Aspergilose é uma das principais causas de mortalidade em aves imunocompetentes e imunodeprimidas. A manifestação clínica aguda da doença é geralmente observada em aves jovens, com episódios de surtos em aviários, enquanto a forma crônica é mais frequentemente observada em aves adultas. A inspeção das carcaças é fundamental para a detecção e monitoramento da prevalência de doenças. Os objetivos do trabalho foram avaliar a ocorrência de aspergilose causada por Aspergillus fumigatus em aves comerciais através do diagnóstico micológico e histopatológico e verificar a possibilidade de associação causal entre os critérios de diagnóstico de aspergilose e condenação por aerossaculite em frangos de corte através de um estudo de casocontrole. O estudo foi realizado com 380 amostras pulmonares. Foram coletados pulmões de frangos condenados (95) por aerossaculite e não condenados (285), diretamente na linha de abate de um frigorífico. Quarenta e seis (12%) amostras de pulmão foram positivas na cultura micológica. Do total de amostras, 177 (46,6%) apresentaram alterações histopatológicas, sendo as mais frequentes pneumonia fibrinoheterofílica necrótica, pneumonia heterofílica e hiperplasia linfóide. Do total de 380 pulmões analisados, 30 (65,2%) apresentaram concomitantemente alterações histopatológicas e isolamento fúngico. A relação entre a presença de lesões histopatológicas e isolamento de A. fumigatus testada por McNemar indicou que houve associação significativa entre a presença de alterações histopatológicas e o isolamento de A. fumigatus. A identificação molecular foi realizada em 44 isolados, sendo todos confirmados como sendo A. fumigatus através dos genes b-tub e rodA. O cultivo micológico e o exame histopatológico aumentam as chances de se detectar alterações pulmonares em aves condenadas pelo Sistema de Inspeção Final do que nas aves normais, sugerindo que tais critérios de diagnóstico são eficazes para aprimorar a avaliação e condenação de aves por aerossaculite. O perfil genético entre os isolados foi variado, mostrando que isolados de aves normais podem ser potencialmente causadores de aspergilose em aves suceptíveis. / Aspergillosis is one of the main causes of mortality in both immunocompetent and immunodepressed birds. The clinical manifestation of acute aspergillosis is usually observed in young birds, often with episodes of outbreaks in poultry farms, whereas chronic aspergillosis is more frequently observed in adult birds. The inspection of carcasses is fundamental for the detection of diseases and for monitoring their prevalence. The objectives of this study were to evaluate the occurrence of aspergillosis caused by Aspergillus fumigatus in poultry through mycological and histopathological diagnosis and to verify the possibility of a causal association between the criteria for aspergillosis diagnosis and carcass condemnation due to airsacculitis in broilers through a case-control study. The study was made with 380 lung samples. Lungs were collected from condemned (95) and not condemned (285) broilers due to airsacculitis, directly from the slaughter line of a slaughterhouse. Forty-six (12%) lung samples were positives in mycological culture. From the total samples, 177 (46.6%) showed histopathological alterations, the most frequent being necrotic, fibrinous, heterophilic pneumonia, heterophilic pneumonia and lymphoid hyperplasia. Of the 380 lungs analyzed, 30 (65.2%) showed histopathological alterations and isolation of fungi. The relation between the presence of histopathological lesions and the isolation of A. fumigatus, as observed with the McNemar test, indicated the significant association between the presence of histopathological alterations and the isolation of A. fumigatus.The molecular identification was made in 44 isolates, and all of them were confirmed to be A. fumigatus through analysis of the b-tub and rodA. The mycological cultivation and the histopathological test increase the chances of detecting pulmonary alterations in birds condemned by the Final Inspection System than in normal birds, suggesting that such diagnostic criteria are efficient to improve the assessment and condemnation of birds affected by airsacculitis. There were different genetic profiles among the isolates, which shows that isolates obtained from normal birds can potentially cause aspergillosis in those susceptible.

A esporotricose é uma micose subcutânea causada por espécies do complexo Sporothrix schenckii que acomete seres humanos e animais, principalmente os gatos. Desde 1998 o Instituto Nacional de Infectologia Evandro Chagas/Fiocruz no Rio de Janeiro vem acompanhando uma epidemia dessa doença envolvendo seres humanos, cães e gatos, onde as principais formas de transmissão são arranhadura, mordedura e/ou contato com o exsudato das lesões cutâneas de gatos doentes. O diagnóstico definitivo da esporotricose felina é obtido a partir do isolamento do Sporothrix sp. em meios de cultura, entretanto, o resultado desse exame pode demorar até quatro semanas, o que em algumas situações pode retardar o início do tratamento antifúngico. Os exames citopatológico, histológico e imuno-histoquímico são opções viáveis e mais rápidas para o diagnóstico dessa micose em gatos, principalmente em situações quando não é possível realizar o isolamento fúngico. O diagnóstico precoce da esporotricose felina é importante na implementação rápida do tratamento antifúngico, melhorando o prognóstico na maioria dos casos. O objetivo deste estudo foi avaliar e comparar as diferentes técnicas utilizadas no diagnóstico da esporotricose felina antes e durante o tratamento antifúngico. Na primeira etapa do estudo foram comparados os exames citopatológico (coloração pelo método panótico rápido), histológico (impregnação pela prata de Grocott) e imuno-histoquímico de 184 gatos no diagnóstico da esporotricose sem tratamento antifúngico prévio utilizando o cultivo fúngico como teste padrão de referência. Estruturas leveduriformes foram observadas em 160 (87,0%) casos no exame citopatológico, 168 (91,3%) na histopatologia e 163 (88,3%) na imunohistoquímica. A associação das três técnicas elevou a sensibilidade do diagnóstico para 98,3%, o que enfatiza a necessidade de sua implementação como ferramentas de rotina, sobretudo quando a cultura fúngica não está disponível. Na etapa seguinte, a carga parasitária e o isolamento de Sporothrix sp. das lesões cutâneas de 74 gatos foram avaliados mensalmente antes e durante o tratamento com itraconazol por um período de 12 semanas. A mediana da carga fúngica observada antes do início do tratamento antifúngico foi maior (pMW = 0,013) nos gatos nos quais foi observada a persistência da lesão (Med=98,6) em relação aqueles em que houve cicatrização (Med=15,0). A redução da carga fúngica ocorreu em todas as lesões estudadas, assim como a redução da positividade da cultura fúngica e do exame citopatológico. Estes resultados sugerem uma redução no potencial zoonótico dos gatos, enfatizando a importância do tratamento precoce como medida de controle. Adicionalmente, o isolamento do fungo e a presença de estruturas leveduriformes nas lesões de gatos com esporotricose podem ser fatores preditores da falência terapêutica, indicando a necessidade da implementação de alternativas terapêuticas. / Sporotrichosis is subcutaneous mycose caused by species of fungus from the Sporothrix schenckii complex and affects humans and animals, especially cats. Since 1998, the Instituto Nacional de Infectologia Evandro Chagas/Fiocruz in Rio de Janeiro has been describing in Rio de Janeiro an epidemic of sporotrichosis, involving humans, cats and dogs, with most of cases related to transmission through scratches, bites or contact with lesions from infected cats. The definitive diagnosis is based on the isolation of the fungus in culture; however, the results may take up to four weeks and postpone treatment outset. The cytopathology, histopathology and immunohistochemistry should be considered as rapid and accessible alternatives for the diagnosis in cats, especially when the fungal culture is not available. The early diagnosis of feline sporotrichosis is desirable for the prompt beginning of the antifungal treatment, improving the prognosis in most of the cases. The aim of this study was to evaluate and compare different techniques for the diagnosis of feline sporotrichosis before and during the treatment with itraconazol. In the first part of the study, cytopathological (Quick Panoptic), histopathological (Grocott silver stain) and immunohistochemical examinations were compared regarding the diagnosis of sporotrichosis in 184 cats without previous treatment, by using fungal culture as a reference standard. The yeast-like cells were observed in 160 (87.0%) cases by cytopathological examination, in 168 (91.3%) by histopathology and in 163 (88.3%) by immunohistochemistry. The combination of the three methods led to the diagnosis of 98.3% of cases, pointing to the need of their implementation as regular tools, notably when fungal culture is not available. In the second part of the study, the fungal burden and the isolation of Sporothrix sp. in cutaneous lesions of 74 cats were monthly evaluated before and during the treatment with itraconazole for twelve weeks. The median of the fungal load detected before the outse of the antifungal treatment was higher (pMW=0.013) in cats in which there was a persistence of the cutaneous lesion (Med=98.6) in comparison to those in which healing of the lesion was observed (Med=15.0). The decrease of the fungal burden occurred in all the lesions in this study as well as the reduction of the positivity of the fungal culture and the cytopathological examination. These results suggest a reduction in the zoonotic potential of cats and emphasize the importance of the early treatment as a control measure. In addition, the isolation of the fungus and the presence of yeast-like cells in lesions of cats with sporotrichosis during the treatment can be a predictor of treatment failure and should alert for the need of alternative therapeutic regimens.

A pneumonia fúngica é uma infecção pulmonar profunda causada principalmente por fungos do gênero Aspergillus, incluindo A. fumigatus, A. niger, A. flavus e A. terreus. Se encontram mais comumente em matéria orgânica em decomposição. Seus propágulos estão presentes na poeira e no ar, o que favorece a inalação, porta principal de entrada do agente no organismo. Produzem grande quantidade de conídios com menos de 8 μ, fazendo com que, quando inalados, alcancem o leito pulmonar. É o gênero considerado o mais comum em nosso planeta e o A. fumigatus é a espécie mais frequentemente descrita em invasão tecidual. Em animais e humanos, os sistemas respiratório e imunológico saudáveis são suficientes para eliminar os propágulos das vias aéreas, evitando sua colonização. Doenças e fármacos imunossupressores têm sido descritos como fatores predisponentes da infecção pulmonar fúngica, considerada oportunística. É considerada rara em cães. Os sinais clínicos são variados, mas a tosse persistente e a não cessação dos sinais com o uso de antimicrobianos são dados para suspeita de pneumonia fúngica. No exame radiológico de pulmões, são descritas várias imagens, das quais a mais relatada é a de padrão intersticial nodular miliar generalizado, embora não seja imagem patognomônica. Este trabalho teve como objetivo verificar a ocorrência de aspergilose pulmonar em cães com sintomatologia respiratória atendidos no Hospital de Clínicas Veterinárias da Universidade Federal do Rio Grande do Sul (HCV-UFRGS), localizado na cidade de Porto Alegre. A amostragem foi composta por 46 cães nos quais foi realizado Biópsia por Aspiração com Agulha Fina (BAAF) nos dois pulmões, coleta de sangue e exame radiológico torácico. O material obtido de uma punção foi homogeneizado com caldo Sabouraud Dextrose líquido. Parte deste homogeneizado foi semeado em Agar Malte para Aspergillus spp. e feito exame direto em lâmina e com colotração de Grocott. A outra parte foi semeada em vários meios de cultura para exame bacteriológico. Do material obtido na outra punção foi realizado exame citopatológico corado pelo método Panótico Rápido. Do soro obtido do sangue coletado foi realizado exame soromicológico para A. fumigatus, A. flavus e A. niger. Os resultados dos exames micológico, citopatológico, soromicológico e bacteriológico foram negativos para todas as amostras testadas. Não havendo positividade dos exames, não foi possível correlacionar a pneumonia fúngica com as imagens radiológicas obtidas dos pulmões dos 46 cães radiografados. A maioria dos cães viviam em áreas abertas, em contato com matéria orgânica onde o fungo frequentemente se encontra. Os exames para detecção de fungos devem ser analisados com cautela, pois o resultado positivo em um único exame não confirma a presença da infecção, pois o agente pode estar presente frequentemente no trato respiratório superior de cães. / Fungal pneumonia is a deeply lung infection caused by fungal agents of the genus Aspergillus, including A. fumigatus, A. niger, A. flavus and A. terreus. They are found most commonly in decaying organic matter. Their fungal propagules are present in dust and air, which favors the inhalation, the main entrance of the agent in the body. They produce large amounts of conidia with less than 8 μ, so that, when inhaled, reaching the pulmonary bed. It is the considered the most common kind genus on our planet and A. fumigatus is the most often reported species in tissue invasion. In animals and humans, a healthy immune and respiratory systems is sufficient to remove the seedlings of the airways, preventing colonization. Diseases and immunosuppressive drugs have been described as predisposing factors of pulmonary fungal infection, considered opportunistic. It is considered rare in dogs. Clinical symptoms are varied, but a persistent cough and no cessation of symptoms with the use of antimicrobials are data for suspected fungal pneumonia. In the radiological examination of the lungs, several images have been described, and the most described is a generalized miliary nodular interstitial pattern, but it is not a pathognomonic image. This work aimed to verify the occurrence of pulmonary aspergillosis in dogs with respiratory symptoms examined at the Veterinary Clinical Hospital of Federal University of Rio Grande do Sul (HCVUFRGS), located in Porto Alegre city, in Brasil. The sampling was composed of 46 dogs in which biopsy was performed by fine needle aspiration (FNAC) in both lungs, blood sampling and radiological examination of the chest. The material obtained from a puncture was homogenized with Sabouraud dextrose liquid. Part of this homogenate was seeded on malt agar for Aspergillus spp. and taken directly on slides and stained with “Grocott”. The other party was seeded in various culture media to bacteriological examination. The material obtained in another puncture was performed cytopathological examination with “Panótico” coloring. Serum obtained from blood collected was performed for serology to A. fumigatus, A. flavus and A. niger. The results of mycological examination, cytology, bacteriology and serology examinations were negative for all samples tested. In the absence of positive tests, it was not possible to correlate fungal pneumonia with radiological images obtained from the lungs of the 46 dogs radiographed. Most dogs live in open areas in contact with organic matter where the fungus is usually found. Tests to detect fungi should be analyzed with caution, because a positive result in a single test does not confirm the presence of infection, since the agent can be present normally in the upper respiratory tract of dogs.

A grande diversidade de organismos que hoje encontramos em nosso planeta se deve à adaptação às diferentes condições ambientais de cada nicho ecológico existente e à resposta adaptativa originária das mudanças dessas condições. Pode-se considerar que a etapa inicial do processo de adaptação seja a reprogramação da expressão gênica dum organismo como resposta imediata a uma nova condição ambiental. De fato parte do genoma de todos os organismos é dedicada à codificação de proteínas relacionadas ao controle dos efeitos nocivos criados por diferentes tipos de estresse como choque térmico, ou osmótico, estresse oxidativo, ou aqueles resultantes de altas concentrações de íons de metais pesados. De forma semelhante, a ausência, ou exaustão, de fontes de macronutrientes, como carbono, nitrogênio, fósforo ou enxofre, exige uma reorganização do padrão de expressão gênica para adequação às novas condições nutricionais, também sendo considerada um estresse ambiental. Visto que a maioria dos estudos de análise da expressão gênica em resposta a estresses ambientais realizados em fungos se refere às leveduras unicelulares Saccharomyces cerevisiae e Schizossacharomyces pombe, nos propusemos a estudar tal resposta no fungo filamentoso multicelular Trichoderma reesei. Dessa forma analisamos por meio da técnica de \"microarrays\" de cDNAs a expressão gênica de aproximadamente 2.000 transcritos desse organismo em resposta a choque térmico, à alta concentração de íons de cádmio II e à ausência de fonte de carbono, ou nitrogênio, por período de 2 horas. Em geral, as respostas aos estresses se compuseram da regulação negativa da transcrição de genes envolvidos em processos com alta demanda de energia como a síntese protéica, evidenciada pela repressão da expressão de genes de proteínas ribossomais e do anabolismo. Em contrapartida, genes codificando proteínas relacionadas à defesa celular, como chaperonas, tiveram sua expressão induzida. As respostas ao choque térmico e ao tratamento com cádmio II se mostraram bastantes semelhantes, enquanto a ausência de fonte de nitrogênio também induziu a expressão de genes relacionados à degradação de proteínas e nucleotídeos. Genes relacionados à utilização de reservas lipídicas foram induzidos tanto na ausência de fonte de carbono quanto de nitrogênio. Foram identificados reguladores transcricionais e componentes de vias de sinalização celular com expressão diferenciada frente a esses diferentes estresses ambientais. A maior parte dos genes cuja expressão se alterou em função dos diversos estresses ambientais estudados ainda não tem função celular conhecida, sendo essa observação, portanto, uma contribuição importante para sua anotação funcional. Uma vez que o fungo filamentoso Trichoderma reesei vem se tornando um organismo de valor biotecnológico por sua característica de alto poder de síntese e secreção de proteínas, esperamos que os dados apresentados forneçam um maior entendimento dos processos celulares desse organismo e possam subsidiar futuros projetos visando uma melhor adaptação do mesmo a ambientes industriais. / The diversity of organisms found today in our planet is due to their adaptation to different environmental conditions present in each ecological niche, and to the adaptative response originated from changes in those conditions. The first step in the adaptation process is considered to be the reprogramming of gene expression as an immediate response to a new environmental condition. A fraction of the genome from all living organisms is dedicated to encoding proteins related to the control of deleterious effects created by different types of stresses like heat or osmotic shock, oxidative stress, or by the presence of high concentrations of heavy metal ions. Similarly, the absence or exhaustion of macronutrients as carbon, nitrogen, phosphorous or sulphur sources demand new patterns of gene expression in order to the organisms survive in a limited nutritional condition, which is also considered an environmental stress. Once the gene expression analyses in fungi as a response to environmental stresses have been widely studied in the yeasts Saccharomyces cerevisiae and Schizossacharomyces pombe, we proposed to study such response in the multicellular filamentous fungus Trichoderma reesei. To this purpose, we have utilized the cDNA microarray technique to analyze the gene expression of approximately 2,000 T. reesei transcripts in response to heat shock, to high concentration of cadmium II ions and to a 2-hour absence of carbon or nitrogen source. As a general response to the four studied stresses, we observed on one hand a negative transcriptional regulation of genes involved in processes that demand great amounts of energy, i.e. a negative regulation of protein synthesis, indicated by strong repression of ribosomal protein genes transcription, as well as a negative regulation of anabolism. On the other hand, genes that encode proteins associated with cellular defense, like chaperones, had their expression induced. The responses to heat shock and to cadmium poisoning were quite similar while nitrogen source absence also induced the expression of genes related to protein and nucleotide degradation. Genes implicated in the consumption of lipid reserves were induced in the absence of both carbon and nitrogen sources. We identified some transcription regulators as well as components of signal transduction pathways that have differential patterns of gene expression caused by these different environmental stresses. Most of the genes that had their expression altered in response to the studied environmental stresses has no known function yet. Their expression patterns towards such stresses are therefore an important contribution to their functional annotation. Since the filamentous fungus Trichoderma reesei has become a microorganism of biotechnological value for its high capacity of synthesis and secretion of proteins, we expect that the data presented on this work can provide a better understanding of its cellular processes and may support future projects for a better adaptation of this organism to industrial conditions.

Malassezia spp. são fungos lipofílicos, reconhecidos há mais de cem anos como membros da microbiota cutânea normal humana, bem como agentes de doenças dermatológicas. Desde 1980, são relatados como causadores de infecções sistêmicas oportunistas. Estas leveduras são frequentemente encontradas em uma grande variedade de animais homeotérmicos, e sua ampla distribuição no meio ambiente agora está sendo explorada através de técnicas moleculares e bioquímicas. O enfoque deste estudo foi a espécie não lipido-dependente Malassezia pachydermatis, e a sua caracterização através do perfil enzimático pelo sistema Api-Zym®. Deste modo, utilizaram-se 30 amostras de M. pachydermatis isoladas de cães, com e sem sinais clínicos, identificadas pela técnica de Reação em Cadeia da Polimerase (PCR). As amostras foram cultivadas em meio de Dixon modificado, incubadas a 37°C durante 48 horas, para posterior quantificação através de espectrofotometria. Um inóculo de 65 μl foi colocado em cada orifício do kit comercial de verificação enzimática e, após, incubado a 37ºC por 4 horas. Os resultados foram obtidos através da leitura visual e interpretação das titulações por escalas pré-determinadas, também foram avaliadas as reações através de “escaneamento” eletrônico. Todos os testes foram realizados em triplicata. Os resultados demonstraram a atividade de enzimas específicas pertencentes ao grupo das peptídeo hidrolases (100%), fosfohidrolases (98,3%) e éster hidrolases (91,6%), enquanto que as enzimas α-galactosidase, β-galactosidase, β-glicuronidase, α-manosidase e α-fucosidase caracterizaram 10% de todos os isolados. Além disso, não se comprovou a viabilidade do sistema utilizado no estudo para a caracterização enzimática da levedura. / Malassezia spp. are lipophilic fungi, which have been recognised for over a century as members of the normal human cutaneous flora, and also as agents of certain skin diseases. In addition, since the 1980s, they have been reported as causing opportunistic systemic infections. These yeasts have frequently been found on a diverse range of other warm-blooded animals, and their wider distribution in nature is now being explored using molecular techniques. The focus of the present study was the species no lipid-dependent Malassezia pachydermatis, and its characterization through the enzymatic profile by the Api-Zym® system. Then 30 isolated samples of dogs had been used, with and without clinical signals, identified by the technique of Polymerase Chain Reaction (PCR). The samples were cultivated into Dixon’s modified medium, incubated at 37°C during 48 hours, for posterior quantification through spectrophotometry. An inocula of 65 μl was placed in each microwell of the commercial kit of enzymatic verification and, after, it was incubated at 37ºC for 4h. The results were obtained through the visual reading and interpretation of the titulations by predetermined scales, it were also evaluated the reactions through electronic scanning. All the tests were performed in triplicate. The results demonstrated the activity of specific enzymes pertaining to the group of the peptide hydrolases (100%), phosphohydrolases (98,3%) and ester hydrolases (91,6%), while the enzymes α-galactosidase, β-galactosidase, β-glucuronidase, α-mannosidase and α-fucosidase characterized 10% off all the isolates. Moreover, it was not proven the viability of the system used in the study for the enzymatic characterization of the yeast.

A pneumonia fúngica é uma infecção pulmonar profunda causada principalmente por fungos do gênero Aspergillus, incluindo A. fumigatus, A. niger, A. flavus e A. terreus. Se encontram mais comumente em matéria orgânica em decomposição. Seus propágulos estão presentes na poeira e no ar, o que favorece a inalação, porta principal de entrada do agente no organismo. Produzem grande quantidade de conídios com menos de 8 μ, fazendo com que, quando inalados, alcancem o leito pulmonar. É o gênero considerado o mais comum em nosso planeta e o A. fumigatus é a espécie mais frequentemente descrita em invasão tecidual. Em animais e humanos, os sistemas respiratório e imunológico saudáveis são suficientes para eliminar os propágulos das vias aéreas, evitando sua colonização. Doenças e fármacos imunossupressores têm sido descritos como fatores predisponentes da infecção pulmonar fúngica, considerada oportunística. É considerada rara em cães. Os sinais clínicos são variados, mas a tosse persistente e a não cessação dos sinais com o uso de antimicrobianos são dados para suspeita de pneumonia fúngica. No exame radiológico de pulmões, são descritas várias imagens, das quais a mais relatada é a de padrão intersticial nodular miliar generalizado, embora não seja imagem patognomônica. Este trabalho teve como objetivo verificar a ocorrência de aspergilose pulmonar em cães com sintomatologia respiratória atendidos no Hospital de Clínicas Veterinárias da Universidade Federal do Rio Grande do Sul (HCV-UFRGS), localizado na cidade de Porto Alegre. A amostragem foi composta por 46 cães nos quais foi realizado Biópsia por Aspiração com Agulha Fina (BAAF) nos dois pulmões, coleta de sangue e exame radiológico torácico. O material obtido de uma punção foi homogeneizado com caldo Sabouraud Dextrose líquido. Parte deste homogeneizado foi semeado em Agar Malte para Aspergillus spp. e feito exame direto em lâmina e com colotração de Grocott. A outra parte foi semeada em vários meios de cultura para exame bacteriológico. Do material obtido na outra punção foi realizado exame citopatológico corado pelo método Panótico Rápido. Do soro obtido do sangue coletado foi realizado exame soromicológico para A. fumigatus, A. flavus e A. niger. Os resultados dos exames micológico, citopatológico, soromicológico e bacteriológico foram negativos para todas as amostras testadas. Não havendo positividade dos exames, não foi possível correlacionar a pneumonia fúngica com as imagens radiológicas obtidas dos pulmões dos 46 cães radiografados. A maioria dos cães viviam em áreas abertas, em contato com matéria orgânica onde o fungo frequentemente se encontra. Os exames para detecção de fungos devem ser analisados com cautela, pois o resultado positivo em um único exame não confirma a presença da infecção, pois o agente pode estar presente frequentemente no trato respiratório superior de cães. / Fungal pneumonia is a deeply lung infection caused by fungal agents of the genus Aspergillus, including A. fumigatus, A. niger, A. flavus and A. terreus. They are found most commonly in decaying organic matter. Their fungal propagules are present in dust and air, which favors the inhalation, the main entrance of the agent in the body. They produce large amounts of conidia with less than 8 μ, so that, when inhaled, reaching the pulmonary bed. It is the considered the most common kind genus on our planet and A. fumigatus is the most often reported species in tissue invasion. In animals and humans, a healthy immune and respiratory systems is sufficient to remove the seedlings of the airways, preventing colonization. Diseases and immunosuppressive drugs have been described as predisposing factors of pulmonary fungal infection, considered opportunistic. It is considered rare in dogs. Clinical symptoms are varied, but a persistent cough and no cessation of symptoms with the use of antimicrobials are data for suspected fungal pneumonia. In the radiological examination of the lungs, several images have been described, and the most described is a generalized miliary nodular interstitial pattern, but it is not a pathognomonic image. This work aimed to verify the occurrence of pulmonary aspergillosis in dogs with respiratory symptoms examined at the Veterinary Clinical Hospital of Federal University of Rio Grande do Sul (HCVUFRGS), located in Porto Alegre city, in Brasil. The sampling was composed of 46 dogs in which biopsy was performed by fine needle aspiration (FNAC) in both lungs, blood sampling and radiological examination of the chest. The material obtained from a puncture was homogenized with Sabouraud dextrose liquid. Part of this homogenate was seeded on malt agar for Aspergillus spp. and taken directly on slides and stained with “Grocott”. The other party was seeded in various culture media to bacteriological examination. The material obtained in another puncture was performed cytopathological examination with “Panótico” coloring. Serum obtained from blood collected was performed for serology to A. fumigatus, A. flavus and A. niger. The results of mycological examination, cytology, bacteriology and serology examinations were negative for all samples tested. In the absence of positive tests, it was not possible to correlate fungal pneumonia with radiological images obtained from the lungs of the 46 dogs radiographed. Most dogs live in open areas in contact with organic matter where the fungus is usually found. Tests to detect fungi should be analyzed with caution, because a positive result in a single test does not confirm the presence of infection, since the agent can be present normally in the upper respiratory tract of dogs.

Pythium insidiosum, classificado no Reino Stramenopila e Classe Oomycetes, é o agente etiológico da pitiose, uma doença diagnosticada principalmente em eqüinos, caninos e humanos. As atividades in vitro do voriconazol, itraconazol e terbinafina, sozinhos ou em combinação, foram estudadas empregando uma metodologia de macrodiluição baseada na técnica M 38-A (CLSI, 2002) contra 30 isolados clínicos de Pythium insidiosum, com o objetivo de avaliar novas medidas para tratar infecções causadas por este agente utilizando quimioterapia. As combinações (terbinafina e voriconazol; terbinafina e itraconazol) tiveram suas interações avaliadas utilizando a técnica de checkerboard seguindo o modelo da macrodiluição em caldo. Terbinafina foi ativa quando testada sozinha, mostrando uma concentração inibitória mínima (CIM) e concentração fungicida mínima ≤ 8,0 mg/L para todos os isolados. Voriconazol e itraconazol foram inativos contra os isolados testados quando usados sozinhos. A combinação de voriconazol com terbinafina foi sinérgica contra 17% das amostras e indiferente em 25 (83%) amostras. O uso concomitante de terbinafina e itraconazol foi sinérgico contra 17% e indiferente contra 83% das amostras. As interpretações de ambas as interações foram equivalentes para 26 isolados (87%): vinte e três foram indiferentes e três mostraram efeito sinérgico. Antagonismo não foi observado. A terapia combinada é uma alternativa à monoterapia, especialmente para pacientes com infecções invasivas que são difíceis de tratar. Estes resultados precisam ser correlacionados com relatos clínicos; e ensaios in vivo, usando modelos animais, podem preencher a lacuna entre avaliações clínicas e avaliações in vitro das drogas. / Pythium insidiosum is classified in the kingdom Stramenopila, class Oomycetes. It causes pythiosis, a disease mainly diagnosed in horses, dogs, and humans. In order to evaluate new approaches to treat infections caused by Pythium insidiosum using chemotherapy, the in vitro activities of voriconazole, itraconazole and terbinafine, alone or in combination, against 30 clinical isolates were studied employing a macrodilution methodology based on the M 38-A technique (CLSI, 2002). The combinations (terbinafine plus voriconazole and terbinafine plus itraconazole) had their interactions evaluated using the checkerboard technique following the broth macrodilution design. Terbinafine was active when used as a single drug, showing minimal inhibitory concentration (MIC) and minimal fungicidal concentration ≤ 8,0 mg/L for all the isolates. Voriconazole and itraconazole were inactive against the isolates tested when used alone. The combination of voriconazole with terbinafine was synergic against 17% of the strains and indifferent on 25 (83%) strains. The concomitant use of terbinafine and itraconazole was synergic against 17% and indifferent against 83% of the strains. The interpretations of both interactions were equivalent for 26 isolates (87%): twenty three were indifferent and three showed synergistic effect. Antagonism was not observed. Combination therapy provides an alternative to monotherapy, especially for patients with invasive infections that are difficult to treat. These results need to be correlated with clinical outcomes, and in vivo assays using experimental animal models could bridge the gap between in vitro and clinical evaluation of drugs.

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2018-04-24T12:40:25Z No. of bitstreams: 1 Jaciel Benedito de Oliveira.pdf: 6502737 bytes, checksum: eae13572b4b7a1ea6da18471ee00392a (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-24T12:40:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Jaciel Benedito de Oliveira.pdf: 6502737 bytes, checksum: eae13572b4b7a1ea6da18471ee00392a (MD5) Previous issue date: 2017-05-03 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Intraglandular injection of botulinum toxin type A (BTX-A) into the submandibular glands is clinically considered an effective therapeutic tool for the treatment of sialorrhoea. However, there are few data in the literature that discuss its influence on the glandular tissue, oral saliva and microbiota, as well as its systemic metabolism. Thus, the objective of the present study was to measure salivary and serum serum electrolytes, to verify the salivary proteins, to perform the mycological diagnosis of the oral cavity of rats and their profile of sensitivity in vitro to antifungals, to analyze the serum biochemistry, to proceed with the histopathological study of the livers and kidneys, in addition to observing the presence of apoptosis through the TUNEL technique and the histological characteristics of the submandibular-sublingual complex parenchyma of rats treated with BTX-A intraglandular injection. Wistar rats were divided into five groups: control group (n = 7), without any treatments; BTX-A groups 12 days (n = 7) and 35 days (n = 6), whose submandibular glands of the right submandibular-sublingual complexes received 2.5 U BTX-A (Prosigne®), with samples analyzed 12 and 35 days after application; and GEL groups 12 and 35 days (n = 6 animals each), whose right salivary glands received injection of 0.125 mg gelatin of bovine origin, with parameters analyzed 12 and 35 days after treatment, respectively. The data collected were submitted to statistical analysis. BTX-A promoted atrophy of serous acyles with cytoplasmic vacuolations. The appearance of apoptosis was most evident in the BTX-A treated groups and analyzed at 12 days. The lymph nodes of the BTX-A treated groups showed reactivity. There were few changes in salivary proteins and ions. Fungi of the genres Candida spp. and Aspergillus spp., Behaved as opportunists in the groups treated with BTX-A, besides being resistant to the antifungal agents tested. Histopathological alterations in the kidneys were verified, but without hepatic alterations. / A injeção intraglandular de toxina botulínica tipo A (BTX-A) nas glândulas submandi-bulares é considerada clinicamente uma ferramenta terapêutica eficaz para o tratamento da sialorreia. Porém, são poucos os dados na literatura que discutem sua influência sobre o tecido glandular, saliva e microbiota oral, assim como seu metabolismo sistêmico. Desta forma, o objetivo do presente trabalho foi mensurar os eletrólitos da saliva e soro sanguíneo, verificar as proteínas salivares, realizar o diagnóstico micológico da cavidade oral de ratas e seu perfil de sensibilidade in vitro a antifúngicos, analisar a bioquímica sérica, proceder com o estudo histopatológico dos fígados e rins, além de observar a presença de apoptose através da técnica de TUNEL e as características histológicas do parênquima dos complexos submandibulares-sublinguais de ratas tratadas com injeção intraglandular BTX-A. Foram utilizadas ratas Wistas, divididas em cinco grupos: grupo controle (n = 7), sem quaisquer tratamentos; grupos BTX-A 12 dias (n = 7) e 35 dias (n = 6), cujas glândulas submandibulares dos complexos submandibulares-sublinguais direitos receberam injeção de 2,5 U BTX-A (Prosigne®), com amostras analisadas 12 e 35 dias após a aplicação; grupo GEL 12 dias e GEL 35 dias (n = 6 animais cada), cujas glândulas salivares direitas receberam injeção de 0,125 mg gelatina de origem bovina, e com parâmetros analisados 12 e 35 dias após o tratamento, respectivamente. Os dados coletados foram submetidos a análise estatística. A BTX-A promoveu uma atrofia dos ácinos serosos com vacuolizações citoplasmáticas. O aparecimento de apoptose foi mais evidente nos grupos tratados com BTX-A e analisados com 12 dias. Os linfonodos dos grupos tratados com BTX-A apresentaram reatividade. Observou-se poucas alterações nas proteínas e íons salivares. Os fungos dos gêneros Candida spp. e Aspergillus spp., se comportaram como oportunistas nos grupos tratados com BTX-A, além de serem resistentes aos agentes antifúngicos testados. Verificou-se alterações histopatológicas nos rins, porém sem alterações hepáticas.

Orientador: Liana Maria Cardoso Verinaud / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-06T19:49:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Souto_PaulaCristinadeSouza_D.pdf: 7669317 bytes, checksum: eeec29689d95e50ddec45928c2c76343 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: O Paracoccidioides brasiliensis é um fungo dimórfico que cresce na forma miceliar a temperatura ambiente e na forma de levedura a 35-37ºC. Recentemente, no laboratório de Imunopatologia do Departamento de Microbiologia e Imunologia do Instituto de Biologia da Unicamp, foi observado que uma amostra da cepa virulenta Pb18 crescia de forma diferente das outras. A análise preliminar desta cultura mostrou que o fungo se apresentava, exclusivamente, em formas intermediárias entre levedura e micélio. Assim, este trabalho teve como objetivo a caracterização parcial deste isolado atípico através da comparação com a cepa selvagem. Para tanto, foram analisados: a morfologia do isolado a 25 e 37ºC; a composição de proteínas de parede celular; o desenvolvimento da doença e a resposta imunológica adaptativa em camundongos BALB/c. Os resultados mostraram que este isolado não alterou a sua forma de crescimento, independente da temperatura de cultivo ou da passagem por animal. Através da análise das proteínas de parede celular observou-se ausência de expressão de algumas proteínas e baixa concentração da glicoproteína 43 (gp43) no fungo atípico quando comparado com o selvagem. A infecção causada por este isolado atípico foi mais branda do que aquela observada com a cepa virulenta Pb18, com completa resolução das lesões de disseminação. Entretanto, não foi possível determinar diferenças na avaliação da resposta imune adaptativa dos animais infectados com os diferentes isolados. Apesar da necessidade de mais estudos, estes resultados indicam que o isolado atípico pode vir a ser uma importante ferramenta para o estudo da biologia do fungo e sua relação com o hospedeiro / Abstract: P. brasiliensis is a dimorphic fungus that grows in mycelial phase at room temperature and in yeast form at 35-37°C. Recently, in the Immunopathology Laboratory of the Department of Microbiology and Immunology (Biology Institute/Unicamp), it was observed that a sample of the virulent strain Pb18 grew in a different way from other ones. Preliminary analysis of this culture showed that the isolated exhibited, exclusively, an intermediate form of pseudohyphae. That way, the objective of this work was the partial characterization of the atypical isolated (Pb18PH) through the comparison with the wild strain Pb18. For this, there were analyzed: the morphology of the isolated to 25 and 37ºC; the composition of cell wall proteins; the disease development and the adaptative immune response in BALB/c mice. The results showed that Pb18PH didn't alter their growth form, independently of the cultivation temperature or the passage through animal. By the analysis of the cell wall proteins, it was observed that Pb18PH didn't express some proteins and presented low concentration of the glicoprotein 43 (gp43) when compared with the wild one. The infection caused by this atypical isolated was softer than that observed with the virulent strain Pb18. Besides, it was noted the complete resolution of disseminated lesions. However, it was not possible to determine differences in the adaptative immune response evaluation of the animais infected with the different isolated. To despite the need of more studies about this atypical isolated, our results indicate that Pb18PH would come to be an important tool for the study of the fungus biology and their relationship with the host / Doutorado / Imunologia / Doutor em Genetica e Biologia Molecular

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2014-12-01T12:34:48Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Thaísa Cristina Silva - 2014.pdf: 1534323 bytes, checksum: 4be57ed4c03026ea32f34f1f69ce1046 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2014-12-04T14:20:07Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Thaísa Cristina Silva - 2014.pdf: 1534323 bytes, checksum: 4be57ed4c03026ea32f34f1f69ce1046 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-12-04T14:20:07Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Thaísa Cristina Silva - 2014.pdf: 1534323 bytes, checksum: 4be57ed4c03026ea32f34f1f69ce1046 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2013-02-28 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Histoplasmosis is a systemic mycosis considered an important public health problem, especially in patients with the human immunodeficiency virus (HIV), in which the disease is associated with poor prognosis and high mortality. It has worldwide distribution with higher prevalence in tropical and temperate zones, and in Brazil has been reported more frequently in the South and Southeast. Objectives: Conduct a descriptive sociodemographic, clinical, laboratory and treatment analysis of patients with histoplasmosis and aids treated between January 2000 and June 2012, at the Hospital for Tropical Diseases - Dr. Anuar Auad (HDT). Methodology: It is a descriptive, observational, cross-sectional and retrospective study, with secondary data analysis of records filed in Sector Statistics Division and Medical File (DEAM) of HDT. All confirmed cases of disseminated histoplasmosis (HD) were sample through laboratory testing. Results: This study found a prevalence of 4.2%, which corresponds to 279 cases of AIDS associated HD. Most patients were young adult males, unmarried and with low education, and most from the interior of Goiás and urban area residents. The main occupations/professions exercised by patients were related to construction activities, home activities and rural. Regarding the signs and symptoms the most frequent were: fever (84.2%), cough (63.4%), weight loss (63.1%), dyspnea (56.3%) and asthenia (53.8 %). The diagnosis was made by blood culture (59.5%) and direct examination of peripheral blood (24.8%). Oral candidiasis, cryptococcosis and pneumocystosis were opportunistic infections associated with histoplasmosis found in these patients. Prevalent laboratory findings were hemoglobin < 10 g/dL (61.2%), platelets > 100,000 cells/mm3 (60.6%), creatinine < 1.5 mg/dL (75.9%), aspartate aminotransferase (AST) ≥ 45 UI/L (76.2%), lactate dehydrogenase (LDH) ≥ 480 UI/L (79.1%) and CD4 cell count below 150 cells/mm3 in 85.9% of patients. After diagnosis, 86.7% of patients were treated with amphotericin B, and 70.3% died and the fatality rate presented was 6.45%. When analyzed risk factors associated with death from HD no variable was significant. Conclusion: Histoplasmosis showed high prevalence and lethality in AIDS patients in Goiânia, showing the need to adopt actions to facilitate early diagnosis, proper treatment and thus improved prognosis. / A histoplasmose é uma micose sistêmica considerada um importante problema de saúde pública, especialmente em portadores do vírus da imunodeficiência adquirida (HIV), nos quais a doença está associada com mau prognóstico e alta mortalidade. Possui distribuição mundial, com maior prevalência em zonas tropicais e temperadas, e no Brasil tem sido relatada frequentemente nas regiões Sul e Sudeste. Objetivos: Realizar análise descritiva dos aspectos sociodemográficos, clínicos, laboratoriais e terapêuticos nos pacientes com histoplasmose e aids atendidos entre janeiro de 2000 a junho de 2012, no Hospital de Doenças Tropicais - Dr. Anuar Auad (HDT). Metodologia: Trata-se de um estudo descritivo, observacional, transversal e retrospectivo, com análise de dados secundários dos prontuários arquivados no Setor de Divisão de Estatística e Arquivo Médico (DEAM) do HDT. Foram incluídos na amostra todos os casos confirmados de histoplasmose disseminada (HD) por meio de exame laboratorial. Resultados: Neste estudo foi encontrada uma prevalência de 4,2%, o que corresponde a 279 casos de HD associada a aids. A maioria dos pacientes eram homens adultos jovens, solteiros e com baixa escolaridade, principalmente do interior de Goiás e residentes em áreas urbanas. As principais ocupações/profissões exercidas pelos pacientes foram atividades relacionadas à construção civil, atividades do lar e rurais. Em relação aos sinais e sintomas, os mais frequentes foram: febre (84,2%), tosse (63,4%), perda de peso (63,1%), dispneia (56,3%) e astenia (53,8%). O diagnóstico foi realizado através de hemocultura (59,5%) e exame direto de sangue periférico (24,8%). Candidíase oral, pneumocistose e criptococcose foram infecções oportunísticas encontradas associadas à histoplasmose nestes pacientes. Os achados laboratoriais prevalentes foram hemoglobina < 10 g/dL (61,2%), plaquetas > 100.000 células/mm3 (60,6%), creatinina < 1,5 mg/dL (75,9%), aspartato aminotransferase (AST) ≥ 45 UI/L (76,2%), desidrogenase lática (DHL) ≥ 480 UI/L (79,1%) e contagem de células CD4 inferior a 150 células/mm3 em 85,9% dos pacientes. Após o diagnóstico, 86,7% dos pacientes foram tratados com anfotericina B, dos quais 70,3% evoluíram para óbito com taxa de letalidade de 6,45%. Quando analisados fatores de risco associados ao óbito por HD nenhuma variável foi significativa. Conclusão: A histoplasmose apresentou alta prevalência e letalidade em pacientes com aids em Goiânia, mostrando a necessidade de adotar medidas para facilitar o diagnóstico precoce, tratamento adequado e, consequentemente, melhorar o prognóstico.