Introdução: A esquizofrenia é um dos principais transtornos mentais e promove distúrbios comportamentais e cognitivos. Apesar do grande impacto social, pouco se conhece sobre a patofisiologia e etiologia da esquizofrenia. Pacientes com desordens psicóticas têm aumentado risco de desenvolver epilepsia, e pacientes com epilepsia do lobo temporal tem alta frequência de psicoses. A utilização de modelos experimentais animais de esquizofrenia e epilepsia pode ajudar a entender a neurobiologia dessas doenças e ter papel importante no desenvolvimento de novas estratégias terapêuticas. As interações complexas das crises epilépticas e quadros psicóticos tem sido aos poucos desvendadas. O óxido nítrico (NO) é um importante modulador da neurotransmissão e doadores de NO como o nitroprussiato de sódio (NPS) tem efeitos promissores em pacientes com esquizofrenia. Em modelos animais de epilepsia, NO pode ter efeito pró ou anticonvulsivante, sugerindo que o uso de NPS em pacientes com epilepsia e psicose pode não ser tão simples. Objetivos: Desenvolver um modelo animal de epilepsia e psicose comórbida, e compará-lo do ponto de vista comportamental e neuropatológico com modelos animais puros de epilepsia e esquizofrenia. Além disso, verificar a possível modulação desencadeada pelo tratamento com NPS nos modelos citados. Metodologia: Ratos Wistar machos (260-300g) foram divididos em grupos controle (SAL+SAL), epilepsia puro (PILO+SAL), esquizofrenia (SAL+QUET), epilepsia e psicose comórbida (PILO+QUET) e suas versões tratadas com NPS (SAL+SAL+NPS, PILO+SAL+NPS, SAL+QUET+NPS e PILO+QUET+NPS). Esses animais foram avaliados em diferentes aspectos comportamentais (campo aberto, teste de inibição pré- pulso, memória de reconhecimento de objeto e memória de trabalho), e filmados ao longo de 71 dias para o monitoramento de crises epilépticas espontâneas recorrentes. Também foram avaliadas a perda neuronal e a expressão de nNOS em diferentes regiões cerebrais. Resultados: NPS reduziu a frequência de crises nos animais com epilepsia e psicose comórbida quando comparados a animais não tratados. NPS também teve efeito ansiolítico no modelo animal de epilepsia com e sem psicose, e diminuiu os correlatos comportamentais de sintomas positivos dos animais no modelo de psicose e no de epilepsia + psicose, além de reverter o prejuízo no filtro sensório motor nos animais que receberam pilocarpina e quetamina. No reconhecimento de objeto o modelo de epilepsia e epilepsia+psicose o tratamento com NPS não interferiu no desempenho de memória de curto prazo, porém NPS melhorou a memória de longo prazo no modelo de psicose. NPS preservou regiões como o córtex entorrinal e subiculum nos animais epilépticos, mas a camada granular e córtex pré-límbico revelaram perda significativa nos animais controles. Alta expressão de nNOS em diferentes regiões cerebrais foram visualizadas nos animais com epilepsia, com destaque para aqueles que receberam tratamento com NPS. Conclusão: O tratamento com NPS foi efetivo na amenização de sintomas correlatos comportamentais de psicose no modelo puro de esquizofrenia e no comórbido VIII com epilepsia. Além disso, não exacerbou crises e contribuiu para diminuição delas nos animais do modelo de epilepsia e psicose, que apresentou grandes similaridades com o que é encontrado em casos clínicos. Nossos resultados sugerem que o uso do NPS pode ter resultados na melhoria dos sintomas da psicose interictal humana, assim como já observado para a esquizofrenia. / Introdution: Schizophrenia is a major mental disorder that affects 1% of young adults and has a great impact on quality of life, behavior, and cognition. Despite the high social burden, little is known about the pathophysiology and etiology of schizophrenia. Patients with psychotic disorders have increased risk of developing epilepsy, and patients with temporal lobe epilepsy have a high frequency of psychoses. The use of experimental animal models of epilepsy and schizophrenia may help to better understand the neurobiology of these diseases and play an important role in the development of potential new therapeutic strategies. The complex interactions of seizures and psychotic symptoms are being unveiled. Nitric oxide (NO) is an important modulator of neurotransmission and NO donors such as sodium nitroprusside (SNP) have shown promising effects in schizophrenic patients. In animal models of epilepsy, NO may exert pro- or anticonvulsant effects, suggesting that the use of SNP in patients with epilepsy and psychosis may not be so straightforward. Objectives: To develop an animal model of epilepsy and comorbid psychosis, and compare it from the behavioral and neuropathological point of view with pure animal models of epilepsy and schizophrenia. It was hoped, to verify the possible modulation triggered by the treatment with SNP. Metodology: Males Wistar rats weighing 260-300g were divided in controls group (SAL+SAL), pure epilepsy (PILO+SAL), schizophrenia (SAL+QUET), comorbid psychosis (PILO+KET) and their versions treated with SNP (SAL+SAL+SNP, PILO+SAL+SNP, SAL+KET+SNP and PILO+KET+SNP). These animals were evaluated in a variety of behavioral tests (open field, prepulse inhibition startle reflex, object recognition and working memory), and were filmed over 71 days to monitor spontaneous recurrent seizures. We also evaluated neuronal loss and nNOS expression in different brain regions. Results: SNP reduced seizure frequency in animals with epilepsy and psychosis when compared to those not treated with SNP. SNP also showed anxiolytic effects in the animal model of epilepsy with or without psychosis, decreased behavioral correlates of positive symptoms in the animal model of epilepsy + psychosis, and prevented sensorimotor gating deficits in epilepsy + psychosis IX model, The object recognition test showed that in epilepsy and epilepsy + psychosis models the treatment with SNP did not interfere with short-term memory performance, but SNP improved long-term memory in the psychosis model. SNP preserved brain regions like entorhinal cortex and subiculum in epileptic animals, but the granular layer and prelimbic cortex revealed significant loss in controls animals. High expression of NOS in same brain regions was observed in the animal model of epilepsy, especially in the animals receiving SNP. Conclusion: Treatment with SNP was effective in ameliorating symptoms of behavioral correlates of psychosis in the pure model of schizophrenia and the model comorbid with epilepsy. Moreover, SNP did not exacerbate seizures and reduced seizure frequency in the animal model of epilepsy + psychosis, which showed striking similarities to clinical cases. Our results suggest that the use of SNP could ameliorate symptoms of human interictal psychosis, such as those observed in schizophrenia.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Bovine herpesvirus type 5 (BoHV-5) is an alphaherpesvirus associated with meningoencephalitis, an important disease of cattle in South America. Alphaherpesvirus recombinants have been used to study the function of gene products and also for vaccine production. In particular, the gene encoding the enzyme thymidine kinase (tk) has been deleted to produce attenuated strains. Thymidine kinase is required for efficient replication of these viruses in the central nervous system (CNS), and its deletion or inactivation is associated with reduction of virulence. Thus, the present study aimed to investigate the pathogenesis and to characterize clinically and virologically the acute and latent infection by BoHV-5 (strain SV-507/99) and by tk-deleted recombinant (BoHV-5tkΔ) in lambs. Chapter 1 reports the characterization of latent by BoHV-5 infection in lambs. During acute infection, lambs inoculated with BoHV-5 (SV-507/99) shed virus in nasal secretions during up to 11 days and developed viral neutralizing antibodies in titers ranging from 16 to 128. Administration of corticosteroids during latency (day 65 pi) resulted in virus reactivation and shedding for 3 to 8 days in titers up to 64. Thus, it is proposed that sheep can be used as animal models for studying the biology of latent infection by BoHV-5. In Chapter 2, was investigated the ability of BoHV-5tkΔ to establish and reactivate latent infection in lambs. After viral inoculation, the recombinant virus retained the ability to replicate in the nose of the lambs. At day 40 pi, latent viral DNA was detected in the trigeminal ganglia (TG) in all inoculated animals. However real time PCR demonstrated a significantly reduced amount of recombinant DNA (9.7-fold less, p<0.001) compared to the parental virus. Following dexamethasone (Dx) treatment, infectious virus was not detected in nasal secretions of the animals inoculated with the recombinant virus, contrasting with virus shedding by lambs inoculated with the parental virus. Nevertheless, some nasal swabs from animals inoculated with BoHV-5tkΔ were positive for viral DNA, indicating low levels of reactivation. Thus, BoHV-5 TK activity is not required for the establishment of latency, but seems critical for efficient virus reactivation. Chapter 3, reports the ability of BoHV-5 and BoHV-5tkΔ to establish and reactivate latent infection in lymphoid tissues. During latent infection, viral DNA was detected in TGs, pharyngeal and palatine tonsils and in retropharyngeal lymph node of all sheep inoculated with both viruses (parental and recombinant). At day 40 pi, Dx was administered to the animals to induce viral reactivation. Viral mRNA of BoHV-5 glycoprotein B was detected in TGs, retropharyngeal lymph node and tonsils of lambs inoculated with the parental virus. In animals inoculated with BoHV-5tkΔ, gB mRNA was detected only in tonsils. Therefore, it is suggested that lymphoid tissues are also sites of latency by BoHV-5 and the recombinant BoHV-5tkΔ, and that viruses can be reactivated from these sites. However, reactivation of recombinant virus appears to occur only in lymphoid tissues and not in neural tissues. In summary, the presented results contribute for the understanding of the pathogenesis and characterization of infection by BoHV-5 and BoHV-5tkΔ. / O herpesvírus bovino tipo 5 (BoHV-5) é um alfaherpesvírus associado com meningoencefalite, uma doença de grande importância em bovinos na América do Sul. Recombinantes de alfaherpesvírus defectivos em genes não essenciais vem sendo utilizados para o estudo da função de produtos gênicos e também para a produção de vacinas. O gene da enzima timidina quinase (tk) tem sido deletado para produzir cepas atenuadas com fins vacinais. A enzima timidina quinase (TK) é necessária para a replicação eficiente desses vírus no sistema nervoso central (SNC), e a sua deleção ou inativação está associada com a redução da virulência. Assim, o presente trabalho teve como objetivo estudar a patogenia e caracterizar aspectos clínicos e virológicos da infecção aguda e latente pelo BoHV-5 (cepa SV-507/99) e por um recombinante com deleção no gene da tk (BoHV-5tkΔ) em ovinos. O capítulo 1 relata a caracterização da infecção pelo BoHV-5 em ovinos. Durante a infecção aguda, cordeiros inoculados com o BoHV-5 (SV-507/99), excretaram vírus em secreções nasais por até 11 dias pós inoculação (pi) e desenvolveram anticorpos neutralizantes em títulos de 16 até 128. A administração de corticoides durante a latência (dia 65 pi) resultou em reativação e excreção viral durante 3 a 8 dias. Sugere-se, assim, que ovinos podem ser utilizados como modelos animais para o estudo da biologia da infecção latente pelo BoHV-5. No capítulo 2, investigou-se a capacidade do BoHV-5tkΔ em estabelecer e reativar a infecção latente em ovinos. Após inoculação viral, o vírus recombinante manteve a capacidade de replicar na cavidade nasal. No dia 40 pi, DNA viral latente foi detectado nos gânglios trigêmeos (TG) de todos os animais, porém demonstrou-se, uma significativa redução (9,7 vezes; p<0,001) na quantidade de DNA do vírus recombinante em relação ao vírus parental, determinado por PCR em tempo real. Após tratamento com dexametasona (Dx), não foi detectado vírus nas secreções nasais dos animais inoculados com o vírus recombinante, contrastando com a excreção viral nos ovinos inoculados com o vírus parental. Porém, alguns suabes nasais dos animais inoculados com o BoHV-5tkΔ foram positivos para o DNA viral, indicando assim, baixos níveis de reativação. Logo, a atividade da TK no BoHV-5 não é necessária para o estabelecimento de latência, mas é crucial para uma reativação eficiente. O capítulo 3, relata uma investigação da capacidade do BoHV-5 e BoHV-5tkΔ em estabelecer e reativar a infecção latente em tecidos linfoides. Durante infecção latente, DNA viral foi detectado nos TGs, tonsilas faringeal e palatina e no linfonodo retrofaríngeo de todos ovinos inoculados com ambos os vírus (parental e recombinante). No dia 40 pi, foi administrada Dx nos animais para induzir reativação viral. Foi detectado RNA mensageiro (mRNA) da glicoproteína B (gB) do BoHV-5, no TG, linfonodos retrofaríngeos e tonsilas dos cordeiros inoculados com o vírus parental. Nos animais inoculados com o BoHV-5tkΔ, mRNA foi detectado apenas nas tonsilas. Logo, sugere-se que tecidos linfoides também são sítios de latência para o BoHV-5 e do recombinante BoHV-5tkΔ, podendo estes vírus serem reativados à partir destes locais. A reativação do recombinante, no entanto parece ocorrer apenas em tecidos linfoides e não em tecidos neurais. Em resumo, os resultados deste estudo contribuem para o conhecimento da patogenia e caracterização da infecção pelo BoHV-5 e pelo recombinante.

O enfisema pulmonar é caracterizado pela destruição das paredes alveolares, sendo a fumaça de cigarro o principal agente etiológico. Pretendeu-se, neste estudo, comparar os efeitos terapêuticos do transplante de células mononucleares da medula óssea (BMMC) e células mesenquimais (CTM) em animais com enfisema pulmonar induzido por exposição à fumaça de cigarro. Camundongos fêmeas da linhagem C57Bl6/J foram expostos à fumaça de cigarro durante 90 dias e, 21 dias após o término do período de exposição, receberam BMMC ou CTM derivadas da medula óssea de camundongos machos da linhagem C57Bl6/J, expressando a proteína GFP. As análises morfométricas mostraram que os tratamentos com BMMC e CTM foram eficientes na recuperação do parênquima pulmonar dos animais expostos à fumaça de cigarro. Testes de fluorescência direta e PCR mostraram a migração de BMMC e CTM para o pulmão. Desta forma, pode-se concluir que, morfologicamente, a terapia celular com BMMC ou CTM é eficaz no tratamento do enfisema pulmonar resultante da exposição à fumaça de cigarro em modelo animal. / Pulmonary emphysema is characterized by destruction of alveolar walls, and the cigarette smoking is the main etiologic agent. It was intended in this study to compare the therapeutic effects of the transplantation of bone marrow mononuclear cells (BMMC) and mesenchymal stem cells (MSC) in animals with pulmonary emphysema induced by exposure to cigarette smoke. C57Bl6/J female mice were exposed to cigarette smoke for 90 days and 21 days after the end of the exposure time, received BMMC or MSC derived from bone marrow of C57Bl6/J male mice expressing the GFP protein. The morphometric analysis showed that treatments with BMMC and MSC were efficient in recovering the lung of animals exposed to cigarette smoke. Fluorescence and PCR tests showed the migration of BMMC and MSC to the lung. Thus, it is concluded the cell therapy with BMMC or CTM is morphologically effective in the treatment of pulmonary emphysema resulting from exposure to cigarette smoke in an animal model.

[pt] O medo é uma parte intrínseca da evolução humana e animal, mas pode se manifestar de forma patológica, como no Transtorno de Ansiedade. Há estudos na literatura que apontam o uso modelos animais para compreender psicopatologias, devido a simplicidade e semelhança neurobiológica. Foram desenvolvidas duas linhagens de ratos, denominadas Cariocas com Alto e Baixo Congelamento (CAC e CBC), que significa os níveis de ansiedade. O objetivo deste estudo foi investigar comportamentos compulsivos e hiperativos nos Cariocas, especificamente o grooming e o rearing de 138 animais (CAC, n=34; CBC, n=36; CTL, n=38). A metodologia foi analítica e descritiva com base em imagens obtidas em gravações do teste do medo contextual, ao longo de 8 minutos antes do choque. Nossos resultados indicaram que os CBC apresentam maior frequência [F(3,60)= 45,94, p<0,0001] e duração [F(3,43)= 21,51, p< 0,0001] do comportamento de rearing quando comparados aos outros grupos, CAC e CTL (rANOVA; P<0,05, teste post hoc de LSD). Do mesmo modo, quanto ao grooming, houve uma diminuição significativa no tempo total [F(2,00)= 6,35, p<0,01]. Portanto, os resultados sugerem que os CBCs exibem um comportamento mais hiperativo, apoiando a hipótese de que podem servir como um modelo animal de TDAH. / [en] Fear is an intrinsic part of human and animal evolution, but it can manifest itself in pathological ways, such as Anxiety Disorder. There are studies in the literature that point to the use of animal models to understand psychopathologies, due to their simplicity and neurobiological similarity. Two strains of rats were developed, called Cariocas with High and Low Freezing (CAC and CBC), which means anxiety levels. The objective of this study was to investigate compulsive and hyperactive behaviors in Cariocas, specifically the grooming and rearing of 138 animals (CAC, n=34; CBC, n=36; CTL, n=38). The methodology was analytical and descriptive based on images obtained from recordings of the contextual fear test, over 8 minutes before the shock. Our results indicated that BCC present a higher frequency [F(3,60)= 45.94, p<0.0001] and duration [F(3,43)= 21.51, p< 0.0001] of behavior rearing when compared to the other groups, CAC and CTL (rANOVA; P<0.05, LSD post hoc test). Likewise, regarding grooming, there was a significant decrease in total time [F(2.00)= 6.35, p<0.01]. Therefore, the results suggest that CBCs exhibit more hyperactive behavior, supporting the hypothesis that they may serve as an animal model of ADHD.

Recursos fisioterapêuticos tem sido utilizados no tratamento de úlceras de perna como a terapia a laser de baixa intensidade. A contaminação bacteriana dessas úlceras é freqüente constituindo-se numa importante complicação da cicatrização. Assim, busca-se investigar os efeitos dessa terapêutica frente às culturas de diferentes espécies bacterianas in vitro e in vivo. Utilizou-se aparelho laser modelo Theralase III-DMC (685 e 830 nm) e diferentes doses (1,2 e 4J). Foram utilizados bactérias, S. aureus ATCC 6538 (Gram+) e P. aeruginosa ATCC 15442 (Gram-), reativadas em B.H.I.Agar inclinado a 37 graus C/24h. Após as bactérias foram re-suspensas em B.H.I. caldo/37 graus Celsius/20h, centrifugadas 3x/15min/4.500rpm, seguida de lavagens e homogeneização. A suspensão foi diluída em placas de cultura celular de 96 poços, submetidas a diluições seriadas sucessivas, encontrando as diluições ideais de \'10 POT.-12\' bactérias/ml para S. aureus e \'10 POT.-15\' bactérias/ml para P. aeruginosa. As soluções bacterianas foram irradiadas com laser de diferentes comprimentos de onda (685 e 830 nm) e diferentes doses (1, 2 e 4J). Dez micro litros da solução bacteriana do último poço foram semeados em placa de petri nos meios Mc Conkey Agar e B.H.I.-Agar bactérias Gram positiva e negativa respectivamente para posterior contagem das unidades formadoras de colônia (U.F.C.´s.). Foram semeadas 10 placas para cada dose de diferente comprimento de onda e espécie bacteriana diferente e 10 placas para o grupo controle, ou seja, sem irradiação laser. Nos estudos in vivo, foram utilizados coelhos, machos, neozelandeses pesando aproximadamente 1,5 Kg. A anestesia foi feita com 1,5 ml/animal de ketamina 100 mg e xylzina 1,0 ml/animal. Foram feitas 6 feridas de 6 mm de diâmentro (punch) em cada orelha, constituindo-se cada animal, um grupo (n=12). As feridas foram previamente contaminadas com S. aureus (G+) e P. aeruginosa (G-). Os animais foram divididos em Grupo 1 (laser 685 nm + G+), Grupo 2 (laser 830 nm + G+), Grupo 3 (laser 685 nm + G-), Grupo 4 (laser 830 nm + G-), Grupo 5 (apenas laser 685 nm), Grupo 6 (apenas laser 830 nm), Grupo 7 (lasers 685 e 830 nm + G-), Grupo 8 (lasers 685 e 830 nm + G+). As úlceras foram fotografadas nos tempos de 24h, 3 dias, 7 dias, 10 dias, 13 dias e 16 dias e posteriormente analisadas com programa Image J, realizadas pelo mesmo indivíduo. Os resultados foram analisados pelo teste estatístico ANOVA e pós-teste de Bonferroni para múltiplas amostras não paramétricas. No experimento in vitro foi observado que todas as doses laser utilizadas tiveram efeito inibitório no crescimento bacteriano em ambas as espécies, sendo esse efeito maior na dose de 4 J/\'CM POT.2\', nos diferentes comprimentos de onda utilizados (685 nm e 830 nm), mesmo quando esses foram usados de forma consecutiva. In vivo, observou-se que no 3º dia pós cirúrgico houve uma diferença estatisticamente significante entre os grupos 1 e 6. No 7º dia a diferença estatística aconteceu entre os grupos 1 e 4. No 10º dia, não houve diferenças estatisticamente significante entre as áreas dos grupos. No 13º dia observou-se diferença estatística entre todos os grupos quando comparados com os grupos 7 e 8 (lasers 685 e 830 nm + G+). No 16º de segmento todas as feridas encontavam-se cicatrizadas. A terapia a laser de baixa intensidade apresentou efeito inibitório do crescimento bacteriano in vitro e nos estudos in vivo, mostrando-se capaz de acelerar o processo de cicatrização de feridas, mesmo contaminadas com diferentes espécies bacterianas. / Physical therapeutic resources have been used to treat leg ulcers, such as laser therapy of low intensity. Bacterial contamination of these ulcers often constitutes itself into a major complication of healing. Thus, search up to investigate the effects of this therapy off the cultures of different bacterial species in vitro and in vivo. It was used laser device model Theralase III-DMC (685 e 830 nm) in different doses (1, 2 e 4J). It was used bacteria S. aureus ATCC 6538 (Gram+) and P. aeruginosa ATCC 15442 (Gram-), reativated in tilted BHI-Agar to 37 Celsius degrees/24h. After the bacteria were re-suspended in broth B.H.I. to 37 Celsius degrees for 20h, centrifuged 3x/15min/4.500rpm, followed by washing and homogenization. The suspension was diluted in 96 wells cell culture plates, and submitted to successive serial dilutions, finding the ideas dilutions of \'10 POT.-12\' bacteria/ml for S. aureus and \'10 POT.-15\' bacteria/ml for P. aeruginosa. The bacterial solutions were irradiated with different wavelength of laser (685 e 830 nm) and different doses (1, 2 e 4J). Ten microliters of bacterial solution from the last well were sowed in Petri´s plate with Mc Conkey agar and BHI-agar to bacterias Gram positive and negative respectively for further counting of colony forming units (CFU´s). Ten plates for each dose of different wavelength and different bacterial species were sowed and 10 boards for the control group, without laser irradiation. In the in vivo studies were used New Zealand male rabbits, weighing approximately 1.5 Kg. Anesthesia was made with 1.5 ml of ketamine 100 mg and xylzina 1.0 mL/animal. Six punched wounds were made in each ear, and each animal constituted a group (n=12). The wounds were previously contaminated with S. aureus (G+) and P. aeruginosa (G-). The animals were divided in Group 1 (laser 685 nm + G+), Group 2 (laser 830 nm + G+), Group 3 (laser 685 nm + G-), Group 4 (laser 830 nm + G-), Group 5 (only laser 685 nm), Group 6 (only laser 830 nm), Group 7 (lasers 685 e 830 nm + G-), Group 8 (lasers 685 e 830nm + G+). The ulcers were photographed in times of 24h, 3, 7, 10, 13 and 16 days and then analyzed with ImageJ software, conducted by the same individual. The results were analyzed by non parametric ANOVA statistical test and post-test for multiple samples by Bonferroni´s test. In the in vitro experiments was observed that all the laser doses used presented an inhibitory effect on bacterial growth in both species, and this effect was greater using the dose of 4J in different wavelengths (685 nm, 830 nm), even when these were applied consecutively. In vivo, it was observed that in the 3rd day after surgery there was a statistically significant difference between groups 1 and 6. In the 7th day happened to statistical difference between groups 1 and 4. In the 10th day there was no statistically significant difference among the areas of groups. In the 13th day there was statistical difference between all groups when compared with groups 7 and 8 (685 and 830 nm lasers + G+). In the 16th to follow all the wounds had been healed. The laser therapy of low intensity showed inhibitory effect of bacterial growth in vitro and in vivo studies and it were able to accelerate the wound healing, even contaminated with different bacterial species.

Os tumores cutâneos e subcutâneos em cães representam um terço das neoplasias nessa espécie. O carcinoma de células escamosas (CCE) é uma neoplasia maligna com origem no epitélio estratificado escamoso da pele e de outras superfícies mucosas. A etiologia do CCE em cães não é bem definida, porém é descrito que a exposição aos raios solares é um importante fator para seu desenvolvimento. O CCE, frequentemente, é precedido pela ceratose actínica (CA). Este trabalho tem como objetivo comparar aspectos clínicos, morfológicos e moleculares da ceratose actínica e carcinoma de células escamosas da pele da região abdominal ventral de cães. Foram coletadas dez amostras de pele apresentando CCE e 9 amostras de pele apresentando CA da região abdominal ventral de caninos domésticos. As amostras foram fixadas em formol a 10%, e rotineiramente processadas para inclusão em parafina. Os cortes histológicos de 5?m foram submetidos à coloração de Hematoxilina e Eosina, para análise histopatológica, e às marcações, por imuno-histoquímica, de E-caderina, p53, Ciclo-oxigenase-2, pancitoqueratina AE1/AE2, vimentina, 5 metilcitosina e Ki67. As expressão de E-caderina, p53, ciclo-oxigenase-2, pancitoqueratina AE1/AE e vimentina foram avaliadas qualititivamente nas 9 amostras de CA e 10 amostras CCE, respectivamente. A metilação global do DNA e a proliferação celular (Ki67) foram quantificadas nos cortes histológicos de CA e CCE por meio da contagem de núcleos de células epiteliais marcados positiva ou negativamente. Os dados foram analisados por meio de testes uni e multivariados. Os cães machos da raça American PitBull Terrier de pelagem branca foram os mais acometidos pela CA e CCE, com média de idade de 8,1 e 8,4 anos, respectivamente. Não houve associação significativa na expressão de p53, COX-2 e vimentina na CA e CCE. Houve aumento no número de células com o núcleo marcado positivamente para Ki-67 e 5 metilcitosina em CCE comparado a CA. Observou-se, também, marcação heterogênea de Ecaderina em CCE. Constatou-se também diminuição na expressão de pancitoqueratina AE1/AE3 quando há invasão linfática e maior expressão de 5 metilcitosina em cães mais idosos, no CCE. Estes achados sugerem que há diferenças entre CA e CCE em relação aos parâmetros estudados, que condizem com a transformação maligna da afecção / Cutaneous and subcutaneous tumors in dogs account for a third of neoplasms in this species. Squamous cell carcinoma (SCC) is a malignant neoplasm that originates in the stratified squamous epithelium of the skin and other mucosal surfaces. The etiology of SCC is not well defined, however it is described that exposure to the sunlight is an important factor for its development. SCC is often preceded by actinic keratosis (AK). This work aims to compare clinical, morphological and molecular aspects of actinic keratosis and squamous cell carcinoma of the skin of the ventral abdominal region of dogs. Ten samples of SCC and 9 skin samples showing AK of the ventral abdominal region of domestic canines were collected. As samples were fixed in 10% formaldehyde, and routinely processed for inclusion in paraffin. Histological sections of 5?m were submitted to staining of Hematoxylin and Eosin for histopathological analysis, and to immunohistochemistry of E-cadherin, p53, Cyclooxygenase-2, pancytokeratin AE1/AE2, vimentin, 5 methylcytosine and Ki-67. The expression of E-cadherin, p53, cyclooxygenase-2, pancytokeratin AE1 / AE and vimentin were qualitatively evaluated in the 9 AK samples and 10 SCC samples, respectively. Overall DNA methylation and cell proliferation (Ki67) were quantified in the histological sections of AK and SCC by counting nuclei of positively or negatively labeled epithelial cells. The data were analyzed by means of uni and multivariate tests. Male dogs of the American PitBull Terrier breed were the most affected by AK and SCC, with an average age of 8.1 and 8.4 years, respectively. There was no significant association in the expression of p53, COX-2 and vimentin in CA and CCE. There was an increase in the number of cells with the nucleus positively labeled for Ki-67 and 5 methylcytosine in CCE compared to CA. There was also a heterogeneous labeling of Ecaderin in CCE. It was also observed a decrease in the expression of pancytokeratin AE1/AE3 when there is lymphatic invasion and greater expression of 5 methylcytosine in older dogs in the ECC. These findings suggest that there are differences between CA and SCC in relation to the studied parameters, which are consistent with the malignant transformation of the disease

Introdução: As queimaduras alcalinas da córnea fazem parte dos ferimentos mais devastadores para o olho. Objetivo: Os objetivos foram investigar o efeito aditivo do olho seco na atividade de proteases na superfície ocular e complicações corneanas apos lesão ocular alcalina e também investigar a eficácia da terapia anti-inflamatória controlar este processo. Métodos: Um modelo combinado (CM) de olho seco e queimadura alcalina unilateral foi usada. Resumidamente, camundongos C57BL /6 foram submetidos à queimadura alcalina unilateral (AB) com ou sem olho seco concomitante por 2 ou 5 dias. Um grupo separado de animais foram submetidos a ambos modelos (AB e olho seco) foram tratados topicamente com a Dexametasona, ou Doxiciclina ou colírio controle de solução salina balanceada (BSS). Os camundongos foram observados diariamente para verificar o aparecimento de perfuração da córnea. Córneas inteiras foram colhidas e homogeneizadas para extração de RNA. PCR quantitativo em tempo real foi realizada para medir a expressão de citocinas inflamatórias, metaloproteinases de matriz (MMP). Ativdade da MMP-9, atividade da gelatinase e da atividade da mieloperoxidase (MPO) foram avaliados em córneas homogeneizadas. A presença da infiltração de neutrófilos foi avaliada por imunohistoquímica e citometria de fluxo. Resultados: Os olhos submetidos ao modelo combinado de AB e olho seco (CM) tiveram 20% de taxa de perfuração estéril da córnea 1 dia após a lesão inicial; que aumentou para 35% em 5 dias. Houve um atraso no fechamento da ferida e aumento de opacidade residual da córnea. Aumento dos níveis de IL-1, IL-6, e as MMPs 1, -3, -8, -9, 13 e CXCL1, foram encontrados após 2 dias no CM comparando com córneas AB. Um aumento da imunorreatividade da MMP-1, -3, -9 e -13 e atividade gelatinolítica da MMP-9 foram observadas em comparação com córneas do grupo CM comparado com AB. O aumento da infiltração de neutrófilos e a atividade da mieloperoxidase foi observado no grupo CM comparando-se com córneas do grupo AB após dois dias da lesão inicial. Não foram observadas perfurações nas córneas tratadas com Dexametasona. Nos olhos tratados com Doxiciclina, 100% do fechamento da ferida pós-lesão no dia 2 e pontuação significantemente menor na escala de opacidade da córnea em relação ao BSS também foram observadas nos dias 4 e 5. Córneas tratadas com Dexametasona apresentaram a menor pontuação de opacidade da córnea. Tratamento com Dexametasona diminuiu significativamente os níveis de mRNA da IL-1, IL-6, e MMP-1, -9, -13, e o TIMP-1 depois de 2 dias, e aumentou os níveis de MMP-8, enquanto que o tratamento com Doxiciclina diminuiu significativamente IL-1, IL-6, MMP-8, -9 e, em comparação com córneas tratadas com BSS. A diminuição da imunorreatividade da MMP-1, -9 e -13 e atividade gelatinolítica foram vistos em córneas tratadas com Doxiciclina e Dexametasona em comparação com o veículo BSS. O aumento da infiltração de neutrófilos e a atividade da mieloperoxidase foi observado no grupo BSS comparação com o grupo Dexametasona 2 dias pós-lesão. Conclusões: O olho seco ambiental piora o resultado da queimadura ocular alcalina, criando uma tempestade de citocinas e proteases, aumentando o risco de perfuração corneana. Entretanto, o tratamento inicial com terapia anti-inflamatória é muito eficaz na preservação da transparência corneana e facilita a cicatrização de feridas, enquanto controla a produção de MMP e a migração de neutrófilos. / Introduction: Alkali burns to the cornea are among the most devastating injuries to the eye. Purpose: To evaluate the effects of dry eye on ocular surface protease activity and sight threatening corneal complications following ocular surface chemical injury and also to investigate the efficacy of anti-inflammatory therapy controlling this. Methods: A combined model (CM) of unilateral alkali burn and dry eye was used. Briefly, C57BL/6 mice were subjected to unilateral alkali burn (AB) with or without concomitant dry eye for 2 or 5 days. A separate group of mice subjected to both AB and dry eye were topically treated with Dexamethasone (Dex), Doxycycline (Doxy) or saline control (BSS). Mice were observed daily for appearance of corneal perforation. Whole corneas were harvested and lysed for RNA extraction. Quantitative real time PCR was performed to measure expression of inflammation cytokines, matrix metalloproteinases (MMP). MMP-9 activity, gelatinase activity and myeloperoxidase (MPO) activity were evaluated in corneal lysates. Presence of infiltrating neutrophils was evaluated by immunohistochemistry and flow cytometry. Results: Eyes subjected to the combined model of AB and dry eye (CM) had 20% sterile corneal perforation rate as soon as 1 day after the initial injury, which increased to 35% by 5 days, delayed wound closure and increased corneal opacity. Increased levels of IL- 1, IL-6, and MMPs 1,-3,-8,-9, 13, and CXCL1 transcripts were found after 2 days in CM compared to AB corneas. Increased MMP-1, -3,-9 and -13 immunoreactivity and gelatinolytic activity were seen in CM corneas compared to AB. Increased neutrophil infiltration and MPO activity was noted in the CM group compared to AB 2 days post injury. No perforations were observed in the Dex treated corneas. Doxy treated eyes had 100% of wound closure 2D post-injury, and significant lower corneal opacity scores at days 4 and 5 compared to BSS. Dex-treated corneas showed the lowest corneal opacity score. Dex treatment significantly decreased mRNA levels of IL-1, IL-6, and MMPs -1,-9, -13, and TIMP-1 after 2 days with increased levels of MMP-8, while Doxy treatment significantly decreased IL-1, IL-6, MMP-8, and -9, compared to BSS-treated corneas. Decreased MMPs -1,-9 and -13 immunoreactivity and gelatinolytic activity were seen in corneas treated with Doxy and Dex compared to BSS vehicle. Increased neutrophil infiltration and MPO activity was noted in the BSS group compared to Dex 2 D post-injury. Conclusions: Desiccating stress worsens outcome of ocular alkali burn, creating a cytokine and protease storm with greater neutrophil infiltration, increasing the risk of corneal perforation. However, early treatment with anti-inflammatory therapy is very efficacious in preserving corneal clarity and facilitating wound healing, while controlling MMP production and migration of neutrophils.

Introdução: A curcumina é um polifenol presente no rizoma da espécie Curcuma longa L. que tem sido usado há séculos como medicamento anti-inflamatório na medicina asiática. A síndrome nefrótica é classicamente tratada com corticosteroides, uma potente classe antiinflamatória e imunossupressora. O tratamento pode trazer sérios efeitos adversos. Objetivos: Este estudo foi desenhado para avaliar o efeito anti-inflamatório e antiproteinúrico da C. longa na forma de droga vegetal, na lesão renal induzida pela doxorrubicina. Desenho do estudo: Trata-se de um estudo experimental in vivo. Métodos: O efeito anti-inflamatório e anti-proteinúrico da C. longa foi avaliado utilizando-se 4 grupos de ratos Wistar: dois grupos com lesão renal induzida por doxorrubicina (3,5 mg/kg) em dose única endovenosa, sendo um alimentando-se de ração padrão e outro com ração misturada a C. longa (5 mg/g de ração). Outros dois grupos controles sem lesão renal foram alimentados, sendo um com ração padrão e outro com C. longa. Foram coletadas amostras de urina para dosagem de albuminúria a cada 2 semanas. Após 8 semanas os animais foram anestesiados e coletado sangue para dosagem no plasma de creatinina, albumina, sódio, potássio, colesterol e osmolalidade. Nas amostras de urina foram dosados albuminúria, sódio, potássio, osmolalidade e os mediadores inflamatórios proteína quimiotática para monócitos-1 e fator de transformação do crescimento beta urinário. Foi coletado tecido renal para realização de microscopia de luz e de imuno-histoquímica para desmina, vimentina e células ED-1 positivas. Resultados: Após a 8a semana de acompanhamento, o tratamento com C. longa atenuou o aumento do MCP-1 urinário, do TGF-? urinário, da imunomarcação para desmina, vimentina e células ED-1+ nos ratos com lesão renal induzida. Conclusão: Os resultados sugerem que o uso de C. longa em um modelo experimental de lesão renal por doxorrubicina, por 8 semanas, não reduz a albuminúria, mas leva a diminuição dos mediadores inflamatórios renais MCP-1 e TGF-? urinário, além de imunomarcação para desmina, vimentina e células ED-1+ no tecido renal. / Background: Curcumin is a polyphenol present in the rhizome of the species Curcuma longa L., which has been used for centuries as an anti-inflammatory remedy in Asian medicine. Nephrotic syndrome is classically treated with corticosteroids, a potent antiinflammatory and immunosuppressive class. The treatment can cause serious adverse effects. Objectives: This study was designed to evaluate the anti-inflammatory and antiproteinuric effects of C. longa, as powdered dried rhizomes, in renal injury induced by doxorubicin. Study design: This is an in vivo experimental study. Methods: The antiinflammatory and anti-proteinuric effects of C. longa were evaluated in four groups of Wistar rats: two groups with intravenous doxorubicin-induced kidney injury (3.5 mg/kg), one fed with standard food and another with standard food mixed with C. longa (5 mg/g food). Two other control groups without kidney injury were fed, one with standard and one with C. longa-mixed food. Urine samples were collected for albuminuria every 2 weeks. After 8 weeks, the animals were anesthetized and blood was collected for measurement of plasma creatinine, albumin, sodium, potassium, cholesterol and osmolality. In the urine samples, measurements of albuminuria, sodium, potassium, osmolality and inflammatory mediators as monocyte chemoattractant protein-1 and transforming growth factor beta were done. Renal tissue was collected for light microscopy and immunohistochemistry for desmin, vimentin and ED-1 positive cells. Results: After the 8th week of follow-up, treatment with C. longa attenuated the increase of urinary MCP-1, urinary TGF-?, and immunostaining for desmin, vimentin and ED-1+ cells in rats with doxorubicin-induced kidney injury. Conclusion: The results suggest that the use of C. longa in an experimental model of nephrotic syndrome for 8 weeks does not reduce albuminuria, but there is a decrease in the inflammatory mediators urinary MCP- 1, urinary TGF-?, and immunostaining for desmin, vimentin and ED-1+ cells.

A síndrome dos ovários policísticos (SOP) é um distúrbio endócrino caracterizado por anovulação crônica e hiperandrogenismo. Modelos animais em ratas são usados para estudar processos complexos da SOP. As procineticinas (PROKs) são proteínas relacionadas a apoptose, proliferação vascular e regulação do sistema reprodutor. No entanto, seu padrão de expressão e função não são bem conhecidos no ovário com SOP. Este estudo propõe-se a identificar e localizar as PROKs e seus receptores nos ovários de ratas com SOP experimental. Foram utilizadas 33 ratas Wistar divididas em 3 grupos que receberam, entre o 1º e o 3º dia de vida, uma única injeção por via subcutânea de: propionato de testosterona (1,25 mg/0,1 mL, GT, n=12); benzoato de estradiol (0,5 mg/0,1 mL, GE, n=11) e óleo de oliva (0,1 mL, GC, n=10). Aos 90-95 dias de idade, os animais foram eutanaziados e os ovários removidos para avaliação da expressão gênica e proteica das procineticinas 1 e 2 e seus receptores por qRT-PCR e imunoistoquímica. A expressão dos genes Prok1 e Prok2 nos ovários de ratas do GT foi maior quando comparado ao GC (p=0,0157 e p=0,0354). Houve maior expressão da proteína PROK2 em células da teca interna (p=0,0049) e nas células intersticiais (p=0,0068) de folículos antrais nos ovários de ratas do GT em relação ao GC. PROK2 foi mais expressa em células da granulosa dos folículos pré-antrais comparado aos folículos antrais no GT (p=0,0098). Concluímos que as procineticinas estão expressas no ovário do modelo estudado em diferentes padrões, e que a PROK2 parece exibir maior expressão no grupo testosterona. Por apresentar papéis relevantes no controle do eixo hipotálamo-hipófise-gonadal, acreditamos que esses resultados podem abrir uma linha de investigação sobre o papel dessa proteína na fisiopatologia da síndrome / Polycystic ovary syndrome (PCOS) is an endocrine disorder characterized by chronic anovulation and hyperandrogenism. Animal models have been used to study PCOS pathophysiology. Prokineticins (PROKs) are proteins with functions related to apoptosis, vascular proliferation and reproductive physiology. However, their expression patterns and functions are unknown in the PCOS ovary. The aim of this study is to identify and localize the PROKs and their receptors in PCOS rat models induced by testosterone or estradiol. Thirty-three female Wistar rats aged between 1-3 days were sorted into three groups according to the compounds injected subcutaneously: Testosterone propionate (1.25 mg / 0.1 mL, TG, n = 12); Estradiol benzoate (0.5 mg / 0.1 mL, EG, n = 11) and olive oil (0.1 mL, CG, n = 10). At 90-95 days of age, the animals were euthanized and the ovaries removed for evaluation of prokineticins 1 and 2 and their receptors by qRT-PCR and immunohistochemistry. The expression of the genes Prok1 and Prok2 in the ovaries was higher in TG compared to CG (p=0.0157 and p=0.0345). There was higher expression of PROK2 in theca interna (p=0.0049) and interstitial cells (p=0.0068) of antral follicles in the ovaries of TG vs CG; PROK2 was higher expressed in the granulosa cells of the preantral follicles compared to the antral follicles in the TG (p=0.0098). We conclude that prokineticins are expressed in the ovary of the animal model studied and they present different patterns, PROK2 seems to exhibit higher expression in the testosterone group. Due important roles in the control of the hypothalamicpituitary- gonadal axis, we believe that these results may open a line of investigation about the role of this protein in the pathophysiology of the syndrome

Made available in DSpace on 2016-04-29T13:17:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Najara Karine Salomao Pereira Almeida.pdf: 2355640 bytes, checksum: 39d43e135617768e1e42e6084f16eca9 (MD5) Previous issue date: 2013-05-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Chronic Mild Stress (SMS) is an anhedonia experimental animal model, induced by the chronic exposition of rats to a mild stressors protocol, and measured by the intake of sucrose, intracranial stimulation and/or site preference conditioning. Aside from anhedonia, this model is also recognized by the production of losses in the body weight, independently of specific feeding regimes and other characteristics analogous to the conditions that compose the depression diagnosis. The objective of the present study was to investigate if the exposition of the subjects to a water VT concurrent scheme water with sucrose 8% VT, of same value, before and after the stressors protocol, would produce disturbances: (1) in the body weight of the subjects; (2) in the diary consumption of food and water; (3) in the consumption and preference of liquids; (4) in the time during which the subjects remained close to the stimulus water and to the stimulus water with sucrose in the operant conditioning box, and (5) in the time in which the subjects have emitted responses in the site of the water fountain and of the water with sucrose 8% fountain. The design was composed by three experimental conditions: (1) exposition of the subjects VTP3, VTP4, VTP7, VTP8, P5, P6, P13 and P15 to the stressors protocol; (2) submission of the subjects VTP3, VTP4, VTP7 and VTP8 to the concurrent 20s VT sessions and (3) application of consumption and liquids´ preference tests in all of the experimental subjects, including the subject C10. The main disturbances noticed were: (a) decrease in the weight losses during the exposition to the protocol and decrease in weight variations during the role experiment; (b) diary water consumption similar to the ones of the subjects submitted to the FR and VI sessions; (c) increase in the diary food consumption, mainly during the exposition to the protocol; (d) constant consumption and preference by sucrose; (e) preference by sucrose in the 20s VT sessions after the exposition to the protocol, and (f) increase in the subjects´ general activity along the submission to the 20s VT sessions. The subjects exposed only to the protocol and to the liquid consumption tests didn´t present decrease in the sensibility to the reinforcer stimulus water with sucrose, what is commonly observed in other studies / Chronic Mild Stress (CMS) é um modelo animal experimental de anedonia, induzida através da exposição crônica de ratos a um protocolo de estressores pouco severos, e medida a partir de ingestão de sacarose, estimulação intracraniana e/ou condicionamento de preferência de lugar. Além de anedonia, este modelo também é reconhecido por produzir perda de peso corporal, independente de regime alimentar específico, e outras características análogas ao que compõe o diagnóstico de depressão. O objetivo do presente estudo foi investigar se a exposição de sujeitos a um esquema concorrente VT água VT água com sacarose a 8%, de mesmo valor, antes e após o protocolo de estressores, produzia alterações: (1) no peso corporal dos sujeitos; (2) no consumo diário de ração e água; (3) no consumo e preferência de líquidos; (4) no tempo em que os sujeitos permaneceram do lado do estímulo água ou do estímulo água com sacarose na caixa de condicionamento operante, e (5) no tempo em que os sujeitos emitiram respostas na região do bebedouro água ou do bebedouro água com sacarose a 8%. O delineamento foi composto por três condições experimentais: (1) exposição dos sujeitos VTP3, VTP4, VTP7, VTP8, P5, P6, P13 e P15 ao protocolo de estressores; (2) submissão dos sujeitos VTP3, VTP4, VTP7 e VTP8 as sessões concorrentes VT 20s e (3) aplicação dos testes de consumo e preferência de líquidos a todos os sujeitos da pesquisa, incluindo o sujeito C10. As principais alterações observadas foram: (a) menor diminuição de peso durante a exposição ao protocolo e menor variação de peso durante todo o experimento (b) consumo diário de água semelhante aos dos sujeitos submetidos às sessões de FR e VI; (c) aumento no consumo diário de ração, principalmente durante a exposição ao protocolo; (d) consumo de líquidos e preferência por sacarose constantes; (e) preferência por sacarose nas sessões VT 20s após a exposição dos sujeitos ao protocolo, e (f) aumento da atividade geral dos sujeitos ao longo da submissão às sessões VT 20s. Os sujeitos expostos somente ao protocolo e aos testes de consumo de líquido não apresentaram diminuição de sensibilidade ao estímulo reforçador água com sacarose comumente observado nos outros estudos