Introdução: As queimaduras alcalinas da córnea fazem parte dos ferimentos mais devastadores para o olho. Objetivo: Os objetivos foram investigar o efeito aditivo do olho seco na atividade de proteases na superfície ocular e complicações corneanas apos lesão ocular alcalina e também investigar a eficácia da terapia anti-inflamatória controlar este processo. Métodos: Um modelo combinado (CM) de olho seco e queimadura alcalina unilateral foi usada. Resumidamente, camundongos C57BL /6 foram submetidos à queimadura alcalina unilateral (AB) com ou sem olho seco concomitante por 2 ou 5 dias. Um grupo separado de animais foram submetidos a ambos modelos (AB e olho seco) foram tratados topicamente com a Dexametasona, ou Doxiciclina ou colírio controle de solução salina balanceada (BSS). Os camundongos foram observados diariamente para verificar o aparecimento de perfuração da córnea. Córneas inteiras foram colhidas e homogeneizadas para extração de RNA. PCR quantitativo em tempo real foi realizada para medir a expressão de citocinas inflamatórias, metaloproteinases de matriz (MMP). Ativdade da MMP-9, atividade da gelatinase e da atividade da mieloperoxidase (MPO) foram avaliados em córneas homogeneizadas. A presença da infiltração de neutrófilos foi avaliada por imunohistoquímica e citometria de fluxo. Resultados: Os olhos submetidos ao modelo combinado de AB e olho seco (CM) tiveram 20% de taxa de perfuração estéril da córnea 1 dia após a lesão inicial; que aumentou para 35% em 5 dias. Houve um atraso no fechamento da ferida e aumento de opacidade residual da córnea. Aumento dos níveis de IL-1, IL-6, e as MMPs 1, -3, -8, -9, 13 e CXCL1, foram encontrados após 2 dias no CM comparando com córneas AB. Um aumento da imunorreatividade da MMP-1, -3, -9 e -13 e atividade gelatinolítica da MMP-9 foram observadas em comparação com córneas do grupo CM comparado com AB. O aumento da infiltração de neutrófilos e a atividade da mieloperoxidase foi observado no grupo CM comparando-se com córneas do grupo AB após dois dias da lesão inicial. Não foram observadas perfurações nas córneas tratadas com Dexametasona. Nos olhos tratados com Doxiciclina, 100% do fechamento da ferida pós-lesão no dia 2 e pontuação significantemente menor na escala de opacidade da córnea em relação ao BSS também foram observadas nos dias 4 e 5. Córneas tratadas com Dexametasona apresentaram a menor pontuação de opacidade da córnea. Tratamento com Dexametasona diminuiu significativamente os níveis de mRNA da IL-1, IL-6, e MMP-1, -9, -13, e o TIMP-1 depois de 2 dias, e aumentou os níveis de MMP-8, enquanto que o tratamento com Doxiciclina diminuiu significativamente IL-1, IL-6, MMP-8, -9 e, em comparação com córneas tratadas com BSS. A diminuição da imunorreatividade da MMP-1, -9 e -13 e atividade gelatinolítica foram vistos em córneas tratadas com Doxiciclina e Dexametasona em comparação com o veículo BSS. O aumento da infiltração de neutrófilos e a atividade da mieloperoxidase foi observado no grupo BSS comparação com o grupo Dexametasona 2 dias pós-lesão. Conclusões: O olho seco ambiental piora o resultado da queimadura ocular alcalina, criando uma tempestade de citocinas e proteases, aumentando o risco de perfuração corneana. Entretanto, o tratamento inicial com terapia anti-inflamatória é muito eficaz na preservação da transparência corneana e facilita a cicatrização de feridas, enquanto controla a produção de MMP e a migração de neutrófilos. / Introduction: Alkali burns to the cornea are among the most devastating injuries to the eye. Purpose: To evaluate the effects of dry eye on ocular surface protease activity and sight threatening corneal complications following ocular surface chemical injury and also to investigate the efficacy of anti-inflammatory therapy controlling this. Methods: A combined model (CM) of unilateral alkali burn and dry eye was used. Briefly, C57BL/6 mice were subjected to unilateral alkali burn (AB) with or without concomitant dry eye for 2 or 5 days. A separate group of mice subjected to both AB and dry eye were topically treated with Dexamethasone (Dex), Doxycycline (Doxy) or saline control (BSS). Mice were observed daily for appearance of corneal perforation. Whole corneas were harvested and lysed for RNA extraction. Quantitative real time PCR was performed to measure expression of inflammation cytokines, matrix metalloproteinases (MMP). MMP-9 activity, gelatinase activity and myeloperoxidase (MPO) activity were evaluated in corneal lysates. Presence of infiltrating neutrophils was evaluated by immunohistochemistry and flow cytometry. Results: Eyes subjected to the combined model of AB and dry eye (CM) had 20% sterile corneal perforation rate as soon as 1 day after the initial injury, which increased to 35% by 5 days, delayed wound closure and increased corneal opacity. Increased levels of IL- 1, IL-6, and MMPs 1,-3,-8,-9, 13, and CXCL1 transcripts were found after 2 days in CM compared to AB corneas. Increased MMP-1, -3,-9 and -13 immunoreactivity and gelatinolytic activity were seen in CM corneas compared to AB. Increased neutrophil infiltration and MPO activity was noted in the CM group compared to AB 2 days post injury. No perforations were observed in the Dex treated corneas. Doxy treated eyes had 100% of wound closure 2D post-injury, and significant lower corneal opacity scores at days 4 and 5 compared to BSS. Dex-treated corneas showed the lowest corneal opacity score. Dex treatment significantly decreased mRNA levels of IL-1, IL-6, and MMPs -1,-9, -13, and TIMP-1 after 2 days with increased levels of MMP-8, while Doxy treatment significantly decreased IL-1, IL-6, MMP-8, and -9, compared to BSS-treated corneas. Decreased MMPs -1,-9 and -13 immunoreactivity and gelatinolytic activity were seen in corneas treated with Doxy and Dex compared to BSS vehicle. Increased neutrophil infiltration and MPO activity was noted in the BSS group compared to Dex 2 D post-injury. Conclusions: Desiccating stress worsens outcome of ocular alkali burn, creating a cytokine and protease storm with greater neutrophil infiltration, increasing the risk of corneal perforation. However, early treatment with anti-inflammatory therapy is very efficacious in preserving corneal clarity and facilitating wound healing, while controlling MMP production and migration of neutrophils.

A descoberta de aminopeptidase regulada por insulina (IRAP), a qual hidrolisa peptídeos como ocitocina e vasopressina e é receptora de angiotensina IV, destaca a importância do estudo do envolvimento de peptidases na função endócrina do adipócito. Estudos recentes detectaram alterações das atividades de aminopeptidase neutra e de dipeptidil peptidase IV (DPPIV) no plasma e no hipotálamo e hipocampo na obesidade induzida por glutamato monossódico (MSG). A presente tese propôs (i) a existência de atividades aminopeptidásicas ácida (APA), básica (APB), neutra insensível (APM) e sensível à puromicina (PSA), metionil (MetAP) e DPPIV, além da já conhecida (leucil (LAP)/cistil (CAP)/IRAP), nas frações de membrana plasmática (FM) e de alta (HDM) e baixa (LDM) densidade microssomal de adipócitos isolados do depósito de gordura retroperitoneal; (ii) que suas atividades catalíticas, expressões gênicas e tráfego subcelular seriam diferenciados entre obesos induzidos por MSG, submetidos ou não à privação alimentar e em animais controle sadios, submetidos ou não a privação alimentar; (iii) e influenciadas por insulina, angiotensina II, angiotensina IV e vasopressina. A existência de todas essas aminopeptidases no adipócito foi demonstrada, sendo a APM a que apresenta maior Vmax e maior eficiência catalítica e a APA a maior afinidade. Os animais obesos apresentaram aumento do diâmetro médio dos adipócitos e aumento do lipócrito, caracterizando hipertrofia adipocítica, enquanto os controles privados de alimento tiveram um aumento no número de adipócitos e aumento no lipócrito, caracterizando hiperplasia adipocítica. Pela primeira vez, um perfil variado de atividades aminopeptidásicas distribuídas em diferentes compartimentos subcelulares do adipócito é evidenciado juntamente com a demonstração de diferenças no padrão de distribuição destas atividades entre os ratos obesos e sadios, privados ou não de alimento. Dentre as novas aminopeptidases detectadas no adipócito não há nenhuma com a característica clássica de IRAP. No geral, as alterações das atividades catalíticas nas diferentes situações sob estudo mostram o envolvimento dessas novas aminopeptidases na regulação endócrina do balanço energético (provavelmente via ação hidrolítica sobre angiotensina II e vasopressina) sob modulação por angiotensina IV (APB, APM, DPPIV, LAP/IRAP, MetAP e PSA em animais controle sadios e APB em animais controle privados de alimento), angiotensina II (APB e PSA nos animais obesos) e vasopressina (APB nos animais obesos privados de alimento; e influenciadas em seu tráfego subcelular por angiotensina II (CAP, DPPIV e LAP/IRAP) e angiotensina IV (LAP/IRAP). O tráfego subcelular da conhecida atividade CAP/IRAP mostrou-se suscetível à insulina e vasopressina / The discovery of insulin-regulated aminopeptidase (IRAP), which hydrolyzes peptides such as oxytocin and vasopressin and is an angiotensin IV receptor, highlights the importance of the involvement of peptidases in the endocrine function of adipocyte. Recent studies have detected changes in aminopeptidase activities of neutral aminopeptidase and dipeptidyl peptidase IV (DPPIV) in the plasma and in the hypothalamus and hippocampus of rats with obesity induced by monosodium glutamate (MSG). The present thesis proposes (i) the existence of acid (APA), basic (APB), neutral insensitive (APM) and puromycin sensitive (PSA) aminopeptidases, methionyl aminopeptidase (MetAP) and dipeptidyl peptidase IV (DPPIV), besides the well-known cystyl (CAP) / leucine aminopeptidase (LAP) / IRAP) in plasma membrane (MF) and in high (HDM) and low (LDM) density microsomes of isolated adipocytes from retroperitoneal fat pad; (ii) that their catalytic activities, gene expression and subcellular trafficking were different among MSG-induced obese and healthy control rats (food deprived or not); (iii) and influenced by insulin, angiotensin II and IV, and vasopressin. The existence of all these adypocite aminopeptidases was demonstrated. APM has a highest Vmax and catalytic efficiency, while APA has a highest substrate affinity. The obese animals have increased mean diameter of adipocytes and lipocrit, characterizing hypertrophy, while the food deprived rats had an increased number of adipocytes and lipocrit, characterizing hyperplasia. For the first time, a profile of varied aminopeptidases activities distributed in different subcellular compartments of adipocyte is evidenced together with the demonstration of differences in the distribution pattern of these activities among the obese and healthy rats, food deprived or not. Among these novel aminopeptidases detected in adipocytes there is no one with the classical characteristic of IRAP. In general, changes on catalytic activities in these different situations show the involvement of these novel aminopeptidases in the endocrine regulation of energy balance (probably via hydrolytic action on angiotensin II and vasopressin) under modulation by angiotensin IV (APB, APM, DPPIV, LAP/IRAP, MetAP and PSA in healthy animals and APB in food deprived healthy animals), by angiotensin II (APB and PSA in obese) and by vasopressin (APB in food deprived obese animais); and under influence of by angiotensin II (CAP, DPPIV, LAP/IRAP) and angiotensin IV (LAP/IRAP) on their subcellular trafficking. Subcellular trafficking of the well-known CAP/IRAP was susceptible to insulin and vasopressin

O presente estudo foi subdividido em duas partes: análises genéticas e análises econômicas. A primeira teve por objetivos definir modelos de avaliação genética para as características de desempenho e carcaça em uma linhagem comercial de frangos e estimar os parâmetros genéticos e fenotípicos para essas características. A segunda parte teve por objetivos derivar os ponderadores econômicos para essas características de acordo com dois segmentos de mercado de carne de frango e propor índices econômicos de seleção para esses segmentos. As características avaliadas foram: taxa de conversão alimentar (CA), peso corporal à seleção juvenil (PC), pesos de carcaça (PCAR), carne de peito (PPEI) e pernas (PPER), rendimentos de carcaça (RCAR), carne de peito (RPEI) e pernas (RPER). As estimativas dos componentes de (co)variância foram obtidas pelo método de máxima verossimilhança restrita utilizando os programas MTDFREML e VCE-6. O teste de razão de verossimilhança foi utilizado para verificar qual o modelo mais adequado à avaliação genética para cada característica. Para a obtenção dos ponderadores econômicos foi desenvolvido um modelo bioeconômico determinístico e a análise econômica foi simulada para uma cadeia de produção de frangos integrada. Foi proposto um índice de seleção para o segmento de mercado frango inteiro e outro para cortes de frango. Foram obtidas estimativas de correlação por postos de Spearman entre os valores preditos pelos dois índices para três intensidades de seleção. Os efeitos de ambiente permanente materno e genético aditivo materno foram significativos (P<0,01) para todas as características. As estimativas de herdabilidade direta e materna foram 0,29 e 0,02 para CA, 0,45 e 0,05 para PC, 0,17 e 0,04 para PCAR, 0,26 e 0,06 para PPEI, 0,22 e 0,02 para PPER, 0,31 e 0,02 para RCAR, 0,53 e 0,04 para RPEI, e 0,44 e 0,02 para RPER, respectivamente. Os ponderadores econômicos foram -1,1783 R$/ponto para CA, 0,007 e 0,006 R$/g para PC respectivamente para o segmento de mercado frango inteiro e cortes de frango, 0,0552, 0,0758 e 0,0629 R$/% para RCAR, RPEI e RPER, respectivamente. Os resultados sugerem que todas as características podem ser selecionadas esperando progresso genético na população estudada. Os efeitos maternos foram importantes, mesmo de pequena magnitude (0,02 a 0,06), e devem ser considerados nos modelos de avaliação genética a fim de obter maior acurácia da predição dos valores genéticos individuais. A CA representou relevante impacto econômico para os dois segmentos de mercado. Para o segmento de mercado cortes de frango, as características de carcaça foram quase tão importantes quanto às de desempenho. A classificação das aves gerada pelos dois índices foi alterada à medida que diminuiu a proporção de aves selecionadas. Portanto, índices de seleção distintos devem ser considerados nos programas de melhoramento de frangos enquanto segmentos diferentes de mercado de carne de frango na proposta de maior eficiência econômica da utilização do mérito genético predito. / The present research was subdivided in two parts: genetic analyses and economic analyses. The first part was conducted to determine models for genetic evaluation of performance and carcass traits in a commercial broiler line and to estimate genetic and phenotypic parameters for these traits. The second part was conducted to derive economic weights for these traits according to two market segments of broiler meat and to propose economic selection indexes for these segments. The traits analyzed were: feed conversion ratio (CA), body weight at juvenile selection (PC), carcass (PCAR), breast meat (PPEI) and leg (PPER) weights, and carcass (RCAR), breast meat (RPEI) and leg (RPER) yields. Estimates of the (co)variance components were obtained by the restricted maximum likelihood method by the software MTDFREML and VCE-6. The likelihood ratio test was applied in order to verify which model was more adapted to the genetic evaluation for each trait. A deterministic bioeconomic model was developed for the derivation of economic weights and the economic analysis was simulated for an integrated broiler production system. It was proposed a selection index for the market segment of whole carcass and another for cuts. Spearman correlation estimates among predicted values from the two indexes were obtained for three selection intensities. For all traits, the maternal genetic and permanent environmental effects were significant (P<0.01). The estimates of direct and maternal heritability were 0.29 and 0.02 for CA, 0.45 and 0.05 for PC, 0.17 and 0.04 for PCAR, 0.26 and 0.06 for PPEI, 0.22 and 0.02 for PPER, 0.31 and 0.02 for RCAR, 0.53 and 0.04 for RPEI, and 0.44 and 0.02 for RPER, respectively. The economic weights were -1.1783 R$/point for CA, 0.007 and 0.006 R$/g for PC respectively for the market segment of whole carcass and cuts, 0.0552, 0.0758 and 0.0629 R$/% for RCAR, RPEI and RPER, respectively. The results suggest that traits analyzed can be selected and genetic progress will be expected. Maternal effects were important, even of small magnitude (0.02 to 0.06), and should be considered in genetic evaluation models in order to obtain accurate prediction of the breeding values of the individuals. The CA represented significant economic impact for the two market segments. For the market segment of cuts, carcass traits were almost as important as the performance traits. The classification of chickens generated by the two selection indexes was changed as the proportion of selected chickens decreased. Therefore, different selection indexes should be considered in broiler breeding programs while different segments of broiler meat market in the proposal for greater economic efficiency in the use of predicted genetic merit.

Submitted by Alexandre Sousa (alexandre.sousa@incqs.fiocruz.br) on 2015-05-13T17:02:04Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_Livia.PDF: 2652314 bytes, checksum: 396aac83a3b7b6106b6eca1b2823cb17 (MD5) / Approved for entry into archive by Alexandre Sousa (alexandre.sousa@incqs.fiocruz.br) on 2015-05-13T17:02:19Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação_Livia.PDF: 2652314 bytes, checksum: 396aac83a3b7b6106b6eca1b2823cb17 (MD5) / Approved for entry into archive by Alexandre Sousa (alexandre.sousa@incqs.fiocruz.br) on 2015-05-13T17:02:32Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação_Livia.PDF: 2652314 bytes, checksum: 396aac83a3b7b6106b6eca1b2823cb17 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-05-13T17:02:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_Livia.PDF: 2652314 bytes, checksum: 396aac83a3b7b6106b6eca1b2823cb17 (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde / Passados quase 16 anos após o surgimento dos medicamentos genéricos no Brasil em 1999, sua aceitação por parte dos prescritores e da população ainda não chegou a níveis alcançados por países que adotaram a política há mais tempo. A principal desconfiança da população é em relação à qualidade dos produtos devido ao baixo custo e, associações que a palavra “genérico” tem conotação em determinadas frases como sendo algo de pouca qualidade ou incompleto, que não atingiu o esperado, carregando assim uma forma pejorativa de se referir a um produto. Apesar da qualidade destes produtos ser garantida pela resolução RDC n°17/2010 que regulamenta as boas práticas para fabricação de medicamentos, o controle de qualidade pós-mercado ainda deixa a desejar. A análise laboratorial do produto, salvo por motivos de renovação de registro, só é atualmente feita quando há denúncias devido a ocorrência de muitos casos de efeitos adversos ou ineficácia a cerca de um medicamento. Nestes casos, os testes realizados são relativos ao teor, características organolépticas, microbiológicas e potência. Porém, nenhuma dessas verificações gera resultados capazes de comprovar o real comportamento dos fármacos no organismo humano. Com isso, faz-se necessária a realização de estudos que comprovem a segurança e eficácia dos medicamentos genéricos disponíveis no mercado brasileiro para que haja uma maior adesão a este programa de governo. O objetivo deste trabalho foi de desenvolver um modelo animal para testar a biodisponibilidade/ bioequivalência dos medicamentos, uma vez que esses testes são feitos em humanos e possuem alto custo de realização além das implicações éticas. Os resultados obtidos confirmam que o fato dos antibióticos não apresentarem alterações na potência não pode ser associada a eficácia do tratamento. O teste de potência não reprovou nenhuma das formulações testadas, enquanto que a avaliação da bioequivalência in vivo foi negativa para um dos medicamentos. Nossos resultados comprovam a necessidade de revisão dos modelos de controle de qualidade utilizados atualmente. E, disponibiliza uma nova e importante opção para utilização no controle de qualidade de medicamentos e, que também pode ser utilizada no desenvolvimento de novos fármacos e medicamentos. / After almost 16 years since the beginning of the Brazilian generic medicines politics in 1999, the acceptance from physicians and the general population is unlike that in other countries that have adopted them for a longer time. The main distrust of consumers regarding the quality of the product lies on its lower cost and the association the word “generic” has with some expressions that infer something of poor quality or inefficient, which gives the product pejorative character. Even though the quality of the products is guaranteed by Resolution RDC No. 17/2010, which regulates good practice for the manufacturing of drugs, post-market quality control is still poor. The verification of the product, except for registration and renewal purposes, is currently only performed when there are reports or many cases of adverse events regarding a drug. In these cases, the tests made are content, organoleptic characteristics, microbiological and potency related. However, none of these tests yields results that prove the bioavailability of the drug. Thus, it is necessary to carry out studies to prove the safety and efficacy of generic drugs available in Brazilian market to promote a greater adherence to the program. The goal of this study was to develop an animal model to test the bioavailability / bioequivalence of drugs, once these tests are made in humans and have high costs to execution and ethical questions. The results confirm the fact that antibiotics that don’t present changes in potency can’t be associated with efficacy of treatment. The in vitro test didn’t reprove any of the tested compositions, whereas the in vivo bioequivalence assessment was negative for one the drugs. Our results show the need to review quality control models currently being used. And gives another and important option for the quality control of medicines and also can be used in new drugs development and medicines.

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:16:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 RandRM.pdf: 491733 bytes, checksum: 93fd5e529dea72386495c9d4b3d94d8f (MD5) Previous issue date: 2006-08-18 / Hormone therapy is an important tool in the treatment of breast cancer and tamoxifen represents one of the most important drugs used in this type of treatment. Recently other drugs based on the inhibition of aromatase had been developed, this enzyme is responsible for the synthesis of estrogenic esteroids from the androgenic ones. The objective of this study would be the development of a quantitative cytological model of murine estral analysis that allowed the characterization of different hormone drugs effect over vaginal epithelium. The technique of monochromatic staining with Evans blue (C.I. 23860) showed to be efficient in the qualitative and quantitative classification of the cycle. It had been observed differences in the cytological standard of animals submitted to the studied drugs; tamoxifen presented a widening of phases of lesser maturation (diestrais), while anastrozole and exemestane increased the duration of the phases of larger maturation (estrais). The data were analysed through a cubical non linear regression (spline) which allowed a better characterization of the drugs, suggesting a proper cytological profile to the antagonism of the estrogen receptor (tamoxifen), aromatase competition (anastrozole) and inhibition of the enzyme (exemestane) / A hormonioterapia ? um importante recurso no tratamento do c?ncer de mama e o tamoxifeno representa o f?rmaco mais empregado neste tipo de tratamento. Recentemente foram desenvolvidos outros f?rmacos baseados na inibi??o da aromatase, enzima respons?vel pela s?ntese de ester?ides estrog?nicos a partir de androg?nios. O objetivo deste estudo seria o desenvolvimento de um modelo citol?gico quantitativo de analise estral murina que permitisse a caracteriza??o dos efeitos farmacol?gicos de diferentes hormonioter?picos sob epit?lio vaginal. A t?cnica de colora??o monocrom?tica com Azul de Evans (C.I. 23860) mostrou-se eficaz na classifica??o qualitativa e quantitativa do ciclo. Observou-se diferen?as no padr?o citol?gico de animais submetidos aos f?rmacos em estudo; onde o tamoxifeno apresentou alargamento das fases de menor matura??o (diestrais), enquanto que o anastrozol e o exemestano incrementaram a dura??o das fases de maior matura??o (estrais). O tratamento dos dados atrav?s de uma regress?o n?o linear por spline c?bica permitiu melhor caracteriza??o dos f?rmacos, sugerindo um perfil citol?gico pr?prio ao antagonismo do receptor de estr?geno (tamoxifeno), competi??o da aromatase (anastrozol) e inibi??o da enzima (exemestano)

Introdução: A curcumina é um polifenol presente no rizoma da espécie Curcuma longa L. que tem sido usado há séculos como medicamento anti-inflamatório na medicina asiática. A síndrome nefrótica é classicamente tratada com corticosteroides, uma potente classe antiinflamatória e imunossupressora. O tratamento pode trazer sérios efeitos adversos. Objetivos: Este estudo foi desenhado para avaliar o efeito anti-inflamatório e antiproteinúrico da C. longa na forma de droga vegetal, na lesão renal induzida pela doxorrubicina. Desenho do estudo: Trata-se de um estudo experimental in vivo. Métodos: O efeito anti-inflamatório e anti-proteinúrico da C. longa foi avaliado utilizando-se 4 grupos de ratos Wistar: dois grupos com lesão renal induzida por doxorrubicina (3,5 mg/kg) em dose única endovenosa, sendo um alimentando-se de ração padrão e outro com ração misturada a C. longa (5 mg/g de ração). Outros dois grupos controles sem lesão renal foram alimentados, sendo um com ração padrão e outro com C. longa. Foram coletadas amostras de urina para dosagem de albuminúria a cada 2 semanas. Após 8 semanas os animais foram anestesiados e coletado sangue para dosagem no plasma de creatinina, albumina, sódio, potássio, colesterol e osmolalidade. Nas amostras de urina foram dosados albuminúria, sódio, potássio, osmolalidade e os mediadores inflamatórios proteína quimiotática para monócitos-1 e fator de transformação do crescimento beta urinário. Foi coletado tecido renal para realização de microscopia de luz e de imuno-histoquímica para desmina, vimentina e células ED-1 positivas. Resultados: Após a 8a semana de acompanhamento, o tratamento com C. longa atenuou o aumento do MCP-1 urinário, do TGF-? urinário, da imunomarcação para desmina, vimentina e células ED-1+ nos ratos com lesão renal induzida. Conclusão: Os resultados sugerem que o uso de C. longa em um modelo experimental de lesão renal por doxorrubicina, por 8 semanas, não reduz a albuminúria, mas leva a diminuição dos mediadores inflamatórios renais MCP-1 e TGF-? urinário, além de imunomarcação para desmina, vimentina e células ED-1+ no tecido renal. / Background: Curcumin is a polyphenol present in the rhizome of the species Curcuma longa L., which has been used for centuries as an anti-inflammatory remedy in Asian medicine. Nephrotic syndrome is classically treated with corticosteroids, a potent antiinflammatory and immunosuppressive class. The treatment can cause serious adverse effects. Objectives: This study was designed to evaluate the anti-inflammatory and antiproteinuric effects of C. longa, as powdered dried rhizomes, in renal injury induced by doxorubicin. Study design: This is an in vivo experimental study. Methods: The antiinflammatory and anti-proteinuric effects of C. longa were evaluated in four groups of Wistar rats: two groups with intravenous doxorubicin-induced kidney injury (3.5 mg/kg), one fed with standard food and another with standard food mixed with C. longa (5 mg/g food). Two other control groups without kidney injury were fed, one with standard and one with C. longa-mixed food. Urine samples were collected for albuminuria every 2 weeks. After 8 weeks, the animals were anesthetized and blood was collected for measurement of plasma creatinine, albumin, sodium, potassium, cholesterol and osmolality. In the urine samples, measurements of albuminuria, sodium, potassium, osmolality and inflammatory mediators as monocyte chemoattractant protein-1 and transforming growth factor beta were done. Renal tissue was collected for light microscopy and immunohistochemistry for desmin, vimentin and ED-1 positive cells. Results: After the 8th week of follow-up, treatment with C. longa attenuated the increase of urinary MCP-1, urinary TGF-?, and immunostaining for desmin, vimentin and ED-1+ cells in rats with doxorubicin-induced kidney injury. Conclusion: The results suggest that the use of C. longa in an experimental model of nephrotic syndrome for 8 weeks does not reduce albuminuria, but there is a decrease in the inflammatory mediators urinary MCP- 1, urinary TGF-?, and immunostaining for desmin, vimentin and ED-1+ cells.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The delayed onset muscle soreness (DOMS) is a common myogenic condition characterized by hypersensitivity or pain in skeletal muscles developed after unaccustomed exercise, being very mentioned by practitioners of resistance exercise or by athletes when new movements are performed and / or new drills are conducted. Animal models with resistance exercise protocols are important to mimic the physiological effects of this exercise experienced by humans and, therefore, clarify its mechanisms, and investigate the minimizing of the undesirable effects caused by the practice of such exercise. However, resistance exercise animal models causing DOMS and the mechanisms involved in the development of this type of pain are still poorly investigated. Thus, this study aimed to develop and characterize an experimental model of post-resistance exercise muscle soreness. For this, two groups were used, one submitted to resistance exercise (RE) and a control (CO), which will be submitted to the fictional exercise. Animals performed the 1RM test to discover the greatest burden that could arise in a single repetition and, from then, the training intensity has been set. For such, it was used the squat machine for resistance exercise protocol. The session consisted of 10 sets of 10 repetitions with 60% load set in the 1RM test for each animal, with 2 minutes of rest between sets. The primary (tweezer) and secondary (von Frey) mechanical hyperalgesia, thermal latency (hot plate), and locomotor activity (activity monitor) were assessed immediately before, and 12, 24 and 48 hours after the completion of resistance exercise session. The animals submitted to resistance exercise protocol showed a significant reduction in muscle withdrawal threshold in all exercised groups when compared the times immediately before and after exercise (p<0.05). When comparing exercise group to control, the paw withdrawal threshold was significantly lower (p<0.05) in all exercised groups, however 24 and 48 hours after the exercise there was significant reduction in only in the left paw withdrawal threshold. There was no statistically significant difference in the paw withdrawal threshold and in thermal latency for exercised groups, when compared the moments immediately before and after exercise in all evaluated times, as well as there was no significant difference between the control and exercise groups in evaluated moments. Regarding the locomotor activity, it was observed significant reduction in the distance traveled (p<0.03), as well as in the average speed (p<0.29), 12 hours after the exercise for the exercised group, but there was no statistically significant difference when distance traveled and average speed were measured 24 and 48 hours after exercise. These results show that it was possible to develop and characterize a model of DOMS induced by resistance exercise in rats, accompanied by primary hyperalgesia and decreased locomotor activity. / A dor muscular tardia (DMT) é uma condição miogênica comum caracterizada por hipersensibilidade ou dor na musculatura esquelética afetada após o exercício desacostumado, sendo muito referida por praticantes de exercícios físicos resistidos ou atletas quando novos movimentos são executados e/ou novos treinos são realizados. Modelos animais com protocolos de exercícios resistido são importantes para mimetizar os efeitos fisiológicos apresentados pelos seres humanos e, com isso, esclarecer os mecanismos envolvidos e elucidar a minimização dos efeitos indesejáveis ocasionados pela prática desse tipo de exercício. Porém, modelos animais de exercício resistido que causem DMT e os mecanismos envolvidos no surgimento desse tipo de dor ainda são pouco investigados. Dessa forma, este estudo buscou desenvolver e caracterizar um modelo experimental de dor muscular tardia pós-exercício resistido. Para tanto, foram utilizados dois grupos, um submetido ao exercício resistido (ER) e um controle (CO), o qual foi submetido ao exercício fictício. Os animais realizaram o teste de 1RM para descobrir a maior carga que conseguiam levantar em uma única repetição e, a partir de então, foi definida a intensidade de treino. Para tal, foi utilizado o aparelho de agachamento para o protocolo de exercício resistido. A sessão consistiu de 10 séries de 10 repetições, com 60% da carga estabelecida no teste de 1RM para cada animal, com 2 minutos de descanso entre as séries. A hiperalgesia mecânica primária (tweezer) e secundária (von Frey), latência térmica (hot plate), e atividade locomotora (monitor de atividades) foram avaliadas imediatamente antes, 12, 24 e 48 horas após a realização da sessão de exercício resistido. Os animais que foram submetidos ao protocolo de exercício resistido apresentaram redução significativa do limiar de retirada muscular em todos os grupos exercitados quando comparados os momentos imediatamente antes e depois do exercício (p<0,05). Quando comparados os grupos exercício ao controle, o limiar de retirada da pata foi significativamente menor (p<0,05) em todos os grupos exercitados, porém 24 e 48 horas após houve redução significativa do limiar de retirada apenas na pata esquerda. Não foi observado diferença estatisticamente significativa no limiar de retirada da pata e latência térmica, quando comparados os momentos imediatamente antes e após o exercício nos grupos exercitados em todos os tempos avaliados, como também não foi observada diferença significativa entre os grupos controle e exercício nos tempos avaliados. Em relação à atividade locomotora, foi observada redução significativa na distância percorrida (p<0,03), como também na velocidade média (p<0,29) 12 horas após o exercício no grupo exercitado, porém não houve diferença estatisticamente significativa quando a distância percorrida e a velocidade média foram medidas 24 e 48 horas após o exercício. Esses resultados mostram que foi possível desenvolver e caracterizar um modelo de dor muscular tardia induzida por exercício resistido em ratos, acompanhado de hiperalgesia primária e redução da atividade locomotora.

A síndrome dos ovários policísticos (SOP) é um distúrbio endócrino caracterizado por anovulação crônica e hiperandrogenismo. Modelos animais em ratas são usados para estudar processos complexos da SOP. As procineticinas (PROKs) são proteínas relacionadas a apoptose, proliferação vascular e regulação do sistema reprodutor. No entanto, seu padrão de expressão e função não são bem conhecidos no ovário com SOP. Este estudo propõe-se a identificar e localizar as PROKs e seus receptores nos ovários de ratas com SOP experimental. Foram utilizadas 33 ratas Wistar divididas em 3 grupos que receberam, entre o 1º e o 3º dia de vida, uma única injeção por via subcutânea de: propionato de testosterona (1,25 mg/0,1 mL, GT, n=12); benzoato de estradiol (0,5 mg/0,1 mL, GE, n=11) e óleo de oliva (0,1 mL, GC, n=10). Aos 90-95 dias de idade, os animais foram eutanaziados e os ovários removidos para avaliação da expressão gênica e proteica das procineticinas 1 e 2 e seus receptores por qRT-PCR e imunoistoquímica. A expressão dos genes Prok1 e Prok2 nos ovários de ratas do GT foi maior quando comparado ao GC (p=0,0157 e p=0,0354). Houve maior expressão da proteína PROK2 em células da teca interna (p=0,0049) e nas células intersticiais (p=0,0068) de folículos antrais nos ovários de ratas do GT em relação ao GC. PROK2 foi mais expressa em células da granulosa dos folículos pré-antrais comparado aos folículos antrais no GT (p=0,0098). Concluímos que as procineticinas estão expressas no ovário do modelo estudado em diferentes padrões, e que a PROK2 parece exibir maior expressão no grupo testosterona. Por apresentar papéis relevantes no controle do eixo hipotálamo-hipófise-gonadal, acreditamos que esses resultados podem abrir uma linha de investigação sobre o papel dessa proteína na fisiopatologia da síndrome / Polycystic ovary syndrome (PCOS) is an endocrine disorder characterized by chronic anovulation and hyperandrogenism. Animal models have been used to study PCOS pathophysiology. Prokineticins (PROKs) are proteins with functions related to apoptosis, vascular proliferation and reproductive physiology. However, their expression patterns and functions are unknown in the PCOS ovary. The aim of this study is to identify and localize the PROKs and their receptors in PCOS rat models induced by testosterone or estradiol. Thirty-three female Wistar rats aged between 1-3 days were sorted into three groups according to the compounds injected subcutaneously: Testosterone propionate (1.25 mg / 0.1 mL, TG, n = 12); Estradiol benzoate (0.5 mg / 0.1 mL, EG, n = 11) and olive oil (0.1 mL, CG, n = 10). At 90-95 days of age, the animals were euthanized and the ovaries removed for evaluation of prokineticins 1 and 2 and their receptors by qRT-PCR and immunohistochemistry. The expression of the genes Prok1 and Prok2 in the ovaries was higher in TG compared to CG (p=0.0157 and p=0.0345). There was higher expression of PROK2 in theca interna (p=0.0049) and interstitial cells (p=0.0068) of antral follicles in the ovaries of TG vs CG; PROK2 was higher expressed in the granulosa cells of the preantral follicles compared to the antral follicles in the TG (p=0.0098). We conclude that prokineticins are expressed in the ovary of the animal model studied and they present different patterns, PROK2 seems to exhibit higher expression in the testosterone group. Due important roles in the control of the hypothalamicpituitary- gonadal axis, we believe that these results may open a line of investigation about the role of this protein in the pathophysiology of the syndrome

O presente estudo foi subdividido em duas partes: análises genéticas e análises econômicas. A primeira teve por objetivos definir modelos de avaliação genética para as características de desempenho e carcaça em uma linhagem comercial de frangos e estimar os parâmetros genéticos e fenotípicos para essas características. A segunda parte teve por objetivos derivar os ponderadores econômicos para essas características de acordo com dois segmentos de mercado de carne de frango e propor índices econômicos de seleção para esses segmentos. As características avaliadas foram: taxa de conversão alimentar (CA), peso corporal à seleção juvenil (PC), pesos de carcaça (PCAR), carne de peito (PPEI) e pernas (PPER), rendimentos de carcaça (RCAR), carne de peito (RPEI) e pernas (RPER). As estimativas dos componentes de (co)variância foram obtidas pelo método de máxima verossimilhança restrita utilizando os programas MTDFREML e VCE-6. O teste de razão de verossimilhança foi utilizado para verificar qual o modelo mais adequado à avaliação genética para cada característica. Para a obtenção dos ponderadores econômicos foi desenvolvido um modelo bioeconômico determinístico e a análise econômica foi simulada para uma cadeia de produção de frangos integrada. Foi proposto um índice de seleção para o segmento de mercado frango inteiro e outro para cortes de frango. Foram obtidas estimativas de correlação por postos de Spearman entre os valores preditos pelos dois índices para três intensidades de seleção. Os efeitos de ambiente permanente materno e genético aditivo materno foram significativos (P<0,01) para todas as características. As estimativas de herdabilidade direta e materna foram 0,29 e 0,02 para CA, 0,45 e 0,05 para PC, 0,17 e 0,04 para PCAR, 0,26 e 0,06 para PPEI, 0,22 e 0,02 para PPER, 0,31 e 0,02 para RCAR, 0,53 e 0,04 para RPEI, e 0,44 e 0,02 para RPER, respectivamente. Os ponderadores econômicos foram -1,1783 R$/ponto para CA, 0,007 e 0,006 R$/g para PC respectivamente para o segmento de mercado frango inteiro e cortes de frango, 0,0552, 0,0758 e 0,0629 R$/% para RCAR, RPEI e RPER, respectivamente. Os resultados sugerem que todas as características podem ser selecionadas esperando progresso genético na população estudada. Os efeitos maternos foram importantes, mesmo de pequena magnitude (0,02 a 0,06), e devem ser considerados nos modelos de avaliação genética a fim de obter maior acurácia da predição dos valores genéticos individuais. A CA representou relevante impacto econômico para os dois segmentos de mercado. Para o segmento de mercado cortes de frango, as características de carcaça foram quase tão importantes quanto às de desempenho. A classificação das aves gerada pelos dois índices foi alterada à medida que diminuiu a proporção de aves selecionadas. Portanto, índices de seleção distintos devem ser considerados nos programas de melhoramento de frangos enquanto segmentos diferentes de mercado de carne de frango na proposta de maior eficiência econômica da utilização do mérito genético predito. / The present research was subdivided in two parts: genetic analyses and economic analyses. The first part was conducted to determine models for genetic evaluation of performance and carcass traits in a commercial broiler line and to estimate genetic and phenotypic parameters for these traits. The second part was conducted to derive economic weights for these traits according to two market segments of broiler meat and to propose economic selection indexes for these segments. The traits analyzed were: feed conversion ratio (CA), body weight at juvenile selection (PC), carcass (PCAR), breast meat (PPEI) and leg (PPER) weights, and carcass (RCAR), breast meat (RPEI) and leg (RPER) yields. Estimates of the (co)variance components were obtained by the restricted maximum likelihood method by the software MTDFREML and VCE-6. The likelihood ratio test was applied in order to verify which model was more adapted to the genetic evaluation for each trait. A deterministic bioeconomic model was developed for the derivation of economic weights and the economic analysis was simulated for an integrated broiler production system. It was proposed a selection index for the market segment of whole carcass and another for cuts. Spearman correlation estimates among predicted values from the two indexes were obtained for three selection intensities. For all traits, the maternal genetic and permanent environmental effects were significant (P<0.01). The estimates of direct and maternal heritability were 0.29 and 0.02 for CA, 0.45 and 0.05 for PC, 0.17 and 0.04 for PCAR, 0.26 and 0.06 for PPEI, 0.22 and 0.02 for PPER, 0.31 and 0.02 for RCAR, 0.53 and 0.04 for RPEI, and 0.44 and 0.02 for RPER, respectively. The economic weights were -1.1783 R$/point for CA, 0.007 and 0.006 R$/g for PC respectively for the market segment of whole carcass and cuts, 0.0552, 0.0758 and 0.0629 R$/% for RCAR, RPEI and RPER, respectively. The results suggest that traits analyzed can be selected and genetic progress will be expected. Maternal effects were important, even of small magnitude (0.02 to 0.06), and should be considered in genetic evaluation models in order to obtain accurate prediction of the breeding values of the individuals. The CA represented significant economic impact for the two market segments. For the market segment of cuts, carcass traits were almost as important as the performance traits. The classification of chickens generated by the two selection indexes was changed as the proportion of selected chickens decreased. Therefore, different selection indexes should be considered in broiler breeding programs while different segments of broiler meat market in the proposal for greater economic efficiency in the use of predicted genetic merit.

Submitted by Edineia Teixeira (edineia.teixeira@unioeste.br) on 2017-12-18T18:47:09Z No. of bitstreams: 2 Caroline_Covatti2016.pdf: 1272706 bytes, checksum: 2b328da4ea5385205d047b1e31662783 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-12-18T18:47:09Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Caroline_Covatti2016.pdf: 1272706 bytes, checksum: 2b328da4ea5385205d047b1e31662783 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2016-06-15 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Cerebral palsy (CP) is characterized by movement and postural disorders that limit the individual‘s activity, and is attributed to the occurrence of non-progressive disturbances during the development of the fetal or infant brain. Animal models have been used in an attempt to reproduce the lesions and characteristics of CP. However, there is still no intervention capable of reproducing the characteristics of this pathology in the experimental area. Thus, the objective of this study was to verify the effects of a CP model that combines prenatal exposure to lipopolysaccharide (LPS), perinatal anoxia and sensorimotor restriction on the muscle fibers and neuromuscular junctions (NMJs) of the extensor digitorum longus (EDL) of rats. Male Wistar pups were separated into two groups: Control group (CTL - n = 10) - pups of mothers injected with saline during pregnancy and Cerebral Palsy Group (CP - n = 10) - pups of mothers injected with LPS during pregnancy. submitted to perinatal anoxia and sensorimotor restriction. On the day of birth, the offspring of the CP group were placed in a closed chamber with nitrogen flow (100%) to perform the perinatal anoxia. Additionally, from the first postnatal day (P1) to P30, those pups were also submitted to sensorimotor restriction by immobilizing the hind limbs. Motor performance was assessed in both groups during open field tests on P29 and P45. After euthanasia, EDL muscle samples were processed for morphological and morphometric analysis of the muscle fibers and NMJs. Regarding motor performance, the time of locomotion and the number of rearings were significantly lower in the CP group compared to CTL group at 29 days of age (p <0.001 and p <0.01, respectively). At 45 days of age, the time of locomotion of the animals in the CP group was also lower in relation to the CTL group (p <0.05). The total body weight, weight and length of the EDL muscle were 18%, 17% and 15% lower, respectively, in the CP group in relation to the CTL. The animals in the CP group presented hypertrophy of the type IIB fibers. However, regarding the other fibers there was no difference between groups. There were no differences between groups in the number of muscle fiber types I, IIA and IIB. The nuclei/fiber ratio, and the capillary/fiber ratio, were significantly higher in the CP group (21% and 18%, respectively). Regarding the intrafusal fibers, the animals from the CP group presented atrophy in 26% of the cross-sectional area and a reduction of 26% in the muscle spindle area. Intramuscular collagen increased by 34% in the animals from the CP group. The ultrastructural study of the EDL muscle in the CP group showed myofibrillar disruption and Z-line disorganization and dissolution. The NMJs in the CP group presented an increase of 22% in area and 11% in diameter when compared to the CTL group. In conclusion, the CP animal model that uses injections of LPS, perinatal anoxia and sensorimotor restraint produces motor deficits that are also observed in children with CP. / A paralisia cerebral (PC) caracteriza-se por desordens do movimento e da postura, por isso causam limitação na atividade do indivíduo, as quais são atribuídas por distúrbios não progressivos que ocorreram no desenvolvimento cerebral fetal ou infantil. Modelos animais têm sido utilizados na tentativa de reproduzir as lesões e características da PC. Porém, ainda não existe uma intervenção capaz de reproduzir as características desta patologia no âmbito experimental. Assim, o objetivo deste estudo foi verificar os efeitos de um modelo de PC que associa exposição pré-natal ao lipopolissacarídeo (LPS), anóxia perinatal e restrição sensório-motora sobre as fibras musculares e junções neuromusculares (JNMs) do músculo extensor longo dos dedos (EDL) de ratos. Filhotes Wistar machos foram separados em dois grupos: Grupo controle (CTL - n = 10) - filhotes de mães injetadas com solução salina durante a gestação e Grupo Paralisia Cerebral (PC - n = 10) - filhotes de mães injetadas com LPS durante a gestação, submetidos à anóxia perinatal e à restrição sensório-motora. No dia do nascimento, os filhotes do grupo PC foram colocados em câmara fechada com fluxo de nitrogênio (100%) para a realização da anóxia perinatal. A partir do primeiro dia pós-natal (P1) até o P30, esses filhotes também foram submetidos à restrição sensório-motora por imobilização das patas pélvicas. Avaliações do desempenho motor foram realizadas em um campo aberto no P29 e P45 para os dois grupos. Após a eutanásia, amostras do músculo EDL foram processadas para análise morfológica e morfométrica das fibras musculares e JNMs. Quanto à performance motora, o tempo de locomoção e o número de erguidas (rearing) foi significativamente menor no grupo PC em comparação ao CTL aos 29 dias de idade (p< 0,001 e p< 0,01, respectivamente). Aos 45 dias de idade, o tempo de locomoção dos animais do grupo PC também foi menor em relação ao grupo CTL (p < 0,05). O peso corporal, peso e comprimento do músculo EDL foram 18%, 17% e 15% menores, respectivamente, no grupo PC em relação ao CTL. Os animais do grupo PC apresentaram hipertrofia das fibras do tipo IIB, todavia, não houve diferença entre os grupos nas demais fibras. Não teve diferenças entre os grupos estudados quanto ao número de fibras musculares dos tipos I, IIA e IIB. A relação núcleo/fibra, e a relação capilar/fibra, foi significativamente maior no grupo PC (21% e 18%, respectivamente). Quanto às fibras intrafusais, os animais do grupo PC apresentaram atrofia de 26% na área de secção transversal e redução de 26% na área do fuso muscular. O colágeno intramuscular aumentou 34% nos animais do grupo PC. O estudo ultraestrutural do músculo EDL do grupo PC mostrou desarranjo miofibrilar, desorganização e dissolução da linha Z. As JNMs do grupo PC apresentaram aumento de 22% na área e de 11% no diâmetro maior quando comparado ao grupo CTL. Em conclusão, o modelo animal de PC que utiliza injeções de LPS, anóxia perinatal e restrição sensório-motora produz déficits motores que também são observados em crianças com PC.