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Estudo microbiológico e histopatológico da glândula mamária de caprinos tuberculina positivo / Microbiological and hystophatlogical study on mammary gland of tuberculin text in goatsAdriana Pinheiro da Franca 16 April 2010 (has links)
Até recentemente acreditava-se que a tuberculose em caprinos fosse uma enfermidade rara, o que levou ao errôneo conceito de que esses animais fossem resistentes ao Mycobacterium bovis. Este trabalho tem por objetivo verificar se houve processo inflamatório da glândula mamária devido a agentes de mastite ou à presença de Mycobacterium, comparar a frequência de isolamento pelo teste de Zielh-Neelsen nas amostras de leite e dos fragmentos de glândula mamária de caprinos tuberculina positivo e verificar lesões encontradas na glândula mamária com frequência semelhante aos isolados pelo teste de Zielh-Neelsen em caprinos tuberculina positivo. Os animais deste experimento foram provenientes de um surto de tuberculose em caprinos ocorrido numa propriedade localizada em Bueno Brandão (Minas Gerais), totalizando 68 animais. Os resultados encontrados foram obtidos através da análise dos testes de Tamis e California Mastitis Test em relação ao exame microbiológico tanto da glândula mamária quanto do leite. Através do isolamento bacteriológico obteve-se 64 (98,46%) amostras para Staphylococcus ssp e apenas 1 (1,54%) para Corynebacterium ssp. Na glândula mamária, dos seis isolamentos obtidos todos eram Staphylococcus ssp. Com os resultados apresentados pelo isolamento microbiológico da glândula mamária concluiu-se que independente da espécie, o Staphylococcus ssp é o agente de maior frequência entre os isolados sendo o maior responsável pela mastite intramamária em caprinos. Das 116 amostras de leite semeadas nos tubos de Stonebrink e Löwenstein-Jensem, foram isolados 5 (4,31%) de amostras de leite positivas ao teste de Zielh-Neelsen. Dos 60 fragmentos de glândula mamária semeados nos meios de Stonebrink e Löwenstein-Jensem, isolou-se apenas um tubo no meio de Stonebrink, perfazendo um frequência de 1 (1,66%) amostra de glândula mamária, o que é um indicativo que seja M. bovis, pois o meio de Stonebrink é um meio de eleição para o seu crescimento, utilizado para isolar o M. bovis. Estes fragmentos de glândula mamária que foram submetidos à análise histopatológica pelas colorações de hematoxilina-eusina e Zielh-Neelsen, apresentaram lesões na glândula mamária de cabras tuberculina positivo, 7 (11, 66%) de achados de lesões causadas por M. bovis na glândula mamária, e 18 (30,00%) processos de reparo. Pela análise histológica dos fragmentos de glândula mamária todos apresentaram processo inflamatório na região intersticial da glândula, sendo um indício de mastite crônica. Concluiu-se que: o processo inflamatório da glândula mamária não estava associado à presença de Staphylococcus ssp, mas ao estágio de secagem dos animais, pelo resultados do teste de Zielh-Neelsen no leite e nos fragmentos de glândula mamária positivos, pode-se utilizar qualquer um dos métodos para verificar a frequência de isolamento de microrganismos em animais tuberculina positivo, a frequência de processo granulomatoso nas glândulas mamárias dos animais estudados foi semelhante estatisticamente, tanto a frequência do testes de Zielh-Neelsen no leite, quanto nos fragmentos de glândula, porém quando se considerou a frequência do processo de reparo comparada com a frequência do teste de Zielh-Neelsen no leite e no fragmento da glândula houve diferença significante, portanto a frequência de processo na glândula mamária de animais tuberculina positivo é superior a frequência do teste de Zielh-Neelsen no leite e na glândula mamária. / Until recently it was believed that caprine tuberculosis was a rare infirmity leading to the wrong agreement that these animals were resistant to Mycobacterium bovis. This study aims to: verify if there was inflammatory process of the mammary gland caused by mastitis agents or the presence of Mycobacterium; compare the frequency of isolation by the Zielh-Neelsen\'s test in the milk samples and fragments of caprine mammary gland tuberculin positive, verify if the lesions found in the mammary gland present similar frequency to the ones isolated by the Zielh-Neelsen´s test in tuberculin positive caprine. The animals used in this experiment came from an outbreak of tuberculosis in caprine that occurred in a property located at the city of Bueno Brandão (Minas Gerais), totalizing 68 animals affected. The results were obtained through the analysis of the Tamis and California Mastitis Tests in relation to the microbiologic exam of, both, mammary gland and milk. By the bacteriological isolation it was obtained 64 (98,46%) samples for Staphylococcus ssp and only 1 (1,54%) for Corynebacterium sp. Of the 64 (98,46%) identified milk samples, from the genus Staphylococcus ssp.. In the mammary gland, of the 6 isolations obtained all were Staphylococcus ssp.. With the results shown by the microbiological isolation of the mammary gland, it is possible to conclude that, independently of the species, the Staphylococcus ssp is the agent of greater frequency among those which were isolated, being the major responsible for the caprine intramammary mastitis. Of the 116 milk samples cultured in the Stonebrink and Löwenstein-Jensem tubes, were isolated 5 (4,31%) milk Zielh-Neelsen positive samples. Of 60 mammary gland fragmentes cultured, in total, in the Stonebrink and Löwenstein-Jensem media, it was isolated only 1 tube in the Stonebrink medium, accomplishing a frequency of 1 (1,66%) samples of mammary gland, which indicates that it was M. bovis. This conclusion was possible because the Stonebrink medium is a way of selection to its growth, used to isolate the M. bovis. Of the 60 mammary gland fragments which were submitted to the histopathological analysis by the coloration of hematoyilin-eosin and Zielh-Neelsen and that showed mammary gland lesions of caprine tuberculin positive, 7 (11,66%) of the lesions were caused by M. bovis in the mammary gland, and 18 (30,00%) underwent repair process. By the histological analysis of the 60 mammary gland fragments, all presented inflammatory process in the interstitial region of the gland, which indicates cronic mastitis. Of 30 lung fragments, in total, sent to the histopathological diagnostic, it were submitted to hematoxylin-eosin (HE) and Zielh-Neelsen (ZN) colorations, 4 (13,33%) lesions typical tuberculosis lesions. From the results shown above, it is possible to conclude that: the inflammatory process of the mammary gland was not associated to the presence of Staphylococcus ssp (predominant microorganism of the positive culture) but in fact to the drying stage of the animals; from the results of the ZN test in the milk and positive mammary gland fragments, it is possible to use any of the methods to verify the isolation frequency of microorganism turberculin positive animals; the frequency of granulomatosus process in the mammary gland of the studied animals were statistically similar, in ZN tests frenquency in milk as much as the ZN tests\' in the gland fragments, however when considering the frequency of repair with the frequency of the ZN tests in the milk and in the gland fragments there was significant differences, and so, the process frequency in the mammary gland of tuberculin positive animals is greater than the frequency of the ZN tests in the milk and in the mammary gland.
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Estudo comparativo entre a eficiência da filagem da Mozzarella e da pasteurização lenta do leite na inativação do Mycobacterium fortuitum e da Listeria monocytogenes experimentalmente inoculados no leite de búfala / Comparative study between the efficiency of the Mozzarella stretching and the holder pasteurization of milk in the inhibition of the Mycobacterium fortuitum and the Listeria monocytogenes experimentally inoculated into buffalo milkDaniele Cristine Raimundo 19 November 2008 (has links)
Leite integral de búfala foi experimentalmente contaminado com Mycobacterium fortuitum e Listeria monocytogenes. Foi feita a análise quantitativa dos agentes imediatamente antes e depois de dois tratamentos térmicos: pasteurização (do leite) e filagem (da Mozzarella). Na análise da Listeria, foi empregada metodologia adaptada para a obtenção do NMP, usando os meios UVM, Fraser e Palcam como pré-enriquecimento, enriquecimento seletivo e isolamento, respectivamente. O Mycobacterium foi semeado em placas com meio Löwenstein-Jensen modificado. Os resultados mostraram que a pasteurização do leite reduziu em média 6,0 log NMP/mL de Listeria sp e 4,0 log UFC/mL de Mycobacterium sp. A filagem da coalhada reduziu em média 8,37 log NMP/g de Listeria sp e 6,3 log UFC/g de Mycobacterium sp. Concluiu-se que a filagem da Mozzarella foi mais eficiente que a pasteurização do leite na redução do inóculo de Listeria monocytogenes e Mycobacterium fortuitum em cerca de 2 logaritmos de cada agente. / Whole buffalo milk was experimentally contaminated with Mycobacterium fortuitum and Listeria monocytogenes. The quantitative analysis of the agents was made immediately before and after two thermal treatments: pasteurization (of milk) and stretching (of Mozzarella). In the analysis of the Listeria, methodology adapted for the attainment of the MPN was used, employing UVM, Fraser and Palcam as not selective enrichment, selective enrichment and isolation, respectively. The Mycobacterium was plated onto modified Löwenstein-Jensen. The results had shown that the pasteurization of milk reduced 6,0 log MPN/mL Listeria sp on average, and 4,0 log CFU/mL de Mycobacterium sp. The stretching of the curd reduced 8,37 log MPN/g de Listeria sp on average, and 6,3 log CFU/g de Mycobacterium sp. It has been concluded that the stretching of Mozzarella was more efficient than the pasteurization of milk in the reduction of Listeria monocytogenes inoculum and Mycobacterium fortuitum in about 2 logarithms of each agent.
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Avaliação da virulência de estirpes de Mycobacterium avium presentes na população de suínos no sul do Brasil / Evaluation of Mycobacterium avium strains virulence from porcine population of south BrazilEugenia Márcia de Deus Oliveira 14 December 2001 (has links)
Tendo sido comprovada a existência da famílias molecularmente distintas de M. avium circulando em suínos de região sul do Brasil, e havendo dúvidas a respeito da importância da transmissão horizontal como mecanismo de manutenção da doença, o presente teve por objetivo estudar a virulência dessas estirpes, informação importente para o aperfeiçoamento dos métodos de controle. As estirpes emergiram do estudo caso-controle, onde as tipagens moleculares por RFLP mostraram a existência de quatro famílias de M. avium (PIG-A, B, C e D). Um estirpe representante de cada família foi inoculada pela via intra-peritoneal em 48 hamsters com uma dose de 30.000 U.F.C. por animal. Após 2, 13, 26 e 40 dias da inoculação, 12 hamsters inoculados de cada família foram anestesiados, sacrificados e os agentes foram quantificados no fígado, baço e pulmão. A presença das estirpes foi verificada no sangue e também foram realizados exames histológicos. As estipers PIG-A, B, C e D desenvolveram lesões granulomatosas no fígado e baço nos quatro tempos experimentais; disseminaram-se pela via linfo-hemática, multiplicando-se em fígado, baço e pulmão. Nos quatro tempos experimentais houve diferença entre as contagens de U.F.C./g entre os órgãos (T1: p<0,001; T2: p<0,001; T3: p<0,001 e T4: p<0,001) e as obtidas do baço foram sempre superiores às do fígado e pulmão. Nos quatro tempos experimentais houve diferença entre as contagens de U.F.C./g entre as estirpes (T1: p<0,001; T2: <0,001; T3: p<0,001 e T4: p<0,001) e foi possível construir a seguinte escala decrescente de virulência: PIG-B > PIG-A > PIG-D > PIG-C. / Given that the existence of molecularly different families of M. avium circulating in swine of the south area of Brazil has been proved, and that some doubts remain regarding the importance of the horizontal transmission as mechanism of maintenance of the disease, this work aimed to study the virulence of those strains, an important information for the improvement of the control methods. The strains emerged from a case-control study, when the RFLP molecular typification showed the existence of four families of M. avium (PIG-A, B, C and D). A strain representative of each family was inoculated by intra-peritoneal route in 48 hamsters with a dose of 30.000 C.F.U./animal. After 2, 13, 26 and 40 days post-infection, 12 inoculated hamsters of each family were anesthetized, euthanized and the bacteria were quantified in the liver, spleen and lung. The presence of the strains was verified in the blood and also histological exams were accomplished. The strains PIG-A, B, C and D developed granulomatous lesions in the liver and spleen in the four experimental times; they were disseminated by the linfo-haematic route, multiplying in liver, spleen and lung. In the four experimental times there was difference among the countings of C.F.U./g among the organs (T1: p<0,001; T2: p<0,001; T3: p<0,001 and T4: p<0,001) and that obtained of the spleen were always superiors to the one of the liver and lung. In the four experimental times there was difference among the countings of C.F.U./g among the ancestries (T1: p<0,001; T2: p<0,001; T3: p<0,001 and T4: p<0,001) and was possible to build the following order of decreasing virulence: PIG-B > PIG-A > PIG-D > PIG-C.
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Susceptibilidade antimicrobiana e tipagem molecular de Mycobacterium fortuitum isoladas de amostras clínicas de origem humana / Antimicrobial susceptibility and molecular typing of Micobacterium fortuitum isolated from clinical specimens of human originWesley Schiavo 06 November 2012 (has links)
Introdução: A revisão da literatura disponível no PubMed evidencia que há relatos de surtos de infecções por micobactérias de crescimento rápido ocorridos no Brasil, mas não há dados nacionais que permitam orientar o tratamento empírico até que o perfil de sensibilidade e a identificação da espécie estejam disponíveis. Não há estudo nacional com amostragem significativa de M. fortuitum nem tampouco análise da relação clonal entre isolados de vários pontos do território nacional. Este trabalho pretende trazer contribuições quanto ao entendimento da disseminação de clones de M. fortuitum no Brasil, assim como o perfil de sensibilidade dessa espécie no Brasil. Material e métodos: Foram utilizadas no estudo 121 isolados pertencentes ao banco de micobactérias do Fleury Medicina e Saúde, referentes ao período de janeiro de 2001 a dezembro de 2010. A identificação da espécie for determinada por sequenciamento parcial do gene rpoB, a clonalidade foi avaliada por eletroforese em campos alternados e a susceptibilidade antimicrobiana foi avaliada utilizando-se placas de microdiluição RAPMYCOI. Resultados e conclusões: Foram detectados três grupos clonais, sendo dois presentes na cidade de Campinas e o terceiro na cidade de Florianópolis. Foi observada a persistência do grupo clonal MFBRA2 na cidade de Campinas por seis anos. A maioria dos casos isolados em diferentes estados brasileiros pertence a grupos clonais distintos. O índice de similaridade de Dice mínimo para a identificação de um grupo clonal de M. fortuitum ao analisar fragmentos de restrição gerados por XbaI deve ser de 98%. Todos os isolados testados foram sensíveis à amicacina, tigeciclina, imipenem, ciprofloxacina, moxifloxacina, sulfametoxazol-trimetoprim e linezolida, o que permite seu uso no tratamento empírico das infecções por M. fortuitum. Houve uma baixa taxa de sensibilidade à doxiciclina o que não subsidia seu uso em tratamento empírico. A taxa de sensibilidade de 89% para claritromicina não permite seu uso empírico no tratamento das infecções por M. fortuitum. / Introduction: The literature available on PubMed shows that there are reports of outbreaks of infections caused by rapidly growing mycobacteria occurred in Brazil, but there is no national data to guide empiric treatment until the susceptibility profile and identification of the species are available. No national study of significant sample of M. fortuitum nor analysis of the clonal relationship between isolates from various parts of the country. This work aims to bring contributions to the understanding of the spread of clones of M. fortuitum in Brazil, as well as the susceptibility pattern of this species in Brazil. Material and methods: We studied 121 isolates belonging to the mycobacteria collection from Fleury Medicina e Saúde, collected during the period from January 2001 to December 2010. Species identification was determined by partial sequencing of the rpoB gene, clonality was assessed by pulsed field gel electrophoresis and antimicrobial susceptibility was assessed using microdilution plates RAPMYCOI. Results and conclusions: There were three clonal groups, with two present in the city of Campinas and the third in Florianopolis. We observed the persistence of the clonal group MFBRA2 in Campinas for six years. Most cases isolated in different Brazilian states belong to different clonal groups. Our data indicate that Dice\'s similarity index for identification of a M. fortuitum clonal group should be at least 98% when analyzing restriction fragments generated by XbaI. All isolates tested were susceptible to amikacin, tigecycline, imipenem, ciprofloxacin, moxifloxacin, linezolid, and trimethoprim-sulfamethoxazole, which allows its use in the empirical treatment of infections caused by M. fortuitum. There was a low sensitivity to doxicycline which does not subsidize its use in empiric treatment. The rate of 89% sensitivity does not allow the empirical use of clarithromycin in the treatment of infections caused by M. fortuitum.
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Achados clínicos e patológicos de paratuberculose em búfalos (Bubalus bubalis) no Rio Grande do Sul - BrasilDalto, André Gustavo Cabrera January 2011 (has links)
Descrevem-se os aspectos epidemiológicos e clínico-patológicos da paratuberculose em um rebanho de búfalos no Município de Guaíba no Rio Grande do Sul. A propriedade possuía cento e noventa e quatro búfalos principalmente da raça mediterrâneo e destinava-se a produção de leite e carne. No período de abril de 2009 a setembro de 2010 seis búfalos apresentaram diarreia crônica intermitente, perda de peso e apetite normal. Na neccropsia observaram-se vasos linfáticos proeminentes no mesentério e na mucosa do intestino. Os linfonodos mesentéricos estavam moderadamente aumentados, com áreas escuras entremeadas com focos multinodulares brancacentos, principalmente na região cortical. A mucosa do intestino se encontrava espessa e cerebriforme. Ao exame histológico, desde o duodeno até o intestino grosso havia infiltrado composto principalmente por macrófagos epitelióides e, em menor escala, linfócitos, plasmócitos e células gigantes tipo Langhans. Outros achados observados foram dilatação dos vasos linfáticos, linfangite granulomatosa e linfangiectasia. Nos linfonodos mesentéricos verificaram-se lesões histológicas semelhantes. A coloração de Ziehl-Neelsen e a imuno-histoquimica revelaram bacilos álcool-ácido resistentes no interior de macrófagos, de células gigantes de Langhans e livres na mucosa e submucosa do intestino e dos linfonodos mesentéricos. Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis foi isolado em cultivo bacteriano de amostras de fezes, raspado de mucosa intestinal e de linfonodos mesentéricos. A identificação do agente foi realizada pela técnica de PCR IS900. Foi realizado, também, levantamento sorológico de 136 búfalos da propriedade através da técnica de ELISA, na qual foram observados 15,45 % reagentes. O diagnóstico da paratuberculose foi baseado nos dados clínicopatológicos, sorologia, isolamento e identificação do agente. / It´s described the epidemiologic, clinical and pathologic aspects of paratuberculosis in a bubaline herd in Guaiba city, southern Brazil. The property had one hundred and ninety animals for milk and meet production. Six adults Mediterranean breed bubalines showed chronic intermittent diarrhea, lost of weight and normal appetite. At necropsy, the lymphatic vessels were prominent in the serosa, the mesenteric lymphnodes were slightly enlarged with dark areas interwoven by multinodular white spots mainly in the cortical region. The intestine mucosa were thickened and of corrugated aspect. The microscopic exam revealed severe diffuse granulomatous inflammation, marked dilatation of the lymphatic vessels, granulomatous lymphangitis and lymphangioectasia from the duodenum to the large bowl. The mesenteric lymphnodes showed similar histological lesions. Acid-fast bacilli in macrophages, in Langhans giant cells and freely in the mucosa and submucosa of the small intestine and lymphnodes were shown at Ziehl-Neelsen staining and immunohistochemistry. Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis was isolated through bacterial cultivation of samples taken from feces, intestinal mucosa, mesenteric lymphnodes, and identified through IS900 PCR. In addition, a serologic survey was performed in the property by ELISA test. 15.45 percent of the animals reacted positive to the test. The diagnosis of paratuberculosis was based on clinical, pathological and epidemiological data, serology exam, bacterial isolation and identification of the agent.
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Avaliação de técnicas moleculares para identificação de micobactérias não causadoras de tuberculose / Evaluation of molecular techniques for non-tuberculous mycobacteria identificationCardoso, Cássia Maria January 2012 (has links)
As micobactérias compreendem um grupo de organismos que são heterogêneos em termos de metabolismo, crescimento, nicho ambiental, epidemiologia, patogenicidade, distribuição geográfica e associação com doenças. O diagnóstico micobacteriológico é atualmente um desafio aos laboratórios. Com a descrição de novas espécies de micobactérias nos últimos anos, tem sido cada vez mais difícil identificar com precisão estas espécies. Uma questão básica na identificação em micobactérias é a diferenciação entre o Complexo Mycobacterium tuberculosis e as Micobactérias Não Causadoras de Tuberculose (MNT); no entanto tem sido cada vez mais importante a diferenciação das MNT. Em virtude das semelhanças fenotípicas e genotípicas, é necessário a aplicação e desenvolvimento de metodologias que melhor caracterizem as MNT para que seja possível determinar de forma mais precisa a prevalência das diferentes espécies. Além disso, diferentes espécies de MNT podem apresentar diferenças no perfil de sensibilidade às drogas terapêuticas, sendo que a identificação precisa é crucial para a adoção de terapia medicamentosa adequada. O objetivo deste trabalho foi caracterizar os isolados de MNT através da comparação entre duas técnicas moleculares, a técnica de PRA-hsp65 e um kit comercial GenoType® Mycobacterium CM, usando o método de sequenciamento do gene hsp65 como padrãoouro. Foram analisadas 96 isolados e a concordância entre os resultados do PRA-hsp65 e do GenoType® Mycobacterium CM foi de 92%. O método molecular PRA-hsp65 mostrou-se eficaz na identificação das espécies em 91% das amostras e o GenoType® Mycobacterium CM em 92%. Em relação aos custos referentes aos dois métodos, foi possível estabelecer que o PRA-hsp65 apresentou um valor final consideravelmente inferior ao do GenoType® Mycobacterium CM. No entanto, a técnica comercial necessita um prazo mais curto (2 dias) para ser realizada em comparação com a técnica PRA-hsp65 (requer 5 dias). Na nossa avaliação, a aplicabilidade do PRA-hsp65 aumenta a qualidade e rapidez do resultado final, já que se mostrou discriminatório, de baixo custo e relativamente de fácil execução na identificação de micobactérias. É possível concluir que ambas as técnicas moleculares avaliadas neste estudo apresentaram uma ótima capacidade de identificação de MNT, sendo que a implementação destas técnicas dependerá das características dos diferentes laboratórios bem como as necessidades clínicas das diferentes instituições. / Mycobacteria comprise a group of organisms that are heterogeneous in terms of metabolism, growth, environmental niche, epidemiology, pathogenicity, geographic distribution and disease association. The laboratory diagnosis of mycobacteria is currently a challenge to laboratories. Due to the increased description of new species of mycobacteria in recent years it is becoming difficult to accurately identify these species. A basic question in the identification of mycobacteria is the differentiation between Mycobacterium tuberculosis and the Non-Tuberculous Mycobacteria (NTM); however it has been increasingly important to differentiate the NTM species. Due to the fact that there are phenotypic and genotypic similarities, it is necessary to apply and develop methodologies to better characterize the NTM to be able to determine more accurately the prevalence of different species. Furthermore, different NTM species may differ in the profile of sensitivity to therapeutic drugs, and accurate identification is crucial for the adoption of appropriate drug therapy. The objective of this study was to characterize NTM isolates by comparing two molecular techniques, the technique of PRA-hsp65 (PCR-Restriction Enzyme Analysis) and a commercial kit GenoType® Mycobacterium CM, using the sequencing the hsp65 gene as gold standard. We analyzed 96 samples and the concordance between the results of the PRA-hsp65 and the GenoType® Mycobacterium CM was 92%. The PRA-hsp65 molecular method proved to be effective in 91% of species identification and the GenoType® Mycobacterium CM in 92%. Regarding costs for the two methods, we could establish that the PRA-hsp65 had a final value considerably lower than the GenoType® Mycobacterium CM. However, the commercial technique requires a shorter period (2 days) to be performed in comparison with the technique PRA-hsp65 (requires five days). In our evaluation, the applicability of the PRA-hsp65 increases the quality and speed of the final result (in relation to traditional phenotypic identification or outsourcing in referral centers), and proved to be discriminatory, inexpensive and relatively easy to perform the identification of mycobacteria. Finally, we conclude that both molecular techniques evaluated in this study showed a great capacity for identification of NTM and that the implementation of these techniques. However, depend on the characteristics of different laboratories as well as the clinical needs of different institutions.
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Síntese e avaliação da atividade antimicrobiana de derivados 4-Tiazolidinonas: análogos estruturais piridínicosLeonardo Verçoza da Silva, George 31 January 2008 (has links)
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Previous issue date: 2008 / As ações terapêuticas de alguns fármacos podem ser melhoradas através da
modificação molecular. São conhecidas as propriedades biológicas de numerosos
compostos heterocíclicos, entre os quais aqueles contendo enxofre e nitrogênio no seu anel.
Entre estes compostos os derivados, das 4-tiazolidinonas merecem destaque especial por
suas atividades antimicrobiana, antifúngica, antiprotozoária, antiinflamatória, entre outras.
A partir dessas informações, sintetizamos uma série de derivados das 4-
tiazolidinonas (4 a-m) para avaliar as atividades biológicas contra algumas bactérias e
fungos. Inicialmente, foram obtidas tiossemicarbazonas (3a-m) preparadas a partir de
formil-piridinas (1 a-c) e tiossemicarbazidas não-substituídas e substituídas (2), em etanol
sob refluxo, sendo posteriormente tratadas e purificadas por recristalização em solvente
apropriado.
Na segunda etapa, as tiossemicarbazonas foram ciclizadas utilizando o anidrido
maléico (aceptor de Michael) para formar as 4-tiazolidinonas. Após purificação, as
substâncias finais apresentaram rendimentos entre 14-50%. Para a caracterização estrutural
dos compostos sintetizados foram empregadas as espectroscopias de infravermelho e
ressonância magnética nuclear (RMN 1H e RMN 13C).
Quanto à atividade biológica, as novas moléculas foram submetidas a testes de
atividade antimicrobiana, sendo avaliadas contra bactérias Gram-positivas, Gram-negativas
e fungos. Dos doze derivados tiazolidinônicos sintetizados, apenas cinco (4a, 4g, 4h, 4j e
4m) foram selecionados para a realização da CMI e CMB em meio líquido. Todos os
compostos analisados demonstraram atividade biológica contra bactérias Gram-positivas e
contra fungos dos gêneros Candida albicans e Malassezia furfura. Entretanto, apenas o
composto 4j apresentou atividade bacteriostática para Klebsiella pneumoniae, que é uma
bactéria Gram-negativa, e boa atividade bactericida contra Mycobacterium smegmatis e
Mycobaterium tuberculosis.
De acordo com os resultados, o composto 4g apresentou atividade bactericida
considerável frente ao M. luteus, tendo melhor resultado do que cloranfenicol. Em relação
aos compostos 4h e 4m verificou-se similaridade em relação à CMI, contra Candida
albicans, quando comparados com a nistatina. Em geral, os derivados 4-tiazolidinonas da
série 4a-m apresentaram consideráveis atividades antimicrobianas frente aos
microrganismos testados, principalmente aqueles com o nitrogênio do anel piridínico na
posição 2. Além disso, alguns destes derivados demonstraram melhores valores de CMI,
CMB e CMF quando comparados aos fármacos de referência
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Resposta imune a antígenos de M. leprae e M. tuberculosis na proteção e na patogênese da hanseníaseSimon, Marise do Vale 01 February 2013 (has links)
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Leprosy is a chronic infectious disease caused by Mycobacterium leprae, intracellular bacterium that causes skin lesions and neurological disorders with sensory loss. The disease
constitutes a major public health problem, including Brazil. Many aspects of its immunopathogenesis are still unclear. The inability of growth in culture of bacillus impedes a greater number of experimental studies. The use of recombinant antigens is an important tool for the identification of specific proteins of M. leprae with potential for future use in immunodiagnostic tests in immunoprophylaxis and immunotherapy. The aim of this study
was to evaluate the immune response to antigens of M. leprae and M. tuberculosis in protection and pathogenesis of leprosy, using a simple assay with whole blood. Patients with confirmed diagnosis of leprosy using clinical, bacteriological and histological were selected. The operational classification of patients and neurological examination to evaluate the degree
of disability were performed. Patients were followed up and some of them have evolved with reactions. The controls household contacts of patients were also selected. The peripheral blood of 55 patients with leprosy, without treatment (39 paucib acillary and 16 multibacillary)and 31 controls were stimulated with antigen crude sonicate of M. leprae (MLCs), purified antigen derived from M. tuberculosis (PPD), 12 recombinant antigens of M. leprae (ML0276, ML2028, ML2055, ML2258, ML2531, ML2629, ML82F, ML2044, ML2380, ML2331, and LID1 PADL) and 2 M. tuberculosis (ID93, ID83). After 24 hours of incubation supernatants were collected and concentrations were determined cytokines IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, IL-12p70, IL-13, IL-15, 1L-17A, IL-23, IL-27, IFN-γ, TNF-α and TGF-β, and the chemokine eotaxin, MCP-1 and MIP-1α by Luminex technique. We observed a high concentration of IFN-γ and IL-2 (response Th1) in response to antigens MLCs and PPD in patients with paucibacillary forms and controls in contacts of patients, compared to those with
multibacillary forms of the disease. However, no statistically significant differences were observed when analyzing the response to such antigens in patients who subsequently
developed with leprosy reactions (n=26) and did not develop leprosy reaction (n = 16) and had the beginning of treatment, degree of disability Physical 0 (n=22) in comparison with the
first and second (n=33). Higher concentrations of IFN-γ were detected in patients paucibacillary PADL in response to antigen when compared with patients multibacillary. There was also increased production of MCP-1 in response to ML2531 ID93 and in patients who developed reactions. In conclusion, the production of MCP1 in response to antigens ML 2531 and ID93 can be assayed as a marker of leprosy reactions, antigen MLCs shows a behavior similar to PPD antigen and may be a marker of protective response in leprosy. The PADL antigen may be associated with induction of protective response, suggesting that PADL and MLCs are promising antigens for use in immunotherapy or immunoprophylaxis in leprosy. / A hanseníase é uma doença infecciosa crônica causada pelo Mycobacterium leprae, bactéria intracelular que causa lesões cutâneas e neurológicas com perda de sensibilidade. A doença se constitue num importante problema de saúde pública, inclusive no Brasil. Muitos aspectos da sua imunopatogênese ainda não foram esclarecidos. A impossibilidade de crescimento do bacilo em cultura inviabiliza um maior número de estudos experimentais. O uso de antígenos recombinantes é uma importante ferramenta na identificação de proteínas específicas do M. leprae com potencial para utilização futura em testes imunodiagnósticos, em imunoprofilaxia e imunoterapia. O objetivo desse trabalho foi avaliar a resposta imune a antígenos de M. leprae e M. tuberculosis na proteção e patogênese da hanseníase, utilizando um ensaio simples com sangue total. Pacientes com diagnóstico confirmado de hanseníase utilizando
critérios clínicos, baciloscópico e histopatológico foram selecionados. A classificação operacional dos pacientes e o exame neurológico para avaliação do grau de incapacidade
física foram realizados. Os pacientes foram acompanhados e alguns deles evoluíram com reações hansênicas. Os controles intradomiciliares contactantes dos pacientes foram também
selecionados. O sangue periférico de 55 pacientes com hanseníase, sem tratamento (39 paucibacilar e 16 multibacilar) e 31 controles foram estimulados com o antígeno bruto
sonicado de M. leprae (MLCS), antígeno purificado derivado de M. tuberculosis (PPD), 12 antígenos recombinantes de M. leprae (ML0276, ML2028, ML2055, ML2258, ML2531, ML2629, ML82F, ML2044, ML2380, ML2331, LID1 e PADL) e 2 de M. tuberculosis (ID93, ID83). Após 24h de incubação os sobrenadantes foram coletados e foram determinadas as concentrações das citocinas IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, IL-12p70, IL-13 IL-15, 1L-17A, IL-
23, IL-27, IFN-γ, TNF-α e TGF-β, e das quimiocinas eotaxina, MCP-1 e MIP-1α, pela técnica de Luminex. Foi observada uma elevada concentração de IFN-γ e IL-2 (resposta Th1) em
resposta aos antígenos MLCS e PPD em pacientes com as formas paucibacilares e nos controles contactantes dos doentes, quando comparados àqueles com as formas multibacilares da doença. Porém, não foi observado diferenças estatisticamente significativas quando analisada a resposta a esses mesmos antígenos em pacientes que posteriormente evoluíram com reações hansênicas (n=26) e não evoluíram com reação hansênica (n=16) e que tinham ao início do tratamento, grau de incapacidade física 0 (n=22) em comparação com 1 e 2
(n=33). Maiores concentrações de IFN-γ foram detectadas em pacientes paucibacilares em resposta ao antígeno PADL, quando comparado com os pacientes multibacilares. Houve também maior produção de MCP-1 em resposta ao ID93 e ML2531 nos pacientes que evoluíram com reações hansênicas. Em conclusão, a produção de MCP1 em resposta aos antígenos ID93 e ML 2531 pode ser testada como marcador de reações hansênicas, o antígeno MLCS apresenta um comportamento semelhante ao antígeno PPD e pode ser um marcador de
resposta protetora na hanseníase. O antígeno PADL pode estar associado à indução de resposta protetora, sugerindo que MLCS e PADL são antígenos promissores para utilização em imunoterapia ou imunoprofilaxia na hanseníase.
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ProduÃÃo de ifn-y em pacientes com hansenÃase e em seus contactantes numa amostra populacional do MunicÃpio de Sobral - Cearà / IFN-y production in patients with leprosy and in yours households in the populacional sample of the Sobral city- Ceara.Luciano Augusto Oliveira de Jesus 26 October 2007 (has links)
Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / A hansenÃase, cujo agente etiolÃgico à o Mycobacterium leprae, à doenÃa de amplo espectro clÃnico e imunopatolÃgico. Suas apresentaÃÃes clÃnicas estÃo correlacionadas com padrÃes imunolÃgicos distintos, variando de uma vigorosa resposta imune mediada por cÃlulas ao M. leprae, com padrÃo tipo 1 no polo tuberculÃide, a uma ausÃncia de resposta celular especÃfica aos antÃgenos do M. leprae no pÃlo lepromatoso, com predomÃnio de resposta tipo 2 e exacerbaÃÃo da resposta humoral. A capacidade do antÃgeno bruto de M. leprae em estimular cÃlulas mononucleares do sangue perifÃrico (PBMC) na produÃÃo de IFN-y foi avaliada em pacientes com hansenÃase e em seus contactantes, do municÃpio de Sobral-CE. Um total de 30 casos foi estudado, antes de receberem tratamento poliquimiterÃpico. O grupo de casos paucibacilares foi constituÃdo por oito com a forma indeterminada, dez com a forma tuberculÃide, dois com a forma dimorfo tuberculÃide; e o grupo multibacilar foi constituÃdo por dez com a forma virchoviana e dois com a forma dimorfa virchoviana. O grupo de contactantes foi constituÃdo por sessenta indivÃduos, sendo 1 consangÃÃneo e 1 nÃo consangÃÃneo para cada caso Ãndice. O antÃgeno bruto de M. leprae estimulou a produÃÃo de IFN-y nas PBMC de sete casos dimorfo tuberculÃide/tuberculÃide (DT/TT), trÃs com a forma indeterminada e dois com a forma dimorfa virchoviana/virchoviana (DV/VV). O grupo DT/TT produziu nÃveis de IFN-y significantemente maiores que o grupo DV/VV (Teste de Fisher, p=0,027). A produÃÃo de IFN-y nos contactantes foi observada em 34 indivÃduos, 21 consangÃÃneos e 13 nÃo consangÃÃneos. NÃo foi observada diferenÃa significativa entre os contactantes do grupo paucibacilar (forma indeterminada, DT/TT) e multibacilares (DV/VV). PorÃm, foi observada diferenÃa significativa na produÃÃo desta citocina entre contactantes e casos DV/VV. O estudo sugere que nÃo hà diferenÃa significativa na produÃÃo de IFN-y entre indivÃduos contactantes consangÃÃneos e nÃo consangÃÃneos, dos casos paucibacilares e multibacilares. AlÃm disso, ao correlacionarmos a produÃÃo desta citocina nos indivÃduos com a presenÃa de cicatriz, tambÃm nÃo observamos diferenÃa significativa / Leprosy, which is caused by Mycobacterium leprae, is an illness of ample clinical and immunopathological spectrum. Its clinical manifestations are correlated with distinct immunologic form, varying from a vigorous immune response mediated by cells to M. leprae, with type 1 standard in the tuberculÃide polar region, to an absence of specific cellular response to antigens of M. leprae in the lepromatous polar region, with predominance of type 2 response and exacerbations of humoral response. The capacity of whole M. leprae antigen to stimulate peripheral blood mononuclear cell (PBMC) in the IFN-y production was measured in leprosy patients and their householdâs contacts, in the city of Sobral, state of CearÃ. A total of 30 leprosy patients were used for the study, before start chemotherapy. The paucibacilary leprosy patient group consisted of eight polar indeterminate, ten polar tuberculÃide, two borderline tuberculÃide, and the multibacilary leprosy patient group consisted of ten lepromatous leprosy and two borderline lepromatous leprosy. The household contacts group consisted of sixty healthy individuals, consanguineous and non consanguineous. The whole M. leprae antigen stimulated IFN-y production in the PBMC of seven borderline tuberculÃide/tuberculÃide (DT/TT), three indeterminate form, two borderline lepromatous/lepromatous (DV/VV the DT/TT group produced IFN-y levels significantly higher than DV/VV group (Fisher Test, p=0,027).
The IFN-y production in the household contacts was observed in 34, 21 consanguineous and 13 non consanguineous. It wasnât observed significant difference between paucibacilary householdâs contacts (DT/TT, indeterminate form) and multibacilary householdâs contacts groups in the IFN-y production to whole M. leprae antigen. However, it was observed significant difference in the production of these cytokine between household contacts and DV/VV patients. This study suggests that there wasnât significative difference in the production IFN-y between non consanguineous and consanguineous subjects of the paucibacilary and multibacilary cases. Moreover, at correlacionated the production in these cytokine in the subjects with the presence of scar, we didnât observed significative difference too
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Detecção do Mycobacterium tuberculosis em imagens de baciloscopia de campo claro utilizando redes neurais convolutivasLópez, Yadini Pérez, 92-98231-6465 13 April 2018 (has links)
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Previous issue date: 2018-04-13 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Tuberculosis (TB) is a disease caused by a slow-growing bacterium named Mycobacterium tuberculosis (MT). Since 2000 has been included among the top 10 leading causes of death worldwide. In 2015, Brazil ranked eighteenth in TB incidence, representing 9% and 33% of the estimated cases worldwide and for the Americas respectively. Light field smear microscopy is the most commonly used exam in developing countries for diagnosis and follow-up of the disease. Since 2008, several researches have been developed focused on TB bacillus detection, aiming the automation of light field smear microscopy. These studies used datasets with different amounts of images, explored different color aspects of bacilli, and applied Digital Image Processing and / or Machine Learning techniques, and more recently, Deep Learning using Grayscale images. However, Deep Learning techniques have not been explored using a robust smear microscopy image dataset that reflect real conditions of smear microscopy exams. This work presents a method for automatic detection of TB bacillus using Convolutional Neural Networks (CNN) using a dataset of images taken from 2 patients in RGB, R-G and Grayscale color formats. To reach the proposed goal, a patch dataset containing bacilli (positive patches) and without bacilli (negative patches) was generated. This patch dataset was used for training three different RNC architectures. Then, Non-maximum Suppression (NMS) algorithm was applied using CNN models and complete smear images for bacillus detection. Best results in the patch classification stage were obtained using R-G and RGB images and two CNN models, achieving an accuracy of 99% in both cases. At final stage, Bacilli detection in full smear images, best results were achieved using RGB images reaching a Precision of 56,82%, Recall of 86,15% and F1-score of 68,47%. / A Tuberculose (TB) é uma doença causada por uma bactéria de crescimento lento, Mycobacterium tuberculosis (MT) e desde o ano 2000 tem sido incluída entre as dez causas principais de morte a nível mundial. No ano 2015 o Brasil ocupou a 18ª posição em incidência de tuberculose, representando 9% dos casos estimados no mundo, e 33% dos estimados para as Américas. O exame de baciloscopia de campo claro é o mais utilizado em países em desenvolvimento para o diagnóstico e acompanhamento da doença. Desde o ano de 2008 têm sido desenvolvidos trabalhos pela comunidade científica focados na detecção do bacilo da TB visando a automatização da baciloscopia de campo claro. Esses estudos utilizaram bases de dados com diferentes quantidades de imagens, exploraram aspectos de cor dos bacilos e aplicaram técnicas de Processamento Digital de Imagens e/ou Aprendizado de Máquina, e mais recentemente Aprendizado de Máquina Profundo. Entretanto, verificou-se que técnicas de Aprendizado de Máquina Profundo não têm sido exploradas utilizando bases de dados de imagens de baciloscopia robustas que refletem as condições reais dos exames de baciloscopia de campo claro. O presente trabalho visa o desenvolvimento de um método de detecção automática do bacilo da TB mediante a utilização de Redes Neurais Convolutivas (RNC), utilizando conjuntos de imagens baciloscópicas de 2 pacientes nos formatos de cor RGB, R-G e Escala de Cinza. Para atingir o objetivo proposto, foi gerada uma base de dados de patches contendo bacilos (positivos) e patches sem bacilos (negativos), os quais foram utilizados no treinamento de três arquiteturas diferentes de RNC. Posteriormente, foi aplicado o algoritmo Non-maximum Suppression utilizando imagens completas de baciloscopia para detectar cada bacilo. Os melhores resultados na etapa de classificação de patches foram obtidos utilizando as imagens de baciloscopia R-G e RGB e dois modelos RNC de duas e três camadas convolutivas, alcançando uma acurácia de 99%. Na etapa final de detecção dos bacilos nas imagens completas de baciloscopia os melhores resultados foram alcançados utilizando as imagens no formato RGB atingindo um Precision de 56,82%, um Recall de 86,15% e um F1-score de 68,47%.
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