A Tuberculose (Tb) à uma doenÃa que tem desafiado a humanidade desde a antiguidade. Acreditava-se que com as novas tecnologias, as doenÃas infecto-contagiosas seriam facilmente controladas e banidas. A realidade, porÃm tem-se apresentado de modo diferente; apesar dos avanÃos no conhecimento da tuberculose e tecnologia disponÃvel para seu controle, o quadro atual encontra-se muito distante das metas estabelecidas pelos governos. à essencial o estudo dos fatores associados à tuberculose pulmonar, uma vez que eles estÃo presentes na primo-infeccÃÃo, na recidiva e na Tb pulmonar multi-resistente. O conhecimento de dados relacionados a tuberculose na populaÃÃo em geral e em grupos de risco especÃficos para Tb sÃo elementos fundamentais para avaliar a realidade epidemiolÃgica do nosso meio possibilitando uma organizaÃÃo adequada das atividades preventivas e assistenciais. OBJETIVO: Investigar os fatores associados ao diagnÃstico de Tb, a freqÃÃncia e as caracterÃsticas da tuberculose pulmonar entre sintomÃticos respiratÃrios atendidos na rotina de trÃs serviÃos de saÃde de Fortaleza. MÃTODOS: Estudo transversal de natureza quantitativa realizado por meio da aplicaÃÃo de um questionÃrio em pacientes atendidos em trÃs unidades de saÃde de Fortaleza. Os entrevistados foram divididos em pacientes com desfecho de tuberculose e desfecho nÃo tuberculose. Foi estudado a influÃncia dos fatores sÃcio demogrÃficos, condiÃÃes de moradia, fatores comportamentais, antecedentes relacionados a infecÃÃo por Tb e variÃveis clÃnicas para o desfecho tuberculose. RESULTADOS: A freqÃÃncia de Tb pulmonar entre sintomÃticos respiratÃrios da amostra estudada foi 41,2%, mas esse dados nÃo podem ser extrapolados, os fatores sÃcio demogrÃficos e clÃnicos independentes associados ao desfecho Tb foram tosse, febre e perda de peso considerando o nÃvel de seis por cento de significÃncia. O principal mÃtodo auxiliar utilizado para diagnÃstico de Tb presumida nos pacientes das unidades estudadas em Fortaleza foi a radiografia de tÃrax. O perfil de sensibilidade de Mycobacterium tuberculosis mostrou 8,82 por cento de cepas MDR e sensibilidade a isoniazida, rifampicina, etambutol e streptomicina de 88,23 por cento nas amostras realizadas, nÃo podendo ser extrapolado. Se excluÃdos todos os TSA provenientes do hospital de Messejana e considerado somente os TSA dos postos de saÃde, o valor da resistÃncia reduz para um caso de MDR para 28 TSA realizados representando 3,6% da amostra, a maioria dos pacientes com Tb pulmonar tiveram BAAR positivo somente uma cruz, o que pode significar tempo de doenÃa nÃo tÃo longo. / Tuberculosis (TB) is a disease that has challenged mankind since antiquity. It was believed that with the new technology, infectious diseases would be easily tracked and banned. The reality has been presented differently, despite advances in knowledge of tuberculosis and technology available for its control, the current picture is far from the targets set by governments. It is essential to the study of factors associated with pulmonary tuberculosis, since they are present in the prime-infeccÃÃo in relapse and multi-drug resistant pulmonary TB. Knowledge of data related to TB in the general population and specific groups at risk for TB are crucial to assess the epidemiological reality of our environment allowing proper organization of prevention and care activities. OBJECTIVE: To investigate factors associated with the diagnosis of TB, the frequency and characteristics of pulmonary tuberculosis with respiratory symptoms in three routine health services in Fortaleza. Cross-sectional study of quantitative accomplished through the application of a questionnaire in patients from three health units of Fortaleza. Respondents were divided on outcome of patients with tuberculosis and non tuberculosis outcome. We studied the influence of sociodemographic factors, housing conditions, behavioral factors, antecedents related to TB infection and clinical outcome for tuberculosis. RESULTS: The rate of pulmonary TB patients with respiratory symptoms among the study sample was 41.2%, but this data can not be extrapolated, the socio demographic and clinical outcome independently associated with TB were cough, fever and weight loss considering the level of six percent of significance. The main method used to assist diagnosis of TB in patients suspected of units studied in Fortaleza was the chest radiograph. The susceptibility profile of Mycobacterium tuberculosis showed 8.82 percent of MDR strains and sensitivity to isoniazid, rifampin, ethambutol and streptomycin from 88.23 percent in the samples taken and can not be extrapolated. If all TSA excluded from the hospital and found only Messejana TSA health posts, the resistance value reduces to a case of MDR 28 to TSA made, representing 3.6% of the sample, most patients with pulmonary TB had AFB positive only a cross, which may mean duration of disease not so long.

Submitted by Maryse Santos (maryseeu4@gmail.com) on 2016-09-02T15:09:48Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Matilde Contreras.pdf: 2282058 bytes, checksum: eae1f17b53a7e783e6a0d0a1bff74346 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-09-16T12:25:29Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação Matilde Contreras.pdf: 2282058 bytes, checksum: eae1f17b53a7e783e6a0d0a1bff74346 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-09-16T12:31:38Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação Matilde Contreras.pdf: 2282058 bytes, checksum: eae1f17b53a7e783e6a0d0a1bff74346 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-16T12:31:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação Matilde Contreras.pdf: 2282058 bytes, checksum: eae1f17b53a7e783e6a0d0a1bff74346 (MD5) Previous issue date: 2013-05-17 / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Leprosy is a chronic infectious disease caused by Mycobacterium leprae. Worldwide efforts to control leprosy with multidrug therapy (MDT), which is a combination of the drugs rifampin, dapsone and clofazimine, have led to a significant reduction in the detection of new cases in recent years. The current control measure for treating leprosy based mainly in MDT is designed to prevent the emergence, transmission and spread of resistant strains of M. leprae. Although resistance has been reported since 1964 to dapsone, since 1976 to rifampin and since 1994 to ofloxacin, determining the prevalence of drug resistance was made possible only with the advent of molecular biology techniques. It is known that mutations in the folp1 gene result in dapsone resistance. Mutations in the rpoB gene are responsible for rifampin resistance. Mutations in the gyrA gene are associated with fluoroquinolone resistance. The aim of this study was to identify mutations in the folp1, gyrA and rpoB genes of M. leprae from leprosy patients being treated at a reference center of dermatologic diseases in the state of Amazonas, Brazil. We utilized molecular biology techniques including conventional Polymerase Chain Reaction (PCR), Leprosy Drug Susceptibility-DNA microarray (LDS-DA) and DNA sequencing. Using the LDS-DA test two mutations in the rpoB gene were observed in two different samples. These mutations were confirmed by DNA sequencing. Through DNA sequencing four mutations in the folp1 gene five mutations in the gyrA gene and six mutations in the rpoB gene were detected. This included two samples that had mutations in both the gyrA and rpoB genes, indicating multidrug resistance (MDR). Primary and secondary drug resistance was confirmed using LDS-DA analysis and DNA sequencing in slit skin smear specimens obtained from leprosy patients, showing the spread of resistant strains of M. leprae in this area of Brazil and the importance to vary the treatment in these leprosy patients to prevent the dissemination of resistant leprosy bacilli. / A hanseníase é uma doença infecciosa crônica causada pelo Mycobacterium leprae. Os esforços globais no controle da hanseníase incluindo a poliquimioterapia (PQT) que consiste na combinação dos fármacos: rifampicina, dapsona e clofazimina têm levado à significativa redução na detecção de casos novos nos últimos anos. A atual estratégia para o controle da hanseníase está embasada principalmente na PQT e pretende prevenir o surgimento, a transmissão e a disseminação de cepas resistentes de M. leprae. Atualmente, sabe-se que mutações no gene folp1 de M. leprae resultam em resistência à dapsona. Mutações no gene rpoB são responsáveis pela resistência à rifampicina. Mutações no gene gyrA são correlacionadas com resistência às fluoroquinolonas. O objetivo deste estudo foi identificar mutações nos genes folp1, gyrA e rpoB do M. leprae de pacientes com hanseníase atendidos no centro de referência de doenças dermatológicas no estado do Amazonas, Brasil. Neste trabalho foram utilizadas técnicas da Biologia Molecular incluindo Reação em Cadeia da Polimerase (PCR), Leprosy Drug Suceptibility-DNA microarray (LSD-DA) e sequenciamento de DNA. Com o LSD-DA foram identificadas duas mutações no gene rpoB em dois diferentes amostras. Através do sequenciamento de DNA foram detectadas quatro mutações no gene folp1, cinco mutações no gene gyrA e seis mutações no gene rpoB. Nestes dados incluem-se duas amostras com mutações nos genes gyrA e rpoB, indicando multidroga resistência. Resistência primaria e secundária foi confirmada usando LDS-DA e sequenciamento de DNA em amostras de raspados dérmicos de pacientes com hanseníase, mostrando a disseminação de cepas resistentes de M. leprae nesta área do Brasil e a importância de avaliar o tratamento nestes pacientes para prevenir a disseminação de bacilos resistentes na hanseníase.

A tuberculose ainda é pontuada como uma doença de impacto mundial, sendo considerada desde 1993 um problema de saúde pública global. Uma das grandes preocupações é a contínua prevalência de cepas da Mycobacterium tuberculosis multidroga resistentes, especialmente o genótipo hipervirulento W-Beijing. Acredita-se que este genótipo apresenta alguma vantagem seletiva em relação a outros genótipos da M. tuberculosis, além de estar associado à falha terapêutica, tuberculose extrapulmonar, resistência à vacinação pela BCG e acentuada capacidade de disseminação. Estas cepas apresentam variável capacidade de sobrevivência dentro de macrófagos e do granuloma, modulando vias metabólicas específicas que culminam no escape do sistema imunológico e sucesso na infecção. Buscando entender esta vantagem seletiva e capacidade de persistência na infecção, este estudo teve como objetivo analisar e comparar o perfil transcriptômico de macrófagos infectados com as cepas da M. tuberculosis, W-Beijing 1471 e H37Rv. Os RNAs mensageiros dos macrófagos infectados foram sequenciados em plataforma HiScan Genome Analyzer Illumina. Foram gerados aproximadamente 30 milhões de sequências por amostra, em leituras single reads, com mais de 70% de sequências com valores de score Q de qualidade superior ou igual a 30. Foram mapeados e analisados 35.581 transcritos. Em média, 63% dos genes não apresentaram diferenças nos valores de expressões, 19% tiveram suas expressões reduzidas e 18% dos genes foram classificados como mais expressos, para todas as amostras de macrófagos sequenciadas. Após as análises terciárias e validação por PCR em tempo real, as amostras infectadas com a cepa W-Beijing 1471 apresentaram um aumento nas expressões de IFNs da classe I (p<0,001) e aumento exacerbado de TNF-alfa (p<0,001), comparativamente ao controle e as amostras infectadas com a cepa padrão H37Rv. Aditivamente foi observado um aumento nas expressões de duas quinases, RIPK1 e RIPK3 e de moléculas envolvidas na indução e controle de espécies reativas de oxigênio (ROS), que em infecções por bactérias intracelulares, estão correlacionadas com a morte de macrófagos por necroptose. A cepa hipervirulenta da M. tuberculosis, W-Beijing 1471, apresentou reduzida persistência intramacrofágica e induziu morte precoce dos macrófagos ao quinto dia de infecção. A morte observada nos macrófagos foi associada a ativação de IFNs da classe I/TNF-&#945;/RIPK1/RIPK3 e ROS, indicando necroptose. Ainda, foi observado um aumento na expressão do receptor TLR3 nas amostras infectadas com a cepa W-Beijing, comparativamente as amostras controles e infectadas com a cepa H37Rv. É provável que a ativação inicial dos IFNs da classe I tenha ocorrido via TLR3 através do reconhecimento de dsRNAs da M. tuberculosis. / Since 1993 the tuberculosis is considered as a disease of worldwide impact and a problem of public health. A major concern is the continuing prevalence of multidrug resistant Mycobacterium tuberculosis strains, especially the hypervirulent W - Beijing genotype. It is believed that this genotype has a selective advantage over other genotypes of M. tuberculosis and has being associated with treatment failure, extrapulmonary tuberculosis, resistance to BCG vaccination and marked ability to spread. These strains have varying ability to survive within macrophages and granuloma, modulating specific metabolic pathways that culminate in the escape of the immune system response. To understand this selective advantage and ability to persist in infection, this study aimed to analyze and compare the transcriptomic profile of macrophages infected with strains of M. tuberculosis W - Beijing 1471 and H37Rv. The mRNAs of infected macrophages were sequenced in HiScan Illumina Genome Analyzer platform. Were generated approximately 30 million sequences per sample, in single-reads readings. More than 70 % of sequences had values of Q score superior or equal to 30. Were mapped and analyzed 35,581 transcripts. On average, 63% of the genes showed no differences in the expressions, 19% were downregulated and 18% were upregulated, for all samples sequenced macrophages. After tertiary analysis and validation by real-time PCR, samples infected with the strain W -Beijing in 1471 showed an increase in expression of IFN class I (p <0.001) and exacerbated increase of TNF- alpha (p < 0.001) when compared to the control samples and those infected with standard strain H37Rv. Additively was observed an increase in expressions of the two kinases RIPK1 and RIPK3 and molecules involved in the induction and control of reactive oxygen species (ROS). In infections by intracellular bacteria, activation of RIPK1, RIPK3, ROS and TNF-&#945;, are correlated with death of macrophages by necroptosis. The hypervirulent M. tuberculosis W - Beijing 1471 strain showed reduced persistence inside macrophage and induced early death of macrophages in the fifth day of infection. The death observed in macrophages was associated with activation of IFNs class I/TNF-&#945;/RIPK1/RIPK3 and ROS, indicating necroptosis. Also was observed an increase in the expression of TLR3 receptor in infected samples with W-Beijing 1471 strain compared to controls and those infected with H37Rv strain. Probably the initial activation of IFNs class I occurred by TLR3 through the recognition of M. tuberculosis dsRNAs.

Foi estabelecida uma parceria entre o Departamento de Medicina Veterinária Preventiva e Saúde Animal (VPS) da FMVZ-USP, a Coordenadoria de Defesa Agropecuária do Estado de São Paulo e o Serviço de Inspeção Federal (SIF) para organizar um sistema capaz de detectar focos de tuberculose bovina no Estado, com base nas rotinas de inspeção de carcaças em abatedouros, cujos objetivos foram: 1) conhecer a diversidade genética de isolados de Mycobacterium bovis em bovinos no Estado de São Paulo; 2) estudar a distribuição espacial desses focos; 3) estudar a tipologia das unidades de criação de bovinos caracterizadas como focos de tuberculose; 4) verificar se é possível, com a atual infra-estrutura existente em São Paulo, operar um sistema de vigilância para detecção de focos de tuberculose bovina. Assim, foi estruturado um sistema de coleta, envolvendo as redes SISP (Sistema de Inspeção do Estado de São Paulo) e SIF, que realizou as coletas de materiais e informações de maio de 2002 a janeiro de 2004. Todo o material seguiu para o VPS, onde foram processados. As propriedades caracterizadas como focos foram rastreadas e delas foi coletada outro conjunto de informações. Seguem os resultados alcançados: 1) foram identificados 33 diferentes espoligotipos dentre os 248 isolados de M. bovis de bovinos no Estado de São Paulo. Os isolados do espoligotipo SB0295 foram re-discriminados em 13 novos perfis genéticos de M. bovis pela técnica MIRU-VNTR; 2) dentre os dois espoligotipos mais prevalentes estudados (SB0295 e SB0121), apenas o SB0295 apresentou-se de forma agrupada nas análises espaciais; 3) foram geradas várias informações sobre a tipologia e o manejo das unidades de criação de bovinos caracterizadas como focos de tuberculose; 4) a atual infra-estrutura existente no Estado de São Paulo foi capaz de operar um sistema de detecção de focos de tuberculose bovina / A partnership between the Department of Preventive Veterinary Medicine and Animal Health (VPS) of the FMVZ-USP, the Coordination of Agriculture and Animal Defense of the State of São Paulo, and the Federal Inspection Service (SIF) was established to organize a work system for detection of bovine tuberculosis focus in the state, based on routine methods of carcass inspection in the abattoir, with the following objectives: 1) to determine the genetic diversity of the isolates of Mycobacterium bovis from bovines in the state of São Paulo; 2) to study the spatial distribution of the focuses; 3) to study the typology of the bovine breading units (farms), which were characterized as tuberculosis focus; 4) to verify the possibility of operating a surveillance system for detection of bovine tuberculosis focus based on the current network in the state of São Paulo. Thus, it was performed a system for data collection involving the current systems SISP (System of Inspection of the State of São Paulo) and SIF, who performed the collection of biological samples and information from May 2002 to January 2004. All samples were addressed to the VPS, where they were processed. Farms characterized as focus were traced to obtain new information. The results obtained in this study follow: 1) A total of 33 different spoligotypes were determined out of 248 bovine isolates of M. bovis in the state of São Paulo. The spoligotype SB0295 isolates were re-discriminated into 13 new M. bovis genetic profiles by the MIRU-VNTR technique; 2) From the two most prevalent spoligotypes analyzed in this study (SB0295 e SB0121), only SB0295 showed a cluster presentation by the spatial analyses; 3) Several information about typology and bovine breeding unit management were generated regarding the status of tuberculosis focus; 4) the current network in the state of São Paulo was capable of operating a system for detection of bovine tuberculosis focus

O gênero Mycobacterium compreende inúmeras espécies estudadas por sua capacidade de causar doenças. Surtos de tuberculose e micobacteriose em zoológicos, aquários, centros de pesquisa e criadouros evidenciaram a importância desses organismos em relação à saúde de animais silvestres mantidos em cativeiro. Duzentas e onze amostras, de 101 animais entre mamíferos, aves, répteis, anfíbios e peixes, foram submetidas à cultura. Foram isolados M. tuberculosis, M. bovis e 13 espécies de MNT associadas à doença. A natureza crônica dessas doenças, seu diagnóstico ante mortem limitado, juntamente com as características de interação social de cada espécie e o confinamento, favorecem a transmissão das micobactérias pelo contato com humanos ou outros animais infectados. Apesar de a presença de M. tuberculosis e M. bovis em instituições brasileiras já ter sido constatada, o presente estudo descreveu infecções em espécies animais utilizadas para consumo humano, e em espécies conhecidas pela suscetibilidade, mas que ainda não foram documentadas no Brasil. Doença causada por MNT foi relatada, mas sua importância deve ser considerada de acordo com a espécie animal acometida / Mycobacterium genus comprises several species, which have been studied for their capacity to cause diseases. Outbreaks of tuberculosis and mycobacteriosis in zoos, aquariums, research and breeding facilities have shown the importance of these organisms to health of wildlife animal maintained in captivity. Two hundred and eleven samples, from 101 animals among mammal, birds, reptiles, amphibians and fishes, were cultured. Mycobacterium tuberculosis, M. bovis and 13 species of non-tuberculous mycobacteria associated to diseases were isolated. The chronical nature of tuberculosis and mycobacteriosis, their limited ante mortem diagnosis, along with social behavior of each species and confinement, favor mycobacterial transmission through contact with infected humans and other animals. Despite the presence of M. tuberculosis and M. bovis has already been observed in Brazilian institutions, the present study described infections in animal species destined to human consumption, and species known for their susceptiblility, yet not documented in Brazil. Disease caused by non-tuberculous mycobacteria was reported, though its importance must be considered according to the animal species affected

Avaliou-se a atividade conservante do Borato de Sódio para amostras de tecidos com lesão tuberculosa. Inicialmente, foi feito um teste de inoculação experimental em hamsters. A partir dos resultados observados neste estudo, foram selecionadas as variáveis para a segunda etapa do experimento, com lesões de abatedouro de bovinos. Noventa hamsters foram inoculados experimentalmente com Mycobacterium bovis e foram eutanasiados 40 dias após a inoculação, quando foi feita a colheita dos baços. Esses órgãos foram, individualmente, armazenados em solução saturada de Borato de Sódio, em quatro períodos de armazenamento distintos (30, 60, 90 e 120 dias após a eutanásia), em duas temperaturas (27&ordm;C e 37&ordm;C), exceto o grupo controle processado no dia da eutanasia. Na segunda etapa do experimento, 69 lesões de órgãos de bovinos foram colhidas de um abatedouro e armazenadas em solução de borato de sódio em três períodos de armazenamento distintos (30, 60 e 90 dias após a colheita), na temperatura de 27&ordm;C, exceto o grupo controle, processado no dia de entrada no laboratório. As análises dos dois experimentos foram feitas separadamente e mostraram-se concordantes. Em relação aos períodos de armazenamento dos órgãos em Borato de Sódio foram consideradas duas variáveis, a proporção de isolados de micobactérias a partir dos órgãos e o número de U.F.C. de micobactérias desses mesmos órgãos. Com base nos resultados observados em ambos os testes, concluiu-se que o armazenamento de tecidos com lesões tuberculosas em solução de Borato de Sódio pode ser feito por até 30 dias em altas temperaturas, 27&ordm;C a 37&ordm;C. Além disso, observou-se que conforme a temperatura ambiente aumenta, diminui a sensibilidade do isolamento de M. bovis a partir de amostras armazenadas em solução saturada de Borato de Sódio. / The preservative activity of Sodium Tetraborate was evaluated for tissues with tuberculous lesion. Initially, an experimental infection essay was performed in hamsters. Based on the results observed in this essay, the variables for the second experiment, involving samples from a slaughterhouse, were selected. The 90 animals were euthanized 40 days after inoculation when the spleens were colected. These organs were individually stored in saturated Sodium Tetraborate solution, in four distincts storage periods (30, 60, 90 and 120 days after the euthanasia), in two temperatures (27&ordm; and 37&ordm;C), except for the control group processed on the euthanasia day. On the second part of the experiment, sixty nine samples of bovine organs with tuberculous lesions were collected from a slaughterhouse. The samples were stored in saturated Sodium Tetraborate solution, in three distincts storage periods (30, 60 and 90 days after collection), at the temperature of 27&ordm;C, except for the control group processed on the day of entry in the laboratory. The analysis of both experiments were done separately and were concordant. In relation to the storage periods of the organs in Sodium Tetraborate solution, two variables were considered, the proportion of mycobacterial isolates from the organs and the number of mycobacterial C.F.U from the same organs. Based on the results observed on both essays, it was concluded that tissues with tuberculous lesions can be stored in Sodium Tetraborate solution up to 30 days in high temperatures, 27&ordm;C a 37&ordm;C. Furthermore, it was observed that as the environmental temperature increases the M. bovis isolation sensibility from the samples stored in Sodium Tetraborate decreases.

A resistência térmica dos microrganismos sofre influência, entre outros fatores, das características do agente e das características do substrato, como o teor de gordura. Um dos objetivos da pasteurização do creme é a eliminação dos patógenos eventualmente presentes no leite. Entretanto, não há padrão de tempo e temperatura de pasteurização para este produto na legislação. O Mycobacterium bovis é considerado o patógeno não formador de esporo de maior resistência térmica que pode normalmente ser transmitido pelo leite. Assim, este trabalho se propõe a avaliar a inativação de Mycobacterium bovis (espoligotipo BR024) em creme de leite fresco submetido a alguns parâmetros comerciais de pasteurização. Creme de leite foi contaminado e pasteurizado em Banho-Maria a 75°C, 80°C, 85°C e 90°C, por 5 e 15 segundos. O agente foi quantificado por semeadura em duplicata das diversas diluições em meio Stonebrink, após incubação a 36°C/45 dias. A redução na população variou de 3,9 log UFC/mL até a 6,8 log UFC/mL o que mostra que, nas condições do estudo, todos os binômios estudados mostraram-se capazes de reduzir a carga contaminante para níveis tão baixos ou menores que 0,1 log UFC/mL, considerando a máxima contaminação inicial natural do leite por M. bovis (4 log UFC/mL), segundo Ball (1943) / The thermal resistance of microorganisms is influenced by the agent in question, the initial microbial load and the characteristics of the substrate that can exert a protective effect on the cell, for example, the fat content. The pasteurization of whipping cream aims to eliminate pathogen microorganisms that may occasionally be present in milk. However, there is no standard in the law of time and temperature for this product, making it necessary more detailed study to consider the specific feature of thermal resistance of microorganisms at different temperatures for pasteurization, especially considering the high fat product. Mycobacterium spp is considered the pathogen spore-non-forming of higher heat resistance that can be transmitted by milk, among species, M.bovis is the most pathogenic. Therefore, this study aims to evaluate the inactivation of Mycobacterium bovis (spoligotype BR024) in fresh whipping cream subjected to some parameters of commercial pasteurization. Whipping cream was contaminated and pasteurized in a water bath at 75°C, 80°C, 85°C and 90°C for 5 and 15 seconds. The agent was measured in duplicate in the middle Stonebrink after incubation at 36°C/45 days. The reduction in the population ranged from 3.9 log CFU / mL up to 6.8 log CFU/ mL which shows that under the conditions of the study, all binomials studied were able to reduce the contaminant load to such low levels or lower than 0.1 log CFU / ml, the maximum initial natural contamination of milk by M. bovis (4 log CFU / mL), according to Ball (1943)

A técnica de camada delgada em placas com meio de Middlebrook 7H11 foi comparada com a técnica padrão de cultura em meio de Stonebrink, a fim de se avaliar a sensibilidade e o tempo de detecção de micobactérias em amostras de leite, experimentalmente inoculadas com Mycobacterium bovis (estirpe AN5), em uma diluição 10-2, e submetidas a duas diferentes técnicas de processamento, utilizando-se da gordura (técnica 1)e do sedimento (técnica 2), descontaminadas pelo método de Petroff modificado (adicionado de Tween 80) e confrontadas com a técnica do leite total submetida ao método de Petroff e semeadas nos dois meios. Os resultados destas técnicas (1 e 2) foram comparados entre si pelo teste não paramétrico de Wilcoxon, e entre os resultados obtidos na técnica de leite total submetida ao método tradicional de Petroff, por meio do teste não paramétrico de Mann-Whitney. Posteriormente, amostras de leite nas diluições 10-3, 10-4 e 10-5 foram então submetidas às mesmas técnicas de processamento e descontaminação para averiguação de sensibilidade. Os resultados obtidos demonstraram que: 1) a técnica de cultivo de micobactérias em amostras de leite no meio de Middlebrook 7H11 se mostrou viável frente à tradicional; 2) a técnica de camada delgada permitiu a visualização precoce das micobactérias quando comparadas ao meio de Stonebrink; 3) as técnica 1 e 2 forneceram maior recuperação de micobactérias e maior proporção de cultivos positivos nos dois empregados; 4) a técnica de camada delgada em meio de Middlebrook 7H11 modificado pode ser usada como uma técnica complementar aos métodos tradicionais de diagnóstico da tuberculose bovina em amostras de leite para fins de vigilância epidemiológica. / The modified thin layer Middlebrook 7H11 cultivation technique was compared to the tradicional culture technique using the Stonebrink in order to evaluate the sensibility and the time for the detection of positive cultures of mycobacteria in milk samples, experimentally inoculated by Mycobacterium bovis (strain AN5), 10-2 dilution, were submitted by two types of procedures named technique 1 (milk fat) and 2 (milk sediment), descontamined by modified Petroff method, added with Tween 80, and compared with total milk samples submitted to tradicional Petroff method, in the same media types. The results of the two tecniques were compared within each other by the non-parametric Wilcoxon test, and within the results of standard milk submitted by the tradicional Petroff method, by the non-parametric Mann-Whitney. Milk samples were diluted to 10-3, 10-4 and 10-5 and submitted by the tecniques 1 and 2 descontaminated by the modified Petroff method, and total milk by tradicional Petroff method to averiguate the sensibility. The results found in this experiment demonstrated that 1) the modified thin layer technique of isolation of mycobacteria in milk samples was practicable against the tradicional one; 2) the time needed for the detection of mycobacteria colonies was slightly less with the thin layer technique than the tradicional culture method; 3) techniques 1 and 2 gave more number of colonies and more proportion of positive culture than the tradicional one in all media used; 4) this technique should be used as a complementary method to the tradicional one in the diagnostic of bovine tuberculosis from milk samples in orther to improve epidemiologic vigilance.

Avaliou-se a atividade micobactericida de cinco desinfetantes químicos frente a uma estirpe de Mycobacterium bovis isolada de caprinos, tipificada por PCR (polymerase chain reaction) e com 32 dias de cultivo no meio de Stonebrink. O teste de desinfetantes foi realizado utilizando-se a técnica de cultivo em camada delgada de ágar Middlebrook 7H11 modificado e foi comparado ao teste em tubos com meio de Stonebrink, tradicionalmente utilizado no laboratório de zoonoses bacterianas da FMVZ/USP. Os cinco desinfetantes ensaiados foram: \"A\" : grupo controle; \"B\" - hipoclorito de sódio (2,5 % de cloro ativo); \"C\"- glutaraldeído (2 %); \"D\" - ácido peracético 0,25 % e peróxido de hidrogênio 5 %; \"E\" - iodóforo (2,6% de iodo) e \"F\"- compostos fenólicos (orto-fenilfeno 12,243 g; orto-benzil paraclorofenol 11,080 g; para-terceário amilfeno 4,1222 g.). A diluição destes produtos foi feita conforme recomendação do fabricante. Os meios de cultura adotados para o procedimento de isolamento e preparo da suspensão bacteriana foram o meio de Stonebrink e o meio de Middlebrook 7H11 modificado. Os testes foram realizados na presença e ausência de matéria orgânica e à temperatura ambiente (21 ± 2°C) e à temperatura de 4 °C. Os resultados obtidos nas contagens de colônias foram transformados em percentual de redução para análise estatítica e demostraram que: a técnica de cultivo de micobactérias em camada delgada no meio de Middlebrook 7H11 permitiu uma visualização precoce das micobactérias e se mostrou viável para realização de testes de desinfetantes; os cinco tipos de desinfetantes analisados apresentaram atividade micobactericida e o melhor desempenho foi obtido pelo ácido peracético seguido pelo hipoclorito de sódio. A atividade micobactericida dos iodóforos foi instisfatória na presença de matéria orgânica. / The mycobactericidal activity of five chemical disinfectants was evaluated against a strain of Mycobacterium bovis isolated from a goat, typified by PCR (polymerase chain reaction) and with 32 days of growth in the Stonebrink medium. The disinfectants were tested using the modified thin layer Middlebrook 7H11 cultivation technique and it was compared to the test made in tubes with Stonebrink medium, which is tradicionally used at the Bacterian Zoonosis Laboratory of the Veterinary Medicice Faculty of the University of São Paulo. The five disinfectants were: \"A\" was the control group; \"B\"- sodium hypochlorite (2,5% of active chlorine); \"C\"- glutaraldehyde (2 %); \"D\"- peracetic acid (0,25 %) and hydrogen peroxide (5 %); \"E\" - iodine compounds (2,6%) e \"F\"- fenolic compounds (orto-fenilfeno 12,243 g; orto-benzil paraclorofenol 11,080 g; para-terceario amilfeno 4,122 g.). The products were diluted according to label instructions. The culture media used for the isolation procedure and preparation of the bacterian suspension were the Stonebrink and modified Middlebrook 7H11 medium. The assays were performed either in the presence or absence of organic matter, at temperatures of 4 °C and 21 ± 2°C The colony counting results were transformed into reduction percentages for the statistical analysis and concluded in: the modified thin layer Middlebrook 7H11 cultivation technique permitted an earlier visualization of the colonies and was practible for the realization of the disinfectants tests; the five disinfectants showed mycobactericidal activity and the peracetic acid had the best performance followed by the sodium hypochlorite. The mycobactericidal activity of the iodine compound was unsatisfactory when in the presence of organic matter.

Dada a existência de quatro famílias molecularmente distintas de estirpes de Mycobacterium avium isoladas de suínos da região Sul do Brasil e a verificação de diferentes virulências em hamsters de um representante por família, o presente trabalho objetiva relacionar a virulência de isolados de M. avium aos seus perfis genéticos obtidos em experimentos de RFLP. Foram selecionados três representantes por família que foram inoculados pela via intraperitoneal em hamsters distribuídos em doze grupos (cada grupo recebeu uma estirpe diferente). Foi mantido um grupo controle que recebeu solução salina estéril pela mesma via. Após 16 dias da inoculação, os animais foram eutanasiados; os baços foram colhidos, pesados, macerados, suspendidos em solução salina estéril e diluídos. Cada uma das diluições foi semeada em duplicata em placas com meio de Petragnani, que foram incubadas a 37°C. Após 30 dias de incubação, foram realizadas as contagens de UFC e os resultados foram expressos em UFC de M. avium por grama de baço. As famílias genéticas apresentaram capacidade de virulência semelhante (p=0,49). As estirpes dentro das famílias PIG B e PIG D não apresentaram diferença na virulência (p=0,15 e p=0,87, respectivamente). Dentro da família PIG A, o isolado A52 foi mais virulento do que A1 e A162; a estirpe C122 se apresentou menos virulenta do que as estirpes C44 e C68 dentro da família PIG C. Independente das famílias, todos os isolados apresentaram diferenças na virulência. A estirpe A52 mostrou maior capacidade de virulência em relação às estirpes A1, A162, B72, C122, D242 e 243. Diferentes contagens de UFC significam diferentes capacidades de produzir infecção, ou seja, diferentes virulências. Concluiu-se que isolados de M. avium com diferentes perfis de RFLP podem apresentar diferentes virulências, independentemente de pertencerem a uma mesma família genética definida com base na similaridade dos padrões de RFLP; não houve diferença de virulência entre as quatro famílias genéticas de M. avium estruturadas com base na similaridade dos padrões de RFLP. / Knowing the existence of four molecularly distinct families of Mycobacterium avium strains isolated from swine populations of Brazil Southern and the corroboration of diverse virulence in experimentally infected hamsters by one representative of each family, this work intend to establish relation between virulence of M. avium isolates and their genetic patterns obtained in prior RFLP analyses. We selected three representatives of each family, totalizing twelve strains, which were introduced by intraperitoneal route into hamsters distributed in twelve groups (each group received a different strain). A control group was maintained and received buffer solution by the same route. Sixteen days after the inoculation, animals were euthanized and their spleens were collected, weighted, triturated, suspended in buffer solution and then diluted. Two plates containing Petragnani medium were seeded with each dilution and were incubated at 37ºC. At the 30th day, the CFU counting was performed and the results were expressed in M. avium CFU/g of spleen. All genetic families presented similar capacity of virulence (p=0,49). Strains of PIG B and PIG D families presented similar virulence within their families (respectively, p=0,15 and p=0,87). Inside the PIG A family, strain A52 was more virulent than strains A1 and A162; the strain C122 presented the lowest virulence compared with the strains C44 and C68 within the PIG C family. All strains, independent of their family, presented diverse virulence. Strain A52 was more virulent than strains A1, A162, B72, C122, D242 and D243. Distinct counting of CFU means different capacity of producing infection, i.e. diverse virulence. We concluded that, independent fo the genetic family established by similarity of RFLP patterns, M. avium isolates with diverse RFLP profiles may present different virulence; there was not difference in virulence; among all of four M. avium genetic families structured according to the similarity of RFLP patterns.