Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias, Curso de Pós-Graduação em Recursos Genéticos Vegetais, Florianópolis, 2011 / Made available in DSpace on 2012-10-26T00:26:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 294753.pdf: 2554120 bytes, checksum: c56d364da119486d65613d08b059b39d (MD5) / México é o centro de origem e diversidade do milho e, portanto, seu cultivo tem grande importância no país. Apresentando uma grande riqueza genética e representando o principal alimento e tem um valor cultural muito grande, o milho significa a "carne e o sangue" "o pai, a mãe e o filho". Por isto quando Quist e Chapela comprovaram em 2001, a introgressão de DNA transgênico em variedades nativas (sinônimo de crioulas), a reação da sociedade em geral foi de forte preocupação. Assim desenvolveram-se pesquisas com a finalidade de conhecer a extensão e a intensidade do fluxo e introgressão de transgenes em variedades nativas. Um destes estudos foi o estudo realizado por organizações sociais, agricultores e indígenas pertencentes à Rede em Defesa do milho. Membros da Rede identificaram no ano 2005, deformações nas plantas do milho nunca antes constatadas e suspeitaram que estas anormalidades fossem causadas pela presença de transgenes. Assim, neste contexto, o presente estudo buscou verificar a existência de uma relação entre a presença de transgenes e a aparição de novos fenótipos anormais em milho em cinco comunidades na região de Vales Centrais de Oaxaca. Foi amostrado tecido foliar de 500 plantas de milho nativo com fenótipos anormais e 500 com fenótipos normais. A análise de detecção de proteínas recombinantes foi feita por Kits comerciais ELISA e comparou-se a frequência da presença de proteínas recombinantes entre plantas de fenótipos distintos. Obteve-se presença de pelo menos um transgene em 17,9% das plantas amostradas, sendo a proteína Cry1Ab a de maior frequência entre as três proteínas testadas. Encontrou-se uma diferença estatisticamente significativa ao comparar-se a frequência de proteínas recombinantes em fenótipos anormais (117/500) com fenótipos normais (62/500). Ao testar os resultados de frequência de presença de proteínas recombinantes nos diferentes fenótipos, com o teste chi-quadrado e o teste de comparações emparelhadas encontrou-se uma diferença estatística significativa (P<0,001). Com base nos resultados obtidos com os testes de proteínas, discute-se a pertinência de utilizar critérios de determinação de resultados positivos à presença de proteínas recombinantes, que se ajustem às caracteristicas de variedades nativas. Sugere-se mais análises de modo a validar a relação entre a presença de transgenes e a maior proporção de fenótipos anormais. / Mexico is the center of origin and diversity of maize; its cultivation, therefore, has great importance in the country. Maize in Mexico presents a great genetic richness, is the main staple food and has a great cultural value. For Mexicans maize means their "flesh and blood" and it is considered as "father, mother and child". Therefore, when Chapela e Quist in 2001, showed the DNA introgression of transgenes in landraces, the reaction in all sectors of society was one of great concern. Thus, surveys were developed aiming to ascertain the extent and intensity of transgene flow and introgression in the landraces. Among these efforts is the study conducted by social organizations, farmers and indigenous people belonging to the Network in Defense of Maize. In 2005 members of this network identified abnormalities on maize plants that have never verified seen before. They suspected that these abnormalities could be caused by the presence of transgenes. Bearing this in mind, this study aims to verify the existence of a relationship between the presence of transgenes and the appearance of new abnormal phenotypes. For this purpose, a sample of 500 plants with abnormal phenotypes and 500 with normal phenotype was collected in five communities of the Central Valley region in Oaxaca. Detection of recombinant proteins was done by ELISA commercial kits and the frequency of presence of recombinant proteins between plants of both phenotypes was compared. The presence of at least one transgene in 17.9% of the 1000 sampled plant was observed and Protein Cry1Ab showed to be most frequent among the three tested proteins. When comparing the frequency of recombinant proteins in abnormal (117/500) and normal (62/500) phenotypes a statistically significant difference was found. The results of the recombinant proteins frequencies in different phenotypes, were then tested by chi-square test and pairwise comparisons, which showed statistical significance (P <0.001). In this study we discuss the relevance of using specific criteria for determining positive results to the presence of recombinant proteins, that fit the characteristics of native varieties. This study is the first systematic approach to uncovering a relationship between the presence of transgenes and phenotypic abnormalities in Mexican maize landraces. Further analysis to validate this relationship is suggested.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Ciência dos Alimentos, Florianópolis, 2011 / Made available in DSpace on 2012-10-26T01:51:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 297593.pdf: 1091974 bytes, checksum: c69f67dcc2b97a7b63484a12f1e4985e (MD5) / Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) e PCR quantitativa em tempo real são usadas para detecção e quantificação de ingredientes geneticamente modificados (GM) em alimentos. Os objetivos deste trabalho foram desenvolver iniciadores e sondas para detecção dos elementos cry1A.105 e cry2Ab2 presentes no evento de milho GM MON89034; aplicar técnicas de PCR e PCR em tempo real para avaliar alimentos disponíveis no mercado brasileiro quanto à presença de material GM; e analisar os resultados segundo as exigências de legislação e rotulagem para esses produtos. Diferentes alimentos derivados de milho e soja foram analisados quanto à presença dos eventos de milho GM Bt11 e Bt176 e do evento de soja GM Roundup Ready (RR). No primeiro estudo, a presença dos eventos de milho GM Bt11 e Bt176 foi avaliada em 81 produtos derivados de milho (farinha de milho, fubá, biju e polenta) comercializados no Brasil. Foi observada a ausência dos eventos Bt11 e Bt176 em todas as amostras analisadas. No segundo estudo, PCR e PCR em tempo real foram aplicadas a fim de detectar e quantificar o evento de soja RR em produtos à base de soja e em derivados de carne. No total de 59 amostras analisadas, seis foram positivas para presença do evento de soja RR e apenas uma amostra apresentou soja RR acima do limite para rotulagem. No terceiro estudo, iniciadores e sondas foram desenvolvidos e avaliados em termos de especificidade, eficiência e limite de detecção para identificação específica dos elementos cry1A.105 e cry2Ab2 presentes no evento de milho GM MON89034. Os resultados mostraram alta especificidade e eficiência para detecção de cry1A.105 e cry2Ab2 sendo o limite de detecção entre 0,05 e 0,01 ng de DNA por PCR para ambos os ensaios. Este trabalho permitiu confirmar a importância e a aplicabilidade da PCR e da PCR em tempo real para detecção e quantificação de eventos e elementos GM em alimentos. / Polymerase Chain Reaction (PCR) and quantitative real time PCR have been used to detect and to quantify genetically modified (GM) ingredients in foods. The aims of this work were: to develop primers and probes for detection of the cry1A.105 and cry2Ab2 elements present in GM maize event MON89034; to apply PCR and real time PCR to evaluate the presence of GM material in foods available at Brazilian market; and to analyze the results according to law and label requirements for these products. Different types of foods derived from maize and soy were analyzed for the presence of GM maize events Bt11 and Bt176 and GM soybean event Roundup Ready (RR). On the first study, the presence of GM maize events Bt11 and Bt176 was evaluated in 81 products derived from maize (maize flour, corn meal, maize flour flakes and polenta) commercialized in Brazil. It was observed the absence of GM maize Bt11 and Bt176 in all samples analyzed. On the second study, PCR and real time PCR were applied to detect and to quantify RR soybean event present in soy and meat derived products. A total of 59 samples were analyzed, six of them were positive to the presence of RR soybean event and only one sample showed RR soybean bove the limit to be labeled. On the third study, primers and probes were developed and evaluated in terms of specificity, efficiency and limit of detection for specific detection of cry1A.105 and cry2Ab2 elements present in GM maize event MON89034. The results showed high specificity and efficiency to detect cry1A.105 and cry2Ab2 with a detection limit between 0.05 and 0.01 ng of DNA per PCR for both assays. This work allowed confirming the importance and the applicability of PCR and real time PCR to detect and to quantify GM events and elements in foods.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias. Programa de Pós-Graduação em Ciência dos Alimentos / Made available in DSpace on 2012-10-22T17:39:00Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Devido à introdução da soja geneticamente modificada Roundup ReadyTM (RR) no mercado brasileiro, a habilidade para detectar organismos geneticamente modificados (OGMs) tornou-se uma necessidade legal. O Decreto 4.680 de 24 de Abril de 2003 prevê que alimentos que contêm acima de 1 % de OGMs em sua composição devem ser obrigatoriamente rotulados. Uma vez que a legislação estipula um limite para a presença de OGMs em alimentos, a detecção qualitativa não atende à exigência imposta. É necessário, então, a utilização de uma ferramenta que forneça dados quantitativos. Tais dados, referentes à presença e teor de soja geneticamente modificada em alimentos, ainda são escassos, principalmente em relação ao Brasil. O objetivo deste trabalho foi a detecção por PCR e quantificação por PCR em tempo real de soja Roundup Ready em proteína texturizada de soja, extrato de soja e ingredientes utilizados na indústria de carnes. O DNA das 114 amostras foi extraído e purificado por um método CTAB. Todas as amostras foram submetidas à pesquisa do gene da lectina de soja, para a verificação da presença de DNA de soja amplificável. Com exceção de 7 amostras de ingredientes, todas as demais apresentaram sinal positivo para este gene. Para a detecção qualitativa de soja RR, foi utilizada uma nested PCR já estabelecida que resultou em uma sensibilidade de 0,01%, considerada aceitável para detecção de OGMs. De um total de 107 amostras analisadas, 62 apresentaram resultado positivo para soja transgênica. 40 amostras de extrato de soja e proteína texturizada foram analisadas por PCR em tempo real, sendo que apenas duas amostras de PTS estavam em desacordo com a legislação.

Dissertação (mestrado) - Pontifícia Universidade Católica do Paraná, Curitiba, 2007 / Bibliografia: f. 144-155 / O nascimento da Engenharia Genética constitui um marco para as Ciências, pois a partir do desenvolvimento desta técnica, também conhecida como técnica do DNA recombinante, tornou-se possível produzir os Organismos Geneticamente Modificados (OGM). Em 1996,

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Recursos Genéticos Vegetais, Florianópolis, 2014 / Made available in DSpace on 2015-02-05T21:19:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 328841.pdf: 2986945 bytes, checksum: 4033a44bd5eb5793f2bbbfc569a1570f (MD5) Previous issue date: 2014 / Organismo geneticamente modificado (OGM) é um organismo cujo material genético foi manipulado através da utilização de técnicas de DNA recombinante. Apesar da adoção generalizada de OGMs por muitos países, a necessidade de pesquisas em biossegurança continua sendo uma preocupação. As técnicas de transformação genética atualmente utilizadas para o desenvolvimento de plantas geneticamente modificadas inserem construções transgênicas em regiões aleatórias no genoma da planta hospedeira e são muitas vezes integradas perto de elementos genéticos importantes, como retrotransposons e sequências repetidas. Isto impõe riscos adicionais devido à introdução de novas sequências reguladoras, que podem conduzir a alterações espaciais e temporais na expressão de genes endógenos. Estas imprevisibilidades podem ter efeitos adversos sobre a estabilidade genética em longo prazo, bem como no valor nutricional, alergenicidade e toxicidade do OGM. Estes processos genéticos representam áreas de pesquisa omitida, bem como lacunas no conhecimento relacionado a potenciais efeitos na saúde e meio-ambiente. Além disso, a abordagem atual para a avaliação de possíveis efeitos indesejados de OGMs é baseada na suposição de que um OGM é composto por duas partes, a planta e a proteína transgênica, que funcionam de forma linear e aditiva. Esta abordagem, que se baseia no conceito de "equivalência substancial", é altamente criticada pela comunidade científica e carece de hipóteses científicas bem fundamentadas. Assim, o objetivo deste trabalho foi testar dois novos modelos metodológicos para caracterizar os potenciais efeitos adversos dos OGMs em nível molecular. A primeira abordagem é baseada na análise comparativa do perfil proteico e níveis de transcrição transgênica de uma variedade de milho GM contendo duas inserções transgênicas, outra contendo apenas uma inserção sob o mesmo background genético e a variedade convencional correspondente. Este modelo biológico proporciona uma oportunidade única de rastreamento de potenciais alterações no proteoma que derivam da combinação dos dois transgenes. A segunda abordagem baseia-se na utilização da ferramenta de interferência por RNA para o silenciamento gênico. Esta ferramenta fornece um meio para estudar genótipos transgênicos sem a acumulação de proteínas transgênicas, isolando assim os efeitos da inserção per se. O desenvolvimento dessas metodologias também acarretou em uma extensa revisão da literatura sobre ensaios de interferência por RNA expressas de maneira transiente e estável em plantas. Os resultados observados demonstram que as construções transgênicas não funcionam de forma linear e aditiva. Mas influenciam a expressão global de genes endógenos, principalmente relacionados ao metabolismo energético e de estresse, dependendo do número de cópias e da natureza do transgene inserido. A presença de mais de um inserto no genoma hospedeiro também altera os níveis de expressão do transgene. Ainda, a análise proteômica de plantas transgênicas silenciadas revelou um baixo número de proteínas endógenas alteradas, indicando que o acúmulo de proteína transgênica é um dos principais fatores que influenciam a modulação do proteoma da planta hospedeira. Portanto, conclui-se que as novas abordagens metodológicas descritas e testadas podem fornecer uma metodologia científica útil e robusta para avaliações de risco de OGMs. Por fim, sugerimos que as agências regulatórias de biossegurança de OGMs considerem que este tipo de estudo seja obrigatório e parte dos documentos produzidos pelos proponentes da tecnologia que visam a liberação comercial de novos eventos de transformação genética.<br> / Abstract: Genetically modified organism (GMO) is an organism whose genetic material has been altered through the use of recombinant DNA techniques. Despite the widespread adoption of GMOs by many countries, the need for biosafety research remains a concern. Actual plant transformation methods include integration of transgenic constructs that take place at random locations in the recipient plant genome and are often close to important genetic elements, such as retrotransposons and repeated sequences. This poses additional risks due to the introduction of new promoter sequences, which may lead to altered spatial and temporal expression patterns of plant endogenous genes. All these events may have unpredictable effects on the long-term genetic stability of the GMO, as well as on their nutritional value, allergenicity and toxicant contents. These putative processes represent areas of omitted research with regard to health and environmental effects of GMOs. In addition, the current approach for the assessment of potential unintended effects of GM crops is based on the assumption that a GMO consists of two parts that function in a linear additive fashion, being that the crop and the novel GM transgene product. Based on the "substantial equivalence" concept, this approach is highly disputed in the scientific community and lacks a well founded scientifically driven hypothesis testing. In this work, two different new methodological models were used to characterize potential adverse effects of GMOs at the molecular level. The first approach is based on the comparative proteomic analysis and transgenic transcript level quantification of a stacked GM maize variety containing two transgenic inserts versus the two single transgenic parental varieties. This biological model provides a unique opportunity to track potential changes in the host proteome that derived from the combination of two transgenes. The second approach is based on the use of RNA interference tool prior to the comparative analysis. By enabling transgene silencing, this tool provides a means to study transgenic genotypes without the accumulation of transgenic protein, thus isolating insertional effects. The development of all these methodologies lead to an extensive literature review on transient and stable RNAi experiment in plants, which then resulted in a review article on this subject. The obtained results showed that transgene constructs do not function in a linear additive fashion, but instead alter endogenous proteome profile. These protein modulations are mainly related to energetic and stress metabolism, which then depended on the number of copies and the nature of inserted transgene sequences. The presence of more than one inserted sequences also affects the levels of transgene expression. In addition, the proteomic analysis of silenced transgenic plants showed a low number of altered endogenous proteins, indicating that the accumulation of transgenic protein is one of the main factors that influence the modulation of the host plant proteome. Therefore, it is concluded that the new methodological approaches described and tested can provide a useful and robust scientific methodology for risk assessment of GMOs. Finally, we suggest that GMO safety regulatory bodies take into account this kind of study and requires that it becomes part of the documentation produced by technology proponents intend to commercialize new genetic transformation events.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Recursos Genéticos Vegetais, Florianópolis, 2015. / Made available in DSpace on 2015-09-22T04:08:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 334739.pdf: 3684799 bytes, checksum: 0ddc65eb696ceae8a137240cbd733eab (MD5) Previous issue date: 2015 / Uma importante questão ainda muito polêmica no mundo está relacionada com os riscos da liberação comercial de organismos geneticamente modificados (OGM), particularmente o impacto ambiental que as plantas geneticamente modificadas podem gerar. Este trabalho tem como objetivo geral investigar as possíveis alterações bioquímicas e dos produtos da expressão gênica de uma variedade comercial de milho transgênico tolerante ao Roundup Ready® (evento NK603), submetida a condições de déficit hídrico e aplicação de herbicida. O primeiro ensaio realizado, denominado Ensaio sem herbicida, foi um ensaio em blocos ao acaso com distribuição trifatorial (Transgenia x Estresse x Ambiente). Este ensaio foi realizado em casa de vegetação (cv) e câmara de crescimento (cc) (fator Ambiente), composto por híbridos transgênicos (T) e sua isolinha convencional (C) (fator Transgenia), submetidos a rega controle (CONT) ou seca (SECA) (fator Estresse). O segundo ensaio, denominado Ensaio com herbicida, foi um ensaio em blocos ao acaso unifatorial, o qual foi formado também por três blocos, sendo cada unidade experimental composta por um grupo de três vasos (uma planta por vaso), com dois tratamentos: Milho Transgênico submetido a seca com aplicação de herbicida (TSECA RR); Milho Transgênico submetido a seca sem aplicação de herbicida (TSECA). A análise proteômica comparativa DIGE demonstrou diferença na expressão de proteínas entre as plantas de milho transgênicas (NK603) e sua isolinha convencional mais próxima (31 spots). O fato de terem sido detectadas proteínas diferencialmente expressas entre os tratamentos CCONT x TCONT (17 spots) e CSECA x TSECA (14 spots), leva a conclusão de que estas plantas não diferem entre si apenas pela expressão da proteína alvo da transformação genética (CP4 EPSPS) conforme proposto pela empresa proponente desta tecnologia e assim levado em consideração pelas agências regulatórias. Além disso, apesar do nível de variação causada pelo modificação genética não se diferir do nível da variação causada pelo ambiente (em termos de número total de proteínas diferenciais), as plantas transgênicas respondem diferencialmente com relação a sua linha isogênica quando cultivadas no mesmo ambiente, o que apoia a ideia da existência de efeitos pleiotrópicos oriundo da inserção da sequência exógena para o evento NK603. A análise comparativa do proteoma no segundo ensaio ainda revelou que a aplicação de herbicida nas plantas transgênicas em situação de estresse por desidratação resulta no aumento da expressão de algumas proteínas e até no provável silenciamento de um ou mais genes responsável pela transcrição de uma proteína. As análises de quantificação de alguns dos principais fitormônios envolvidos nos mecanismos de defesa a estresse pelas plantas, revelou que a concentração de ABA, MeJA, SA, CA e GA3 foi diferente entre as plantas transformadas e não-transformadas, bem como as interações foram significativas entre os fatores  Estresse e  Ambiente . Verificou-se também que a situação de estresse e o cultivo em diferentes ambientes resultaram na variação no conteúdo de todos os fitormônios analisados. Com relação a análise quantitativa de lignina, a transformação genética também provocou alterações no teor de LTGA, pois assim como encontrado por outros autores em diferentes eventos de transformação, as plantas transformadas (NK603) apresentaram teores de lignina superior aos das plantas não transformadas.Além disso, a análise de lignina nos tratamentos do segundo ensaio revelou que a aplicação de herbicida em plantas transgênicas em situação de déficit hídrico provocou ainda mais o aumento no teor de lignina. O tratamento TSECA RR apresentou em média um aumento de 33% na concentração de LTGA em comparação ao tratamento TSECA. Portanto, os resultados encontrados neste trabalho concordam com resultados de outros estudos sobre a existência de efeitos pleiotrópicos relacionados a expressão proteica, aumento nos teores de fitormônios e lignina em plantas geneticamente modificadas (evento NK603), submetidas a diferentes condições de cultivo.<br> / Abstract : A worldwide important issue still very controversial is related to the risks of commercial release of genetically modified organisms (GMO), particularly the environmental impact that genetically modified (GM) plants can generate. This study aims to investigate possible biochemical changes of a commercial hybrid of GM maize (event NK603) and its counterpart, subjected to drought stress conditions and herbicide application. The first experiment, called experiment without herbicide, was a factorial experiment being the plots arranged in a three randomized block design (Transgenic x Stress x Environment). This experiment was conducted in a greenhouse (cv) and growth chamber (cc) (Environment factor), composed of transgenic hybrid (T) and its conventional isogenic line (C) (Transgenic factor), subject to water control (CONT) or drought stress conditions (SECA) (Stress factor). The second experiment, called Experiment with herbicide application, was an experiment in a randomized block design, with three repetitions. In that case each experimental unit was composed of a group of three pots (one plant per pot) with two treatments: GM maize submitted to drought stress and herbicide application (TSECA RR); GM maize subjected to drought stress without herbicide application (TSECA). The comparative proteomic DIGE showed difference in protein expression between transgenic maize (NK603) and its conventional isoline (31 spots). The fact that differentially expressed proteins detected between CCONT x TCONT treatments (17 spots) and CSECA x TSECA (14 spots), leads to the conclusion that these plants do not differ only by the expression of the target gene transformation (CP4 EPSPS) as proposed by the proponent of the technology. Furthermore, although the level of variation caused by genetic modification does not differ from the level of variation caused by the environment (in terms of total number of differential proteins), transgenic plants respond differentially in respect to their isogenic line when grown in the same environment, which supports the idea of pleiotropic effects from the genetic transformation for the NK603 event. The comparative analysis of the proteome in the second experiment also showed that herbicide application in transgenic plants under drought stress results in increased expression of some proteins and in a probable silencing of one or more genes responsible for the transcription of a protein. Quantification analyzes of some of the major plant hormones involved in defense mechanisms to stress in plants, showed that the concentration of ABA, MeJA, SA, CA and GA3 were different between the GM plants and non-GM, as well as interactions between "Stress" and "Environment" were significants. It was also verified that the stress situation and cultivation in different environments resulted in variation in the content of all plant hormones analyzed. Regarding the quantitative analysis of lignin, the genetic transformation also changed lignin content. Similarly to other studies done in different events of genetic transformation, the GM NK603 plants presented higher lignin content than the non-GM plants. In addition, the lignin analysis in the second experiment revealed that the herbicide application in transgenic plants under drought stress situation causes increase in lignin content. The TSECA RR treatment showed 33% increase in the concentration of LTGA compared to TSECA treatment. Therefore, the findings of this study agree with the results found by other studies about the presence of pleiotropic effects related to protein expression, plant hormones synthesis and lignin content in plants of the event NK603, under different growing conditions.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Recursos Genéticos Vegetais, Florianópolis, 2016. / Made available in DSpace on 2016-09-20T05:05:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 339561.pdf: 2519282 bytes, checksum: 82b63d82508ac6d22bd2ec93f83608fe (MD5) Previous issue date: 2016 / Organismo Geneticamente Modificado (OGM) é definido como um organismo cujo material genético ? DNA/RNA - tenha sido modificado por qualquer técnica de engenharia genética e, portanto, pode apresentar riscos advindos da sua manipulação. Para minimizar estes riscos, órgãos reguladores internacionais exigem que o OGM desenvolvido seja submetido à uma análise de risco para a identificação e prevenção de efeitos adversos que podem levar a mudanças não intencionais pela presença de transgene(s) tanto em aspectos moleculares, quanto aspectos ecológicos e de saúde humana e animal. A principal abordagem em análises de risco envolve o conceito de equivalência substancial, onde as características do organis o odi icado são co paradas co a s a linha parental considerado seg ro para sos de ali entação h ana e ani al , en ol endo est dos de per or ance agron ica, fenot pica e ali entação ani al, ou ainda de composição ica e n tricional. proble a e an lises baseadas na e i al ncia s bstancial não le a e consideração as poss eis danças não intencionais geradas pela própria odi icação gen tica, a qual poderia causar potenciais alterações e prote nas (ou seja, poss eis prod tos t icos e alerg nicos). Portanto, o objetivo deste trabalho foi testar duas novas abordagens moleculares para caracteri ar os potenciais e eitos sin rgicos e antagonistas dos s e n el olec lar. A primeira abordagem visou avaliar comparativamente o perfil de expressão gênica (transcriptoma) de uma variedade de milho GM estaqueada (contendo duas proteínas inseticidas CRY e duas proteínas EPSPS que conferem tolerância ao herbicida glifosato), seus parentais GM simples e a linha isogênica não modificada, todas sob o mesmo background genético. Está combinação de genótipos permite isolar as potenciais alterações no transcriptoma que derivam da combinação dos dois transgenes na variedade estaqueada. A segunda abordagem visou avaliar comparativamente o perfil de expressão de micro RNAs (miRNAs) na mesma combinação de genótipos GMs de milho. miRNAs possuem a capacidade de regular a expressão gênica de diversos genes endógenos e, portanto, desempenham papéis fundamentais em diversos processos biológicos em um organismo. Os resultados das análises demonstraram que, para o perfil transcriptômico, diversos processos biológicos apresentaram diferenças em regulação, principalmente àqueles envolvidos em vias de redox, modificações pós-transducionais e regulação da transcrição gênica. Já para a análise dos perfis de expressão de miRNAs, alguns apresentaram uma regulação diferencial, e estesdemonstraram ser responsáveis pela regulação de fatores de transcrição endógenos, principalmente àqueles envolvidos em desenvolvimento foliar, mecanismos de resistência à estresse, transdução de sinais e processamento e tradução de RNA. Portanto, conclui-se que as abordagens moleculares utilizadas podem ser aplicadas como ferramentas úteis para aumentar a abrangência e confiabilidade em avaliações de riscos de OGMs. Por fim, recomendamos que outras investigações, visando compreender mais detalhadamente a relevância das mudanças encontradas, se a reali adas, al de s gerir e as ag ncias reg lat rias de biosseg rança de s considere e este tipo de estudo em futuras avaliações de risco para a liberação comercial de novos OGMs.<br> / Abstract : Genetically Modified Organism (GMO) is defined as an organism in which the genetic material ? DNA/RNA ? has been modified by any technique of genetic engineering and, therefore, could present risks resulting from its manipulation. In order to minimize these risks, international regulatory bodies demand that the newly developed GMO is submitted to a risk assessment in order to identify and prevent adverse effects of transgene(s) that could lead to unintended changes in the GMOs, both at molecular level and ecological and human and animal health aspects. However, the main approach used in risk assessment involves the concept of substantial equivalence, where the characteristics of the modified organism are compared to its parental line (considered safe for animal and human food and feed uses), involving studies of agronomic, phenotypic and animal feeding performances, as well as chemical and nutritional compositions. The problem is that analyses based on substantial equivalence do not take in consideration the possible non-intended changes generated by the genetic modification itself, which could cause potential alterations in proteins (i.e. possible toxic and allergenic products). Therefore, the goal of this study was to test two new molecular approaches to characterize the potential synergic and antagonistic effects of GMOs at the molecular level. The first approach aimed to comparatively evaluate the gene expression profile (transcriptomics) of a stacked GM maize variety (containing two insecticidal CRY proteins and two EPSPS proteins which confer tolerance to the glyphosate herbicide), its single GM parental and the near-isogenic non-modified line, all of them under the same genetic background. This combination of genotypes allows isolating the potential alterations in the transcriptomics that derive from the combination of the two transgenes in the stacked variety. The second approach aimed to comparatively evaluate the expression profile of micro RNAs (miRNAs) in the same combination of GM maize genotypes. miRNAs have the ability of regulating gene expression of several endogenous genes and, therefore, play major role in a range of biological processes in an organism. The results of the analyses demonstrated that, for the transcriptomic profile, several biological processes showed differences in regulation, particularly those involved in redox pathways, post-translational modifications and regulations of transcription. On the other side, the analysis of the miRNAs expression profiles showed a differential regulation, responsible for targeting endogenous transcription factors, particularly those involved in leafdevelopment, mechanisms of stress resistance, signal transduction and RNA processing and translation. Therefore, it is concluded that the used molecular approaches could be applied as useful tools to increase broadness and confidence in risk assessments of GMOs. At last, we recommend that other investigations, aiming to address in more detail the relevance of such changes, should be conducted, besides suggesting that GMO safety regulatory bodies take into consideration these types of studies and require that it becomes mandatory in the risk assessment for the releasing of new GMOs.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Filosofia e Ciências Humanas, Programa de Pós-Graduação Interdisciplinar em Ciências Humanas, Florianópolis, 2016. / Made available in DSpace on 2016-10-19T13:23:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 342944.pdf: 3214778 bytes, checksum: d3730c48fa1492bec3519a48593243c1 (MD5) Previous issue date: 2016 / Esta tese analisa a trajetória e a emergência de controvérsias em torno do herbicida glifosato, ingrediente ativo do Roundup, produto da Monsanto. Alicerçados nas bases teórico-metodológicas da Teoria Ator-Rede e na metodologia da Cartografia de Controvérsias, partimos do questionamento sobre como e por que o glifosato, considerado por muito tempo o mais seguro/sustentável de todos os herbicidas, passa a ser questionado quanto à sua sustentabilidade e segurança. A partir dessa questão central caracterizamos a trajetória do glifosato descrevendo o processo de construção de sua imagem de sustentabilidade e segurança, por um lado, e a construção dos discursos de risco associados a ele, por outro. Além disso, demonstramos como os discursos sobre o glifosato se transformaram nessa trajetória e como os diferentes atores se posicionam a favor e contra seus riscos e sustentabilidade. Argumentamos que a trajetória do glifosato para ser aceito no mercado não enfrentou grandes desvios até final da década de 1990, quando não havia inimigos declarados do herbicida. As estratégias de tradução mobilizadas pela Monsanto foram bem sucedidas. Sustentamos que, por conta do sucesso de sua tradução, ele foi mobilizado para fazer parte de outro projeto da Monsanto: o dos cultivos geneticamente modificados. No entanto, este segundo momento, de associação aos cultivos GM, coloca o herbicida no meio de uma controvérsia global. Destacamos quatro principais controvérsias associadas ao herbicida: 1) as análises de riscos e as discussões sobre padrões científicos de determinação de segurança; 2) a resistência de ervas daninhas ; 3) os fungos e doenças em plantas; e 4) os riscos à saúde humana. Ao descrever a trajetória do glifosato e as negociações para transformá-lo no herbicida do século colocamos em evidência as complexas relações entre agências governamentais, indústrias privadas e os cientistas. Parte da legitimidade do glifosato decorre do argumento de que a aprovação do glifosato por diversas agências reguladoras internacionais é indicativo incontestável de sua segurança. Questionamos isto a partir de dados levantados sobre os processos de aprovação em diferentes países. Esperamos trazer elementos para contribuir na compreensão interdisciplinar da discussão em torno dos discursos dominantes do uso de agrotóxicos e os conflitos de interesses na sua regulamentação.<br> / Abstract : This thesis analyzes the history and the emergence of controversies surrounding the herbicide glyphosate, the active ingredient in Roundup, a Monsanto s product. Anchored in the theoretical and methodological approach of Actor-Network Theory and Cartography of Controversies, our departed question is how and why the glyphosate, long considered the safest and most sustainable of all herbicides, currently in strong questioning. From this key issue we characterized the trajectory of glyphosate describing the process of construction of its image as representing sustainability and safety, on the one hand, and the construction of risk discourses associated with it, on the other. Furthermore, we demonstrate how the discourses around glyphosate have been changed in this trajectory and how the different actors perceive and take side for and against its risks and sustainability. We argue that the trajectory of glyphosate for acceptance in the market faced no major detours until the end of the 1990s, when there was no "enemy" declared to the herbicide. The translation strategies deployed by Monsanto were successful. We sustain that, because of the success of its translation the glyphosate was mobilized to take part in other Monsanto's project: the one on genetically modified crops (GMOs). However, this second stage, with the association with GM crops, put the herbicide in the middle of the global controversy. We emphasize four major controversies associated with the herbicide: 1) the risk analysis and discussions on scientific safety standards determination; 2) the "weed" resistance; 3) fungi and plant diseases; and 4) risks to human health. By describing the trajectory of glyphosate and the negotiations to make it the "once-in-a-century herbicide" we put in evidence the complex relationships between government agencies, private industries, and scientists. The allegation that the herbicide has the approval of many international regulatory agencies becomes an incontestable indicative of its safety, is questioned in this thesis from data raised over the approval processes in different countries. We hope that theses elements will contribute to understand from an interdisciplinary perspective the discussion around the mainstrain discourse on pesticide uses and the conflict of interest around its regulation.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro Tecnológico. Programa de Pós-Graduação em Engenharia Ambiental. / Made available in DSpace on 2012-10-20T19:10:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 202874.pdf: 1120600 bytes, checksum: 48ef6f8e7726866024c6acab56e0b9fa (MD5) / O homem, ao superar os desafios de produzir alimentos em grandes quantidades, acabou criando um sistema agrícola altamente impactante ao condicionar o emprego de produtos altamente tóxicos à vidae ao determinar a monotonia das paisagens com as monoculturas, provocando profundos efeitos nocivos ao ambiente e à organização social. A partir dos Organismos Geneticamente Modificados, o Brasil tem a oportunidade de produzir alimentos resistentes a insetos, a vírus, ao estresse biótico e abiótico, entre outros. Contudo, na mesma proporção dos benefícios desta tecnologia estão os riscos de impacto ambiental, devido a falta de experiência com esses organismos. Nesse sentido, buscou-se identificar e avaliar a legislação brasileira sobre os Organismos Geneticamente Modificados para verificar se seria capaz de exercer o controle dos impactos ambientais que podem resultar da produção desses Organismos. Para iniciar, foram apresentados o significado da Revolução Verde no Brasil, o conceito legal de Organismo Geneticamente Modificado, sua construção, benefícios e riscos. Levantou-se e analisou-se a legislação brasileira vigente sobre os OGMs, definindo o significado do Estudo de Impacto Ambiental e da suma importância desse estudo para a segurança na utilização desses Organismos. Na análise dos resultados constataram-se não-conformidades legais e, conseqüentemente, ambientais na legislação sobre os OGMs, pois existe a possibilidade de causarem impacto ambiental, uma vez que o Estudo de Impacto Ambiental não é exigido pela lei, logo as variáveis de avaliação para o EIA/RIMA dos OGMs não são respondidas. Além disso, a lei leva ao conflito de competências entre a CTNBio e o IBAMA com relação à competência para a exigência do EIA/RIMA. Enquanto o primeiro emite parecer vinculante para os demais órgãos, o segundo é quem tem o "poder de polícia", pois é o órgão de fiscalização dos recursos naturais renováveis.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:30Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-07-24Bitstream added on 2014-06-13T19:58:00Z : No. of bitstreams: 1 costa_ll_me_jabo.pdf: 384581 bytes, checksum: 9399a91772503c1f48c8f0c1334b8197 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Objetivou-se estudar a dinâmica populacional de Alabama argillacea, (Hübner), o parasitismo natural dos ovos da referida praga por Trichogramma pretiosum Riley e a ocorrência de predadores em cultivares convencionais e transgênica de algodoeiro na região de Ipameri, GO. O delineamento experimental utilizado foi blocos ao acaso, com cinco tratamentos constituídos pelas cultivares convencionais DeltaOPAL, FMX 966, FMX 993; FMX 910 e a transgênica NuOPAL, com quatro repetições. As avaliações foram realizadas semanalmente após a emergência das plantas, examinando-se 5 plantas inteiras ao acaso, por parcela. Em relação à preferência de oviposição e ao parasitismo dos ovos de A. argillacea por T. pretiosum, verifica-se que não ocorreram diferenças siginificativas entre as cultivares. As lagartas do curuquerê ocorreram a partir dos 34 dias após a emergência das plantas (DAE), mas a densidade populacional nas cultivares convencionais foi mais intensa dos 89 aos 114 DAE, enquanto na cultivar transgênica observou-se apenas lagartas pequenas, em baixa densidade. Dos artrópodes predadores observados nas cultivares avaliadas, os coccinelídeos e aranhas foram os mais abundantes. A população de coccinelídeos foi maior no início do desenvolvimento do algodoeiro, com pico populacional sincronizado com o de Aphis gossypii Glover. Os pentatomídeos e forficulídeos predominaram dos 99 aos 128 DAE, enquanto as aranhas ocorreram em todo ciclo da cultura. Verificou-se também que não houve interação negativa entre os artrópodes predadores e não foi constatado efeito negativo da cultivar transgênica sobre os predadores observados. / The objective was to study the population dynamics of Alabama argillacea (Hueb.), natural egg parasitism of the mentioned pest by Trichogramma pretiosum Riley and the occurrence of predators in conventional and transgenic varieties of cotton in the region of Ipameri, GO. The experimental design was randomized blocks with five treatments consisting of the conventional cultivars DeltaOPAL, FMX 966, FMX 993, FMX 910 and transgenic NuOPAL, with four replications. Evaluations were performed weekly after emergence of plants, observed 5 entire plants at random per plot. Regarding the preference of oviposition and egg parasitism of A. argillacea by T. pretiosum it appears that there weren’t significant differences among cultivars. The larvae of cotton leafworm occurred from 34 days after plant emergence (DAE), but the population density of larvae in the conventional cultivars, was more intense from 89 to 114 DAE, while in transgenic cultivar was observed only small larvae, in low population density. Of the arthropods sampled in the cotton crop, the coccinellids and spiders were most abundant in the cultivars evaluated. The population of coccinellids was higher early in the development of cotton, with synchronized with the peak population of aphids, Aphis gossypii Glover. The predominant pentatomid and forficulid of 99 to 128 DAE, while the spiders occurred throughout the culture cycle. It was not found negative interactions between predatory arthropod and wasn’t observed negative effect of the transgenic cultivar on predator observed.