Este trabalho objetivou avaliar como a expressão de WNK4 (With No Lysine Kinase 4) é modulada por NFAT através da modulação por AngII (Angiotensina II) e Ciclosporina A (CsA). WNK4 é uma cinase que tem papel fundamental na regulação do transporte iônico ao longo do néfron distal, pois fosforila outras cinases (SPAK Proline Alanine-Rich Kinase e OSR1 Oxidative Stress Responsive 1) que fosforilam, e assim ativam, o co-transportador sódio-cloreto sensível aos tiazídicos (NCC), o que acarreta no aumento da reabsorção de sódio, cloreto e água, transporte esse sabidamente regulado pelo hormônio Angiotensina II. O estudo genético que revelou que mutações no gene de WNK geravam um quadro de hipertensão, hipercalemia e hipercalcemia, denominado de pseudohipoaldosteronismo tipo II (PHAII) ou Sídrome de Gordon, foi crucial para a descoberta da importância das WNKs. Este quadro é revertido quando se utiliza diuréticos tiazídicos, mostrando a relação com o NCC. Interessantemente, um quadro similar ocorre quando pacientes transplantados recebem tratamento com CsA. Estudos comprovam que AngII interfere agudamente no conteúdo da proteína de WNK4, por ativação da PKC e fosforilação da Kelchl3 (Kelh-like 3), culminando com inibição do complexo Ubiquitina-Ligase-E3, importante no processo de degradação da WNK4. Ainda não se sabe qual o papel do NFAT sobre a regulação de WNK4 e como AngII e CsA modulação a transcrição gênica de WNK4. Através dos métodos de westernblotting verificamos que CsA aumenta o conteúdo de WNK4. Por RT-PCR observamos também que AngII e CsA são capazes de aumentar significativamente o mRNA-WNK4 após 24h de incubação. Por ensaio da atividade da luciferase utilizando um vetor que apresenta o gene da luciferase sob o controle de promotor contendo elementos para ligação com NFAT, observamos que AngII parece aumentar atividade de NFAT. Observamos que CsA inibe significativamente a atividade da calcineurina através de ensaio enzimático e AngII não teve efeito significativo. Além disso, amplificamos o promotor do gene de WNK4 por PCR do DNA genômico e seguimos com a clonagem deste fragmento no vetor pGL4.10 (que apresenta o gene de luciferase como gene repórter). Neste constructo, vimos que tanto AngII como CsA são capazes de estimular o promotor do gene de WNK4. Após mutações pontuais para elementos NFAT no promotor de WNK4, observamos que o NFAT pode se ligar em diferentes elementos e essa diversidade gera efeitos estimulatórios e inibitórios na síntese proteica de WNK4, pois os elementos apresentam comportamentos diferentes na regulação da transcrição do gene repórter regulado pelo promotor do gene de WNK4. Assim, concluímos que AngII é capaz de estimular a síntese proteica de WNK4 por via dependente de NFAT. / This work aimed to understand how WNK4 expression is modulated by NFAT through AngII and CsA. Wnk4 is a kinase which plays a significant role in ionic transport regulation in distal nephron by inducing phosphorylation of other kinases such SPAK and OSR1, which ultimately lead to NCC phosphorylation. WNK4 activation increases sodium, water and chloride reabsorption in this segment and it´s already know that AngII can modulate this pathway. Genetic mapping studies showed that mutations in WNK gene lead to a hypertension, hyperkalemia and hypercalcemia condition, called Pseudohypoaldosteronism type II (PAH II) or Gordons Syndrome. This finding was crucial for WNKs discovery. Interestingly, this disease is controlled with thiazide diuretics treatment, showing that NCC participates in its pathogenesis. Curiously, a similar condition occurs when transplant recipient are treated with cyclosporine A. AngII changes the WNK4 protein content, thought PKC activation and KLHL3 phosphorylation, leading to an inhibition of ubiquitin-ligase E3 complex, which is important to WNK4 degradation. It is still unclear how NFAT may modulate WNK4 gene expression. We show, by western blotting technique, that CsA increased WNK4 expression, but AngII had not significant effect. After 24h, AngII and CsA increased mRNA-WNK4 by RT-PCR. Using luciferase assay, we observed that AngII increases NFAT activity and CsA decreases NFAT activity, both significantly. AngII did not show effect on calcineurin activity but CsA was able to decrease it, after incubation during 4h. WNK4 gene promoter was amplified by PCR using genomic DNA as a template, and the sequence obtained was cloned in a recombinant vector which has a luciferase gene reporter. Using this recombinant vector cloned with WNK4 gene promoter, we observed that both AngII and CsA increase WNK4 expression. We made a mapping of genome sites for NFAT binding at WNK4 promoter and we identified four elements for NFAT binding. Point mutations in these sites were engineered in order to evaluate the NFAT action in WNK4 promoter activity. We could see that NFAT had an ambiguous behavior and this effect is dependent on which element NFAT is bounded. In summary, we conclude that AngII may increase WNK4 expression through activation of NFAT.

O desenvolvimento de sistemas de expressão através da modificação de fortes promotores conhecidos vem sendo amplamente utilizado para a produção de proteínas com potencial utilização biotecnológica em diversos hospedeiros como S. cerevisiae. O objetivo do trabalho foi construir um promotor quimérico através de modificações do promotor cbh1 de T. reesei e inserção de elementos de resposta a metais provenientes do promotor ZRT1 de S. cerevisiae. O promotor desenhado foi utilizado na construção de um sistema de expressão, que foi inserido na levedura e teve sua atividade analisada pelo teste de ONPG. Foi possível observar que, conforme a concentração de zinco aumenta, a atividade do promotor diminui. O promotor teve maior atividade no meio sem zinco e menor no meio com 1000 μM de zinco. Esses resultados confirmam que o sistema funciona de forma eficiente em S. cerevisiae. Também foi possível observar que os mutantes crescidos em meio com limitação de zinco e, consequentemente com maior atividade do promotor, tiveram sua taxa de crescimento alterada. O que é esperado devido ao fenômeno conhecido como estresse metabólico, comum durante a produção de proteínas recombinantes em leveduras, na qual a cultura apresenta uma diminuição significativa do crescimento. / The development the expression systems by modifying strong promoters has been widely used for the production of proteins with potential biotechnological use in various hosts such as S. cerevisiae. This study aimed to construct an expression system constituted of the chimeric promoter built with cbh1 promoter modified by inserting metal responsive elements from the promoter of ZRT1 gene of S. cerevisiae. The S. cerevisiae was transformed and the system was induced with different concentrations of zinc and was tested using ONPG as substrate. It was observed that under high zinc concentrations promoter activity is low. At low zinc concentrations the opposite effect is observed, and the promoter reaches its highest activities. These results confirm that the system functions efficiently in S. cerevisiae. It was also observed that the mutant grown in environment with zinc limitation, hence with higher activity of the promoter, showed reduced growth rate. Indeed, this is expected due to the phenomenon known as metabolic burden, characterized by a joint stress during the production of recombinant proteins in yeast, under conditions which the culture has a significant growth reduction.

O objetivo desse experimento foi verificar diferentes planos nutricionais através da utilização de diferentes tipos de levedura na alimentação de frangos de corte no período de 1 a 42 dias. Foram utilizadas leveduras autolizada, hidrolizada e levedura íntegra e sua influência sobre parâmetros de desempenho (ganho de peso, consumo de ração e conversão alimentar) e características de carcaça (rendimento de carcaça, rendimento de peito e rendimento de pernas). Foram utilizados 1.080 pintinhos de corte, machos de um dia de idade, da linhagem Cobb, distribuídos em delineamento experimental inteiramente casualizado, em esquema fatorial 3 x 3: 3 formas de suplementação de levedura no período de 1 a 14 dias (sem levedura, levedura autolisada e levedura hidrolisada) e 3 formas de suplementação no período de 15 a 42 dias (sem suplementação, levedura autolisada e levedura íntegra) mais um tratamento controle positivo, com a adição de um antibiótico promotor de crescimento (APC), totalizando 10 tratamentos, 9 repetições e 12 aves por unidade experimental. As dietas utilizadas foram formuladas a base de milho e farelo de soja, sendo utilizado como APC a bacitracina de zinco na inclusão de 0,5 kg/ton em todas as dietas. No período de 1 a 14 dias foi utilizado o nível de inclusão de 10kg/ton das leveduras autolisada e hidrolisada e no período de 15 a 42 dias, 5kg/ton das leveduras autolisada e íntegra. As análises estatísticas dos dados foram realizadas pelo método da análise de variância com o auxílio do procedimento GLM do SAS (2002) e em caso de significância estatística, as médias foram comparadas pelo teste de Tukey, no nível de 5% de probabilidade. No período de 1 a 14 dias a levedura hidrolisada apresentou melhor viabilidade de uso na dieta. Para a utilização de um programa contínuo, a combinação do uso da levedura hidrolisada no período de 1 a 14 dias e de levedura autolizada no período de 15 a 42 dias, apresenta-se como melhor resposta pelas aves. / The objective of this experiment was to evaluate different nutritional plans using various types of yeasts in broiler chicken feed during a 42-day period. We used autolyzed, hydrolyzed, and whole yeasts and evaluated their influence on performance parameters (weight gain, feed intake, and food conversion) and carcass features (whole chicken yield, breast yield, and leg yield). A total of 1080 1-day-old male Cobb lineage chicks were used and distributed across a completely randomized 3 x 3 factorial experimental design. The treatments were comprised of 3 yeast supplement types during days 1 to 14 (i.e., without yeast, autolyzed yeast, and hydrolyzed yeast), 3 supplement types during days 15 to 42 (as above), and growth-promoting antibiotic (GPA) as positive control for a total of 10 treatments, 9 replications, and 12 birds per experimental unit. The diets were formulated based on corn and soybean meal, and 0.5 Kg/ton of zinc bacitracin was included as the GPA in the control diets. We used 10 Kg/ton of autolyzed and hydrolyzed yeast in days 1 to 14, and 5 Kg/ton of autolyzed and whole yeast during days 15 to 42. Statistical data analyses were conducted using an analysis of variance and the SAS GLM procedure (2002), and statistically significant means were compared using Tukey´s test at the 5% probability level. In days 1 - 14, the hydrolyzed yeast presented the best viability of use in the chicken diet. As an ongoing program, the birds responded best to the combination of hydrolyzed yeast in days 1 to 14 and autolyzed yeast in days 15 to 42.

Duas linhagens filogenéticas principais (LI e L2) foram definidas em Trypanosoma cruzi, com base em sequências de genes de rDNA e mini-exon e análise por RAPD (Souto et al. 1996). Neste trabalho investigamos a estrutura e atividade dos promotores do cistron ribossômico das duas linhagens de T. cruzi. O promotor da cepa Dm28 (L2) foi clonado e sua seqüência foi comparada com seqüências publicadas da região homóloga de CL (L1) e La Cruz (L2). A identidade entre os dois promotores de L2 foi de 98%, e entre estes e o de L1 foi de 82%. O ponto de início de transcrição foi mapeado, apresentando a mesma localização nas duas linhagens. A atividade dos promotores de L1 e L2 foi determinada em construções plasmidiais contendo o gene reporter da cloranfenicol acetil transferase (CAT). Experimentos de expressão transitória mostraram que o promotor de L1 foi funcional apenas em isolados de L1, enquanto que o promotor de L2 foi funcional em ambas as linhagens. A expressão do promotor de L2 em isolados de L1 foi maior do que a do promotor homólogo. Analisamos ainda a atividade dos dois promotores em um grupo de isolados que apresentam dois tipos de cistrons ribossômicos (grupo 1/2). Neste grupo de cepas observamos que ambos os promotores presentes nas construções são funcionais, embora o promotor de L2 induza maior expressão de CAT. Por outro lado, demonstramos que nestes isolados apenas o cistron ribossômico de tipo 2 é expresso in vivo. Neste trabalho analisamos ainda a eficiência de entrada das construções plasmidiais nas cepas de T. cruzi; caracterizamos a atividade de regiões do promotor de L2 e a eficiência do processo de \"trans-splicing\" para gerar mRNA de CAT contendo a seqüência de mini-exon na extremidade 5\'. / Two major phylogenetic lineages (L1 and L2) have been defined in Trypanosoma cruzi based on rDNA and mini-exon sequences and RAPD analysis (Souto et al., 1996). In the present work we have investigated the structure and activity of ribosomal RNA promoters from the two T. cruzi lineages. The promoter region of Dm28 strain (L2) was cloned and its sequence was compared with the homologous regions from the CL (L1) and La Cruz (L2) strains, whose sequences were previously published. The identity found between promoters of the two L2 strains was 98%, while the identity between L2 and L1 promoters was 82%. The transcription start point mapped in the two Lineages showed the same localization. The activity of L1 and L2 promoters was investigated through the use of plasmid constructs bearing bacterial chloramphenicol acetyl transferase (CAT) as reporter gene. Experiments of transient expression showed that the L1 promoter drove high CAT activity in L1 isolates, but essentially no activity in L2 strains. On the other hand, L2 promoter was functional in both Lineages. The expression driven by L2 promoter in L1 isolates was higher than that driven by the homologous promoter. We have also analysed the activity of both L1 and L2 promoters in a particular group of T. cruzi isolates (group 1/2) which contains two types of rRNA cistrons. It was observed that both promoters were functional in this group of strains, although L2 promoter drove higher CAT activity. This is an interesting result since we have shown that in group 1/2 isolates only the type 2 rRNA cistron is expressed in vivo. In the present study, we have also analysed the transfection efficiency of the plasmid constructs in T. cruzi strains; the activity of segments of the L2 promoter; and the efficiency of the \"trans-splicing\" process involved in the generation of mature CAT mRNA containing the mini-exon sequence at the 5\' end.

Objetivou-se avaliar a influência da monensina sódica sobre o acúmulo hepático de cobre em ovinos. Haja vista, que ionóforos podem alterar a absorção, disponibilidade e distribuição tecidual de minerais em muitos tecidos do organismo. Foram utilizados 24 ovinos mestiços das raças Santa Inês x Dorper com média de três meses de idade e peso medio de 30 kg ao início do experimento, que receberam dieta basal calculada em 2,75% do peso corpóreo, sendo 50% de concentrado comercial (7,13 ppm de Cu) e 50% de feno de capim coast-cross (3,72 ppm de Cu) e 10 gramas de sal mineral (5,9 ppm de Cu). Os cordeiros foram distribuídos em quatro grupos distintos, sendo: Controle apenas dieta basal; Monensina (Mon) - dieta basal e 30 ppm de monensina sódica; Cobre (Cu) - dieta basal acrescida de 10 mg/kg P.V./dia de cobre, na forma de sulfato de cobre pentahidratado; e grupo Monensina+Cobre (MonCu) - dieta basal acrescida de 10 mg/kg P.V./dia de cobre e 30 ppm de monensina sódica. O período experimental teve duração de 14 semanas. Foram coletadas amostras de figado e bile no início por biópsia, e ao final do experimento por necropsia, para determinação de minerais, assim como amostras semanais de sangue para avaliação bioquímica, hematológica e mineral. Foi realizada análise estatística por meio de fatorial 2x2 considerando como fatores a inclusão ou não de cobre e monensina na dieta. Somente um animal apresentou quadro clínico de intoxicação cúprica acumulativa. As concentrações de cobre no fígado no início do experimento variaram entre 243,8 e 345,4 ppm não havendo diferença entre os grupos experimentais. As concentrações médias e desvios-padrão em ppm do cobre hepático ao final do experimento foram 3.363 ± 576 para o grupo MonCu; 2560 ± 524 para o grupo Cu; 562 ± 168 para o grupo Mon e 253 ± 131 para o grupo Controle. Ao final do estudo a concentração de cobre hepático foi influenciada pela suplementação com cobre (P = 0,0001) e monensina (P = 0,0003). Os grupos suplementados com cobre tiveram redução dos teores de ferro hepático (P = 0,0287) e aumento das concentrações de cobre na bile. A avaliação bioquimica demonstrou elevação da atividade sérica da GGT e AST (P < 0,05) nos grupos Cu e MonCu a partir da décima primeira semana do experimento em relação aos grupos Controle e Mon. O aumento da atividade destas enzimas foram influenciadas pela suplementação de cobre (P = 0,0340), enquanto os grupos suplementados com monensina apresentaram menores valores de creatinina quinase. Os resultados obtidos permitem concluir que a monensina interfere positivamente com o acúmulo hepático de cobre sendo que a sumplentação deste aditivo pode predispor a quadros de intoxicações cúprica em ovinos. / The aim of this study was to verify if monensin can change the accumulation of cooper in the liver of sheep, in view of ionophores can alter the absorption, availability, tiissue distribution of many minerals in the body. Twenty four crossbred Dorper X Santa Inês lambs wiht mean age of 3 months and wheitgh 30 kg at the begining of trial recived a basal diete calculated by 2,75% of body wheigth of 50% concentrade (7,13 ppm of Cu) and 50% cost-cross hay (3,72 ppm of Cu) and 10 g of mineral salt (5,9 ppm of Cu). Lambs were randomly distributed in four groups: Control: basal diet, Mon Group reciving basal diet plus 30 mg of monensin; Cu group: basal diet plus 10 mg Cu B.W of CuSO4.5H2O solution; Group CuMon: basal diet plus 30 mg of monensin and 10 mg of Cu B.W. The exeperimental period lasted for fourteen weeks. Liver samples were obtined by liver biopsy initially and at the end by necropsy when lambs were slaughterd. Blood samples were obtained weekly for determination of biochemical, hematological and mineral. Statistical analysis using a 2x2 factorial was conducted considering the factors copper and monensin in the diet and the interaction between them to evaluate the hepatic copper at the beginning and at the end of the study. Only one of animal of group MonCu exhibit clinical sings of copper toxicosis. Copper concentrations in the liver at the beginning of the experiment ranged between 243,8 and 345,4 ppm with no difference between experimental groups. Mean concentrations and standard deviations in ppm of hepatic copper at the end of the experiment were 3,363 ± 576 for MonCu group; 2560 ± 524 for Cu group; 562 ± 168 for the Mon group and 2538 ± 131 for the control group. At the end of the study liver concentrations and total hepatic copper accumulation were influenced both by the amount of dietary copper (P = 0.0001) and of monensin (P = 0.0003). The groups supplemented with copper had reduced levels of hepatic iron (P = 0.0287) and increased concentrations of copper in the bile. The biochemical evaluation demonstrated elevated serum AST and GGT activity (P <0.05) with Cu and MonCu from the eleventh week of the experiment compared to the control groups and Mon. The increased activity of these enzymes were influenced by copper supplementation (P = 0.0340), while group monensin had lower values of creatinine kinase. The results indicate that monensin interferes positively with hepatic copper accumulation and supplementation of this additive can predispose cupric poisoning in sheep.

Higher-order regulatory interactions between enhancer elements and target gene promoters have been implicated in the coordination and regulation of transcription in a spatio-temporal manner. Within development, the graded activity of enhancers controls transcriptional programs necessary to establish cell fates and tissue patterning. How enhancer promoter interactions form and dynamically change throughout development remains largely unknown. The aim of this thesis is to further characterise BMP enhancers during development. Using ChIP data, an enrichment of architectural binding proteins (ABPs) with enhancers regulated by the BMP pathway was identified. Analysis of chromatin signatures revealed a correlation with the active histone marks, H3K27ac and H3K36me3, over BMP enhancers enriched for the ABP BEAF32. BEAF32 mutants show disrupted expression of BMP target genes and altered tissue fates defined by the BMP pathway. Consequently, the role of BEAF32 genome-wide was considered, revealing interactions with factors associated with enhancers and promoters, in addition to a correlation with RNA Polymerase II (RNAPII) pausing at promoter regions. This suggests a possible role for BEAF32 in bridging enhancer promoter interactions and releasing paused RNAPII. Based on the prevalence of BEAF32 at some enhancer sites and interaction with CBP, eRNAs were identified within the Drosophila embryo, utilising available GRO-seq data and GroHMM. eRNA expression correlates to accessible enhancer states regardless of chromatin composition, with transcribed enhancers revealing interactions with active promoters, supporting correlations to transcriptional activation. Chromatin architecture of BMP targets were lastly considered using Capture-C against BMP regulated promoters, revealing multiple regulatory interactions including contacts with enhancers regulated along the Dorso-ventral (DV) axis and additional BMP promoters, with dynamic interactions between enhancers and promoters. Overall the presented data suggest that BMP promoters are dynamically regulated by distal enhancers, with a plausible role for BEAF32 in mediating enhancer promoter interactions, to co-ordinate transcription programs used to pattern dorsal tissues in the Drosophila embryo.

Submitted by Luanna Matias (lua_matias@yahoo.com.br) on 2015-03-03T14:36:30Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Ana Caroline de Souza Barnabé - 2012.pdf: 955092 bytes, checksum: 1c7e4c5347d5c7994c39252d1f1f2fef (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-03-04T12:04:33Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Ana Caroline de Souza Barnabé - 2012.pdf: 955092 bytes, checksum: 1c7e4c5347d5c7994c39252d1f1f2fef (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-04T12:04:33Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Ana Caroline de Souza Barnabé - 2012.pdf: 955092 bytes, checksum: 1c7e4c5347d5c7994c39252d1f1f2fef (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2012-02-24 / In this study, 300 1 day-old male Cobb chicks were used to evaluate, with the objective of evaluating the effects of phytogenic additives on performance, gut integrity and immune system of broilers inoculated with Salmonella enterica serovar Enteritidis (SE). The birds were divided into five treatments with six repetitions each. Treatment (Ttm) 1 - group inoculated orally with 0.1 mL of sterile buffered saline 0.85% (placebo), Ttm 2 - phytogenic received additives in the feed at a dosage of 0.10 kg/ton feed of the initial age until 35 days (Contr. FA); Ttm 3 - group inoculated orally with 0.5 mL of buffered saline 0.85%, containing approximately 5.0X105 CFU/0.5mL Salmonella enterica serovars Enteritidis (Contr. positive SE); Ttm 4 - group inoculated orally with 0,5 mL of buffered saline 0.85%, containing approximately 5.0X105 CFU/0.5mL of SE and received as antimicrobial growth promoter (AGP) bacitracin methylene disalicylate at a dosage of 55 ppm in the feed until 35 days of age (SE + AGP); Ttm 5 - group inoculated orally with 0.5 mL of buffered saline 0.85%, containing approximately 5.0X105 CFU/0.5 mL SE received phytogenic additives in the feed at a dosage of 0.10 kg/ton of feed of 1 to 35 days old (SE + FA). Performance was evaluated and six birds for treatment were weighed, sacrificed and the pH of the gastrointestinal tract was measured. Fragments were collected duodenum and jejunum to histomorphometric analysis, morphometric lymphocyte count. There was significant difference in the period 1-35 of the experiment the average weight and weight gain of groups without microbial challenge, and feed conversion in the group feed with phytogenic. We observed greater higher villus height to 14 days in the duodenum and greater villus:crypt to the group that received phytogenic The pH was influenced by the AGP in the colon and caecum. There was no significant effect of treatment on biometry of organs and Salmonella groups. There was lymphoid depletion in spleen, bursa and caecal tonsils was variable, with a predominance of mild and moderate depletion. It is concluded that the additives phytogenic control the effects of SE in broilers as expressed in the performance, especially in the feed conversion, and histomorphometric of the intestine, although it has not prevented the migration of the SE for the lymphoid organs, as well as not stimulate the proliferation of lymphoid cells in broilers. / No presente estudo, foram utilizados 300 pintos com um dia de idade, machos, linhagem Cobb, com o objetivo de avaliar os efeitos dos aditivos fitogênicos sobre desempenho, a integridade intestinal e o sistema imunológico de frangos de corte inoculados experimentalmente com Salmonella enterica sorovar Enteritidis (SE). As aves foram divididas em cinco tratamentos com seis repetições cada. Tratamento (Ttm) 1 - grupo inoculado por via oral, com 0,1 mL de solução salina tamponada e esterilizada a 0,85% (Placebo); Ttm 2 - recebeu os aditivos fitogênicos na ração na dosagem de 0,10 kg/ tonelada de ração da fase inicial aos 35 dias de idade (Contr. AF); Ttm 3 - grupo inoculado via oral, com 0,5 mL de solução salina tamponada a 0,85%, contendo aproximadamente 5,0 X 105 UFC/0,5 mL de Salmonella enterica sorovar Enteritidis (Contr. positivo SE); Ttm - 4 - grupo inoculado por via oral, com 0,5 mL de solução salina tamponada a 0,85%, contendo aproximadamente 5,0 X 105 UFC/0,5 mL de SE e que recebeu como antimicrobiano promotor de crescimento (APC) a bacitracina metil dissilicato na dosagem de 55 ppm na ração até os 35 dias de idade (SE + APC); Ttm 5 - grupo inoculado por via oral, com 0,5 mL de solução salina tamponada a 0,85%, contendo aproximadamente 5,0 X 105 UFC/0,5 mL de SE que recebeu os aditivos fitogênicos na ração na dosagem de 0,10 kg/ tonelada de ração do 1º aos 35 dias de idade (SE + AF). Foram realizadas análises de desempenho e seis aves por tratamento foram pesadas, sacrificadas e o pH do trato gastrintestinal foi aferido . Coletou-se fragmentos de duodeno e jejuno para análises histomorfométricas, morfometrias e contagem de linfócitos. Observou-se diferença significativa, durante o período de 1-35 final do experimento no peso médio e no ganho de peso dos grupos sem desafio microbiano, além de melhor conversão alimentar no grupo alimentado com aditivos fitogênicos. Observou-se maior altura dos vilos aos 14 dias no duodeno e maior relação vilo:cripta para o grupo que recebeu fitogênicos O pH foi influenciado pelo APC no cólon e ceco. Não houve efeito significativo dos tratamentos sobre a biometria dos órgãos e Salmonella nos grupos. Observou-se a depleção linfóide nos baços, bursas e tonsilas cecais foi variável, com predominância de depleção discreta e moderada. Conclui-se que os aditivos fitogênicos controlam os efeitos da SE em frangos de corte como expresso nos dados de desempenho, especialmente na conversão alimentar, e dados histomorfométricos do intestino, embora não tenha impedido a migração da SE para os órgãos linfóides, bem como não estimulam a proliferação de células linfóide nos frangos de corte.

Submitted by Wendell Amoedo (wendell.amoedo@hotmail.com) on 2018-11-26T14:35:47Z No. of bitstreams: 1 dissertação.kerollen.runa.pinto2017.pdf: 1354749 bytes, checksum: 47321c0e5d660481ffc33d9d3204b2f0 (MD5) / Submitted by Wendell Amoedo (wendell.amoedo@hotmail.com) on 2018-11-28T13:01:00Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) dissertação.kerollen.runa.pinto2017.pdf: 1354749 bytes, checksum: 47321c0e5d660481ffc33d9d3204b2f0 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2018-11-28T13:20:12Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) dissertação.kerollen.runa.pinto2017.pdf: 1354749 bytes, checksum: 47321c0e5d660481ffc33d9d3204b2f0 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-11-28T13:20:12Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) dissertação.kerollen.runa.pinto2017.pdf: 1354749 bytes, checksum: 47321c0e5d660481ffc33d9d3204b2f0 (MD5) Previous issue date: 2017-02-27 / FAPEAM - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas / Enterokinase (EC 3.4.21.9) is a heterodimer serine protease, a natural activator of trypsinogen, capable of cleaving specifically the sequence Asp-Asp-Asp-Asp-Lys. Due to the high specificity of the recognition site, it became a great tool of biotechnological interest. It is usually used to remove affinity tags in vitro, of recombinant proteins. In this work, the molecular cloning strategy resulted in the construction of the pDMK06, capable of programming the regulated expression of a heterologous gene ETK-Trx in E. coli. Through the cleavage process with restriction enzymes NdeI and BamHI, it was possible to obtain the coding sequence of the fusion protein between enterokinase and thioredoxin (ETK-Trx) of approximately 1259 bp from pENTK plasmid. Then, this sequence was subcloned at NdeI and BamHI sites of the expression vector pDM02, originating the recombinant plasmid pDMK06. This vector contains the TH2 promoter, which is efficiently regulated by Lac operator/repressor. E. coli JM110 cells transformed with the recombinant plasmid showed smaller growth in a solid medium when the expression of the heterologous protein was induced by IPTG in comparison with the control; however, this effect was not detected in the liquid medium. Furthermore, the E. coli cells morphology was analyzed through optical microscopy containing the recombinant plasmid pDMK06, when it was observed, all through the growth time, modifications on cell morphology, characterized by the formation of filaments in those induced with IPTG, in comparison with the control. For expression analysis of the recombinant protein ETKTrx, polyacrylamide gel electrophoresis SDS-PAGE was performed with the samples that grew with IPTG induction for eight hours. The results showed that the protein ETK-Trx is about 47 kDa with a high level of expression at the insoluble fraction, probably as an inclusion corpuscle. The high levels of expression of ETK-Trx protein occurred in a perfectly regulated way, showing the functionality of the pDM02 plasmid expression/regulation system. / A enteroquinase (EC 3.4.21.9) é uma serino protease heterodimérica, ativadora natural do tripsinogênio, capaz de clivar especificamente a sequência Asp-Asp-Asp- Asp-Lys. Devido à alta especificidade do sítio de reconhecimento tornou-se uma ferramenta de grande interesse biotecnológico. É comumente utilizada para a remoção in vitro de marcas de afinidade, como etiquetas de fusão (tags) de proteínas recombinantes. No presente trabalho, a estratégia de clonagem molecular resultou na construção do plasmídeo pDMK06, que é capaz de programar a expressão heteróloga regulada do gene ETK-Trx em E.coli. Por meio do processo de clivagem com as enzimas de restrição NdeI e BamHI foi possível obter a sequência codificadora da proteína de fusão entre enteroquinase e tiorredoxina (ETK-Trx) de aproximadamente 1259 pb partir do plasmídeo pENTK, a seguir essa sequência foi subclonada nos sítios de NdeI e BamHI do vetor de expressão pDM02, originando o plasmídeo recombinante pDMK06. Esse vetor contém o promotor TH2 que é regulado eficientemente pelo sistema operador/repressor Lac. Células de E.coliJM110 transformadas com o plasmídeo recombinante mostram menor crescimento em meio sólido quando a expressão da proteína heteróloga era induzida por IPTG em relação ao controle, porém esse efeito não foi detectado em meio líquido. Além disto foi analisado por microscopia ótica a morfologia das células de E.colicom o plasmídeo recombinante pDMK06, onde observou-se no decorrer do tempo de crescimento e indução, alterações na morfologia celular caracterizada de filamentação das células induzidas com IPTG quando comparadas com o controle. Para análise da expressão da proteína recombinante ETK-Trx utilizou-se a eletroforese em gel de poliacrilamida SDS-PAGE das amostras referentes a 8 horas de crescimento e indução com IPTG. Os resultados obtidos apresentaram a proteína ETK-Trx com tamanho aproximado de 47kDa com alto nível de expressão na fração insolúvel, provavelmente em forma de corpúsculo de inclusão. A expressão em altos níveis das proteínas ETK-Trx ocorreu de forma perfeitamente regulada mostrando a funcionalidade do sistema de expressão/regulação do plasmídeo pDM02.

O saneamento é uma questão essencial para a qualidade de vida, para condições ambientais salubres, entre outros aspectos. O reconhecimento do saneamento como direito social diante da essencialidade à vida humana e à proteção ambiental ainda não foi contemplado dignamente. A pesquisa tem como objetivo investigar a viabilidade da escola tornar-se Promotora da Saúde implementando práticas sócioeducativas nos ambientes escolar e comunitário visando alcançar melhores condições de saneamento básico com mobilização social. A proposta adota a metodologia da pesquisa-ação com a estratégia da pesquisa social, atendendo os aspectos de interação e de investigação não se limitando a uma forma de ação, mas aumentando o conhecimento do pesquisador e dos atores envolvidos. Para tratar os dados de uma das atividades se utiliza o processo de análise de conteúdo. A pesquisa trata da Promoção da Saúde, da temática escola, do complexo saneamento e recursos hídricos; da mobilização, controle social e aprendizagem social. Definida a bacia hidrográfica do ribeirão da Vargem do Salto em Ibiúna/SP, para desenvolver as atividades previstas na pesquisa onde estão localizadas escolas municipais dos bairros Vargem do Salto, Lageado, Saltinho, Salto e Samano. Há um diálogo estabelecido entre a pesquisa e documentos oficiais legais para fundamentação teórica; e também sustentado pelo pensamento de Paulo Freire, John Dewey, Pedro Roberto Jacobi, Michael Apple, Moacir Gadotti, Leonardo Boff, Henry Giroux, Edgar Morin e Michel Thiollent. Promoção da Saúde definida como o processo de capacitação da comunidade para atuar na melhoria da sua qualidade de vida e saúde, inclui uma maior participação no controle deste processo e a escola pode ser um espaço para se concretizar as ações da Promoção da Saúde, proporcionando a mobilização, participação, o controle social e aprendizagem social. A síntese analítica adota o percurso metodológico de forma cronológica para apresentação dos resultados. Constata-se a função social da escola que adotando os princípios da Escola Promotora da Saúde adquire potencial para gerar processos que fortalecem a convivência, a participação, o diálogo permanente das pessoas e a compreensão consciente da sociedade em que vivem e a possibilidade de efetiva transformação. / Sanitation is essential to quality of life, healthy environmental conditions, among other things. The recognition of sanitation as a social right in light of its essentiality to human life and to environmental protection has not been contemplated in a dignified manner. This research aims to investigate the viability for the school to become a Promoter of Health by implementing socio-educational practices in the school and community environments in order to achieve better conditions of sanitation with social mobilization. The proposal adopts the methodology of research-action with the strategyof social research, taking into account the aspects of interaction and research, not limited to one form of action, but increasing the knowledge of the researcher and all involved. To process the data of one of the activities the content analysis process was used. The research deals with the Promotion of Health, the topic of the school, the sanitation and water resources complex; the mobilization, social control and social learning. The basin of the stream in Vargem do Salto in Ibiúna, SP, was established for the activities set in the survey to be developed, locality where municipal schools of Vargem do Salto, Lageado, Saltinho, Salto and Samanoare located. There is a dialogue between the research and the legal official documents for theoretical foundation; sustained by the points of view from Paulo Freire, John Dewey, Pedro Roberto Jacobi, Michael Apple, MoacirGadotti, Leonardo Boff, Henry Giroux, Edgar Morin and Michel Thiollent. Health promotion, defined as the process of empowerment of the community to work on improving their quality of life and health, includes a greater participation in the control of this process. The school can be a place to achieve the actions of Health Promotion, providing the mobilization, participation, social control and social learning. The analytical overview adopts a methodological path in a chronological way to present the results. It is noted that the schools social function that, adopting the principles of the School as a Health Promoter, gains potential to generate processes that strengthen coexistence, participation, permanent dialogue and the conscious understanding of the community in which they live and the possibility of effective transformation.

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