Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2008. / Submitted by Diogo Trindade Fóis (diogo_fois@hotmail.com) on 2009-09-15T12:17:32Z No. of bitstreams: 1 2008_DeniseSampaioVazdeMelo.pdf: 5966954 bytes, checksum: 2c6d15e00a6c545ff23851c911fa7cc5 (MD5) / Approved for entry into archive by Luanna Maia(luanna@bce.unb.br) on 2009-09-15T12:30:24Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_DeniseSampaioVazdeMelo.pdf: 5966954 bytes, checksum: 2c6d15e00a6c545ff23851c911fa7cc5 (MD5) / Made available in DSpace on 2009-09-15T12:30:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_DeniseSampaioVazdeMelo.pdf: 5966954 bytes, checksum: 2c6d15e00a6c545ff23851c911fa7cc5 (MD5) Previous issue date: 2008-12 / No presente experimento foram utilizados 43 calitriquídeos da espécie Callithrix penicillata, pertencentes ao Centro de Primatologia da Universidade de Brasília. Esses animais ficam separados em 20 viveiros com dois ou três exemplares cada, tendo sido esta a unidade experimental adotada. Exames histopatológicos de dois animais que vieram a óbito no final de 2006, revelaram a presença de estruturas semelhantes às de trematódeo no tecido hepático. Exames de fezes do grupo experimental mostraram que 40% eram positivos para ovos de Platynosomum spp. Os calitriquídeos que foram a óbito durante o período experimental (n=9), foram necropsiados, exemplares de trematódeos foram colhidos da vesícula biliar e posteriormente identificados como P. illiciens (Braun, 1901) Kossack, 1910. Todos os animais do plantel foram submetidos a tratamento com praziquantel na dosagem de 40mg/kg. Exames de fezes realizados pós tratamento continuaram detectando ovos de Platynosomum spp. Com base nos resultados obtidos confirma-se o diagnóstico de P. illiciens, e sugere-se que outro princípio ativo seja testado, assim como medidas de manejo adequadas, sobretudo visando o controle do hospedeiro intermediário, sejam adotadas. _________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / In this experiment were used 43 marmosets, of the specie Callithrix penicillata, belonging to the Primatology Center of the Universidade de Brasília. These animais are distributed in 20 cages, with two or three specimens each cage. Histopatological exams from two marmoset that died at the end of 2006 revealed the presence of trematode structures in the liver tissue. Faecal examinations of the remaining animals showed that 40% were carriers of Platynosomum spp. eggs. The marmosets that died during the experimental period (n=9) were necropsied and from the biliary bladder were collected some trematode’s specimens that were identified a Platynosomum illiciens (Braun, 1901) Kossack, 1910. All marmosets were treated with praziquantel at 40 mg/kg. The post-treatment faecal exams still revealed the presence of Platynosomum eggs. Based on obtained results its suggested the test of other active principle, and the adoption of management measures that involve manly the control of intermediate host.

Submitted by Pós graduação Farmácia (ppgfar@ufba.br) on 2017-05-30T20:09:49Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_Renata Kelly N R Silva.pdf: 1992158 bytes, checksum: 31b040d0efc44acc04e5946c258375e9 (MD5) / Approved for entry into archive by Patricia Barroso (pbarroso@ufba.br) on 2017-06-01T17:34:25Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação_Renata Kelly N R Silva.pdf: 1992158 bytes, checksum: 31b040d0efc44acc04e5946c258375e9 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-01T17:34:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_Renata Kelly N R Silva.pdf: 1992158 bytes, checksum: 31b040d0efc44acc04e5946c258375e9 (MD5) / CNPq / FAPESB / A infecção por parasitos ocorre com maior frequência na população infantil e pode evoluir com gravidade em pacientes com alterações no sistema imunológico, como por exemplo, aqueles com desnutrição ou câncer. A Giardia duodenalis é o parasito mais frequente em crianças, causando infecções intestinais que variam de assintomáticas à presença de diarreia aguda ou crônica, sendo imprescindível que seu diagnóstico seja realizado corretamente. Entretanto, as técnicas diagnósticas mais sensíveis, também são as mais caras, sendo necessária uma análise mais detalhada do custo-benefício de sua utilização na rotina clínica. Além do diagnóstico de rotina, a caracterização molecular da Giardia contribui para um melhor entendimento da taxonomia, epidemiologia, potencial zoonótico de transmissão e associação entre o quadro clínico e um determinado genótipo (A H). Este estudo teve como objetivo avaliar a etiologia das infecções enteroparasitárias em diversos grupos pediátricos, utilizando diferentes técnicas de diagnóstico, e caracterizar os genótipos de Giardia duodenalis isolados de crianças de creche. Foram coletadas amostras fecais de 824 crianças: 70 de pacientes oncológicos, 110 internadas com desnutrição energéticoprotéica grave, 151 internadas devido à doença diarreica e 493 saudáveis atendidas em creches. As amostras foram submetidas às seguintes técnicas de diagnóstico: a) exame direto; b) Baermann-Moraes; c) cultura de fezes em placas de agar; d) Faust; e) sedimentação por centrifugação; g) coloração Ziehl-Nielsen modificado e h) pesquisa de coproantígenos de Cryptosporidium sp., Giardia duodenalis e Entamoeba histolytica por ELISA. Setenta e uma amostras fecais positivas para Giardia duodenalis oriundas das crianças de creche foram submetidas a genotipagem através da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR), tendo como alvo os genes β-giardina e Gdh, seguida pela Análise do Polimorfismo do Fragmento de Restrição (RFLP). Dentre as 824 crianças, 30,3% estavam infectadas por pelo menos um parasito. As crianças com câncer apresentaram a maior ocorrência de enteroparasitos (47,1%), seguidas pelo grupo de creche (35,4%), crianças com diarreia (16,6%), e por último, crianças com desnutrição (15,5%). A Giardia duodenalis foi o parasito mais frequente (18,4%) e se destacou na população sem diarreia, enquanto o Cryptosporidium e a E. histolytica apresentaram associação significativa com o quadro de diarreia. Comparando as técnicas de diagnóstico para Giardia, utilizando como padrão de referência a positividade em pelo menos uma das técnicas, o ELISA se mostrou mais sensível que a microscopia (97% versus 55%). Dos 71 isolados de G. duodenalis de crianças de creche submetidos à PCR, 51 (77,4%) tiveram os DNAs amplificados. Foram identificados os genótipos AII, BIII, BIV e E, com predomínio do AII, sugerindo que a principal via de transmissão é antroponótica, seja pela ingestão de água ou alimentos contaminados com fezes humanas, ou através do contato pessoa a pessoa, uma vez que esse subtipo tem sido encontrado apenas em humanos. / Parasitic infections occur most frequently in children and can lead to severe disease in patients with alterations in the immune system, such as those with malnutrition or cancer. Giardia duodenalis is the most frequent parasite in children, causing intestinal infections ranging from asymptomatic to the development of acute or chronic diarrhea, being essential the correct diagnosis of the parasite. However, the more sensitive diagnostic techniques are also the most expensive, requiring a detailed analysis of the cost-benefit of their use in clinical routine. In addition to the routine diagnosis, the molecular characterization of Giardia contributes to a better understanding of the taxonomy, epidemiology and zoonotic potential of transmission and clinical forms of infection associated to a specific genotype (A - H). This study aimed to evaluate the etiology of parasitic infections in pediatric groups, using different diagnostic techniques, and characterize the genotypes of Giardia duodenalis isolates from children attending day care centers. There were collected fecal samples from 824 children: 70 oncologic patients, 110 hospitalized with severe protein-energy malnutrition, 151 hospitalized due to diarrheic disease and 493 healthy day care children. The samples were subjected to the following diagnostic techniques: a) direct examination, b) Baermann-Moraes c) stool culture on agar plates d) Faust e) sedimentation by centrifugation; g) modified Ziehl-Nielsen staining h) search of coproantigens of Cryptosporidium sp., Giardia duodenalis and Entamoeba histolytica by ELISA. Seventy-one fecal samples positive for Giardia duodenalis from day care centers children were subjected to genotyping by polymerase chain reaction (PCR) of the target genes β-giardina and Gdh, followed by Analysis of Restriction Fragment Length Polymorphism (RFLP). Among the 824 children, 30.3% were infected with at least one parasite. Children with cancer had the highest frequency of intestinal parasites (47.1%), followed by the day care group (35.4%), children with diarrhea (16.6%), and those with malnutrition (15.5 %). The parasite Giardia duodenalis was the most frequent (18.4%) in stood of the population without diarrhea, while Cryptosporidium and E. histolytica were significantly associated with the diarrheic disease. Comparing the diagnostic techniques for Giardia using as reference standard the positivity in at least one technique, the ELISA was more highly sensitive than microscopy (97% versus 55%). Of the 71 isolates of G. duodenalis from day care children subjected to PCR, 51 (77.4%) had the DNAs amplified. There were identified genotypes IIA, BIII, BIV and E, with a predominance of the IIA, suggesting that the main route of transmission is anthroponotic, either by ingesting food or water contaminated with human feces, or through the contact person-to-person, since this subtype has been found only in humans.

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2014-01-28T15:28:12Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao Vanderson Firmiano Valente.pdf: 745830 bytes, checksum: 0b1f73870dcce3870b012cc3323bdddf (MD5) / Made available in DSpace on 2014-01-28T15:28:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Vanderson Firmiano Valente.pdf: 745830 bytes, checksum: 0b1f73870dcce3870b012cc3323bdddf (MD5) Previous issue date: 2013 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas René Rachou / A ancilostomíase é causada por parasitas nematoides das espécies Necator americanus e Ancylostoma duodenale. É uma das formas de infecção crônica mais comum em humanos com estimativa de 740 milhões de casos especialmente em áreas rurais pobres dos trópicos e subtrópicos segundo a Organização Mundial de Saúde.As principais manifestações clínicas da doença resultam da perda crônica de sangue intestinal causada pela fixação dos vermes adultos à mucosa e submucosa dos intestinos. Quandoa perda de sangue excede as reservas nutricionais, há deficiência de ferro e desenvolvimento de anemia, relacionada ao baixo rendimento escolar em crianças, apatia, adinamia e queda da produtividade em adultos. O enfoque atual para o tratamento da ancilostomíase eoutras helmintoses transmitidas pelo solo consiste em administrações periódicas de anti-helmínticos da classe dos benzimidazólicos, tanto albendazol quanto mebendazol. Contudo, estudos têm demonstrado que a reinfecção ocorre rapidamente após o tratamento, o que na maioria das vezes resulta em administrações regulares de anti-helmínticos predispondo ao risco de aparecimento de resistência às drogas e manutenção de níveis endêmicos da doença. Diante disso, nosso objetivo nesse trabalho foi avaliar a evolução da intensidade de infecção pelo ancilostomídeo em crianças entre 1 a 10 anos de idade de seis comunidades em dois municípios na região nordeste de Minas Gerais, Brasil, após o tratamento com a droga mais comumente utilizada, o Albendazol, num período de dois anos, além da possibilidade de avaliar a velocidade com que a reinfecção ocorre. Nossos resultados mostraram que a intensidade da infecção pelo ancilostomídeo medida em ovos por grama de fezes foi reduzida pela administração do medicamento, com queda parcial na prevalência que se manteve estável durante o seguimento. Houve uma superutilização do albendazol além do esperado pelo protocolo em grande parte devido ao encontro de outros parasitas cujo tratamento também se baseia no uso dessa droga. A velocidade de reinfecção não pôde ser mensurada em virtude de limitações metodológicas do protocolo. Pudemos inferir com nossos resultados, a tendência encontrada na literatura de que isoladamente o tratamento farmacológico em massa interfere na intensidade das infecções, mas não controla os níveis de doença, conforme foi observado nos 24 meses de seguimento. São necessários novos estudos com melhor abordagem metodológica e tempo de seguimento para avaliar com mais precisão o efeito da terapia farmacológica sobre a velocidade em que a reinfecção se faz. / The hookworm infection is caused by parasitic nematode species Ancylostoma duodenaleand Necator americanus. It forms one of the most common chronic infectionin humans with an estimated 740 million cases especially in poor rural areas of the tropics and subtropics according to the World Health Organization the main clinical manifestations of the disease result from chronic intestinal blood loss caused by fixing adult worms from the intestinal mucosa and submucosa. When blood loss exceeds the nutritional reserves, appear iron deficiency and development of anemia, related to poor school performance in children, apathy, adynamia and decreased productivity in adults. The current approach for the treatment of helminthiasis hookworm and other soil-transmitted helminthiasis consists of periodic administration of anthelmintic class of benzimidazole, mebendazole so as albendazole. However, studies have shown that reinfection occursrapidly after treatment, which in most cases results in regular administration of anthelmintic predisposing risk of the emergence of drug resistance and maintenance of the disease endemic levels. Therefore, our goal in this work was to evaluate the intensity of parasite infection in children aged 1-10 years from six communities in the municipalities of Novo Oriente de Minas e Caraí in northeastern of Minas Gerais, Brazil, after treatment with the most commonly used drug, the Albendazole , a period of two years, plus the ability to assess the speed with which reinfection occurs. Our results showed that the intensity of hookworm infection measured in eggs per gram of feces was reduced by administration of the drug, with partial fall in prevalence that remained stable during follow-up. On the other hand, there was an overuse of albendazole, which according to the protocol should be dispensed for the treatment of heavy infections, largely due to the gathering of other parasites which treatment also based on the use of this drug. The rate of reinfection could not be measured due to methodological limitations of the protocol. We conclude our results with the tendency found in theliterature of the pharmacological treatment in mass alone interfere with the intensity of the infection, but not controls the levels of disease, as was observed during the 24 month follow up. Further studies are needed to better methodological approach and follow-up time to more accurately assess the effect of drug therapy on the speed of reinfection.

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:46:48Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006 / O objetivo desta pesquisa é investigar o ensino da Parasitologia na graduação das universidades chilenas a partir de docentes coordenadores da disciplina. Deste modo, procurou-se delinear objetivos, conteúdos, estratégias de ensino e avaliação das propostas curriculares, bem como, conhecer os docentes responsáveis por este ensino. Esta pesquisa tem um caráter descritivo e foi realizada a partir de uma abordagem quantitativa e qualitativa em seis das 13 universidades chilenas que têm turmas formadas no curso de Medicina: três de caráter público e três de caráter privado. Foram aplicados questionários a seis docentes coordenadores da Disciplina de Parasitologia e foram analisados os planos de ensino da disciplina. Os dados foram analisados pela técnica de Análise de Conteúdo. Constatamos que a Parasitologia esta sendo inserida no ciclo básico na maioria dos cursos de medicina a partir do terceiro ano da graduação. Por outro lado, observamos que os cenários de aprendizagem utilizados, em todos os casos analisados correspondem à sala de aula e o laboratório de aulas práticas. Verificamos que existe uma valorização do desenvolvimento cognitivo no processo de aprendizagem com ênfase nas características biológicas e clínicas das parasitoses. Entre as estratégias utilizadas no ensino da Parasitologia, concluímos que a principal ferramenta utilizada é a aula expositiva e a Aprendizagem Baseada em Problemas (ABP). Discutiu-se também alguns traços do perfil dos docentes. Observamos que os docentes responsáveis pela Disciplina de Parasitologia apresentam uma formação heterogênea e a maior parte dos docentes realizou pós-graduação, sendo Doutores e Mestres. Em relação aos atributos considerados mais relevantes para o exercício da docência na área, os docentes coordenadores indicaram que o bom professor, alem de apresentar amplo conhecimento científico e técnico na área, deve ser um bom transmissor de conhecimentos e motivar a auto-aprendizagem do aluno. Acreditamos que este estudo venha mostrar a importância do ensino da Parasitologia no currículo integral da formação do médico. De igual forma dará indícios para melhorar a qualidade e aperfeiçoamento do ensino da Parasitologia. / The purpose of this work is to obtain an insight on Parasitology Teaching carried out at Chilean universities. This is a descriptive research based on academic information provided by teachers which considered the objectives, contents, teaching strategies, curriculum evaluation and staff from three private and three public Chilean universities where Parasitology is part of the Medical School curricula. Questionnaires were applied to all six teaching coordinators and the Parasitology programs were compared. The information obtained was analyzed using a Contents Analyses technique. We have confirmed that Parasitology courses are given at the third year of studies. In most cases, the course is part of the basic cycle and the classroom and laboratories were the learning space. Cognitive development was valuable for the student learning process with emphasis on the biological and clinical characteristics of parasitoses. Expositive classes and problem-based learning were the main teaching strategies. Parasitology teacher’s profiles are also provided. Teachers showed a heterogeneous academic background and most of them have postgraduate studies. The most highly valued attributes for a Parasitology teacher were a wide scientific and technical knowledge of the discipline, the capability to transfer knowledge and to convey motivation for autonomous learning. We think this work will contribute to a better understanding on the teaching-learning process and will also provide insights for improving the quality of the Parasitology teaching process on Medical Schools. / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Submitted by Tatiana Oliveira (tsilva@icict.fiocruz.br) on 2012-06-06T15:04:56Z No. of bitstreams: 1 nilza_n_felizardo_ioc_bp_0024_2010.pdf: 9661682 bytes, checksum: 0ef453a7727a9375eaad508caf8a0e0f (MD5) / Made available in DSpace on 2012-06-06T15:04:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 nilza_n_felizardo_ioc_bp_0024_2010.pdf: 9661682 bytes, checksum: 0ef453a7727a9375eaad508caf8a0e0f (MD5) Previous issue date: 2010 / Fundação Oswaldo Cruz.Instituto Oswaldo Cruz. Rio de janeiro, RJ, Brasil / Com o objetivo de estudar os helmintos parasitos de linguados, foram necropsiados 60 espécimes de Paralichthys isósceles Jordan, 1890 e 25 de P. patagonicus Jordan, 1889 coletados no litoral do Estado do Rio de Janeiro, Brasil, no período de outubro de 2006 a março de 2008. Em P. isósceles foram coletados 1820 espécimes de Hysterothylacium sp. em terceiro e quarto estágios larvares, com prevalência de 100%, intensidade média de infecção de 30,3, abundância média de 32 e amplitude de variação da intensidade de infecção de 1 a 596. Macroscopicamente foram observados nódulos na mucosa do estômago e serosa do intestino. No exame histopatológico desses nódulos foram observadas seções de larvas inseridas dna musculatura abdominal, nas camadas submucosa, muscular e serosa do estômago e do intestino, sempre associadas a granulomas, constituídos por tecidos conjuntivo fibroso, macrófago e linfócitos, que centralizavam além das larvas, material necrótico e túneis revestidos por material acidófilo. As alterações patológicas e ocorrências de Hysterothylacium sp. foram pela primeira vez reportadas nesse hospedeiro. Outras quatro larvas de relevância zoonótica foram identificadas e reportadas considerando as suas prevalências (P). Para as espécies de Raphidascaris sp. (P=36,7%), Terranova sp. (P=5%), Anisakis simplex (P=5%) e de Contracaecum sp. (P=3,3%). Paralichthys isósceles é um novo hospedeiro para as larvas de Anisakis simplex e Hysterothylacium sp. Em P. isósceles e P. patagonicus foram coletadas 169 larvas de trematodeos dogenéticos pertencentes à família Didymozoidae, identificadas como tipos Torticaecum e Neotorticaecum com prevalência de 80% para o primeiro hospedeiro e 40% para o segundo, sendo o primeiro registro na América do Sul, Oceano Atlântico, Brasil. Em P. isósceles foram realizados a identificação taxonômica dos cestóides encontrados, tendo em conta a importância higiênico-sanitária deste pescado nos mercados brasileiros e estrangeiros, onde em 56 (93,3%) dos peixes coletados infectados, encontrou-se pelo menos um exemplar de metacestoides, incluídos em três ordens diferentes: Diphyllobotriidea, Trypanorhyncha e Tetraphyllidae. A ordem Diphyllobotriidea estava representa por plerocercóides de duas espécies: Diphyllobothrium sp. 1 (similar a Diphyllobothrium latum) localizadas no estômago, na mucosa do estômago e no mesentério e Dyphyllobothrium sp. 2 (similar a D. dendriticum) no intestino, fígado, ovário e a cavidade abdominal. As duas espécies apresentam prevalência de 6% e 10% respectivamente. A ordem Trypanorhyncha estava representada por Grillotia carvajalregorum (Carvajal & Rego, 1993) Menoret & Ivanoc, 2009 (P=73%), Nybelinia lingualis (Cuvier, 1817) Dollfus, 1927 (P=57%), Heteronybelinia nipponica (Yamaguti, 1952) (P=35%), Otobothium sp. (P=15%) / In order to study the helminth parasites of pigs were necropsied 60 specimens of Paralichthys isosceles Jordan, 1890 and 25 P. patagonicus Jordan, in 1889 the State collected on the coast of Rio de Janeiro, Brazil, from October 2006 to March 2008. In P. Isosceles 1820 specimens were collected Hysterothylacium sp. third and fourth larval stages, with a prevalence of 100%, mean intensity of infection was 30.3, mean abundance of 32 and range of variation of intensity of infection of 1-596. Macroscopically nodules were observed in the stomach mucosa and serosa of the intestine. The histopathological sections of the nodules were observed in larvae inserted DNA abdominal musculature, in the submucosal layers, muscle and serosa of the stomach and intestine, where associated with granulomas, consisting of fibrous tissues, macrophages and lymphocytes, also centered larvae, material necrotic material and tunnels coated acidophilus. Pathological changes and occurrences of Hysterothylacium sp. were first reported in this host. Four other important zoonotic larvae were identified and reported considering their prevalence (P). The following species of Raphidascaris sp. (P = 36.7%), Terranova sp. (P = 5%), Anisakis simplex (P = 5%) and Contracaecum sp. (P = 3.3%). Paralichthys isosceles is a new host for the larvae of Anisakis simplex and Hysterothylacium sp. In P. isosceles and P. patagonicus were collected 169 larval trematodes belonging to the family dogenéticos Didymozoidae, identified as types and Torticaecum Neotorticaecum with a prevalence of 80% for the first host and 40% for the second, being the first record in South America, Atlantic Ocean, Brazil. In P. isosceles were carried out taxonomic identification of the cestodes found, taking into account the importance of sanitary conditions in fish markets from Brazil and abroad, where in 56 (93.3%) of infected fish collected, met at least one copy of metacestodes, included in three different orders: Diphyllobotriidea, and Trypanorhyncha Tetraphyllidae. The order was represented by Diphyllobotriidea plerocercoids of two kinds: Diphyllobothrium sp. 1 (similar to Diphyllobothrium latum) located in the stomach, the gastric mucosa and the mesenterium and Dyphyllobothrium sp. 2 (similar to D. dendriticum) in the intestine, liver, ovary and abdominal cavity. Both species have a prevalence of 6% and 10% respectively. The order was represented by Trypanorhyncha Grillotia carvajalregorum (Carvajal & Rego, 1993) Menoret & Ivanoc, 2009 (P = 73%), Nybelinia lingualis (Cuvier, 1817) Dollfus, 1927 (P = 57%), Heteronybelinia nipponica (Yamaguti, 1952 ) (P = 35%), Otobothium sp. (P = 15%)

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2013-01-07T15:58:08Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Alessandra Orfanó.pdf: 10376056 bytes, checksum: 69183dcae9646089fc702958e90fc51d (MD5) / Made available in DSpace on 2013-01-07T15:58:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação Alessandra Orfanó.pdf: 10376056 bytes, checksum: 69183dcae9646089fc702958e90fc51d (MD5) / A malária é responsável por cerca de 350 a 500 milhões de casos clínicos anuais, permanecendo como um dos maiores problemas de saúde mundial. Estudos sobre a influência da microbiota intestinal do vetor no desenvolvimento do ciclo de vida dos parasitos vêm sendo desenvolvidos. Em mosquitos, as pesquisas vêm mostrando que infecções por bactérias do intestino podem inibir o desenvolvimento esporogônico dos parasitas da malária. No presente trabalho, o papel da microbiota intestinal do Aedes aegytpi infectado com Plasmodium gallinaceum foi avaliado. Os insetos foram submetidos a cinco diferentes antibióticos (canamicina, carbenicilina, espectinomicina, gentamicina e tetraciclina). Somente canamicina e carbenicilina tiveram efeito sob a infecção com o parasito. Para esses dois antibióticos e o controle, técnicas de cultivo bacteriano de isolamento e sequenciamento do DNA ribossomal 16S foram feitas. Asaia bogorensis, Asaia Krungthepensis, Asaia siamensis, Bacillus licheniformis e Chryseobacterium meningosepticum foram identificadas para o grupo controle. No grupo tratado com carbenicilina foram identificadas Chryseobacterium meningosepticum e uma bactéria da família Microbacteriaceae, e para o grupo com canamicina Microbacterium lacticum. Este trabalho sugere que a interação entre espécies de Asaia e C. meningosepticum são relevantes na resistência/suscetibilidade do A. aegypti ao P. gallinaceum. Para observar o efeito do tratamento com os dois antibióticos que mostraram efeito na infecção na expressão de peptídeos antimicrobianos, os níveis de gambicina e defensina foram medidos utilizando-se a técnica de Real-time PCR. Os níveis de defensina se mostraram super-expressos quando os mosquitos foram submetidos aos tratamentos com canamicina e carbenicilina, enquanto gambicina se mostrou super-expressa nos mosquitos tratados com canamicina e sub-expressa naqueles com carbenicilina. A expressão desses dois AMPs também foi medida quando esses grupos de insetos se alimentaram com sangue e com sangue infectado. Nossos resultados mostraram que a expressão de defensina e gambicina no grupo tratado com carbenicilina alimentado com sangue apresentou um aumento de 24h para 36h, e uma queda no grupo controle alimentado com sangue. Insetos tratados com canamicina infectados aumentaram a expressão de defensina 24h e 36h após a alimentação, diminuídas nos tratados com carbenicilina. É observada uma inibição do mRNA de gambicina no grupo carbenicilina infectado sugerindo assim que a ativação desse peptídeo não ocorre somente pelo parasita e necessita da ação da microbiota. Estes resultados indicam que as bactérias associadas ao intestino do A. aegypti tem um papel importante na infecção e resposta imune ao parasito. / Malaria is responsible for about 350 to 500 million clinical cases annually, remaining as one of the largest health problems worldwide. Studies on the influence of the vector gut microbiota in the life cycle of the parasites are being performed. In mosquitoes, studies have shown that infection with midgut microbiota may inhibit the sporogonic development of malaria parasites. Here, the role of intestinal microbiota of Aedes aegytpi infected with Plasmodium gallinaceum was assessed. The insects were subjected to five different antibiotics (kanamycin, carbenicillin, spectinomycin, gentamicin and tetracycline). Only kanamycin and carbenicillin had effect over the infection process. The response of treated groups and control was analyzed by: bacterial culture techniques of isolation and sequencing of 16S ribosomal DNA. Asaia bogorensis, Asaia krungthepensis, Asaia siamensis, Bacillus licheniformis and Chryseobacterium meningosepticum were identified for the control group. In the carbenicillin treated group Chryseobacterium meningosepticum and Microbacteriaceae family bacterium were identified. In the kanamycin treated group Lacticum microbacterium was found. This work suggests that the interaction between C. meningosepticum and Asaia species is relevant in the resistance/susceptibility balance in the A. aegypti/P. gallinaceum model. To observe the effect of treatment over the expression of antimicrobial peptides, gambicin and defensin levels were measured by Real-time PCR. Levels of defensin proved to be up-regulated when the mosquitoes were subjected to treatment with kanamycin and carbenicillin. Gambicin levels were be up-regulated in mosquitoes treated with kanamycin and down-regulated in those treated with carbenicillin. The expression of these two AMPs was also measured when these groups of insects were fed with blood and infected blood. Our results showed that the expression of defensin and gambicin in carbenicillin treated blood fed group increased between 24 to 36 hours, and decreased in the blood fed control group. Infected insects treated with kanamycin increased the expression of defensin between 24 to 36 hours after feeding, while it decreased in those treated with carbenicillin. An inhibition in the expression of gambicin in the infected group treated with carbenicillin was observed, suggesting that activation of these peptides does not occur only by the parasite, or microbial action, but by both. These results indicate that the microbiota associated with A. aegypti has an important role in infection and immune response to the parasite.

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2013-01-15T17:01:51Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao_Izabela Coimbra Ibraim.pdf: 3600819 bytes, checksum: 7dc73c7a016be4f2bdca2b741e85a75e (MD5) / Made available in DSpace on 2013-01-15T17:01:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao_Izabela Coimbra Ibraim.pdf: 3600819 bytes, checksum: 7dc73c7a016be4f2bdca2b741e85a75e (MD5) Previous issue date: 2012 / O LPG apresenta variações estruturais que são importantes para os diferentes estágios de desenvolvimento do parasito. Nas formas procíclicas, o LPG de L. braziliensis (cepa M2903), não apresenta cadeias laterais enquanto um a dois resíduos de β-glicose podem aparecer nas unidades repetitivas da forma metacíclica. O LPG de L. infantum (cepa BH46), apresenta até três cadeias laterais de glicoses nas unidades repetitivas da forma procíclica e ainda não foi caracterizado nas formas metacíclicas. Esses polimorfismos nas unidades repetitivas do LPG e seu papel na interação com o hospedeiro vertebrado e invertebrado já foram amplamente estudados, sobretudo, para as espécies do Velho Mundo. Entretanto, para a maioria das espécies do Novo Mundo, o papel desses polimorfismos no perfil imunopatológico da doença é ainda desconhecido. Este projeto teve como objetivo avaliar o estudo da interação entre os LPGs de duas espécies epidemiologicamente importantes no Brasil e macrófagos murinos. Estas incluem L. braziliensis e L. infantum, responsáveis pela forma cutânea e visceral, respectivamente. Neste estudo, os macrófagos peritoneais de camundongos BALB/c, C57BL/6 e C57BL/6 knock-out (TLR2 -/- e TLR4 -/-), foram primados com IFN- e estimulados com LPG de ambas as espécies. A produção de citocinas (IL-1β, IL-2; IL-4, IL-6, IL-10, IL-12p40, IFN- e TNF-α) foi determinada por citometria de fluxo e a concentração de nitrito pelo método de Griess. A ativação de ERK e p38 foi avaliada por Western blot. Os macrófagos estimulados com LPG de L. braziliensis, apresentaram uma maior produção de TNF-α, IL-1β, IL-6 e NO em comparação aos estimulados com LPG de L. infantum. Também foi observada uma cinética de ativação diferencial das MAPK entre os LPGs. Leishmania infantum apresentou uma ativação constante até 45 minutos após estimulação, enquanto L. braziliensis apresentou um único pico de ativação após 15 minutos. Estes dados sugerem que variações interespecíficas no LPG de Leishmania podem ter um papel importante nos eventos iniciais do compartimento imune inato do hospedeiro. / The structural variations observed on LPG are important for the different parasite developmental stages. The procyclic form of L. braziliensis LPG (strain M2903), is devoid of side chains, while one to two β-glucose side chains are added in the repeat units of the metacyclic LPG. The L. infantum LPG has with up to 3 glucoses residues in the repeat units in the procyclic parasites, while those structures are not known in the metacyclic stage. Those polymorphisms in the composition and sequence of the sugars branching off the repeat units of the LPG have been assessed in the interaction with vertebrate and invertebrate hosts, especially for the Old World Leishmania species. However, for most of New World species of Leishmania, the role of those polymorphisms in the mmunopathology of the disease is still unknown. This study aimed to evaluate the interaction between the LPGs of two epidemiologically important Brazilian species and murine macrophages. Those include L. braziliensis and L. infantum, causative agents of cutaneous and visceral leishmaniasis, respectivelly. Mice peritoneal macrophages from BALB/c, C57BL/6, and C57BL/6 knock-out (TLR2 -/- e TLR4 -/-) lineages were primed with IFN- and stimulated with LPG from both species. Cytokine production (IL-1β, IL-2; IL-4, IL-6, IL-10, IL-12p40, IFN- and TNF-α) and nitrite concentration were determined by flow cytometry and Griess reaction, respectivelly. Western blot was performed to evaluate the activation of the MAPKs ERK and p38. Macrophages stimulated with L. braziliensis LPG, had a higher TNF-α, IL-1β, IL-6 e NO production than those stimulated with L. infantum’s. A different MAPK activation kinetics between the two species was detected. Leishmania infantum LPG exhibited a gradual activation profile until 45 min after stimulation, whereas L. braziliensis LPG showed an activation peak at 15 min. These data suggest that interpecies variations in Leishmania LPG may have an important role during initial steps of infection in the host’s innate imune system.

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-10T17:01:38Z No. of bitstreams: 1 Tese_BCM_CarolineMacedoGoncalves-pdf.pdf: 1566062 bytes, checksum: e805bc24ca1900f82d5004ef6cd9058a (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-10T17:01:48Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_BCM_CarolineMacedoGoncalves-pdf.pdf: 1566062 bytes, checksum: e805bc24ca1900f82d5004ef6cd9058a (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-10T17:02:18Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_BCM_CarolineMacedoGoncalves-pdf.pdf: 1566062 bytes, checksum: e805bc24ca1900f82d5004ef6cd9058a (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-10T17:02:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_BCM_CarolineMacedoGoncalves-pdf.pdf: 1566062 bytes, checksum: e805bc24ca1900f82d5004ef6cd9058a (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa René Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil / No Brasil, as epidemias de dengue ainda estão difundidas por todo o país. Além da falta de conhecimento de como os surtos da doença são capazes de iniciar e sustentar o seu ciclo de transmissão, existem poucos estudos avaliando a habilidade das populações brasileiras de A. aegypti para transmitir o vírus. O objetivo do nosso estudo foi comparar a susceptibilidade de A. aegypti capturados nas nove regionais de Belo Horizonte, ao DENV-2, nos anos de 2009 e 2011. Para tal finalidade, parâmetros como a taxa de infecção (IR), competência vetorial (CV) e a taxa de infeção disseminada (DIR) foram determinadas. Os ovos dos A. aegypti de cada regional foram coletadas separadamente e colonizados em um insetário. As fêmeas adultas foram infectadas experimentalmente com DENV-2 e o vírus foi detectado através da RT-qPCR nas amostras dos corpos e cabeças dos mosquitos. Os dados foram analisados através do programa estatístico Social Sciences – versão 17. A IR variou de 40% a 82,5% em 2009 e de 60% a 100% em 2011. A CV variou de 25% a 77,5% em 2009 e de 25% a 80% em 2011. Já a DIR oscilou de 68,7% a 100% em 2009 e 38,4% a 86,8% em 2011. Os resultados foram avaliados por um modelo logístico utilizando IR como co-variável. Em 2009, as regionais Norte, Barreiro, Centro-Sul e Venda Nova mostraram uma forte associação. Em 2011, uma forte associação foi observada entre as regionais Centro-Sul, Venda Nova, Oeste e Nordeste. Utilizando a competência vetorial com co-variável, em 2009, as regionais Centro-Sul e Venda Nova apresentaram associação mais relevante. Já em 2011, as regionais Centro-Sul, Venda Nova e Barreiro apresentaram associação significativa. Quando os dados de DIR foram analisados pelos modelos de regressão logística, Pampulha, Centro-Sul, Venda Nova, Oeste, Nordeste e Leste 2009), bem como, Centro-Sul, Venda Nova e Oeste (2011) foram as regionais que apresentaram a associação mais forte. Concluí-se que as populações de A. aegypti de Belo Horizonte exibiram ampla variação na sua competência vetorial para transmitir DENV-2. Por isso, dados e estratégias de controle do vetor, de cada uma das regionais, precisam estar disponíveis para os órgãos competentes. Análises futuras precisam ser desenvolvidas para um melhor entendimento das razões pelas quais ocorre esta grande variabilidade na CV e como estes parâmetros se correlacionam com os achados epidemiológicos dos anos seguintes. / In Brazil, dengue epidemics are still diffusing throughout the country and it is unclear if outbreaks may initiate a sustainable transmission cycle. There are few studies evaluating the ability of Brazilian Aedes aegypti populations to transmit the virus. The aim of this study was to compare the DENV susceptibility of field-captured Ae. Aegypti populations from nine distinct geographic areas of the city of Belo Horizonte in 2009 and 2011. Parameters as Infection Rate (IR), Vector Competence (VC) and Disseminated Infection rate (DIR) were determined. Aedes aegypti eggs from each region were separately collected and hatched in an insectary. Adult females were experimentally infected with DENV-2 and the virus was detected by qPCR in body and head samples. Data were analyzed with the Statistical Package for the Social Sciences version 17. IR varied from 40% to 82.5% in 2009 and 60% to 100% in 2011. VC ranged from 25% to 77.5% in 2009 and 25% to 80% in 2011. DIR oscillated from 68.7% to 100% in 2009 and 38.4% to 86.8 in 2011. The results were evaluated by a logistic model using IR as covariate. In 2009, North, Barreiro, Central South and Venda Nova showed the strongest association. In 2011, the same was observed for Central South, Venda Nova, West and Northeast regions. Using VC as covariate, in 2009, Central South and Venda Nova showed the most relevant association. In 2011, Central South, Venda Nova and Barreiro presented the most revelation association. When DIR data were analyzed by logistic regression models, Pampulha, Central South, Venda Nova, West, Northeast and East (2009) as well as Central South, Venda Nova and West (2011) were the districts showing the strongest association.We conclude that A. aegypti populations from Belo Horizonte exhibit wide variation in vector competence to transmit dengue. Because of it, vector control strategies should match the available data for each region. Further analysis should be conducted to better understand the reasons for this large variability of vector competence and how these parameters correlate with epidemiological findings in the following years.

Made available in DSpace on 2015-06-12T13:55:09Z (GMT). No. of bitstreams: 2 428.pdf: 5454864 bytes, checksum: e796ffff377b56e109d6c62011da5b30 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2010 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães. Recife, PE, Brasil / A esquistossomose é uma doença crônica que está vinculada particularmente às condições hidro-biológica dos criadouros dos caramujos. Em Pernambuco, nada se sabe sobre a situação atual da ecologia do Biomphalaria e da variabilidade genética de S. mansoni. Além disso, das implicações desses aspectos na definição da dinâmica de transmissão. O objetivo desta pesquisa foi: Analisar alguns aspectos da ecologia do Biomphalaria e da estrutura dos perfis genéticos de Schistosoma mansoni. Realizamos um estudo ecológico na escala regional e um estudo experimental na escala local (município de Goiana). Coletamos os moluscos em 14 municípios, tomamos nota das variáveis bióticas (espécies de moluscos e tipo de vegetação aquática) e abióticas (tipo de habitat e tipo de substrato). Analisamos os dados através da Análise de Correlação Canônica (ACC). O diagnostico da positividade do Biomphalaria foi feito através da técnica convencional e a Nested-PCR. Em Goiana, foram isoladas as cepas de S. mansoni e de Biomphalaria. Também, coletamos caramujos. Por último, isolamos os ciclos de S. mansoni dos casos para identificar os perfis genéticos de S. mansoni através do RAPDPCR. Usamos o Median Joining Network, para compreender a biogeografia evolutiva do parasito e a dinâmica de transmissão. Os ACC mostraram: 1) B. stramiena tem preferência por Nasturtium spp. e gramíneas, habitat semi- permantes, e os substratos argila, areia e pedra, e B. glabrata, por N. lotus, E. crassipes e P. estratioste, habitat temporais e o substrato barro; e 2) O gênero Biomphalaria esta separado tanto do ponto de vista geográfico como ecológico. As técnicas de diagnósticos mostraram que as duas espécies de Biomphalaria são responsáveis pelos focos do litoral. As interações parasito - molusco mais eficiente em Goiana é alopátrica. Identificamos uma variabilidade genética importante através dos primers usados. O MJN mostrou que a freqüência - dependência dos perfis genéticos é direcionada pela pressão de seleção do gênero Biomphalaria. Em conclusão o padrão geográfico dos perfis genéticos de S. mansoni presentes em Pernambuco depende dos níveis de compatibilidade do Biomphalaria. Em acréscimo, a existência de interconexão dos focos do ponto de vista geográfico e funcional explica o caráter focal e heterogêneo da transmissão da esquistossomose neste Estado

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-11-20T17:24:52Z No. of bitstreams: 1 PACIDÔNIO.pdf: 32476477 bytes, checksum: a96cf41a7daea427bc40612b36dfc340 (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-11-20T17:25:04Z (GMT) No. of bitstreams: 1 PACIDÔNIO.pdf: 32476477 bytes, checksum: a96cf41a7daea427bc40612b36dfc340 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-20T17:25:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PACIDÔNIO.pdf: 32476477 bytes, checksum: a96cf41a7daea427bc40612b36dfc340 (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa Rene Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil / A dengue é um problema médico crescente em países subtropicais e tropicais. A dengue é uma infecção viral que apresentem quatro sorotipos distintos, DENV-1 a - 4, sendo recentemente relatado o quinto sorotipo, DENV-5, na Malásia. Estes são transmitidos pela picada de mosquitos infectados do gênero Aedes, sendo o Aedes aegypti o principal vetor. Atualmente, a prevenção e controle da dengue dependem exclusivamente de medidas de combate ao vetor, e estas apresentam-se ineficientes, principalmente em países em desenvolvimento. Nesse contexto, há a necessidade da busca de novas estratégias que possam ser utilizadas concomitantemente com as formas de controle já existentes. A Wolbachia é uma bactéria intracelular, amplamente conhecida por promover o fenótipo de bloqueio do vírus dengue em mosquitos A. aegypti. Apesar disto, não se conhece se a Wolbachia é capaz de interferir na infecção da progênie de mosquitos infectados com o vírus dengue, fenômeno conhecido como transmissão vertical. A transmissão vertical pode estar associada com a manutenção do vírus em períodos interepidêmicos ou em locais nos quais a transmissão ativa está diminuída. Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar se a Wolbachia introduzida na linhagem brasileira de A. aegypti influencia a transmissão vertical da dengue. Duas metodologias de infecção foram utilizadas: infecção oral e nanoinjeção intratorácica, onde utilizou-se o DENV-4 e DENV-1,-3 e -4, respectivamente. Para estes experimentos, foram comparados mosquitos com Wolbachia (Mel) e uma linhagem de mosquitos tratada com antibiótico e portanto, livre da bactéria (Tet). Os ovos dos mosquitos infectados foram coletados em um período de 20 e 11 dias após a infecção, oral e injeções, respectivamente. A fecundidade e fertilidade, de forma geral, foram diminuídas na co-infecção da Wolbachia com o vírus dengue. Em todos os mosquitos infectados, não se observou diferenças na suscetibilidade ao vírus, porém a carga viral foi diminuída pela Wolbachia no DENV-4, em ambas as formas de infecção. Foi possível a detecção de pools positivos independente da forma de infecção, demonstrando que a transmissão vertical do vírus dengue ocorreu, porém a proporção de pools positivos entre os grupos Mel e Tet não foi alterada. Entretanto, pudemos observar uma diminuição da carga viral nos pools positivos Mel. Os ovários na infecção oral, interessantemente, tiveram uma forte diminuição da suscetibilidade conferida pela Wolbachia. A carga viral dos ovários foi diminuída em DENV-1 e DENV-4, em ambas as formas de infecção. Os dados obtidos nestes experimentos apontam que a transmissão vertical do vírus dengue ocorreu em pequenas taxas. Independente da forma de infecção utilizada, as taxas não variaram, mostrando que os mecanismos que regulam a ocorrência da transmissão vertical precisam ser explorados. Concluímos que, a Wolbachia pode potencialmente ser responsável pela redução da transmissão vertical em campo. Isto é considerado um grande avanço no controle da dengue, se realmente for comprovada que a transmissão vertical é a responsável pela manutenção do vírus em períodos inter-epidêmicos. / Dengue is a growing medical problem in subtropical and tropical countries. Dengue is a viral infection which is known four distinct serotypes, DENV-1 to -4, recently being reported the fifth serotype DENV-5 in Malaysia. These are transmitted by the bite of infected mosquitoes of the genus Aedes, being the main vector Aedes aegypti. Currently, prevention and control of dengue rely solely on anti-vector measures, and these have to be inefficient, especially in developing countries. In this context, there is the need to search for new strategies that can be used concurrently with the forms of existing control. Wolbachia is an intracellular bacterium The widely known for promoting the virus lock phenotype in dengue mosquitoes A. aegypti. Despite this, it is not known if the Wolbachia is able to interfere in the progeny of infected mosquitoes, known as vertical transmission. Vertical transmission may be associated with the maintenance of the virus in inter-epidemic periods or active sites that transmission is decreased. The objective of this study was to evaluate whether Wolbachia introduced in the Brazilian strain of A. aegypti influences the vertical transmission of dengue. Two methods were used for infection: Oral nanoinjeção intrathoracic infection and, where used DENV-4 and DENV-1, -3 and -4 respectively. For these experiments, mosquitoes were compared with Wolbachia (Mel) and a strain of mosquitoes treated with antibiotics and therefore free of bacteria (Tet). The eggs of infected mosquitoes were collected over a period of 20 and 11 days after infection, orally and injections, respectively. The fecundity and fertility, in general, were reduced in the co-infection of Wolbachia with the dengue virus. In all infected mosquitoes, no differences were observed in susceptibility to the virus, but the viral load was reduced by Wolbachia in DENV-4 in both forms of the infection. Independent positive pools of detection was possible the form of infection, demonstrating that vertical transmission of dengue virus occurred, but the proportion of positive pools between Mel and Tet group was unchanged. However, we observed a decrease in viral load in positive pools Mel. Ovaries in the oral infection, interestingly, had a strong decrease in susceptibility conferred by Wolbachia. The viral load in the ovaries was decreased DENV-1 and DENV-4 in both forms of the infection. The data from these experiments indicate that vertical transmission of dengue virus occurred in small fees. Independent of the infection used, the rates did not change, showing that the mechanisms that regulate the occurrence of vertical transmission need to be explored. We conclude that the Wolbachia could potentially be responsible for the reduction of vertical transmission in the field. This is considered a major breakthrough in dengue control, if it is really proven that vertical transmission is responsible for virus maintenance in inter-epidemic periods