Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação Nanociência e Nanobiotecnologia, 2016. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2016-05-25T13:46:24Z No. of bitstreams: 1 2016_AliciaSimalieOmbredane.pdf: 2064852 bytes, checksum: b44036cc1dea0669306297b2c133343e (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2016-05-25T20:43:52Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_AliciaSimalieOmbredane.pdf: 2064852 bytes, checksum: b44036cc1dea0669306297b2c133343e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-25T20:43:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_AliciaSimalieOmbredane.pdf: 2064852 bytes, checksum: b44036cc1dea0669306297b2c133343e (MD5) / O câncer de pele não melanoma (CPNM) é o tipo de tumor de maior incidência no Brasil, e o subtipo maligno denominado de carcinoma epidermoide representa 70% das mortes por CPNM. Os tratamentos convencionais apresentam grande chance de cura, entretanto, são geralmente associados a vários efeitos colaterais adversos localizados e/ou sistêmicos. Portanto, o desenvolvimento de novas estratégias terapêuticas é de grande interesse. O uso de compostos naturais e de nanopartículas de prata (AgNPs) demonstram uma grande relevância para o tratamento de vários tipos de câncer. Adicionalmente, a síntese verde de AgNPs consiste em utilizar organismos biológicos e/ou biomoléculas isoladas como agentes redutores e estabilizantes. Portanto, o método de síntese se torna mais eco-amigável, de menor custo e biocompatível. Diante do exposto, o objetivo deste trabalho é de sintetizar AgNPs utilizando extrato aquoso (EA) do tubérculo de açafrão (Curcuma longa) e nitrato de prata (AgNO3), associá-las com polímeros de quitosana, caracterizá-las, avaliar a citotoxicidade em células tumorais de CPNM (A431) e não tumorais (queratinócitos - HaCAT) e investigar seus possíveis mecanismos de ação em linhagem de CPNM (A431), in vitro. O rendimento da síntese de AgNPs foi dependente da variação de temperatura de armazenamento da C. longa, do método de extração, da temperatura de síntese e da concentração de EA e de AgNO3. Após a otimização da síntese (C. longa armazenada a temperatura ambiente, extração por fervura, síntese a 75°C por 24 horas com 2 mg/mL de EA e 1 mM de AgNO3) a quitosana foi utilizada para recobrir as AgNPs devido às suas propriedades de biocompatibilidade, biodegradabilidade e bioadesividade. As AgNPs obtidas apresentaram uma homogeneidade e estabilidade coloidal moderadas (PdI de 0,319 ± 0,043 e potencial Zeta de -24,8 ± 2,2 mV) com diâmetro hidrodinâmico (DH) de 210,3 ± 57,1 nm. Em paralelo, as AgNPs recobertas por quitosana (CH-AgNPs) apresentaram DH de 328,0 ± 61,6 nm, moderada homogeneidade (PdI de 0,372 ± 0,059) e estabilidade coloidal (potencial Zeta de +53,9 ± 3,1 mV). A forma das nanopartículas foi avaliada por técnicas de microscopia. As amostras demonstraram ser estáveis por 30 dias a 4°C. Além disso, ambas demonstraram atividade citotóxica dose-dependente em células A431 e HaCAT. A investigação dos possíveis mecanismos de ação das AgNPs expostas às células A431 por 24 horas a 50μM demonstrou a indução de lesão de membrana plasmática (50%), diminuição da proliferação celular (50%), aumento da taxa de fragmentação de DNA (40%) e do potencial de membrana mitocondrial. Além disso, as CH-AgNPs bloquearam as células em fase G1 do ciclo celular e apresentaram maior marcação por Anexina-V, sugerindo morte celular por apoptose. Em suma, pode-se concluir que a síntese verde demonstrou ser uma boa alternativa para a obtenção de AgNPs com grande potencial citotóxico. A associação com a quitosana pode representar um potencial promissor para o tratamento de CPMN. _______________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Nonmelanoma skin cancers (NMSC) represents the most incident tumor in Brazil, and the malignant subtype squamous cell carcinoma accounts for 70% of deaths from NMSC. Conventional treatments have great chance of cure, however, they are usually associated with several localized and/or systemic adverse side effects. Therefore, the development of new therapeutic strategies is of great interest. The use of natural compounds and silver nanoparticles (AgNPs) showed a great importance for the treatment of various cancers. Additionally, the green synthesis of AgNPs consists of using biological organisms and/or biomolecules isolated as reducing agents and stabilizers. Therefore, this method of synthesis becomes more eco-friendly, less costly and biocompatible. Given the above, the objective of this study is to synthesize AgNPs using aqueous extract (EA) of turmeric tuber (Curcuma longa) and silver nitrate (AgNO3), associate them with chitosan polymers, characterize them, analyze the cytotoxicity NMSC tumor (A431) and non-tumor cells (keratinocytes - HaCaT) and investigate the possible mechanisms of action in NMSC cells line (A431) in vitro. The yield of synthesis was dependent on the variation of the storage temperature of C. longa, the method of extraction, the temperature of synthesis and the concentration of EA and AgNO3. After optimization of the synthesis parameters (C. longa stored at room temperature, extraction by boiling, and synthesis at 75°C for 24 hours with 2 mg/ml EA and 1 mM AgNO3) chitosan was used to coat AgNPs due to its properties of biocompatibility, biodegradability and bioadhesiveness. The obtained AgNPs showed a moderate homogeneity and colloidal stability (0.319 ± 0.043 PDI and Zeta potential of - 24.8 ± 2.2 mV) with hydrodynamic diameter (HD) of 210.3 ± 57.1 nm. In parallel, covered with chitosan (CH-AgNPs) exhibited HD of 328.0 ± 61.6 nm, moderate homogeneity (PDI 0.372 ± 0.059), and colloidal stability (Zeta potential of +53.9 ± 3.1 mV). The shape of the nanoparticles was analyzed by microscopy techniques. The samples proved to be stable for 30 days at 4°C. In addition, both showed dosedependent cytotoxic activity in HaCaT and A431 cells. The investigation of possible mechanisms of action of AgNPs exposed to A431 cells for 24 hours at 50 μM demonstrated the induction of plasma membrane injury (50%), reduction of cell proliferation (50%), increased of DNA fragmentation rate (40%) and mitochondrial membrane potential and induction of cell death by apoptosis. Furthermore, CH-AgNPs blocked cells in G1 phase of the cell cycle and presented anexin-V dialing suggesting cell death by apoptosis. In short, it can be concluded that the green synthesis proved to be a good alternative for obtaining AgNPs with high cytotoxic potential. The association with chitosan may represent a promising potential for the treatment of CPMN.

Introdução A mastocitose abrange um grupo heterogêneo de condições crônicas caracterizado pela proliferação excessiva de mastócitos nos tecidos. Os sinais e sintomas clínicos são decorrentes da distribuição anatômica dos mastócitos e do efeito funcional dos mediadores produzidos e liberados por estas células. Na infância, a doença é considerada uma condição benigna na maioria dos casos, cujo comprometimento característico é o cutâneo. As mais freqüentes manifestações na pele são os mastocitomas e a urticária pigmentosa. Lesões cutâneas bolhosas podem manifestar-se e acompanhar todas as formas de mastocitose e quando esta apresentação é a predominante, é denominada de mastocitose bolhosa. O diagnóstico de mastocitose é suspeitado clinicamente e confirmado pela histologia. A demonstração do aumento do número de mastócitos nas lesões cutâneas características se constitui no principal critério diagnóstico. Contudo, este método tem dificuldades técnicas que impedem a adequada reprodutibilidade dos achados, dificultando a elucidação de casos duvidosos e retardando seu tratamento. Considerando as propriedades imunológicas e a importância clínica dos mastócitos reveste-se de maior importância compreender o papel destas células nas doenças, sendo indispensável identificá-las e enumerá-las com acurácia nos tecidos. Objetivos Quantificar o número de mastócitos marcados com anticorpo monoclonal antitriptase, através de técnica imuno-histoquímica e análise de imagem, em biópsias cutâneas de crianças, com diagnóstico clínico de mastocitose. Descrever os achados histológicos; quantificar o número de mastócitos marcados com o anticorpo antitriptase entre as diferentes expressões clínicas da mastocitose cutânea; comparar o número de mastócitos entre os casos de mastocitose cutânea e mastocitose associada à sintomas sistêmicos e correlacionar as contagens de mastócitos entre os dois diferentes métodos (coloração por Giemsa com contagem manual e marcação com anticorpo antitriptase e análise digital). Material e Método Foram incluídas no estudo biópsias cutâneas de crianças de 0 a 14 anos, com diagnóstico clínico e histológico de mastocitose. Os casos foram classificados de acordo com a apresentação clínica cutânea em mastocitoma, urticária pigmentosa ou mastocitose bolhosa e assinalada a presença de sintomas sistêmicos associados. Os fragmentos de pele fixados em formalina e emblocados em parafina foram cortados e utilizados para diagnóstico histopatológico convencional, corados com hematoxilina-eosina e Giemsa, e para análise imuno-histoquímica com estreptavidina peroxidase marcados com anticorpo antitriptase. A densidade de mastócitos (número de células por área) foi realizada por um único observador na técnica histológica e através de um sistema de análise de imagem de vídeo no método imuno-histoquímico. Resultados Foram avaliados 33 casos de mastocitose, sendo 21 do sexo masculino. Dez casos (30,3%) apresentavam mastocitoma, 21 (63,6%) urticária pigmentosa e 2 (6,1%) mastocitose bolhosa. Todos os casos da amostra foram classificados como tendo mastocitose incipiente e em 6 (18,8%) pacientes pôde ser identificada a associação com sintomas sistêmicos. Prurido foi o sintoma mais freqüente, sendo relatado em 21 casos. Em 21 dos 33 casos foi identificada a infiltração de mastócitos na derme havendo predominância pela região perivascular (p=0,001, teste exato de Fisher). Não houve diferenças significativas entre a presença de infiltrado mastocitário e as várias formas cutâneas de mastocitose ou a mastocitose sistêmica. A presença de eosinófilos foi identificada em 15 casos (45,5%) e em 10 casos associadamente ao infiltrado perivascular de mastócitos. A densidade de mastócitos na técnica histológica, incluindo-se todos os casos, foi 50,00 células/mm2. Não houve diferença significativa das contagens entre os pacientes com mastocitoma e aqueles com urticária pigmentosa, assim como entre os pacientes com e sem sintomas sistêmicos associados aos cutâneos. A densidade de mastócitos encontrada com a técnica imuno-histoquímica e contagem por análise de imagem foi 158,85 células/mm2. Não houve diferença significativa das contagens entre os pacientes com mastocitoma e aqueles com urticária pigmentosa, assim como entre aqueles com e sem sintomas sistêmicos. Comparando-se a contagem dos mastócitos por área (densidade) entre a histologia e a imuno-histoquímica houve uma diferença significativa (p=0,0001 teste não-paramétrico de Wilcoxon). A média da diferença entre as contagens foi 199,98 células/mm2 (±365,31 DP). Também não houve semelhança, entre os dois métodos, nos grupos mastocitoma e urticária pigmentosa (p=0,005 e p=0,01, respectivamente, teste não-paramétrico de Wilcoxon). Puderam ser identificados 518% a mais de mastócitos com a técnica imunohistoquímica quando comparada com a histológica. Conclusões O presente estudo permite concluir que: 1) a localização preferencial da infiltração de mastócitos é dérmica e perivascular, não sendo possível identificar diferenças histológicas entre casos de urticária pigmentosa e mastocitoma; 2) o número de mastócitos marcados com o anticorpo monoclonal antitriptase e contados com análise digital de imagem, em biópsia de pele de crianças com diagnóstico clínico de mastocitose, foi 159 células por milímetro quadrado; 3) a densidade de mastócitos, foi semelhante entre os casos de urticária pigmentosa e mastocitoma e entre os casos com e sem sintomas sistêmicos associados nas duas diferentes técnicas empregadas; 4) o número de mastócitos por milímetro quadrado com a técnica imuno-histoquímica e a contagem através de análise de imagem foi significativamente maior quando comparada com a coloração através de Giemsa e a contagem manual, com uma diferença média entre os dois métodos de 200 células por milímetro quadrado; 5) a densidade de mastócitos com a técnica imunohistoquímica foi significativamente maior tanto nos casos com urticária pigmentosa quanto nos com mastocitoma, quando comparada com a técnica empregada rotineiramente e 6) com a técnica imuno-histoquímica e a contagem através de análise de imagem foi possível identificar 518% a mais de mastócitos quando comparada com a técnica histológica. / Introduction Mastocytosis includes a heterogeneous group of chronic conditions characterized by increased proliferation of mast cells in the tissues. The clinical signs and symptoms result from the anatomic distribution of mast cells and from the functional effect of mediators produced and discharged by these cells. In childhood, the disease is considered a benign condition, in the majority of the cases, whose characteristic implication is cutaneous. The most frequent manifestations in the skin are mastocytomas and urticaria pigmentosa. Bullous cutaneous lesions may be manifested and accompany all kinds of mastocytosis and when this presentation is predominant, it is named bullous mastocytosis. The diagnosis of mastocytosis is clinically suspected and confirmed by histology. The demonstration of increased number of mast cells in proper cutaneous lesions is the main diagnostic criterion. Although, this method has technical problems that impede the adequate reproduction of the findings, complicating the elucidation of doubtful cases and delaying the treatment. Considering the immunological properties and the clinical significance of mast cells becomes of great relevance to understand the role of these cells in the diseases, being absolutely necessary to identify and enumerate them with accuracy in the tissues. Aims To count the number of marked mast cells with anti-tryptase monoclonal antibody, by immunohistochemical technique and image analysis in cutaneous biopsies of children with clinical diagnosis of mastocytosis. To describe the histological findings; to count the number of marked mast cells with anti-tryptase antibody among the different clinical expressions of cutaneous mastocytosis; to compare the number of mast cells among the cases of cutaneous mastocytosis and systemic mastocytosis and to correlate the counting of mast cells between both different methods (stained by Giemsa with handy counting and marked with anti-tryptase antibody and digital analysis). Material and Methods Cutaneous biopsies of children from 0 to 14 years old were included in the study, with clinical and histological diagnosis of mastocytosis. The cases were classified according to the clinical presentation in mastocytoma, urticaria pigmentosa or bullous mastocytosis and distinguished the presence of associated systemic symptoms. The blocks of formalin fixed and paraffin embedded fragments of skin were cut and utilized for conventional histopathologic diagnosis, stained with hematoxylin eosin and Giemsa. Similar sections were processed for immunohistochemical analysis with streptavidin peroxidase marked with anti-tryptase antibody. The evaluation of the density of mast cells (number of cells by area) was performed by only one observer in the histological technique and by a video image analysis system in the immunohistochemical method. Results Thirty-three cases of mastocytosis were appraised, 21 of them belonging to the masculine sex. Ten cases (30,3%) presented mastocytoma, 21 (63,6%) urticaria pigmentosa and 2 (6,1%) bullous mastocytosis. All patients of the sample were classified as having indolent mastocytosis and in 6 (18,8%) of them the association with systemic symptoms could be identified. Pruritus was the most frequent symptom, being related in 21 cases. In 21 of the 33 cases dermal infiltration of mast cells was identified predominating in the perivascular region (p=0,00l, exact test of Fisher). There were no significant differences regarding to the presence of infiltrated mast cells in the diverse cutaneous forms of mastocytosis or the systemic mastocytosis. The presence of eosinophils was identified in 15 cases (45,5%) and in 10 of them associated to the perivascular infiltrated of mast cells. The density of mast cells in the histological technique, including all cases, was 50,00 cells/mm2. There was no significant difference in the counting of cells, taking into account patients with mastocytoma in comparison with those with urticaria pigmentosa; the same happened when patients with or without systemic symptoms associated to cutaneous manifestations were considered. The density of mast cells found with the immunohistochemical technique and the counting by the analysis of image was 158,85 cells/mm2. There was no significant difference in the counting between the patients with mastocytoma and those with urticaria pigmentosa, and also between those ones with or without systemic symptoms. Comparing the counting of mast cells by area (density) between the regular histology and the immunohistochemistry there was a significant difference (p=0;0001, nonparametric test of Wilcoxon). The mean of the difference among the countings was 199,98 cells/mm2 (±365,31 SD). Also, there was not resemblance between both methods in the mastocytoma and the urticaria pigmentosa groups (p=0,005 and p=0,01, respectively, nonparametric test of Wilcoxon). With the immunohistochemical technique, an increase of 518% in the number of mast cells could be demonstrated when compared with the histological method. Conclusions The present study allows to conclude that: 1) the preferential location of the infiltration of mast cells is dermic and perivascular, not being possible to identify histological differences between the cases of urticaria pigmentosa and mastocytoma; 2) the number of anti-tryptase monoclonal antibody marked mast cells and counted by digital image analysis in skin biopsies of children with clinical diagnosis of mastocytosis, was 159 cells by square millimeter; 3) the density of mast cells was similar in cases of urticaria pigmentosa and mastocytoma and also in those with and without associated systemic symptoms in both distincts techniques; 4) the number of mast cells, by square millimeter, marked by immunohistochemical technique and counted by image analysis was significantly greater than the number obtained by Giemsa staining and handy counting, with an average difference of 200 cells by square millimeter between both methods; 5) the density of mast cells marked by immunohistochemical technique was significantly greater in both, urticaria pigmentosa and mastocytoma cases, when compared with the regular histopathological technique, and 6) the use of the immunohistochemical technique and the digital image analysis counting allowed the detection of 518% more mast cells than the histological method.

Orientador: Carla Raquel Fontana / Coorientador: Marlus Chorilli / Banca: Ana Claudia Pavarina / Banca: Natalia Mayumi Inada / Resumo: A acne vulgar é uma das dermatoses mais frequentes em jovens e a infecção causada pela bactéria Cutibacterium acnes (antigo Propionibacterium acnes) tem importante papel na patogênese da acne. Existem várias opções de tratamento que variam de acordo com a gravidade da doença, porém são associados com reações indesejadas e resistência aos antimicrobianos. A terapia fotodinâmica antimicrobiana (TFDa) então é proposta como tratamento alternativo para inativar C. acnes juntamente com a incorporação do fotossensibilizador (FS) em uma formulação tópica para otimizar a terapia. Este trabalho objetivou avaliar a eficácia in vitro da TFDa mediada pelo azul de metileno (AM) incorporado em hidrogel de quitosana e poloxamer (HG-AM) contra C. acnes em fase planctônica e biofilme. A viabilidade celular após TFDa foi avaliada através da quantificação das colônias formadas por mililitro de amostra (UFC/mL). Para caracterizar estruturalmente os HGs foram realizadas as análises oscilatórias e de comportamento de fluxo em reômetro de estresse controlado com geometria placa-cone e a bioadesão em pele de orelha de porco utilizando um texturômetro. A análise estatística dos dados feita foi a Análise de Variância (one way ANOVA) com pós-teste de Tukey. Os resultados deste estudo mostrou que a TFDa contra C. acnes foi eficaz utilizando HG-AM em fase plactônica. A concentração bactericida mínima foi de 12,5 µg/mL associada a uma fluência de 90 J/cm2. O biofilme de C. acnes não foi totalmente eliminad... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Acne vulgaris is one of the most frequent dermatosis in young people and the infection caused by the bacteria Cutibacterium acnes (formerly Propionibacterium acnes) plays an important role in the pathogenesis of acne. There are several treatments options that vary according to the severity of the disease, but are associated with unwanted reactions and antimicrobial resistance. Antimicrobial photodynamic therapy (aPDT) is then proposed as an alternative treatment to inactivate C. acnes together with the incorporation of the photosensitizer (PS) into a topical formulation to optimize therapy. This work aimed to evaluate the in vitro efficacy of methylene blue (MB) mediated TFDa incorporated in chitosan and poloxamer (HG-MB) hydrogels against planktonic and biofilm C. acnes. Cell viability after aPDT was evaluated by quantifying the colonies formed per milliliter of sample (CFU / mL). To characterize structurally the HG were performed the oscillatory and behavior of flow in a controlled stress rheometer with cone-plate geometry and bioadhesion in pig ear skin using a texture analyser. The statistical analysis of the data was the Analysis of Variance (one way ANOVA) with post-test of Tukey. The results of this study showed that aPDT was effective using HG-MB in planktonic phase. The minimum bactericidal concentration was 12.5 μg/mL associated with a fluence of 90 J/cm2 . The C. acnes biofilm was not totally eliminated by the aPDT with HG-MB under the conditions tested. The maximum microbial reduction achieved with HG-MB was 1.9 log10 with 75 μg/mL of the PS using 150 J/cm2 and 30 minutes biofilm incubation with HG-MB. HG at 0.25% of chitosan (HG1) was adequate for application to the skin surface because higher concentrations... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2015. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2015-11-13T12:30:07Z No. of bitstreams: 1 2015_KleytonCarvalhoMesquita.pdf: 12901766 bytes, checksum: 8be6abf91d83899b83898869ed0610e3 (MD5) / Approved for entry into archive by Patrícia Nunes da Silva(patricia@bce.unb.br) on 2015-11-16T11:07:18Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_KleytonCarvalhoMesquita.pdf: 12901766 bytes, checksum: 8be6abf91d83899b83898869ed0610e3 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-16T11:07:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_KleytonCarvalhoMesquita.pdf: 12901766 bytes, checksum: 8be6abf91d83899b83898869ed0610e3 (MD5) / Introdução: O papel desempenhado pela vitamina D na dermatite atópica (DA) é controverso e tem sido o foco de diversos estudos. O hormônio paratireoideo (PTH) e o índice ultravioleta (IUV), embora possivelmente envolvidos nessa associação, não têm sido considerados nessas pesquisas. Objetivos: Avaliar a concentração sérica da 25-hidroxivitamina D [25(OH)D] em pacientes com DA e em grupo controle; avaliar a adequabilidade dos valores de referência da 25(OH)D por meio de sua relação com o PTH molécula intacta (PTHi); identificar preditores independentes da gravidade clínica da DA e da concentração sérica de 25(OH)D. Métodos: Em estudo transversal com 106 pacientes de 0 a 18 anos de idade portadores de DA, um grupo controle foi pareado (1:1) com uma subamostra de 54 sujeitos com DA. Foram avaliados dados epidemiológicos, índice SCORing Atopic Dermatitis (SCORAD), testes laboratoriais e IUV. Resultados: O subgrupo DA apresentou maior concentração sérica de 25(OH)D e maior IUV - em média 3,39 ng/ml e 2,54 acima, respectivamente - que o grupo controle (p<0,05). Não houve associação significativa entre 25(OH)D e PTHi. Imunoglobulina E e IUV foram fatores independentes associados ao índice SCORAD. Por sua vez, fototipo, idade e IUV foram fatores independentes associados a 25(OH)D. Conclusões: A diferença da concentração de 25(OH)D entre casos e controles, embora significativa, pode não ter significância clínica e pode estar relacionada ao maior IUV médio encontrado nos casos com DA. A 25(OH)D e o PTHi não influenciaram o índice SCORAD. Estudos prospectivos com múltiplas dosagens de 25(OH)D são necessários para elucidar o papel da vitamina D na prevalência e gravidade da DA. Os pontos de corte adotados para a 25(OH)D parecem inadequados à amostra testada no tocante à supressão do PTHi. Uma vez que o IUV se mostrou significativamente associado com o SCORAD e com a 25(OH)D, esse índice pode atuar como fator de confusão e deve ser considerado em estudos envolvendo DA e vitamina D. / Introduction: The role played by vitamin D in atopic dermatitis (AD) is controversial and has been the focus of many studies. Although possibly involved in this association, parathyroid hormone (PTH) and ultraviolet index (UVI) have not been considered in such research. Objectives: To assess 25-hydroxy vitamin D [25(OH)D] serum levels in AD patients and a control group; to assess the adequacy of the cutoff point used for 25(OH)D investigating its relationship with intact PTH (iPTH); to identify the independent predictors of the AD clinical severity and 25(OH)D serum level. Methods: We conducted a cross-sectional study of 106 AD patients from 0 to 18 years old. A control group was matched (1:1) with a subsample of 54 participants with AD. Epidemiological data, SCORing Atopic Dermatitis (SCORAD) index, laboratory tests and UVI were assessed. Results: The AD subgroup had higher serum 25(OH)D level and higher UVI than control group – difference between the means of 3.39 ng/ml and 2.54, respectively (p<0.05). There was no significant correlation of iPTH with 25(OH)D. Immunoglobulin E and UVI were independent predictors associated with the SCORAD index. Skin type, age and UVI were independent predictors of 25(OH)D. Conclusions: The different levels of 25(OH)D between AD patients and controls may not have clinical consequences and may be related to the higher UVI found in AD subjects. The 25(OH)D and iPTH levels did not have an influence in SCORAD index. Prospective studies with multiple measurements of serum 25(OH)D levels are necessary to elucidate the role of vitamin D in prevalence and severity of AD. The cutoff point of 25(OH)D seems to be inappropriate to the sample at least with regard to the suppression of iPTH. Once UVI was significantly associated with SCORAD and with 25(OH)D, this index can work as a confounding factor and should be considered in studies involving AD and vitamin D.

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:46:00Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013 / Associação Fundo de Incentivo à Psicofarmacologia (AFIP) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A reducao do tempo de sono e uma das varias consequencias da vida moderna, gerando um estresse significante para o organismo. Numerosos estudos em humanos e animais mostraram que o estresse prejudica a qualidade e quantidade de colageno na pele, promove a invasao bacteriana e retarda o processo de cicatrizacao. Alem disso, diversos fatores como o uso de morfina ou o envelhecimento, apresentam efeitos negativos na cicatrizacao de pele e tambem provocam alteracoes no sono. Nesse sentido, o objetivo do presente estudo foi avaliar o processo de cicatrizacao de pele em camundongos privados de sono paradoxal, em duas situacoes distintas e analisadas separadamente: tratados com morfina ou associado ao fator idade. No experimento I, camundongos adultos hairless machos foram distribuidos nos seguintes grupos: Controle, morfina, privacao de sono, e morfina + privacao de sono. A morfina (10 mg.kg-1, subcutaneo) foi administrada a cada 12 horas durante 9 dias consecutivos. Apos a privacao de sono foram coletadas amostras de pele para processamento e avaliacao imuno-histoquimica de COX-2 e iNOS. No experimento II, foram utilizados camundongos C57BL&#8260;6J machos jovens (3 meses) e de meia-idade (10 meses). Os animais foram randomizados nos seguintes grupos: controle 3 meses; controle 10 meses; privacao de sono paradoxal 3 meses; privacao de sono paradoxal 10 meses. Apos o termino da privacao, os animais foram submetidos a lesao na regiao dorsal com o auxilio de um punch descartavel de biopsia de pele (6 mm). Os resultados do primeiro estudo sugerem que a morfina proporcionou imunoexpressao de COX-2 e iNOS. Porem, a privacao de sono nao alterou os resultados induzidos pela morfina. Ja em relacao aos resultados obtidos no segundo experimento, pudemos observar que houve um retardo no processo de cicatrizacao nos animais de meia-idade comparado aos jovens, independente da condicao de sono. Entretanto, os animais de meia-idade privados de sono apresentaram piora na cicatrizacao quando comparados aos animais de meia-idade na condicao controle e aos animais jovens privados de sono. Em resumo, o presente projeto permite concluir que os resultados do nosso primeiro estudo sugerem que a morfina e capaz de induzir a imunoexpressao da COX-2 e iNOS na pele de camundongos hairless, e que a falta de sono nao modula este resultado. Nosso segundo experimento mostrou que a privacao de sono pode afetar o processo de cicatrizacao somente quando associado ao fator idade, sugerindo a importancia do sono ao longo da vida para manutencao de uma pele saudavel. Em geral, os experimentos I e II nos permitem sugerir que uso de morfina, a falta de sono e a idade em animais podem modular o processo de cicatrizacao de pele / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:47:36Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Introdução: A principal queixa dos pacientes após o emagrecimento gerado pela cirurgia bariátrica é a deformidade resultante na parede abdominal. A abdominoplastia do tipo mista que resulta em cicatriz com desenho de âncora é recomendável em abdomes com cicatrizes prévias e excessiva flacidez. Alterações sensoriais da pele podem ocorrer após adominoplastias. Não há, até este momento, estudo de sensibilidade cutânea em abdominoplastia pós-bariátrica. Objetivo: Avaliar a sensação da pele da parede abdominal após a abdominoplastia pós-bariátrica. Métodos: Testaram-se as sensibilidades táctil à pressão estática com estesiômetro de Semmes-Weinstein, pressão em movimento com chumaço de algodão, vibratória com diapasão de 256Hz e dolorosa a “pontada”, calor inócuo de 40ºC e doloroso de 50ºC e frio inócuo de 25ºC e doloroso de 10ºC com provetas e balões de vidro. Os testes foram realizados na véspera da cirurgia, com um e seis meses de pós-operatório. Vinte e quarto pacientes pós-cirurgia bariátrica foram operadas e tiveram seus resultados comparados com os de quinze controles. Para a análise estatística, foram usados: teste t de Student, ANOVA com medidas repetidas e Análise não paramétrica para dados categóricos ordenados em desenho com observação longitudinal com pequena amostragem. Resultados: A sensibilidade táctil à pressão inócua foi mantida no pós-operatório. Também não houve alteração das sensibilidades táctil em movimento, dolorosa e térmicas. A melhora da sensibilidade vibratória não foi relevante. Conclusão: A abdominoplastia em âncora realizada em pacientes pós-bariátricas não gerou alteração da sensorial da pele da parede abdominal. / Introduction: Abdominal deformity is the major problem of the postbariatric patient. Mixed type or Anchor-line abdominoplasty is a good technique for the scarred abdominal wall of post-bariatric patients. Previous authors focused studies in sensory alterations after abdominoplasties of patients without no historic of morbid obesity. There is not any study about the skin sensation after abdominoplasty in postbariatric patients. Objective: Skin sensation evaluation of the abdominal wall after post-bariatric abdominoplasty. Methods: Quantitative pressure evaluation with Semmes-Weinstein monofilaments, qualitative evaluation for vibration sense by a 256cps tuning fork, tactile pain by pinprick test, innocuous and painful heat sensibilities to 40ºC and 50ºC and innocuous and painful cold sensibilities to 25ºC and 10ºC with test tubes and 12,5cm2 probe (Florence flask). The skin sensation tests were performed at three moments: before, one month and six months after abdominoplasty. Twenty four patients were submitted to post-bariatric anchor-line abdominoplasty without flap undermining, the sensibility thresholds and scores were compared to a control group composed by fifteen post-bariatric patients who were not submitted to abdominoplasty. All the results received statistical analysis with significance level always below 5%. Results: No differences for the tactile thresholds before and after the abdominoplasty were noted. Tactile pain, vibration and thermal sensibility were the same before and after the post-bariatric abdominoplasty. Conclusion: The postbariatric abdominoplasty doesn’t impair abdominal wall skin sensation. / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Submitted by Maria Anália Conceição (marianaliaconceicao@gmail.com) on 2016-06-23T12:33:13Z No. of bitstreams: 1 Publico-NOVO-04.pdf: 2427133 bytes, checksum: bd93608d3c698a26cf602adb4102dc4a (MD5) / Approved for entry into archive by Maria Anália Conceição (marianaliaconceicao@gmail.com) on 2016-06-23T12:34:04Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Publico-NOVO-04.pdf: 2427133 bytes, checksum: bd93608d3c698a26cf602adb4102dc4a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-23T12:34:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Publico-NOVO-04.pdf: 2427133 bytes, checksum: bd93608d3c698a26cf602adb4102dc4a (MD5) Previous issue date: 2014 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Introdução: O processo de cicatrização envolve fenômenos bioquímicos e fisiológicos e qualquer desequilíbrio pode acarretar em alterações da cicatriz. Objetivo: Avaliar a Terapia Laser de Baixa Intensidade pré-incisional na cicatrização em pele de ratos. Métodos: Foram utilizados 90 ratos, distribuídos em três grupos: Grupo Simulação (GS); Grupo Laser Vermelho (GLV) e Grupo Laser Infravermelho (GLIV). Os grupos foram subdivididos em três subgrupos, correspondentes ao 3º, 7º e 14º dias de avaliação. Foi realizada uma ferida incisional no dorso do animal, contendo 3cm. O GS não recebeu tratamento, GLV e GLIV foi utilizada uma energia de 60J por ponto, totalizando três pontos de aplicação, com tempo 600s. As amostras foram coletas do terço médio da cicatriz e logo após foram coradas por hematoxilina-eosina para identificação de vasos, azul de toluidina para mastócitos e picro sirus para colágeno total. Resultados: Não houve diferença significante com relação à quantidade de vasos e mastócitos entre os grupos e períodos avaliados. Houve diferença significante na avaliação de picro sirus, onde o grupo GS 14º apresentou uma concentração maior de colágeno total quando comparado a GS3º e GS7º. Já os grupos GLV e GLIV 14º apresentaram uma diminuição do colágeno total quando comparado ao GS14º. Conclusão: A Terapia Laser de Baixa Intensidade pré-incisional diminui a quantidade de colágeno total. / Introduction: The healing process involves biochemical and physiological phenomena, any imbalance can results in changes in the scar. Objective: To evaluate the Low Level Laser Therapy in preoperative period of healing in the skin of rats. Methods: Were used 90 rats distributed in three groups: Simulation Group (SG); Red Laser Group (RLG) and Infrared Laser Group (ILG), the groups were subdivided into three subgroups, corresponding to 3rd, 7th and 14th days of evaluation. The SG has not received treatment, RLG and ILG 60J energy per point, time 600s. Samples were stained by hematoxylin-eosin for identification of vessels, toluidine blue to mast cells and picro sirus to total collagen. It was applied the two-factor Anova test and Tukey test for comparison of the groups and periods. Being pinned p ≤ 0.05 the level of rejection of the null hypothesis. Results: There was no significant difference regarding the amount of vessels and mast cells between the groups and evaluation periods. There was a significant difference in the evaluation of picro sirus, SG 14th showed a higher concentration of total collagen when compared to SG 3rd and SG 7th. RLG 14th and ILG 14th showed overall decrease in total collagen when compared to SG 14th. Conclusion: Low Level Laser Therapy in preoperative period of healing in rat skin decreases the amount of total collagen.

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:49:53Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-10-28 / Diversos fatores associados à menopausa contribuem para mudanças na pele, incluindo envelhecimento cronológico do organismo e a ausência de hormônios esteróides. Sabe-se que a supressão dos hormônios sexuais causa alterações na matriz extracelular. O ácido hialurônico (HA) é um glicosaminoglicano de alto peso molecular e é o maior componente da matriz extracelular da pele. A pele contém aproximadamente 50% de todo HA do organismo. Diversas funções biológicas foram atribuídas ao ácido hialurônico, tais como: estabilização da matriz extracelular, retenção de água, lubrificação de articulações, proliferação celular e regulação das atividades celular. A glicosamina sulfato (Glc) e o condroitim sulfato (CS), ambos componentes da matriz extracelular, têm sido utilizados no tratamento da osteoartrite. A glicosamina sulfato é um amino açúcar que está presente em todo tecido humano e é precursora na biossíntese dos glicosaminoglicanos e proteoglicanos. O condroitim sulfato é um glicosaminoglicano formado por unidades dissacarídicas repetidas contendo galactosamina sulfato e ácido glucurônico. Entretanto, os efeitos da glicosamina sulfato apenas ou associada ao condroitim sulfato (Glc/CS) ainda são desconhecidos na pele. O presente trabalho analisa a distribuição do ácido hialurônico na pele de ratas ooforectomizadas e tratadas com Glc ou Glc/CS. Ratas wistar (n = 50) foram divididas em dois grupos: não ooforectomizados (controle) e ooforectomizados (experimental). Os animais receberam por gavagem 0,0214 mg Dinaflex® (glicosamina sulfato) ou de Condroflex® (glicosamina sulfato + condroitim sulfato) por grama de peso do animal dissolvidos em 250 μl de água durante 45 e 60 dias. As peles foram retiradas e foram analisados os seguintes parâmetros: 1) espessura da derme e epiderme; 2) localização histoquímica do ácido hialurônico na epiderme e derme; 3) quantificação bioquímica do ácido hialurônico na pele. Os resultados mostraram que: 1) Animais ooforectomizados apresentam diminuição na concentração de ácido hialurônico na pele; 2) Animais ooforectomizados e tratados com água ou glicosamina sulfato ou glicosamina sulfato associada ao condroitim sulfato, por 45 e 60 dias não apresentam alterações na concentração de ácido hialurônico na pele; 3) A administração terapêutica destes compostos deve levar em consideração as peculiaridades de cada tecido, uma vez que a literatura mostra que a cartilagem responde a administração terapêutica destes açucares. / Several factors contribute to the skin changes that are associated with menopause, including chronologic aging of the organism and the withdrawal of steroid hormones. It is known that sexual hormone suppression leads to alterations in the skin extracellular matrix. Hyaluronic acid (HA) high molecular weight glycosaminoglycan and a major component of the extracellular matrix. In the skin, which contains 50% of the total body HA. Several biological functions have been assigned to HA, among them the stabilization of the extracellular matrix, water homeostasis, joint lubrification, proliferation cell and regulation of the cellular activities. Glucosamine sulfate (Glc) and chondroitin sulfate (CS), both components to the extracellular matrix, have been used for treatment of osteoarthritis. The Glucosamine sulfate is an amino monosaccharide that is present in all human tissues and is precursors for the biosynthesis of the glycosaminoglycan and ploteoglycans. The chondroitin sulfate is a glycosaminoglycan formed for repeating disaccharide units containing galactosamine sulfate and glucuronic acid. However, the glucosamine sulfate and its association with chondroitin sulfate (Glc/CS) and their effects on the aged skin tissue are still unknown. This study was done to observe the profile of the hyaluronic acid in the skin after ovariectomy in rats treated and untreated with Glc or Glc/CS. Wistar rats (n = 50) were divided in two groups: not ovariectomized (control) and ovariectomized (experimental). The animals received by gavage either water (0,25ml) or 0,0214 mg/g of animal weight of Dinaflex® 1,5g (glucosamine sulfate) or Condroflex® 1,5g + 1,2g (glucosamine sulfate + chondroitin sulfate) during 45 and 60 days. Their skins were dissected and analyzed the following parameters: 1) thickness of dermis and epidermis; 2) histochemical localization of the hyaluronic acid; 3) biochemical quantification of the hyaluronic acid. Through this study we conclude that: 1) ovariectomized animals decreased the amount of hyaluronic acid in the skin; 2) ovariectomized animals and treated with water or Glc or Glc/CS for 45 and 60 days to administration they do not present alterations in the acid hyaluronic concentration: 3) the therapeutical administration of these composites must take in consideration the peculiarities of each tissue. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:03Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-09-24 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / INTRODUÇÃO: Pesquisas in vitro evidenciam que a diferença de potencial bioelétrico de uma corrente elétrica pode influenciar a proliferação de fibroblastos e a síntese de fibras colágenas de uma incisão. OBJETIVO: Investigar o efeito da corrente elétrica pré-operatória na cicatrização, em pele de ratos. MÉTODOS: Quarenta ratos foram distribuídos em: Grupo Controle, 20 ratos foram anestesiados e submetidos a uma incisão no dorso, sem a aplicação da corrente. O Grupo Estimulado, 20 ratos foram estimulados eletricamente (corrente elétrica pulsada retangular, com frequência de 7,7Hz e intensidade de 8mA) no dorso durante 30 minutos, no pré-operatório, cuja incisão foi realizada dois minutos após o término da estimulação. O eletrodo com polaridade positiva foi colocado no dorso do rato, e o eletrodo negativo na parede abdominal. Nos 7º e 14º dias foram coletadas a pele do rato e o tecido cicatricial, sendo os animais submetidos à eutanásia. Foi realizada histomorfometria para infiltrado inflamatório, vasos neoformados, fibroblastos, para colágeno tipos I e III. RESULTADOS: O Grupo Estimulado, no 7º dia, apresentou maior quantidade de vasos sanguíneos e fibroblastos, assim como diferença estatística com menor densidade do colágeno tipo III, mas não revelou diferença estatística, quanto aos mastócitos e às fibras de colágeno tipo I. CONCLUSÃO: A estimulação elétrica com polaridade positiva, no pré-operatório, aumentou a quantidade de fibroblastos e de vasos sanguíneos e diminuiu a densidade do colágeno tipo III na cicatriz no 7º dia pós-operatório. / BACKGRAUND: In vitro studies have demonstrated that electrical current may affect the proliferation of fibroblast, and synthesis of collagen fibers. OBJECTIVE: To evaluate the effects of preoperative electrical stimulation on cutaneous wound healing in rats. METHODS: Forty rats were divided into two groups of 20 animals each. In the control group, an incision was made on back of the animals. In the stimulation group, a preoperative electrical stimulation was applied using a rectangular pulse current at a frequency of 7.7Hz, and intensity of 8mA, for 30 minutes, with the positive electrode placed on the back of the animal, and the negative electrode placed on the abdominal wall. Following, an incision was made on their back. Biopsy on the postoperative days 7 and 14, and histological analysis was performed. RESULTS: The stimulated group, at day 7, showed a greater number of newly formed vessels and fibroblasts, and a statistical difference with lower density of collagen type III, bud no statistical difference were observed for mast cells and fibers of collagen type I. CONCLUSION: Preoperative electrical stimulation with positive polarity increased the amount of fibroblasts and blood vessels and decreased the density of collagen type III in the scar at the postoperative day 7. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:26Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-08-25 / A pele dos anfíbios atua em muitas funções vitais, relacionadas à atividade de dois tipos de glândulas cutâneas: mucosas e granulosas. As glândulas granulosas (de veneno) atuam na defesa química que caracteriza os anfíbios, secretando uma grande diversidade de compostos. A presença de secreções de alta toxicidade está frequentemente associada a padrões de colorido chamativos, ditos apossemáticos, reconhecidos e evitado por predadores. O colorido de espécies apossemáticas pode estar presente também em certas espécies indefesas, que assim adquirem proteção, um fenômeno designado mimetismo batesiano. Por outro lado, um conjunto de espécies tóxicas pode apresentar colorido semelhante, caracterizando o chamado mimetismo mulleriano. Dentre os anfíbios, muitos casos de mimetismo envolvem rãs tóxicas e apossemáticas da família Dendrobatidae. A rã Leptodactylus lineatus (família Leptodactylidae) possui colorido similar ao de vários dendrobatídeos, em especial ao de Ameerega picta. Embora assumido como um mímico de A. picta, dentre outros dendrobatídeos, não há de fato evidências de que L. lineatus não secrete toxinas. Uma terceira espécie, Leptodactylus andreae, guarda semelhanças com essas duas no padrão de colorido. Essa investigação tencionou esclarecer a síndrome mimética envolvendo essas três espécies. Objetivou-se determinar: há mimetismo entre elas? Se sim, ele é de natureza batesiana ou mulleriana? Para tanto, atentou-se para a morfologia cutânea, com foco na estrutura e distribuição das glândulas de veneno, assim como para a bioquímica das secreções, o colorido da pele e informações de sua história natural. Foi observado que L. lineatus possui grande número de glândulas granulosas, que se apresentam concentradas em regiões de acúmulo na face dorsal e ventral do corpo. No dorso, esses acúmulos apresentam notável correlação com a posição de listas e manchas, sugerindo que o colorido sinaliza regiões onde o veneno está concentrado. Essas regiões são enfatizadas por um conjunto de posturas defensivas, que podem aumentar as chances de contato do predador com as toxinas ou favorecer o reconhecimento de L. lineatus. A distribuição glandular de L. andreae é semelhante, mas os acúmulos são mal definidos e possuem muito baixa densidade. A. picta, por outro lado, possui distribuição de glândulas uniforme no dorso e ventre. A caracterização histoquímica, bioquímica e ultraestrutural sugerem grande quantidade e diversidade de proteínas nas secreções de L. lineatus, dotadas de significativa atividade enzimática proteolítica. Por outro lado, as proteínas estão praticamente ausentes das secreções de A. picta, nas quais foram detectadas mucossubstâncias de caráter glicídico, que podem contribuir para a toxicidade da espécie. Os dados sugerem que, assim como A. picta, L. lineatus é uma espécie tóxica, que parece atuar como um co-mímico mulleriano desse e possivelmente de outros dendrobatídeos. Em contraste, a morfologia cutânea sugere que L. andreae apresenta baixa toxicidade, possivelmente atuando como um mímico batesiano de A. picta e L. lineatus. São apresentados dados sobre outros atributos da pele, como as glândulas mucosas e a presença de uma camada calcificada na derme. Os resultados são discutidos no contexto de diferenças entre as espécies com relação ao comportamento e ecologia. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações