Made available in DSpace on 2015-05-14T16:53:33Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-06Bitstream added on 2015-05-14T16:58:40Z : No. of bitstreams: 1 000828889.pdf: 1474303 bytes, checksum: 5e90c0d81b102049672685d3cfea7b62 (MD5)

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2016. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2016-04-18T13:37:34Z No. of bitstreams: 1 2016_JanainaGomesPenteado.pdf: 1707561 bytes, checksum: 7d887c75501d8d6d5bb010f333c4e8e9 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2016-04-18T20:06:56Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_JanainaGomesPenteado.pdf: 1707561 bytes, checksum: 7d887c75501d8d6d5bb010f333c4e8e9 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-18T20:06:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_JanainaGomesPenteado.pdf: 1707561 bytes, checksum: 7d887c75501d8d6d5bb010f333c4e8e9 (MD5) / Entre os tipos de câncer de pele, o melanoma é responsável por 4% dos casos. É o mais agressivo, por possuir um alto potencial metastático. Como proposta para um tratamento mais efeciente e que cause menos danos estéticos, foi utilizada a Terapia Fotodinâmica (TFD) como um sistema que proporcionasse uma futura utilização por via tópica. No presente trabalho as micelas de Pluronic® F127 contendo 1, 5 e 10 μg/mL do fotossensibilizante alumínio-cloro-ftalocianina (NP F127/AlClPc), as micelas foram utilizadas para investigar os efeitos da TFD em células de melanoma murino. NP F127/AlClPc foram avaliadas quanto a sua estabilidade e caracterização fotofísica e fotoquímica O diâmetro hidrodinâmico (DH) médio de NP F127/AlClPc com 1 μg/mL de ALCLPc foi de 22 nm ; 42,03 nm para 5 μg/mL e 152,9 nm para 10 μg/mL a ~25 °C. O índice de polidispersão foi 0,43 para 1 μg/mL; 0,68 para 5 μg/mL; 0,37 para 10 μg/mL, e o potencial zeta (PZ) de -2,71mV para 1 μg/mL; -0,11mV para 5 μg/mL e -0,58 mV para 10 μg/mL, mostrando que as micelas são polidispersas. NP F127/AlClPc apresentou máxima absorbância a 670 nm e fluorescencia a 680 nm.Duas linhagens celulares foram utilizadas: B16F10 (melanoma murino) e B16F10FF (melanoma murino modificadas com FireFly Luciferase). Somente a irradiação com a luz LED ou a exposição das células a diferentes concentrações de NP F127/AlClPc não causaram toxicidade em ambas as linhagens celulares. Quando aplicada a TFD com fluência de 85,1 J/cm2. Os resultados de citotoxicidade da NP F127/AlClPc, com vários tempos de incubação, mostrou uma maior eficácia em células B16F10 do que em células B16F10FF. A concentração de 1 μg/mL; 5 μg/mL;10 μg/mL mostraram-se mais eficaz no tempo de incubação de 20 e 25 minutos para as células B16F10. Pelo mesmo tempo de exposição de 25 minutos, as células B16F10FF mostraram-se mais resistentes ao tratamento. A citotoxicidade sem irradiação e com irradiação do LED mostrou que as micelas não causaram toxicidade em ambas as linhagens celulares. As células expostas à NP F127/AlClPc nas concentração de 1 μg/mL; 5 μg/mL; 10 μg/mL por 15, 20 e 25 minutos e irradiadas com a fluência de 85,1 J/cm2, mostraram que células B16F10 tratadas com a NP F127/AlClPc 10 μg/mL apresentaram viabilidade de 25%, enquanto as células B16F10FF sob as mesmas condições apresentaram viabilidade de 64%. A citotoxicidade nas células B16F10FF foi de 7% para o tempo de incubação de 20 minutos e de 3 a 4% nos tempos de 15 e 25 minutos, quando estas células sofream duas incubações (24-48 horas) e duas aplicações de TFD (24-48 horas). Pode-se concluir então que, a NP F127/AlClPc apresentou características fotofísicas e fotoquímicas favoráveis para o seu uso da TFD. _______________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Melanoma accounts for 4% of cases among skin cancer types. But it is the most aggressive with a high metastatic potential. Photodynamic therapy (PDT) was used as an alternative efficient and less damage inducing treatment in comparison to chemotherapy for topical application. In the present work Pluronic® F127 micelles containing 1, 5 and 10 μg /mL of the photosensitizer aluminum-chlorophthalotocyanine (F127/AlClPc). The micelles were used to investigate the effects of PDT on murine melanoma cells. Their stability, photophysical characteristics and photochemistry was evaluated. The hydrodynamic diameter for the micelles carrying 1μg/mL, 5μg/mL and 10μg/mL was 22nm, 42.04nm and 152.9nm respectively. The poly dispersity index for the micelles with 1mg/mL, 5mg/mL and 10mg/mL were 0.43, 0.68 and 0.37 respectively. The zeta potential for the micelles with 1μg/mL, 5μg/mL and 10μg/mL F127/AlClPc were -2.7mV,-0.11mV and -0.58mV. The micelles showed maximum absorbance at 670nm and fluorescence at 680nm. Two cell lines were evaluated B16F10 (murine melanoma) and B16F10FF (murine melanoma modified with firefly luciferase). The irradiation of LED with light or with different concentration of F127 / AlClPc did not cause toxicity to both cell lines when the PDT fluent was 85.1 J / cm2. The cytotoxity results of the micelles F127/AlClPc at various incubation times was more prominent with B16F10 than B16F10FF. The concentration of 1μg/mL, 5μg/mL and 10 μg/mL were more effective against B16F10 cells when incubated for 20 minutes and 25 minutes. However, for B16F10FF cells they were resistant to treatment after 25 minutes of incubation. The cytotoxicity with either irradiation or without showed that the micelles did not cause toxicity to both cells. Upon exposure to 1μg/mL, 5μg/mL and 10 μg/mL for 15, 20 and 25 minutes and irradiation of fluency 85.1 J / cm2 B16F10 presented a viability of 25% while B16F10FF had 64%. After incubation of 15, 20 and 25 minutes the cytotoxicity of B16F10FF cells was 3%, 7% and 4% respectively when the cells were incubated (24-48 hours) and PDT was applied twice (24-48 hours). It can be concluded that the micelles with F127 / AlClPc presented photophysical and photochemical characteristics favorable for use in photodynamic therapy.

Orientador: Mariângela Esther Alencar Marques / Coorientador: Luciane Donida Bartoli Miot / Coorientador: Hélio Amante Miot / Banca: Ediléia Bagatin / Banca: Samira Yarak / Banca: Luciana Patricia Fernandes Abbade / Banca: Juliano Vilaverde Schmitt / Banca: Mariângela Esther Alencar Marques / Resumo: Não disponível / Abstract: Not available / Doutor

Avanços na medicina e o desenvolvimento tecnológico têm contribuído para o aumento na sobrevida dos prematuros, no entanto, em virtude da sofisticação dos recursos, um maior número de procedimentos invasivos se faz necessário, incluindo a dor como um custo à sobrevida desses pacientes. O objetivo deste estudo foi testar a efetividade do contato pele a pele na diminuição das respostas comportamentais e fisiológicas de dor no prematuro, durante a punção de calcâneo para coleta do Teste do Pezinho. Trata-se de um estudo analítico-experimental randomizado, realizado na unidade de cuidado intermediário neonatal de um hospital universitário de Ribeirão Preto - SP. A amostra constituiu-se de 59 prematuros submetidos à coleta do Teste do Pezinho, divididos aleatoriamente em dois grupos: experimental (n=31), submetido ao contato materno pele a pele por 15 minutos antes e durante todo o procedimento, e controle (n=28) cujos bebês eram mantidos no berço ou incubadora durante todo o procedimento. O projeto foi aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa da instituição, e o Termo de Consentimento Livre e Esclarecido foi firmado com as mães ou responsáveis pelos prematuros. As variáveis comportamentais (mímica facial, estado de sono e vigília e choro) foram registradas continuamente pela filmagem por uma câmera durante a coleta de dados. A variável fisiológica (freqüência cardíaca) foi mensurada por um monitor cardíaco. A coleta foi dividida em sete períodos: basal, tratamento, antissepsia, punção, ordenha, compressão e recuperação. Como não se comprovou a normalidade das variáveis quantitativas, fez-se a comparação entre os dois grupos utilizando-se o teste não-paramétrico para duas amostras independentes, Mann-Whitney. Para as variáveis qualitativas, utilizou-se o Qui-Quadrado ou Teste Exato de Fisher. Na comparação dos resultados dos escores do Neonatal Facing Coding System (NFCS), do estado de sono e vigília e da média da freqüência cardíaca intra-sujeitos e entregrupos, utilizou-se a ANOVA com medidas repetidas. Nas comparações do NFCS entre os grupos, utilizou-se a ANCOVA e estratificação direta. Os valores médios do NFCS foram inferiores no grupo experimental em todos os períodos com diferença estatisticamente significativa nos períodos de punção e ordenha em comparação ao grupo controle, mesmo ao se controlar a idade corrigida, idade pós-natal, experiência prévia de dor e o sexo. O choro foi o estado de sono e vigília mais incidente na punção e ordenha em ambos os grupos, sendo que, na ordenha, os bebês do grupo controle permaneceram chorando em maior proporção do que no experimental (85,7 vs 58,1%). Na recuperação, 71,0% do grupo experimental estavam em sono profundo em comparação com 21,4% no controle. O tempo médio de choro diferiu significativamente entre os grupos, sendo maior no controle. Houve elevação da freqüência cardíaca como resposta ao procedimento, mas a diferença não foi estatisticamente significativa entregrupos, todavia no grupo experimental houve retorno próximo ao valor médio basal na recuperação; no controle manteve-se acima de 160 bpm da antissepsia à recuperação. Comprovou-se a efetividade do contato pele a pele no alívio da dor em prematuros, constituindo-se em medida simples e natural, sem custos adicionais, podendo ser aplicada em diversas situações de dor aguda. / Advances in medicine and technological development have contributed to increase in preterm infants? survival. However, due to resource sophistication, more invasive procedures are needed, including pain as a price to pay for these patients? survival. This research aimed to test the efficacy of skin-to-skin contact to decrease preterm infants? behavioral and physiological pain response during heel lancing to collect the PKU test. This analytic randomized trial was carried out at the intermediary neonatal care unit of a university hospital in Ribeirão Preto - SP. The sample consisted of 59 preterm infants who were submitted to PKU test collection, randomly divided in two groups: experimental (n=31), submitted to skin-to-skin contact with the mother for 15 minutes before and during the entire procedure, and control (n=28), whose babies were held in the cot or incubator during the entire procedure. The project was approved by the institutional Research Ethics Committee, and the mothers or responsibles for the infants signed the Free and Informed Consent Term. The behavioral variables (facial mimics, sleep-wake state and cry response) were continuously recorded by a camera during data collection. The physiological variable (heart frequency) was measured by a heart monitor. Data collection was divided in seven periods: baseline, treatment, antisepsis, heel lancing, heel squeezing, compression and recovery. As the normality of the quantitative variables was not proved, the two groups were compared, using Mann-Whitney?s nonparametric test for two independent samples. For the qualitative variables, Chi-Square or Fisher?s Exact Test was applied. Variance analysis with repeated means was used to compare NFCS scores, sleep-wake state and mean heart frequencies within and between subjects. Covariance analysis and direct stratification were used to compare NFCS scores between the groups. Mean NFCS scores were lower in the experimental group across all periods, with statistically significant differences during heel lancing and squeezing in comparison with the control group, even when controlling for corrected age, postnatal age, previous pain experience and gender. Crying was the most incident sleep-wake state during lancing and squeezing in both group. During squeezing, babies in the control group continued crying longer than in the experimental group (85.7 vs. 58.1%). During recovery, 71.0% of the experimental group was in deep sleep, against 21.4% of controls. Mean crying time differed between the groups, with statistical significance, and was longer in the control group. Heart frequencies increased in response to the procedure, but intergroup differences were not statistically significant. However, during recovery, babies in the experimental groups returned close to mean baseline levels, while heart rates in the control group continued above 160 bpm from antisepsis until recovery. Results prove the efficacy of skin-to-skin contact proved to be effective for pain relief in preterm infants, constituting a simple and natural measure, without additional costs and easily applicable in different acute pain situations.

Submitted by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2015-04-01T20:56:35Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Lana Bezerra Fernandes - 2014.pdf: 2091741 bytes, checksum: d2de505d009cccbbff3717ebe19797ba (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2015-04-01T21:13:22Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Lana Bezerra Fernandes - 2014.pdf: 2091741 bytes, checksum: d2de505d009cccbbff3717ebe19797ba (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-01T21:13:22Z (GMT). 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The variables were analyzed by calculating relative and absolute frequencies and chi-square test for categorical variables. Set value of 5% for significance. RESULTS: Physiological skin changes showed most high phototype and its prevalence was 88.95%. Among these the most common abnormality was hyperpigmentation (87.95%), followed by the appearance of new stretch marks (46.96%). The period of emergence of the changes was greater in the 3rd quarter and compared to other quarters was no statistical difference between them and the type of prenatal care was no statistical difference. The specific skin dermatoses showed most high phototype and its prevalence was 8.72%. Among these the Atopic Eruption was the most common (70.88%), followed by intrahepatic cholestasis (18.98%). The 3rd quarter was the only one to show a statistical difference compared to other quarters. However, when compared to the emergence of these type of prenatal this difference was not significant. CONCLUSION: The prevalence of cutaneous physiological changes of pregnancy was 88.95%, and the specific dermatoses of pregnancy was 8.72% The most common time of onset of physiological changes was in the 3rd trimester, as well as the specific dermatoses. No statistical difference in prenatal low risk compared to high risk was observed, whereas the cutaneous physiological changes specific dermatoses / FUNDAMENTO: Durante a gravidez ocorrem alterações imunológicas, metabólicas, endócrinas e vasculares responsáveis por alterações cutâneas fisiológicas e patológicas. OBJETIVOS: Estabelecer a prevalência das alterações cutâneas fisiológicas e das dermatoses específicas gestacionais, comparar o período da idade gestacional de seu surgimento e comparar tipo de pré-natal (baixo e alto risco) quanto às alterações dermatológicas. MÉTODOS: Estudo transversal analítico realizado com 905 gestantes no ambulatório de pré-natal de baixo e alto risco do Hospital das Clínicas/UFG. A gestante foi submetida ao exame dermatológico completo, obedecendo dinâmica cefalo-podal. Foram solicitados exames laboratoriais e biópsias para diagnósticos diferenciais. As variáveis foram estudadas através dos cálculos de frequências relativas e absolutas e teste Qui-quadrado para variáveis categóricas. Estabelecido valor de 5% para significância. RESULTADOS: As alterações cutâneas fisiológicas apresentaram maioria fototipo alto e sua prevalência foi de 88,95%. Dentre estas a alteração mais comum foi a pigmentar (87,95%), seguida pelo aparecimento de novas estrias (46,96%). O período de surgimento das alterações foi maior no 3º trimestre e comparado aos outros trimestres houve diferença estatística entre eles e quanto ao tipo de pré-natal não foi houve diferença estatística. As dermatoses cutâneas específicas apresentaram maioria fototipo alto e sua prevalência foi de 8,72%. Dentre estas a Erupção Atópica foi a mais comum (70,88%); seguida pela Colestase Intra-hepática (18,98%). O 3º trimestre foi o único a apresentar diferença estatística comparado aos demais trimestres. Já quando comparado o surgimento destas ao tipo do pré-natal esta diferença não se mostrou significativa. CONCLUSÃO: A prevalência de alterações fisiológicas cutâneas gestacionais foi de 88,95%, sendo que a das dermatoses específicas gestacionais foi de 8,72%. O momento mais comum de surgimento de alterações fisiológicas foi no 3º trimestre gestacional, assim como o das dermatoses específicas. Não se observou diferença estatística no pré-natal de baixo risco comparado com o de alto risco, considerando as alterações fisiológicas cutâneas e as dermatoses específicas gestacionais.

No Brasil, o câncer de pele não-melanoma é o tipo de câncer mais comum, corresponde a cerca de 95% de todos os tipos de câncer de pele e 25% de todo o tipo de tumor maligno. O diagnóstico precoce permite tratar lesões logo nos primeiros estágios da doença, melhorando as condições do paciente. Assim, é de grande importância desenvolver técnicas para auxiliar o diagnóstico, como a fluorescência marcada. Ela consiste em usar substâncias fotossensíveis como biomarcadores e analisar sua resposta de fluorescência à excitação por luz. O uso do ácido aminolevulínico (ALA) é de interesse para tal, pois apresenta seletividade para formação da protoporfirina IX (PpIX) em células alteradas, substância esta que apresenta boa resposta de fluorescência à excitação por luz (região do UV-Azul). Para um diagnóstico adequado, portanto, é necessário entender melhor o comportamento da luz em meios túrbidos, como a pele. Assim, o objetivo do estudo é investigar fenômenos envolvidos com esta técnica in vitro e in vivo. Para a análise in vitro foi usado um phantom de pele contendo 2% de nanquim, 1% de Lipofundin® e 5% BRIJ-35. Um derivado de porfirinas (Photogem®) foi inserido no interior dessa solução e excitado de formas diferentes para estudar o comportamento da fluorescência, da luz de excitação e de ambas. No ensaio clínico, soluções de ALA (5% e 10%) foram aplicadas em lesões de pele malignas e potencialmente malignizáveis, e em intervalos regulares de tempo (15, 30, 45 e 60 minutos), as imagens de fluorescência foram coletadas com o protótipo de um sistema de diagnóstico por imagem de fluorescência. A diferente atenuação dos comprimentos de onda envolvidos foi quantificada in vitro. Verificou-se que o limitante do diagnóstico é a luz de excitação, sua penetração limitada em meios túrbidos impede que esta chegue à camadas profundas do tecido com uma intensidade suficiente para excitar o centro fluorescente, de modo que a fluorescência emitida possa ser detectada na superfície do tecido. Na investigação in vivo, o ALA proporcionou uma fluorescência marcada que distinguiu significantemente a pele normal da tumoral e as lesões de pele pré-malignas foram identificadas através de sua autofluorescência. A técnica de diagnóstico contribuiu também para a identificação das bordas da lesão, o que é muito importante para um tratamento eficaz. / Non melanoma skin cancer is the most common cancer lesion in Brazil. It represents about 95% of all skin cancer lesions, and 25% of tumor types. Early diagnosis allows treatment of lesions in the initial stages of the disease, improving patient´s condition. Thus, it is of great importance the development of techniques to aid diagnosis, such as marked fluorescence. This technique consists in using photosensitive substances as biomarkers and analyzing their fluorescence response to light excitation. The use of aminolevulinic acid (ALA) as a biomarker precursor is interesting because it shows selectivity for protoporphyrin IX (PpIX) formation in abnormal cells. This substance shows high fluorescence yield when excited with UV-blue range of light spectrum. For an appropriate diagnosis, therefore, better understanding of light propagation in a turbid media, such as skin, is needed. This study aim is to investigate the phenomena involved with this technique in vitro and in vivo. For in vitro analysis, a skin phantom containing 2% India ink, 1% Lipofundin® and 5% BRIJ-35 was used. A haematoporphyrin derivative (Photogem®) was placed into this phantom and excited using different setups to study fluorescence propagation and the excitation light, both individually and simultaneously. In the clinical trial, ALA water solutions (in 5% and 10% concentration) were applied to malignant and pre malignant skin lesions. At regular time intervals (15, 30, 45 and 60 minutes), fluorescence images were collected with a prototype system for fluorescence imaging. Attenuation for different wavelengths was quantified in vitro. Results show that the limiting factor for diagnosis is the excitation light penetration in turbid media the short penetration of UV-blue light avoids it to reach deeper tissue layers with sufficient intensity to excite the fluorescence sources, so that the fluorescence detected on the tissue surface comes from a limited depth. For in vivo research, ALA has provided a marked fluorescence that allowed distinguishing, significantly, normal and tumor skin. Pre-malignant lesions were identified by own autofluorescence, not requiring biomarking. The diagnostic technique also helped to better determine lesion edges, which is very important for effective treatment of malignant/pre-malignant lesions.

O câncer não-melanoma corresponde a 25% de todos os tumores e é caracterizado por uma neoplasia dos queratinócitos. Evidências mostram que a resistência a apoptose é uma das características para o surgimento e evolução dos tumores malignos. A proposta deste trabalho foi estudar quais funções as moléculas BIM, PUMA e Fas desempenham nos queratinócitos quando submetidas à transformações celulares, como UVB e DMBA, e indutores de apoptose. Para isso foi estabelecido cultura primaria de queratinócitos de neonatos das linhagens C57Bl/6 WT; PUMA KO; LPR. As células foram tratadas com AD, VP-16, CHX, UVB e DMBA in vitro. Observamos a expressão de Bid, Bim, Bax no tratamento com UVB. Avaliamos o perfil de desenvolvimento do tumor nesses animais utilizando um modelo de tumorigenese química in vivo. Os queratinócitos deficientes em PUMA e Fas se comportam de maneira semelhante no tratamento com quimioterápicos, no entanto, no tratamento com carcinógenos a molécula Fas desempenha um papel mais relevante na indução de morte celular e no desenvolvimento da carcinogênese. / The non-melanoma cancer accounts for 25% of all tumors and is characterized by a neoplasm of keratinocytes. Evidence shows that apoptosis resistance is one of the characteristics for the emergence and development of malignant tumors. The This study investigated what roles the BIM, PUMA and Fas molecules play in keratinocytes when subjected to cell transformations, such as UVB and DMBA, and apoptosis inducers. For this, keratinocytes primary culture was established from neonatal skin to C57BL / 6 WT; PUMA KO; LPR. The cells were treated with AD, VP-16, CHX, UVB and DMBA in vitro. We observed the expression of Bid, Bim, Bax in treatment with UVB. We evaluated tumor development profile in these animals using a model of chemical tumorigenesis in vivo. PUMA-deficient keratinocytes and Fas mutant have similarly behave in chemotherapy treatment, however, Fas molecule plays a more important role in the induction of cell death with the treatment with carcinogens in the development and carcinogenesis.

Os melanomas são o tipo mais mortal de câncer de pele, apesar da baixa incidência, 80% das mortes de câncer de pele são devem-se ao melanoma metastático. Novas abordagens farmacológicas e a busca por novos compostos para a terapêutica do melanoma, em aplicações isolados ou em combinação com outros fármacos é imprescindível. Esta busca ocorre principalmente no campo das terapias de alvos específicos, devido à aquisição de resistência tumoral e recidiva. O resveratrol (RES) é um polifenol com atividade anti-oxidante, e seu efeito anti-tumoral foi mostrado pela indução de morte celular, porém o seu estudo não foi aprofundado pela inviabilidade do uso de altas doses in vitro para observação de efeitos celulares. Outro composto, o 2-methoxiestradiol (2ME) é um metabólito do estrógeno cujo efeitos anti-câncer já foi demonstrado em melanoma, porém sem elucidação das vias de sinalização envolvidas. O efeito em células com resistência adquirida também nunca foram testados. Neste estudo ampliamos o painel de linhagens celulares de melanoma humano, e demonstramos que o 2ME induz morte celular, inibe a proliferação destas células sendo que esta inibição está associada a indução de senescência. Pela primeira vez foi observada a inibição de proliferação pelo 2ME em células com a mutação BRAF V600E resistentes ao vemurafenibe (inibidor de BRAF) e duplo resistentes ao vemurafenibe e trametinibe (inibidor de MEK). A inibição de proliferação foi acompanhada pela modulação de p21Cip1, Ciclina B1, pRb, proteínas envolvidas na regulação do ciclo celular. A exposição prolongada ao 2ME inibiu a formação de colônias em todas as linhagens de melanoma (não resistentes e resistentes), mas não teve o mesmo efeito em fibroblastos primários, mostrando efeito seletivo. Em modelo tridimensional de esferóides, foi observado que as linhagens resistentes (Sk-Mel-28R) e duplo resistentes (Sk- Mel-28RT) são mais invasivas que a parental (Sk-Mel-28). Neste modelo, o 2ME foi capaz de inibir a invasão e viabilidade destas células. No modelo de pele reconstituída, na ausência de tratamento, observa-se invasão das células de melanoma pela derme, porém este fenômeno é diminuído quando as peles são tratadas com 2ME. Estes resultados demonstram que o 2ME é um efetivo agente anti-melanoma, independente de sua resistência. / Melanomas are the deadliest type of skin cancer, and in spite of the low incidence, 80% of the skin cancer associated death cases are due to metastatic melanoma. New pharmacological approaches and the search of new compounds for melanoma therapeutics, for monotherapy or combination therapy, are essential. This search occurs mainly in the targeted therapy field because of the melanoma acquisition of resistance to the current treatments. Resveratrol (RES) is a polyphenol with anti-oxidant activity, and its anti-tumor effect has been shown through the induction of cell death. However, the study of this compound has been discontinued in this work due to the impossibility of using high doses in vitro for the observation of cellular effects. Another compound, 2-methoxyestradiol (2ME) is a metabolite from estrogen, and its anti-cancer effects has already been shown in melanoma, but with no elucidation of the signaling pathways involved. Furthermore, the effects in cells with acquired resistance have never been shown. In this study we used a broader panel of human melanoma cell lines and demonstrated that 2ME induces cell death, inhibits proliferation of these cells, and this inhibition is associated with the induction of cell senescence. The inhibition of proliferation caused by 2ME was observed for the first time in BRAF V600E cells that are resistant to Vemurafenib (BRAF inhibitor) and double resistant to Vemurafenib and Trametinib (MEK inhibitor). The proliferation inhibition was related to the modulation of p21Cip1,Cyclin B1 and pRb, which are proteins involved in cell cycle regulation. Long exposure to 2ME in colony formation assay showed the inhibition of colony in all melanoma cell lines (regardless of resistance and mutational status), but not in primary fibroblasts, showing selective effect. In three-dimensional spheroid model, it was observed that the resistant (Sk-Mel- 28R) and double-resistant (Sk-Mel-28RT) cell lines were more invasive than the parental cell line (Sk-Mel-28). In this model, 2ME was able to inhibit cell invasion and cell viability. In the skin reconstruct model, in the absence of treatment, melanoma cell invasion can be observed in the dermis layer. However, after the treatment with 2ME these cell invasion foci are inhibited. Altogether, these effects demonstrate that 2ME is an effective anti-melanoma agent, regardless of resistance.

A thesis submitted in fulfilment of the requirements for the degree of Doctor of Philosophy in the Department of Communication Science at the University of Zululand, South Africa, 2012. / The under-resourced and overused public health sector of South Africa has been the subject of national policy reform initiatives and frequent government led investigations. Subsequently, in October 1997, the government introduced eight Batho Pele principles to serve as acceptable policy and legislative framework regarding service delivery in the public service. However the media has constantly criticised the public health system for their pathetic service delivery. Hospitals and clinics have been portrayed as being overburdened and under-productive. Multiple efforts by the government to remedy (and rescue) the situation have not decreased nor diminished the problems. The primary goal of this study is to examine the current quality of service offered by the public health system in South Africa especially in terms of service delivery proposed by the Batho Pele principles. More importantly, how the Batho Pele principles are communicated to the external publics will be evaluated to ascertain the challenges key government sectors face in the adoption and application of these principles. The participation of patients and staff members of two public health facilities in KwaZulu-Natal provided this study with valuable information on which this study is based. The data was collected through the use of structured interviews of in-patients and questionnaires for both outpatients and staff members. A total of 255 patients and 92 staff members participated in this study. Further, the study exposes provocative and controversial issues in the public health system and hopes to stir awareness amongst its respective leaders and its publics. This study demonstrates how challenges faced by the public health organisations through poor ineffective communication techniques caused it to fail to meets its intended purpose. This study also exposes provocative and controversial challenges which place our health care system at risk of total annihilation if left unattended. The study speaks to issues of accountability such as: planning, budgeting and decision making and the plight of the people of our nation.

The purpose of this study was to assess perceptions of the Lichtenburg community regarding service delivery and communication by the Department of Home Affairs (DHA) in The Lichtenburg municipality. A structured questionnaire was used to gather data from a sample of 80 respondents. The questionnaire consisted of four sections that the respondents were to answer. The study revealed that DHA officials in Lichtenburg are trained, that they adhere to the Bathe Pele Principles, are good communicators and that they also maintain high ethical standards. Officials also have access to the necessary equipment, and have the necessary time and support to render services to the public. Although there are some shortcomings among officials - such as the absence of name tags, office cleanliness and the unfriendliness among some officials - respondents are still happy to conduct business with the DHA in Lichtenburg. Some of the shortcomings identified can be addressed within a short space of time, such as consistently wearing name tags. Addressing other shortcomings, such as the provision of human resources, will require the attention of the top ranks of government leadership, who will need to incorporate these into their planning processes. In general, the DHA in Lichtenburg is trying its best to render efficient and effective services to its clients. The study found that the public knows what is expected from the DHA when they require its services, and they are able to express these views freely. The DHA interacts with the public on a daily basis in rendering essential services such as the issuance of identification documents, passports, birth, marriage and death certificates; and its clients cannot obtain these anywhere else. Consequently, it is essential that the DHA maintains high ethical standards. It is important for the DHA to provide regular training and workshops to help its employees to keep abreast of new developments. This will help to ensure that the department maintains a high level of service delivery. The study's findings should serve as a guide to measure the performance of other DHA offices. It is recommended that regular studies of this nature be conducted to help identify any gaps in service, and to address them accordingly. / M Development and Management, North-West University, Potchefstroom Campus, 2014