Resumo: A cana-de-açúcar é uma das culturas mais plantadas no mundo e o Brasil é o maior produtor e exportador de açúcar. Pensando no aumento dessas exportações, pesquisas vêm sendo realizadas para se conseguir cultivares mais resistentes a pragas e intempéries. Uma possibilidade é a transformação genética, porém são necessários aperfeiçoar os protocolos existentes de regeneração in vitro de plantas, pois cada cultivar de cana-de-açúcar responde de forma distinta em meio nutritivo. Nesse contexto, experimentos para obtenção de calos embriogênicos foram realizados, a fim de possibilitar estudos posteriores de transformação genética da cultura por biobalística. Diante disso, objetivou-se estabelecer protocolos de regeneração in vitro para três cultivares e um clone de cana-de-açúcar, visando a obtenção de calos embriogênicos. Sendo assim, os experimentos foram realizados em etapas, testando cinco concentrações de 2,4-D (1, 3, 9, 16 e 27 ?M) em RB986419 e RB966928. Para o cultivar RB855156, analisou-se a influencia da luminosidade e três concentrações de 2,4-D (3, 9 e 16 ?M) sobre a formação de calos embriogênicos. Testes com diferentes meios de cultura (MS, MS/2 e MS/Fe) em cinco concentrações de 2,4-D (1, 3, 9, 16 e 27 ?M) foram realizados no cultivar RB72454. Pôde-se concluir que a utilização de 9 ?M para RB986419 e 16 ?M de 2,4-D para o cultivar RB966928 propiciaram maiores formações de calos embriogênicos e regeneração de plantas. O cultivar RB855156 tem maiores porcentagens de formação da embriogênese somática no escuro, com reduzida oxidação dos explantes. A calogênese do cultivar RB72454 é mais facilmente obtida em meio de cultura com a redução dos macro e micronutrientes em concentrações de 9 e 16 ?M de 2,4-D.

A família Orchidaceae apresenta imensa diversidade taxonômica, bioquímica, fisiológica e genética. Por essa razão não existe um modelo único que possibilite o sucesso na propagação in vitro para todas as suas espécies e variedades. Assim, esse trabalho teve como objetivo estudar aspectos envolvidos com a propagação, o desenvolvimento inicial in vitro e a aclimatização de Brassavola martiana Lindl., espécie ocorrente no estado do Tocantins. Testou-se os efeitos dos meios de cultura de Knudson C [KC], de Vacin e Went [VW] e de Murashige e Skoog nas concentrações de 100 e 50% de seus macronutrientes [MS e ½MS] na germinação e desenvolvimento inicial in vitro. Analisou-se também a influência da idade das sementes no processo germinativo. Foram avaliados os efeitos de diferentes concentrações de sacarose (0%, 1%, 2%, 3%, 4%, 5% e 6%) bem como do ácido naftalenoacético (ANA) e da benziladenina (BA) em combinações de 0; 0,57; e 2,28 μM na multiplicação e desenvolvimento de plantas, em experimentos separados. Verificou-se também a possibilidade de se multiplicar a espécie por meio de segmentos caulinares estiolados. Por fim, foi desenvolvido um protocolo para aclimatização de B. martiana utilizando-se substratos comerciais. O meio ½MS foi o mais promissor para a germinação de B. martiana, enquanto que o KC foi o melhor para o desenvolvimento dos protocormos e formação de novas plantas. Para a obtenção de uma germinabilidade superior a 60% recomenda-se utilizar sementes com pelo menos 7 meses de idade. A adição de 3% de sacarose ao meio de cultura favoreceu a multiplicação e desenvolvimento in vitro. O uso de concentrações iguais de ANA e BA (0,57 μM) favoreceu o desenvolvimento tanto da parte aérea quanto das raízes. A utilização de segmentos caulinares estiolados foi eficaz para a propagação de B. martiana. Para a aclimatização, as plantas de B. martiana devem inicialmente serem transferidas para recipientes comunitários contendo o substrato Bioplant e após oito semanas transplantadas para vasos individuais contendo o substrato Ouro Negro e cultivados durante 90 dias. A porcentagem de sobrevivência das plantas foi considerada satisfatória. / The Orchidaceae family presents immense taxonomic, biochemical, physiological and genetic diversity. For this reason, there is no single model that allows the success of in vitro propagation for all species and varieties. Thus, the objective of this work was to study aspects involved in the propagation, initial in vitro development and acclimatization of Brassavola martiana Lindl., A species occurring in the state of Tocantins. The effects of the cultivation media of Knudson C [KC], Vacin and Went [VW] and Murashige and Skoog at the concentrations of 100 and 50% of their macronutrients [MS and ½MS] on initial in vitro germination and development. The influence of seed age on the germination process was also analyzed. The effects of different concentrations of sucrose (0%, 1%, 2%, 3%, 4%, 5% and 6%) as well as naphthaleneacetic acid (ANA) and benzyladenine (BA) were evaluated in combinations of 0; 0.57; and 2.28 μM in plant multiplication and development, in separate experiments. It was also verified the possibility of multiplying the species by means of stretched cauline segments. Finally, a protocol for the acclimatization of B. martiana was developed using commercial substrates. The ½MS medium was the most promising for the germination of B. martiana, while the KC was the best for the development of protocormos and formation of new plants. To obtain germinability higher than 60%, it is recommended to use seeds at least 7 months old. The addition of 3% sucrose to the culture medium favored multiplication and development in vitro. The use of equal concentrations of ANA and BA (0.57 μM) favored the development of both shoot and roots. The use of styrofoam segments was effective for the propagation of B. martiana. For acclimatization, B. martiana plants should initially be transferred to community vessels containing the Bioplant substrate and after eight weeks transplanted into individual pots containing the Ouro Negro substrate and cultured for 90 days. The percentage of plant survival was considered satisfactory.

O tratamento de esgoto tem se evidenciado devido às necessidades ambientais, e no final do processo há geração de um resíduo denominado lodo de esgoto ou biossólido, rico em matéria orgânica e elementos essenciais as plantas. Neste estudo, propôs-se a utilização do biossólido da ETE de Paraguaçu- MG como fonte alternativa para nutrição in vitro de Sucupira-preta (Bowdichia virgilioides Kunth.), espécie lenhosa nativa do cerrado brasileiro. As sementes de sucupira-preta foram desinfestadas em etanol 70 % e hipoclorito de sódio, e imersas em ácido sulfúrico concentrado (98 %) para superação da dormência tegumentar. Após 3 enxágues em água destilada autoclavada as sementes foram inoculadas, uma por tubo de ensaio contendo 30 mL de meio WPM e diferentes concentrações do biossólido moído. Os tratamentos foram divididos da seguinte maneira: controle com meio WPM; meio WPM acrescido de concentrações crescentes de biossólido; concentrações crescentes de biossólido apenas; e um segundo controle contendo apenas água destilada. O delineamento foi inteiramente casualizado em esquema fatorial (2 x 7 com 14 tratamentos e 8 repetições por tratamento), com fator presença e ausência de meio WPM e fator concentração de biossólido (ausência; 1,0; 2,0; 4,0; 6,0; 8,0 e 10 g L-¹). Os tubos foram mantidos em sala de crescimento até o 41º dia, quando foram avaliados: número de folhas; comprimento da parte aérea; área foliar; número de gemas; número de raízes secundárias; comprimento da raiz principal; espessura do caule e massa seca da planta inteira. O fator presença de biossólido apenas, foi significativo influenciando de forma direta as variáveis área foliar, número de raízes secundárias e número de gemas. A presença do biossólido influenciou de forma significativa nos tratamentos onde há interação deste com meio WPM apenas para variável comprimento da raiz principal. Quanto as demais variáveis: número de folhas, comprimento da parte área, espessura de caule e massa seca, não houve resultado significativo para os tratamentos com a presença do biossólido apenas. Os resultados mostraram que a suplementação do meio com o biossólido é possível. Conclui-se que devido à maioria dos parâmetros avaliados não diferirem estatisticamente, o biossólido tem potencial para a substituição dos nutrientes do meio WPM, no que se refere ao estabelecimento in vitro de Sucupira-preta utilizando sementes como explante, resultando em economia para o processo, além de reutilizar o resíduo do tratamento de esgotos. Estudos complementares visando a padronização dos teores de cada componente do biossólido auxiliarão na consolidação do uso deste na cultura de tecidos vegetais. / The high organic matter content of sewage sludge is one of the motivations for their disposal in the environment as a soil conditioner, and at the end of the process, there is a production of one residue denominated the biosolids, wich is rich in organic matter and essential elements to the plants. This study aim to use the biosolids from ETE Paraguaçu (Minas Gerais) as alternative source to in vitro nutrition of sucupira-preta (Bowdichia virgilioides Kunth.), a native woody species from Brazilian Cerrado. Sucupira-preta seeds was sterilized in both 70 % ethanol and hypochlorite of sodium and immersed in 98 % concentrated sulphuric acid for breaking of seed coat dormancy. After 3 rinses in distilled autoclaved water the seeds were inoculated one by each one test tube containing 30 ml of WPM medium and at different concentrations of grounded biosolids. The treatments were divided in four procedures: first control with WPM medium, one with WPM medium amended with increased concentrations of biosolids, other with only increased concentrations of biosolids and the last control medium with only distillated water. The experimental design was completely randomized in a factorial arrangement (2 x 7 with 14 treatments with eight replications), with the presence or absence factor of WPM medium and the biosolids concentration factor (absence; 1,0; 2,0; 4,0; 6,0; 8,0 e 10 g L-¹). Test tubes were maintained in growing room until the 41th day and it was evaluated the number of leaves, aerial part length,  leaf area measurements, the number of buds, the number of secondary roots, the length of the main root,  the thickness of the stem and the mass of dry matter of the whole plant. The factor with only the biosolids presence was significate influenced the leaf area, number of secondary roots and the number of buds directly. The biosolids presence significantly influences the treatments as the biosolids interacted with WPM medium affecting only the main root length variable. As for the other variables such as the number of leaves, aerial part length, the thickness of the stem and the drier mass, the results showed no significance to those treatments with only biosolids presence. Results demonstrated that the supplementation of medium with the biosolids is possible. The Since the majority of estimated parameters did not have significative  differences, it is possible to infer that biosolids has a potential to substitute the nutrients of WPM medium regarding the establishment in vitro of sucupira-preta using seeds as explants. Consequently, it is a safety way for the process besides of the reusing of sludge that result from processes of sewing treatment. Complementary studies searching for the standardization of each components of biosolids will contributed to evaluated the feasibility of this residue use as substrate in plants tissue cultivation.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Recursos Genéticos Vegetais, Florianópolis, 2010 / Made available in DSpace on 2012-10-25T04:04:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 282458.pdf: 2633740 bytes, checksum: 477fe973bcb08eab24756caf9fd2bf45 (MD5) / A ocorrência de variações genéticas e epigenéticas foi avaliada em clones de macieira e de morangueiro obtidos por via vegetativa convencional e micropropagação, em três ciclos de cultivo consecutivos. As plantas multiplicadas pelas duas modalidades foram caracterizadas quanto à fidelidade genotípica através de marcadores AFLP, visando detectar mutações, com a utilização de uma combinação de enzimas de restrição e uma combinação de iniciadores e MSAP, visando estimar o padrão de metilação, com a utilização de duas combinações de enzimas de restrição e uma combinação de iniciadores, bem como sua evolução ao longo dos ciclos de cultivo, comparando-as com a planta matriz. Foram feitas observações visuais em plantas de macieira com relação a: i) coloração pela antocianina na folha em crescimento; ii) posição folhas em relação ao caule; iii) comprimento folha; iv) largura folha; v) conformação da margem da folha; vi) flexibilidade dos ramos e em morangueiro, com relação a: i) forma dentes dos folíolos; ii) cor da folha; iii) posição da inflorescência em relação a folhagem, visando detectar a ocorrência de variações fenotípicas, nas duas modadlidades de propagação. Os resultados obtidos indicam a ocorrência de variações genéticas, tanto na propagação vegetativa convencional como na micropropagação, variando de 3,7 a 100% das plantas analisadas e ainda, modificações no padrão de metilação, variando de 25 a 96,2% das plantas analisadas. Entretanto, estas variações não tiveram reflexo no fenótipo das plantas propagadas. O presente estudo indica que variações genéticas e epigenéticas são passsíveis de ocorrência quando plantas são submetidas à propagação vegetativa, seja via convencional, seja via micropropagação, com maior probabilidade de ocorrência quanto maior o número e a variação dos métodos envolvidos.

Tese (Doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciencias Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Recursos Genéticos Vegetais, Florianópolis, 2010 / Made available in DSpace on 2012-10-25T08:23:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 279462.pdf: 1524764 bytes, checksum: 6aeeb1f55ba566debda7335ec88f37c1 (MD5) / As bromélias representam um grupo taxonômico importante sob os prismas ecológico e econômico, ocorrendo majoritariamente no bioma Mata Atlântica, o qual se encontra entre os mais ameaçados do planeta. Assim, o desenvolvimento das tecnologias que utilizam sistemas regenerativos de alta eficiência de cultivo ou de conservação de germoplasma vegetal apresenta alto potencial de aplicação. No presente trabalho o sistema de micropropagação baseado na indução e desenvolvimento de culturas nodulares (CNs) foi estudado e caracterizado a partir de segmentos nodais extraídos de brotos estiolados em Billbergia zebrina, e a partir de sementes e de bases foliares em Vriesea reitzi. Foi também testada a suplementação ao meio de cultura MSB de diferentes tipos, concentrações, balanços de fitorreguladores e submetidos a diferentes condições de cultivo, durante a indução, regeneração e alongamento de microbrotos. Em B. zebrina, segmentos nodais, extraídos de brotos estiolados foram cultivados em meios de cultura MS liquido, suplementados com diferentes concentrações de TDZ, ANA e BAP. CNs e folhas de brotações foram empregadas para análises moleculares por meio de marcadores AFLP. O uso do meio de cultura MS com diferentes concentrações de TDZ resultou em CNs com diferentes morfologias e potenciais regenerativos. CNs induzidas com TDZ (0,01 µM) e subcultivadas em meio de cultura MSB isento de fitorreguladores apresentam alta freqüência regenerativa. CNs originadas em meio com TDZ, (0,1 µM) quando foram subcultivadas em MSB com ANA (2 µM) e 2-iP (4 µM) resultaram em maior número médio de brotos adventícios por grama de CN inoculada. Brotos alongados (>3 cm) foram aclimatizados com sucesso em ambiente in vivo e mudas transplantadas para vasos apresentaram padrão normal da espécie. Análises histológicas e em MEV revelaram que a indução de CNs ocorreu a partir da região da gema do segmento nodal e confirmaram características morfogenéticas intermediárias entre organogênese e embriogênese somática, típico de CNs. A análise molecular com base na técnica de AFLP revelou 88% de similaridade dos regenerantes em relação à planta mãe, sugerindo a ocorrência de alta diversidade. Esta diversidade pode ter aplicação em programas de melhoramento genético ou como ferramenta eficaz em programas de conservação desta espécie. Em V. reitzii foram estudados os fatores determinantes do controle da morfogênese in vitro das CNs. Os fitorreguladores suplementados ao meio MSB inibiram a germinação das sementes e promoveram a indução de CNs após duas semanas em cultivo. CNs induzidas em meio suplementado com ANA (4 µM) e subcultivadas em meio MSB com ANA e 2-iP (2 µM cada) apresentaram textura granular e alta taxa de proliferação. O cultivo destas CNs em meio MSB suplementado com AIA (4 ?M) resultou em alto número médio de microbrotos (1.468 brotos/g de CNs). A partir do modelo de regressão foi possível inferir que o número máximo de brotos alongados (66,3 brotos/g) pode ser obtido com o subcultivo dos microbrotos em meio MSB suplementado com AIA (2 µM) e AG3 (10 ?M). Em explantes foliares, em todos os meios de cultura testados observou-se a indução de CNs a partir da região basal. Estas CNs responderam de forma diferencial aos tratamentos em termos de características morfogenéticas e potencial regenerativo. CNs mantidas na presença de luz resultaram em maior produção de massa fresca e de microbrotos em comparação com aquelas mantidas na ausência de luz. CNs subcultivadas em meio MSB líquido e suplementado com ANA (4 µM) e 2-iP (2 µM) revelaram elevada eficiência regenerativa. A maior eficiência regenerativa e proliferação de microbrotos foram obtidas com o uso do meio MSB suplementado com ANA e 2-iP (2 µM cada). O subcultivo em meio MSB suplementado com AG3 (10 µM) promoveu um maior alongamento de brotos e de forma sincronizada. A utilização destes meios de cultura resultou em uma eficiência regenerativa de 12,4 g/g de CN inoculada. Estima-se, a partir disto, uma regeneração de mais de 5.300 novos microbrotos e na fase de alongamento, uma taxa efetiva de 75% destes microbrotos podem ser convertidos em brotos completos a cada 10 semanas de cultivo. As análises estruturais das CNs revelaram que os processos de indução da morfogênese e da regeneração de microbrotos ocorrem a partir da proliferação de grupos de células meristemáticas e que desenvolvem a formação de múltiplos meristemas caulinares. Estas estruturas regenerativas sustentam a classificação de CNs organogênicas. Brotos maiores do que 3,0 cm resultaram em mais de 95% de sobrevivência ex vitro. Os resultados obtidos com as CNs de V. reizii se configuram, com base em estudos morfohistológicos, em uma rota regenerativa in vitro intermediária entre a organogênese e a embriogênese somática. Esta rota apresenta elevado potencial regenerativo para a propagação em larga escala de bromélias ornamentais e/ou ameaçadas de extinção, como são o caso de V. reitzii e B. zebrina.

Orientador: Ana Maria Soares Pereira / Banca: Giuseppina Pace Pereira Lima / Banca: Bianca Waléria Bertoni / Resumo: Croton antisyphiliticus Mart. ex M. Arg. popularmente pé de perdiz, é uma planta medicinal nativa do Cerrado, pertencente à família Euphorbiaceae. A raíz é utilizada popularmente na forma de decoctos e garrafadas para combater infecções do aparelho reprodutor masculino e feminino. A coleta da planta é realizada de forma extrativista e não há trabalhos a respeito da conservação da espécie. Desta forma, este trabalho teve como objetivo desenvolver um protocolo de micropropagação visando a multiplicação em larga escala de C. antisyphiliticus para que no futuro seja possível o desenvolvimento de um medicamento fitoterápico a partir desta espécie. Foram desenvolvidos experimentos de germinação in vitro, protocolos de micropropagação e conservação de germoplasma in vitro. Para determinar a melhor condição de germinação in vitro foi avaliada a ação do fungicida Cercobin na assepsia das sementes. No desenvolvimento do protocolo de micropropagação foram avaliados o efeito dos meios MS, WP e B5 e da concentração de sais no desenvolvimento das plantas; o efeito das citocininas BAP, cinetina, zeatina e 2ip na multiplicação dos explantes; a associação do BAP com a auxina AIA na intensificação das brotações; o tamanho do recipiente para o cultivo in vitro; o co-cultivo; a posição da gema em relação à brotação; a influência da auxina AIB no enraizamento in vitro; a aclimatação dos explantes; e o efeito de agentes de estresse osmótico no crescimento mínimo de explantes de C. antisyphiliticus. O meio MS/2 foi o meio mais eficiente para o desenvolvimento de plantas in vitro. Várias citocininas influenciaram na multiplicação dos explantes, no entanto, a BAP (1μM) foi selecionada como a mais eficaz para a multiplicação. A associação de BAP com AIA não apresentou resultado significativo no aumento das brotações. As plantas cultivadas em frasco tipo... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Croton antisyphiliticus Mart. ex M. Arg. popularly "pé de perdiz" is a medicinal plant native from Cerrado, belonging to Euphorbiaceae family. The root is used popularly in the form of decoctions and "garrafadas" to combat males and females tract infections. The collection of the plant is carried through of extrativist form and it doesn't have works regarding the conservation of the species. So, this study had as aimed to develop a micropropagation protocol to a multiplication in a large scale of C. antisyphiliticus, so that in future it is possible to develop a fitotherapic medicament from this species. Experiments had been developed of in vitro germination, micropropagation protocols and in vitro conservation of germoplasm. To determine the best condition for in vitro germination was evaluated the action of the fungicide Cercobin in the asepsis of the seeds. In the development of micropropagation protocol had been evaluated the effect of media MS, B5 and WP and the concentration of salts in plant development; the size of the container for the in vitro cultivation; the effect of the cytokinins BAP, kinetin, zeatin and 2ip in multiplication of explants; the combination of BAP with IAA in enhancing shoot; the influence of the auxin IBA on in vitro rooting; the co-cultivation; the bud position in relation to the shooting and; the effect of osmotic stress agents in minimal growth of explants of C. antisyphiliticus. The MS was the most efficient with its concentration reduced by half resulted in better development of plants in vitro. Plants grown in flasks showed better results. Many cytokinins had influence on the multiplication of the explants,however, the BAP (1 μ M) was selected as the most efficient for multiplication. The combination of BAP with IAA didn't present weren't significant results in the increase of shoots. The explants also to present co-cultivation in vitro... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-04-17T18:53:02Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2609607 bytes, checksum: 556bda4a6de90f9be2c592e47697cdca (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-17T18:53:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2609607 bytes, checksum: 556bda4a6de90f9be2c592e47697cdca (MD5) Previous issue date: 2005-05-13 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O presente trabalho teve por objetivo o estudo de diversos fatores que influenciam a morfogênese in vitro e o estabelecimento e implementação de protocolo de transformação genética mediada por Agrobacterium para duas espécies de maracujazeiro (Passiflora edulis f. flavicarpa e P. cincinnata). O método de retirada total do tegumento da semente foi efetivo para a germinação de P. cincinnata, sendo a maior produção de plântulas normais obtida em meio MS na sua força total. Melhor resultado de regeneração em P. cincinnata foi obtido em meio MS suplementado com 0,5 mg l -1 de BAP e 10% (v/v) de água de coco, sendo indicado a redução da concentração de BAP pela metade aos 15 dias, no primeiro subcultivo. O uso de ágar Vetec para essa espécie é aconselhável, tendo em vista seu menor custo e maior rendimento obtido de ramos por explante. Apesar do bom alongamento dos ramos regenerados, o enraízamento e a manutenção desses ramos quando individualizados não foi satisfatória. Embriogênese somática foi observada no tratamento cujo meio de cultura foi suplementado apenas com água de coco. Os calos obtidos nesse tratamento foram bastante proliferativos e os embriões formados, em geral, normais. A germinação desses embriões gerou plântulas aclimatadas. morfologicamente Explantes normais, hipocotiledonares as quais puderam ser das duas espécies de maracujazeiro estudadas se mostraram bastante resistentes à Higromicina. Em teste realizado com P. cincinnata, a Higromicina foi menos ativa em meio gelificado com ágar Vetec, em comparação com aquele gelificado com Phytagel. Solução de Agrobacterium com densidade ótica (λ= 600 nm) ajustada para 0,25 se mostrou mais eficiente que aquela ajustada para 0,50. Foram obtidas raízes transformadas por A. rhizogenes de ambas as espécies. Em raízes transformadas de P. cincinnata mantidas em meio seletivo, sem reguladores de crescimento, foi observada a formação de gemas e embriogênese somática. Plantas de P. edulis f. flavicarpa, transformadas com A. tumefaciens SHOOTER, regeneradas em meio sem reguladores de crescimento, não apresentaram reação histoquímica positiva para gus, embora a reação e PCR com primers específicos tenha indicado a presença desse gene no DNA genômico das plantas regeneradas. A combinação de reguladores proposta por DREW (1991) foi eficiente na indução de novo de gemas adventícias em explantes cotiledonares e hipocotiledonares, sendo o acréscimo de 10 μM de STS importante para o incremento do número de ramos, principalmente em explantes hipocotiledonares, que se mostraram mais sensíveis ao etileno. O tratamento com enzimas pecto-celulolíticas foi bastante eficiente na indução de regeneração ao longo do explante, sendo essa uma característica que poderá ser bastante útil em protocolos de transformação genética mediada por Agrobacterium. / The present work had for objective study of diverse factors that influence the in vitro morphogenesis and the genetics Agrobacterium- mediated transformation for two species of passion fruit (Passiflora edulis f. flavicarpa e P. cincinnata). The total withdrawal of teguments of seeds method was effective for the germination of P. cincinnata, being the biggest production of normal seedlings was obtained in half salts concentration of MS media. Better resulted of regeneration in P. cincinnata it was gotten in MS media supplemented with 0,5 mg l -1 of BAP and 10% (v/v) of coconut water, being indicated the reduction of the concentration of BAP for the half to 15 days, in the first subculture. The use of VetecTM agar-agar is advisable, having in sight its lesser cost and greater income of branches for explant. Despite the good along of the regenerated branches, the rooting and the maintenance of these branches when isolated was not satisfactory. Somatic embryogenesis was observed in the treatment whose media was supplemented only with coconut water. Callus gotten in this treatment had been very proliferated and the embryos formed, in general, were normal. The germination of these embryos generated seedlings morphologically normal, which could have been acclimatized. Hypocotyls explants of the two studied species of yellow passion fruit showed sufficiently resistant to the Hygromycin. In test carried through with P. cincinnata, the Hygromycin was less active in media gelling with VetecTM agar-agar in comparison with the one with PhytagelTM. Solution of Agrobacterium with optical density (λ= 600 nm) adjusted for 0.25 showed more efficient that that one adjusted for 0.50. They had been gotten roots transformed for A. rhizogenes of both the species. In roots transformed of P. cincinnata kept in selective media, without growth regulators, it was observed the formation of buds and somatic embryogenesis. Plants of P. edulis f. flavicarpa, transformed with A. tumefaciens SHOOTER, regenerated in way without growth regulators not they had presented positive histochemical reaction for gus, even so reaction e PCR with primers specific it has indicated the presence of this gene in the DNA genomic of the regenerated plants. The plant growth regulators combination of proposal for DREW (1991) it was efficient in the induction de novo of adventitious buds in cotyledon and hypocotyl explants, being the addition of 10 μM of STS was important for the increment of the number of branches, mainly in hypocotyl explants, that they had revealed more sensible to the ethylene. The treatment with pecto-cellulolytics enzymes were efficient in the induction of regeneration to long of the explant, being this one characteristic that it could be very useful in protocols of Agrobacterium- mediated genetic transformation. / Tese importada do Alexandria

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-05-04T18:16:17Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2678959 bytes, checksum: 1530553ed498eff5fb1415df6fa3359e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-04T18:16:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2678959 bytes, checksum: 1530553ed498eff5fb1415df6fa3359e (MD5) Previous issue date: 2002-03-22 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Algumas espécies da família Orchidaceae, como as do gênero Cattleya, possuem elevada importância econômica no mercado florístico, que está em plena expansão. Isto demonstra a necessidade de se disporem de métodos adequados de propagação massal, como a cultura de tecidos. Os objetivos deste trabalho foram verificar a capacidade morfogênica de algumas espécies de orquídeas do grupo Cattleya, em grande medida, a formação de novas plantas a partir de explantes específicos, cultivados em diferentes meios de cultivo. No primeiro capítulo, foram descritos os ensaios que subsidiaram os experimentos desta pesquisa. Foram utilizados vários tipos de explante, como ápices radiculares de plântulas obtidas pela via seminífera in vitro, calos originados de protocormóides, formados in vitro, em temperatura elevada, e gemas axilares dianteiras de brotações de plantas adultas de distintas espécies, cultivadas em distintos meios, objetivando verificar as respostas morfogênicas dos citados explantes, bem como formulações e composição dos meios, condições de cultivo e métodos de desinfestação adequados para a condução dos experimentos. No segundo capítulo, foram utilizados segmentos de plântulas obtidas pela via seminífera in vitro de Brassolaeliocattleya Sun King Orange x Laelia purpurata, cultivados em meios com concentrações variadas de auxina e citocinina, para estabelecer um meio com adequado balanço hormonal. Concluiu-se que para o híbrido utilizado, pode-se recomendar o cultivo em 47 dias, em um meio de cultivo liquído constituído de minerais nutrientes de MS, adicionando 1,24 mg L-1 de BAP e 0,6 mg L-1 de 2,4-D. No terceiro capítulo, foram usados ápices caulinares de brotações e gemas axilares, extraídos de brotações e da base dos pseudobulbos de plantas adultas, objetivando identificar o melhor explante para Laelia lobata Jenni x L. lobata alba. Embora os três tipos de explantes apresentassem alta porcentagem de oxidação, todos mostraram boa capacidade morfogênica, principalmente as gemas axilares de brotações, potencializando uma via promissora para propagação em escala comercial dessa espécie. No quarto capítulo, utilizou-se pedúnculo de inflorescência de Cattleya White Dream, cujas novas estruturas poderiam ser utilizadas para o desenvolvimento de plântulas. Para esse híbrido, discos de pedúnculos de inflorescências não apresentaram respostas morfogênicas, segundo os procedimentos experimentais adotados. Uma vez que para cada espécie ou híbrido foi necessário um protocolo específico para sua propagação in vitro, obtiveram-se, de modo geral, respostas morfogênicas de algumas espécies, formando plântulas completas e, em alguns casos, em grande número. Dada a importância dos cultivos celulares para esta planta, estudos futuros devem ser conduzidos para se testarem outros tipos de explante, outros meios e condições de cultivo, de modo a otimizar o processo de propagação massal. / Some species of the Orchidaceae family, such as those form the Cattleya, have high economic importance in the flower market, which is in clear expansion. This shows the necessity of adequate methods for mass propagation, like tissue culture. The goals of this work are to verify the morphogenic capacity of some orchid species of the Cattleya group, for a great measure, the formation of new plants from specific explants, grown in different culture media. In the first chapter we describe the essays that subsidized the experiments in this thesis. Various kinds of explants were used, such as root tips from seedlings obtained through in vitro seed propagation, callus originated from protocorm-like bodies, formed in vitro under high temperatures, and forward axillary buds from young shoots of adult plants from different species, grown in different media, aiming to verify the morphogenic response of the aforementioned explants, as well as the formulation and composition of the media, growing conditions and adequate de-infestation methods for the execution of the experiments. In the second chapter, segments of seedling obtained through in vitro seed propagation of Brassolaeliocattleya Sun King 'Orange' x Laelia purpurata, grown in media with different concentrations of auxin and cytokinin, were used to establish a medium with adequate hormonal balance. We concluded that for the hybrid used we can recommend the cultivation in 47 days, in a liquid growing medium composed of MS nutritive minerals, adding 1.24 mg L-1 of BAP and 0.6 mg L-1 of 2.4-D. In the third chapter, young shoot tips and axillary buds, extracted from young shoots and from the basis of adult plant pseudobulbs, were used to identify the best explants for Laelia lobata 'Jenni' x L. lobata alba. Although the three kinds of explants showed high percentage of oxidation, all exhibited good morphogenic capacity, specially the young shoot tips, indicating a promising solution for the propagation of that species in commercial scale. In the fourth chapter, we used inflorescence peduncles of Cattleya White Dream, whose formation of new structures could be used for the growing of seedlings. For that hybrid, sections of inflorescence peduncles did not exhibit morphogenic responses according to the experimental proceedings adopted. Considering that for each species or hybrid a specific protocol was necessary for its in vitro propagation, we achieved, in general, morphogenic responses from some species, forming complete seedlings and, in some cases, in large numbers. Given the importance of cellular cultivation for that plant, future studies must be conducted to test other kinds of explants, other media and growing conditions, in order to optimize the process of mass propagation.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2015-12-01T10:00:40Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2074063 bytes, checksum: 134cb38743509c9477bb8007bd4e851c (MD5) / Made available in DSpace on 2015-12-01T10:00:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2074063 bytes, checksum: 134cb38743509c9477bb8007bd4e851c (MD5) Previous issue date: 2014-12-10 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Este trabalho visou avaliar a produção de microestacas obtidas pela micropropagação de clones híbridos de Eucalyptus spp., tendo como objetivos específicos avaliar: 1) o efeito de doses de AIB e de coletas sucessivas de microestacas em tufos de gemas em multiplicação na micropropagação de clones híbridos de Eucalyptus grandis x E.urophylla e Eucalyptus urophylla x E. globulus; 2) a produção de microestacas em sistema de micropropagação via tufos de gemas axilares em um clone de Eucalyptus grandis x E. urophylla, em diferentes recipientes e substratos; 3) o efeito de trocas gasosas e concentrações de sacarose na produção de microestacas oriundas da micropropagação via proliferação de gemas axilares em Eucalyptus grandis x E. urophylla; e 4) a produção de microestacas em sistema de micropropagação via microcepas em um clone de Eucalyptus grandis x E. urophylla, considerando-se posições de origem das microcepas, densidades de microcepas, qualidades de luz e de substratos. O material experimental utilizado neste trabalho foi proveniente da fase de multiplicação in vitro de um clone de Eucalyptus grandis x E. urophylla e de um clone de Eucalyptus urophylla x E. globulus, com 25 e 72 subcultivos, respectivamente. Os experimentos in vitro foram conduzidos no Laboratório de Cultura de Tecidos II do Instituto de Biotecnologia Aplicada à Agropecuária (BIOAGRO), da Universidade Federal de Viçosa (UFV), localizado no município de Viçosa/MG, e os experimentos ex vitro foram conduzidos no Viveiro de Pesquisas do Departamento de Engenharia Florestal da UFV. Com base nos resultados obtidos, pode-se concluir que: 1) as microestacas in vitro apresentaram boa produção no decorrer das coletas sucessivas, bem como foram ajustados os níveis de AIB para cada clone, variando de 0,25 a 0,50 mg L-1 de AIB para o clone Eucalyptus grandis x E.urophylla e de 0,75 a 1,0 mg L-1 para o clone Eucalyptus urophylla x E. globulus; nas condições ex vitro, a dosagem de AIB apresentou efeito residual, proporcionando bom enraizamento e sobrevivência nas dosagens de 0,25 a 0,50 mg L-1 de AIB para o clone Eucalyptus grandis x E.urophylla e de 0,50 a 1,0 mg L-1 para o clone Eucalyptus urophylla x E. globulus; 2) o melhor recipiente para produção de brotos maiores que 0,5 cm, bem como microestacas maiores que 2 cm, é o pote de polipropileno (500 mL); no entanto, quando se deseja maior produção por m 2, o frasco de vidro (250 mL) é mais vantajoso diante da melhor possibilidade de adensamento; os melhores substratos para produção de brotos maiores que 0,5 cm, bem como microestacas maiores que 2 cm, utilizando o recipiente Agripot ®, são o ágar ou a vermiculita; 3) a redução para 15 g L-1 de sacarose apresenta os melhores resultados; o sistema com troca gasosa atua negativamente no comprimento da maior microestaca; os tratamentos realizados in vitro apresentam efeito residual ex vitro, melhorando a sobrevivência das mudas durante todo seu processo de formação; 4) as microcepas oriundas de segmentos nodais basais de microestacas proporcionaram maior número de brotos bem como maior enraizamento; a densidade de três ou quatro microcepas por recipiente proporcionou os melhores resultados, e a iluminação 4 LEDs proporcionou maior vigor para as microestacas; o uso de ágar ou vermiculita apresentou as maiores médias para as características analisadas, porém o uso de ágar proporcionou baixas porcentagens de enraizamento. / This paper aimed to evaluate the micro-cuttings production obtained by the micropropagation of Eucalyptus spp. hybrid clones, with the following evaluations as specific objectives: 1) effect of IBA doses and successive collections of micro- cuttings on bud stumps in the micropropagation of Eucalyptus grandis x E.urophylla and Eucalyptus urophylla x E. globulus hybrid clones; 2) micro-cuttings productivity in micropropagation system via stumps of axillary buds in a Eucalyptus grandis x E. urophylla clone, in different types of containers and substrates; 3) effect of gas exchange and sucrose concentrations on the micro-cuttings productivity in micropropagation system via axillary bud proliferation in Eucalyptus grandis x E. urophylla; and 4) micro-cuttings productivity in micropropagation system via micro- stumps on Eucalyptus grandis x E. urophylla clone, considering micro-stumps origin position, micro-stumps density, light quality and substrates. The experimental material used in this work derived from the in vitro multiplication phase of one Eucalyptus grandis x E. urophylla clone and one Eucalyptus urophylla x E. globulus clone, with 25 and 72 subcultures, respectively. The experiments were carried out at the Plant Tissue Laboratory, Institute of Biotechnology Applied to Agriculture (BIOAGRO), Federal University of Viçosa, Viçosa/MG. Based on the results it may be concluded that: 1) in vitro, micro-cutting showed high yield after successive harvesting, as well as the IBA levels for each clone were adjusted, varying from 0.25 to 0.50 mg L-1 of IBA in the Eucalyptus grandis x E.urophylla clone, from 0.25 to 0.50 mg L-1 in the Eucalyptus grandis x E.urophylla clone, and from 0.75 to 1,0 mg L-1in the Eucalyptus urophylla x E. globulusclone; in ex vitro conditions the IBA dosage showed residual effect providing high rooting and survival, as well as other morphological parameters in dosages from 0.25 to 0.50 mg L-1in Eucalyptus grandis x E.urophylla clone, and from 0.50 to 1.0 mg L-1 in Eucalyptus grandis x E.urophylla clone; 2) the polypropylene pot (500 mL) was the best container for production of shoots higher than 0.5 cm, as well as micro-cuttings larger than 2 cm, however, for increase the productivity per m2, the glass flask (250 mL) are more favorable due to the best fit on the shelves. The agar and vermiculite were the best substrates for production of shoots higher than 0.5 cm, as well as micro-cuttings larger than 2 cm, using the container Agripot TM; 3) the reduction to 15 g L-1 sucrose provides the best results; the gas exchange system acts negatively on the length of the highest micro- cutting; and in vitro, treatments showed ex vitro residual effect, actively acting in the plantlets survival throughout their development process; 4) The micro-stumps originated from micro-cuttings basal nodal segments provide more shoots and roots; the density of three or four micro-stumps per container provided the best results and the 4 LEDs lighting provided more vigorous micro-cuttings; the use of agar or vermiculite showed the highest means for the evaluated parameters, however, the use of agar provided low rooting percentages.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2016-04-28T16:07:28Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1340603 bytes, checksum: ea9dfc7b17475a86b39c1a8eb39e27ad (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-28T16:07:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1340603 bytes, checksum: ea9dfc7b17475a86b39c1a8eb39e27ad (MD5) Previous issue date: 2014-11-24 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Com a substituição dos corantes sintéticos pelos naturais, o urucum (Bixa orellana L.) tem alcançado crescente importância no mercado internacional, por ser a principal fonte do apocarotenoide bixina, utilizada para vários fins na indústria, sendo o único responsável por suprir a demanda do comércio mundial. Neste cenário busca-se a compreensão da via e a clonagem dos genes envolvidos na via de biossíntese da bixina, visando principalmente à obtenção de plantas melhoradas, bem como para inserção de genes da própria via em outras espécies comerciais de cultivo amplo e mecanizado. Atualmente trabalhos relacionados à transformação genética em B. orellana são escassos e há a necessidade de otimizar métodos de regeneração in vitro que viabilizem a obtenção de plantas transgênicas com desempenho superior em nível de produção de bixina. Dessa forma o objetivo desse trabalho foi testar diferentes explantes hipocotiledonares de urucum, citocininas e diferentes meios de cultura na organogênese, desenvolvimento e enraizamento de brotos de B. orellana. Foi observado que explantes hipocotiledonares contendo tamanho de 6,0; 8,0; e 10,0 mm de comprimento apresentaram eficientes respostas organogênicas, sendo observada a formação de até 10 brotos por explante quando cultivados no meio JADS suplementado com zeatina. Em explantes hipocotiledonares de urucum seccionado longitudinalmente e posicionados com a secção em contato com o meio de cultura JADS acrescido de zeatina foi observado a formação de 17,11 brotos por explante. Explantes hipocotiledonares pré-tratafdoscom Zeatina, BAP e TDZ (0,1 e 0,5 mg L-1) não diferiram significativamente na indução de brotos em comparação com explantes não tratados com citocininas. O meio de cultura JADS se mostrou mais eficiente em comparação ao MS, induzindo maior número de brotos. Os brotos apresentaram-se mais alongados, vigorosos e totalmente não hiperhídricos. Os brotos induzidos em meio JADS apresentaram também maior número e maior desenvolvimento de raízes em comparação com brotos induzidos em meio MS de urucum, consequentemente, devido ao desenvolvimento superior, brotos induzidos no meio JADS, apresentaram 100% de sobrevivência durante a fase de aclimatização ex vitro. O presente trabalho possibilitou otimizar as respostas organogênicas em diferentes explantes hipocotiledonares de urucum, concentrações de fitorreguladores e meios de cultura, os quais podem ser utilizados para estudos futuros de transformação genética de urucum. / With the substitution of synthetic dyes to natural, annatto seeds (Bixa orellana L.) industry is increasing the international market importance, given that this species is the main natural and commercial source of the apocarotenoid bixin. This plant pigment is used for various industrial purposes, and it is the main pigment that has been comerciallized worldwide. In this scenario, it is necessary to understand the metabolic pathway and the cloning of the genes involved in the bixin biosynthesis, aiming to obtain improve plants or even to add genes of interest related to bixin biosynthesis to other commercial crop species of broad and mechanized cultivation. Currently, there are few publications related to genetic transformation in B. orellana, being necessary to optimize in vitro protocols that will allow the obtainining of transgenic plants with higher level of bixin production. Thus, the aim of this work was to test different hypocotyl explants of annatto, the cytokinin effect and different media on in vitro organogenesis and rooting of B. orellana adventitious shoots. It was observed that hypocotyl explants with 6.0, 8.0 and 10 mm longer showed the best organogenic responses inducing up to 10 shoots per explant when cultured in JADS medium supplemented with zeatin. Hypocotyl explants of annatto induced more shoots when they were sectioned longitudinally and positioned with the section in contact with the JADS medium in presence of zeatin, which stimulated the induction of 17.11 shoots per explant. The hypocotyl explants pre-treated with zeatin, BAP and TDZ (0.1 and 0.5 mg L- ) did not differ significantly on shoot induction from control explants which were not treated with cytokinins. The JADS medium was more appropriate for shoot induction in comparison with MS medium. The shoots induced on JADS medium were more vigourous, longer and non-hiperhidric. The JADS medium affect positively the rooting, given that the shoots displayed more roots and well developed roots in comparison with shoots induced on MS medium. Consequently, due to the best development on JADS medium, the shoots supported the ex vitro acclimatization phase with 100% of survival. This work possibilited the optimization of organogenesis from different hypocotyl explants, plant growth regulator concentrations and culture media, which can be used in further studies of annatto genetic transformation.