Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2016-06-14T09:45:18Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 3806262 bytes, checksum: 7171ac96932a9b0129a753982c0a71da (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-14T09:45:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 3806262 bytes, checksum: 7171ac96932a9b0129a753982c0a71da (MD5) Previous issue date: 2011-11-21 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O objetivo geral do presente estudo foi verificar a influência das trocas gasosas e do enriquecimento com CO 2 na propagação in vitro de Pfaffia glomerata (Spreng.) Pedersen (Amaranthaceae). Neste estudo foram utilizados como explantes segmentos nodais, a partir de culturas-estoque de vitroplantas de fáfia, mantidas sob subcultivos mensais. Foram avaliadas características relacionadas ao crescimento, aspectos anatômicos da folha, pigmentos fotossintéticos, teor de β-ecdisona (20E), atividade da Rubisco, amido, fenóis e açúcares. O primeiro capítulo teve como objetivo avaliar a influência da atmosfera ambiente e enriquecida com CO 2 (360 ou 720 μmol mol -1 de CO 2 ), vedação do recipiente de cultura e presença ou não de sacarose no meio de cultura durante o crescimento e desenvolvimento de explantes nodais de P. glomerata. Todas as características de crescimento das vitroplantas de fáfia aumentaram em condições de elevação de CO 2 . Nessas condições de atmosfera enriquecida com CO 2 foram produzidas vitroplantas de P. glomerata com características desejáveis para produção clonal massal, sendo uma alternativa para o estabelecimento de plantios comerciais que visem uniformidade e objetivem a produção de 20E para suprir a demanda industrial. A menor perda relativa de água das folhas oriundas de vitroplantas cultivadas em meio de cultura com ou sem sacarose e em condição de elevação de CO 2, mostra que um sistema fotoautotrófico ou fotomixotrófico com enriquecimento de CO 2 é atrativo para a aplicação na produção comercial massal de mudas dessa espécie, possivelmente reduzindo as perdas que ocorrem durante a aclimatização ex vitro, devido à desidratação das vitroplantas. O segundo capítulo teve como objetivo comparar a eficiência de novos tipos alternativos de membranas para vedação com as membranas MilliSeal ® , sobre a morfogênese e crescimento in vitro de fáfia. Dentre as membranas testadas, foi possível selecionar uma que mostrou características desejáveis para um sistema de propagação in vitro de plantas em larga escala, pois, aumentou o crescimento das vitroplantas de fáfia e apresenta custo unitário reduzido em comparação com membranas comercializadas atualmente. No terceiro capítulo é relatado o uso de substrato poroso combinado com o enriquecimento da atmosfera com CO 2 . Todas as características de crescimento das vitroplantas cultivadas em condições de elevação de CO 2 e em Florialite ® aumentaram. Em atmosfera enriquecida com CO 2 foram produzidas plantas de P. glomerata com alto acúmulo de biomassa e de 20E e apresentando alterações ultraestruturais. O presente estudo mostra que um sistema fotoautotrófico com enriquecimento de CO 2 pode ser atrativo para a aplicação na produção massal de mudas de fáfia ou ainda, para a produção de biomassa de fáfia com teor elevado de β-ecdisona. / The overall objective of this study was to investigate the influence of gas exchange and CO 2 enrichment on the in vitro propagation of Pfaffia glomerata (Spreng.) Pedersen (Amaranthaceae). Nodal segments from Pfaffia vitroplants maintained by monthly subculture were used as explants. Characteristics related to growth, leaf anatomy, photosynthetic pigments, β-ecdysone (20E) content, Rubisco activity, starch, phenols and sugars were evaluated. The objective of the first chapter was to evaluate the influence of the ambient atmosphere and the atmosphere enriched with CO 2 (360 or 720 μmol mol -1 CO 2 ), the closure system of culture vessels and presence or absence of sucrose in the culture medium during growth and development of Pfaffia nodal explants. All growth characteristics of Pfaffia vitroplants increased under high CO 2 . Under conditions of CO 2 -enriched atmosphere, P. glomerata vitroplants were produced with good characteristics for clonal mass production, which is an alternative for the establishment of homogeneous commercial plantations aiming to the production of 20E to meet the industrial demands. The low relative water loss from leaves of vitroplants grown in culture medium with or without sucrose and high CO 2 , shows that a photoautotrophic or photomixotrophic system with CO 2 enrichment is beneficial for mass production of seedlings of this species, possibly reducing losses during acclimatization due to dehydration of vitroplants. The second chapter aimed to compare the effectiveness of new alternative types of membranes for closure with the MilliSeal ® membrane on the growth and morphogenesis in vitro of Pfaffia. Among the membranes tested, the M3 showed the desirable characteristics for a system of large-scale in vitro propagation of plants, because it increased the growth of Pfaffia vitroplants and has reduced unit cost compared with currently marketed membranes. The third chapter reports on results obtained using porous substrates combined with atmosphere CO 2 enrichment. Vitroplants grown under high CO 2 and Florialite ® had all growth characteristics increased. Seedlings of P. glomerata produced in CO 2 -enriched atmosphere had high accumulation of biomass and 20E and showed ultrastructural alterations. The present study shows that a photoautotrophic system with CO 2 enrichment can be beneficial for either mass production of Pfaffia seedlings or the production of Pfaffia biomass with high 20E content. / Tese antinga

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2016-06-20T15:06:04Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 676315 bytes, checksum: a451bf2e2060adec62ba8c114611d497 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-20T15:06:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 676315 bytes, checksum: a451bf2e2060adec62ba8c114611d497 (MD5) Previous issue date: 2009-12-22 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Há uma grande demanda por técnicas de laboratório mais simples e de menor custo e por procedimentos mais acessíveis a orquidófilos que não têm o embasamento teórico necessário à utilização de métodos usuais de produção seminífera e clonal de orquídeas in vitro. Neste trabalho, três experimentos foram conduzidos com os objetivos de avaliar a desinfestação química com hipoclorito de sódio (NaClO) de sementes e de tecidos de orquídeas para a produção de mudas in vitro, e testar a utilização de seringa descartável para o cultivo de tecidos, de modo a dispensar, em todos os casos, o uso de câmara de fluxo laminar. No primeiro experimento, sementes de Cattleya intermedia foram tratadas com seis concentrações de NaClO, variando de 1,2 a 4.800 mg L-1 de NaClO e semeadas utilizando-se dois métodos de cultivo: inoculação de sementes em frascos via seringa descartável, através de um furo em tampa de frascos de vidro, ou, abrindo-se o frasco, retirando-se a tampa, e colocando as sementes sobre o meio. Em ambos os métodos, as sementes foram inoculadas via 2 mL de suspensão semente-NaClO. Estes métodos foram comparados com o tradicional (controle), conduzido em câmara de fluxo laminar; com as sementes previamente desinfestadas com NaClO na concentração de 2.400 mg L -1 , corresponde a 100 mL L -1 de água sanitária comercial (ASC), e enxaguadas em H 2 O, mas sem a aplicação de NaClO aos meios nos frascos com as sementes. No segundo experimento, estudou-se a eficiência de concentrações de NaClO, variando de 1.200 a 6.000 mg L -1 (50 a 250 mL L -1 de ASC) aplicadas nos meios de cultura, na ausência ou presença de carvão ativado, em comparação à utilização de câmara de fluxo laminar sem a aplicação, neste caso, de NaClO nos meios, com os tecidos (explantes). Foram utilizados explantes de duas espécies de orquídeas: Arundina bambusifolia e Epidendrum ibaguenses. No terceiro experimento, estudou-se a utilização de seringa descartável, em substituição à câmara de fluxo laminar, utilizando três meios (MS1/2, GB5 e VW) e duas concentrações de três reguladores de crescimento (TDZ, ANA e BAP), para a obtenção de mudas de Phalaenopis spp. e de um híbrido de Dendrobium nobile, via cultura de tecidos. Como tratamento controle, utlizou-se o meio MS1/2 com 1,0 mg L -1 de TDZ em tubos de ensaio, com os explantes cultivados em condições normais, utilizando-se de câmara de fluxo. Não houve contaminação dos meios de cultura inoculados com a suspensão semente – NaClO. A presença do NaClO nas menores concentrações promoveu maior taxa de germinação e crescimento das plantas, em relação à sua não utilização (tratamento controle). A câmara de fluxo laminar mostrou-se desnecessária em relação à desinfestação feita com NaClO no meio de cultura. A aplicação de NaClO sobre o meio de cultura inoculado com os tecidos das plantas promoveu eficiente controle da contaminação. As maiores concentrações de NaClO causaram redução no crescimento das plantas. O uso de carvão ativado promoveu melhores resultados em termos de produção de plantas mas, por outro lado, a contaminação foi maior em sua presença. A utilização de seringa descartável mostrou-se viável para a propagação vegetativa das plantas. Embora, com alguns efeitos médios significativos, a diferença entre meios de cultura, reguladores de crescimento e suas concentrações apresentaram tendência geral para a similaridade dos dados de crescimento das plantas, evidenciando a possível simplificação dos procedimentos de desinfestação e cultivo. / There is a great demand for simpler and less costly laboratory techniques and for more accessible procedures for orchid breeders who do not have the necessary theoretical basis to use the traditional seed and clone production methods of orchids in vitro. In this study, three experiments were conducted with the purpose of evaluating chemical disinfection with sodium hypochlorite (NaClO) of orchid seeds and tissues for seedling production in vitro, and to test the use of disposable syringes for tissue culture, to dispense with the use of laminar flow in all cases. In the first experiment, seeds of Cattleya intermedia were treated with six NaClO concentrations between 1.2 and 4,800 mg L -1 NaCl, seeded by two methods: seed inoculation in glass jars with a disposable syringe through a hole in the lid, or by opening the jar, removing the lid, and placing the seeds on the medium. In both methods, seeds were inoculated in 2 mL seed – NaClO suspension. These methods were compared with the traditional (control) method, using laminar flow. After previous disinfection with NaClO at a concentration of 2400 mg L -1 , corresponding to 100 mL L -1 commercial bleach (CB), the seeds were rinsed in H 2 O, but without NaClO application to the media in the jars with the seeds. In the second experiment the effectiveness of NaCl concentrations between 1200 and 6,000 mg L -1 (50–250 mL L -1 CB) for the tissues (explants) was tested, applied to culture media in the absence or presence of activated carbon, in comparison with the use of laminar flow without the NaClO application to the media. Explants of two orchid species, Arundina bambusifolia and Epidendrum ibaguenses, were used. The third experiment tested the use of disposable syringes, instead of laminar flow, in three media (MS1/2, GB5 and VW) and with two concentrations of three growth regulators (TDZ, NAA and BAP) for obtaining Phalaenopis spp. seedlings and a Dendrobium nobile hybrid by tissue culture. In the control treatment, the MS1/2 medium was used with 1.0 mg L -1 TDZ in test tubes, and the explants were cultured under normal conditions, using a flow chamber. No contamination was observed in the culture media inoculated with seed – NaClO suspension. At low NaClO concentrations the germination and plant growth rates were higher than in absence of NaClO (control). In comparison, it was found that the application of NaClO dispensed with the use of laminar flow. The contamination control with NaClO application to the culture medium inoculated with the plant tissues was efficient. The highest NaClO concentrations resulted in reduced plant growth. The use of activated carbon led to the best results in terms of plant production while on the other hand, contamination was higher in their presence. The use of disposable syringes was feasible for the vegetative propagation of plants. However, with some significant mean effects, the difference between culture media, growth regulators and their concentrations generally tended to data similarity regarding plant growth, suggesting a possible simplification of the sterilization and cultivation procedures.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Recursos Genéticos Vegetais, Florianópolis, 2015. / Made available in DSpace on 2015-10-20T03:10:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 334964.pdf: 2246614 bytes, checksum: 32093f6cd81b63a2fc050ea3ef34cd58 (MD5) Previous issue date: 2015 / A embriogênese somática (ES) é um métedo eficiente à propagaçãomassiva de plantas e à conservação de germoplasma. Em nível básico elase configura como um modelo biológico para o aprofundamento deestudos de morfogênese, fisiologia, bioquímica e genética de plantas.Muitos organismos apresentam características similares durante a ES, taiscomo a expressão de genes homólogos, o desenvolvimento de tecidosespecializados semelhantes ao observado na embriogênese zigótica e asrespostas a certos reguladores de crescimento. Para abordarprofundamente estas características associadas à ES de palmeirasneotropicais foi elaborada uma ampla revisão sobre este tema no primeirocapítulo desta dissertação. De uma forma geral esta revisão mostrou queembriões zigóticos e/ou meristemas apicais têm sido os explantes maisempregados, mostrando-se responsivos ao meio de cultura baseado naformulação salina de Murashige e Skoog suplementado com vitaminas deMorel, 3% de sacarose, carvão ativado e concentrações elevadas deauxinas, principalmente 2,4-D ou picloram. Em seguida, odesenvolvimento embrionário normalmente é estimulado em meios decultura suplementados com teores reduzidos destas auxinas e com oemprego de citocininas, notadamente BAP e 2-ip. Por fim, os embriõessão convertidos em plântulas em meios isentos de reguladores decrescimento. Além da micropropagação, muitos estudos concentraram-sena expressão de genes e na bioquímica do desenvolvimento de embriõessomáticos de palmeiras. Estudos histológicos sugeriram tendênciascomuns em diferentes espécies durante a morfogênese in vitro, tais comomorfologia semelhante dos ápices caulinares meristemáticos, calos ecélulas epidérmicas. No segundo capítulo estudou-se o emprego deculturas de protoplastos em três espécies de palmeiras, pupunha (Bactrisgasipaes), butiá-da-serra (Butia eriospatha) e açaí (Euterpe oleracea).Protoplastos são células com suas paredes celulares removidas eapresentam interesse tanto pela sua capacidade regenerativa quanto pelapossibilidade da geração de híbridos através da fusão somática de doisprotoplastos diferentes. Esta tecnologia tem sido investigada em váriasespécies de palmeiras, tais como dendê (Elaeis guineensis) e tamareira(Phoenix dactyilifera). Na presente dissertação, culturas embriogênicaspreviamente estabelecidas de pupunha, butiá-da-serra e açaí foramtratadas com uma solução enzimática composta por 2% de celulase, 0,5% de hemicelulase e 0,5 % de pectinase e em seguida elas foram23incubadas no escuro a 25 ± 2 ° C durante 6, 12, 18, ou 24 horas semagitação ou num agitador orbital a 45 rpm para o isolamento deprotoplastos. As maiores quantidades de protoplastos foram obtidasatravés da incubação em agitador orbital, sendo 5.50±0.68x105 e1.22±0.13x106 protoplastos / grama de peso fresco de pupunha e açaí,respectivamente, depois de seis horas de incubação, e 5,36 ± 2.23x105células / grama de peso fresco para butiá após 24 horas incubação.Culturas de pupunha e açaí mostraram diminuição de rendimento deprotoplastos após seis horas de incubação, enquanto a quantidade deresíduos celulares visíveis aumentou. A viabilidade de protoplastosmanteve-se elevada (> 70%), com exceção de protoplastos de açaí, cujaviabilidade diminuiu rapidamente após seis horas na incubação orbital.Os protoplastos foram cultivados usando o método de gotas de agarose oude alginato, sendo submetidos a seis tipos de meios líquidos contendo 0,1, ou 10 µM de picloram com ou sem 2µM de 2-ip. Picloram não semostrou essencial para as divisões celulares, as quais, no entanto forammais frequentes e ocorreram mais cedo em resposta a meios com níveiscrescentes do mesmo. Foram observadas microcolônias se formando nasgotas de alginato com 10 de µM picloram e 2 µM de 2-ip, no entantocolonias visíveis foram formados apenas em duas esferas de agarose. Noterceiro capítulo desta dissertação o incremento de massa seca e os teoresde proteínas, açúcares e amido foram investigados em culturas depupunha com diferentes capacidades para ES: alta capacidadeembriogênica (ACE), baixa capacidade embriogênica (BCE), e nãoembriogênica(NE). Culturas de ACE e NE apresentaram incrementos demassa seca semelhantes e que foram maiores queo incremento de massaseca em culturas de BCE. Culturas de ACE apresentaram teoresligeiramente mais elevados de proteínas do que as culturas NE, contudoambas continham maiores teores de proteínas do que as culturas de BCE.Níveis de amido foram semelhantes entre culturas de ACE e NE e queforam maiores que os níveis de amido em culturas de BCE. Níveis deaçúcares foram demasiadamente baixos para terem seus valorescalculados utilizando uma curva padrão de glicose, porém as leituras deabsorbância mostraram que as culturas de ACE e NE apresentaramvalores médios semelhantes e superiores aos níveis encontrados emculturas de BCE. Estes dados sugerem que os diferentes comportamentosde crescimento das diferentes culturas podem não refletir as quantidadestotais de proteínas, e sim os tipos de proteínas a serem expressas. A grandequantidade de amido nas culturas NE, juntamente com a morfologia24distinta destas culturas, pode sugerir uma rota regenerativa baseada naorganogênese. Além disso, é possível que a falta de reservas de energianas culturas de BCE esteja relacionada com o seu rápido crescimento.Formações de tecidos organizados também foram observadas nas culturade BCE, isto pode sugerir que a morfogênese in vitro não inclui apenasos embriões somáticos, calos, raiz e plântulas, mas pode incluir outrostipos de tecidos. No quarto capítulo buscou-se a optimização da ES emculturas de pupunha, butiá e açaí. Culturas de pupunha 'G3' foramcultivadas em meios de cultura compostos pelos sais de MS ou MSmodificado, suplementados com 1 mM de espermidina, 1 mM deespermina, ou sem poliaminas. Não houve diferença no número deembriões somáticos regenerados a partir dos meios de MS ou MSmodificado, no entanto, ambas as poliaminas apresentaram efeitosnegativos para a formação de embriões. Culturas de pupunha ?G2? foraminoculadas em meio de cultura contendo 3% de sacarose ou uma misturaigual de sacarose, glicose, frutose, e sorbitol, não revelando diferenças emtermos de números totais de embriões regenerados. Embriões zigóticos debutiá inoculados em meio MS contendo 3% sacarose, 2,5 g / L de carvãoativado e 300 µM ou 450 µM de picloram responderam com a formaçãode calos com aparência embriogênica similares aos observados empupunha, 40% e 27,5% respectivamente. No entanto, culturas friáveis debutiá foram submetidas a vários tipos de meios de cultura, incluindomeios sólidos e líquidos; diferentes concentrações de auxinas, citocininas,ABA, GA3, sacarose e carvão ativado,e ausência ou presença de luzdurante o cultivo, porém, em nenhum dos ambientes proporcionadosocorreu a formação de embriões somáticos. Além disso, desidrataçãoparcial não induziu melhorias na multiplicação das culturasde butiá, omesmo foi observado em culturas de pupunha. A multiplicação dasculturas de açaí foi melhorada com a adição 2,5 g / L de carvão ativado eaumento nos teores de picloram de 10 µM até 50 µM. O carvão ativadolevou à redução de 400% no número de explantes oxidados, um aumentono número de explantes produzindo embriões, número deembriõesformados por explante, e numero de massas poliembriogênicas porexplante. No entanto, os casos de crescimento de raizes organogênicas ede calogênese observados a partir de explantes de açaí colocadas emmeios com carvão ativado sugerem que o efeito da auxina diminui napresença de carvão ativado. Tomados em conjunto, os resultados dapresente dissertação contribuem para uma melhor compreensão dosestudos da morfogênese in vitro de palmeiras, notadamente aqueles25associados aos fatores envolvidos na tecnologia de protoplastos, àscaracterísticas bioquímicas de culturas de pupunha com diferentespotenciais embriogênicos e à otimização dos protocolos regenerativosestudados, especialmente o de açaí.<br> / Abstract : Somatic embryogenesis (SE) is a powerful technology that is useful for commercial propagation, scientific study, germplasm conservation, and has potential applications in reforestation attempts in damaged ecosystems. Many organisms show similar traits during SE, such as the expression of commonly-found gene homologs, development of specialized tissues similar to zygotic embryogenesis, and response to certain growth regulators. To summarize these trends, a review article was written (Chapter 1 of this thesis). A literature analysis of SE in the palm family, Arecaceae, suggests similar trends across palm species. Both zygotic embryos or palm shoot meristems tended to respond well to culture media composed of Murashige and Skoog salts, vitamins, 3% sucrose, exogenous activated carbon, and high concentrations of auxins, such as 2,4-D or picloram. Embryo development was usually stimulated through subculture onto media with reduced auxins and addition of cytokinin, such as BAP and 2-ip and then embryos could be frequently converted on media without growth regulators. In addition to micropropagation, many studies focused on the biochemistry and gene expression of developing palm somatic embryos. Histological studies revealed common trends, such as similar morphology of meristematic vs. callus and epidermal cells. One of the technologies that several research groups had evaluated was protoplast culture. Protoplasts, cells with their cell walls removed, are of scientific interest due to both being able to regenerate into larger cultures and the ability to create hybrids through somatic fusion of two different protoplasts. This technology has only been investigated in several large-scale economic species, such as oil palm (Elaeis guineensis) or date palm (Phoenix dactyilifera), and increased understanding of trends might lead to further development of protoplast culture as a whole (Chapter 2). To understand protoplast isolation and culture, previously-established peach palm (Bactris gasipaes), butiá-da-serra (Butia eriospatha), and açaí (Euterpe oleracea) cultures were treated with an enzyme solution composed of 2% w/v cellulase, 0.5% hemicellulase, and 0.5% pectinase and then either incubated stationary for 6, 12, 18, or 24 hours or on an orbital shaker at 45 rpm for 3, 6, 12, or 24 hours in the dark at 25±2 °C. Stationary incubation did not provide large amounts of protoplasts in comparison to incubation done on an orbital shaker. The greatest numbers of protoplasts per species were 5.50±0.68x105 and 1.22±0.13x106 protoplasts/ gram FW for peach palm and açaí after six hours of orbital shaking and 5.36±2.23x105 cells/gram FW for butiá after 24 hours of orbital shaking. Both peach palm and açaí saw dramatic decreases in protoplast yield after later incubations while the amount of visible cellular debris increased, possibly showing a potential reason for the decreased cell yield as cellular debris might lyse cells in motion. Protoplast viability remained high (>70%), except for açaí protoplasts, which decreased rapidly during orbital incubation. Protoplasts were cultured either using the agarose bead or the alginate bead method. Protoplasts cultured in alginate beads were subjected to six types of liquid media containing 0, 1, or 10µM picloram either with or without 2µM 2-ip. Auxin was not shown to be essential for causing cell division in several occasions, however cell division was more frequent and occurred earlier in media with increasing levels of picloram. 2-ip was not found to have a major impact. Microcolonies were observed to form in alginate beads with 10µM picloram and 2µM 2-ip, however visible colonies were only formed twice in agarose beads. Further optimization would be required to achieve regeneration of whole plants, however there are many trends in other species, such as use of nurse cultures, higher cell density during culture, and type of culture method, which can be pursued. The biochemistry of peach palm cultures with different capacities for SE, high embryogenic (HE), low embryogenic (LE), and non-embryogenic (NE), were investigated for dry weight, protein, sugar, and starch content (Chapter 3). It was found that both HE and NE cultures had similar dry weights, but water made up a larger proportion of LE cultures. Because of this difference, protein, sugar, and starch amounts were evaluated in terms of both fresh weight and dry weight. HE contained slightly higher amounts of protein than NE cultures, but both tissues contained higher proteins contents than LE cultures, even after adjusting for dry weight. Starch levels were comparable between HE and NE cultures, but LE cultures contained significantly fewer starch reserves. Sugar levels were too low to have their amounts calculated using a glucose standard curve, however their absorbance readings showed HE and NE cultures had the about the same values, while once again LE cultures contained fewer reserves. These data suggest that the different growth behavior of the different tissues may not reflect overall protein amounts, but rather the types of proteins being expressed. Additionally, the large amounts of starch growth, along with the distinct morphology of NE tissues might suggest a type of organogenesis. Additionally, it is possible that the lack of energy reserves found in LE tissue is related to its rapid growth. Organized tissue formations were also observed in LE tissue, possibly suggesting that in vitro organogenesis extends beyond simply somatic embryos, roots, and shoots. Additionally, SE optimization was investigated in peach palm, butiá, and açaí cultures. Peach palm tissue lines  G3 were placed on media containing either MS or modified MS salts and media containing 1mM spermidine, spermine, or no polyamines. No difference was detected in the number of somatic embryos recovered from MS or modified MS cultures, however either polyamine had a negative effect. Peach palm  G2 cultures were placed on media containing either 3% sucrose or an equal mix of sucrose, glucose, or sorbitol with no difference in total numbers of recovered embryos. Fast-growing friable butiá cultures were subjected to numerous types of media, including both solid and liquid media, media containing different concentrations of auxins, cytokinins, ABA, GA3, sucrose, and activated charcoal in both light and dark, but no somatic embryos were induced. Additionally, partial dehydration did not induce improved peach palm multiplication nor butiá SE. However, 40% and 27.5% placed on MS media containing 2.5g/L activated charcoal and 300µM or 450µM, respectively, picloram responded with tissue growth similar to that found in peach palm highly embryogenic tissue. Açaí multiplication was greatly improved through optimizing multiplication media with addition 2.5g/L activated charcoal and increased picloram up to 50µM from 10µM. The effects of the activated charcoal led to 400% reduction in number of oxidized explants, an increase in number of explants producing embryos, embryos per explant, number of embryos producing polyembryogenic masses, and number of polyembryogenic masses per explant. However, instances of organogenic root growth and increased callogenesis were observed on açaí explants placed on media with activated charcoal, which suggests that the decreased effect of auxin caused by activated charcoal can reduce embryogenic potential. Together, these works contribute to better understanding the trends found in multiple palms, factors involved in the valuable technology of protoplast culture, the biochemical characteristics of several types of peach palm tissue with different embryogenic potential, and cultural optimization, especially for the economically valuable açaí palm.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Recursos Genéticos Vegetais, Florianópolis, 2017. / Made available in DSpace on 2017-07-25T04:12:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 347035.pdf: 1475783 bytes, checksum: 8ddebabe058cf5e37e595d8c32776065 (MD5) Previous issue date: 2017 / Theobroma cacao L. é uma espécie amplamente cultivada na zona tropical húmida do planeta. As sementes tem um elevado valor econômico e são a matéria prima para a produção de chocolate. No entanto, devido às características botânicas que esta espécie apresenta, associadas a um alto grau de auto-incompatibilidade, os plantios comerciais apresentam alta heterozigosidade genética, afetando diretamente a produtividade do cultivo. Por esta razão, sistemas de propagação clonal como estacas enraizadas e enxertia tem sido aplicados para a multiplicação de variedades de elite. Estas técnicas, contudo, apresentam alto custo de mão de obra e não garantem a qualidade sanitária das plantas. Neste contexto, técnicas de micropropagação in vitro associadas à embriogênese somática podem contribuir para produção em larga escala de novas variedades e de genótipos superiores, bem como para a conservação de germoplasma, além de servir como modelo para o estudo de processos fisiológicos, genéticos e bioquímicos envolvidos no desenvolvimento embrionário. A embriogênese somática a partir de partes florais tem sido o método mais eficiente para a regeneração in vitro de plântulas. Este sistema integra a embriogênese indireta com subsequente embriogênese secundária direta, a partir da qual o sistema se torna cíclico. Os protocolos de embriogênese somática apresentam lacunas no conhecimento que precisam ser preenchidas. Neste contexto, o presente trabalho teve como objetivos aprofundar nos mecanismos moleculares que determinam a qualidade dos embriões somáticos e estudar a relação da metilação do DNA e a capacidade de conversão de embriões somáticos com a embriogênese somática secundaria a longo prazo. Assim, utilizou-se a tecnologia de identificação multidimensional de proteínas (HDMSE), para identificar o perfil proteômico de embriões do tipo branco e do tipo translúcido, os quais diferem amplamente pela capacidade de conversão. O grupo das proteínas diferencialmente expressas revelou que a capacidade de conversão dos embriões somáticos está relacionada com o metabolismo dos carboidratos e com a capacidade das culturas em manter um equilíbrio no sistema redox. A análise global dos níveis da metilação do DNA em embriões somáticos jovens e embriões somáticos envelhecidos sugere que a hipometilação do DNA observada em embriões envelhecidos é uma resposta adaptativa (acumulativa) das culturas às condições in vitro, enquanto que a perda do potencial embriogênico associada com a embriogênese somática a longo prazo, é uma característica epigenética que pode ser reversível. Finalmente, o uso da droga demetilante 5-azcC mostrou uma correlação positiva com a recuperação do potencial embriogênico em embriões somáticos envelhecidos.<br> / Abstract : Theobroma cacao L. is a plant species widely cultivated in the humid tropics of the planet. The cacao beans have a high economic value and they are the raw material for the chocolate industry. However, due to the botanical traits associated with a high degree of self-incompatibility, the commercial plantations present high genetic heterozygosity, directly affecting the crop yield. For this reason, clonal propagation systems such as rooted cuttings and grafting have been applied for the multiplication of elite varieties. However, these methods present a high labor cost and do not guarantee the plants sanitary quality. In this view, in vitro micropropagation methods associated with somatic embryogenesis can contribute to the large-scale propagation of improved varieties and genotypes, as well as the conservation of germoplasm, and this can uses as a model for the study of the physiological, genetic and biochemical processes involved in plant embryogenic development. Somatic embryogenesis using floral explants has been the most efficient method for regeneration in vitro seedlings. This system integrates indirect embryogenesis with subsequent direct secondary embryogenesis, from which the system becomes cyclic. Somatic embryogenesis protocols present hole in the knowledge, which need to be elucidated. In this context, the present work had as objective to deepen in the molecular mechanisms that determine the somatic embryo quality to study the relationship between the DNA methylation and the embryogenic potential of somatic embryos in the long-term secondary somatic embryogenesis. Thus, the multidimensional protein identification technology (HDMSE) was used to identify the proteomic profiles of white and translucid somatic embryos, which are widely different in the conversion capacity. The somatic embryos conversion ability was related to carbohydrate metabolism and the ability of cultures to maintain equilibrium in the redox system. The global DNA methylation levels in young somatic embryos and aged somatic embryos suggested that hypomethylation of DNA in aged somatic embryos is an adaptive (cumulative) response to in vitro culture conditions, whereas the loss of the embryogenic potential associated with long-term somatic embryogenesis, is an epigenetic feature that can be reversible. Finally, the 5 -azaC showed a positive correlation with the recovery of the embryogenic potential in aged somatic embryos.

Made available in DSpace on 2016-08-29T15:36:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_7452_Marcio Jose Vieira de Oliveira.pdf: 1178417 bytes, checksum: f1c94b6a827971ad2f16256321e1fb3b (MD5) Previous issue date: 2014-02-28 / O desenvolvimento da técnica de micropropagação do mamoeiro por meio da cultura de tecidos se destaca como uma ferramenta de grande aplicação na produção em larga escala de clones com características superiores, de sexos definidos e livres de viroses. Na micropropagação, a possibilidade do enraizamento ex vitro proporciona redução de custos com mão de obra e infraestrutura, pois uma etapa do processo in vitro é eliminada e há economia de energia e espaço na sala de crescimento. Outra forma de se obter maior rendimento na produção de brotos das plantas matrizes é a miniestaquia. Foram realizados três experimentos com objetivos de avaliar o efeito da aplicação de ácido indolbutírico (AIB) para indução do enraizamento em microestacas e miniestacas de plantas hermafroditas de mamoeiro híbrido UENF/CALIMAN 02. No experimento 1, as microestacas produzidas in vitro foram submetidas a duas formas de indução para o enraizamento em condições ex vitro em sistema semi-hidropônico: indução in vitro e ex vitro. O experimento foi instalado em num delineamento inteiramente ao acaso em um esquema fatorial 2 x 4, sendo dois sistema de indução (in vitro e ex vitro) e quatro níveis de AIB ( 00; 2,5; 5,0 e 7,5 mg L-1). No experimento 2, foram selecionadas miniestacas (de 4 a 6 cm) das plantas matrizes e submetidas ao enraizamento em hidroponia com diferentes níveis de AIB (0; 1,; 5; 10; 50 e 100 mg L-1 de AIB). O experimento foi instalado em delineamento inteiramente ao acaso com seis tratamentos, quatro repetições e cinco miniestacas por repetição. O experimento 3 foi instalado em esquema fatorial com cinco níveis de AIB: 0; 2,5; 5,0; 7,5 e 10 mg L-1, dois substratos: vermiculita e fibra de coco, num delineamento inteiramente ao acaso, com três repetições e seis miniestacas por repetição. Os dados foram submetidos à análise de variância e as médias foram comparadas pelo teste de Tukey e, para a massa seca da parte aérea e do sistema radicular foram também submetidas à análise de regressão. No enraizamento de microestacas de mamoeiro em sistema semi-hidropônico, o tratamento que gerou melhor resultado (96,66% de enraizamento) foi aquele em que se utilizou 2,5 mg L-1 de AIB com aplicação in vitro. Para o enraizamento de miniestacas em sistema semi-hidropônico, o nível adequado de AIB é de 5,0 mg L-1, que propiciou 61,11% de enraizamento com os substratos vermiculita e com fibra de coco / The development of techniques of micropropagation of papaya through tissue culture stands as a "tool" of wide application in large-scale production of clones with superior characteristics, the sexes defined and free of viruses. In micropropagation, the possibility of ex vitro rooting provides cost saving in manpower and infrastructure, as a step of the in vitro process is eliminated and there is power and space savings in the growth room. Another way to obtain higher yield of shoots of stock plants is microcutting. Three experiments aimed to evaluate the effect of Indolebutyric Acid (IBA) to induce rooting on micropiles and mini hermaphrodite papaya plants hybrid UENF/CALIMAN 02 were performed. In experiment 1 microcuttings produced in vitro were subjected to two forms of induction for rooting in ex vitro conditions in semihydroponic system: in vitro and ex vitro induction. The experiment was installed in a completely randomized design in a 2 x 4 factorial arrangement, two induction system (in vitro and ex vitro) and four levels of IBA (00, 2.5, 5.0 and 7.5 mg L-1 ). In experiment 2 minicuttings were selected (4-6 cm) from the mother plants and subjected to rooting hydroponics with different levels of IBA (0, 1, 5, 10, 50 and 100 mg L-1 IBA). The experiment was installed in a completely randomized design with six treatments, four replications and five minicuttings per replicate. Experiment 3 was installed on factorial design with five levels of IBA: 0, 2.5, 5.0, 7.5 and 10 mg L-1 , two substrates: vermiculite and coconut fiber in a completely randomized design with three replications and six minicuttings per replication. Data were subjected to analysis of variance and means were compared by Tukey test, and for dry weight of shoot and root were also subjected to regression analysis. On rooting of papaya minicuttings in semi-hydroponic system, the treatment that produced the best result (96.66% rooting) was the one which used 2.5 mg L-1 IBA with in vitro application. For rooting cuttings in semi-hydroponic system, the appropriate level of IBA is 5.0 mg L-1 which provided 61.11% rooting with vermiculite and coconut fiber.

Dissertação (Mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. / Made available in DSpace on 2012-10-18T16:13:23Z (GMT). No. of bitstreams: 0Bitstream added on 2016-01-09T03:17:12Z : No. of bitstreams: 1 147232.pdf: 8736264 bytes, checksum: 969de9cd192ee2bfec5be86c67714876 (MD5)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:40Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-02-22Bitstream added on 2014-06-13T19:34:16Z : No. of bitstreams: 1 oliveira_tg_me_botfca.pdf: 953738 bytes, checksum: e9b546727e5293ea8910f7d268c05876 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Croton antisyphiliticus Mart. ex M. Arg. popularmente pé de perdiz, é uma planta medicinal nativa do Cerrado, pertencente à família Euphorbiaceae. A raíz é utilizada popularmente na forma de decoctos e garrafadas para combater infecções do aparelho reprodutor masculino e feminino. A coleta da planta é realizada de forma extrativista e não há trabalhos a respeito da conservação da espécie. Desta forma, este trabalho teve como objetivo desenvolver um protocolo de micropropagação visando a multiplicação em larga escala de C. antisyphiliticus para que no futuro seja possível o desenvolvimento de um medicamento fitoterápico a partir desta espécie. Foram desenvolvidos experimentos de germinação in vitro, protocolos de micropropagação e conservação de germoplasma in vitro. Para determinar a melhor condição de germinação in vitro foi avaliada a ação do fungicida Cercobin na assepsia das sementes. No desenvolvimento do protocolo de micropropagação foram avaliados o efeito dos meios MS, WP e B5 e da concentração de sais no desenvolvimento das plantas; o efeito das citocininas BAP, cinetina, zeatina e 2ip na multiplicação dos explantes; a associação do BAP com a auxina AIA na intensificação das brotações; o tamanho do recipiente para o cultivo in vitro; o co-cultivo; a posição da gema em relação à brotação; a influência da auxina AIB no enraizamento in vitro; a aclimatação dos explantes; e o efeito de agentes de estresse osmótico no crescimento mínimo de explantes de C. antisyphiliticus. O meio MS/2 foi o meio mais eficiente para o desenvolvimento de plantas in vitro. Várias citocininas influenciaram na multiplicação dos explantes, no entanto, a BAP (1μM) foi selecionada como a mais eficaz para a multiplicação. A associação de BAP com AIA não apresentou resultado significativo no aumento das brotações. As plantas cultivadas em frasco tipo... / Croton antisyphiliticus Mart. ex M. Arg. popularly “pé de perdiz” is a medicinal plant native from Cerrado, belonging to Euphorbiaceae family. The root is used popularly in the form of decoctions and “garrafadas” to combat males and females tract infections. The collection of the plant is carried through of extrativist form and it doesn’t have works regarding the conservation of the species. So, this study had as aimed to develop a micropropagation protocol to a multiplication in a large scale of C. antisyphiliticus, so that in future it is possible to develop a fitotherapic medicament from this species. Experiments had been developed of in vitro germination, micropropagation protocols and in vitro conservation of germoplasm. To determine the best condition for in vitro germination was evaluated the action of the fungicide Cercobin in the asepsis of the seeds. In the development of micropropagation protocol had been evaluated the effect of media MS, B5 and WP and the concentration of salts in plant development; the size of the container for the in vitro cultivation; the effect of the cytokinins BAP, kinetin, zeatin and 2ip in multiplication of explants; the combination of BAP with IAA in enhancing shoot; the influence of the auxin IBA on in vitro rooting; the co-cultivation; the bud position in relation to the shooting and; the effect of osmotic stress agents in minimal growth of explants of C. antisyphiliticus. The MS was the most efficient with its concentration reduced by half resulted in better development of plants in vitro. Plants grown in flasks showed better results. Many cytokinins had influence on the multiplication of the explants,however, the BAP (1 μ M) was selected as the most efficient for multiplication. The combination of BAP with IAA didn’t present weren’t significant results in the increase of shoots. The explants also to present co-cultivation in vitro... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:37Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-04-19Bitstream added on 2014-06-13T19:23:49Z : No. of bitstreams: 1 ichinose_jgs_dr_jabo.pdf: 375994 bytes, checksum: ca9a5202ea2ae13b7677ec7e4a5a5440 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Sophronitis cernua e Brassavola flagellaris são orquídeas epífitas, nativas do Brasil. O cultivo in vitro é uma técnica que permite produzir grande número de indivíduos, entretanto ocorrem muitas perdas durante o período de aclimatização (ex vitro). Em razão disto, este trabalho teve como objetivo estudar o efeito da suplementação do meio de cultura Murashige e Skoog com paclobutrazol, no crescimento e desenvolvimento de plântulas de Sophronitis cernua e Brassavola flagellaris (in vitro), visando aumentar a taxa de sobrevivência das plântulas ex vitro. O delineamento experimental utilizado foi inteiramente casualisado. Foram quatro tratamentos (três concentrações de paclobutrazol: 0,5; 1,0 e 1,5 mg i.a. L-1 e controle) e 10 repetições com 12 plântulas. Após cultivo em meio sem suplementação, as plântulas foram inoculadas nos tratamentos, onde permaneceram por mais 90 dias. Após este período, cinco repetições foram separadas para as análises destrutivas e as outras cinco foram transplantadas para bandejas contendo fibra de coco (S. cernua) e mistura de fibra de coco e esfagno (B. flagellaris). Verificou-se que as diferentes concentrações de paclobutrazol promoveram alterações nas características morfológicas das plântulas das duas espécies. Para S. cernua foi verificada redução do número de folhas, área foliar, massa seca e comprimento da parte aérea; aumento no diâmetro e massa seca de raízes e redução na taxa de sobrevivência das plântulas. Para B. flagellaris houve incrementos no acúmulo de massa seca de todas as partes (exceto na maior concentração para parte aérea), no número de folhas, na área foliar (0,5 mgL-1), no diâmetro no comprimento de raízes e no número de raízes; redução no número de brotos e comprimento da parte aérea e maiores taxas de sobrevivência da plântulas / Sophronitis cernua and Brassavola flagellaris are orchids epiphytes, native of Brazil. The in vitro propagation is a technique that allows to produce large numbers of plants, however many losses occur during the period of acclimatization (ex vitro). For this reason, this work aimed to study the effect of supplementation of the Murashige and Skoog medium with paclobutrazol on growth and development of plants of Sophronitis cernua and Brassavola flagellaris (in vitro) to increase the survival rate of seedlings ex vitro. The experimental design was completely randomized. There were four treatments (three concentrations of paclobutrazol: 0.5, 1.0 and 1.5 mg ai L-1 and control) and 10 repetitions with 12 plants. After cultivation in medium without supplementation, the seedlings were inoculated on treatments, where they remained for another 90 days. After this period, five replicates were separated for destructive analysis and the other five were transplanted into trays containing coir (S. cernua) and a mixture of coconut fiber and sphagnum moss (B. flagellaris). It was found that paclobutrazol induced changes in the morphological characteristics of both species. To S. cernua: reducing the number of leaves, leaf area, dry weight and shoot length and increase in diameter and dry mass of roots. Reduction in the rate of seedling survival. To B. flagellaris: increases in dry mass of all parties, except at the highest concentration (aerial part), the number of leaves, leaf area (0.5 mgL-1), diameter, length of roots and more roots. Reduction in the number of shoots and shoot length. Highest survival rates of seedlings

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:37Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-04-05Bitstream added on 2014-06-13T20:25:24Z : No. of bitstreams: 1 gimenes_r_dr_jabo.pdf: 1905322 bytes, checksum: 311e2450a860a56f3629aaab5cb74493 (MD5) / As plantas da família Orchidaceae são muito apreciadas pelo potencial ornamental, ecológico e econômico. O domínio de técnicas para a domesticação e propagação em massa das espécies é extremamente importante, visto que possibilita diminuir a coleta predatória, além de reduzir o custo de produção das plantas. O cultivo in vitro é uma técnica que permite produzir grande número de plantas; entretanto, ocorrem muitas perdas durante o período de aclimatização (ex vitro). O retardante de crescimento paclobutazol (PBZ) atua como inibidor de giberelinas, diminuindo a parte aérea das plantas, promovendo engrossamento nas raízes e aumentando a resistência a estresses, características estas relevantes para aclimatização de mudas com sucesso, contribuindo para altas taxas de sobrevivência. Este trabalho teve como objetivo estudar o efeito da suplementação do meio de cultura Murashige e Skoog com PBZ, no crescimento e desenvolvimento in vitro, e na aclimatização de plantas de Zygopetalum crinitum e Cattleya schilleriana, visando aumentar a taxa de sobrevivência ex vitro. O delineamento experimental (in vitro e ex vitro) foi inteiramente casualisado, com quatro tratamentos (três concentrações de paclobutrazol: 0,5; 1,0; 1,5 mg L-1 e controle); na fase in vitro foram 5 repetições com 5 plântulas/parcela, e na fase ex vitro, 5 repetições com 15 plântulas/parcela. A suplementação do meio de cultivo com PBZ promoveu em plântulas de Z. crinitum redução no comprimento da parte aérea e do sistema radicular, e engrossamento das raízes durante a fase in vitro; na fase ex-vitro, verificou-se engrossamento das raízes, redução no comprimento e na massa de matéria seca da parte aérea. As alterações morfofisiológicas promovidas nas plântulas pela aplicação de PBZ não implicaram melhores taxas de sobrevivência... / The plants from Orchidaceae family are very much appreciated by their ornamental, ecologic and economic potential. The mastery of domestication techniques and mass propagation of the species is extremely important since it would decrease the predatory collecting and also reducing the production cost of the seedlings. The in vitro cultivation is a technique that allows the production in large scale; however, the losses during the acclimatization process (ex vitro) can be considerable. The growth retardant paclobutrazol (PBZ) act as gibberellin synthesis inhibitor, reducing the growth of the aerial part and promoting root thickening of the plants, which may increase their resistance to stress conditions; and also being considered good characteristics for plant survival in the acclimatization phase. This work has aimed to study the effect of PBZ supplementation on Murashige and Skoog culture media in the growth and development in in vitro and acclimatization process of Zygopetalum crinitum and Cattleya schilleriana, aiming to increase the survival rate. The experimental design (in vitro and ex vitro) was totally randomized, with four treatments (three paclobutrazol doses: 0.5, 1.0, 1.5, mg L-1 and a control); in the in vitro phase were performed 5 replications with 5 seedlings per plot and in the ex vitro one, 5 replications with 15 seedlings per plot. The paclobutrazol supplementation promoted, for Z. crinitum seedlings, reduction in aerial part and root length and root thickening in the in vitro process; in the ex vitro phase, it was observed root thickening and reduction in length and dry mass of the aerial part. The morphophysiological changes in the seedlings due to the PBZ application did not cause an increase in survival rates for this orchid. For C. schilleriana seedlings, the PBZ promoted root thickening in vitro; and in the acclimatization... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2016-06-02T19:29:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2438.pdf: 2335958 bytes, checksum: 52c4c09c1c5b16a8d39ab3d6985a533c (MD5) Previous issue date: 2009-05-08 / Financiadora de Estudos e Projetos / Aiming to know the sorts of Orchidaceae of the central region of the State of São Paulo, from 1996 and more intensively from 2005, visits were carried out in 125 forest fragments of 23 local municípios, with weekly periodicity and also, fortnightly. The collect were assistematics, being each fragment visited in the biggest number of points. The species not identified in field, had collected examples (with authorization of the IBAMA and Forest Institute of São Paulo) and cultivated at green house up to the blooming. At least the floral parts were herborized and deposited principally in the Herbarium of the Federal University of São Carlos. 219 species were registered in 98 genera: 64 % epiphytic (140 species), 35% terrestrian (77) and 1% halfepiphytes (two). 15,5% from epiphytic (32) are also rock plants and 0,4% from terrestrian (one) is micoheterotrofic. The species with bigger richness were: Acianthera (13 species), Habenaria (12 species), Epidendrum (11 species), Bulbophyllum e Campylocentrum (10 species each), Pelexia (seven species), Cyclopogon (six species) and Baptistonia, Cattleya, Cyrtopodium and Encyclia (five species each). Four species (Anathallis sp., Baskervilla sp., Pelexia sp., Triphora sp.) they are in study and can be new táxons. Triphora sp. is a species of new incident for São Paulo and Baskervilla sp. can be the second valid species in Brazil for the genera. Probably that elevated number of species found is due to the fact that the studied area represents a region with influence of savana and Atlantic forest. From the total species studied 44,7 % are considered practically extinct in the nature, 42 % is threatened of extinction and 13,2 % is common. This fact is due not only to the deforestation and to the forest fragmentation, but also to his great collect. Regarding the species epiphytes, studies were done on interaction between these and his host tree (hostness), with approach on ecological nets, nestled structures and the factors wrapped in these relations, being taken into account and, also, if the time of interaction between them, analyzed through the phylogeny of the orchids and host tree, contributed to such a interaction. The structure interconnected of the web of interactions between species can be described through a net (graphs), i.e. a set of points (apexes, knots) that can or not be connected through lines (edges, connections). In a net between organisms, the knots represent the species of a locality and, the lines, interactions between the species. The study of the structure of the nets, mutualistics or not, is still essentially in a descriptive phase. Pollination, dispersal of seeds and epiphytism, they have been studied and fitted in the category of non-trophic mutualistics relations in nets. The studies on interactions between communities can be usefull for the understanding which factors are wrapped in the origin and evolutive maintenance of them. This standard of interaction has been called nestled. A matrix was mounted describing the interactions between the species of orchids in the lines and the species of host tree in the columns. When there was interaction, the element aij of this matrix was considered 1 (one), when there was not this interation was considered 0 (zero). Through the NESTED program 3.0, was analyzed if the 139 species of epiphytic orchids were in structure nestled with 158 species of host tree, and also there was done the calculation of the rate NODF (Nestedness metric based on Overlap and Decerasing Fill). They were considered in the analyses, around 7.500 incidents of epiphytic orchids and 2.900 of host tree. For the phylogenetic analyses there was used the module PHYDIST of the program Phylocon 3.41. The drawings of the phylogenetic trees were done with help of IT ADDS-4 (Analyses des Données Ecologiques). The species of orchids that more interacted with the host tree were Polystachya spp., Rodriguesia decora (Lem.) Rchb. f. and Ionopsis utricularioides (Sw.) Lindl. The species of host tree that more they interacted with the orchids were: Calophyllum brasiliense Cambess., Talauma ovata A. St.-Hill. and Inga edulis Mart. The analyses were done with ANINHADO 3.0 (with two model null tests to 5 %), they showed that the standard of interaction between the orchids and the host tree is nestled and that this nestedness is not casual (NODF = 0.30, P <0.001 for two null models). With Phylocon tests, there was discarded the hypothesis of which the time of evolutive interaction between the orchids and his host trees has contributed to this nestled standard of interaction. Probably, this nestled standard was developed due to attributes of the host tree, such as roughness of the bark, released substances exudated from cuticle and hidatodes, degree of inclination of the stem and branches, age dynamic of the top and moisture of the environment in which the host tree is (the most wet environments favor the establishment of a bigger number of species of orchids). Also, it was suggested what micorrizes already existent to the trees could contribute for the nestled interaction, as soon as the seeds of orchids only germinate in the nature, if associated to these fungus. It seems that the accumulation of organic matter in the surface of the host tree favors the appearance of the micorrizes (the majority is saprophytic), that for his time, favor the appearance of the orchids. For last, the propagation was carried out in vitro, of Baptistonia pubes (Lindl.) Chiron & V.P. Castro, a threatened species of extinction in the state of São Paulo. Such a propagation was for method assymbiotic. They were tested if the pH and the constitution of the medium of culture were influencing the germination, growth and of B. pubes development. The inoculation of the tiny seeds of this orchid was made using a micropipette. Were weighed 0,0001 of seeds grams of this orchid and diluted in 3,5 mL of water with Tween detergent. Prior countings appreciated the average of seeds found in each micropipetation (around 98). Besides the use of the culture media Murashig-Skoog (MS), another culture media was used dwarf banana added with NPK 20-20-20 Plant Prood (BAN). For germination and growth, the tested pHs were 5,2 and 6,2 (based on data available in the literature). However in the germination, the culture media MS had the concentration of the macronutrients half reduced. In the plantules obtained for chiming, the pH of germination it was of 5,2 (so much in the media MS/2 as in the environment BAN). The plantules were sowed and rung in laminating flow and cultivated in environment controlled for around eight months. They were analyzed after this period, the fresh mass, the length of the biggest root, the biggest length of the air part and the number of roots. The statistical analyses were based on the test of Tukey (5%). The seeds germinated on average 15 days after the inoculation, in all the conditions. The percentage of germination varied between 2,6 to 11,6 %, and the biggest percentage took place in pH=5,2 BAN and the shortest in pH=6,2 MS/2. The way BAN was more efficient in the germination. The pHs, in each environment, altered significantly the averages of the germinated seeds. The growth of the plantules showed better results in the nourishing medium with dwarf banana (pH=5,2), probably due to the complexity nutritional of this of culture media. / Visando conhecer as espécies de Orchidaceae da região central do estado de São Paulo, desde 1996 e mais intensivamente a partir de 2005, foram realizadas visitas em 125 fragmentos florestais de 23 municípios, com periodicidade semanal e/ou quinzenal. As coletas foram assistemáticas, sendo cada fragmento percorrido no maior número de pontos possíveis. As espécies não identificadas em campo tiveram exemplares coletados (com autorização do IBAMA e Instituto Florestal de São Paulo) e cultivados em casa de vegetação até a floração. Ao menos as partes florais foram herborizadas e depositadas, principalmente, no Herbário da Universidade Federal de São Carlos. Foram registradas 219 espécies em 98 gêneros: Foram registradas 219 espécies em 98 gêneros: 64 % epífitas (140 espécies), 35% terrícolas (77) e 1%hemiepífitas (duas). 15,5% das espécies epífitas (32) também eram rupícolas e 0,4% das terrícolas (uma) era micoheterotrófica. Os gêneros com maior riqueza foram: Acianthera (13 espécies), Habenaria (12 espécies), Epidendrum (11 espécies), Bulbophyllum e Campylocentrum (10 espécies cada), Pelexia (sete espécies), Cyclopogon (seis espécies) e Baptistonia, Cattleya, Cyrtopodium e Encyclia (cinco espécies cada). Quatro espécies (Anathallis sp., Baskervilla sp., Pelexia sp., Triphora sp.) estão em estudo e podem ser novos táxons, sendo que Triphora sp. é um gênero de ocorrência nova para São Paulo e Baskervilla sp. pode ser a segunda espécie válida no Brasil. É provável que o número elevado de espécies encontrado seja devido ao fato da área estudada representar uma região com influência de Cerrado e Floresta Atlântica. Das espécies encontradas 44,7% estão praticamente extintas nessa região, 42% estão ameaçadas e 13,2% são comuns. Este fato deve-se não só ao desmatamento e à fragmentação florestal, mas também ao extrativismo inconsequente. Com relação às 2 espécies epífitas, foram feitos estudos sobre interação entre estas e seus forófitos (hospedeiros), com enfoque sobre redes ecológicas, estruturas aninhadas e os fatores envolvidos nessas relações, levando-se em conta, inclusive, se o tempo de interação entre eles, analisado através da filogenia das orquídeas e forófitos, contribuiu para tal interação. A estrutura interconectada da teia de interações entre espécies pode ser descrita através de uma rede (grafo), isto é, um conjunto de pontos (vértices, nós) que podem ou não estar conectados através de linhas (arestas, ligações). Em uma rede entre organismos, os nós representam as espécies de uma localidade e, as linhas, interações entre as espécies. O estudo da estrutura das redes, mutualísticas ou não, ainda está em fase essencialmente descritiva. Polinização, dispersão de sementes e epifitismo, têm sido estudados e enquadrados na categoria de relações mutualísticas não-tróficas em redes. Os estudos sobre interações entre comunidades podem ser úteis para o entendimento de quais fatores estão envolvidos na origem e manutenção evolutiva das mesmas. Este padrão de interação tem sido denominado aninhado. Foi montada uma matriz descrevendo as interações entre as espécies de orquídeas nas linhas e as espécies de forófitos nas colunas. Quando existia interação, o elemento aij desta matriz foi considerado 1 (um), e quando não existia interação, foi considerado 0 (zero). Através do programa ANINHADO 3.0, foi analisado se as 139 espécies de orquídeas epífitas estavam em estrutura aninhada com as 158 espécies de forófitos, e também foi feito o cálculo do índice NODF (Nestedness metric based on Overlap and Decerasing Fill, que pode ser traduzido como Medida de aninhamento baseada no preenchimento decrescente e sobreposição ). Foram consideradas nas análises, cerca de 7.500 ocorrências de orquídeas epífitas e 2.900 de forófitos. Para as análises filogenéticas foi utilizado o módulo PHYDIST do programa Phylocon 3.41. Os desenhos das árvores filogenéticas foram feitos com auxílio de ADE-4 (Analyses des Données Ecologiques). As espécies de orquídeas que mais interagiram com os forófitos foram Polystachya spp., Rodriguesia decora (Lem.) Rchb. f. e Ionopsis utricularioides (Sw.) Lindl. As espécies de forófitos que mais interagiram com as orquídeas foram: Calophyllum brasiliense Cambess., Talauma ovata A. St.-Hill. e Inga edulis Mart. As análises feitas com auxílio de ANINHADO 3.0, com dois modelos nulos a 5%, concluíram que o padrão de interação entre as orquídeas e os forófitos é aninhado e que esse aninhamento não é casual (NODF = 0.30, P < 0.001 para os dois modelos nulos). Com auxílio de Phylocon, ficou descartada a hipótese de que o tempo de interação evolutiva entre as orquídeas e seus forófitos tenha contribuído para esse padrão aninhado de interação. Provavelmente, esse padrão aninhado foi desenvolvido devido a atributos dos forófitos, tais como rugosidade da casca, substâncias liberadas via cutícula e hidatódios, grau de inclinação do caule e galhos, idade, dinâmica da copa e umidade do ambiente em que o forófito está (os ambientes mais úmidos favorecem o estabelecimento de um maior número de espécies de orquídeas). Também foi sugerido que fungos micorrízicos já existentes nas árvores possam colaborar para a interação aninhada, uma vez que as sementes de orquídeas só germinam na natureza, se associadas a esses fungos. Parece que o acúmulo de matéria orgânica na superfície dos forófitos favorece o surgimento dos fungos micorrízicos, que por sua vez, favorecem o surgimento das orquídeas. Por último, foi realizada a propagação in vitro, de Baptistonia pubes (Lindl.) Chiron & V.P. Castro, uma espécie ameaçada de extinção no estado de São Paulo. Tal propagação foi pelo método assimbiótico. Foram testados se o pH e a constituição dos meios de cultura influenciavam na germinação, crescimento e desenvolvimento de B. pubes. A inoculação das diminutas sementes dessa orquídea foi feita através de um micropipetador. Foram pesadas amostras com 0,0001 g de sementes dessa orquídea e diluídas em 3,5 mL de água e detergente Tween. Contagens prévias estimaram a média de sementes encontradas em cada micropipetação (cerca de 98). Além da utilização do meio de cultura Murashig-Skoog(MS), foi utilizado outro meio de cultura à base de banana nanica acrescida de NPK 20-20-20 Plant Prood (BAN). Tanto para germinação como para o crescimento, os pHs testados foram 5,2 e 6,2. Na germinação, o meio de cultura MS teve a concentração dos macronutrientes reduzida pela metade. Nas plântulas obtidas para a repicagem, o pH de germinação foi de 5,2 nesses dois meios. As plântulas foram semeadas e repicadas em fluxo laminar e cultivadas em ambiente controlado por cerca de oito meses. Após esse período, foram analisadas a massa fresca, o comprimento da maior raiz, o comprimento maior da parte aérea e o número de raízes. As análises estatísticas foram baseadas no teste de Tukey (5%). As sementes germinaram em média 15 dias após a inoculação, em todas as condições. A porcentagem de germinação variou entre 2,6 a 11,6%, sendo que a maior porcentagem ocorreu no pH=5,2 BAN e a menor no pH=6,2 MS/2. O meio BAN foi mais eficiente na germinação. Os pHs, em cada meio, alteraram significativamente as médias das sementes germinadas. O crescimento das plântulas mostrou melhores resultados no meio nutritivo à base de banana nanica (pH=5,2), provavelmente devido à complexidade nutricional desse meio de cultura.