Evidências sugerem que o aprendizado e a realização de tarefas motoras de habilidade podem induzir mudanças comportamentais e neurofisiológicas, o que ocorre tanto em animais intactos quanto naqueles submetidos às lesões do SNC. Nesse sentido, alguns trabalhos evidenciam uma possível participação dos astrócitos GFAP+ na plasticidade induzida por experiências comportamentais. Sendo assim, o objetivo do presente estudo foi avaliar o desempenho sensório-motor e aspectos morfológicos de astrócitos GFAP+ em estruturas encefálicas importantes para o controle motor, tais como o córtex sensório-motor (área de representação do membro anterior) e o estriado dorsolateral, em ratos controles ou submetidos à HIC e aos treinamentos de habilidade do alcance (TH) ou ao treinamento de não-habilidade (TNH). Para tanto, ratos Wistar adultos foram inicialmente adaptados às diferentes tarefas motoras empregadas ao longo de três semanas. Após, os mesmos foram submetidos às cirurgias de indução da hemorragia intracerebral (HIC) por meio da administração intra-estriatal de colagenase tipo IV ou sham. Em seguida, os animais dos grupos S-TH e HIC-TH foram submetidos ao treinamento da tarefa de habilidade do alcance e preensão, os animais dos grupos S-TNH e HIC-TNH foram submetidos ao treinamento da tarefa de não-habilidade e os animais S-ST e HIC-ST não receberam nenhum tipo de treinamento durante 4 semanas. Ao longo desse período, os animais foram testados quando ao desempenho sensório-motor ao final de cada semana de treinamento (exceto o teste do cilindro, realizado apenas nos períodos pré-cirurgia, pós-cirurgia e póstreinamento). Encerrado o período de treinamento, os animais foram profundamente anestesiados, perfundidos e tiveram seus encéfalos processados para a análise morfológica. Os resultados demonstram que a realização da tarefa de habilidade do alcance e preensão foi capaz de aumentar o comprimento dos processos primários em astrócitos GFAP+, o que ocorreu em estruturas cerebrais importantes para o controle motor, tais como o córtex sensório-motor (bilateralmente) e o estriado dorsolateral (perilesional), tanto em animais lesados pela HIC quanto em animais nãolesados. De modo particular, essas modificações astrogliais foram aumentadas quando ocorreu a associação da HIC com o treinamento de habilidade do alcance. Além disso, a referida tarefa de habilidade, mas não o treinamento de não-habilidade, foi capaz de promover uma melhor recuperação sensório-motora, avaliada pelos testes comportamentais. Sendo assim, nossos resultados sugerem que as modificações morfológicas em astrócitos GFAP+ poderiam fazer parte dos mecanismos neurobiológicos que medeiam a plasticidade induzida pela tarefa de habilidade, tanto em animais que sofreram uma HIC quanto em animais não-lesados, além de possivelmente contribuírem para a recuperação sensório-motora.

Evidências sugerem que o transtorno bipolar esteja associado a uma toxicidade sistêmica, representada por alterações periféricas em marcadores de inflamação, estresse oxidativo e neurotrofinas, a qual parece estar associada aos episódios de humor e à progressão da doença levando a prejuízos sistêmicos e na neuroplasticidade. Os trabalhos apresentados nesta tese tiveram como objetivo revisar estas alterações e explorar possíveis mecanismos responsáveis por estes achados, com enfoque em uma desregulação transcricional no transtorno bipolar. No primeiro capítulo, revisamos os biomarcadores periféricos associados aos episódios de humor, a relação destes com a toxicidade sistêmica e os possíveis mecanismos subjacentes a esta toxicidade. Seguimos ilustrando, no capítulo 2, um exemplo de alterações estruturais cerebrais em um paciente bipolar com experiência de múltiplos episódios, como um possível exemplo da neuroprogressão no transtorno bipolar. Em seguida, buscamos por vias de regulação transcricional disfuncionais no córtex pré-frontal de pacientes que poderiam estar associadas a essas alterações e neuroplasticidade prejudicada. A partir de abordagem inovadora de bioinformática, no capítulo 3, identificamos algumas unidades regulatórias (regulons) associadas com as duas assinaturas gênicas do transtorno bipolar avaliadas, obtidas a partir de bancos de dados de microarranjo de pré-frontal postmortem. Em uma análise mais rigorosa, identificamos apenas o regulon do gene early growth response 3 (EGR3) enriquecido nas duas assinaturas da doença em duas redes transcricionais do pré-frontal, estando reprimido no fenótipo bipolar. Nossos resultados sugerem o regulon do EGR3 como um alvo importante no transtorno bipolar. Considerando seu papel fundamental na resposta ao estresse e na translação de estímulos ambientas em mudanças na expressão gênica neuronal, propomos que uma disfunção em vias biológicas envolvendo EGR3 poderia levar a uma resposta prejudicada ao estresse e influenciar no risco para o transtorno bipolar. No quarto capítulo, então, caracterizamos o perfil de expressão gênica do modelo de células SH-SY5Y diferenciadas e avaliamos o comportamento do regulon do EGR3 de acordo com o protocolo de diferenciação. Além disso, identificamos moléculas com potencial de modular os regulons enriquecidos no transtorno bipolar visando testar o efeito destas drogas no referido modelo celular. Nossos resultados reforçam o fenótipo neuronal deste modelo in vitro e demonstram que o regulon do EGR3 está enriquecido nas células diferenciadas, sugerindo que ele é importante nesse processo e que este modelo experimental é adequado para estudar este regulon e as moléculas selecionadas pela análise de mapa de conectividade. Nós ainda avaliamos nas células SH-SY5Y o efeito do soro de pacientes bipolares, para investigar o papel da toxicidade sistêmica em células neuronais. O soro de pacientes, especialmente em estágio tardio da doença, causou toxicidade às células, reduzindo a densidade de neuritos e a viabilidade celular. Esses achados representam uma forma de desafio celular relacionado à toxicidade sistêmica do transtorno bipolar, propondo as células SH-SY5Y diferenciadas como um modelo in vitro para estudo desta doença. Em suma, os resultados desta tese sugerem que a toxicidade sistêmica relacionada aos episódios recorrentes de humor pode influenciar nas alterações anatômicas cerebrais associadas com a progressão do transtorno bipolar, e a disfunção no regulon do EGR3 poderia estar envolvida com aspectos desta neuroprogressão considerando o papel de EGR3 na resposta ao estresse e na neuroplasticidade. Estas hipóteses, que também sugerem alvos interessantes para o desenvolvimento de novos tratamentos, devem ser apropriadamente validadas em modelos experimentais, como o modelo de células SH-SY5Y diferenciadas estudado neste trabalho. / Evidence suggests that bipolar disorder is associated with a systemic toxicity, represented by peripheral changes in markers of inflammation, oxidative stress and neurotrophins, which appears to be associated with mood episodes and illness progression leading to systemic damage and impaired neuroplasticity. The work presented in this thesis aimed to review these changes and explore possible mechanisms responsible for these findings, focusing on transcriptional regulation in bipolar disorder. In the first chapter, we review the peripheral biomarkers associated with mood episodes, their relationship with systemic toxicity and the possible mechanisms underlying this toxicity. We have shown, in Chapter 2, an example of structural brain changes in a bipolar patient with multiple episodes experience, as a possible example of ‘neuroprogression’ in bipolar disorder. Then we investigated dysfunctional transcriptional regulatory pathways in the prefrontal cortex of patients that could be associated with these changes and impaired neuroplasticity. Using innovative bioinformatics approaches, in Chapter 3, we identified some regulatory units (regulons) associated with the two gene signatures of bipolar disorder evaluated, obtained from microarray data sets from prefrontal postmortem studies. With a more rigorous analysis, we only identified the regulon of early growth response 3 gene (EGR3) enriched in the two bipolar signatures in the two transcriptional prefrontal networks evaluated, being EGR3 repressed in bipolar phenotype. Our results suggest the EGR3 regulon as an important target in bipolar disorder. Considering its key role in response to stress and translation of environmental stimuli into long-term changes in neuronal gene expression, we propose that a dysfunction in biological pathways involving EGR3 could lead to an impaired response to stress and influence on the risk for bipolar disorder. Then, in Chapter 4, we characterized the gene expression profile of differentiated SHSY5Y cells and evaluated the EGR3 regulon according to the differentiation protocol. Furthermore, we have identified molecules with potential to modulate the regulons enriched in bipolar disorder, using connectivity map analysis, in order to test the effect of these drugs on this cellular model in future studies. Our results consolidated the neuronal phenotype of this in vitro model and demonstrated that the EGR3 regulon is enriched in differentiated cells, suggesting that it is important in this process and that this experimental model is suitable for studying this regulon and molecules selected by connectivity map analysis. Moreover, in Chapter 5, we evaluated the effect of serum of bipolar patients on differentiated SH-SY5Y cells to investigate the role of systemic toxicity in neuronal cells. The serum of patients, especially at late stages of illness, caused toxicity to cells, reducing neurite density and cell viability. These findings represent a strategy of challenging cells related to the systemic toxicity of bipolar disorder, proposing differentiated SH-SY5Y cells as an in vitro model to study this disorder. Therefore, the results of this thesis suggest that systemic toxicity related to recurrent mood episodes may influence on the brain anatomical changes associated with the bipolar disorder progression, and dysfunction in EGR3 regulon could be involved with aspects of ‘neuroprogression’ considering the role of EGR3 in response to stress and neuroplasticity. These hypotheses, which also suggest interesting targets for the development of new treatments, should be further properly validated in experimental models such as the differentiated SH-SY5Y cells model studied in this work.

A sepse é um conjunto complexo de interações moleculares e celulares mediado pela estimulação de receptores celulares envolvidos na inflamação. O controle desta rede de sinalização é compensado pela resposta pró- e antiinflamatória do organismo. Os desequilíbrios inflamatórios induzidos alteram o estado fisiológico de diversos órgãos. No cérebro, observam-se diversas modificações que envolvem desde o aumento na permeabilidade da barreira hematoencefálica (BHE), morte de células neurais por apoptose ou necrose, redução do fluxo sanguíneo e aumento do estresse oxidativo, resultando no desenvolvimento do delirium associado à sepse. O delirium associado à sepse é um conjunto de disfunções neurológicas induzidas por uma resposta inflamatória sistêmica. Assim, é possível que diferentes mecanismos compensatórios estejam envolvidos durante a sepse. Este estudo objetivou analisar a influência do modelo de ligação cecal e punção (CLP), na excreção de ligantes do receptor para produtos finais de glicação avançada (RAGE) e as modificações ocasionadas no cérebro pela inflamação sistêmica decorrente da sepse. Nossos resultados demonstraram que os níveis séricos de TNF-α aumentaram após a indução da CLP, confirmando o estado inflamatório dos animais CLP, ocorrendo um aumento nos níveis de proteínas carboniladas, HSP70 e HMGB-1 no soro desses animais, indicando um aumento de estresse oxidativo nesses animais e liberação de proteínas associadas a manutenção e estabilização intracelular. Entretanto, encontramos uma redução no imunoconteúdo de destas proteínas no hipocampo e córtex, possivelmente por aumento nos níveis de necrose/lise celular ou por eliminação durante o período de disrupção da BHE. Assim, concluímos que durante a sepse ocorre uma aumento expressivo nos níveis séricos de proteínas associadas a resposta inflamatória crônica, além de alterações nos níveis destas proteínas relacionadas a proteção intracelular no hipocampo e córtex, que pode ter relação com as alterações observadas em pacientes e modelos animais. / Sepsis is a complex whole of molecular and cellular interactions mediated stimulation of cellular receptors involved in inflammation. The control of this system is compensated by pro and anti-inflammatory response in organism. The imbalance induced inflammatory alters the physiological state of different organs. In the brain, there are various modifications that involve from the increase in permeability of the blood-brain barrier (BBB), neural cell death by apoptosis or necrosis, reduced blood flow and increased oxidative stress, resulting in the development of sepsis-associated delirium. Sepsis-associated delirium is a whole of neurological dysfunctions induced a systemic inflammatory response. Thus, it is possible that different compensatory mechanisms are involved during sepsis. The aim of the study was to analyze the influence of the model cecal ligation and puncture (CLP), in the excretion of agonists for receptor advanced glycation end products (RAGE) and alterations in the brain caused by systemic inflammation caused by sepsis. Our results showed that serum levels of TNF-α increased after the induction of CLP, confirming the inflammatory status of CLP animals, which results in increased levels of carbonylated proteins, HSP70 and HMGB-1 in the serum of these animals, indicating an increase of stress oxidative these animals and release of proteins associated with maintaining and stabilizing intracellular. However, happened a reduction in immunocontent these proteins in the hippocampus and cortex, possibly by increased levels of necrosis/lysis cell or by removal during the period of disruption of the BBB. Therefore, concluded that during sepsis occurs a significant increase in serum proteins associated with chronic inflammatory response and changes in levels of proteins related to intracellular protection in the hippocampus and cortex, which may be related to the changes observed in patients and models animals.

Resumo não disponível.

O carcinoma epidermóide do esôfago é neoplasia com alta taxa de mortalidade e distribuição geográfica peculiar. O estudo da célula tumoral ou suas diferenciações pré-tumorais, demonstraram ter por análise imunohistoquímica e genética, inúmeros determinantes que podem ajudar no tratamento. Neste trabalho foi avaliada a expressão imunohistoquímica de p53 e ki-67 na carcinogênese esofágica induzida quimicamente através do uso de dietilnitrosamina, em um grupo de 100 camundongos fêmeas. O estudo experimental foi realizado com 4 grupos de animais, onde os grupos I e II foram considerados controles, sendo diferenciados por gavagem esofágica, uma vez semana, com água fria (temperatura ambiente) ou quente (60º-70ºC). E os grupos III e IV foram considerados estudos, os quais receberam dietilnitrosamina por 3 dias consecutivos semanalmente, também sendo diferenciados por gavagem, uma vez por semana, com água fria ou quente. O estudo apresentou data progressiva de sacrifícios com colheita de peças esofágicas, que iniciava aos 30 dias de experimento e terminava aos 150 dias. Demonstrou-se que não houve diferença na incidência tumoral quando foi acrescida a variável temperatura da água; provavelmente devido ao episódio único semanal que era adicionado ao animal em experimentação. A análise imunohistoquímica do p53 não evidenciou diferença estatística durante a evolução da carcinogênese até 150 dias, porém quando analisado a relação com alterações patológicas demonstra-se que apresenta significância em relação à patologia baixo grau de displasia, alto grau e carcinoma. A análise imunohistoquímica do ki-67 demonstrou diferença estatística durante a evolução da carcinogênese a partir do dia 120 de experimento e quando analisada a relação com alterações patológicas demonstrou-se que apresenta significância também em relação à lesão intraepitelial de alto grau e carcinoma.

O soro de leite é o coproduto da produção de queijos e contém proteínas com excelentes propriedades nutricionais e tecnológicas. Dentre essas proteínas, as majoritárias são a β-lactoglobulina (BLG) e a α-lactalbumina (ALA). Embora o soro do leite já seja aproveitado pelas indústrias para a produção de isolados e concentrados proteicos, esses produtos consistem em uma mistura de diversas proteínas e atualmente há um grande interesse em realizar o seu fracionamento a fim de aproveitar melhor as suas propriedades individuais. Entretanto, fracionar essas proteínas é um grande desafio devido às suas massas molares próximas, e uma combinação de diferentes abordagens baseadas nas suas características se torna necessária para possibilitar uma boa separação. A ALA apresenta uma capacidade de formar agregados proteicos em meio ácido e ausência de cálcio, sendo uma estratégia interessante para combinar com processos de separação por membranas. Diante disso, o objetivo deste trabalho foi realizar o fracionamento da BLG e da ALA a partir da agregação proteica combinada com processos de separação por membranas. O ajuste do pH para 4 e adição de citrato de sódio como agente complexante do íon cálcio possibilitou a formação de agregados proteicos da solução de isolado proteico do soro de leite 6 %, porém ao determinar a pressão de operação dessa solução utilizando membranas cerâmicas de microfiltração (MF) de 0,8 e 0,05 μm para reter os agregados proteicos, o fluxo de permeado foi baixo. O mesmo procedimento foi utilizado para a solução de soro do leite em pó 6 % e membrana de 0,8 μm, resultando, também, em um fluxo de permeado baixo durante a determinação da pressão de operação. Ao combinar a centrifugação com a ultrafiltração (UF), o sobrenadante, contendo a fração que não formou agregados proteicos, apresentou maiores fluxos de permeado em pH 7 e 10, e baixos fluxos em pH 3 e 4. A purificação do sobrenadante em pH 10 com membrana cerâmica de 5 kDa apresentou fluxo de permeado elevado e, quando a diafiltração foi realizada, o fluxo de permeado apresentou um comportamento ascendente e menor tendência ao fouling, variando entre 56,5 e 64,6 %. O sedimentado ressolubilizado em pH 10 também apresentou um fluxo de permeado elevado, porém com comportamento mais estável durante a diafiltração, e tendência ao fouling entre 81,4 e 84,6 %. Contudo, a agregação proteica precisa ser mais bem avaliada para separar as proteínas, bem como a retenção da membrana de 5 kDa, x a qual permitiu a passagem de parte das proteínas tanto do sobrenadante como do sedimentado ressolubilizado, sendo, ainda, verificado um pH mais elevado nos concentrados do que nos permeados e livre passagem dos demais íons mediante análise de condutividade elétrica. Os resultados demonstraram que o ajuste do pH para 10 possibilitou melhorar a performance do fluxo de permeado, provavelmente devido à menor interação proteína-proteína e proteína-membrana, além de ser uma estratégia interessante para minimizar os fatores limitantes em processos de separação por membranas. / Whey is the co-product of cheese production and contains proteins with excellent nutritional and technological properties. Among these proteins, β-lactoglobulin (BLG) and α-lactalbumin (ALA) are the main ones. Although whey is already used by industries to produce protein isolates and concentrates, these products consist of a mixture of several proteins and currently there is a great interest in their fractionation in order to take better advantage of their individual properties. However, fractionating whey proteins is a great challenge because of their similar molecular weight. Due to this, a combination of different approaches based on characteristics of each of these proteins becomes necessary to enable a good separation. ALA has the ability to form protein aggregates in an acidic media and absence of calcium, providing an interesting condition to combine with membrane separation processes. In view of this, the aim of this work was to fractionate BLG and ALA using a combination of protein aggregation procedure and membrane separation processes. Adjustment of pH to 4 and addition of sodium citrate as complexing agent of calcium ion allowed the formation of protein aggregates in whey protein isolate solution, but when microfiltration was carried out with ceramic membranes of 0.8 and 0.05 μm to retain the protein aggregates formed, permeate flux was low during the determination of the operating pressure of the process. The same procedure was used with whey powder solution and 0.8 μm membrane, also resulting in a low permeate flux when determining the operating pressure. By combining centrifugation with ultrafiltration, the supernatant containing the fraction that did not form protein aggregates showed higher permeate flux at pH 7 and 10, and lower permeate flux at pH 3 and 4. Purification of the supernatant at pH 10 with 5 kDa ceramic membrane showed high permeate flux and, when the diafiltration was performed, the permeate flux presented an upward behavior and lower fouling tendency, varying between 56.5 and 64.6 %. The resolubilized sediment at pH 10 also showed a higher permeate flux, but with a more stable behavior during diafiltration and fouling tendency between 81.4 and 84.6 %. Nevertheless, protein aggregation procedure needs to be better evaluated to separate the proteins as well as the retention of the 5 kDa membrane, which allowed passage of part of the proteins of the supernatant and the resolubilized sediment solutions and showed a higher pH in the xii concentrates than in the final permeate and free passage of the other ions evaluated by electrical conductivity analysis. The results showed that adjusting the pH to 10 allowed to improve the perfomance of permeate flux, probably due to the lower protein-protein and protein-membrane interactions, besides being an interesting strategy to minimize the limiting factors in PSM.

Submitted by Emanoel Martins Filho (emanoelfilho@ufba.br) on 2016-07-11T10:46:54Z No. of bitstreams: 1 Dissert Paulo Bahiano.pdf: 1519247 bytes, checksum: 513f19cb7ab4130f97005a3280f2ff7b (MD5) / Approved for entry into archive by Patricia Barroso (pbarroso@ufba.br) on 2016-07-13T01:17:22Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissert Paulo Bahiano.pdf: 1519247 bytes, checksum: 513f19cb7ab4130f97005a3280f2ff7b (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-13T01:17:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissert Paulo Bahiano.pdf: 1519247 bytes, checksum: 513f19cb7ab4130f97005a3280f2ff7b (MD5) / Programa de Demanda Social (CAPES) / No presente estudo, é descrita a padronização da técnica de imunoensaio enzimático (ELISA) para o sorodiagnóstico da infecção causada por Leishmania em canídeos silvestres brasileiros. Na América do Sul, a leishmaniose visceral (LV) é causada pela L. chagasi, sendo alguns canídeos considerados reservatórios naturais do parasito. A resposta imunológica à Leishmania é pouco estudada nos canídeos silvestres, que parecem apresentar resistência natural ao parasito. Foram estudadas amostras de soro/plasma obtidas de 12 canídeos cativos: sete lobos-guará (Chrysocyon brachyurus), três raposinhas (Lycalopex vetulus) e dois cachorros-do-mato (Cerdocyon thous). Dentre os canídeos estudados, um C. brachyurus e uma L. vetulus cativos em área endêmica para a LV, apresentavam em seu histórico clínico positividade na IFI e na técnica de PCR em aspirados de medula óssea para Leishmania sp. Foram então realizados diferentes ensaios imunoenzimáticos com o conjugado anti-IgG de cão e proteína A, que detectaram quatro (04/12) e três (03/12) C. brachyurus soropositivos para Leishmania sp. no ELISA com os respectivos conjugados. Os testes foram capazes de distinguir claramente as amostras positivas das negativas, uma vez que a média das densidades ópticas (DOs) das amostras negativas foram 4,8 vezes mais baixa do que a média das DOs dos positivos no ensaio com o conjugado anti-IgG de cão e 15,5 vezes nos testes com a proteína A. No Western Blot foi detectado um total de 22 bandas, com destaque para as de peso molecular 19, 22, 24, 45 e 66 kDa, presentes nas amostras de três C. brachyurus com soropositividade no ELISA indireto. Entretanto, as bandas 212, 32 e 23 kDa foram constatadas somente nos dois C. brachyurus com maiores valores de DOs. Os testes ELISA com a proteína A e o conjugado anti-IgG de cão apresentaram uma concordância excelente (Kappa = 1 p. 0,001) e moderada com o Western Blot respectivamente. O ensaio com a proteína A mostrou ser adequado a testes sorológicos de triagem, mas o ideal ainda seria o desenvolvimento de conjugados com anticorpos espécie-específico para padronização de ELISA indireto para as diferentes espécies silvestres. / In the present study, the standardization of an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for the serodiagnosis of infection by Leishmania in brazillian species of wild canids is described. In South America, visceral leishmaniosis (VL) is caused by L. chagasi, being some wild canids considered natural reservoirs of the parasite. The immunological response to Leishmania is not studied enough in the wild canids, which seem to show natural resistance to the parasite. Samples of serum/plasma from 12 captive wild canids were studied: seven maned wolves (Chrysocyon brachyurus), three hoary foxes (Lycalopex vetulus) and two crabeating foxes (Cerdocyon thous). Among the canines studied, a C. brachyurus and L. vetulus captives in an area endemic for VL, presented in their clinical history a positivity in Indirect Immunofluorescence Reaction, RIFI, and Polymerase Chain Reaction, PCR, in bone marrow aspirates for Leishmania sp. Were then performed with different immunoassays conjugated anti-dog IgG and protein A, which detected four (04/12) and three (03/12) C. brachyurus seropositive for Leishmania sp. by ELISA with their conjugates respectively. The tests were able to clearly distinguish the negative and positive samples, as the mean optical density (OD) of the negative samples was 4.8 times lower than those of the average of the positive in test with anti-IgG conjugate dogs and 15.5 times in the tests with protein A. Western blot was detected in a total of 22 bands, especially those of molecular weight 19, 22, 24, 45 and 66 kDa present in the samples of three C. brachyurus with seropositivity in ELISA. However, bands 212, 32 and 23 kDa were observed in only two C. brachyurus with higher values of OD.. The ELISA with protein A and conjugated anti-dog IgG showed excellent agreement (Kappa = 1 p. 0.001) and moderate (Kappa = 0,8 p. 0,0015) with the Western Blot respectively.. Even though the test with protein A has shown adequate to screening tests, the ideal would be the development of conjugates with species-specific antibodies for the standardization of indirect ELISA for different wild species.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Neurociências. / Made available in DSpace on 2012-10-22T16:43:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 226470.pdf: 390157 bytes, checksum: a67db64f0c9d57edfb87c4ff4c5cb5da (MD5) / Citolisinas animais têm sido ferramentas fundamentais para a análise dos mecanismos envolvidos no controle da liberação de neurotransmissores em sinapses. Os objetivos deste trabalho foram: i) verificar o efeito da equinatoxina-II (EqTx-II) recombinante na liberação de glutamato de sinaptossomas corticais de camundongos; ii) investigar as vias de sinalização celular envolvidas na liberação de glutamato induzida pela EqTx-II e toxina Bc2 (isolada da anêmona do mar Bunodosoma caissarum); iii) verificar se a liberação de glutamato induzido pela EqTx-II e toxina Bc2 é citosólica ou exocitótica. Sinaptossomas corticais de camundongos foram obtidos utilizando um gradiente de Percoll e incubados com L-[3H]glutamato. Os sinaptossomas foram incubados na presença de tampão HBSS, KCl (33 mM), EqTx-II (0,1; 1 e 10 g/ml), toxina Bc2 (0,1; 1 e 10 g/ml), ionomicina (Iono, 1, 3 e 10 M) e latrotoxina (Ltx, 0,1; 0,3 e 1 nM). A liberação de [3H-glutamato] foi determinada num cintilador líquido. EqTx-II, toxina Bc2, iono e Ltx induziram uma liberação de glutamato de modo dependente da concentração e do tempo de incubação. O pré-tratados com EqTx-II ou toxina Bc2, não afetou a liberação exocitótica de glutamato induzida por despolarização com KCl. PD98059 (inibidor da via MAPK/ERK) diminuiu a liberação de glutamato induzida por EqTx-II, toxina Bc2, iono (1 M) e Ltx (0,1 nM). H89 (inibidor de PKA), estaurosporina (inibidor inespecífico de PKC) e KN-62 (inibidor de CaMKII) bloquearam a liberação de glutamato provocada por KCl, EqTx-II e toxina Bc2. Entretanto, queleritrina (inibidor da PKC) e LY294002 (inibidor da PI3K) não afetaram a liberação de glutamato. O pré-tratamento com bafilomicina (BAF) e toxina tetânica (TeTx) não afetaram a liberação de glutamato induzida pela incubação dos sinaptossomas durante 1 minuto com EqTx-II ou toxina Bc2. Contudo, em sinaptossomas incubados durante 5 minutos com as citolisinas, a liberação de glutamato foi reduzida por BAF e TeTx. Os resultados deste trabalho sugerem que a liberação de glutamato sinaptossomal induzida pela EqTx-II e toxina Bc2 envolve as vias MAPK/ERK, PKC e CaMKII. EqTx-II e toxina Bc2 induzem a liberação de glutamato sinaptossomal citosólica ou vesicular, de modo dependente do tempo de incubação.

Orientador: Irma Godoy / Banca: Suzana Erico Tanni / Banca: Hugo Hyung Bok Yoo / Banca: Oliver Augusto Nascimento / Banca: Marcia Maria Faganello / Resumo: Estudos mostram que os valores médios da Interleucina 6 (IL-6) e Proteína CReativa (PCR) não mudam significativamente em pacientes com DPOC no período de um ano. No entanto, o acompanhamento de longo prazo desses mediadores não está estabelecido. Portanto, o objetivo do atual estudo é verificar a evolução dos marcadores inflamatórios sistêmicos de pacientes com DPOC após três anos e verificar a associação entre eles e os demais marcadores da doença. Uma coorte de 77 pacientes com DPOC estável foi avaliada no momento basal e 53 (VEF1=56±21%) foram incluídos no estudo. Nós avaliamos IL-6, PCR, distância percorrida em seis minutos (DP6) e índice de massa corporal (IMC) no momento basal e após três anos. A concentração plasmática de IL-6 foi avaliada por meio de ensaios imunoenzimáticos (ELISA) ultrassensíveis e a PCR foi obtida por meio de imunonefelometria com uso de kits ultrassensíveis. Os valores da IL-6 aumentaram significativamente após três anos em comparação ao momento basal [0,8 (0,5-1,3) vs 2,4 (1,3-4,4) pg/ml, p <0,001] e foram associados com piora da DP6. Os resultados da análise de regressão de Cox mostraram que os valores aumentados de IL-6 no momento basal foram associados com a mortalidade [Hazard Ratio (95% CI)=2,68 (0,13; 1,84); p=0,02]. Os valores médios da PCR não apresentaram alteração significativa [5 (1,6-7,9) vs 4,7 (1,7-10) mg/ L, p=0,84]; embora, onze pacientes (21%) apresentaram aumento >3 mg/L da PCR no período de três anos. O processo inflamatório sistêmico, avaliado pela IL-6, parece ser persistente e progressivo e associado com mortalidade e piora da performance física em pacientes com DPOC / Abstract: Past studies have shown that mean values of Interleukin-6 (IL-6) and Creactive protein (CRP) do not change significantly in COPD patients over a one-year period. However, longer period follow-up studies are still lacking. Thus, the aim of this study is to evaluate plasma CRP and IL-6 concentration over three years in COPD patients and to test the association between these inflammatory mediators and disease outcome markers. A cohort of 77 outpatients with stable COPD was evaluated at baseline, and 53 (mean FEV1, 56% predicted) were included in the prospective study. We evaluated IL-6, CRP, six-minute walking distance (6MWD), and body mass index (BMI) at baseline and after three years. Plasma concentration of IL-6 was measured by high sensitivity ELISA, and CRP was obtained by high sensitivity particle-enhanced immunonephelometry. IL-6 increased significantly after 3 years compared to baseline measurements [0.8 (0.5-1.3) vs 2.4 (1.3-4.4) pg/ml; p<0.001] and was associated with worse 6MWD performance. In the Cox regression, increased IL-6 at baseline was associated with mortality [Hazard Ratio (95% CI)=2.68 (0.13, 1.84); p=0.02]. CRP mean values did not change [5 (1.6- 7.9) vs 4.7 (1.7-10) pg/L; p=0.84], although eleven patients (21%) presented with changes >3 mg/L in CRP after 3 years. The systemic inflammatory process, evaluated by IL-6, seems to be persistent, progressive and associated with mortality and worse physical performance in COPD patients / Doutor

Made available in DSpace on 2016-08-15T20:31:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 LigianeNSS_DISSERT.pdf: 333802 bytes, checksum: b08155ff5daceeb3eea9fe36814efbd0 (MD5) Previous issue date: 2013-08-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Considering the prevalence of soybean s bran in chickens ration and its valorization, other agroindustrial subproducts with protein characteristic, for instance, sunflower s bran, has been purposed in feeding programs. Therefore, aiming to evaluate protein s source s replacement in balanced rations over productive and economic yield of Isa Label s chickens in semi-intensive system, 320 birds were selected between 28 and 35 days-old and monitored until 121 days-old, being destined to conventional slaughter subsequently. The dietary treatments were constituted in a reference ration with soybean meal (RFS) and three other rations with gradual levels of replacement of soybean meal by sunflower meal with basis in the protein of these ingredients, in levels of 15% (FG15), 30% (FG30) and 45% (FG45), properly supplied with lysine and methionine. Such rations has suffered nutritional adjusts according to the growing phase, namely, period 1 (35 to 63 days), period 2 (64 to 92 days) and period 3 (93 to 121 days). There weren t observed any significant differences of the birds performance during the growing phase in function of dietary treatments, determining the following general averages to the periods 1, 2 and 3: feed intake in 108,08 ; 139,25 and 165,80 grams/day; weight gain in 44,32 ; 43,15 and 28,43 grams/day; and food conversion 2,50; 3,56 and 6,21 kg/kg, respectively. The protein replacement of soybean by sunflower in Isa label chickens ration didn t influence significantly either the yield carcass, the cuts and eatable visceral. These parameters presented general averages of 74,29% to carcass yield, of 19,33% to breast, of 12,55% to thigh, of 11,56% drumstick, of 0,47% to heart, of 1,24% to liver and of 1,68% to gizzard. The economic analysis demonstrated the reduction in financial value per kilogram of ration in proportion to the replacement in 15, 30 and 45% of the soybean meal by sunflower meal with basis in protein content and supplemented with lysine and methionine (R$1,77, 1,75, 1,70 and 1,67, respectively) and elevation of profitability index in function of sale s price of the chicken carcasses (R$ 2,44, 2,40, 2,57 and 2,58, respectively). Thus, the additional profit and the balance price were favored by the inclusion of sunflower meal in balanced rations to Isa Label chickens in semi-intensive production system / Considerando a prevalência do farelo de soja nas rações avícolas e sua valorização mercantil, outros subprodutos agroindustriais com característica protéica, por exemplo, o farelo de girassol, têm sido propostos nos programas de alimentação. Portanto, com objetivo de avaliar a substituição da fonte protéica em rações balanceadas sobre o rendimento produtivo e econômico de aves Isa Label em sistema semi-intensivo, 320 aves foram selecionadas entre 28 e 35 dias de idade e monitoradas até 121 dias de idade, sendo posteriormente destinadas ao abate convencional. Os tratamentos dietéticos constituíram-se em uma ração referência com farelo de soja (RFS) e outras três rações com níveis graduais de substituição do farelo de soja pelo farelo de girassol com base no teor de proteína destes ingredientes, em níveis de 15% (FG15), 30% (FG30) e 45% (FG45), devidamente suplementadas com lisina e metionina. Tais rações sofreram ajustes nutricionais de acordo com a fase de crescimento das aves, a saber, período 1 (35 a 63 dias), período 2 (64 a 92 dias) e período 3 (93 a 121 dias). Não foram observadas diferenças significativas de desempenho das aves durante a fase de crescimento em função dos tratamentos dietéticos, determinando-se as seguintes médias gerais para os períodos 1, 2 e 3: consumo de ração em 108,08; 139,25 e 165,80 gramas/ave/dia; ganho de peso vivo em 44,32 ; 43,15 e 28,43 gramas/ave/dia; e conversão alimentar 2,50 ; 3,56 e 6,21 kg/kg; respectivamente. A substituição da proteína do farelo de soja pelo farelo de girassol nas rações das aves também não influenciou significativamente o rendimento de carcaça, dos cortes e vísceras comestíveis. Estes parâmetros apresentaram médias gerais de 74,29% para rendimento de carcaça, de 19,33% para peito, de 12,55% para coxa, de 11,56% para sobrecoxa, de 0,47% para coração, de 1,24% para fígado e de 1,68% para moela. A análise econômica demonstrou a redução no valor financeiro por quilograma de ração à medida que se substituiu em 15, 30 e 45 % o farelo de soja pelo farelo de girassol com base no teor de proteína e suplementado com lisina e metionina (R$ 1,77 , 1,75, 1,70 e 1,67 reais, respectivamente) e elevação do índice de rentabilidade em função do preço de comercialização das carcaças das aves ao abate (R$ 2,44, 2,40, 2,57 e 2,58 reais, respectivamente). Assim, o lucro adicional e o preço de equilíbrio foram favorecidos pela inclusão do farelo de girassol em rações balanceadas para as aves Isa Label em sistema de produção semi-intensivo