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Avaliação da proteína disulfeto isomerase A1 (PDIA1) como marcador para a qualidade seminal em garanhões

Linden, Liana de Salles van der January 2017 (has links)
O período de puberdade, em equinos, define-se pela aparição de espermatozóides maduros no ejaculado de animais jovens, bem como a maturação das funções endócrinas. Os espermatozóides precisam passar por um processo de maturação no epidídimo. Para se obter marcadores moleculares que permitam estabelecer a fertilidade de um garanhão, é necessário um melhor conhecimento das proteínas presentes em espermatozóides imaturos e maduros, uma das quais é a PDI (proteína dissulfeto-isomerase). A PDI foi descrita também como importante marcador de fertilidade no plasma seminal e espermatozóides de diversas espécies. O objetivo deste trabalho foi identificar a presença da PDI no epidídimo equino durante a puberdade, e quantificá-la no fluido e espermatozóides epididimários. Visou verificar a presença da PDI no plasma seminal e espermatozóides ejaculados, em garanhões férteis e subférteis. Foram realizados dois experimentos: Experimento 1: utilizou-se 22 equinos Crioulos saudáveis, castrados e divididos em três grupos: G1: potros até 24 meses, G2: de 25-36 meses e G3: a partir de 36 meses. Imediatamente após a castração, foi efetuada a dissecação do epidídimo para a coleta de fluido epididimário, o qual foi separado dos espermatozoides por centrifugação a 800 g por 10minutos. O sobrenadante foi removido, e criopreservado a -196º C. Os espermatozóides foram ressuspendidos em PBS e armazenados a -196º C. Para a dosagem de proteína das amostras, utilizou-se o método de Kit BCA espectrofotômetro e a eletroforese em gel de poliacrilamida a 10% SDS- Page.Para imunodetecção das proteínas, efetuou-se a incubação do anticorpo primário específico por no mínimo, 6 horas a 4º C, e incubação com anticorpo secundário conjugado com peroxidase anti-igG de camundongo ou anti-IgG de rato. Para a visualização das bandas foi utilizado o Kit de ECL em filmes de raio-X, e as bandas quantificadas pela utilização do software livre ImageJ. A PDI foi identificada nos três grupos avaliados na análise proteômica do fluido , e espermatozoides epididimários, sendo sua quantidade inferior no G1 em relação aos grupos dois (2) e três (3). Em conclusão, a expressão da PDI nos espermatozóides e fluido epididimários de potros castrados cirurgicamente, aumenta conforme o animal atinge a maturidade sexual. Experimento 2- Utilizou-se 12 garanhões adultos que já haviam sido submetidos à pelo menos duas temporadas de monta na região da Campanha do Rio Grande do Sul, efetuando-se quatro (4) coletas de cada garanhão, fora da estação de monta, respeitando-se um intervalo de 48h entre coletas. Imediatamente após a coleta, analisou-se motilidade, vigor e concentração com auxílio de microscópio óptico e retirou-se uma alíquota de sêmen para avaliação das patologias espermáticas. A partir dos dados obtidos, os garanhões foram divididos em dois grupos: Grupo 1: motilidade não inferior a 70%, tendo-se uma média de 76,04±5,89% e histórico reprodutivo de temporadas anteriores com índice de prenhez mínimo por temporada de 80%. Grupo 2: motilidade igual ou inferior a 30%, com média de 11,83±11,21%, e histórico reprodutivo de temporadas anteriores de índices de prenhez inferiores a 35%. Efetuadas as análises, as mostras foram centrifugadas a 800 g por 10 minutos para separar o plasma seminal, de mesma forma que no Exp. 1. Os pellets passaram por ressuspensão em PBS gelado e posteriormente armazenados a -196º C. As amostras foram submetidas à dosagem das proteínas, para serem submetidas à eletroforese, utilizando-se géis de poliacrilamida a 10% SDS-Page.Para imunodetecção das proteínas, efetuou-se a incubação do anticorpo primário específico por no mínimo, 6 horas a 4º C, e incubação com anticorpo secundário conjugado com peroxidase anti-igG de camundongo ou anti-IgG de rato. Na visualização das bandas foi utilizado o Kit de ECL em filmes de raio-X, e as bandas foram quantificadas pela utilização do software livre Image J. Ao analisar a presença da PDI no plasma seminal dos garanhões, verificou-se sua expressão em ambos os grupos; porém não houve diferença de expressão da PDI entre eles(p˂0,05). Não houve também relação da PDI com motilidade, nem com a concentração espermática. Considerando os dados obtidos no presente experimento, não foi possível relacionar a PDI com qualidade espermática e assim considerá-la como um potencial marcador de fertilidade em equinos. São necessários mais estudos que possam envolver outros fatores moleculares inclusive as demais proteínas da família das PDIs. / Puberty, in the equine species, may be defined by the appearance of mature spermatozoa in young animals´ ejaculates, as well as endocrine function maturation. One of the proteins found in immature and mature spermatozoa is PDI (protein dissulfide-isomerase). PDI was also described as an important fertility marker both in seminal plasma and sperm of many species. is responsible for rearranging dissulfide bonds, necessary for sperm adhesion proteins to link to the oocyte. The aim of this work was to identify PDI in equine epididymis during puberty, and quantify it in epididymal sperm and fluid of fertile and subfertile sperm. Two experiments were performed. Experiment 1-twenty-two healthy Crioulo colts were surgically castrated, and divided in three groups: G1: until 24 months; G2: from 25-36 months and G3: more than 36 months. Immediately after castration, testicles were measured, weighed, and the epididymis was dissecated for epididymal fluid collection, which was centrifuged at 800 g for 10minutes to separate epididymal fluid from sperm. Supernatant was removed, and cryopreserved at -196º C. Sperm were re-suspended in PBS and stored at -196º C. Protein dosing of samples was performed with BCA Kit and electrophoresis at 10% SDS-Page. To detect proteins, primary antibody was incubated for at least 6 hours at 4º C, and then incubation with secondary antibody conjugated with anti-mouse IgG or anti-rat IgG. To see bands, ECL Kit in X-ray films was used, and the bands quantified with softwareImageJ. In the three groups PDI was identified, in epididymal fluid and epididymal sperm, but in smaller amount in G1 when compared with Groups 2 and 3. In conclusion, expression of PDI in epididymal fluid and sperm of surgically castrated colts, increases as the animal attains sexual maturity. Experiment 2- The aim of this work was to verify the presence of PDI in equine seminal plasma and sperm, quantify it and to compare its expression on seminal plasma from fertile and subfertile stallions. Twelve adult stallions with at least two breeding season were used. For the study, four collections of each animal were performed. Immediately after collection, analysis of motility, velocity, concentration and sperm morphology were performed. Stallions were divided in two groups, according to the semen analysis and previous breeding history: Group 1: motility greater than 70% and previous history of pregnancy rates higher than 80%; Group 2: sperm motility less or equal than 30% and breeding history of less than 35% of pregnacy per season. After the analysis, samples were centrifuged at 800 g/10minutes to remove seminal plasma. Samples were prepared as described in Exp. 1. The expression of PDI in seminal plasma was seen in both groups, but with no statistical difference between them. There was no correlation of PDI with sperm motility or concentration. According to these findings, it is not possible to consider PDI as a fertility marker in stallions. More research is needed, involving other mollecular factors, including other PDIs family proteins.
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Estudo da expressão do IGF1R mRNA em meninas com puberdade precoce central antes e durante o tratamento com análogos do GnRH / Expression of IGF1R mRNA study in girls with central early puberty before and during treatment with the GnRH

Mariana Teresa Alves Sarti de Paula 11 December 2015 (has links)
INTRODUÇÃO Na puberdade, tanto fisiológica quanto precoce, um dos eventos marcantes é o estirão de crescimento. Análogos do GnRH tem sido utilizado como tratamento da puberdade precoce central (PPC) tendo como consequência o bloqueio do eixo gonadal e diminuição da velocidade de crescimento, porém mantém níveis séricos elevados de IGF-I e IGFBP-3. Não existem relatos sobre a expressão do IGF1R durante a puberdade. Considerando-se que este poderia ser um ponto de regulação da velocidade de crescimento, o presente estudo propõe avaliar a expressão do IGF1R em meninas com PPC antes e durante o tratamento. MÉTODOS: Avaliamos meninas com PPC que foram divididas em dois grupos: Grupo A foi constituído por 16 meninas avaliadas antes do início do tratamento com idade média de 8,0+-0,7anos e o Grupo B constituído por 16 pacientes em uso regular do análogo do GnRH com idade média de 9,4+-0,8 anos. O grupo controle foi composto por 18 crianças saudáveis, pré-púberes com idade média 7,1+-1,3 anos. RESULTADOS: A expressão do mRNA do gene do IGF1R foi maior no grupo B quando comparado ao grupo A (p= 0,04) e ao grupo controle (p=0,004). Não foi observado diferença estatística entre o Grupo A e o grupo controle (p=0,17). Os níveis séricos de IGF-I e IGFBP3 assim como a relação molar IGF-I/IGFBP3 foram significativamente maiores no grupo A em relação ao grupo controle. (p<0,0001). Não encontramos diferença nas concentrações de IGF-I, IGFBP3 ou na relação molar entre os grupos A e B. O grupo controle apresentou níveis mais elevados de IGFBP1 quando comparado com os grupos A e B (p<0,001). Ao compararmos somente os grupos A e B, o grupo B apresentou número estatisticamente maior de valores indetectáveis de IGFBP1 quando comparado com o grupo A (p=0,01) mostrando uma tendência a valores menores no grupo B. A dosagem de insulina foi significativamente menor no grupo controle quando comparado ao grupo A (p<0,001) e não apresentou diferença entre os grupos A e B. Ao analisarmos os 3 grupos (controle, A e B) não encontramos a correlação negativa entre insulina e IGFBP-1. Essa correlação aparece quando avaliamos somente o grupo controle e o grupo A (r= - 0,5; p=0,007) e desaparece quando acrescentamos o grupo B na análise. CONCLUSÃO: As variações nas concentrações séricas de IGF-I, IGFBP-3, IGFBP-1 e insulina não explicam a desaceleração da velocidade de crescimento durante o tratamento de meninas com puberdade precoce central com análogos do GnRH. O aumento da expressão do IGF1R parece refletir uma redução da sinalização intracelular do IGF1R com consequente diminuição da bioatividade do IGF-I em um mecanismo de feedback de alça ultra curta. O aumento da secreção do hormônio de crescimento devido a redução do feedback negativo na hipófise, explica as concentrações encontradas de IGF-I, IGFBP3 e IGFBP1.Estudos outros serão necessários para confirmar esta hipótese, avaliando diferentes pontos de sinalização na cascata pós-receptor / BACKGROUND: Growth spurt is a major event in central precocious puberty (CPP). GnRH analogues (GnRHa) treatment inhibit gonadal axis and decrease height velocity. However, serum IGF-I and IGFBP-3 remain high as before treatment. No reports regarding IGF type 1 receptor (IGF1R) in CPP is available. Considering that this could be a point of regulation of height velocity, the present study aims to study IGF1R mRNA expression in girls with CPP before and during GnRHa treatment. MÉTHODS: Sixteen girls with CPP (8.0±0.7yr) were evaluated before treatment (Group A) and sixteen (9.4±0.8yr) in use of GnRHa (Group B). Age-matched pre pubertal children were studied as controls (n=18). Fasting blood sample were collect for IGF1R mRNA expression analysis in peripheral lymphocytes (RT-PCR) and serum IGF-I, IGFBP-3, IGFBP-1 and insulin determination. RESULTS: The expression of IGF1R mRNA was higher in Group B than in Group A (p=0.04) and Controls (p=0.004). No difference was observed between Groups A and Controls. IGF-I, IGFBP-3 and IGF-I/IGFBP3 molar ratio were similar in Group A and B but higher than in Controls (p<0.0001). IGFBP-1 was higher (p<0.0001) in Controls than in Groups A and B. When we compare only Groups A and B, group B showed more IGFBP1 undetectable values than group A (p = 0.01) showing a tendency to lower values in group B. Insulin levels were lower in Controls than in Group A (p<0.001), but no difference were observed between Groups B and A. Negative correlation was found between insulin and IGFBP-1 when controls and Group A were put together (r= -0.5; p=0.007). This correlation disappear if Group B is included in the analysis. CONCLUSION: Serum concentrations of IGF-I, IGFBP-3, IGFBP-1 and insulin do not explain the decrease in height velocity during CPP treatment with GnRH analogue. The increase in IGF1R mRNA expression suggest impairment of IGF-I signaling and compensatory up regulation of the IGF1R. Increased GH concentrations due to reduction of IGF-I feedback could explain the IGF-I, IGFBP-3 and IGFBP-1 findings. Other studies are necessary to confirm this hypothesis by studying different signaling points in post-receptor cascade
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Influência da adição de gordura protegida na dieta de novilhas Nelore (Bos taurus indicus) no estabelecimento da puberdade e da ciclicidade pós-parto / Influence of addition of protected fat in the diet of Nellore heifers (Bos taurus indicus) in the establishment of puberty and cyclicity postpartum

Cipriano, Rafael Silva 29 January 2013 (has links)
O presente trabalho teve como objetivo verificar se o fornecimento de gordura protegida após à desmama interfere no desenvolvimento folicular e na idade à primeira ovulação em novilhas Nelore (Bos taurus indicus). E também se os ácidos graxos de cadeia longa no terço final da gestação interferem no desenvolvimento folicular e antecipa a ciclicidade no período pós-parto de primíparas com escore corporal de 2,5. No primeiro utilizamos 30 novilhas Nelore com peso 167kg, separadas em 3 grupos: Grupo Controle (GC, n=10) recebeu 500g de milho/animal/dia. Grupo Gordura (GG, n=10) recebeu 200g de gordura protegida/animal/dia. Grupo Energia (GE, n=10) recebeu 500g de milho e 200g de Megalac-E®/animal/dia. Foi realizado exame ultrassonográfico dos ovários e colhidas amostras de sangue para quantificação de FSH, LH, leptina e progesterona. Durante o tratamento o peso não variou entre os grupos, o peso vivo aumentou ao longo do tempo (p=0,0001). Após a mudança na dieta, os animais dos grupos que receberam gordura apresentaram menor (p=0,019) número de folículos que os animais do GC. Durante o período dos tratamentos nutricionais o GG apresentou maior (p=0,05) número de picos de LH que o GE e o GC foi intermediário. O GC apresentou maior área de secreção de FSH (p=0,03) quando comparado ao GG e o GE foi intermediário. O GC apresentou maior área de concentração e valor máximo máxima de FSH (p=0,06) aos 14 meses. Dentro de cada grupo, todos apresentaram menor área total de secreção de leptina antes do tratamento comparado ao período pós tratamento. Após o período de tratamento, o GE apresentou maior valor máximo máxima de leptina (p=0,08) que o GC e o GG valor intermediário. A gordura diminuiu o número de folículos, aumentou a freqüência de pulsos de LH, diminuiu a secreção de FSH durante o começo da suplementação. A dieta com a soma das energias diminuiu a área de secreção de LH e aumentou a valor máximo máxima de concentração de leptina. No segundo experimento utilizamos 19 animais, com 24 a 27 meses de idade e peso de 366kg. Os tratamentos nutricionais foram realizados de 50 a 60 dias antes do parto previsto. As novilhas foram divididas em dois grupos: grupo Controle (GC, n=9) sem adição de gordura na ração (250 g de milho/novilha/dia) e grupo Gordura (GG, n=10) com gordura na ração (100g Megalac-E®/novilha/dia). Os animais foram mantidos em um escore corporal de 3,5 no período pré-parto, e diminuíram e foram mantidos com 2,5 até os noventa dias após parto. O GC obteve maior ganho médio diário dos 91 aos 119 dias pós-parto (p=0,011) comparado ao GG.O peso à ovulação foi maior no GC que no GG (p=0,03). O diâmetro do maior folículo não diferiu (p=0,31) entre o GC e GG durante o pós-parto. O diâmetro do segundo maior folículo foi maior no GC (p=0,028) que no GG. Houve um aumento no diâmetro do maior folículo no GC (p=0,05) e uma tendência no GG. Os dois grupos apresentaram aumento na concentração de LH com o passar dos intervalos (GC p<0,0001, GG p=0,0024). Entre o 15° e 30° dia pós-parto foi o período que apresentou menor área total de concentração de LH (p<0,0001) comparado aos demais intervalos dentro de cada grupo (p=0,85). GC e GG tiveram maior valor máximo de LH no intervalo de 75 a 90 dias (p=0,03 e p=0,04) quando comparado com os intervalos de 15 a 30 e de 30 a 45 dias pós-parto (p=0,97). Não houve diferença no peso vivo ao nascimento das bezerras do GC (34,3±2,58kg, p=0,18) comparado as do GG no período pré-parto (31,75±4,62 kg). As bezerras nascidas de vacas do GC obtiveram maior ganho médio diário nos primeiros 30 dias pós-parto (p=0,05) comparadas às bezerras do GG. Não houve diferença no ganho de peso por mamada das bezerras entre os GC e GG no período pós-parto, aos 20 dias (p=0,30), aos 46 dias (p=0,46), aos 81 dias (p=0,63) e aos 108 dias (p=0,66). Animais tratados com gordura no pré-parto apresentam um maior tempo para a primeira ovulação, menor quantidade de folículos secundários, acompanhada de menor peso vivo e menor ganho de peso no final do pós-parto / This study evaluated whether protected fat supply after weaning will interfere on follicular development and age at first ovulation in Nelore heifers (Bos taurus indicus) and if fat in the final third of pregnancy increases the preovulatory follicle diameter and number of follicles, changing the cyclicity in postpartum primiparous with a body score of 2.5. For this two experiments were developed, at first 30 contemporary Nellore heifers with of 167 kg life weight were used. The animals were sorted into 3 groups: Control group (CG, n=10), 500g of corn/animal/day. Fat group (GG, n=10), 200g of Megalac-E®/animal/day. Energy group (EG, n=10), 500g of corn plus 200g Megalac-E®/animal/day. Ovaries ultrasonography was performed to characterize the diameter and number of follicles. Blood samples were collected and radioimmunoassay was performed to quantify LH, FSH, progesterone and leptin. Either during nutritional treatment (p=0.32) or after (p=0.34) there was no difference in life weight between groups, but weight increased over time (p=0.0001). Heifers that received fat had lower (p=0.02) number of follicles than the control group. During nutritional treatments Fat group had higher (p=0.05) number of LH peaks than the Energy group and Control group showed intermediate number of LH peaks. The GC showed greater FSH concentration area (p=0.03) compared to GG and GE was intermediate. The GC had higher FSH concentration area (p=0.06) and maximum valor máximo (p=0.08), than GG and GE had intermediate values at 14 months. All groups exhibited lower leptin total concentration area before compared to after nutritional treatments. After the treatment period, the GE had higher leptin maximum value (p=0.08) than control group and GG intermediate. Fat supply decreased the number of follicles, increased LH pulses frequency, decreased FSH concentration at the supplementation beggining. Energy energy diet anticipated age at puberty, decreased LH concentration area and increased leptin concentration maximum value. For the second experiment 19 animals between 24 and 27 months of age and 366kg live weight were used, fixed time artificial insemination was performed (TAI). The dietary treatments were performed during 60 days before the estimated partum. The heifers were sorted in: Control (CG, n = 9) with no added fat (250 g of corn/heifer/day) and fat group (GG, n = 10) with 100 g Megalac-E®/heifer/day. The animals were maintained in a 3.5 BSC (1 to 5) during pre-partum, and decreased and maintained with 2.5 BSC until 90 days after calving. The GC had a higher average daily weight gain from 91 to 119 days postpartum (p=0.011) compared to GG. The weight at ovulation was higher in GC (p=0.03) than GG. Largest follicle diameter did not differ (p=0.31) between the CG and GG during the postpartum period. Second largest follicle diameter was greater in the GC (p=0.028) than in GG. There was an increase in the largest follicle diameter in CG (p=0.05) and a tendency in GG during the experimental period. Both groups showed an increase in LH concentration over the intervals (p<0.0001; p=0.0024). Between the 15th and 30th day postpartum there was the lowest LH concentration total area (p<0.0001) compared to other intervals within each group. LH maximum value was greater (p=0.03 and p=0.04) between 75 to 90 days compared to 15-30 and 30-45 days postpartum. There was no difference in calves birth weight between GC and GG (p=0.18). Calves born from GC cows had greater average daily weight gain in the first 30 days (p=0.05) than calves from GG. There was no difference in weight gain after 15 min suckling between GC and GG calves at 20, 46 days, 81 and at 108 days. Heifers treated with fat in pre-partum have an increased time to first ovulation, fewer secondary follicles, accompanied by a lower body weight and less weight gain in the end of postpartum
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Puberdade de novilhas: 1 - Efeito da nutrição e da DEP do touro para precocidade sexual na puberdade de novilhas Nelore; 2 - Efeito da desmama precoce e da nutrição no imprinting metabólico sobre a puberdade de novilhas Nelore e cruzadas (Angus x Nelore) / Puberty of heifers: 1 - Effect of nutrition and EPD of sire for sexual precocity on puberty in Nellore heifers; 2 - Effect of early weaning and nutrition in metabolic imprinting on puberty in Nellore and crossbreed (Angus x Nellore) heifers

Ferraz Junior, Marcos Vinicius de Castro 08 August 2016 (has links)
O objetivo do experimento I foi avaliar a interação entre dois ganhos médios diários [GMD - fator nutricional (ganho elevado GA = 0,700 e ganho baixo GB = 0,300 Kg/dia)] e a diferença esperada da progênie (DEP para idade ao primeiro parto - fator genético) na puberdade de novilhas Nelore. Foram utilizadas 58 novilhas desmamadas com 8 meses de idade, filhas de 4 touros [2 precoces (P) e 2 tardios (T)], formando um esquema fatorial 2 x 2, no qual o fator 1 foi o GMD e o fator 2 foi a DEP do touro, constituindo assim quatro tratamentos: Touro precoce com GMD elevado (PGA), touro precoce com GMD baixo (PGB), touro tardio com GMD elevado (TGA), touro tardio com GMD baixo (TGB). Houve efeito dos tratamentos na porcentagem de novilhas púberes durante o experimento (PGA e PGB = 100%; TGA = 83% até 27 meses de idade; TGB = 38% até 3 anos de idade). As novilhas do PGA apresentaram a menor (P = 0,0001) idade na puberdade (18 &#177; 1 meses). Contudo, a nutrição atrasou a puberdade em cerca de 10 meses nas novilhas filhas de touros precoces e tardios (PGA = 18 &#177; 1 vs. PGB = 29 &#177; 1 meses; TGA = 24 &#177; 1 vs. TGB = 34 &#177; 1 meses). Assim podemos concluir que a DEP para IPP foi o fator necessário para o adiantamento da idade a puberdade. No entanto, o GMD foi um fator limitante para o aparecimento da puberdade. O objetivo do experimento II foi avaliar o efeito do imprinting metabólico dos 3 aos 7 meses de idade na puberdade em novilhas cruzadas (Angus x Nelore). Os tratamentos foram arranjados em esquema fatorial 2 x 2, no qual o fator 1 foi GMD elevado e médio dos 3 aos 7 meses de idade (fase 1) e o fator 2 foi GMD elevado e médio dos 7 meses de idade até a puberdade (fase 2). Formando os seguintes tratamentos: CAA Novilhas cruzadas submetidas ao GMD elevado nas fases 1 e 2; CAM - GMD elevado na fase 1 e GMD médio na fase 2; CMA- GMD médio na fase1 e GMD elevado na fase 2; CMM GMD médio nas fases 1 e 2. O GMD médio foi atingido pela restrição do consumo de matéria seca (CMS) no GMD médio. As novilhas dos tratamentos CAA, CAM e CMA apresentaram puberdade na mesma idade (cerca de 12 meses). As novilhas cruzadas submetidas ao GMD elevado na fase 2 foram mais pesadas (P = 0,0379) na puberdade do que novilhas submetidas ao baixo GMD. O GMD elevado dos 3 aos 7 meses de idade não impactou na puberdade das novilhas cruzadas. O objetivo e a metodologia do experimento III foram semelhantes ao experimento II, no entanto foram utilizadas novilhas Nelore (N) ao invés de cruzadas e o experimento terminou aos 19 meses de idade. O tratamento NAA (84%) induziu maior (P = 0,0145) proporção de novilhas púberes do que o NMM (23%), mas não houve diferença na taxa de puberdade entre os tratamentos NAM (60%) e NMA (50%). Além disso, o comportamento das curvas de puberdade dos tratamentos NAM e NMA foram semelhantes, sendo assim não houve efeito de imprinting metabólico nas novilhas Nelore. O GMD elevado dos 3 aos 19 meses idade aumentou a porcentagem de novilhas Nelore púberes aos 19 meses de idade / The objective of experiment I was to evaluate the interaction between two average daily gain (ADG nutritional factor (high gain HG = 0,700 and low gain LG = 0,300 kg/day)] and expected progeny differences (EPD to age at first calving; genetic factor) on puberty attainment of Nellore heifers. Fifth eight heifers weaned at 8 months of age and daughters of 4 sires [2 precocious (P) and 2 later (L)]. A factorial design 2 x 2 was used, where the factor 1 was the ADG and the factor 2 was the EPD of sire, resulting in four treatments: Precocious sire with HG (PHG), precocious sire with LG (PLG), later sire with HG (LHG) and later sire with LG (LLG). There was effect of treatment in the percentage of pubertal heifers (PHG and PLG = 100%; LHG = 83% until 27 month of age; LLG = 38% until 3 years old). Heifers from the PHG treatment were the youngest (P = 0,0001) (18 months of age). However, the nutritional factor delayed puberty achievement by approximately 10 months the age at puberty in precocious and later heifers (PHG = 18 &#177; 1 vs. PLG = 29 &#177; 1 months; LHG = 24 &#177; 1 vs. LLG = 34 &#177; 1 months of age). The EPD to age at first calving was the main factor affecting the age at puberty. However, the ADG was limiting to puberty onset. The objective of experiment II was to evaluate the effect of metabolic imprinting from 3 to 7 months of age on puberty attainment of crossbreed heifers (Angus x Nellore). The treatments were arranged in 2 x 2 factorial design, where the factor 1 was high (H) and medium (M) ADG from 3 to 7 months of age (phase 1) and the factor 2 was high and medium ADG from 7 months of age to puberty onset (phase 2), resulting in the following treatments: CHH crossbreed heifers submitted to high ADG in both phases of experiment; CHM high ADG in phase 1 and medium ADG in phase 2; CMH medium ADG in phase 1 and high ADG in phase 2; CMM Medium ADG in both phases. The medium ADG were targeted by restricting of dry mater intake (DMI) in medium ADG. Crossbreed heifers of treatments CHH, CHM, CMH showed the same age at puberty, about 12 months. Heifers submitted to high ADG on phase 2 were heavier (P = 0,0379) at puberty than heifers submitted to low ADG. The high ADG from 3 to 7 months did not affect puberty onset in crossbreed heifers. The objective and methodology used in experiment III was the same of used in experiment II. However, Nellore heifers (N) were used instead of crossbreed heifers and the experimental period ended at 19 months of age. The NHH treatment (84%) induced higher (P = 0,0145) percentage of pubertal heifers than NMM (23%), but there was not difference in puberty rate between NHM (60%) and NMH (50%) treatments. Furthermore, the comportment of curves of puberty of treatments NHM and NMH were similar, thus there was not effect of metabolic imprinting in Nellore heifers. The high ADG from 3 to 19 months of age increased the percentage of pubertal Nellore heifers at 19 months of age
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Possíveis efeitos da leptina e IGF-I plasmáticos sobre a puberdade e a precocidade sexual de novilhas Nelore (Bos taurus indicus) / Possible effects of plasmatic leptin and IGF-I on puberty and sexual precocity of Nelore heifers (Bos taurus indicus)

Beltran, Maria Paula 28 January 2008 (has links)
Foram avaliadas as concentrações plasmáticas de leptina e IGF-I do 8° ao 16° mês de idade de 36 novilhas Nelore e comparadas com a idade à primeira ovulação e precocidade sexual. Para a quantificação da leptina, foi validado um radioimunoensaio (RIA) utilizando anticorpo produzido contra leptina recombinante eqüina após inoculação em coelho. A especificidade, estabilidade, taxa de recuperação e efeito matriz indicaram que o ensaio foi adequado para a quantificação de leptina plasmática bovina. O IGF-I foi quantificado por Kit comercial (DSL). As amostras de sangue foram colhidas em intervalos de 4 dias e avaliadas nos 60 dias retrospectivos à primeira ovulação e de amostras mensais do 8° ao 16° mês de idade. A maioria das novilhas (83,3%) ovulou até o final do experimento e foram divididas em prenhes até os 16 meses de idade (33,3%), formando o grupo precoce (P), e não prenhes (50%), formando o grupo Não Precoce (NP) 16,7% das novilhas não ovularam (chamadas de NO) até o final do experimento. Não houve diferença (P > 0,05) na idade à primeira ovulação entre os grupos P (439±27,9 dias) e NP (445±36,8 dias). O peso aumentou (P < 0,01) nos 3 grupos, não diferiu (P > 0,05) entre as novilhas P e NP durante o experimento, mas as NO apresentaram peso inferior aos outros grupos a partir do 12°mês (P < 0,01). Nos 60 dias que antecederam a primeira ovulação, a concentração de leptina plasmática aumentou (P < 0,01) no grupo P, mas não nos grupos NP e NO (P > 0,5), porém não houve diferença entre os grupos (P > 0,5). Houve correlação entre a concentração de leptina plasmática e o peso corporal nos grupos P (r=0,36; P < 0,01) e NP (r=0,4313; P < 0,01), mas não no grupo NO (r=0,095; P > 0,5). A concentração plasmática de IGF-I aumentou (P < 0,01) nos 3 grupos do 8° ao 16° mês de idade, mas foi maior no grupo P (P < 0,01) do que nos NP e NO, que não diferiram entre si. Antes da primeira ovulação, não foi verificado aumento (P > 0,1) na concentração de IGF-I em nenhum dos grupos, porém a concentração foi maior no grupo P (P < 0,05). Pode-se concluir que a concentração de leptina, junto com o peso corporal foram importantes na primeira ovulação, enquanto o IGF-I, na determinação da precocidade sexual. / Plasmatic leptin and IGF-I were quantified from 36 Nelore heifers, and compared to age at first ovulation and sexual precocity. For leptin quantification, a radioimmunoassay, using antibody against recombinant equine leptin inoculated in rabbit was validated. The specificity, stability, recuperation tax and matrix effect showed that the assay was able to quantify for plasmatic bovine leptin quantification. The IGF-I was quantified with a commercial Kit (DSL). Blood samples were taken every 4 days and analyzed retrospectively 60 days before first ovulation and from mensal samples from 8th to 16th month of age. Most of the heifers ovulated (83.3%) until the end of experiment, those were divided in heifers that became pregnant until the 16° month of age (33.3%), named Precocious group (P), 50% that did not became pregnant were the non precocious group (NP) 16% of the heifers did not ovulated and were named NO. There was no difference (P > 0.05) in the first ovulation age between P (439±27.9 days) and NP (445±36.8 days) groups. The weight of the 3 groups increased (P < 0.01), but did not differ (P > 0.05) between P and NP heifers but NO showed lower weight (P < 0.01) after the 12th month (P < 0.01). Sixty days before first ovulation, plasmatic leptin concentration increased (P < 0.01) in P group, but did not in NP or NO (P > 0.5), and there were no difference between groups. (P > 0.5). There was correlation between plasmatic leptin and body weight in P (r=0.36; P < 0.01) and NP (r=0.4313; P < 0.01), but did not in NO group (r=0.095; P > 0.5). Plasmatic IGF-I concentration increased (P < 0.01) in the 3 groups, from 8th to 16th month of age, but was higher in P (P < 0.01) than NP and NO, that did not differ among themselves. Before first ovulation there was, no increase (P > 0.1) in IGF-I in none of groups, but concentration was higher in P (P < 0.05) group. It could be concluded that leptin concentration as well as body weight were important in first ovulation, while IGF-I, in the sexual precocity determination.
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Gene expression analyses on adipose tissue of Nellore peripubertal heifers reveal genes that have an impact on reproductive physiology / Análise da expressão gênica do tecido adiposo em novilhas Nelore púberes revela interação entre tecidos reprodutivos

Henriques, Paula Suarez 14 February 2017 (has links)
Pubertal development is an outcome of genes\' interaction producing molecular signals that rule physiological mechanisms. Understanding the genetic changes surrounding the peripubertal period in Nellore heifers could unveil certain differences in age at puberty because they reach sexual maturity much later than European heifers. The adipose tissue regulates energy metabolism and is an endocrine organ with active participation in reproductive processes .The present study aimed at understanding the functions of the adipose tissue around pubertal time in Nellore heifers. Our strategy was to search for differences in gene expression between prepubertal and pubertal animals. We quantified gene expression in the adipose tissue for Nellore heifers who reached puberty according to either the early or late pattern. This research was done on 30 Nellore heifers monitored weekly from 230 kg bodyweight until the onset of puberty through gynaecological ultrasound examination. The onset of puberty was defined by the presence of corpus luteum in the ovary and blood progesterone > 1 ng/ml. Adipose tissue was collected through subcutaneous biopsy; the first biopsy was done when heifers reached 230 kilos bodyweight and subsequently once a month until they entered puberty. Biopsies were collected of each heifer that reached puberty alongside its half-sister who had not reached puberty. We analysed samples of six early pubertal heifers and their six late pubertal sisters at two different stages: at the time of ovulation and approximately 50 days before ovulation. The RNA was extracted from the biopsies\' tissue and gene expression quantified through RNA sequencing. There were nine genes differentially expressed in pubertal heifers that have been found previously correlated with reproductive traits and/or processes in mammals on other studies. These genes were APOD, CYP17A1, DNMT3B, AKR1C4, TENM1/ODZ3, HPSE, SMPD3, FAM134B and CYP26B1, already found expressed in adipocytes, hypothalamus, ovaries and uterus, corroborating previous knowledge of a link among energy metabolism, reproductive organs and neural influence. By measuring the genetic changes and correlating them with known physiological mechanisms on the nervous system and reproductive organs during puberty, we detected genes expressed here that are related to modifications in the organism as a whole. Therefore the adipose tissue may be regarded as an instrument to indicate what is going on during reproductive processes. The results presented here may aid in a better understanding of genetic changes happening during peripubertal period. / O desenvolvimento púbere é o resultado da interação de genes que produzem sinais moleculares regulando os mecanismos fisiológicos. A compreensão das mudanças genéticas que permeiam o período peripuberal em novilhas Nelore (Bos indicus) poderia desvendar o porquê das diferenças em idade a puberdade, pois elas atingem a maturidade sexual mais tarde que o gado europeu (Bos taurus). O tecido adiposo regula o metabolismo de energia e é um órgão endócrino que tem participação ativa em processos reprodutivos. O presente estudo teve como objetivo entender as funções do tecido adiposo na época peripubertal em novilhas Nelore. Nossa estratégia foi procurar diferenças em expressão gênica entre animais pré-púberes e púberes. Nós quantificamos a expressão gênica no tecido adiposo de novilhas Nelores precoces ou tardias. A pesquisa foi feita em 30 novilhas Nelore, monitoradas semanalmente a partir do momento em que atingiram 230 kg de peso até a manifestação da puberdade por exame de ultrassom ginecológico. O momento da puberdade foi definido pela presença de corpo lúteo no ovário e concentração sanguínea de progesterona maior que > 1 ng/ml. O tecido adiposo foi coletado por biópsia subcutânea; a primeira biópsia foi feita quando as novilhas alcançaram 230 quilos de peso e subsequentemente uma vez por mês ate que elas entrassem em puberdade. As biópsias foram coletadas de cada novilha que atingiu a puberdade e de sua meia-irmã que não tinha atingido a puberdade. Nós analisamos amostras de seis novilhas púberes precoces e de seis novilhas púberes tardias em dois estágios diferentes: no momento da ovulação e aproximadamente 50 dias antes da ovulação. O RNA foi extraído do tecido das biopsias e a expressão genica quantificada através de sequenciamento de RNA. Encontramos nove genes diferencialmente expressos em novilhas púberes que foram previamente relacionados com características e/ou processos reprodutivos de mamíferos em outros estudos. Esses genes foram APOD, CYP17A1, DNMT3B, AKR1C4, TENM1/ODZ3, HPSE, SMPD3, FAM134B e CYP26B1, já encontrados expressos em adipócitos, hipotálamo, ovários e útero, comprovando conhecimento prévio da conexão existente entre metabolismo de energia, órgãos reprodutivos e influencia neural. Ao medir as mudanças genéticas e correlacioná-las com mecanismos fisiológicos conhecidos em sistema nervoso e órgãos reprodutivos durante a puberdade, nós conseguimos identificar genes expressos em adiposo que são relacionados a modificações no organismo como um todo. Sendo assim, o tecido adiposo pode ser considerado um instrumento para indicar o que está acontecendo durante os processos reprodutivos. .Os resultados apresentados aqui podem ajudar na melhor compreensão de mudanças genéticas durante o período peripuberal.
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Desempenho reprodutivo até o primeiro parto de leitoas selecionadas com baixas taxas de crescimento / Reproductive performance to first farrowing of gilts selected with low growth rate

Walter, Marina Patrícia January 2018 (has links)
O objetivo do presente trabalho foi avaliar o desempenho reprodutivo de leitoas que foram selecionadas com baixos ganhos de peso diários (GPD) aos 160 dias de vida. Leitoas da linhagem Camborough® (n = 3301) foram alocadas em quatro grupos de acordo com o GPD no momento da seleção: G1 (n = 799) leitoas com GPD ≥480 a ≤ 530g/dia, G2 (n = 978) leitoas com >530 a ≤ 580g/dia, G3 (n = 916) fêmeas com >580 a ≤ 630g/dia e G4 (n = 608) leitoas com >630 a ≤ 810g/dia. Não foram encontradas diferenças na idade de início de estimulação com o macho e manifestação do primeiro estro entre as classes (P> 0,05). Na cobertura todos os grupos diferiram entre si sendo o G4 o grupo mais precoce e com maior peso (P< 0,05). O GPD da seleção até a cobertura diferiu entre as classes, sendo que o G1 teve maiores ganhos de peso quando comparado ao G3 e G4 respectivamente (P< 0,05). As médias de nascidos totais, nascidos vivos e intervalo desmame-estro não diferiram entre os grupos (P> 0,05). As remoções entre a seleção e a cobertura pós-desmame foram maiores no G1 e G2 quando comparados ao G4 (P< 0,05). Quando agrupados G1 e G2 e, a partir disso, formadas duas classes de acordo com o peso na cobertura (≤ 130 kg e > 130 kg), o grupo > 130 kg obteve 0,93 leitão a mais no primeiro parto (P< 0,05). Em conclusão, leitoas selecionadas com baixos GPDs (inferiores a 630g/dia) podem ser incorporadas no plantel sem gerar prejuízos no desempenho reprodutivo até o primeiro parto, desde que alcancem 130 kg no momento da cobertura. / The aim of this study was to evaluate the reproductive performance of gilts selected with low average daily gain (ADG) at 160 days of age. Camborough® gilts (n = 3301) were allocated into four groups according to ADG at selection: G1 (n = 799) represented the group of gilts with ADG ≥480-≤ 530g/day, G2 (n = 978) corresponded to gilts with >530- ≤ 580g/day, G3 (n = 916) represented the gilts with > 580-≤ 630g/day and G4 (n = 608) gilts with > 630-≤ 810g/day. There were no differences in the age at the onset of boar exposure and first estrus expression among groups (P> 0.05). Age and weight at insemination were different (P< 0.05) among groups. Gilts from G4 were inseminated earlier and heavier. The ADG from selection until mating was different among the groups, and G1 had greater weight gains when compared to G3 and G4 (P< 0.05). Total number of piglets born, number of piglets born alive and weaning to oestrus interval were not different among classes (P> 0.05). The removals since the selection until post-weaning insemination were higher in G1 and G2 when compared to G4 (P< 0.05). When gilts from G1 and G2 were grouped and categorized into two classes according to the weight at insemination (≤ 130 kg and > 130 kg), the heavier group (> 130 kg) had an increasing of 0.93 total born piglets at first farrowing (P< 0.05). The results of this study suggest that gilts selected with low ADG (less than 630g/day) could be incorporated into the breeding herd with no reproductive performance losses until the first farrowing if they reach 130 kg at insemination.
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Efeito da exposição pré-puberal ao arsênio sobre parâmetros morfofuncionais na próstata ventral de ratos pubescentes

Aquino, Ariana Musa January 2019 (has links)
Orientador: Wellerson Rodrigo Scarano / Resumo: O arsênio é um metaloide associado ao desenvolvimento de algumas patologias, como doenças cardiovasculares, lesões dérmicas e diferentes tipos de câncer. Pouco se sabe sobre a ação do arsênio ou compostos de arsênio na próstata durante o período pré-puberal e puberdade, estágios essenciais para a morfogênese tardia da próstata. Nesse sentido, este estudo teve como objetivo estabelecer se a exposição ao arsenito de sódio (NaAsO2) interfere na morfofisiologia da próstata ventral de ratos púberes. Para isso, 30 ratos machos da linhagem Wistar, no dia pós-natal 23 (DPN23), foram distribuídos, aleatoriamente, em 3 grupos experimentais (n =10/grupo). O grupo controle (Ctrl) recebeu água filtrada (veículo); o grupo As1 recebeu 0.01 mg/L de NaAsO2; e o grupo As2 recebeu 10.0 mg/L de NaAsO2. Todas as soluções foram diluídas na água do bebedouro e estiveram disponíveis aos animais do DPN23 ao DPN53. Os hábitos alimentares e a evolução do peso corpóreo dos animais foram acompanhados durante todo o período experimental. Ao final deste período, os animais foram pesados e, em seguida, eutanasiados (DPN53). Coletou-se o sangue para mensurar os níveis de testosterona. O fígado, os rins e a próstata ventral (PV) foram coletados e pesados. Apenas a PV foi dissecada e destinada às análises histológicas (hemilobo esquerdo) e moleculares (hemilobo direito). Os resultados dos parâmetros analisados durante o período experimental revelaram que o NaAsO2 não foi capaz de causar toxicidade sistêmica em... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Arsenic is an endocrine disruptor associated with the development of some pathologies such as cardiovascular diseases, dermal lesions and different types of cancer. Little is known about the action of arsenic or arsenic compounds in the prostate during the prepubertal and puberty period, an essential stage for late morphogenesis of the prostate. Therefore, this study aimed to establish whether exposure to sodium arsenite (NaAsO2) interferes in the morphophysiology of the ventral prostate of pubertal rats. In this study, thirty male Wistar rats, on the postnatal day 23 (PND23), were randomly distributed to 3 experimental groups (n = 10/group). The control group (Ctrl) received only saline solution; the second group (As1) received 0.01 mg/L of NaAsO2; and the third group (As2) received 10.0 mg/L of NaAsO2. All solutions were diluted in drinking water and were available to the animals from DPN23 to DPN53. The eating habits and the evolution of the body weight of the animals were evaluated throughout the experimental period. At the end of this period, the animals were weighed and then euthanized (DPN53). Blood was collected to measure testosterone levels. The liver, kidneys and ventral prostate (VP) were collected and weighed. Only VP was dissected for histological analysis (left hemilobo) and molecular (right hemilobo). The results of the parameters analyzed during the experimental period revealed that NaAsO2 was not able to cause systemic toxicity in both exposed groups nor cha... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre
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Estudo do mecanismo molecular da progesterona e do estradiol no desenvolvimento  do endométrio de novilhas Nelore pré-púberes / Study of the molecular mechanism of progesterone and estradiol in the development of endometrial prepubertal Nellore heifers

Sousa, Rafael Teixeira de 21 February 2017 (has links)
A elucidação dos eventos fisiológicos, pelos quais os esteroides ovarianos atuam no desenvolvimento endometrial de novilhas pré-púberes, é fundamental para o emprego de ferramentas de manejo reprodutivo que reduzam a idade ao primeiro parto e aumentem a taxa de desfrute do rebanho Nelore. Objetivou-se com este estudo averiguar os efeitos de implante de liberação sustentada de progesterona (DIB) e da manipulação do crescimento folicular, através de aspiração folicular transvaginal (AFTV), sobre mecanismos moleculares de genes modulados pela progesterona (P4) e pelo estradiol (E2) no endométrio de novilhas Nelore pré-púberes. 60 novilhas com 13,9 &#177; 2,9 meses, peso de 273,6 &#177; 5,6 kg, escore de condição corporal 5,9 &#177; 0,7, em uma escala de 0 a 9, sem sinais de ovulação, foram aleatoriamente e equitativamente distribuídas em quatro estratégias hormonais: 1) AFTV1 sem DIB&reg;: submetidas a aspiração folicular transvaginal guiada por ultrassonografia um dia antes do abate (AFTV1), sem o emprego de DIB; 2) AFTV4 sem DIB: também sem DIB e submetidas a aspiração folicular transvaginal guiada por ultrassonografia quatro dias antes do abate (AFTV4); 3) AFTV1 com DIB&reg; submetidas a uso de dispositivo intravaginal de liberação sustentada de progesterona (DIB&reg;, MSD Saúde Animal Brasil), usado previamente por duas vezes em vacas Bos indicus e AFTV1; Grupo 4; com DIB&reg; e AFTV4. Ao final do experimento, 35 animais, que não apresentaram presença de corpo lúteo, foram abatidos e tiveram seus úteros dissecados no lado ipso e contralateral, levando-se em consideração o maior diâmetro de folículo um dia antes do abate. Para a extração do ácido ribonucleico (RNA) total foram selecionados tecidos intercarunculares, obtidos das porções do terço médio do corno uterino direito e esquerdo, de seis animais de cada tratamento, totalizando 48 amostras de RNA total. Após a extração do RNA total e síntese do ácido desoxirribonucleico complementar (cDNA), a abundância dos transcritos foi avaliada empregando PCR em tempo real. Para estudar a regulação endometrial dos receptores de esteroides, foi mensurada a expressão relativa do: receptor de estrógenos alpha (ESR1) e beta (ESR2), receptor de progesterona isoformas A (PGR1), B (PGR2) e C (PGR3), receptor componente de membrana 1 (PGRMC1) e 2 (PGRMC2). Assim como de genes envolvidos em vias de resposta a P4 e ao E2: AQP4 (transporte de água), EGFR, FGF2, FGF2R, VEGFA, WNT5A (proliferação celular), OXTR, LPL, LTF, SERPINA14, SLC2A1 (atividade secretória), MMP2, MMP9 (remodelamento de matriz extracelular) e MUC1 (adesão celular). O GAPDH foi utilizado como gene constitutivo para correção dos resultados de expressão gênica. Os dados foram submetidos a análise de variância, utilizando o PROC MIXED do SAS 9.3. Houve interação entre os efeitos de corno uterino, DIB e AFTV sobre a expressão relativa de ESR1 (P = 0,05); EGFR (P = 0,05); PGR1 (P = 0,02); FGF2 (P = 0,01); FGFR2 (P = 0,10) e LPL (P = 0,04). Também foi verificado interação AFTV x corno uterino sobre a expressão relativa de PGR3 (P = 0,07); PGRMC1 e 2 (P = 0,02; P = 0,01), respectivamente; AQP4 (P = 0,09); MUC1 (P = 0,03); SLC2A1 (P = 0,09). Ocorreu interação DIB x corno uterino sobre a expressão relativa de PGRMC1 e 2 (P = 0,05; P = 0,03), respectivamente; AQP4 (P = 0,09) e OXTR (P = 0,08). E interação AFTV x DIB sobre a expressão de VEGFA (P = 0,09); MMP9 (P = 0,09); WNT5A (P = 0,01); SLC2A1 (P = 0,01). Enquanto que a expressão relativa da SERPINA14 foi influenciada pelo DIB (P = 0,02) e localização do corno uterino (P = 0,05). Estes resultados confirmam a complexa modulação dos receptores de esteroides ovarianos pela presença de DIB&reg; e dia da AFTV, na alteração da ação biológica de genes alvos, no tecido endometrial de novilhas Nelore pré-púberes. Baixos diâmetros foliculares próximo ao abate, aumentaram a expressão relativa de MUC1 no corno contralateral, sugerindo uma menor receptividade neste. Ademais, o aumento do peso uterino em função da inclusão do DIB, possivelmente seja uma consequência da maior abundância de transcritos de SERPINA14 e AQP4, mediados principalmente pelo PGRMC1 e PGRMC2. / The elucidation of the physiological events by which ovarian steroids act on endometrial development of pre-pubertal Nellore heifers, is critical for the for the use of reproductive management tools that reduce the age of first calving and increase the slaughter rate of the Nellore herd. The objective of this study was to investigate the effects of progesterone sustained release implant (DIB) and manipulation of follicular growth, through transvaginal follicular aspiration (TFA), on molecular mechanisms of genes modulated by progesterone (P4) and estradiol (E2) in the molecular mechanisms involved in the endometrial development of pre-pubertal Nellore heifers. Sixty heifers with 13.9 &#177; 2.9 months of age, weight of 273.6 &#177; 5.6 kg, body condition score 5.9 &#177; 0.7, on a scale from 0 to 9, without signs of ovulation, were randomly and evenly distributed into four hormonal strategies: 1) TFA1 without DIB&reg;: submitted to transvaginal follicular aspiration guided by ultrasonography one day before slaughter (TFA1), without the use of DIB; 2) TFA4 without DIB&reg;: also without DIB and submitted to transvaginal follicular aspiration guided by ultrasound four days before slaughter (TFA4); 3) TFA1 with DIB&reg;: Submitted to the use of intravaginal progesterone sustained release device (DIB&reg;, MSD Animal Health Brazil), previously used twice in Bos indicus cows and TFA1; Group 4; with DIB&reg; and TFA4. At the end of the experiment, 35 animals, which did not present a corpus luteum, were slaughtered and had their uterus dissected on the ipso and contralateral sides, taking into account the largest follicle diameter one day before slaughter. For the extraction of total ribonucleic acid (RNA), intercaruncular tissues were obtained from the middle third of the right and left uterine horns of six animals from each treatment, totaling 48 samples of total RNA. After extraction of total RNA and complementary deoxyribonucleic acid (cDNA) synthesis, abundance of the transcripts was assessed using real-time PCR. To study the endometrial regulation of steroid receptors, the relative expression of: alpha (ESR1) and beta (ESR2) estrogen receptor, progesterone receptor isoforms A (PGR1), B (PGR2) and C (PGR3), membrane component receptor 1 (PGRMC1) and 2 (PGRMC2). As well as genes involved in P4 and E2 response pathways: AQP4 (water transport), EGFR, FGF2, FGF2R, VEGFA, WNT5A (cell proliferation), OXTR, LPL, LTF, SERPINA14, SLC2A1 (secretory activity), MMP2, MMP9 (extracellular matrix remodeling) and MUC1 (cell adhesion). GAPDH was used as a constitutive gene for the correction of gene expression results. The data were submitted to analysis of variance, using PROC MIXED of SAS 9.3. There was interaction between the effects of uterine horn, DIB and TFA on the relative expression of ESR1 (P = 0.05); EGFR (P = 0.05); PGR1 (P = 0.02); FGF2 (P = 0.01); FGFR2 (P = 0.10) and LPL (P = 0.04). It was also verified the TFA x uterine interaction on the relative expression of PGR3 (P = 0.07); PGRMC1 and 2 (P = 0.02, P = 0.01, respectively); AQP4 (P = 0.09); MUC1 (P = 0.03); SLC2A1 (P = 0.09). DIB x uterine interaction occurred on the relative expression of PGRMC1 and 2 (P = 0.05; P = 0.03, respectively); AQP4 (P = 0.09) and OXTR (P = 0.08). And TFA x DIB interaction on VEGFA expression (P = 0.09); MMP9 (P = 0.09); WNT5A (P = 0.01); SLC2A1 (P = 0.01). While the relative expression of SERPINA14 was influenced by DIB (P = 0.02) and location of the uterine horn (P = 0.05). These results confirm the complex modulation of ovarian steroid receptors by the presence of DIB&reg; and TFA day in the alteration of the biological action of target genes in the endometrial tissue of prepubertal Nellore heifers. Low follicular diameters close to slaughter, increased the relative expression of MUC1 in the contralateral horn, suggesting a lower receptivity. In addition, increased uterine weight as a function of the DIB&reg; inclusion is possibly a consequence of the greater abundance of SERPINA14 and AQP4 transcripts, mainly mediated by PGRMC1 and PGRMC2.
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Análise econômica da precocidade na puberdade e do diagnóstico da gestação em fêmeas bovinas da raça Nelore e Angus x Nelore / Economic analysis of sexual precocity and pregnancy diagnosis in Nelore and Angus x Nelore cows

Rodriguez, Frederich Diaz 08 March 2017 (has links)
Entre as raças bovinas utilizadas comercialmente para produção de carne no Brasil, a Nelore e o cruzamento Nelore x Angus são de destaque pela adaptação que possuem às condições tropicais. No entanto, é comum que as fêmeas da raça Nelore produzam o primeiro bezerro entre os 44 a 48 meses de idade, fato que reduz a vida útil das matrizes no sistema de produção. Pesquisas desenvolvidas no Laboratório de Nutrição e Reprodução Animal (LNRA) da Escola Superior de Agricultura Luiz de Queiroz (ESALQ/USP) e no Laboratório de Fisiologia e Endocrinologia Molecular (LFEM) da Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia na (FMVZ/USP), mostram que esta realidade pode ser eventualmente alterada por meio do desenvolvimento de novas técnicas que visam precocidade em alguns eventos da vida produtiva das fêmeas bovinas, como a puberdade e o diagnóstico da gestação. Objetiva-se com a presente pesquisa determinar o efeito na viabilidade econômica de unidades produtivas comerciais dedicadas à produção de bezerros de: i) reduzir o tempo ao qual as fêmeas Nelore e Nelore x Angus chegam à puberdade, oferecendo dois ritmos de crescimento (500 e 1000 g dia-1) em duas fases de crescimento (dos três aos sete meses de idade e dos sete meses de idade até a puberdade); e ii) realizar o diagnóstico da gestação de forma convencional pela ultrassonografia transretal ou de forma precoce a través da quantificação de genes ISGs em células mononucleares do sangue periférico ou utilizando ultrassom com Doppler colorido. Após realizar análise de investimento por período de 16 anos (803 semanas), foram calculados os indicadores econômicos Valor Presente Líquido (VPL), Taxa Interna de Retorno (TIR) e o tempo de recuperação do capital (payback). O VPL foi utilizado para determinar a viabilidade econômica dos sistemas, por meio de regressões múltiplas. Em tais regressões, a variável dependente foi o VPL e o conjunto de variáveis explicativas foram a genética, a nutrição, o tipo de diagnóstico da gestação e os níveis de preços relativos de insumos e produtos. O fato de algumas variáveis explicativas serem qualitativas justificou o uso de variáveis do tipo dummy (0 ou 1). De acordo com os resultados obtidos, realizar o diagnóstico da gestação uma semana antes do tempo normalmente utilizado, elevaria o VPL do empreendimento em, aproximadamente, R$ 2,7 milhões. Após confinamento das novilhas Nelore e Nelore x Angus foi observado nos cenários onde foi oferecido Alto GMD nas duas fases do confinamento melhor desempenho econômico. No entanto, entre os dois grupos genéticos, as novilhas Nelore x Angus apresentaram maior VPL. Finalmente, foi realizado um levantamento do histórico de preços pagos e recebidos pelo produtor rural nos últimos 10 anos. Esta análise permitiu observar que são os preços dos insumos os que mais influenciam a viabilidade dos sistemas. / Among the bovine breeds commercially used for meat production in Brazil, the Nelore and Nelore x Angus crosses are prominent for the adaptation that are useful to tropical conditions. However, it is common for Nelore females to produce the first calf between 44 and 48 months of age, to reduce the useful life of the matrices in the production system. (LNRA) of the Luiz de Queiroz College of Agriculture (ESALQ / USP) and not Laboratory of Physiology and Molecular Endocrinology (LFEM) of the Faculty of Veterinary Medicine and Animal Science at (FMVZ / USP)), show that this reality can be altered by Means of developing new techniques aimed at precocity in some events of life produced by females, such as puberty and diagnosis of gestation. The objective of this study is to investigate the effect of the Nelore and Nelore x Angus females on the economic viability of vegetable production units dedicated to the production of calves. Growth (500 and 1000 g day-1) in two growth stages (from three to seven months of age and two months of age until puberty); And ii) perform the diagnosis of pregnancy in a conventional manner by transrectal ultrasonography or early by quantifying ISG genes in peripheral blood mononuclear cells or using color Doppler ultrasound. After the investment analysis for a period of 16 years (803 weeks), the calculations of economic indicators Net Present Value (NPV), Internal Rate of Return (IRR) and payback time. The NPV was used to determine the economical viability of the systems, through multiple regressions. In such regressions, a dependent variable for the NPV and the set of explanatory variables for a genetics, a nutrition, a type of pregnancy diagnosis and the price levels of inputs and products. The fact that some explanatory variables are qualitative justified for the use of dummy variables (0 or 1). According to the results obtained, carry out the diagnosis of gestation a week before the time used, raise the NPV ventures in about R $ 2.7 million. After confinement of the Nelore and Nelore news x Observations on the scenarios in which the High GMD in the two phases of the confinement was carried out better economic performance. However, between the two genetic groups, such as Nelore x Angus heifers presented higher NPV. Finally, a survey of the price history paid and received by the rural producer in the last 10 years was carried out. This analysis showed that it is the input prices that most influence the systems viability.

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