Orientador: Raimundo Souza Lopes / Coorientador: Mary Marcondes / Banca: Hélio Langoni / Banca: Regina Akemi Takahira / Banca: Cecília Braga Laposy / Banca: Aureo Evangelista Santana / Resumo: É de extrema importância para a medicina transfusional que haja segurança no procedimento de transferência de hemocomponentes, minimizando a ocorrência da transmissão de patógenos. O presente trabalho visa caracterizar as possíveis alterações hematológicas e bioquímicas, ocorridas durante o período de 21 dias de armazenamento das amostras de sangue canino colhidas em bolsas plásticas para transfusão, investigando ainda a eficiência do tratamento destas bolsas com luz ultravioleta e riboflavina na inativação de Leishmania infantum chagasi. Para isto, realizou-se hemograma, teste de fragilidade osmótica, determinação da concentração sérica de sódio e potássio, testes sorológicos e moleculares, comparando-se um grupo de bolsas de sangue colhidas de cães parasitados com L. infantum chagasi, com um grupo de bolsas de sangue obtidas de cães hígidos. Após as análises laboratoriais in vitro, o sangue canino parasitado foi submetido ao tratamento com riboflavina e luz UV por 30 e 45 minutos e inoculado em hamsters. O sangue de cães com leishmaniose armazenado em bolsas para transfusão demonstrou: anemia, hiperproteinemia, trombocitopenia, hipercalemia, diminuição do pH, 100% das RIFIs positivas (título 1:640) e PCR convencional positiva em 20% dos animais, demonstrando a importância do hemograma, exames bioquímicos e dos testes laboratoriais de diagnóstico da leishmaniose na seleção dos doadores. O sangue parasitado não perdeu a capacidade de produzir a infecção após o período de armazenamento. Os hamsters inoculados com sangue tratado com riboflavina e luz UV por 30 e 45 minutos apresentaram PCR positiva, apesar de não apresentarem sinais e sintomas clínicos da enfermidade. Na qPCR pode-se identificar que a associação da riboflavina com a luz UV reduziu o número de leishmanias, diminuindo a carga parasitária, porém não eliminou completamente os parasitas / Abstract: Providing safety during the transfusion of blood products is of major importance in transfusion medicine; this requires a proper blood to minimize the occurrence of pathogen transmission. The present work aims to characterize the possible hematological and biochemical changes that occurr during the 21 days of storage of canine blood samples collected in plastic bags for transfusion and to investigate the treatment efficiency of these bags with ultraviolet light and riboflavin in inactivating Leishmania infantum chagasi. Total blood count, osmotic fragility test, determination of serum sodium and potassium, serological and molecular tests were performed comparing a group of bags of blood taken from dogs infected with L. infantum chagasi, with a group of bags of blood obtained from healthy dogs. After this, the parasitized canine blood was subjected to the treatment with riboflavin and UV light for 30 to 45 minutes and inoculated in hamsters. The blood of dogs with leishmaniasis stored in bags for transfusion showed anemia, hyperproteinemia, thrombocytopenia, hyperkalemia, decreased pH, 100 % of RIFIs positive (1:640 title) and conventional PCR positive in 20% of animals, demonstrating the importance of blood count, biochemical tests and laboratory tests for the diagnosis of leishmaniasis in blood donor selection. The parasitized blood has not lost the ability to produce infection after the storage period. Hamsters inoculated with blood treated with riboflavin and UV light for 30 and 45 minutes were PCR positive, although not presenting clinical signs and symptoms of the disease. The qPCR can identify that the combination of riboflavin with UV light reduced the number of Leishmania, reducing the parasitic load, but did not completely eliminate parasites / Doutor

O diagnóstico da malária tem como teste de referência a gota espessa, porém é consenso que é preciso adotar alternativas em situações específicas, com técnicas mais sensíveis e que possam ser aplicadas no processamento de grande número de amostras, como estudos clínicos, epidemiológicos ou triagem de doadores em bancos de sangue. Com a finalidade de formar uma plataforma de diagnóstico para malária em amostras agrupadas em pools, foi realizada análise comparativa da PCR em tempo real, a nested PCR e um teste rápido específico para detecção de anticorpos contra P.falciparum e P. vivax, com intuito de reduzir o número de ensaios, com custo relativamente baixo. Foram utilizadas 50 amostras de sangue positivas para Plasmodium, de acordo com a prevalência das espécies no Brasil (P. vivax 75%, P. falciparum 22% e P. malariae 3%), com diagnóstico realizado pelo método padrão ouro. Adicionalmente, 48 amostras de sangue negativas para Plasmodium foram selecionadas para controle negativo e confecção de 15 pools, contendo amostras positivas e negativas. Quatro das amostras negativas para malária eram positivas para outras doenças. Tanto as amostras positivas como as negativas foram submetidas individualmente aos ensaios de PCR em tempo real, nested PCR e teste imunocromatográfico SD Bioline Pf/Pv para detecção de malária. Um teste de PCR convencional foi incluído a fim de testar a qualidade do DNA, mediante amplificação de uma sequência do gene humano da -globina como controle interno. Posteriormente as amostras foram analisadas em pools pelos ensaios moleculares e sorológicos. Nos testes individuais, 45/49 amostras foram positivas para Plasmodium pela PCR em tempo real, com Sensibilidade de 91,84%, e Especificidade (48/48) de 100,00%; 46/49 amostras detectaram Plasmodium pela nested PCR, com Sensibilidade de 93,88%, e Especificidade (12/12) de 100,00%; 32/46 amostras foram reagentes no teste sorológico SD Bioline Pf/Pv, com Sensibilidade de 69,56%, e Especificidade (10/10) de 100,00%. Nos ensaios com amostras agrupadas, 13 pools (86,66%) foram positivos pela PCR em tempo real; a nested PCR também obteve positividade nos mesmos 13 pools (86,66%). O teste imunocromatográfico SD Bioline apresentou Sensibilidade de 73,33% considerando o diagnóstico pela gota espessa. Tanto a PCR em tempo real como a nested PCR apresentaram boa sensibilidade e especificidade, seja nas amostras clínicas analisadas individualmente ou em pools, diferentemente do teste sorológico SD Bioline. Ambas as metodologias moleculares apresentaram desempenho semelhante, com bons resultados de acurácia e indicadores de validade, como Sensibilidade, Especificidade, Valor Preditivo Positivo e Negativo. Considerando-se as vantagens inerentes à PCR em tempo real, como rapidez, processamento em sistemas fechados e dispensa de eletroforese após amplificação, este método deve ser indicado como primeira escolha para diagnóstico de malária em grande número de amostras, seguido da nested PCR para diferenciação de espécies de Plasmodium. O teste sorológico, que é específico para detecção de anticorpos contra P. vivax e P. falciparum, pode ser indicado apenas como método complementar no diagnóstico de malária / The diagnosis of malaria is based on the thick blood film as reference test, but the consensus is that it is necessary to adopt alternatives in specific situations, with more sensitive techniques that could be applied in the processing of large numbers of samples in clinical and epidemiological studies or in the screening of donors at blood banks. The purpose of this study was to analyze and compare the real-time PCR, the nested PCR and a rapid test for detection of specific antibodies against Plasmodium falciparum and P. vivax, to build a platform for malaria diagnosis in pooled samples, reducing the number of tests and providing relatively low cost. For the tests analysis, we used 50 blood samples positive for Plasmodium, according to the prevalence of the species in Brazil (75% P. vivax, 22% P. falciparum and 3% P. malariae), with diagnosis performed by the gold standard method. In addition, 48 blood samples negative for Plasmodium were selected for negative control and production of 15 pools containing positive and negative samples. Four of the malaria negative samples were positive for other diseases. Both the positive and negative samples were submitted to individual testing of real-time PCR, nested PCR and immunochromatographic test SD Bioline Pf/Pv for the detection of malaria. To check the quality of DNA, a conventional PCR was included, with amplification of a sequence of the -globin human gene as internal control. Subsequently the samples were analyzed in pools by molecular and serological tests. In individual tests, 45/49 samples were positive for Plasmodium by real time PCR, with sensitivity of 91.84% and (48/48) 100.00% specificity, 46/49 samples detected Plasmodium by nested PCR, with sensitivity of 93.88% and (12/12) specificity 100.00%; 32/46 samples were positive on serological test SD Bioline, with sensitivity of 69.56% and (10/10) 100.00% specificity. In tests with pooled samples, 13 pools (86.66%) were positive by real time PCR; the nested PCR also had positive results in the same 13 pools (86.66%). Immunochromatographic test SD Bioline Pf/Pv showed sensitivity of 73.33% compared with blood smear. Both real-time PCR and the nested PCR showed good sensitivity and specificity in samples analyzed individually and in pools, unlike the SD Bioline test. Both molecular methods showed similar performance, with good results in accuracy and validity indicators, such as sensitivity, specificity, positive and negative predictive values. Considering the advantages inherent in real-time PCR, a fast test that is processed in closed systems without post-amplification handling, this method should be indicated as first choice for diagnosis of malaria in large numbers of samples, followed by nested PCR for species determination. Serological test, that is specific for antibodies against P. vivax and P. falciparum, could be used as a supplementary method for diagnosis of malaria

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-07-02Bitstream added on 2014-06-13T18:55:45Z : No. of bitstreams: 1 barbante_p_me_botfmvz.pdf: 14043998 bytes, checksum: de62a414c23b2ef4f92ffe0263efd2d7 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Nos últimos anos a ovinocultura reapareceu na região Sudeste, principalmente no estado de São Paulo, como solução econômica para os pecuaristas. Entretanto, havendo um estado sanitário deficiente na criação, pode-se haver a instalação de doenças nos rebanhos e diminuição na produção, como ocorre na leptospirose, uma das zoonoses mais representativas. Com o intuito de estudar a presença de Leptospira spp. nos rebanhos ovinos, foram colhidas 100 amostras sanguíneas e os respectivos fragmentos de fígado e rim dos animais de 20 diferentes propriedades, durante o abate em um frigorífico da região de Sorocaba/SP. Pela prova de Soroaglutinação Microscópica (SAM) obteve-se 23 amostras sorológicas positivas (23%) para um ou mais sorovares de Leptospira spp., com prevalência do sorovar Autumnalis. Para a pesquisa do agente em fragmentos de fígado e rim, 100 amostras de cada tecido foram cultivadas em meio de Fletcher, obtendo-se oito (4%) amostras positivas, sendo quatro para rim e quatro para fígado. Destes, cinco animais apresentaram sorologia positiva (um animal positivo simultaneamente para fígado e rim) e dois negativos. Com a prova de Reação em Cadeia pela Polimerase (PCR) para Leptospira spp. houve positividade em 14 (7%) amostras, sendo sete de rim e sete de fígado. Destes, dez eram animais positivos sorologicamente (dois animais positivos simultaneamente para fígado e rim) e dois negativos. Em relação a técnica de cultivo em meio de Fletcher®, a prova PCR demonstrou-se mais rápida, prática e sensível na detecção de leptospira. Pelos resultados obtidos ressalta-se a importância da espécie ovina no contexto epidemiológico da leptospirose / In recent years, sheep farming has reappeared in the Southeast region. However, having a deficient sanitary state, disease can appear in flocks and production reduce, which occurs with leptospirosis. With the aim of studying Leptospira spp. in sheep herds, 100 blood samples and respective kidney and liver fragments were collected from animals from 20 different properties during slaughter at a meat company in the Sorocaba region, SP, Brazil. The microscopic agglutination test (MAT) found 23 serologically positive samples for one or more Leptospira spp. serovars, with an antileptospire antibody occurrence rate of 23% and more significantly for the Autumnalis serovar. To study the agent in the liver or kidney, 100 samples of each tissue were submitted to culture in Fletcher medium using the Pasteur pipette method and analysed by the Polymerase Chain Reaction test, obtaining 12 positive animals considering both agent detection techniques. The Leptospira spp. cultures presented eight positive samples (four kidney and four liver), corresponding to five animals with positive serology (one animal simultaneously positive for both kidney and liver) and two negatives. PCR detected Leptospira in 14 samples (seven kidney and seven liver) corresponding to 12 positive animals (two animals simultaneously positive for kidney and liver), of these, ten were serologically positive and two negative.PCR was faster, more practical and sensitive than culture for detecting leptospire. Our results stress the importance of ovine specie in the epidemiological context of leptospirosis, acting as disease reservoirs and carriers for the environment and for rural and meat process workers

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-08-09Bitstream added on 2014-06-13T18:31:12Z : No. of bitstreams: 1 aquino_mcc_me_araca.pdf: 684677 bytes, checksum: 7318d697f23b509c8008184e6a67c272 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / om o objetivo de determinar a ocorrência e caracterizar molecularmente a infecção por Cryptosporidium spp. em bezerros bubalinos do Estado de São Paulo, Brasil, foram colhidas 222 amostras fecais de animais da raça Murrah, com até seis meses de idade. As amostras foram avaliadas pela técnica de Ziehl-Neelsen modificada e por meio da reação em cadeia da polimerase tipo nested (nPCR) para amplificação de fragmentos de DNA da subunidade 18S do gene do RNA ribossômico e sequenciamento dos fragmentos amplificados. Pela técnica de Ziehl-Neelsen modificada, foi detectada positividade de 8,1% (18/222), e pela nPCR, foi observada amplificação em 48,2% (107/222) das amostras, das quais 63 foram sequenciadas. A análise das sequências obtidas mostrou que a espécie mais frequente nesses animais foi Cryptosporidium ryanae, em bezerros bubalinos a partir de cinco dias de idade. A espécie zoonótica Cryptosporidium parvum foi detectada em apenas um animal e um genótipo incomum, similar a Cryptosporidium sp. W20486, foi encontrado, pela primeira vez em búfalos / With the aim of determining the occurrence and molecularly characterizing infection by Cryptosporidium spp. in buffalo calves from São Paulo State, Brazil, 222 fecal samples were collected from Murrah animals aged up to six months. The samples were assessed by means of modified Ziehl-Neelsen technique and nested polymerase chain reaction (nPCR) for amplification of DNA fragments from subunit 18S of the gene of ribosomal RNA and sequencing of the amplified fragments. The modified Ziehl-Neelsen technique indicated 8.1% positivity (18/222), while nPCR revealed amplification for 48.2% (107/222) samples, of which 63 were sequenced. The analysis of the obtained sequences showed that the most frequent species in these animals was Cryptosporidium ryanae, present in buffalo calves from five days of age. The zoonotic specie Cryptosporidium parvum was detected in only one animal, and an uncommon genotype, similar to that of Cryptosporidium sp. W20486, was found for the first time in buffaloes

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-25Bitstream added on 2014-06-13T18:55:47Z : No. of bitstreams: 1 ribeiro_lf_me_jabo.pdf: 1207984 bytes, checksum: 5a5e1f9c2d00ce2012cc5d6ff3d5b0e6 (MD5) / Os queijos elaborados a partir de leite cru são muito consumidos no Brasil. No entanto, sua elaboração realizada por pessoas não capacitadas pode resultar em sua contaminação por vários micro-organismos, incluindo Escherichia coli, afetando a qualidade microbiológica do queijo e representando risco potencial para a saúde dos consumidores. Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar as características fenotípicas e genotípicas de estirpes de Escherichia coli isoladas em amostras de queijos elaborados a partir de leite não pasteurizado em três cidades, para avaliar o possível risco potencial deste tipo de queijo para a população humana. Para tanto, 83 queijos foram coletados em cada um dos três diferentes municípios, Uberaba / Minas Gerais (30), Ribeirão Preto / São Paulo (22) e Aracajú / Sergipe (31) no ano de 2010. Os isolados foram cultivados em ágar EMB e, no ano de 2012, analisados o grupo filogenético por PCR, o sorogrupo O por aglutinação, a resistência antimicrobiana por difusão em disco, a presença de genes de resistência antimicrobiana por PCR, e campo pulsado por eletroforese em gel. O número de amostras positivas para E. coli foi maior na cidade de Aracaju (90,32%) e os isolados de E. coli da cidade de Uberaba demonstraram alta resistência antimicrobiana (92,30%). A maior parte dos isolados pertencia ao grupo filogenético A (54,4%) e B1 (44,3%). A resistência aos antimicrobianos foi moderada, sendo que a maior prevalência foi do município de Uberaba (56,7%). Houve isolados com genes de resistência a antimicrobianos, sendo que o gene tetB foi o gene mais comumente encontrado. Os sorotipos mais observados foram O4, O18 e O23, importantes como causadores de doenças extra intestinais, como meningite e infecção do trato urinário. Clones de E. coli foram encontrados em amostras de queijos na... / The cheeses made from raw milk is widely consumed in Brazil. However, preparation is performed by people not trained and can result in contamination by various micro-organisms, including Escherichia coli, affecting the microbiological quality of cheese and representing potential risk to consumer health. The objective of this study was to assess the phenotypic and genotypic characteristics of Escherichia coli strains isolated in samples of cheeses made from unpasteurized milk in three cities, to assess the possible risk potential of this type of cheese for the human population. For this, 83 cheeses were collected in each of three different municipalities, Uberaba / Minas Gerais (30), Ribeirão Preto / São Paulo (22) and Aracaju / Sergipe (31) in 2010. The isolates were cultured on agar and EMB, and in 2012, analyzed the phylogenetic group by PCR, serogroup by agglutination, antimicrobial resistance by disk diffusion, the presence of antimicrobial resistance genes by PCR and pulsed field by gel electrophoresis. The number of samples positive for E. coli was higher in the city of Aracaju (90.32%) and E. coli isolated from Uberaba demonstrated high antimicrobial resistance (92.30%). Most isolates belonging to the phylogenetic group A (54.4%) and B1 (44.3%). Antimicrobial resistance was moderate, and the highest prevalence was at Uberaba (56.7%). There were isolates with antimicrobial resistance genes, and the gene tetB was the gene most commonly found. The serotypes most frequently observed were O4, O18 and O23, important as disease causing extra bowel, such as meningitis and urinary tract infection. E. coli clones were found in samples of cheeses in the same city and in different cities and there was also a high genetic variability, indicating that this type of food can be contaminated at different points during the... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-02-28Bitstream added on 2014-06-13T20:35:29Z : No. of bitstreams: 1 santana_las_me_jabo.pdf: 425731 bytes, checksum: b7a11a67ef69a8ebcc72848774e63722 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Conhecendo-se a predileção das leptospiras pelo aparelho urogenital, e a crescente utilização de técnicas de reprodução assistida na espécie canina, o presente trabalho objetivou pesquisar a presença e a ação da Leptospira no sêmen e testículo de cães. Foram utilizados 32 animais, dos quais 20 foram inoculados com uma cepa patogênica de Leptospira interrogans sorovar Canicola e 12 não receberam inóculo algum, sendo considerados animais-controle. Assim, os 32 animais experimentais foram reunidos em quatro grupos de estudo encerrando cinco cães inoculados e três cães-controle por grupo. Os animais do grupo um foram sacrificados após sete dias da inoculação, os animais do grupo dois sacrificados 15 dias após a inoculação, os animais do grupo três sacrificados após 30 dias de incubação e os animais do grupo quatro foram sacrificados após 45 dias da inoculação da cepa patogênica. Após o sacrifício, colheram-se fragmentos de testículo para pesquisa de Leptospira no parênquima testicular pela técnica de coloração de Levaditi. Nos dias zero (dia da inoculação), três, cinco, sete, dez, e a partir daí de cinco em cinco dias após a inoculação da cepa patogênica de Leptospira, foram colhidas amostras de sangue e sêmen. No sêmen, foram realizados exames andrológicos e PCR, no sangue, além da pesquisa de anticorpos pela técnica de soroaglutinação microscópica (SAM), foram verificados os níveis hormonais de testosterona. Dos 20 cães infectados, apenas um não apresentou título detectável na prova de SAM no período analisado. No grupo dois, foi verificada uma queda significativa nos valores do vigor e da concentração espermática, nos cães infectados, durante grande parte do período de estudo... / Considering the Leptospira predilection for the urogenital system and the increasing of utilization of assisted reproduction in dogs, this work aimed to search the presence and the role of Leptospira in semen and testicles from dogs. From 32 animals, 20 were inoculated with a pathogenic Leptospira interrogans serovar Canicola strain and 12 received no inoculum, acting as control animals. The 32 experimental animals were distributed in four groups with five inoculated and three control dogs per group. Animals from group one were sacrificed seven days after inoculation, animals from group two were sacrificed 15 days after inoculation, animals from group three were sacrificed 30 days after inoculation, and animals from group four were sacrificed 45 days after inoculation. Testicle fragments were collected after dog sacrifices for searching Leptospira in testicle parenchyma using Levaditi stain technique. Blood and semen samples were collected at day zero (inoculation day), three, five, seven, ten and then by each five days after pathogenic Leptospira strain inoculation. Andrologic exams and PCR were performed with semen. Blood samples were used to detect antibodies using microscopic agglutination test (MAT) and verify testosterone levels. Only one of the 20 infected dogs had no detectable titre using MAT. Spermatic vigor and spermatic concentration had a significant decrease in group two during most part of the study. In three of nine days of semen collection, only spermatic concentrations were significantly lower in infected animals from group three. In this study it was possible to detect Leptospira DNA in semen samples from 16 of the 20 dogs inoculated with L. interrogans serovar Canicola strain. Thereby it was not possible to correlate the decrease of testosterone serum levels in infected animals with those detected in control animals...(Complete abstract, click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-02-18Bitstream added on 2014-06-13T20:27:44Z : No. of bitstreams: 1 salles_r_me_jabo.pdf: 598083 bytes, checksum: 499f9c1f74412f0e6664ce1077b27a3c (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O presente estudo teve como objetivo determinar a ocorrência de rotavírus do grupo A e a genotipagem G e P de estirpes detectadas em bezerros de rebanhos leiteiros e gado de corte, durante o período de julho de 2006 a setembro de 2008, em propriedades rurais do Estado de São Paulo, Brasil. Foram amostrados 395 bezerros, na faixa etária entre 1 e 60 dias, independentemente da manifestação clínica de diarréia, de 18 rebanhos bovinos, sendo nove de exploração leiteira e nove de gado de corte. Por meio da técnica de eletroforese em gel de poliacrilamida (EGPA), determinou-se a ocorrência de rotavírus em 33,3% (06/18) entre os rebanhos e de 8,6% (34/395) na população amostrada. A maior freqüência de infecção foi detectada em animais com idade entre 16 e 30 dias (p < 0,01). Foram diagnosticados bezerros infectados por rotavírus tanto em animais com sinais clínicos de diarréia (22%;29/133) quanto naqueles clinicamente normais (1,9%;05/262), existindo, porém, uma correlação entre a presença da infecção e a manifestação clínica da diarréia (p<0,01). Em relação ao tipo de exploração, nos rebanhos leiteiros 0 percentual de ocorrência foi de 5,3% (14/264), enquanto que nos rebanhos de gado de corte o rotavírus teve maior ocorrência (15,3%; 20/131). A análise do perfil do genoma de rotavírus por EGPA identificou dois eletroferótipos distintos, cujas diferenças estavam localizadas na posição de migração dos segmentos 2, 3, 7, 8 e 9. A genotipagem pela reação em cadeia pela polimerase (RT-SNMPCR) das amostras de rotavírus revelou a que as estirpes circulantes nos rebanhos eram G6P[5], G10P[5], não foi possível fazer associação com o genotipo P[1]. / The present study aimed to determine the Group A rotavirus and G/P genotyping in detected virus strains in dairy and beef cattle calves from July 2006 to September 2008 in São Paulo State-Brazil farms. 395 calves in 18 flocks (9 dairy cattle and 9 beef cattle) from 1 to 60-day-old were sampled, independently whether manifesting clinically diarrhea or not. By using Poliacrylamide Gel Electrophoresis Technique (PAGE), the rotavirus occurrence of 33.3% (06/18) among flocks and 8.6% (34/395) among the population sampled were determined. The higher infection frequency was detected in 16-to-30-day-old calves (P<0.01). Rotavirus-infected flocks rotavirus-infected were diagnosticated as much the ones having clinical symptoms of diarrhea (22%, 29/133) as the ones clinically normal (1.9%, 05/262), shawing a correlation between the presence of infection and the diarrhea manifestation (p<0.01). Related to the kind of exploration, the occurrence in dairy cattle was 5.3% (14/264) while in the beef cattle the occurrence was higher (15.3%, 20/131). The rotavirus genome profile analysis by PAGE identified two distinct electroferotypes, in which differences were located in the following segment migration positions: 2, 3, 7, 8 and 9. The genotyping of the Rotavirus sample by polymerase chain reaction (RT-snmPCR) revealed that the circulating strains among the flocks were G6P[5], G10P[5] e G?P[1].

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:17Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-11-26Bitstream added on 2014-06-13T20:56:06Z : No. of bitstreams: 1 000743666.pdf: 1070303 bytes, checksum: 6cc475d81bb258dbe7f48c85fac453ca (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Infection by some species or genotypes of Cryptosporidium represents a potential risk to public health, mainly because of the morbidity and mortality in children from zero to five years of age and in immunocompromised patients. Although there are some reports of Cryptosporidium infection in exotic animals, the participation of these animals in the epidemiology of human cryptosporidiosis is uncertain and studies on this topic is still rather scarce. The aim of this study was to determine the occurrence as well as to perform the molecular classification of Cryptosporidium spp. in faecal samples of exotic animals raised as pets in Brazil. A total of 386 faecal samples from six species of exotic animals was collected and stored in a solution 5% potassium dichromate at 4°C. The oocysts were purified by centrifugal sedimentation water-ether, followed by genomic DNA extraction and the performance of the nested-PCR to amplify partial gene fragment of 18S rRNA. Positivity for Cryptosporidium spp. was obtained in 11.40% (44/386) of samples. The sequencing of the amplified fragments allowed the identification of Cryptosporidium tyzzeri (Cryptosporidium mouse genotype I) on mice (Mus musculus), Cryptosporidium muris in mice, hamster (Mesocricetus auratus and Cricetulus griseus) and chinchilla (Chinchilla lanigera), Cryptosporidium parvum in chinchila and Cryptosporidium sp. in guinea pig (Cavia porcellus). The results of this study show that there are a variety of species of Cryptosporidium spp. present in exotic animals company in Brazil. The data suggest that these animals may have zoonotic potential and participate in the epidemiology of human cryptosporidiosis / FAPESP: 11/02730

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:18Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-08-18Bitstream added on 2014-06-13T20:16:26Z : No. of bitstreams: 1 viol_ma_me_araca.pdf: 293015 bytes, checksum: bdc10c5bc3d8d20c951f2fc3b6dc7f4e (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O objetivo deste estudo foi detectar reações cruzadas por Leishmania spp. e Trypanossoma cruzi pelo Ensaio Imunoenzimático Indireto (ELISA), pela Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI) e pela Reação em Cadeia da Polimerase (PCR). Assim, foram colhidas 408 amostras sanguíneas de cães domiciliados no município de Araçatuba,SP, de ambos os sexos, de diversas raças e com idade a partir de seis meses. Em relação à Leishmania spp., pela RIFI, 14,95 % (61/408) foram reagentes. A positividade por meio do ELISA, foi de 20,10% (82/408) e pela PCR, 29,66% (121/408), com diferença significativa para o sexo e a idade destes animais (p<0,05). Para Trypanosoma spp., a ocorrência de anticorpos pelo ELISA foi de 10,54% (43/408) e pela PCR, 2,45% (10/408) cães foram positivos. Pela RIFI, 10,29% (42/408) dos animais foram considerados positivos e somente o sexo apresentou diferença significativa (p<0,05). Neste trabalho, constatou-se que 10,54%(43/408) dos animais foram soropositivos por ELISA para Trypanosoma spp., sendo que 79,07%(34/43) obtiveram resultados positivos no diagnóstico molecular para Leishmania spp. e dos 10,29% (42/408) positivos por RIFI, 95,24% (40/42) dos cães confirmaram a infecção por este parasita. Por meio dos resultados obtidos, pode-se inferir que foram evidenciadas reações cruzadas nos ensaios sorológicos para ambos os protozoários, nos animais analisados neste trabalho / The aim of this study was to detect cross-infection by Leishmania spp. and Trypanosoma spp. by indirect immunosorbent assay (ELISA), by Indirect Immunofluorescence (IFA) and by the Polymerase Chain Reaction (PCR). Thus, blood samples were collected from 408 domestic dogs of both sexes, different races and ages from six months. For Leishmania spp. by IFA, 14.95% (61/408) were positive. Positive by ELISA, was 20.10% (82/408), and PCR 29.66% (121/408), with significant difference for sex and age of animals (p <0.05). For Trypanosoma spp., the occurrence of antibodies by ELISA, was 10.54% (43/408), and PCR, 2.45% (10/408) dogs were positive. By IFA, 10.29% (42/408) of the animals were considered positive and only sex was significant difference (p <0.05). In this work it was found that 10.54% (43/408) animals were seropositive by ELISA for Trypanosoma spp., 79.07% (34/43) had positive results in molecular diagnostic for Leishmania spp. and 10.29% (42/408) positive by IFA, 95.24% (40/42) dogs confirmed the infection by this parasite. Through the results obtained can be inferred that cross-infection were observed by both protozoa in animals of this paper

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:20Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-10-11Bitstream added on 2014-06-13T19:14:38Z : No. of bitstreams: 1 000738835.pdf: 2748761 bytes, checksum: dcad72914370b9d270982eb35f883ae3 (MD5) / O presente estudo foi realizado no período de janeiro de 2012 a janeiro de 2013 em fazendas leiteiras da região de Dracena, São Paulo. Durante o período, foram coletadas 800 amostras de fezes com suabes retais em vacas leiteiras. Essas amostras foram levadas para o Laboratório de Microbiologia do Campus Experimental de Dracena, onde foram isoladas e identificadas 561 amostras para Escherichia coli. Após o isolamento foram extraídos os DNAs de todas as amostras pelo método da fervura e por PCR o DNA foi amplificado para se detectar a presença dos genes de virulência de E. coli pertencentes ao grupo STEC, produtora de toxina tipo shiga em 446 amostras. De todas as cepas isoladas 90 eram portadoras do gene stx1, 97 do gene stx2, 45 do gene eae, 37 dos genes stx1 e stx2, 110 dos genes stx1 e eae e 67 dos genes stx2 e eae. Foram isoladas também 115 cepas que não eram portadoras de nenhum dos genes de virulência de STECs do estudo. Todos os isolados de E. coli portadores de cada gene de virulência foram avaliados quanto a resistência frente a 10 antimicrobianos. Os percentuais de resistências aos antimicrobianos foram maiores para a lincomicina, penicilina e novobiocina e menores para ampicilina, neomicina e tetraciclina. Foram identificados os sorogrupos, dos quais os mais frequentes entre os isolados portadores do gene de virulência stx1 foram o O119 e O114; do gene de virulência stx2 foram os sorogrupos O9 e O8; e do gene de virulência eae foram os sorogrupos O9, O8 e O127. Todos os isolados de E. coli apresentaram multirresistência e a maioria apresentou maior percentagem de multirresistência contra 2 a 3 e contra 10 antimicrobianos. Não foi verificado estatisticamente relação entre os padrões de virulência e os padrões de resistência aos antimicrobianos entre as amostras / The present study was conducted between january 2012 to january 2013 on dairy farms of Dracena city region, São Paulo. During the period, 800 samples of faeces were collected with rectal suabs from dairy cattle cows. Those samples were taken to the laboratory of microbiology of Dracena Experimental Campus, where 561 samples were isolated and identified for Escherichia coli. After the DNA from the samples were extracted by the boiling method and with PCR the genetic material was amplified to detect the presence of virulence genes from STEC, shiga-like toxin producer E. coli, on 446 samples. Of those samples, 90 were carriers of the stx1 gene, 97 of the gene stx2, 45 of the gene eae, 37 of the genes stx1 and stx2, 110 of the genes stx1 and eae, 67 of the genes stx2 and eae. Also were isolated 115 samples that did not carry none of the virulence genes from STECs of the study. All the E. coli isolates of each virulence gene were evaluated for resistence to 10 antibiotics. The percentual of resistence were higher for lincomycin, penicillin and novobiocin and lower for ampicillin, neomycin and tetracycline. A serogroup test was made, of which the most frequent among isolates carrying the virulence gene stx1 were O119 and O114; of the gene stx2 were serogroups O8 and O9; and of the gene eae were the serogroups O9, O8 and O127. All the E. coli isolates presented multirresistence and most isolates presented more percentage of multirresistence against 2 to 3 and against 10 antibiotics. Was not verified statistically relationship between virulence patterns and patterns of antimicrobial resistance among the samples