Orientador: Carmen Silvia Bertuzzo / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-23T02:22:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Furgeri_DanielaTenorio_D.pdf: 7382335 bytes, checksum: edfcfca14ac645a69fd4e8e2d2777246 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: A fibrose cística (FC) é uma doença autossômica recessiva com características de doença complexa. Complicações clínicas parece ser fator decisivo para o prognóstico dos pacientes. Os polimorfismos nos genes ADRA2A e TCF7L2 são importantes para elucidar parte da variabilidade encontrada nas características clínicas de doenças inflamatórias, incluindo a FC, que tem a Diabetes Mellitus como uma importante co-morbidade. Os objetivos deste estudo foram determinar a frequência do polimorfismo rs12255372 no gene TCF7L2 e sua associação com Diabetes Mellitus em pacientes com fibrose cística, e investigar a associação de 27 variáveis clínicas da FC com os polimorfismos rs553668 e rs10885122 do gene ADRA2A. Em nosso estudo, 145 pacientes foram avaliados em relação ao genótipo do polimorfismo rs12255372 no gene TCF7L2 e 176 pacientes foram avaliados em relação à associação dos polimorfismos rs553668 e rs10885122 no gene ADRA2A com 27 variáveis clínicas da FC. Todos os pacientes em atendimento no Ambulatório de Pediatria da Faculdade de Ciências Médicas da UNICAMP foram confirmados como tendo fibrose cística por dois testes de suor alterados (valor de sódio e de cloro superior a 60 mmol / L) e por análise de diferencial do epitélio da membrana do intestino através da dosagem de CFTR pela câmara Ussing. A identificação das mutações do gene CFTR foi realizada no laboratório de Genética Molecular da FCM/Unicamp. O rastreio do polimorfismo rs12255372 foi feito através da técnica de PCR associada à digestão enzimática específica. O rastreio dos polimorfismos rs553668 e rs10885122 no gene ADRA2A foi feito por PCR ARMS. Uma comparação genotípica foi realizada com as 27 variáveis clínicas, da FC considerando as mutações do gene CFTR. Encontramos associações clínicas, sem considerar as mutações no gene CFTR, com as variáveis categóricas: raça [para o polimorfismo rs553668 (p = 0,002), grupo haplotípico (p = 0,014)], íleo Meconial [para o polimorfismo rs553668 (p = 0,030) Quando consideradas as duas mutações no gene CFTR, encontramos associações com as variáveis íleo meconial (p = 0,0012) e IMC [para o polimorfismo rs553668 (p = 0,014)]. A associação com dados numéricos, sem considerar as mutações no gene CFTR, foi positiva para a idade ao diagnóstico [para o polimorfismo rs553668 (p = 0,022)]. Considerando as duas mutações no gene CFTR, a associação com dados numéricos foi positiva para o Escore de Bhalla [para o polimorfismo rs553668 (p = 0,014)], Escore de Shwachman-Kulczycki [para o polimorfismo rs553668 (p = 0,008) e haplótipos (p = 0,050)]. Os polimorfismos rs553668 e rs10885122 no gene ADRA2A parecem ser moduladores da gravidade da FC em nossa amostra. Em nossa amostra, não houve associação entre o polimorfismo rs12255372 no gene TCF7L2 e a Diabetes Mellitus / Abstract: Cystic fibrosis (CF) is an autosomal recessive disease with characteristics of complex disease. Clinical complications appear to be a decisive factor in the prognosis of patients. The ADRA2A and TCF7L2 gene polymorphisms are important to elucidate part of the variability encountered in clinical characteristics in inflammatory diseases, including CF, which has diabetes-associated as an important comorbidity. The aims of this study ware to determine the frequency of polymorphism rs12255372 in the TCF7L2 gene and its association with Diabetes Mellitus in Cystic Fibrosis patients and to investigate the association of 27 CF clinical variables with ADRA2A polymorphisms. In our study, 145 patients were evaluated in relation to the genotype of the rs12255372 polymorphism in the TCF7L2 gene. 176 patients were evaluated in relation to associate rs553668 and rs10885122 polymorphisms in the ADRA2A gene with 27 CF clinical variables. All patients in attendance at the Pediatric Clinic at the Faculty of Medical Sciences, UNICAMP, were confirmed as having cystic fibrosis by two altered sweat tests (sodium and chlorine value greater than 60 mmol/L) and by analysis of differential membrane epithelium of the intestine by the dosage of active CFTR through the Ussing chamber. The identification of CFTR gene mutations was performed in the laboratory of Molecular Genetics, FCM/Unicamp. The rs12255372 polymorphism was screening by PCR method associated with specific enzymatic digestion. The rs553668 and rs10885122 polymorphisms in ADRA2A gene were screening by ARMS-PCR. A genotypic comparison was performed with 27 CF clinical variables, considering CFTR mutations. We found clinical associations, without considering the mutations in the CFTR gene, with categorical variables: race [for polymorphism rs553668 (p = 0.002), haplotype group (p = 0.014)], meconium ileus [for polymorphism rs553668 (p = 0.030). Considering the two mutations in the CFTR gene, we find associations with categorical variables meconium ileus (p = 0.0012) and BMI [for polymorphism rs553668 (p = 0.014)]. The association with numerical data, without considering the mutations in the CFTR gene, was positive for age at diagnosis [for polymorphism rs553668 (p = 0.022)]. Considering the two mutations in the CFTR gene, the association with numerical data was positive for Bhalla score [for polymorphism rs553668 (p = 0.014)], Shwachman-Kulczycki score [for polymorphism rs553668 (p = 0.008) and haplotypes (p = 0.050)]. Polymorphisms rs553668 and rs10885122 in ADRA2A gene appear to be modulators of CF severity in our sample. In our sample, there was no association between the polymorphism rs12255372 in the TCF7L2 gene and Diabetes Mellitus / Doutorado / Clinica Medica / Doutora em Clínica Médica

Orientador: Eulalia Sakano / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-23T20:48:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ng_RonnyTahYen_M.pdf: 2076573 bytes, checksum: 564de0a72c22446e69acd2aaae6840a7 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: A fibrose cística (FC) é uma doença genética autossômica recessiva, resultante da ausência total na proteína CFTR (Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator), ou de alterações qualitativas ou quantitativas do gene que transcreve esta proteína, em células de diversos órgãos do corpo humano, resultando em inúmeros genótipos e fenótipos desta doença. Em muitos pacientes, o diagnóstico é difícil de ser definido, pelo método clássico de dosagem de sódio e cloro no suor, ou pelo sequenciamento genético, justificando a utilização de novas técnicas de auxílio diagnóstico, como a Diferença de Potencial Nasal (DPN). Este teste proporciona uma forma de avaliação direta e sensível, através do epitélio nasal, do transporte de sódio e cloro das membranas celulares, baseado nas propriedades bioelétricas transepiteliais. O objetivo deste trabalho foi verificar se existe diferença dos valores obtidos no exame de DPN em pacientes com FC em comparação com indivíduos controles saudáveis; e verificar se este teste permite diferenciar pacientes com FC das subclasses funcionais mais graves (I, II, III) das subclasses menos graves (IV, V, VI). Foram incluídos no estudo 15 pacientes FC, 10 com mutações mais graves (grupo A) e 5 com mutações menos graves (grupo B), e 21 controles saudáveis (grupo C). Foram considerados os seguintes parâmetros do teste da DPN: "Finger", PDMax, ?Amilorideo, ?Amilorídeo+livrecloreto e index de Wilchanski. Para a variável "Finger", foi encontrada diferença entre pacientes com FC grupo B - mutações menos graves (classe IV, V ou VI) e indivíduos saudáveis - grupo C. O valor do index de Wilchanski mostrou diferença entre pacientes com FC grupo A - mutações mais graves (classes I, II ou III) e indivíduos saudáveis - grupo C. No nosso estudo, a DPN mostrou valores estatisticamente diferentes entre FC com 2 mutações conhecidas e sujeitos saudáveis. Porém, não conseguiu diferenciar fibrocísticos com mutações mais graves (classes I, II e III) daqueles com mutações consideradas menos graves (classes IV, V e VI) / Abstract: Cystic fibrosis (CF) is an autosomal recessive genetic disease, due to the total absence of protein CFTR (Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator), or due to qualitative or quantitative changes in the gene that transcript this protein in cells of various organs of the human body, resulting in numerous genotypes and phenotypes of the disease. In several patients, the diagnosis is difficult to be defined by the classical method of sodium and chloride dosage in sweat, or by genetic sequencing, justifying the use of new techniques for diagnosis, as the Nasal Potential Difference (NPD). This test provides a way of direct and sensitive assessment of the transport of sodium and chloride ions in cell membranes, via the nasal epithelium, based on transepithelial bioelectric properties. The objective of this work was to verify the difference of the values obtained in the examination of NPD in patients with CF compared with healthy control subjects, and, to verify if this test allows differentiating patients with more severe CF functional subclasses (I, II , III) from patients with less severe CF subclasses (IV, V, VI). This study included 15 CF patients, 10 with more severe mutations (group A) and 5 with less severe mutations (group B), and 21 healthy controls (group C). We considered the following test parameters of NPD: "Finger", PDMax, ?Amiloride, ?Amiloríde+Chloridefree and Wilchanski index. For "Finger" values, it was found difference between patients with CF Group B - less severe mutations (class IV , V or VI) and healthy individuals - group C. The value of Wilchanski index showed difference between group A CF patients, with more severe mutations (class I, II or III) and healthy individuals - group C. In our study, NPD showed statistically different values between CF patients with two known mutations and healthy subjects. However, it was not able to distinguish between CF patients with more severe mutations (class I, II and III) of the CF patientswith less severe mutations (Class IV, V and VI) / Mestrado / Otorrinolaringologia / Mestre em Ciências Médicas

[pt] O presente estudo tem como objetivo investigar o problema da legitimidade democrática da atuação normativa das agências reguladoras no Brasil a partir da seguinte questão: Como pensar a legitimação da atividade de produção de normas dessas entidades administrativas brasileiras a partir da teoria discursiva do Direito e da democracia de Jürgen Habermas? O foco da análise são os desafios que uma teoria que explica os processos de integração e reprodução da sociedade a partir de um conceito de racionalidade situado entre a facticidade e a validade das ações sociais deve enfrentar, quando aplicada a realidades distintas daquela a partir da qual foi elaborada. Para tanto, assume- se, como ponto de referência, a obra de Paulo Todescan Lessa Mattos, que, em relação às agências reguladoras, é o principal representante de uma corrente analítica que enxerga, no modelo habermasiano de legitimação pelo procedimento discursivamente estruturado, uma saída teórica capaz de oferecer parâmetros normativos para a legitimação democrática da atuação normativa dessas entidades. O diálogo com a posição de Mattos e suas conclusões sobre o tema é constante ao longo do trabalho e estabelece a base sobre a qual são levantados alguns pontos problemáticos da tentativa de identificar, a partir da teoria de Habermas, potenciais de legitimação democrática nos espaços de participação popular institucionalizados no interior dos processos de tomada de decisão das agências reguladoras brasileiras. / [en] The main purpose of this work is to analyze the issue of democratic legitimacy of regulatory norms produced by independent agencies in Brazil, considering the following question: How to think about legitimating the lawmaking activity of these administrative entities according to Jürgen Habermas´ discourse theory of democracy and the law? The analysis focuses on the challenges that a theory which explains the integration and reproduction processes of modern societies through a concept of rationality situated between the facts and norms of social action must face, when applied to a reality that is different from the one that inspired its development. Thus, I take the work of Paulo Todescan Lessa Mattos, an authority in the topic of regulatory agencies, as a reference of an analytical perspective that sees in Habermas´ discursive model of procedural legitimation a way to find normative parameters to legitimate the norms of these entities. The dialog with Mattos´ argument and his conclusions is constant in this work, and it sets the basis for developing several problematic issues related to identifying, through Habermas´ theory, potentials of democratic legitimation in the institutionalized spaces of public participation within the decision-making processes of Brazilian regulatory agencies.

Orientador: Prof. Dr. Alfeu Joãzinho Sguarezi Filho / Coorientador: Prof. Dr. José Alberto Torrico Altuna / Tese (doutorado) - Universidade Federal do ABC. Programa de Pós-Graduação em Energia, Santo André, 2018.

[pt] Quadricópteros vêm sendo o objeto de estudo de inúmeras pesquisas ao redor do mundo. Diversas técnicas de controle já foram desenvolvidas, cada uma com seus prós e contras, objetivando o aprimoramento do desempenho destes veículos aéreos na consecução de tarefas específicas. Este trabalho foca na comparação de características de desempenho de técnicas de controle aplicadas a quadricópteros. Este trabalho mostra o projeto de controles modernos aplicados à quadricópteros apresentando tais técnicas, iniciando com a realimentação de estados com polos dominantes, passando pelo controle Linear Quadratic Regulator (LQR). Por sua vez, visando otimizar o desempenho das técnicas de controle aqui estudadas, foram aplicadas técnicas de inteligência computacional para resolver um problema de otimização do LQR e para auxiliar no controle de forças dos rotores. Apresenta-se o projeto de um controle PID, que será usado como referência para as demais técnicas analisadas. O controle por realimentação de estados citado anteriormente obteve bons resultados. O tempo de assentamento foi o menor para o eixo Z, overshoots e o erro em regime permanente, os menores para os eixos X e Y. O controlador Fuzzy conseguiu fazer seu papel auxiliando a movimentação do quadricóptero. O GA otimizou o tempo de assentamento do LQR. Esse controle conseguiu alcançar os menores tempos de assentamento para os eixos X e Y, sendo mais rápido que a configuração original do LQR, escolhida por heurísticas. Com esse trabalho foi possível notar que os controladores modernos, realimentação de estado e LQR, tem um desempenho melhor que o controle PID de referência. / [en] Quadcopters are researched all over the world. A lot of techniques had been developed and many others a blistering, each one with their pros and cons. The focus of this work is the comparison between the performance of some techniques most used in quadcopters, qualifying these techniques. This work shows the designing process of a quadcopter controllers, starting with state feedback with dominant poles and going to the Linear Quadratic Regulator controller. Focusing on optimizing the performance of those control strategies, computational techniques were used to solve an LQR optimization problem and to help choose the best inputs for the rotors. This work presents a PID controller that will be used as a reference for comparison. The state feedback controller with the Fuzzy position control performed very well, being the fastest one to settle on the Z axis, having the least overshoots and the lowest steadystate errors for the X and Y axes. The Fuzzy controller did what was supposed to do, smoothing and enabling a precise movement for the quadcopter. The GA also did what was supposed to do and improved the settling time for the LQR controller. It showed that it was a nice way to tune the Q and R matrixes, allowing the controller to be the fastest one to settle in the X and Y axes. As a result of this work, the modern control techniques, state feedback and LQR, performance better than the classic PID controller, used as reference.

[ES] El contexto de esta Tesis se enmarca en los sistemas de dos componentes (TCS) para comprender el mecanismo de transducción de la señal. Se analizó la especificidad en el reconocimiento de los TCS abarcando estudios a nivel funcional, estructural y evolutivo. Primero se utilizó el sistema HK853-RR468, que al estar previamente caracterizado nos permitió analizar específicamente las regiones de reconocimiento (HK-RR) correspondientes a los Lß3α3 y Lß4α4 de RR468 mutando residuos que determinaran la influencia en la transferencia del grupo fosfato. Los mutantes se caracterizaron de manera bioquímica y se hicieron aproximaciones estructurales pudiendo asignar la reacción de fosfotransferencia a una estructura formada por un complejo entre HK853 y RR468 mutante. Esta estructura nos permitió observar el carácter disociativo de dicha reacción que ha sido descrito previamente y la nula participación del dominio CA. Al mismo tiempo, se analizó la influencia del pH en los residuos catalíticos de la HK y el RR (His y Asp), utilizando un rango de pH de 5 a 8. Los ensayos bioquímicos generados en este rango nos mostraron como la His catalítica perdía su carácter nucleofílico cuando el pH se acercaba y disminuía de 6. Esto se relaciona con el pKa del anillo de imidazol presente en el residuo de His, que se se encuentra en torno a 6 y la pérdida de protonación. También se cristalizó el complejo HK-RR a diferentes pHs donde observamos que la His adquiría un rotámero gauche- que se asignaba a un estado inactivo o de reposo. Por otra parte, se analizó la influencia de la mutación G63V en el RR OmpR, que fue descrita como una mutación relacionada con la resistencia al antibiótico ertapenem. Para esto se generaron mutantes en OmpR en la posición G63, tanto en el dominio REC aislado como en la proteína completa. Los estudios bioquímicos de estas mutaciones demostraron como la mutación en esta posición disminuía la capacidad del RR para fosforilarse e incluso a dimerizar. Esto afectaba a la afinidad de este RR para interaccionar con su ADN correspondiente, las cajas ompF y ompC. Estos efectos se lograron evidenciar con la estructura de OmpRRECG63V, donde se observó como la mutación generaba un cambio conformacional al reducir el tamaño del Lßα3 y generaba un bolsillo hidrofóbico donde quedaba atrapada la cadena lateral de la Val. Finalmente se analizó el aspecto evolutivo de la señalización, para lo que se buscaron organismos endosimbiontes que presentaran una HK y uno o varios RRs. Estas características nos sugerían que la menor presión selectiva nos iba a permitir encontrar organismos con TCSs menos evolucionados cuya especificidad se haya visto reducida. Se analizaron los sistemas de Chlamydia trachomatis, Chlamydia psittaci, Simkania negevensis y Methanobrevibacter sp. Abm4. Solo pudo evidenciarse reacción de fosfotransferencia en el sistema perteneciente a Methanobrevibacter, el cual presenta una HK y 4 RRs. Sin embargo, esta fosfotransferencia presentaba una eficiencia diferenciada, siendo más rápida en RRMet572 y RRMet589-1 mientras que era nula en RRMet589-2. Por su parte las HKs de C. trachomatis y S. negevensis, fueron capaces de fosfotransferir, de manera no selectiva, a RR468, probablemente debido a la alta similitud que presenta la hélice α1 de las HKs con HK853. La aproximación estructural de estos sistemas permitió obtener las estructuras de los RRsMet589-1 y RRMet572, ambos en estado no fosforilado. Las dos estructuras presentaron grandes diferencias conformacionales a partir del Lßα4. Esto sugiere que sus mecanismos de reconocimiento con HKMet y de regulación son diferentes lo que apoya la selectividad diferenciada entre los RRs de este sistema. / [CA] Esta Tesi s'emmarca en l'estudi dels sistemes de dos components (TCS) amb la finalitat d'entendre el seu mecanisme de transducció de senyal basat en l'especificitat de reconeixement a nivell funcional, estructural i evolutiu. Utilitzant el TCS HK853-RR468, analitzarem les regions Lß3α3 y Lß4α4 del regulador de la resposta (RR) RR468, que prèviament s'havien mostrat importants en el reconeixement, generant mutants i determinant la influència en la transferència del grup fosforil. Els mutants foren caracteritzats bioquímicament, observant que afectaven a una reacció específica i permetent-nos captar la reacció de fosfotransferència en una estructura formada per un complex entre HK853 i RR468 mutant. Aquesta estructura va mostrar el caràcter dissociatiu d'aquesta reacció i la nul·la participació del domini CA de la HK. Al mateix tems, s'analitzà l'efecte del pH sobre la transducció del senyal utilitzant els TCS K853-RR468 i EnvZ-OmpR. Els assajos bioquímics generats dins del rang de pH entre 5 i 8 ens mostraren com la His de la HK catalítica perdia el seu caràcter nucleofílic quan el pH s'aproximava i disminuïa de 6, valor del pKa de l'anell d'imidazole de la cadena lateral del residu d'His, indicant que aquesta disminució en l'activitat es correlacionava amb el canvi en la protonació de l'anell. Un exhaustiu estudi estructural del complex HK853-RR468 a diferents pHs mostrà que la His catalítica sempre adquiria un rotàmer gauche- independentment del valor del pH, invalidant el model que proposava que el pH regulava l'activitat de les HKs de la família HisKA induint un canvi en el rotàmer de la His catalítica. D'altra banda, s'analitzà la influència de la mutació G63V en el RR OmpR, que fou descrita com una mutació relacionada amb la resistència a l'antibiòtic ertapenem. Amb aquesta finalitat, es generaren mutants a OmpR a la posició G63 tant al domini REC aïllat com a la proteïna completa. Els estudis bioquímics demostraren com la mutació en aquesta posició disminuïa la capacitat de OmpR per fosforilar-se i per dimeritzar, afectant a la capacitat d'interaccionar amb les seqüències d'ADN palindròmiques diana, corresponents a les caixes ompF i ompC. Aquests efectes es visualitzaren a nivell molecular al resoldre l'estructura del mutant G63V d'OmpRREC, on s'observava com la mutació induïa un canvi conformacional al reduir la mida del Lßα3 generant una butxaca hidrofòbica degut a la presència de la nova Val en posició 63. Aquests canvis es transmeten a la resta de l'estructura d'OmpR produint canvis en Lßα4 i α4 que impedeixen la formació d'una superfície de dimerització competent i impedint la seua interacció amb l'ADN. Finalment, s'analitzà l'aspecte evolutiu de l'especificitat HK-RR. Buscaren organismes endosimbionts que presentaren TCS aïllats consistent en una HK i un o diversos RRs, suggerint que la menor pressió selectiva permetria trobar TCS menys evolucionats, on l'especificitat s'haguera vist reduïda. S'analitzaren HKs i RRs presents en Chlamydia trachomatis, Chlamydia psittaci, Simkania negevensis i Methanobrevibacter sp. Abm4. La reacció de fosfotransferència es va detectar en Methanobrevibacter, que presenta una sola HK i 4 RRs. Aquesta HK mostrà eficiència diferenciada per a la reacció de fosfotransferència, presentant major velocitat per als RRs RRMet572, RRMet589-1 i nul·la per a RRMet589-2. Per la seua banda, les HKs de C. trachomatis i S. negevensis, foren capaces de transferir, de manera no selectiva, a RR468 de Thermotoga maritima, probablement degut a l'alta similitud que presenta l'hèlix α1 de les HKs amb HK853. L'aproximació estructural d'aquests sistemes ens va permetre resoldre les estructures dels RRsMet589-1 i RRMet572 en estat no fosforilat. Les dues estructures presentaren grans diferències conformacionals a partir del Lßα4, els que ens suggereix que els seus mecanismes de reconeixement amb HKMet i de regulació són diferents, cosa que suporta la selectivitat diferenciada entre els RRs d’aquest sistema. / [EN] The context of the Thesis is framed in the two component systems (TCS) to understand the signal transduction mechanism. The specificity in the recognition of TCS was analyzed covering studies at the functional, structural, and evolutionary level. First, the previously characterized HK853-RR468 was used, this allowed us to analyze specific recognition regions corresponding to Lß3α3 and Lß4α4 of RR468 and induce mutations in these regions and understand the recognition between HK and RR and determine the phosphate group transfer's influence. The mutants were characterized biochemically, and structural approximations were prepared, thus assigning the phosphotransfer reaction in a formed structure by an HK8536 and a mutant RR468 complex. This structure allowed us to observe the dissociative character of this reaction that has been previously described and the null participation of the CA domain. Simultaneously, the influence of pH on the catalytic residues of HK and RR (His and Asp) was analyzed, using a pH range of 5 to 8. The biochemical assays generated in this range showed how HK's catalytic His lost the nucleophilic characteristic when pH reached six or below. This is related to the pKa of the imidazole ring present in the His residue that if found around 6 and the loss of protonation. The HK853-RR468 complex was also crystallized at different pHs where we observed that His acquired a gauche- rotamer that was assigned an inactive or resting state. In addition, the influence of mutation G63V in the RR OmpR was analyzed. This mutation was associated with resistance to the antibiotic ertapenem in E. coli. For this, mutants in OmpR were generated in position G63 in both the isolated REC domain and in the whole protein. Biochemical studies of this mutations showed how the mutation in this position reduced the capacity of RR to phosphorylate and even to form a dimer. This affected the affinity of the RR to interact with it's corresponding DNA, the boxes ompF and ompR. These effects were shown with the structure of the REC domain of the OmpR protein mutant G63V. This mutation generated a conformational change by reducing the Lßα3 and generating a hydrophobic pocket that trapped Val's lateral chain. Finally, the evolutive aspect of signaling was analyzed. For this, endosymbiotic organisms that had one HK or many RRs were identified. These characteristics suggested that lower selective pressure would allow us to find organisms with TCSs that showed lower KH-RR specificity. The systems of Chlamydia trachomatis, Chlamydia psittaci, Simkania negevensis, and Methanobrevibacter sp. Abm4 were analyzed. The phosphotransference reaction was only evident in the the Methanobrevigbacter system. This system presents only one KH and four RRs. This HK shows differentiated efficiency in the phosphotranference. It has a higher speed in RRMet572, RRMet589-1 and it is null in RRMet589-2. On the other hand, the HKs of C. trachomatis y S. negevensis were able to transfer in a nonselective manner the RR468 of T. maritima. This is due to the similarity between the α1 helix of the HKs with HK853. The structural approach of there systems allowed us to obtain the structure of RRMet589-1 y RRMet572, both in a non-phosphorylated state. The two structures presented large conformational differences from Lßα4. This suggests that the recognition mechanisms with KHMet and regulation are different. This supports differentiated selectivity between the RRs in this system. / Mideros Mora, C. (2021). Bases moleculares de la especificidad en el mecanismo de transducción de señal en los sistemas de dos componentes bacterianos [Tesis doctoral]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/161920

A precocidade de maturação é o principal fator de sucesso econômico do persicultor paulista, em vista desse fato existe uma demanda muito grande por novas técnicas que possibilitem a melhoria da qualidade dos frutos e uma maior precocidade na colheita. Este trabalho visa verificar a influência dos sistemas de podas e manutenção das folhas após a colheita nas reservas de carboidratos não estruturados em ramos e raízes do pessegueiro da cultivar Flordaprince,verificar a produção dessas plantas e a qualidade dos frutos em função das reservase verificar a eficiência do uso do regulador vegetal 2,4-DP (ácido diclofenoxipropiônico), em função das reservas de carboidratos solúveis existentes nas plantas, bem como seu possível efeito na qualidade dos frutos obtidos. O trabalho conduzido na Escola Superior de Agricultura "Luiz de Queiroz", em Piracicaba. O delineamento foi de blocos ao acaso, constando de 9 tratamentos e 4 repetições. Cada parcela foi composta por 4 plantas. Os dados foram submetidos as análises de variância e à comparação das médias pelo Teste de Tukey. O espaçamento adotado foi de 3,0 X 1,2 metros, correspondendo a 2777 plantas ha-1. As plantas foram conduzidas em sistema líder central, e todas receberam as práticas de irrigação, nutrição, quebra de dormência, tratamento fitossanitários, desbrotas, normalmente utilizadas. As podas foram realizadas logo após a colheita, no final de agosto de 2003, quando da ocasião da instalação do experimento. Foram coletadas amostras de raízes e ramos,que foram trituradas, secas em estufas, moídas e submetidas à análise de laboratório. Verificou-se os teores de carboidratos solúveis totais no ramo e na raiz das plantas de pessegueiro. O crescimento dos frutos apresentou a forma de uma curva sigmóide dupla. O tratamento onde não ocorreu desfolha de verão apresentou maior produção de frutos, e maior número de frutos por planta. A aplicação do regulador vegetal 2,4-DP não promoveu aumento significativo nas dimensões dos frutos, causou ainda uma queda no teor de sólidos solúveis e promoveu uma melhora na coloração dos frutos, tanto na face exposta como no fundo do fruto. Ocorreu ainda uma antecipação na colheita em cerda de 7 dias devido a aplicação do regulador vegetal. A concentração de carboidratos solúveis nas raízes e nos ramos flutuou de acordo com a época em que foram coletados, dentro do ciclo da planta, e a concentração nas raízes foi sempre superior àquela encontrada nos ramos. A poda de renovação causou uma queda na produção e um número menor de frutos por planta. / The precocity maturation is the main factor of economical success of the producing of peach from São Paulo, in view of that fact the very big demand exists goes new techniques that make possible the improvement of the quality of the fruits and the larger precocity in the crop. This work seeks to verify the influence of the systems of prunings and maintenance of the leaves after the crop in the carboidrates reservations in the structured in branches and roots of the peach tree of cultivating Flordaprince, to verify the production of those plants and the quality of the fruits in function of the reservations to verify the efficiency of the use of the vegetable regulator 2,4-DP (acid diclofenoxipropiônico), in function of the reservations of existent soluble carboidrates in the plants, as well it’s possible effect in the quality of the obtained fruits. The work was established at Escola Superior de Agricultura "Luiz of Queiroz", in Piracicaba. The experimental design used was of blocks at random, consisting of 9 treatments and 4 repetitions. Each portion was composed by 4 plants. The data were submitted the variance analyses and to the comparison of the averages for the Test of Tukey. The adopted spacing was of 3,0 X 1,2 meters, corresponding to 2777 plants hectare-1. The plants were driven in system central leader, and all received the irrigation practices, nutrition, numbness break, and treatments to keep healthy plants were maid, sprouts were removed, usually used. The prunings were accomplished soon after the crop, in the end of August of 2003, when of the occasion of the installation of the experiment. Samples of roots and branches, that were collected were triturated, droughts in greenhouses, milled and submitted to the laboratory analysis. It was verified the tenors of total soluble carboidrates in the branch and in the root of the peach tree plants. The growth of the fruits presented the form of a curve double sigmóide. The treatment where didn't happen defoliates of summer presented larger production of fruits, and larger number of fruits for plant. The application of the vegetable regulator 2,4-DP didn't promote significant increase in the dimensions of the fruits, it still caused a fall in the tenor of soluble solids and it promoted an improvement in the coloration of the fruits, in the exposed face and in the bottom of the fruit. It still happened an anticipation in the crop in bristle of 7 days due to application of the vegetable regulator. The concentration of soluble carboidrates in the roots and in the branches it floated in agreement with the time in that they were collected, inside of the cycle of the plant, and the concentration in the roots was always superior that found in the branches. The renewal pruning caused a fall in the production and a smaller number of fruits for plant.

Dentre as poucas espécies de Eucalyptus que apresentam aptidão ao cultivo em regiões de baixas temperaturas e a geadas frequentes, destacam-se genótipos de Eucalyptus benthamii que representam opções para futuros plantios florestais em diferentes regiões brasileiras. Porém, existem poucas informações quanto a obtenção de mudas clonais, e se focarmos as espécies aconselhadas para o plantio em condições subtropicais, tal carência é ainda maior, principalmente ao considerar os fatores endógenos e exógenos para o enraizamento adventício. Baseado no exposto, o presente trabalho teve como objetivo geral avaliar aspectos morfofisiológicos da clonagem de genótipos de Eucalyptus benthamii por meio das técnicas de miniestaquia e micropropagação. Para tanto, o trabalho foi dividido em quatro estudos básicos. O primeiro estudo (Capítulo 2) baseou-se na avaliação da morfofisiologia de um minijardim clonal em relação a diferentes concentrações de Zn e B ao longo de sucessivas coletas de brotações. O segundo estudo (Capítulo 3) foi baseado em avaliar o enraizamento de miniestacas quanto a diferentes concentrações de Zn e B e aplicação de AIB ao longo de sucessivas coletas de brotações. O terceiro estudo (Capítulo 4) baseou-se em avaliar a dinâmica de enraizamento de miniestacas quanto a diferentes concentrações de AIB, tempo ótimo de permanência de miniestacas enraizadas em casa de vegetação e a origem da conexão vascular da raiz emitida. Por fim, o quarto estudo (Capítulo 5) foi baseado no desenvolvimento e estabelecimento de protocolo para a micropropagação visando a produção de microcepas para formar um microjardim clonal. Em termos gerais, a sobrevivência das minicepas, produção de miniestacas por metro quadrado ao ano e os teores foliares de macro e micronutrientes variaram significativamente em relação as concentrações de Zn e B, apresentando diferentes respostas ao longo das coletas de brotações no minijardim clonal. Os teores foliares de carboidratos solúveis não estruturais variaram significativamente de acordo com as coletas de brotações e solução nutritiva, sendo que o aumento das concentrações de Zn e B na solução nutritiva induziu a redução dos teores de carboidratos solúveis não estruturais. A porcentagem de enraizamento dos materiais clonais foi baixa, sendo considerados de difícil propagação pela miniestaquia. A presença de Zn e B na solução nutritiva (concentrações variando de 1,0 a 2,0 mg L-1) associadas a presença de AIB induziram os maiores índices de enraizamento. A aplicação de AIB na concentração de 2.000 mg L-1 favoreceu a indução de raízes, e o intervalo de 35 a 42 dias foi o mais indicado para a permanência das miniestacas enraizadas em casa de vegetação. De acordo com as análises histológicas da rizogênese foi verificado que a raiz adventícia apresentou conexão direta com o câmbio vascular. A multiplicação in vitro de gemas axilares dependeu do clone, meio de cultura e concentração de regulador de crescimento e, o alongamento de brotações dependeu do clone e regulador de crescimento. O protocolo de micropropagação foi eficiente para a produção de microplantas de Eucalyptus benthamii as quais podem ser usadas para a formação de um microjardim clonal. / Few Eucalyptus species present adaptation for cultivation in regions subject to low temperatures and frequent frosts, and Eucalyptus benthamii genotypes may represent options for future forest plantations in different regions of Brazil, in view of its excellent silvicultural performance in these conditions. However, there is little information on obtaining clones, and considering the species recommended for planting in subtropical conditions, this lack of information is even greater, mainly when considering the endogenous and exogenous factors for the adventitious rooting. Based on these information, the present work was aimed the conducting of studies on morphophysiological aspects during the cloning of Eucalyptus benthamii through of the mini-cuttings and micropropagation techniques. Therefore, the work was divided into four basic studies. The first study (Chapter 2) was based in evaluate the morphophysiology of a clonal mini-garden regarding to Zn and B concentrations during successive shoot collections. The second study (Chapter 3) was based in evaluate the induction of adventitious rooting in mini-cuttings regarding to genotype, Zn and B concentrations, shoot collections and IBA application. The third study (Chapter 4) was based in evaluate the adventitious rooting percentage of selected genotypes regarding the IBA concentration, optimal time of permanence of rooted mini-cuttings in a greenhouse and the origin of the vascular connection. Finally, the fourth study (Chapter 5) was based in develop a method for cloning of selected genotypes through micropropagation technique for the formation of a clonal micro-garden. In overall terms, mini-stumps survival, mini-cuttings production per square meter per year and foliar content of macro and micronutrients varied significantly in relation to treatments, presenting different responses according to shoots collection of the clonal mini-garden. The content of soluble carbohydrates non-structural of leaves varied regarding the shoots collection and nutrient solution. The increasing of the Zn and B concentrations in the nutrient solution induced reduction of the total content of soluble carbohydrates non-structural of leaves. The adventitious rooting percentage was low, and the genotypes were considered difficult to propagation by mini-cuttings technique. The ministumps fertigated with nutrient solutions containing Zn and B (concentrations of 1.0 at 2.0 mg L-1) associated with the IBA application presented the greater adventitious rooting percentage. The IBA application in the concentration of 2,000 mg L-1 resulted in the greater speed of rooting and rooting percentage, and the interval of 35 to 42 days was the most suitable for the permanence of mini-cuttings rooted in a greenhouse. According to the histological analysis of rhizogenesis was verified that the adventitious root presented direct connection to the vascular cambium. The in vitro multiplication of axillary buds depends of the genetic material, culture medium and concentration of plant growth regulator and, the shoots elongation depends of the genetic material and plant growth regulator. The micropropagation protocol was efficient for the microplants production of Eucalyptus benthamii and can be used to form a clonal microgarden.

Este estudo qualitativo e prospectivo baseou-se em entrevistas com os principais atores do sistema de controle de produtos para a saúde no país. No total 44 profissionais participaram da pesquisa de campo, sendo: 25 representantes do setor regulado, envolvidos predominantemente em áreas de assuntos regulatórios e qualidade, atuantes em empresas do segmento médico-hospitalar, nacionais e multinacionais; 19 profissionais representando o setor regulador, alocados em Brasília ou no Estado de São Paulo, envolvidos com o processo de registro e fiscalização de produtos médicos ou de entidades que produzam, façam uso ou comercializem estes itens. Os entrevistados responderam a quatro questões de referência sobre a função do registro, seu papel na garantia da segurança e eficácia dos produtos para a saúde e a fiscalização pós-comercialização. Os procedimentos éticos vigentes (relativos à pesquisa em seres humanos - RE CNS 196/96) foram observados na condução deste estudo. Todas as entrevistas foram gravadas, assim como o consentimento livre e esclarecido verbal do respectivo entrevistado, expresso através de declaração. Posteriormente, as falas foram transcritas para a análise de opiniões sobre o controle de produtos para a saúde. Os resultados (176 discursos individuais)foram avaliados de acordo com a metodologia do discurso do sujeito coletivo. A fiscalização de boas práticas de fabricação estabelecida pela RDC nº 59/00 é percebida como importante por ambos os setores para a garantia da segurança, qualidade e da eficácia dos produtos médicos. A boa-fé não é uma crença da maioria dos entrevistados, pois há grande desconfiança sobre as informações declaradas pelo setor regulado nos processos de registro de produtos para saúde. A falta de fiscalização no mercado foi enfatizada, bem como de infraestrutura e de conhecimento do setor regulador. A atuação das autoridades sanitárias é sustentada por denúncias do próprio setor regulado. O controle pré-comercialização é visto pelo setor regulado como necessário para liberar o produto médico no mercado e como uma responsabilidade da ANVISA (Agência Nacional de Vigilância Sanitária); entretanto, este não garante a qualidade do produto para a saúde, pois é documental e não há fiscalização eficiente. Os discursos expressam que o sistema atual não cumpre com as diretrizes de vigilância sanitária preconizadas por legislação – de eliminar, diminuir ou prevenir riscos à saúde pública. Os atores deste estudo entendem que a adoção da tecnovigilância é uma boa perspectiva para melhorar o controle de produtos para saúde na pós-comercialização, contando com o comprometimento de todos os envolvidos, inclusive profissionais de saúde e usuários. / This is a qualitative and prospective study based on interviews performed with the main stakeholders of the healthcare products’ regulatory control in Brazil. A total of 44 professionals were involved in the survey: 25 were predominantly employees responsible for regulatory affairs or quality assurance areas in medical device vendors, manufacturers or distributors, including national or multinational companies; 19 were government members responsible for pre-market review and postmarketing surveillance at the vendors or hospitals, located in Brasília or in the state of São Paulo. The participants have answered to four reference questions regarding to the register role, its purpose in assuring the safety and effectiveness of a medical device and the post-market vigilance. The ethical proceedings related to clinical trials in human subjects (Brazilian law RE-CNS 196/96) were followed in the execution of this study. All interviews were recorded, as well as the spoken agreement in participating of the study. Then, the speeches were written to perform the analyses and search for the collective opinions about the medical device controls. The results (176 speeches) were evaluated according to the qualitative methodology of the subject’s collective speech. Both vendors and government participants understand the good manufacturing practices issued by the Brazilian law RDC n. 59/00 as important to maintain the medical devices safety as well as their effectiveness and quality. The majority of the stakeholders surveyed do not trust in the good faith since most of them mistrust the information declared in the register submission by the vendors. During this survey, it was reinforced that there is a lack of infrastructure and expertise in the governing bodies and not enough on-market inspecting. The health authorities often acknowledge the medical devices problems when the vendors themselves denounce. The vendors perceive the model of register as mandatory to marketing clearance under the National Agency of Sanitary Surveillance (ANVISA) responsibility. However, this procedure does not assure the quality of the medical devices as a bureaucratic process not followed by an efficient postmarketing control. The speeches express that the system in place does not guarantee the health surveillance objectives described in the Brazilian laws in accomplishment - eliminate, decrease or prevent risks to public health. The participants of this study feel that the postmarketing surveillance is the main prospective to improve the medical device control, linked with the commitment of all stakeholders, including users and health care professionals.

A Fibrose Cística (FC) é a doença autossômica recessiva mais freqüente em caucasianos e está associada, em seu amplo espectro de apresentação clínica, a mais de 1500 mutações no gene CFTR (Cystic Fibrosis Transmembrane conductance regulator). O papel de CFTR é especialmente relevante no desenvolvimento da porção reprodutiva dos ductos mesonéfricos. Em 98% dos pacientes masculinos portadores da FC, mutações em CFTR são responsáveis pela ausência bilateral congênita dos ductos deferentes (CBAVD), associada à anomalias variáveis das vesículas seminais, ductos ejaculatórios e da porção distal dos epidídimos. A ausência uni ou bilateral congênita dos ductos deferentes (CAVD), na ausência de outros sinais clínicos de FC, é conhecida causa de infertilidade masculina, presente em 1%-2% de todos os homens inférteis, e em cerca de 10% dos azoospérmicos. A reprodução assistida utilizando a injeção intracitoplasmática de espermatozóides (ICSI) obtidos preferencialmente por aspiração microcirurgica de espermatozóides do epidídimo (MESA) permite a paternidade biológica a esses pacientes. Em função da alta morbi-mortalidade da FC e da alta freqüência de portadores assintomáticos, estimada em 1:25, é recomendável que seja realizado teste para identificação de mutações em CFTR em todos os pacientes com CAVD antes de serem submetidos à ICSI. Em populações de etnia homogênea, a mutação F508 é identificada em 90% dos pacientes com FC e em 70% a 85% dos pacientes com CAVD. No Brasil, onde diferenças étnicas refletem a heterogeneidade genética, a freqüência da mutação F508 varia entre 23% e 50% em paciente com FC indicando que outras mutações devam estar envolvidas. Este dado levou ao estudo completo do gene CFTR de 20 homens inférteis com CAVD visando a identificação das mutações mais prevalentes em nossa população. Foram identificadas mutações em 17 pacientes (85%): três DF508 representando 15% (3/20), uma G542X, uma 875+1G>A e 4 mutações ainda não descritas na literatura, a S753R, G149W identificada em dois irmãos, V580F e a 712-1G>T. A variação no trato polipirimidínico em IVS8 (alelo 5T), seja como segunda mutação ou presente em homozigose, está diretamente relacionada com a CAVD, com freqüências em população caucasiana masculina infértil variando entre 21% e 30%. No presente estudo, 15 (15/20=75%) pacientes apresentaram o alelo a variante alélica 5T sendo que em 8 pacientes essa variante alélica foi identificada em heterozigose composta com outra mutação. Anomalias renais foram identificadas em 6 pacientes, todos com CBAVD. O presente estudo pode correlacionar o fenótipo da CAVD a alterações no genótipo de CFTR em 100% dos pacientes investigados / Cystic Fibrosis (CF) is the most common autosomal recessive disorder in caucasians and is associated, in an wide variety of different clinical manifestatons. More than 1500 mutations in the CFTR gene (Cystic Fibrosis regulator Transmembrane conductance) have been described and an even growing number of mutations are being currently studied worldwide. The role of CFTR gene is especially important in reproductive tissues of the mesonephric tract sensitive to the expression of the CFTR gene. The great majority of infertile males with CF (98%) have clinical manifestations and mutations in CFTR are responsible for the congenital bilateral absence of the vas deferens (CBAVD), associated to the abnormalities of the seminal vesicles, ejaculatory ducts and/or the distal portion of the epididymis. The congenital absence, uni or bilateral, of the vas deferens (CAVD), in the absence of other clinical signals of CF is a known cause of male infertility present in 1%-2% of all men investigated and in about 10% of men with obstructive azoospermia. Serious considerations should be drawn about the lack of proper diagnosis of infetile males with CFTR that seek reproductive clinics for assisted reproductive techniques (ARTs), as well as the lack of proper consideratins of the existance of this disease as a potential cause of male infetility among male are takers, like urologistas, andrologistas and gynecologists that rush for the misuse of ARTs. The introduction of Intracytoplasmic Sperm Injection (ICSI), has given new reproductive potetntial for these couples, but again as in the majority of cases it is obstructive azoospermia, couples should be advised about proper microsurgical sperm retrieval, preferentialy microsurgical epydidymal sperm aspiration (MESA). As a consequence of the potential high mortality rate of the CF descendents and the high frequency of carriers, estimated in 1:25,it is highly recommended that tests for correct identification of mutations in CFTR gene are carried out for all patients with CAVD before considered being submitted to ICSI. In populations of homogeneous ethnic origin, the mutation F508 is identified in 90% of the patients with CF and between 70% and 85% of the patients with CAVD. In Brazil, where ethnic differences reflect the genetic heterogeneity, the frequency of the mutation in F508 varies between 23% and 50%, indicating that other mutations must have a role. Our data looked carefully in the CFTR gene of 20 infertile men with CAVD aiming at the identification of the most prevalent mutations in our population. Mutations had been identified in 17 patients (85%): three DF508 representing 15% (3/20), one G542X, one 875+1G>A and 4 mutations not yet described in literature, S753R, G149W identified in two brothers, V580F and 712-1G>T. In the literature the allelic variant in IVS8 (allele 5T), either as a second mutation or in homozygosis, is directly related with the CAVD, with reported frequencies in the infertile caucasian male population varying between 21% and 30%. In the present study, 15 (15/20=75%) patients presented the CFTR mutation in the IVS8/5T: eight of them in heterozygosis composed with another mutation. Regarding genitourinary tract malformations, kidney anomalies were identified in 6 patients, all with CBAVD. In the present study we could correlationate the phenotype of the CAVD with the genotype alterations of CFTR gene in 100% of the investigated patients