O carcinoma do colo uterino é um dos tumores mais freqüentes entre as mulheres e o principal fator de risco para o desenvolvimento desta neoplasia é a infecção persistente por tipos de papilomavírus humano (HPV) de alto risco oncogênico. Dentre estes, o HPV-16 é o mais comumente encontrado em lesões de alto grau e carcinoma. HPV cujas seqüências nucleotídicas diferem em até 2% são classificados como variantes de um mesmo tipo, e algumas destas variações genômicas levam a mudanças de aminoácidos em proteínas virais, em regiões potencialmente antigênicas. Além de variações antigênicas, o polimorfismo das moléculas HLA de classe II, responsáveis pela apresentação de antígenos às células T, também pode influenciar a resposta imune. Alguns estudos já descreveram associações entre alelos HLA e risco de câncer do colo do útero e infecção pelo HPV. Este projeto visa avaliar se existem diferenças na distribuição de alelos HLA entre pacientes com carcinoma do colo uterino portadoras de diferentes variantes de HPV-16 e mulheres sem câncer. Foram utilizados 112 casos de carcinoma do colo do útero positivos para presença de DNA de HPV-16 e 257 controles. Em todas as amostras do estudo foram realizadas as tipagens dos genes HLA-DRB1 e DQB1. A caracterização dos genes E6 e L1 de variantes de HPV-16 foi realizada nos 112 casos através de PCR-SSO e permitiu a identificação de infecções por uma única variante de HPV-16 em 89 amostras. Dentre elas foram encontradas variantes européias, asiático-americanas e africanas. A magnitude da associação entre os grupos HLA e as variantes de HPV-16 foi estimada através do cálculo de Odds Ratio e respectivo intervalo de confiança de 95%. Uma associação negativa entre DQB1*05 e câncer do colo do útero portadores de HPV-16 foi descrita anteriormente nesta amostra. Nosso estudo mostrou que esta associação pode ser atribuída as portadoras de variantes não-européias. A associação positiva de DRB1*15 mostrou ser maior entre portadoras de variantes européias que nãoeuropéias. Apesar do pequeno número de casos portadores de variantes africanas, foram encontradas associações positivas com DRB1*0701 e DQB1*0201. O polimorfismo da posição 350 do gene E6, descrito anteriormente como associado a risco de persistência de HPV, também foi avaliado: entre portadores de 350T, que codifica o aminoácido leucina, encontrou-se um efeito protetor dos alelos DRB1*04 e DQB1*0302. Uma maior freqüência de DRB1*15 foi observada entre portadores de variantes 350T quando comparada à freqüência nos controles. Nossos resultados sugerem que a associação entre alelos HLA de classe II e risco de câncer do colo do útero é influenciada pela distribuição de variantes de HPV-16 numa população determinada. / Cervical cancer is one of the most frequent tumor among women and the major risk factor for the development of this neoplasia is persistent infection with high risk oncogenic types of human papillomavirus (HPV). Among these, HPV-16 is the commonest type found in high grade lesions and carcinoma. HPV with less than 2% of divergence in nucleotide sequence are classified as variants of a given type, and these genomic variations can lead to changes in potentially antigenic regions. Besides these antigenic variations, polymorphism of HLA class li molecules, responsible for antigen presentation to T cells, can also influence the immune response. Several studies showed associations between HLA class II polymorphism and risk of cervical cancer and HPV infection. The aim of this study is to investigate if there are differences in the HLA class II alleles distribution between women with invasive cervical cancer (ICC) that harbor different HPV-16 variant and women without cancer. We analyzed 112 HPV-16 positive cases of cervical carcinoma and 257 controls. AII the samples had their HLA-DRB1 and DQB1 genes previously typed. HPV-16 variants in 112 ICC samples were characterized for E6 and L1 genes by PCR-SSO and allowed the identification of infections by single variants in 89 samples. European, Asian-American and African variants were found. The magnitude of association between HLA markers and HPV-16 variants was measured by Odds Ratios (OR) and respective 95% confidence intervals (CI). A negative association between DQB1*05 and HPV-16 positive ICC was previously described in this sample. Our study showed that it may be attributed to non-European variants carriers. The positive association of DRB1*15 was higher for women harboring European than non-European variants. In spite of the small number of women carrying African variants, positive association was found with DRB1*0701-DQB1*0201. The E6 gene polymorphism at residue 350, previously described as associated with risk of HPV persistence, was also investigated: among ICC carrying 350T, that code for leucine, we found a protective effect of DRB1*04-DQB1 *0302 haplotype. A higher frequency of DRB1*15 was found among carriers of 350T variants as compared to controls. Our results suggest that the association between HLA class II polymorphism and risk of invasive cervical cancer is influenced by the distribution of HPV-16 variants in a given population.

A endometriose (EDT) é caracterizada pela presença de tecido endometrial fora da cavidade uterina, e afeta mulheres em idade reprodutiva. Postulamos que alterações na frequência de células T reguladoras (Treg), natural killer (NK), supressoras mielóides (MDSC) e dendríticas (DC) no peritônio justificariam a redução da capacidade do sistema imune de reagir contra as células endometriais, permitindo sua implantação em locais ectópicos. Aqui, células Treg, NK, MDSC e DC foram quantificadas no fluido peritoneal (FP) e sangue de mulheres com EDT, a fim de associa-las ao desenvolvimento da doença; níveis de citocinas também foram avaliados. Na EDT, observou-se aumento na frequência de Treg, MDSC e DC no sangue e aparente redução destas no FP; ainda, a concentração de IL-12 foi menor no sangue comparadas ao grupo controle. Não foram observadas diferenças quanto às células NK e as outras citocinas analisadas. Os resultados indicam aumento da frequência de populações reguladoras em amostras de sangue de pacientes EDT, entretanto esses resultados não são refletidos no FP. / Endometriosis (EDT) is a gynecological disease characterized by the presence of endometrial cells out of the uterine cavity, which affects women in reproductive age. We postulated that alterations in the frequencies of regulatory T cells (Treg), natural killer cells (NK), myeloid-derived suppressor cells (MDSC) and dendritic cells (DC) in the peritoneum could justify the reduced capacity of the immune system to react to these ectopic endometrial cells, allowing them to invade distant tissues. Here, Treg, NK, MDSC and DC were quantified in the peritoneal fluid (PF) and peripheral blood (PB) of women with EDT, in order to associate them with the development of EDT; cytokine levels were also assessed. In EDT, higher frequencies of Treg, MDSC and DC in the PB and apparent lower frequencies of these cells in the PF were observed; IL-12 concentration was smaller in PB of EDT compared to control. No differences between groups were observed for NK cells and the other cytokines evaluated. The results indicate higher frequencies of regulatory cells in PB samples of EDT patients, although these findings were not reflected in PF samples.

A exposição limitada ao Plasmodium chabaudi induz proeminente imunidade celular, associada à proteção de células T da apoptose. Este estudo tem como objetivo verificar a influência da carga parasitária na geração e manutenção dos linfócitos T e B de memória ao P. chabaudi. Assim, camundongos C57BL/6 foram submetidos à infecção tratada (subpatente) ou não (patente) com cloroquina após a inoculação de 106 eritrócitos parasitados (EP) e analisados nos dias 0, 20, 60, 120 e 200. Com relação à memória de linfócitos T, no dia 20, as freqüências de células CD4+ memória/ativadas e respondedoras aos EP foram significativamente maiores nos animais do grupo subpatente. Os níveis máximos de IgG2a específica foram encontrados no dia 120 em ambos os grupos. O desafio dos animais com 108 EP mostrou que a imunidade protetora declina progressivamente, mas os grupos ainda são capazes de estabelecer resposta secundária eficiente que elimine o parasita. Assim, podemos concluir que a carga parasitária influencia a fase aguda, mas não impede a geração e manutenção das células T e B de memória. / One of the main characteristics of malaria is the intense policlonal activation of splenic T and B lymphocytes induced by the parasite and the consequent elimination, through apoptosis, of part of these cells. However, the limited exposure to the bloodstage malaria seems to induce a prominent cellular immunity, associated with the protection of T lymphocytes from apoptosis. With this in mind, this study aimed to verify the influence of the parasite load in the generation and maintenance of memory T and B cells specific for Plasmodium chabaudi chabaudi AS. In order to evaluate this idea, C57BL/6 mice were infected with 106 parasitized red blood cells (pRBC) and submitted to a patent (untreated) or subpatent infection (controlled with sub-curative doses of chloroquine every time parasitemia reached 1%). Splenocytes from these mice were analyzed at 20, 60, 120 and 200 days after infection, regarding the pRBC-specific T cell proliferation and the expression of surface molecules, as CD4, CD8, CD62L, CD45RB, CD44, CD45R-B220 and IgG. The parasitemia and the splenocyte phenotype were also monitored after the challenge with 108 pRBC. Regarding T cell memory, at day 20 of infection, the frequencies of effector/activated CD4+ T cells (CD62LLOW CD45RBLOW/HIGH) were significantly increased in animals from the patent group, which was strict linked with the highest cellular activation observed in these animals. On the other hand, the total numbers of pRBCproliferating T (CD4+ and CD8+) cells per spleen were approximately 3-fold increased in subpatent animals, indicating that these cells were protected from apoptosis as a result of the limited exposure to the parasite. However, in both groups, these parameters decreased to values similar to those in controls at day 200. The splenocytes from both groups produced Th1 cytokines in response to pRBC in all times of analysis, but at the early phase of infection, Th2 cytokines were also observed, but without differences between the infected groups. Regarding memory B cells, the frequency of sIgG+ cells was increased at day 20 of infection, when 11% and 9% of CD45R+ cells from patent and subpatent animals were positive, respectively. For both groups, specific IgG2a antibodies attained maximum serum levels at day 120, but at day 200, it is possible to observe a significant decrease of these levels only in the serum of patent mice. Moreover, at day 200 of infection, mice of subpatent group showed significantly higher amounts of IgG2a that recognized the intra-erythrocytic forms of the parasite and the surface of infected erythrocytes. Challenge of mice with 108 pRBC showed that protective immunity progressively decline with time and despite the higher levels of specific antibody in subpatent mice, both groups showed similar protection. In experiments of adoptive transference to CD28-/- mice, cells from 200-day infected mice were able to produce specific IgG2a antibodies, in a T CD4+ cell dependent way. In addition, we verified that CD45R+ cells of subpatent mice, when transferred to CD28-/- mice, secreted higher amounts of specific IgG2a and IgG1 antibodies, comparing to cells of patent mice. So, from this work, we can conclude that the parasite load has a great influence in the early immune response to P. chabaudi malaria and it also affects the generation and/or maintenance of memory B cells. Furthermore, according to our data, at least during the analyzed period, the loss of protective immunity against this parasite does not seem to be influenced by the acute-phase parasite load, but it can be a consequence of the progressive decline of T-cell memory response that occurs in patent and subpatent groups with time of infection.

Submitted by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2013-06-03T19:14:07Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Tese_CaracterizacaoRespostaImune.pdf: 1244558 bytes, checksum: c43d999fb552fb479140d57b56fda3a4 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva(arosa@ufpa.br) on 2013-06-04T14:13:21Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Tese_CaracterizacaoRespostaImune.pdf: 1244558 bytes, checksum: c43d999fb552fb479140d57b56fda3a4 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-06-04T14:13:21Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Tese_CaracterizacaoRespostaImune.pdf: 1244558 bytes, checksum: c43d999fb552fb479140d57b56fda3a4 (MD5) Previous issue date: 2011 / IEC - Instituto Evandro Chagas / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A tese aqui apresentada trata-se do primeiro estudo em nível mundial que pesquisa e caracteriza a resposta imune citocínica em infecções humanas pelo Orthobunyavirus Oropuche. Como metodologia para o alcance dos objetivos aqui apresentados foi utilizado um total de 320 amostras de soros humanos, onde 60 destas foram provenientes de Banco de Sangue (Controle negativo) e 260 foram obtidas mediante dois surtos do Vírus Oropouche nos Estados do Pará e Amapá (Brasil), sendo estas últimas divididas em oito subgrupos para obtenção dos dados com exatidão. Nas amostras coletadas foram realizadas análises dos dados clínicos/sintomatologia através dos prontuários, dados sorológicos através da titulação de anticorpos por Inibição da Hemaglutinação (IgM/IgG) e detecção do nível de citocinas plasmáticas por citometria de fluxo a qual permitiu a descrição técnica da dosagem de citocinas possibilitando ainda a análise de frequência de baixos e altos produtores de citocina. Os dados obtidos permitiram observar as variáveis e o comportamento das assinaturas de citocinas expressas pelos pacientes mediante a confirmação sorológica do vírus, bem como o comportamento destes analitos séricos quando da presença de sintomas específicos como febre, calafrios, cefaléia e tontura, permitindo assim que se chegasse à conclusão que a) existe um padrão na síntese de citocinas pró-inflamatórias e reguladoras; b) observa-se um balanço no perfil da resposta imune entre citocinas pró-inflamatórias (Th1) e moduladoras (Th17); c) a infecção pelo Vírus Oropouche altera a produção das citocinas nos indivíduos; d) os resultados mostram também que ao comparar os indivíduos Não respondedores com os Respondedores precoces, houve aumento da IL-1β e diminuição da IL-12; Não respondedores com Respondedores tardios, houve diminuição da IL-8, e aumento da IFN-α, IL-23 e IL-17; Não respondedores comparados com Respondedores precoces ocorreram o aumento de IL-4 e IFN-; Já quando comparado Respondedores precoces e respondedores tardios houve diminuição de IFN-α e IL-6; Respondedores precoces de forma geral apresentaram diminuição da IL-10 e Respondedores tardios apresentaram aumento da IL-5; e) Os resultados mostram ainda a expressão de IL-5 em pacientes que manifestaram os sintomas específicos para a infecção pelo Oropouche (febre, calafrios, cefaléia e tontura), sugerindo este sinal estar associado diretamente à patogênese do vírus; f) há a necessidade da complementação desta pesquisa com mais estudos como àqueles relacionados com a expressão de quimiocinas. / This thesis is the first global study that researches and analyzes the immune response of cytokine in human infections by Orthobunyavirus Oropuche virus. The study used 320 samples of human serum. Sixty were from the Blood Bank (negative control) and 260 were obtained from two outbreaks of the Oropouche virus in the State of Pará and Amapá (Brazil). The latter was divided into 8 subgroups for better data accuracy. The collected samples were analyzed for clinical data/symptoms with serologic testing by titration of antibodies by the hemagglutination inhibition (IgM/IgG) and the detection cytokines plasma levels by flow cytometry. This allowed for the technical description of cytokine. The data obtained allowed for the observation of the characteristics and the behavior of the cytokines signatures expressed by patients by the presence or not of the virus. This also allowed for the observation of changes to serum through the presence of specific symptoms such as fever, chills, headache and dizziness. This led to the following conclusions a) there is a pattern in the synthesis of pro-inflammatory and regulatory cytokines; b) there is a balance in the profile of the immune response between pro-inflammatory cytokines (Th1) and modulators (Th17); c) an infection by the Oropouche virus alters the production of cytokines in individuals; d) the results also show that whem comparing individuals no responders with early responders, there was an increase of IL-1β and decreased IL- 12; no responders with late responders, there was a decrease of IL-8, and increased IFN-α, IL-23 and IL-17; No responders occurred early responders compared with the increase IL-4 and IFN-g; However, when compared early responders and late responders, decreased IFN-α and IL-6; early responders generally showed a decrease in IL-10 and late responders showed an increase in IL-5; e) The results also show the expression of IL-5 in patients who showed symptoms specific for Oropouche infection (fever, chills, headache and dizziness), suggesting this signal to be directly associated with pathogenesis of the virus; f) there is a need to complement this research with more studies such as those related to the expression of chemokines.

Foram imunizados 27 macacos-prego (Cebus apella), por via intramuscular, com vacina anti-rábica inativada, produzida a partir de cérebros de camundongos lactentes (VARCCL), empregada nas campanhas de prevenção da raiva animal de cães e gatos. Os animais permaneceram em cativeiro, durante o período de junho de 1995 a junho de 1997, sendo divididos em 3 grupos experimentais e vacinados conforme o esquema: grupo I, com 3 doses a intervalo de 30 dias; o II, com 2 doses a intervalo 30 dias e reforço aos 210 dias; e, o III com uma dose e reforço aos 210 dias. A revacinação anual foi realizada em todos os animais aos 365 dias. As amostras de soros foram obtidas aos 0, 30, 60, 90, 150, 210, 240, 300, 365, 395, 545 e 730 dias, e armazenadas à temperatura de -20ºC, e a dosagem dos anticorpos realizada através do teste simplificado da inibição da fluorescência. Verificou-se que os animais do grupo I apresentaram soroconversão mais duradoura (12232 dias) do que os dos grupos II e III (p<0,05) após a vacinação inicial, e os animais do grupo I apresentaram soroconversão mais duradoura (183,6120,6 dias) do que os dos grupos II (p<0,05), após a revacinação anual aos 365 dias. A VARCCL induziu a resposta imune nos macacos-prego, após vacinação e revacinação, respectivamente, em 81,4 por cento e 76,0 por cento dos animais; com produção de anticorpos neutralizantes, iguais ou superiores a 0,5 UI/ml, porém, de curta duração; não constituindo assim, imunógeno apropriado para ser utilizado na rotina de imunização destes animais de difícil lide, mantidos em cativeiro / Twenty-seven capuchin monkeys (Cebus apella) were intramuscularly immunized with inactivated suckling mouse brain rabies vaccine (SMBV) employed in campaigns for animal rabies prevention in dogs and cats. The animals were kept confined from June, 1995 to June, 1997. They were divided into 3 experimental groups and vaccinated according to the following scheme: group I, with 3 doses within a 30-day interval; group II, with 2 doses within a 30-day interval and a booster dose at the 210th day; and, group III; with a single dose and a booster dose at the 210th day. All animals were given the annual re-vaccination at the 365th day. Sera samples were obtained at the 0th, 30 th, 60th, 90 th, 150 th, 210 th, 240 th, 300 th, 365 th, 395 th, 545 th e 730 th days and kept stored at 20ºC. The antibodies dosage was carried out through the simplified inhibition fluorescent test. The following results were observed: animals belonging to group I had longer humoral immune response (12232 days) than the ones belonging either to group II or group III (p<0.05) after initial vaccination; animals of group I presented longer humoral immune response (183.6120.6 days) than the ones of the group II (p<0.05) after the annual re-vaccination at the 365th day. The SMBV induced humoral immune response in capuchin monkeys after vaccination and re-vaccination in respectively 81.4 per cent and 76.0 per cent of the animals, producing neutralizing antibodies equal to or higher than 0.5 IU/ml; however, they were short-lasting, being therefore not appropriate as an immunogen to be used routinely in the immunization of these animals which are difficult both to be deal with and to be held confined

Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-05-15T11:31:56Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_RespostaImuneHumoral.PDF: 1103336 bytes, checksum: f20142b1495f0855c37bd778d9a9dda5 (MD5) / Approved for entry into archive by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2017-05-16T17:13:52Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_RespostaImuneHumoral.PDF: 1103336 bytes, checksum: f20142b1495f0855c37bd778d9a9dda5 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-16T17:13:52Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_RespostaImuneHumoral.PDF: 1103336 bytes, checksum: f20142b1495f0855c37bd778d9a9dda5 (MD5) Previous issue date: 2013-08-31 / A brucelose está distribuída em todo território nacional, com maior prevalência para a espécie Brucella abortus que apesar de ser endêmica, apresenta-se de forma heterogênea entre as diferentes regiões do Brasil. O presente estudo tem por objetivo avaliar a resposta imune humoral de bezerras bubalinas criadas na Mesorregião do Médio Amazonas, vacinadas com a cepa B19 de B. abortus na idade preconizada pelo Programa Nacional de Controle e Erradicação da Brucelose e Tuberculose (PNCEBT). Foram selecionadas e acompanhadas 36 fêmeas (grupo teste) e 6 machos (grupo controle) com idades entre 3-8 meses. No dia 0 foi coletado sangue de todos os animais, em seguida todas as fêmeas receberam vacina comercial com amostra B19 em dose padrão conforme orienta o PNCEBT, com posteriores coletas de sangue realizadas aos 30, 60, 90, 120, 150, 180, 210, 330, 360 e 390 dias. Os soros sanguíneos foram avaliados pelo soro aglutinação das provas de triagem: Antígeno Acidificado Tamponado - AAT e pela prova confirmatória: 2 Mercaptoetanol - 2ME. Os resultados obtidos para todas as amostras coletas no dia 0 apresentaram resultado negativo na reação. Aos 30 e 60 dias todas as fêmeas apresentaram 100% de reação na prova AAT e titulação de 1:200, iniciando o declínio da titulação aos 90 dias nas duas provas. Aos 210 dias as fêmeas ainda reagentes apresentaram resultados similares nas duas provas, tendo apenas um animal se mantido reativo nas duas provas até 360 dias e, somente aos 390 dias 100% das fêmeas obtiveram reação negativa nas duas provas, durante todo o experimento os machos foram não reativos. Assim, pela avaliação dos resultados, a vacinação mostrou-se eficaz para a imunização, sendo uma ferramenta importante na profilaxia da brucelose na espécie estudada, bem como as provas aplicadas para o diagnostico dessa enfermidade em búfalos a nível regional. / Brucellosis is spread throughout the country, with the highest prevalence for the strain Brucella abortus that despite being endemic presents unevenly among different regions of Brazil. This study aims to evaluate the humoral and immune response of buffalo calves raised in the Middle Amazon Mesoregion, Pará state, vaccinated with B19 strain of B. abortus according the age recommended by the National Program for the Control and Eradication of Brucellosis and Tuberculosis (PNCEBT). Thirty-six female (test group) and six males (control group) aged 3-8 months were selected and monitored. On day 0 of the experiment, blood was collected from all animals, then all females received commercial vaccine with standard-dose sample B19 as recommended by PNCEBT with subsequent blood samples were taken at 30, 60, 90, 120, 150, 180, 210, 330, 360 and 390 days, respectively. The blood serums were evaluated for evidence of agglutination screening through Buffered Acidified Antigen - AAT and the confirmatory test through 2 Mercaptoethanol - 2ME. The results for all samples collected on day 0 were negative in the reaction, however at 30 and 60 days all females were 100% positive through test reaction AAT and titration 1:200, starting the decline through the titration at 90 days in both events. Females at 210 days still present reagents with similar results in both tests, however only one animal remained reactive in both tests up to 360 days. After 390 days of the begin of the experiment 100% of the females had a negative reaction in both events and throughout the experiment males were negative. Thus, by the evaluation of results, vaccination was effective for immunization, as well as an important tool in the prophylaxis of brucellosis in the species studied, as well as the tests applied to the diagnosis of this disease in buffaloes species at regional level.

A doença do enxerto contra o hospedeiro (DECH) é uma das maiores causas de mortalidade e morbidade pós-transplante de células-tronco hematopoiéticas. A DECH, em sua manifestação crônica (DECHc), ainda não tem sua fisiopatologia totalmente esclarecida; entretanto, o envolvimento do sistema imunológico, por meio de respostas imunes inatas e adaptativas é bem estabelecido na literatura. A DECHc afeta múltiplos órgãos, incluindo as glândulas salivares, o que tem, como causa imediata, a xerostomia. Essas alterações são largamente desconhecidas e sub-relatadas. Assim, esse estudo indagou se o sintoma de xerostomia na DECHc é decorrente de alterações morfológicas e funcionais das glândulas salivares. Para responder essa pergunta analisamos de forma qualitativa e por meio da morfometria, espécimes de biopsias de glândulas salivares labiais de pacientes com DECHc e com sintoma de xerostomia. Foram utilizados como controles, espécimes de biopsias de glândulas salivares de pacientes diagnosticados com Síndrome de Sjögren (SSp) (que é um modelo clássico de xerostomia) e de pacientes com líquen plano oral (LPO) (cujas manifestações clínicas orais podem se assemelhar às da DECHc) e queixa de xerostomia. Também foram analisadas, por meio de ensaio multiplex, as citocinas relacionadas à resposta imune Th17 (importante via imunológica na patogenia da DECHc) na saliva de 21 pacientes de DECHc, 27 de SSp, 10 de LPO e 15 voluntários saudáveis. Os principais achados morfológicos nas glândulas salivares dos pacientes de DECHc foram a extensa fibrose, fibroplasia periductal, atrofia ductal e acinar; alterações vasculares representadas pela congestão e formação de trombos hialinos; e infiltrado inflamatório intersticial difuso de aspecto leve a moderado. As glândulas salivares de SSp, entretanto, apresentaram um infiltrado inflamatório na forma de focos de linfócitos ao redor dos ductos excretores de intensidade moderada a severa; os ductos excretores apresentaram-se atróficos, ectásicos, exibindo metaplasia oncocítica e fibroplasia periductal; as alterações vasculares, por sua vez, se apresentaram em maior proporção na forma de vasculite. No LPO as alterações teciduais foram menos intensas. Quando analisadas as concentrações das citocinas, na DECHc, foram encontradas maiores concentrações de IL-17A, IL-4, IL-17F e IL-10, em relação aos grupos controles, essas citocinas estão envolvidas em mecanismos prófibróticos, o que permitiu a correlação dessa expressão aos eventos escleróticos nas glândulas salivares dos pacientes de DECHc. Entre elas, a IL-17F apresentou uma tendência de aumento em relação a proporção da área de fibrose nas glândulas salivares destes pacientes. A CD40L, que também esteve presente em maior concentração nos pacientes de DECHc, é uma molécula de ligação capaz de amplificar a resposta imunológica no mecanismo de rejeição do enxerto no hospedeiro, além de regular o mecanismo de apoptose e ativar o endotélio para a formação de trombos. As citocinas IL-31, IL-23 e IL-22, também apresentaram relevância na saliva dos pacientes de DECHc, sendo participantes do mecanismo das alterações liquenóides no LPO. Através das análises comparativas foi possível correlacionar a presença de citocinas envolvidas na resposta Th17 com as alterações glandulares e consequente xerostomia nos pacientes de DECHc. / The graft versus host disease (GVHD) is one of the biggest causes of mortality and morbidity after hematopoietic stem cells transplantation. The pathophysiology in the chronical manifestation of the disease (cGVHD), is not entirely elucidated, however the involvement of the immunological system, by means of the innate and adaptive responses are depicted in the literature concerning the disease development. The cGVHD affects multiple organs, including the salivary glands, leading to xerostomia. These alterations are under reported and mostly unknown. Therefore, this study investigated if the symptom of xerostomia in cGVHD is triggered by functional e morphological changes in minor salivary glands. To answer this inquiry specimens of biopsied labial salivary glands from patients of cGVHD and xerostomia were analyzed qualitatively and through morphometry. Specimens of biopsied salivary glands from patients with Sjögren\'s Syndrome (SS) (which is a classic model of xerostomia) and from patients with oral lichen planus (OLP) (whose clinical oral manifestations resemble the cGVHD lesions) were used as controls. Also, the cytokines related to the immunological response Th17 (important immune pathway in cGVHD pathophysiology) in the saliva of 21 cGVHD patients, 27 of SS, 10 patients of OLP and 165 healthy individuals were analyzed using the multiplex assay. The major morphological findings revealed on the salivary glands of cGVHD patients were the extensive fibrosis, periductal fibrosis, ductal and acinar atrophy. Congestion and hyaline thrombi formation were the most important vascular changes shown among these specimens. A diffuse interstitial inflammatory infiltrate was observed, with varied intensity. The SS salivary glands, however, portrayed a focal inflammatory infiltrate, with moderate to severe intensity around the excretory ducts. These ducts exhibited atrophy, ectasia, periductal fibrosis and oncocytic metaplasia. The main vascular change presented in these patients was the manifestation of vasculitis. The salivary glands from the OLP patients showed a lesser amount of alterations. The multiplex assay revealed a higher concentration of the cytokines IL-17A, IL-4, IL-17F and IL-10 in the cGVHD samples, when compared to the other groups. These cytokines are involved within the promotion of fibrosis, which endorsed the association of these secretions with the salivary glands sclerotic mechanisms. The secretion of CD40L was higher in cGVHD samples; this membrane protein is capable of amplifying the immunological response in graft rejection, besides the capacity to regulate apoptosis and activate the endothelium in thrombi formation. The cytokines IL-31, IL-23 and IL-22, also presented a higher concentration in cGHVD patients\' saliva, these secretions are actively involved in the mechanisms of lichenoid lesions in OLP, corroborating the perceived morphological changes. The comparative analysis of the morphological and salivary changes in cGVHD confirmed the correlation of Th17 immunological response within the minor salivary glands injuries and consequent xerostomia in these patients.

Submitted by Anderson Silva (avargas@icict.fiocruz.br) on 2012-05-25T16:58:53Z No. of bitstreams: 1 carolina_r_oliveira_ioc_pb_0015_2010.pdf: 3062249 bytes, checksum: d10c05b137f114e42d406ad40e28433a (MD5) / Made available in DSpace on 2012-05-25T16:58:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 carolina_r_oliveira_ioc_pb_0015_2010.pdf: 3062249 bytes, checksum: d10c05b137f114e42d406ad40e28433a (MD5) Previous issue date: 2010 / Fundação Oswaldo Cruz e CNPQ / Universidade Estácio de Sá. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A malária continua sendo uma das doenças parasitárias mais importantes do mundo, sendo responsável por 300-500 milhões de casos por ano. A resistência dos plasmódios aos medicamentos antimaláricos e dos vetores aos inseticidas agrava ainda mais a situação. Neste contexto, o desenvolvimento de novos métodos terapêuticos e profiláticos é de suma importância. Apesar dos esforços, uma vacina eficaz ainda não foi desenvolvida. Atualmente sabe-se que a resposta imune antiplasmódio pode ser responsável pela proteção e patogênese da doença. Porém, os mecanismos envolvidos na imunidade protetora e/ou patológica ainda não estão esclarecidos. Assim sendo, o presente trabalho objetiva avaliar as alterações hematológicas e o perfil imunofenotípico de células mononucleares de sangue periférico de indivíduos naturalmente infectados por P. vivax (n=47) ou por P. falciparum (n=24) provenientes de área endêmica brasileira (PV-RO), na fase aguda e de convalescença. Para isso, sangue dos voluntários foi coletado para realização do exame parasitológico, do hemograma completo e para obtenção de células mononucleadas para a avaliação do perfil imunofenotípico através de citometria de fluxo. As populações alvo incluíram células CD4 +, CD8+, linfócitos T, Tγδ, células CD3- e subpopulações produtoras de diferentes citocinas (IFN-γ, TNF-α, IL-2, IL-4, IL-10); células NK, NKT e subpopulações (CD4+ e CD8+); células B e subpopulações (incluindo populações produtoras de TGF-β). Na fase aguda, pacientes com malária vivax e falciparum apresentaram plaquetopenia, leucopenia e aumento no número de bastões e também apresentaram um aumento no percentual de células CD4+CD8- e redução no percentual de células B CD5-CD11b-. Pacientes com P. vivax apresentaram aumento no percentual de: células CD4+, CD8+, TCRγδ+ e CD3- produtoras de TNF-α; células CD8 ativadas, células T e células CD3- produtoras de IL-10; células B expressando TGF-β. Nos indivíduos infectados por P. falciparum foi observado um aumento de células T TNF-α+ e redução de células T citotóxicas. Na fase de convalescença, os dois grupos apresentaram redução de células Tγδ e CD3- produtoras de TNF-α; células CD3-IL-2+; células CD3-IL-10+. Apenas os indivíduos infectados com P. vivax apresentaram redução de CD4+CD8-; células B CD5+CD11b-; células CD8+ produtoras de TNF-α e de TNF-α e IFN-γ de forma simultânea; além do aumento de células B CD5-CD11b-. Tanto o pacientes com P. falciparum quanto com o P. vivax apresentaram significante diminuição no número de linfócitos e apenas algumas subpopulações celulares circulantes se encontravam alteradas. Entretanto, alterações significativas no perfil de expressão de citocinas foram observadas principalmente nos pacientes com P. vivax. Dentro desse contexto, na fase aguda da malária por P. vivax houve aumento tanto no percentual de células com marcação para citocinas do tipo 1 quanto para citocinas do tipo 2. Como todos os pacientes incluídos no trabalho apresentaram malária não complicada, pode-se supor que o mais importante no controle da gravidade da doença é justamente o balanço entre resposta pró e anti-inflamatória. / Malaria remains one of the most important parasitic diseases in the world, being responsible for 300-500 millions cases annually. The resistance of Plasmodium to antimalarial drugs and the resistance of vectors to insecticides worsens the situation. In this context, the development of new therapeutics and prophylactics methods is extremely important. Despite efforts, an effective vaccine has not been developed. Presently it is known that the antiplasmodial immune response may be responsible for the protection and pathogenesis of the disease. However, the mechanisms involved in protective and / or pathological immunity remain unclear. Therefore, this study aims to evaluate the hematological and immunophenotypic profile of peripheral blood mononuclear cells of naturally infected individuals with P. vivax (n = 47) or P. falciparum (n = 24) from an endemic area of Brazil (PV-RO), on the acute phase and convalescence. To achieve the objective, volunteers' blood was collected for parasitological examination, hemogram and to obtain mononuclear cells to evaluate the immunophenotypic profile using flow cytometry. The target populations included CD4+, CD8+, T lymphocytes, Tγδ, CD3- cells, and subpopulations producing different cytokines (IFN-γ, TNF-α, IL-2, IL-4, IL-10); NK, NKT cells and subpopulations (CD4+ e CD8+); B cells and subpopulations (including populations that produces TGF-β). In the acute phase, patients with falciparum and vivax malaria had thrombocytopenia, leukopenia and an increased number of band cells and also presented an increased percentage of CD4+CD8- besides a reduction in the percentage of CD5-CD11b- B cells. Patients with P. vivax showed an increase in the percentage of TNF-α producing CD4+, CD8+, TCRγδ+ and CD3- cells; activated CD8 T cells and CD3-cells that produces IL-10; TGF-β expressing B cells. In P. falciparum infected individuals it was observed an increase in T cell TNF-α+ and a reduction of cytotoxic T cells. In the convalescence, both groups presented a reduction in TCRγδ+TNF-α+, CD3- TNF-α +, CD3-IL-2+ and CD3-IL-10+ cells. Only those individuals infected with P. vivax showed a decrease of CD4+ CD8-; CD5+CD11b- B cells; CD8+ cells that express TNF-α and TNF-α and IFN-γ simultaneously; besides there is an increase of CD5-CD11b- B-cell. Either patients with P. falciparum as in P. vivax infected individuals a significant decrease in the number of lymphocytes was observed, however only a few circulating lymphocyte subsets were altered. Indeed, significant changes in the cytokines expression profile were observed in the P. vivax patients. Within this context, in the acute phase of P. vivax malaria there was an increase in both the percentage of type 1 and type 2 cytokines producing cells. As all patients included in the study had uncomplicated malaria, it can be assumed that the most important in controlling the severity of the disease is precisely the balance between the pro and anti- inflammatory response.

Submitted by Anderson Silva (avargas@icict.fiocruz.br) on 2012-09-30T14:49:37Z No. of bitstreams: 1 regina_p_carvalho_ipec_pesquisaclinicadi_0005_2010.pdf: 1759534 bytes, checksum: 3ba01da2b81179270af6897d913fd20c (MD5) / Made available in DSpace on 2012-09-30T14:49:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 regina_p_carvalho_ipec_pesquisaclinicadi_0005_2010.pdf: 1759534 bytes, checksum: 3ba01da2b81179270af6897d913fd20c (MD5) Previous issue date: 2010 / Fiocruz / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Pesquisa Clínica Evandro Chagas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Introdução: A imunidade mediada por células tem um papel importante na resposta imune do hospedeiro à Leishmania. Em pacientes com leishmaniose cutânea, a presença de células ativadas tem sido correlacionada positivamente com o tamanho das lesões. Já a atividade citolítica de células T CD8 + vem sendo associada ao dano tecidual e à gravidade da forma mucosa. No entanto, não se sabe o perfil fenotípico induzido nas células de indivíduos clinicamente curados quando estes reencontram os antígenos de Leishmania. Objetivo: Identificar perfis imunológicos associados à cura clínica na leishmaniose cutânea, com foco na análise das características fenotípicas e funcionais de linfócitos T específicos para a Leishmania. Materiais e Métodos: Foram estudados 26 indivíduos curados de leishmaniose cutânea (LCC) divididos em dois grupos de acordo com o tempo de cura: (i) menor que 2 anos (<2 anos, n=13) e (ii) 2 a 5 anos (2-5 anos, n=13). Como grupo controle, foram utilizados 12 indivíduos sadios (IS) sem histórico prévio de leishmaniose. As células mononucleares do sangue periférico foram analisadas ex vivo e após cultivo in vitro na presença de antígenos de Leishmania (Ag-Lb). Foi analisada a expressão de moléculas de superfície relacionadas ao fenótipo dos linfócitos (CD3, CD4 e CD8), ao fenótipo funcional dos linfócitos de memória central (TMC) ou de memória efetora (TME) - (CCR7 e CD45RO), à ativação (CD69 e CD25), à citotoxicidade (C1.7) e à migração linfocitária (CLA). Essas moléculas foram avaliadas dentro da subpopulação de células T CD4+ e T CD8+. Resultados: A média da razão TCD4+/TCD8+ nos pacientes LCC foi similar nas células ex vivo e nas células estimuladas por Ag-Lb. Nos LCC, houve um aumento significativo do percentual de células CD25+ e CD69+ em T CD4+ e em T CD8+ após o estímulo com Ag-Lb. Houve uma correlação negativa entre o tempo de cura e o percentual de células T ativadas pelo antígeno (CD25 + e CD69+). Nos pacientes LCC, o percentual de linfócitos TME em CD4+ e CD8+ aumentou após o estímulo com Ag-Lb, quando comparado com as células ex vivo. Já o percentual de células TMC não se modificou. O percentual de células C1.7+ dentro de T CD8+ e de células CLA+ em T CD4+ e T CD8+ foi similar na análise de células ex vivo e após estímulo com Ag-Lb, em pacientes LCC. Nos IS, não foi observado aumento do percentual de células T para nenhuma das moléculas avaliadas, quando comparadas às células ex vivo e estimuladas com Ag- Lb. Conclusão: À medida que aumenta o tempo de cura clínica, há uma redução de moléculas associadas à ativação tanto em linfócitos T CD4+ quanto em T CD8+. Esses indivíduos apresentam um aumento de células de ME que poderiam participar no controle dos parasitos caso ocorra uma reinfecção. Além disso, as células expandidas não apresentaram moléculas de superfície relacionadas à citotoxicidade ou migração para a pele. Considerando que os pacientes curados possuem um padrão de resposta imunoprotetor, tal padrão pode ser considerado um parâmetro importante para a seleção de antígenos candidatos para uma vacina. / Introduction: The cell-mediated immunity plays an important role in the immune response of the host to Leishmania. In cutaneous leishmaniasis patients, the presence of activated cells has been positively correlated with lesion size. The cytolytic activity of T CD8+ cells has been associated with tissue damage and the severity of mucosal form. However, the phenotypic profile induced in cells of clinical cured individuals, when they are exposed to Leishmania antigens again, is not known. Objective: Identify imunological profiles associated with clinical cure in cutaneous leishmaniasis, with emphasis on phenotypical and functional characteristics of Leishmania-specific T cells. Materials and Methods: In the study, 26 individuals cured from cutaneous leishmaniasis (CCL) were divided in two groups according to the time of cure: (i) less than 2 years (<2 years, n=13) and (ii) from 2 to 5 years (2-5 years, n=13). As the control group, 12 healthy subjects (HS) without previous history of leishmaniasis were used. Peripheral blood mononuclear cells were evaluated ex vivo and after in vitro culture in the presence of Leishmania antigens (Lb-Ag). It was analysed the expression of surface molecules related with lymphocytes phenotype (CD3, CD4 and CD8), functional phenotype of central memory (TCM) or effector memory lymphocytes (TEM) - (CCR7 and CD45RO), activation (CD69 and CD25), citotoxicity (C1.7) and lymphocyte migration (CLA). These molecules were evaluated within subpopulations of CD4 + and CD8+ T cells. Results: The mean ratio T CD4+/T CD8+ in CCL patients was similar in ex vivo cells and in Lb-Ag stimulated cells. In CCL, there was a significant increase in the percentual of CD25 + and CD69+ in CD4+ and in CD8+ T cells after Lb-Ag stimulus. There was a negative correlation between the time of cure and the percentual of T cells activated by the antigen (CD25+ and CD69+). In CCL patients, the percentual of TEM lymphocytes in CD4+ and in CD8+ increased after Lb-Ag stimulus, when compared to ex vivo cells. The percentual of TMC cells has not altered. The percentual of C1.7+ cells within CD8+ T cells and CLA+ in CD4+ and in CD8+ T cells was similar to the analysis of ex vivo cells and after Lb-Ag stimulus, in CCL patients. In the HS, it was not observed an increase in the percentual of T cells in any of the molecules analised, when comparing ex vivo to Lb-Ag stimulated cells. Conclusions: As the time of cure increases, there is a decrease of molecules related to activation in both CD4+ and CD8+ T cells. These individuals present an increase in EM cells that could take part in the parasite control in case of reinfection. Moreover, expanded cells have not presented surface molecules related to citotoxicity or migration to skin. Considering that cured patients have a imunoprotective response profile, such profile should be considered as an important parameter for selection of antigen candidates for the development of a vaccine.

Made available in DSpace on 2016-12-23T13:56:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Maria Carolina Campana - texto completo.pdf: 1739324 bytes, checksum: 2c77a0541ea8a062d1765a13e6b4e9e5 (MD5) Previous issue date: 2010-09-02 / Immunity against tuberculosis depends on the establishment of an effective Th1 response, with IFN- production, a pivotal cytokine to the activation of macrophages and bacilli destruction. It is known that several factors are related to the host s resistance to tuberculosis. In the present work, the influence of T regulatory cells (Tregs) in the immune response against Mtb was evaluated in whole blood and PBMC cultures from tuberculin skin test positive (TST+) and tuberculin skin test negative (TST-) individuals. Paralelly, we also evaluated if different levels of resistance to anti-mycobacterial drugs displayed by different Mtb clinical isolates could interfere with the cytokine profile, Tregs frequency, and with its proliferative capacity on both PBMC and whole blood cultures from TST+ and TST- subjects. Twenty-two healthy volunteers were invited to participate in our study, 11 TST+ and 11 TST-. Twelve Mtb clinical isolates were used, 6 drug-resistant and 6 drug-susceptible. Our data shows that differences in drug susceptibility did not affected any of the evaluated parameters. In the other hand, TST status correlated with differences in Treg frequencies, which was significantly elevated among TST+ when compared to TSTsubjects. The increase in Tregs was also associated with a decrease in the microbicidal effect observed in whole blood cultures from TST+, when compared to TST-. This association was confirmed through the depletion of Tregs, which restored the microbicidal activity and an increase in IFN-, IL-2, IL10, and TNF- when compared to undepleted cultures. Data presented here supports the hypothesis that pre-exposure to MTB, represented by a positive TST result, may increase the number of Treg cells, which in turn could affect negatively the establishment of a protective immunity against TB in TST+ individuals / A resposta imune contra a tuberculose é mediada por uma resposta do tipo Th1, com a produção de IFN-&#947;, citocina fundamental para a ativação dos macrófagos e, consequentemente para a eliminação do bacilo. Vários fatores podem estar relacionados com a resistência a tuberculose. Neste trabalho, foi avaliado o impacto das células T reguladoras na resposta imune contra o Mtb em infecções de amostras de sangue total e CMSP de indivíduos positivos para o teste com PPD (PPD+) e negativos ao teste com PPD (PPD-). Além disso, avaliamos também se o perfil de resistência dos isolados de Mtb tem relação com o perfil de citocinas secretadas, com a frequência de células T reguladoras e com sua capacidade proliferativa em culturas de sangue total e CMSP dos indivíduos estudados. Para isso, foram arrolados 22 voluntários saudáveis. Desses indivíduos, 11 eram PPD+ e 11 eram PPD-. Foram também utilizados 12 isolados de Mtb, sendo 6 sensíveis e 6 resistentes a drogas antituberculose. Não foram encontradas diferenças entre os perfis de resistência dos isolados de Mtb e os parâmetros avaliados. O número de células T reguladoras encontrado nos indivíduos PPD+ foi maior em relação aos PPD- e a presença dessas células afetou negativamente o efeito microbicida nas culturas de sangue total de indivíduos PPD+, nas quais os isolados de M. tuberculosis proliferaram mais. Quando foram feitas infecções com isolados de Mtb em culturas de CMSP nas quais as células T reguladoras foram depletadas uma diminuição na proliferação do Mtb foi encontrada tanto nas amostras de indivíduos PPD+ quanto PPD-. Essa alteração na proliferação do Mtb foi acompanhada de maiores níveis de INF-&#947;, IL-2, IL-10 e TNF-&#945; em relação às culturas de CMSP na presença das células T reguladoras. Os resultados desse trabalho sugerem que a pré-exposiçã o ao Mtb, evidenciada pelo teste positivo com o PPD, pode aumentar o número de células T reguladoras que, por sua vez, podem prejudicar a resposta imune protetora contra a tuberculose nos indivíduos PPD+