Made available in DSpace on 2014-12-17T14:03:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 JoaoFRN_DISSERT.pdf: 3516278 bytes, checksum: 9fe0338a2547517c2f45d91b7860116c (MD5) Previous issue date: 2010-12-03 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / Visceral leishmaniasis (VL) in Brazil is a disease caused by Leishmania infantum chagasi (L.i.chagasi). The clinical evolution post-infection depends on the vertebrate host immune response, which is genetically mediated. This study aimed to evaluate the immune response of individuals living in endemic area for VL in the state of the Rio Grande do Norte, considering individuals with VL under treatment (n = 9), recovered VL <1 year post treatment (n = 10), > 10 years posttreatment (n = 9), uninfected individuals living in endemic areas (n = 7), individuals that lost DTH response (n=6) and asymptomatic individuals for VL (n=9). Peripheral blood cells were evaluated in the presence and absence of soluble Leishmania antigens (SLA) and ex vivo, to determine activation, presence of regulatory cells and memory cells. The Leishmania parasitemia and anti-Leishmania antibodies were determined respectively by qPCR and ELISA. Cells from individuals with VL under treatment showed less cell activation after stimulation with SLA for the markers CD4/CD69, CD8/CD69 and CD8/CD25 compared with VL post treatment treatment (p <0.001). Apparently uninfected individuals have a higher cell activation than symptomatic VL (p <0.001), with the exception of CD8/CD25 marker (p = 0.6662). On the other hand, in the ex-vivo group, significant differences were observed for CD4/CD69, CD8/CD69 and CD8/CD25 between the 4 groups due to increased cell activation present in cells of individuals symptomatic LV (p <0.001). VL cells under treatment, ex vivo, have a lower percentage of memory cells (CD4/CD45RO and CD8/CD45RO) than individuals VL post-treatment or control group (p = <0.01). Likewise, individuals with symptomatic VL have fewer regulatory cells when stimulated by SLA [CD4/CD25 (p = 0.0022) and CD4/FOXP3 (p = 0.0016)] and in the ex-vivo group (p = 0.0017). Finally, DNA isolated from recovered VL contained Leishmania DNA, supporting the hypothesis of non-sterile clinical cure for Leishmania infection. Recovered VL, even 10 years after treatment have high levels of memory cells, which may be due to the presence of stimulation, either by reexposure to Leishmania or non-sterile cure / A Leishmaniose visceral (LV) nas Am?ricas ? uma doen?a causada pela esp?cie Leishmania infantum chagasi (L.i.chagasi). A forma cl?nica evolutiva p?s-infec??o depende da resposta imune do hospedeiro vertebrado, que ? geneticamente mediada. Este estudo teve como objetivo avaliar a resposta imune de indiv?duos residentes em ?rea end?mica para LV no estado do Rio Grande do Norte, considerando indiv?duos com LV em tratamento (n=9), indiv?duos curados de LV < 1 ano (n=10) e > 10 anos p?s-tratamento (n=9), indiv?duos residentes em ?reas end?micas (n=7) aparentemente n?o infectados, indiv?duos que perderam a resposta DTH (n=6) e indiv?duos assintom?ticos para LV (n=9). C?lulas de sangue perif?rico foram avaliadas em presen?a e na aus?ncia de ant?genos sol?veis de Leishmania (SLA) e ex-vivo, para determina??o da ativa??o, da presen?a de c?lulas regulat?rias e de c?lulas de mem?ria. A parasitemia e anticorpo anti-Leishmania foram determinadas, respectivamente, por qPCR e ELISA. C?lulas oriundas de indiv?duos com LV em tratamento apresentaram menor ativa??o celular p?s-est?mulo com SLA para os marcadores CD4/CD69, CD8/CD69 e para CD8/CD25 quando comparado com LV p?s-tratamento (p<0,001). Indiv?duos aparentemente n?o infectados apresentam maior ativa??o celular que LV sintom?tico (p<0.001), com exce??o do marcador CD8/CD25 (p=0,6662). Por outro lado, na condi??o ex-vivo, diferen?as significativas foram observadas para CD4/CD69, CD8/CD69 e CD8/CD25 devido a uma maior ativa??o celular presente em c?lulas de indiv?duos LV sintom?ticos (p<0,001). Indiv?duos LV sintom?ticos, ex vivo, apresentam um menor percentual de c?lulas de mem?ria (CD4/CD45RO CD8/CD45RO) do que indiv?duos com LV p?stratamento ou controles (p=<0.01). Da mesma forma, indiv?duos com LV sintom?ticos apresentam uma menor quantidade de c?lulas regulat?rias quando estimuladas por SLA [CD4/CD25 (p= 0,0022) e CD4/FOXP3 (p= 0,0016)] e na condi??o ex-vivo (p=0.0017). Finalmente, pacientes com LV clinicamente recuperados permaneceram com parasitemia, determinado por qPCR, dando suporte ? hip?tese de cura cl?nica n?o est?ril para infec??o por Leishmania. Pacientes com LV recuperado, mesmo 10 anos p?s-tratamento mant?m n?veis elevados de c?lulas de mem?ria, que pode ser devido ? presen?a de ant?genos de Leishmania, seja devido ? re-exposi??o ? Leishmania ou por uma prov?vel cura n?o est?ril

Made available in DSpace on 2015-03-03T15:38:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 BrunaRMS_TESE.pdf: 1789056 bytes, checksum: 3971348cc480ce2ec7b8b377a649483e (MD5) Previous issue date: 2011-02-17 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / Periodontal disease is an inflammatory condition of infectious nature characterized by destruction of protecting and supporting dental tissues. It happens as a response produced by the host when attacked by microorganisms. Several factors are involved in this process. Among them, cytokines are key regulatory molecules in this immune response, playing a role either protective and/or destructive in lesion progression. Thus, this study investigated the immunohistochemical expression of IFN- , GATA-3, IL-17, IL-23, IL-6 and TGF- in gingival tissues of humans, in an attempt to gain a better understanding of the participation of Th1, Th2 and Th17 immune responses in the development of periodontal disease processes. To this end, eighty-two samples of gingival tissues were divided into three groups: Group 1 = 15 (samples of healthy gum tissue as controls), Group 2 = 36 (samples with chronic gingivitis) and Group 3 = 31 (samples with chronic periodontitis). All cases were submitted to morphological analysis from sections stained with hematoxylin and eosin and then subjected to staining by immunohistochemistry using the streptavidin-biotin method. Results showed positive labeling for all proteins. Nonetheless, we observed a greater expression of Th1 cytokines and Th17 cells in group 3. We found statistically significant difference between TGF- expression and the clinical condition of the samples (p=0.02). We conclude that Th1 and Th17 responses may act synergistically in the destructive process of periodontal tissue, overlapping the Th2 response that was also present in these tissues / A doen?a periodontal ? uma condi??o inflamat?ria de car?ter infeccioso, caracterizada pela destrui??o dos tecidos de prote??o e sustenta??o dent?rios, face ? resposta produzida pelo hospedeiro frente ?s agress?es sofridas pelos microrganismos. V?rios fatores est?o envolvidos nesse processo, sendo as citocinas as principais mol?culas reguladoras dessa resposta imune, desempenhando um papel protetor e/ou destrutivo na progress?o da les?o. Diante disso, este experimento investigou a express?o imuno-histoqu?mica de IFN- , GATA-3, IL-17, IL-23, IL-6 e TGF- em tecidos gengivais de humanos, na tentativa de se obter um maior entendimento da participa??o das respostas imunes Th1, Th2 e Th17 no desenvolvimento destes processos patol?gicos. Para tanto, oitenta e duas amostras de tecidos gengivais foram subdivididas em tr?s grupos: Grupo 1=15 (amostras de tecido gengival saud?vel-controle), Grupo 2=36 (amostras com gengivite cr?nica) e Grupo 3=31 (amostras com periodontite cr?nica). Todos os casos foram submetidos ? an?lise morfol?gica a partir de cortes corados em hematoxilina e eosina e, posteriormente, submetidas ? t?cnica de colora??o pela imuno-histoqu?mica atrav?s do m?todo da Estreptoavidina-Biotina. Os resultados mostraram positividade de marca??o para todas as prote?nas, sendo observada uma maior tend?ncia de marca??o para as citocinas das respostas Th1 e Th17 no grupo 3. Diferen?a estatisticamente significativa foi verificada entre a express?o de TGF- e a condi??o cl?nica das amostras (p=0,02). Assim, podemos concluir que as respostas Th1 e Th17 podem atuar sinergicamente no processo destrutivo dos tecidos periodontais, sobrepondo-se ? resposta Th2 que tamb?m se encontrou presente nestes tecidos

Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Neospora caninum is an intracellular parasite that has the dog as its definitive host and other mammals, especially cattle, as intermediate hosts. Economically, neosporosis is an important disease in Veterinary medicine due to the induction of relevant clinical signs, as abortions in cattle and neuromuscular paralysis in dogs. The aim of this study was to evaluate the role of the TLR adaptor protein TRIF in the resistance against N. caninum infection. For this, in vitro experiments with bone marrow derived macrophages (BMDMs) from C57BL/6 wild-type (WT) and TRIF knockout (TRIF-/-) mice, stimulated by tachyzoites and in vivo infections, were performed in order to investigate the production of cytokines and antibodies, cellular and tissue parasitism, histological changes during different phases of infection and survival analysis. We observed that TRIF-/- BMDMs presented notable defects in inflammatory cytokine production in relation to WT macrophages. Additionally, we found that the concentration of NO, IL-12p40, IFN-y and TNF were decreased in peritoneal fluids and lungs of TRIF-/- mice, while IL-2, IFN-γ, TNF and IL-17 were reduced in sera of these animals compared to WT mice. Higher parasite burden was observed in peritoneal cells, lungs and brain during the acute and chronic phases of infection, which were associated with inflammatory changes in the analyzed tissues, while TRIF-/- mice survival rate decreased 2-fold compared to WT. In conclusion, our results show that TRIF is required for resistance against the infection induced by N. caninum, regulating the production of key Th1 cytokines and participating in the control of the tissue parasitism and inflammatory lesions induced against the parasite. / Neospora caninum é um parasito intracelular que tem como hospedeiro definitivo o cão e outros mamíferos, especialmente bovinos, como hospedeiros intermediários. Economicamente, a neosporose é uma doença de grande importância na medicina veterinária por induzir relevantes sinais clínicos, como abortos em bovinos e paralisia neuromuscular em cães. O objetivo deste estudo foi avaliar o papel da molécula adaptadora TRIF da via de sinalização dos TLRs na resistência contra a infecção por N. caninum. Para isso, experimentos in vitro com macrófagos derivados de medula óssea (BMDMs) obtidos de camundongos do tipo selvagem (WT) e TRIF knockout (TRIF-/-) estimulados com taquizoítos e infecções in vivo foram realizadas a fim de se investigar a produção de citocinas e anticorpos, parasitismo celular e tecidual, alterações histológicas durante diferentes fases da infecção e análise de sobrevida. Nós observamos que BMDMs TRIF-/- apresentaram reduções significativas na produção de citocinas inflamatórias em relação a macrófagos WT. Adicionalmente, foi visto que as concentrações de NO, IL-12p40, IFN- e TNF foram diminuídas no lavado peritoneal e nos pulmões de camundongos TRIF-/-, enquanto que IL-2, IFN-γ, TNF e IL-17 foram reduzidas no soro desses animais em comparação aos WT. Alta carga parasitária foi encontrada nas células peritoneais, pulmões e cérebro durante as fases aguda e crônica da infecção, associada com alterações teciduais inflamatórias significativas nos pulmões. Além disso, camundongos TRIF-/- tiveram uma taxa de sobrevida 2 vezes menor quando comparada aos animais WT. Concluindo, nossos resultados mostram que TRIF é requerido para a resistência contra a infecção induzida por N. caninum, regulando a produção de citocinas chave do perfil Th1 de resposta imune e participando no controle do parasitismo tecidual e das lesões inflamatórias oriundas desta infecção. / Mestre em Imunologia e Parasitologia Aplicadas

Carrapatos são artrópodes hematófagos de distribuição cosmopolita que têm grande importância médica e veterinária devido ao efeito deletério direto causado por se fixarem e sugarem seus hospedeiros, como também por serem importantes vetores de doenças para o homem e para os animais domésticos. Sabendo que carrapatos permanecem fixos em seus hospedeiros por longos períodos de tempo sem serem rejeitados, é possível inferir que esses ácaros possuam um arsenal de mecanismos que atuem no controle da resposta imune do hospedeiro. De fato, diversos trabalhos têm demonstrado que carrapatos são capazes de modular a resposta imune de seus hospedeiros através de componentes presentes na saliva, que são inoculados durante o repasto sangüíneo. Assim, este trabalho procurou investigar se carrapatos exercem a modulação da resposta imune do hospedeiro através do recrutamento de células T regulatórias CD4+CD25+ (Tregs), com a intenção de conter uma resposta inflamatória / imune prejudicial à sua alimentação. Para isso, células isoladas de amostras de pele e linfonodos de camundongos BALB/c infestados com carrapatos Rhipicephalus sanguineus foram analisadas quanto à expressão das moléculas de superfície CD4, CD25, CTLA-4, CD45RB, GITR e CD103 (fenótipo de células Tregs), por citometria de fluxo. Adicionalmente, as células obtidas dos linfonodos foram avaliadas quanto à expressão de mensagem para o fator de transcrição Foxp3 (característico da função regulatória), por PCR quantitativo. Paralelamente, saliva de R. sanguineus foi inoculada na orelha de animais da mesma linhagem, a fim de se comparar o infiltrado celular com o obtido na pele dos camundongos infestados com carrapatos. Os resultados mostraram que as infestações não alteraram a percentagem de células T CD4+CD25+ nem a expressão de moléculas associadas ao fenótipo de células Tregs nas células infiltradas na lesão de fixação dos carrapatos ou nos linfonodos em comparação a camundongos controles. Também não se verificou aumento da expressão do gene para Foxp3 nos linfonodos em nenhum dos grupos analisados. Por outro lado, a inoculação de saliva na orelha de camundongos induziu um aumento significativo da população de células T CD4+, porém estas também não apresentavam fenótipo regulatório, sugerindo que o mecanismo de imunomodulação exercido pelos carrapatos sobre seus hospedeiros não é mediado por essas células. Resultados adicionais mostraram que a saliva de carrapatos reduziu significativamente a percentagem de células dendríticas nas orelhas dos camundongos, sugerindo que carrapatos podem estar modulando a resposta imune de seus hospedeiros por diminuírem o repovoamento da pele com células dendríticas, as quais são essenciais na vigilância imune dos tecidos periféricos. / Ticks are bloodsucking arthropods that feed on vertebrates and are responsible for serious global economic losses both through the effects of blood sucking and as vectors of pathogens. A tick?s bloodmeal lasts for several days, during which it remains fixed to the host and avoids rejection by local inflammatory and immunological reactions. This status is achieved by the escape mechanisms ticks have evolved. In fact, many studies have demonstrated that ticks modulate the host immune response through salivary compounds inoculated during their bloodmeals. This study investigated if during bloodfeeding ticks can recruit regulatory T cells in an attempt to modulate the host immune response and to control inflammatory responses that could be harmful to tick feeding. BALB/c mice were infested with Rhipicephalus sanguineus, the skin at feeding sites and the regional lymph nodes were collected, and the cells forming the local infiltrates were analyzed by flow cytometry for simultaneous expression of CD4, CD25, CTLA-4, CD45RB, GITR and CD103 molecules. Additionally, expression of mRNA for Foxp3 was measured in the lymph node cells. Tick saliva was also inoculated into the ears of BALB/c mice in order to compare the local cellular infiltrate with that elicited by artificial infestation. Control animals were sham infested. The results show that, relative to sham-infested tissues, tick infestations did not alter the percentage of CD4+CD25+ T cells present at the site of their attachment or in draining lymph nodes. Infestations also did not increase the expression of Foxp3 in skin and lymph nodes. On the other hand, saliva inoculated into the ear induced a significant increase in the number of CD4+ T lymphocytes recruited to the site of inoculation, although these cells did not express a regulatory phenotype. These results suggest that the modulation of the host immune response by ticks does not involve CD4+CD25+ T cells. Additional results showed that tick saliva reduced the percentage of dendritic cells in the skin of infested mice. This finding indicates that ticks may modulate the host immune response by diminishing the repopulation of skin with dendritic cells, which are essential for maintaining surveillance of peripheral tissues for incoming antigens.

Submitted by Gabriela Lopes (gmachadolopesufpel@gmail.com) on 2018-07-30T18:34:11Z No. of bitstreams: 1 Itiane Barcellos Jaskulski.pdf: 1235418 bytes, checksum: 9fdf9c1822423763aa421923556d593c (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2018-07-31T19:15:23Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Itiane Barcellos Jaskulski.pdf: 1235418 bytes, checksum: 9fdf9c1822423763aa421923556d593c (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-31T19:15:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Itiane Barcellos Jaskulski.pdf: 1235418 bytes, checksum: 9fdf9c1822423763aa421923556d593c (MD5) Previous issue date: 2018-03-05 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Na última década, a ciência contribuiu significativamente para inúmeros avanços e progressos em relação ao tratamento e prevenção do câncer colorretal (CCR), porém, a prevalência global e taxa de mortalidade ainda permanecem altos. Há relatos sobre efeitos benéficos de espécies de Bifidobacterium e Lactobacillus com potencial probiótico na prevenção de CCR, no entanto, a bactéria probiótica Lactococcus lactis subps. lactis é comumente utilizada para fins industriais, não havendo comprovações in vivo sobre seu potencial anticarcinogênico. Visto o interesse emergente dos efeitos benéficos dos probióticos a fim de prevenir ou tratar o CCR, o presente estudo objetivou explorar os efeitos protetores de Lactococcus lactis subsp. lactis sobre o CCR. Ratos da linhagem Wistar receberam doses subcutâneas de 1,2 dimetilhidrazina (DMH), suspensão de Lactococcus lactis subsp. lactis por via oral e dieta hipercalórica. Após 20 semanas, os tecidos intestinais foram analisados histologicamente, além de controle ponderal e consumo de alimentos, parâmetros hematológicos e bioquímicos, estresse oxidativo e estado redox do tecido hepático. De acordo com o resultado, o isolado demonstrou potencial anticarcinogênico contra CCR, estabilizou o ganho de peso, reduziu adiposidade abdominal, apresentou ligeira melhora da resposta imune, exerceu atividade antioxidante frente ao estresse oxidativo e, demonstrou proteção à peroxidação lipídica. Estes resultados são promissores para a ciência frente às pesquisas relacionadas ao tratamento e prevenção de CCR. / In the last decade, science has contributed significantly to numerous advances and advances in treating and preventing colorectal cancer (CRC), but the overall prevalence and mortality rate remain high. There are reports on the beneficial effects of Bifidobacterium and Lactobacillus species with probiotic potential in the prevention of CRC, however, the probiotic bacterium Lactococcus lactis subps. lactis is commonly used for industrial purposes, and there is no in vivo evidence for its anticarcinogenic potential. Given the emerging interest in the beneficial effects of probiotics in preventing or treating CRC, the present study aimed to explore the protective effects of Lactococcus lactis subsp. lactis in the CRC. Wistar rats received subcutaneous doses of 1,2-dimethylhydrazine (DMH), suspension of Lactococcus lactis subsp. lactis orally and a hypercaloric diet. After 20 weeks, intestinal tissues were analyzed histologically, in addition to weight control and food consumption, hematological and biochemical parameters, oxidative stress and redox status of the hepatic tissue. According to the results, the isolate demonstrated anticarcinogenic potential against CRC, stabilized the weight gain, reduced abdominal adiposity, showed a slight improvement in the immune response, exerted antioxidant activity against oxidative stress and demonstrated protection of lipid peroxidation. These results are promising for science regarding the treatment and prevention of CRC.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:30:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dis Bruna D de S Silva 2010.pdf: 942780 bytes, checksum: 696823192ee17b463193f279bf7aed38 (MD5) Previous issue date: 2010-11-19 / Tuberculosis (TB) is a disease that afflicts mankind catastrophically, causing millions of new cases and deaths worldwide. It is estimated that one third of the world population is infected with the TB bacillus, Mycobacterium tuberculosis. Currently, the major challenges in TB control are the iden-tification of latent individuals, who are have increased chances to become ill, and the effective treat-ment of individuals with active disease. Understanding the immunology of this disease is of crucial importance for the development of new diagnostic tests and vaccines to combat this disease effec-tively. In order to elucidate the cellular immune response in tuberculosis, we evaluated the subpopu-lations of TCD4+ Th1, Th17 and T regulatory cells of patients with active pulmonary tuberculosis and rheumatoid arthritis against the recombinant antigen GLcB of M. tuberculosis. Peripheral blood mononuclear cells were obtained from twenty one patients with active pulmonary tuberculosis, re-cruited at Anuar Auad Hospital, twenty five patients with rheumatoid arthritis (RA), eleven individu-als with latent tuberculosis (TST+) and twelve healthy subjects (TST-). These cells were cultured, stimulated with antigen recombinant GLcB and Th1, Th17 and T regulatory subsets cells were eva-luated by flow cytometry. It was found that patients with active pulmonary tuberculosis have a high-er response of Th1 (8.2&#61617;1.9), Th17 (3.92.1) and T regulatory (2.81.2) antigen-specific recombi-nant GLcB when compared with individuals with latent infection (Th17=2.81.3; Treg=3.11.2) and healthy controls (Th17=1.40.8; Treg=0.60.3). Individuals with latent infection have only a signifi-cant percentage of Th1 cells specific (4.61.1) to GLcB when compared to controls (1.71.0). RA Patients that developed tuberculosis had immune response similar to those with only TB. Given these results, we conclude that the Th1 cells, Th17 and regulatory T cells are directly involved in active disease. / A Tuberculose (TB) é uma doença que atinge a humanidade de forma catastrófica, causando milhões de casos novos e de mortes no mundo todo. Estima-se que um terço da população mundial esteja infectada com o bacilo da TB, Mycobacterium tuberculosis. Atualmente, os principais desafios no controle da TB são: a identificação dos indivíduos latentes, que são os principais indivíduos com potencial desenvolvimento da doença e o tratamento efetivo dos indivíduos com doença ativa. O entendimento da resposta imunológica nessa doença é de crucial importância para o desenvolvimen-to de novos testes diagnósticos e novas vacinas para combater de forma efetiva essa enfermidade. Com o intuito de elucidar a resposta imune celular envolvida no desenvolvimento da tuberculose ativa, avaliamos as subpopulações de células TCD4+ Th1, Th17 e T reguladoras de pacientes com tuberculose pulmonar e pacientes com artrite reumatóide ativa frente ao antígeno recombinante GLcB do M. tuberculosis. Foram obtidas células mononucleares do sangue periférico de vinte e um pacientes com tuberculose pulmonar ativa, recrutados no Hospital de Doenças Tropicais Anuar Au-ad, vinte e cinco pacientes com artrite reumatóide, onze indivíduos com tuberculose latente (PT+) e doze indivíduos saudáveis (PT-). Estas células foram cultivadas, estimuladas com o antígeno recom-binante GLcB e as subpopulações Th1, Th17 e T reguladoras foram avaliadas através da análise das citocinas IFN-&#61543;, IL-17 e TGF-&#61538; e IL-10, respectivamente, por citometria de fluxo. Constatou-se que pacientes com tuberculose pulmonar ativa apresentam maior resposta de células Th1 (8.2&#61617;1.9), Th17 (3.92.1) e T reguladoras (2.81.2) específicas ao antígeno recombinante GLcB quando comparados com indivíduos com infecção latente (Th17=2.81.3; Treg=3.11.2), e controles saudáveis (Th17=1.40.8; Treg=0.60.3). Indivíduos com infecção latente apresentam somente porcentagem significativa de células Th1 (4.61.1) específicas ao GLcB quando comparado aos controles (1.71.0). Pacientes com AR não apresentaram diferença significativa na porcentagem destas células quanto à classificação em PT+ e PT-. Porém, pacientes com AR que desenvolveram tuberculose a-presentaram resposta semelhante aos pacientes com TB. Diante destes resultados, podemos concluir que as células Th1, Th17 e T reguladoras estão diretamente envolvidas na doença ativa.

Flagelina, a subunidade estrutural dos flagelos bacterianos, pode ser empregada em estratégias vacinais como carregadora de epitopos antigênicos fusionados ou como adjuvante. Neste trabalho avaliamos a imunogenicidade e o potencial vacinal das flagelinas Salmonella enterica sorovar Typhimurium em camundongos BALB/c após administração pelas vias oral ou intraperitoneal. Os resultados indicam que animais imunizados pela via oral com linhagens flageladas de S. Typhimurium não desenvolvem respostas de anticorpos, sistêmicos ou secretados, anti-flagelina, por outro lado, ativam respostas celulares específicas para as flagelinas em função da via de administração utilizada. Observamos ainda que as diferentes flagelinas testadas apresentam efeito adjuvante quando co-administradas pela via nasal com a fímbria CFA/I de ETEC. Em suma, os resultados apresentados contribuem para um melhor conhecimento sobre as propriedades imunológicas e adjuvantes das flagelinas de S. Typhimurium e agregam informações para o uso racional dessas proteínas em formulações vacinais. / Flagellin, the structural subunit of bacterial flagella, can be used in vaccine development as a fused antigenic epitope carrier or as an adjuvant. In this work we evaluated the immunogenicity and vaccine approach of S. Typhimurium flagellin in BALB/c mice after administration by oral or intraperitoneal route. Our results indicate that mice immunized by oral route with flagellated S. Typhimurium strains do not develop any anti-flagellin antibody response, be it serum or secreted. On the other hand, specific anti-flagellin cellular response was observed depending on the chosen route of immunization with S. Typhimurium attenuated strain. Furthermore, all flagellins tested proved to be efficient adjuvants when co-administrated with CFA/I fimbriae by nasal route. Together, these results contribute to a better understanding of the immunological and adjuvant properties of S. Typhimurium flagellins and also provide information on the rational use of these proteins in vaccine development.

Durante a ativação policlonal induzida pelo P. chabaudi a maior fonte de IL-2 são as células CD4+ ativadas, além disso, acorre a expansão de células Treg. No dia 7 após a infecção, a ausência de células Treg leva a uma exacerbação da ativação de células CD4+, além de altos níveis de anticorpos anti-P.chabaudi e auto-anticorpos. A neutralização da IL-2, com Mab anti-IL-2 JES6-1, na fase aguda da infecção leva a uma redução no número de células Treg. No dia 20 de infecção, a freqüência de células CD4+ ativadas esteve elevada e as células Treg voltaram aos níveis basais. Experimentos in vitro mostraram que a neutralização da IL-2 não altera a proliferação antígeno-específica de células CD4+ da fase aguda da infecção, porém, em tempos tardios da infecção houve um drástico aumento na freqüência de células CD4+ que proliferam em resposta a eritrócitos parasitados. Podemos concluir que a IL-2 e as células Treg são capazes de limitar a ativação policlonal induzida pelo P. chabaudi ainda que com cinéticas distintas. / Polyclonal activation during P. chabaudi infection results on a huge IL-2 production by activated CD4+ T cells, besides a considerable expansion of Treg cells. At day 7 after infection in the absence of Treg cells there is an enhanced response of activated CD4+ T cells, an increase of Abs anti-P.chabaudi and autoantibody production. Neutralization of IL-2 with Mab anti-IL2 JES6-1 during acute infection reveals a markedly reduction in Treg-cells number. At day 20 of infection we can observe an increase on activated CD4+ T cells frequency. Moreover, Treg cells return to values similar to controls. IL-2 in vitro assays during acute infection results on Ag-specific CD4+ T cells proliferation, on the other hand, at the late infection, we observed a huge increase of CD4+ T cells frequency that strongly response to PRBC. Our findings suggest that IL-2 and Treg cells are capable of restricting PLA during P.chabaudi infection, although with different kinetics.

0 objetivo deste trabalho foi definir se a carga parasitaria na fase aguda da doenga de Chagas experimental afeta a parasitemia, a patologia e a resposta imune na fase cr6nica. Para obtengelo de diferentes cargas parasitoirias na fase aguda, camundongos A/J foram infectados corn 103 OU 105 formas tripomastigotas de T. cruzi e analisados urn ano depois. Os animais cr6nicos infectados corn 105 formas tripomastigotas apresentaram maior nivel de parasitemia residual, maior intensidade de inflamagclo no coragtio e no moscuio esquel6tico e maior grau de ativa95o do sistema imune do que os animais infectados corn 103 formas. Em reiagclo aos parametros imuno16gicos analisados, observou-se nos animais infectados corn 105 formas: i) expansio das populag6es B220-CD5- e CD8\'; ii) freq0@ncia maior de blastos nas populag6es linfocit@rias B220\', CD8\' e CD4\'; iii) mudanga acentuada nas c61ulas CD4+ para o fen6tipo CD4+CD45RBI-ow, indicando urn aumento das c61ulas efetoras elou de mem6ria; iv) freqGC=ncias elevadas de blastos CD4+CD45RB Hig\' e CD4+CD45RB Low; vi) nomero superior de c61ulas secretoras de lg principaimente IgG2a; v) niveis superiores de anticorpos IgG2a e IgGl especificos e vii) maior produgclo de IFN-Y e de IL-4. Estes resultados indicam que a carga parasitaria na fase aguda da infecggto influencia a ativagclo do sistema imune e o desenvolvimento da patologia na fase cr6nica da doenga de Chagas. / The objective of this project is to evaluate if the parasite load in the acute phase experimental Chagas\' disease affects the parasitemias, the pathology and the immune response in the chronic phase. To obtain low- and high-parasite loads in the acute phase of the disease, AlJ mice were infected with 103 or 105 T. cruzi trypomastigotes of the Y strain, and treated on day 6 with Benzonidazol. One year later, chronic mice were screened for subpatent parasitemias, tissue pathology and immune response. Mice infected with the high parasite inoculum showed higher levels of chronic parasitemias, heart and striated muscle inflammation and activation of the immune system when compared to mice infected with the low¬dose inoculum. Concerning the activation of the immune system, the main findings in high-dose infected mice were: i) increased numbers of splenocytes, with preferential expansion of CD8+ and B220-CDS- cells, many of them bearing a macrophage phenotype; ii) higher frequencies of B (B220+), CD4+ and CD8+ large lymphocytes; iii) a shift of CD4+ cells towards a CD4SRBLow phenotype; iv) increased frequencies of both CD4SRBLow and CD4SRBHigh large CD4+ cells; v) augmented numbers of total Ig-secreting cells, with predominance of IgG2a¬producing cells, and; vi) increased production of IFN-y and IL-4. In addition, these mice presented lower IgM and higher IgG2a and IgG1 parasite-specific serum antibody levels. Our results indicate that the parasite load at the acute phase of T. cruzi infection influences the activation of the immune system and development of Chagas pathology at the late chronic phase of the disease.

Conhecemos o papel dos leucócitos no controle do Trypanosoma cruzi, mas ignoramos qual a contribuição das populações estruturais (miócitos, hepatócitos, etc). Estas populações poderiam sinalizar a presença do parasita e/ou ter ação efetora que poderia aumentar em resposta a citocinas como o IFN-g. Para verificar se as células estruturais respondem ao IFN-g contribuindo à destruição do T. cruzi, analisamos a infecção em quimeras WT/IFNgR-KO (WT/KO) geradas em camundongos IFNgR-KO reconstituídos com medula óssea de camundongos selvagens (WT), nas quais parte dos leucócitos é IFNgR+, mas as células não leucocitárias são deficientes. Quimeras WT/KO e quimeras controle WT/WT foram estudadas em relação à carga parasitária e inflamação. O parasitismo sistêmico e tissular é maior nas quimeras WT/KO do que nas quimeras WT/WT, mas inferior à dos controles IFNgR-KO. Nos animais WT/KO o aumento de ninhos no coração e músculo não se acompanha de aumento no infiltrado leucocitário. Os resultados sugerem que as células não leucocitárias contribuem à defesa frente ao T. cruzi. / Although we know the role played by leukocytes in Trypanosoma cruzi control, we ignore the contribution of structural cells (myocytes, hepatocytes, etc). These cells could signal the presence of the parasite and/or mediate an effector activity which could increase in response to cytokines, as IFN-g. To evaluate if non-leukocytes respond to IFNg, contributing to T. cruzi destruction, we analysed the infection in WT/IFNgR-KO (WT/KO) chimaeras, generated in IFNgR-KO mice reconstituted with bone marrow of wild-type mice (WT) so that most leukocytes are IFNgR+ but structural cells are deficient. WT/KO chimaeras and control WT/WT chimaeras were infected by T. cruzi and the parasite load and inflammation analyzed in various organs. Systemic and tissue parasite loads were higher in WT/KO chimeras than in WT/WT chimeras, but lower than in control IFNgR-KO mice. In WT/KO chimaeras the increased parasite load at the heart and skeletal muscle was not followed by an increase of inflammatory infiltrates. Our results suggest that structural cells contribute to T. cruzi control.