Orientador: Ana Elizabete Silva / Coorientador: Érika Cristina Pavarino / Banca: Claudia Aparecida Rainho / Banca: Claudia Regina Bonini Domingos / Resumo: O câncer colorretal (CCR) é um dos modelos da associação inflamação-câncer. Assim, polimorfismos em genes que desempenham um papel importante na suscetibilidade a doenças inflamatórias, como os receptores Toll-like (TLR2 e TLR4), podem ser alvos interessantes para estudos de possíveis marcadores moleculares para CCR. Objetivos: Avaliar a associação dos polimorfismos TLR2 -196 a -174del, TLR4 -1607 T/C (rs10759932) e TLR4 +896 A/G (rs4986790), e de fatores de risco (gênero, idade, tabagismo e etilismo) com o desenvolvimento de CCR; assim como determinar os níveis de expressão relativa desses genes no tecido tumoral e a influência dos polimorfismos funcionais sobre os níveis de expressão do RNAm. Materiais e Métodos: Foram genotipadas 434 amostras (194 de pacientes com CCR e 240 de indivíduos saudáveis) de DNA de leucócitos de sangue periférico ou de células de tecido tumoral (DNA e RNA), por meio das técnicas de PCR alelo-específico e PCR-RFLP. A análise de regressão logística múltipla foi utilizada para avaliar a associação dos polimorfismos com risco de CCR, aplicando os modelos log-aditivo, dominante e recessivo, ajustados para os fatores de risco. Para a quantificação relativa (RQ) do RNAm foi utilizada a técnica de PCR quantitativa em tempo real (qPCR) em 40 amostras de tecido tumoral. Resultados: A variante polimórfica TLR2 -196 a -174del foi associada com risco aumentado de desenvolvimento de CCR de acordo com os modelos dominante (OR=1,72, IC95%=1,03-2,89; p=0,038) e log-aditivo (OR=1,59, IC95%=1,02-2,48; p=0,039), porém para os polimorfismos TLR4 -1607 T/C e TLR4 +896 A/G não foi encontrada associação. Idade acima de 60 anos (OR=1,83, IC95%=1,26-2,90; p=0,003) e hábito etilista (OR=2,78, IC95%=1,68-4,60; p=0,000) também estão associados com risco... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Colorectal cancer (CRC) is one of the models of inflammation-cancer association. Thus, polymorphisms in genes that play a role in susceptibility to inflammatory diseases, such as Toll-like receptors (TLR2 and TLR4) may be interesting targets for studies of potential molecular markers for CRC. Objectives: To evaluate the association of polymorphisms TLR2 -196 to -174del, TLR4 -1607 T/C (rs10759932) and TLR4 +896 A/G (rs4986790) and risk factors (gender, age, smoking and drinking habits) with CRC development, as well as to determine the relative expression levels of these genes in tumor tissue and influence of functional polymorphisms on the levels of mRNA expression. Materials and Methods: We genotyped 434 samples (194 patients with CRC and 240 from healthy individuals) of DNA from peripheral blood leukocytes or tumor tissue cells (DNA and RNA), by PCR allele-specific or PCR -RFLP. The multiple logistic regression analysis was performed to evaluate the association between the polymorphisms with risk of CRC, applying the log-additive, dominant and recessive models, adjusted for risk factors. The relative quantification (RQ) of the mRNA was performed by the real time quantitative PCR (qPCR) technique in 40 tumor tissue samples. Results: The polymorphic variant TLR2 -196 to -174del was associated with increased risk of developing CRC according to both dominant (OR=1.72, 95%CI=1.03 to 2.89, p=0.038) and log-additive models (OR=1.59, 95%CI=1.02 to 2.48, p=0.039), but for the TLR4 -1607 T/C and TLR4 +896 A/G polymorphisms no association was found. Age above 60 years old (OR=1.83, 95%CI=1.26 to 2.90, p=0.003) and alcohol consumption (OR=2.78, 95%CI=1.68 to 4.60, p=0.000) are also associated with increased risk for developing of this cancer. Analysis of relative quantification of the mRNA showed a... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:44:52Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011 / O retalho musculocutâneo transverso do reto do abdome é um procedimento indicado para pacientes submetidas à reconstrução de mama. O seroma é uma complicação frequentemente encontrada na área doadora do retalho. OBJETIVO: Avaliar a incidência seroma na área doadora do retalho TRAM em que foram realizados os pontos de adesão com drenos, pontos de adesão sem drenos, comparando-se aos que não usaram os pontos de adesão e com drenos, em pacientes submetidas à reconstrução de mama. MÉTODOS: Foram realizadas 48 reconstruções de mama com retalho TRAM, bipediculado. As pacientes foram distribuídas aleatoriamente, por sorteio, em três grupos compostos por 16 pacientes cada: Grupo C, pacientes sem pontos de adesão, com uso de drenos de sucção; Grupo PD, com pontos de adesão, com o uso dos drenos de sucção; Grupo PSD, com pontos de adesão, sem o uso dos drenos de sucção. Para a investigação da formação do seroma foi realizado ultrassonografia (USG) no sétimo dia de PO e no 14º de PO, em todas as pacientes, em cincos regiões da parede abdominal: epigástrio, umbilical, hipogástrio, fossa ilíaca direita, fossa ilíaca esquerda. RESULTADOS: A avaliação pela USG apresentou maior incidência de seroma no Grupo C (p=0,008). No Grupo C houve presença de seroma na fossa ilíaca, enquanto que nos demais grupos não ocorreram nesse local (p=0,028). Não houve diferença entre o Grupo PD-PSD (p=1,00), em relação à importância da presença dos drenos. CONCLUSÃO: Os pontos de adesão realizados na área doadora do retalho TRAM são eficazes na diminuição da presença do seroma. / Objective: To evaluate the incidence of seroma formation with and without the use of quilting sutures or suction drains in the closure of the transverse rectus abdominis myocutaneous (TRAM) flap donor site in patients who underwent breast reconstruction. Summary Background Data: Seroma is a common morbidity at the donor site. The use of quilting sutures in the closure of the donor site causes the collapse of the dead space and may reduce seroma formation. Methods: In a prospective randomized double-blind clinical trial (ClinicalTrials.gov, number NCT01358786), 48 breast reconstructions were performed using the bipedicled TRAM flap. Patients were randomly allocated into three groups of 16 participants each: QS+DN group, use of quilting sutures and suction drains at the donor site; QS group, use of quilting sutures alone; and DN group, use of suction drains alone. Ultrasound examinations were performed to assess seroma formation in 5 regions of the abdominal wall (epigastric, umbilical, hypogastric, right iliac, and left iliac regions) on postoperative days 7 and 14. Results: Seroma volume was significantly higher in the DN group than in the QS+DN group (p=0.048), but no difference was found between the QS+DN and QS groups (p=1.00). The region of seroma formation was significantly correlated with the type of surgical procedure (p=0.028). Seroma formation was observed in the iliac regions of patients in the DN group, but not in the QS+DN and QS groups. Conclusion: Quilting sutures at the TRAM flap donor site were efficient in reducing seroma formation. / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:13Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-03-25 / Introdução: O retalho musculofasciocutâneo abdominal transverso do músculo reto do abdome (TRAM) pode apresentar necrose, sobretudo em pacientes com fatores de risco. A abdominoplastia representa um fator de risco devido à lesão de vasos perfurantes durante a sua execução. A perspectiva para a utilização de terapia gênica com o fator de crescimento do endotélio vascular (VEGF) com vetor plasmidial, estimulando a neovascularização do retalho TRAM após abdominoplastia, originou este estudo. Objetivo: Determinar o efeito do VEGF plasmidial na viabilidade do retalho TRAM, após a Abdominoplastia, em ratos. Métodos: Trinta e dois ratos da linhagem Wistar-EPM foram distribuídos em quatro grupos (n = 8). O retalho TRAM de pedículo caudal direito foi realizado em todos os animais e foi o único procedimento realizado no grupo I (TRAM). Nos grupos II (Abdominoplastia) e III (Plasmídeo), o procedimento de abdominoplastia foi realizado com injeção intramuscular de solução salina e vetor plasmidial sem o gene que codifica o VEGF, respectivamente. No grupo IV (VEGF), 100 microgramas de vetor plasmidial com o gene foram injetados no músculo reto do abdome. O retalho TRAM foi realizado após trinta dias da abdominoplastia. Resultados: Os grupos TRAM, Abdominoplastia, Plasmídeo e VEGF mostraram uma média de porcentagem de necrose de 24,65%, 62,49%, 57,80% e 18,33%, respectivamente (p = 0,001). A imuno-histoquímica do retalho TRAM com o anticorpo HHF-35 mostrou um aumento significante do número de vasos no grupo IV. Conclusão: O VEGF plasmidial aumentou a viabilidade e o número de vasos no retalho TRAM após a abdominoplastia em ratos. / Introduction: Transverse rectus abdominis musculocutaneous (TRAM) flap may present necrosis, in pacients with risk factors. Abdominoplasty is a risk factor due to disruption and transection of vascular perforators. Perspectives on naked plasmid DNA encoding vascular endothelial growth factor (VEGF) as gene therapy for angiogenesis and neovascularization of TRAM flap harvesting after abdominoplasty, originated this study. Objective: The objective of this study was to determine the effect of VEGF plasmid DNA in TRAM flap’s rat model viability after abdominoplasty. Methods: Thirty-two Wistar rats were distributed into four groups (n=8). The caudal pedicled TRAM flap was harvested in all animals and it was the only procedure in the group I (TRAM). In groups II (Abdominoplasty) and III (Plasmid), an abdominoplasty procedure was performed with intramuscularly injection of saline solution and plasmid DNA without VEGF gene, respectively. In Group IV (VEGF) 100 micrograms of plasmid encoding VEGF, was injected into the rectus muscle. TRAM flaps were harvested thirty days after abdominoplasty. Results: TRAM group, Abdominoplasty group, Plasmid group and VEGF group showed a mean percentage of necrosis of 24.65%, 62.49%, 57.80% and 18,33%, respectively (p=0,001). TRAM flap’s immunohistochemical analysis with antibody HHF-35 showed a significant increase in number of vessels in the group IV. Conclusion: The plasmid vector including VEGF after abdominoplasty improved TRAM flap viability and the number of the vessels in rats. / TEDE

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:45Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-11-24 / Introdução: O defeito na parede abdominal na área doadora do retalho musculocutâneo transverso do reto do abdome – retalho TRAM - é extenso, complexo e predispõe ao surgimento de hérnia, abaulamento e fraqueza abdominal. A reconstrução da parede abdominal deve ser anatômica e funcional, preferencialmente com tecidos autólogos, materiais de síntese resistentes e mínima tensão na sutura. As técnicas de descolamento músculo-aponeurótico seletivo da parede abdominal permitem uma reconstrução com tecido autólogo e tensão reduzida. Apesar dos relatos clínicos e avaliações em cadáveres, não foram encontrados estudos com a finalidade de comprovar, de maneira objetiva, a eficácia das manobras de descolamento músculo-aponeurótico seletivo na área doadora do retalho TRAM. Objetivo: Avaliar a resistência à tração dos componentes músculo-aponeuróticos na área doadora do retalho TRAM bipediculado. Métodos: No período de Maio de 2006 a Maio de 2008, foram estudadas 20 pacientes, com idade entre 29 e 58 anos, submetidas a reconstrução mamária com retalho TRAM bipediculado. A resistência à tração medial dos componentes músculo-aponeuróticos na área doadora do retalho TRAM foi medida, bilateralmente, com um dinamômetro analógico que foi fixado à margem lateral da lâmina anterior da bainha do músculo reto do abdome 3 cm inferior ao umbigo. Os coeficientes de tração foram comparados em três fases: Fase inicial sem qualquer incisão ou descolamento adicional na área doadora do retalho; Fase 1 incisão sobre a margem lateral da bainha do reto; Fase 2 descolamento do músculo oblíquo externo até a linha axilar anterior. Para a análise estatística foram utilizados os testes de Wilcoxon e o teste de t para dados emparelhados na comparação dos coeficientes de tração direito e esquerdo nas Fases inicial, 1 e 2. O teste de Friedman e teste post hoc de Dunn foram utilizados para comparar os coeficientes de tração das Fases inicial, 1, 2 no lado direito e no esquerdo. Resultados: Houve redução estatisticamente significante da resistência à tração após cada fase do descolamento seletivo. Conclusão: A resistência à tração medial dos componentes músculo-aponeuróticos na área doadora do retalho musculocutâneo transverso do reto do abdome diminuiu, após a incisão na margem lateral interna da bainha do músculo reto do abdome e após o descolamento do músculo oblíquo externo. / Introduction: The defect on the abdominal wall in the transverse rectus abdominis myocutaneos flap -TRAM flap- donor site is extensive, complex and predisposes the emergence of hernia, bulging and abdominal weakness. The closure of the abdominal wall must be anatomic and functional, preferably with autologous tissues, resistance synthesis material and minimal tension suture. The selective musculoaponeurotic undermining of the abdominal provide a abdominal wall closure with autologous tissue and reduced tension. Despite many clinical studies, no experimental researches prove the real efficacy of selective musculoaponeurotic undermining in the TRAM flap donor site. Objective: The aim of this study is to evaluate the resistance to medial traction of the musculoaponeurotic components in the bipedicled TRAM flap donor site. Methods: In the period of May of 2006 until May of 2008, 20 patients, with ages from 29 to 58 years old, submitted to mammary reconstruction with bipedicled TRAM flap were studied. The resistance to medial traction of the musculoaponeurotic components in the bipedicled TRAM flap donor site was measured with a dynamometer that was fixed in the lateral edge of the defect, 3 cm below the umbilicus. The traction coefficients obtained were compared in three situation: Initial Stage - with no incision or additional underminig in the flap donor site; Stage 1 - incision above the lateral edge of the rectus sheath; Stage 2 - undermining of the external oblique muscle. To the statistical analyses it was used the Wilcoxon and the t test to paired data in the comparison of the right and left traction coefficients in Initial Stage, Stage 1 and Stage 2. The Friedman test and the post hoc of Dunn test was used to compare traction coefficients in initial Stage, stage 1 and Stage 2, in the right and left sides. Results: There was a significant reduction of traction resistance after each stage of the dissection. Conclusion: The incision on the internal lateral edge of the rectus sheath and the external oblique undermining reduce the medial traction resistance of the musculoaponeurotic components in the TRAM flap donor site. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Nutrição / Made available in DSpace on 2013-06-25T22:51:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 310698.pdf: 1539368 bytes, checksum: ecc8afe3dfccb5dd69fca0b57a676a1c (MD5) / Células e mediadores inflamatórios são componentes essenciais do microambiente tumoral. A inflamação no câncer é sustentada pela produção de citocinas e quimiocinas pelas células imunes, tumorais e do estroma a partir da ativação de fatores de transcrição nestas mesmas células em resposta a estímulos de iniciação e promoção tumoral, ou ainda, de controle da progressão da doença (quimio e/ou radioterapia). As citocinas IL-1B, IL-6, IL-8, IL-10 e TNF-a apresentam papel bem definido na inflamação e seus valores estão elevados no câncer colorretal (CCR) quando comparados a indivíduos saudáveis. Entretanto, não se possui clareza quanto ao provável papel que a IL-17A possa exercer na inflamação relacionada ao câncer. Valores de PCR também encontram-se elevados no CCR, e se associam positivamente a malignidade da doença e a pior prognóstico clínico. Ácidos graxos poli-insaturados n-3 (AGPI n-3), em especial os ácidos graxos eicosapentaenóico (EPA) e docosahexaenóico (DHA) encontrados no óleo de peixe, podem modular a inflamação relacionada ao câncer através da produção de metabólitos lipídicos derivados destes, que apresentam atividade pró-resolução da inflamação. Sendo assim, este ensaio clínico prospectivo, controlado e randomizado foi conduzido com o objetivo de verificar se existem alterações sobre a produção de mediadores inflamatórios, o perfil de ácidos graxos plasmáticos e indicadores do estado nutricional, com a suplementação de 2 g/dia de óleo de peixe durante nove semanas no câncer colorretal. Também pretendeu-se avaliar os efeitos da suplementação sobre a toxicidade a quimioterapia. Onze pacientes adultos com diagnóstico histopatológico de câncer colorretal atendidos no Centro de Pesquisas Oncológicas de Florianópolis, CEPON-SC, e com indicação de tratamento quimioterápico, foram randomizados para dois grupos: a) GS - suplementado diariamente com 2 g/dia de óleo de peixe encapsulado durante nove semanas (n=6), ou, b) GC - controle sem placebo (n=5). Citocinas (TNF-a, IL-1B, IL-10 e IL-17A) foram avaliadas por ELISA; PCR pelo método turbidimétrico; albumina pelo método colorimétrico verde de bromocresol; ácidos graxos plasmáticos por cromatografia líquida de alta performance (HPLC); e indicadores do estado nutricional, por antropometria. Toxicidade a quimioterapia foi relatada em entrevista. Todos os desfechos foram avaliados no dia anterior a primeira quimioterapia e nove semanas depois. TNF-a, IL-1B, IL-10 e IL-17A, assim como o balanço pró/anti-inflamatório e albumina sérica, não tiveram alterações significativa entres os momentos e os grupos de estudo (P >0,05). PCR apresentou comportamento inverso nos grupos, reduzindo significativamente seus valores no GS, ao passo que se elevaram no GC (GS vs GC no 9 Semanas, p=0,045). Relação PCR/albumina indicou um aumento no risco de complicações inflamatórias e nutricionais no GC (de baixo e médio para alto risco) enquanto que permaneceu baixo no GS. Proporção plasmática de EPA e DHA aumentaram 1,8 e 1,4 vezes, respectivamente, enquanto que AA reduziu aproximadamente 0,6 vezes com a suplementação (Basal vs 9 Semana, p<0,05). Indivíduos do GS tenderam a ganhar ou preservar seu peso durante a quimioterapia. A suplementação pareceu não exercer influência sobre os relatos clínicos de toxicidade à quimioterapia. Estes resultados evidenciam que 2 g/dia de óleo de peixe durante nove semanas exercem efeitos positivos sobre a resposta inflamatória sistêmica e o estado nutricional durante a quimioterapia. / Cells and inflammatory mediators are essential components of the tumor microenvironment. The inflammation in cancer is supported by the production of cytokines and chemokines by immune, tumor and stroma cells, starting the activation of transcription factors in these same cells in response to stimulus of tumor initiation and promotion, or even control of disease progression (chemo and / or radiotherapy). The cytokines IL-1B, IL-6, IL-8, IL-10 and TNF-a have well-defined role in inflammation, and its values are elevated in colorectal cancer (CRC) compared to healthy subjects. However, one does not have clarity on the likely role that IL-17A may play in inflammation-related cancer. CRP levels also are high in CRC, and are positively associated with malignancy of the disease and worse clinical prognosis. Fatty acids polyunsaturated n-3 (n-3 PUFA), especially the fatty acids eicosapentaenoic acid (EPA) and docosahexaenoic acid (DHA) found in fish oil, can modulate cancer-related inflammation via the production of lipid metabolites derived therefrom which present activity pro-resolution of inflammation.Therefore, this prospective, controlled and randomized clinical trial was conducted in order to check whether there are changes on the production of inflammatory mediators, the plasma fatty acid profile and nutritional status indicaroes, with the supplementation of 2 g/day of fish oil for nine weeks in colorectal cancer patients. We also intended to evaluate the effects of supplementation on chemotherapy toxicity. Eleven adult patients with histological diagnosis of colorectal cancer treated at the Oncology Research Center of Florianopolis, CEPON-SC, and with indication of chemotherapy were randomized to two groups: a) SG - supplemented daily with 2 g/day of encapsulated fish oil for nine weeks (n = 6), or b) CG - control without placebo (n = 5). Cytokines (TNF-a, IL-1B, IL-10 and IL-17A) was assessed by ELISA; CRP by the turbidimetric method; albumin by colorimetric bromocresol green; plasmatic fatty acids by high performance liquid chromatography (HPLC); and indicators of nutritional status by anthropometry. Chemotherapy toxicity was reported in an interview.All outcomes were evaluated the day before the first chemotherapy and nine weeks later. TNF-a, IL-1B, IL-10 and IL-17A, pro/anti-inflammatory balance and serum albumin had no significant change as between the times and the study groups (P> 0.05). CRP showed opposite behavior in groups, significantly reducing their values in SG, while increased in CG (SG vs CG in 9 Weeks, p = 0.045). CRP/albumin ratio indicated an increased risk of inflammatory and nutritional complication in CG (low and moderate to high risk) whereas it remained low in SG. Plasma proportion of EPA and DHA increased 1.8 and 1.4 fold, respectively, whereas AA reduced approximately 0.6 times with supplementation (9 Weeks vs Basal, p <0.05). Individuals of SG tended to gain or maintain weight during chemotherapy. The fish oil supplementation did not seem to influence the clinical reports of toxicity to chemotherapy. These results indicate that 2 g/day of fish oil for nine weeks exert positive effects on systemic inflammatory response and nutritional status during chemotherapy in patients with colorectal cancer.

Made available in DSpace on 2015-12-10T14:23:58Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-08-28. Added 1 bitstream(s) on 2015-12-10T14:30:04Z : No. of bitstreams: 1 000853903.pdf: 918508 bytes, checksum: d82c80d39357f403a66df5582254910d (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O interferon alfa (IFN-α), um IFN do tipo I, se apresenta como uma citocina com grande potencial terapêutico, pois atua no combate direto às células tumorais, além de agir sobre a maturação de células dendríticas (DCs), que são células apresentadoras de antígenos profissionais e peças chave na elaboração da uma resposta antitumoral. Entretanto, a administração sistêmica de citocinas pode produzir toxicidade importante nos pacientes, de modo que a indução de sua produção in situ poderia representar uma forma de imunomodulação mais adequada. Assim, o objetivo deste estudo é verificar a ação de vetores lentivirais carregando o gene do IFN-α para transdução de células tumorais, permitindo assim a produção localizada de IFN-α, a fim de explorar, in vitro, seu potencial lítico e imunomodulatório sobre DCs. Vetores lentivirais carregando o gene do IFN-α humano (Lego-IFN) ou GFP (Lego-GFP) foram utilizados para a transdução in vitro de células de câncer colorretal. A transdução foi feita com diferentes multiplicidades de infecção (MOIs - 0.3, 1.0, 2.0, 4.0) para avaliarmos o efeito dose-dependente, seguido de co-cultura com DCs derivadas de monócitos de doadores saudáveis (DC-0.3, DC-1.0, DC-2.0, DC-4.0). Após 48h de co-cultura, as DCs foram avaliadas fenotípica e funcionalmente, através da análise dos marcadores de membrana por citometria de fluxo, capacidade de aloestimulação e de indução de linfócitos T citotóxicos (CTLs). Nós observamos que a transdução com Lego-GFP, mas não com Lego-IFN, aumentou a imunogenicidade das células tumorais, com aumento de expressão de CD54 e HLA-DR. A co-cultura de DCs com células tumorais transduzidas com Lego-IFN aumentou discretamente seu perfil de ativação, mas não seu potencial aloestimulatório in vitro. Observamos que linfócitos cultivados com DC-2.0 produziram níveis mais altos de IFN-γ, sugerindo a indução de um perfil Th1, enquanto que... / Interferon alpha (IFN-α) is a type I IFN with great therapeutic potential, since it is able to directly fight tumor cells and enhance the maturation of dendritic cells (DCs), the main antigen-presenting cells, required for an effective antitumor response. However, the systemic administration of cytokines can induce severe collateral effects. Therefore, the induction of cytokine secretion in situ should represent a more adequate approach for cytokine-based immunotherapy. Thus, the goal of this study was to induce IFN-α secretion by colon cancer cells by transduction with a lentivirus vector carrying the human IFN-α gene, followed by analysis of its immunomodulatory potential over DCs. Transduction was made with different multiplicities of infection (MOIs - 0.3, 1.0, 2.0 and 4.0) to evaluate the dose-dependent effects. Such cells were co-cultured with monocyte-derived DCs from healthy donors (DC-0.3, DC-1.0, DC-2.0 and DC-4.0). Forty-eight hours later, DCs were evaluated for their phenotype (surface activation/maturation markers) by flow cytometry, their ability to induce allogeneic response in a mixed leukocyte reaction (MLR) and effectiveness to induce cytotoxic T cells. We observed that transduction with Lego-GFP, but not Lego-IFN, increased tumor cells' immunogenicity with up-regulation of the markers CD54 and HLA-DR. Co-culture of Lego-IFN-transduced tumor cells with DCs slightly enhanced their activation phenotype but not their potential to stimulate T cell proliferation in vitro. Furthermore, we observed that lymphocytes cultured with DC-2.0 produced higher levels of IFN-γ, suggesting an induction of Th1 profile on T cells, while DC-GFP induced more IL-10 and IL-4. Additionally, DC-4.0 was more efficient in generating cytotoxic T lymphocytes (CTLs) that the control DC, however DC-GFP induced even more CD8+T cell proliferation. The enhancement of tumor cell immunogenicity and the superior induction of CLTs ...

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:05Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-26Bitstream added on 2014-06-13T18:53:59Z : No. of bitstreams: 1 succi_m_me_sjrp_parcial.pdf: 268320 bytes, checksum: 47bca06cf986a823daf8462cd47bd92b (MD5) Bitstreams deleted on 2015-03-16T11:30:15Z: succi_m_me_sjrp_parcial.pdf,Bitstream added on 2015-03-16T11:31:00Z : No. of bitstreams: 1 000714071.pdf: 1014657 bytes, checksum: b46cd9f9aefc594fb472e9cf8b775085 (MD5) / Alterações nos níveis de expressão de moduladores da resposta inflamatória, como a Anexina-A1 (AnxA1/ANXA1) e a Galectina-1 (Gal-1/LGALS1) têm sido observadas em diversos tipos de câncer. O câncer colorretal, um dos modelos da associação inflamação-câncer progride, na sequência, do epitélio normal para adenoma (AD) e adenocarcinoma (ADC). Objetivos: Avaliar a expressão gênica e proteica da AnxA1 e Gal-1 e o índice de proliferação celular (IP) em amostras de AD, ADC esporádico e das mucosas normais adjacentes, assim como investigar a ocorrência de correlação entre os níveis de expressão de ambos os mRNA e de associação com fatores de risco (idade, gênero, tabagismo e etilismo) e sítio anatômico de origem da lesão. Materiais e Métodos: As análises foram realizadas pelas técnicas de PCR quantitativa em tempo real (qPCR), para quantificar os níveis de mRNA de ANXA1 e LGALS1 em 70 biópsias de lesão (27AD e 43ADC) e 58 de mucosa normal adjacente (19 e 39 respectivamente), e de imuno-histoquímica, para caracterizar a expressão proteica da AnxA1 e Gal-1 em 25 biópsias de lesão (10AD e 15ADC) e 16 de mucosa normal adjacente (6 e 10 respectivamente), como também investigar o IP pela detecção do antígeno Ki-67 em 44 biópsias de lesão (19AD e 25ADC) e 16 de mucosa normal adjacente (8 em ambas). Resultados: A expressão relativa de ANXA1 apresentou-se elevada em comparação à mucosa normal tanto no AD (RQ=1,11; P=0,040), como no ADC (RQ=2,33; P<0,001). Contudo, LGALS1 apresentou expressão relativa aumentada apenas no ADC em comparação à mucosa normal (RQ=1,85; P<0,001), enquanto no grupo AD foi observada expressão basal (RQ=0,90; P=0,319). A comparação entre as lesões mostrou que ambos os genes apresentam-se significantemente mais expressos no ADC em comparação... / Changes in expression levels of inflammatory response modulators, such as Annexin-A1 (AnxA1/ANXA1) and Galectin-1 (Gal-1/LGALS1) have been observed in several types of cancer. Colorectal cancer, one of the models of inflammation-cancer association, progresses, in sequence, from normal epithelium to adenoma (AD) and adenocarcinoma (ADC). Objectives: To evaluate the gene and protein expression of AnxA1 and Gal-1 and the cell proliferation index (IP) in samples of AD, sporadic ADC and adjacent normal mucosa, as well as to investigate the occurrence of correlation between the mRNA expression levels and association with risk factors (age, gender, smoking and drinking habits) and anatomic site of lesion origin. Materials and Methods: The analyzes were performed by quantitative real-time PCR (qPCR) technique to quantify the levels of ANXA1 and LGALS1 mRNA in 70 biopsies of lesions (27AD and 43ADC) and 58 adjacent normal mucosa (19 and 39 respectively), and immunohistochemistry technique to characterize the protein expression of AnxA1 and Gal-1 in 25 biopsies of lesions (10AD and 15ADC) and 16 adjacent normal mucosa (6 and 10 respectively), and also to investigate the IP by detection of Ki-67 antigen in 44 biopsies of lesions (19AD and 25ADC) and 16 adjacent normal mucosa (8 in both). Results: The relative expression of ANXA1 showed higher compared to adjacent normal mucosa in both AD (RQ=1.11; P=0.040) and ADC (RQ=2.33; P<0.001). However, LGALS1 mRNA showed overexpression only in ADC compared to normal mucosa (RQ=1.85; P<0.001), while in AD group it was observed basal expression (RQ=0.90; P=0.319). The comparison between lesions showed that both genes were significantly more expressed in ADC compared to AD (ANXA1: P=0.039; LGALS1: P=0.019). In both lesion groups it was observed positive correlation between the mRNA expression of these genes... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:05Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-25Bitstream added on 2014-06-13T19:53:59Z : No. of bitstreams: 1 proenca_ma_me_sjrp.pdf: 521619 bytes, checksum: c975ed11c57b1194496e34885464bcca (MD5) / O câncer colorretal (CCR) é um dos modelos da associação inflamação-câncer. Assim, polimorfismos em genes que desempenham um papel importante na suscetibilidade a doenças inflamatórias, como os receptores Toll-like (TLR2 e TLR4), podem ser alvos interessantes para estudos de possíveis marcadores moleculares para CCR. Objetivos: Avaliar a associação dos polimorfismos TLR2 -196 a -174del, TLR4 -1607 T/C (rs10759932) e TLR4 +896 A/G (rs4986790), e de fatores de risco (gênero, idade, tabagismo e etilismo) com o desenvolvimento de CCR; assim como determinar os níveis de expressão relativa desses genes no tecido tumoral e a influência dos polimorfismos funcionais sobre os níveis de expressão do RNAm. Materiais e Métodos: Foram genotipadas 434 amostras (194 de pacientes com CCR e 240 de indivíduos saudáveis) de DNA de leucócitos de sangue periférico ou de células de tecido tumoral (DNA e RNA), por meio das técnicas de PCR alelo-específico e PCR-RFLP. A análise de regressão logística múltipla foi utilizada para avaliar a associação dos polimorfismos com risco de CCR, aplicando os modelos log-aditivo, dominante e recessivo, ajustados para os fatores de risco. Para a quantificação relativa (RQ) do RNAm foi utilizada a técnica de PCR quantitativa em tempo real (qPCR) em 40 amostras de tecido tumoral. Resultados: A variante polimórfica TLR2 -196 a -174del foi associada com risco aumentado de desenvolvimento de CCR de acordo com os modelos dominante (OR=1,72, IC95%=1,03-2,89; p=0,038) e log-aditivo (OR=1,59, IC95%=1,02-2,48; p=0,039), porém para os polimorfismos TLR4 -1607 T/C e TLR4 +896 A/G não foi encontrada associação. Idade acima de 60 anos (OR=1,83, IC95%=1,26-2,90; p=0,003) e hábito etilista (OR=2,78, IC95%=1,68-4,60; p=0,000) também estão associados com risco... / Colorectal cancer (CRC) is one of the models of inflammation-cancer association. Thus, polymorphisms in genes that play a role in susceptibility to inflammatory diseases, such as Toll-like receptors (TLR2 and TLR4) may be interesting targets for studies of potential molecular markers for CRC. Objectives: To evaluate the association of polymorphisms TLR2 -196 to -174del, TLR4 -1607 T/C (rs10759932) and TLR4 +896 A/G (rs4986790) and risk factors (gender, age, smoking and drinking habits) with CRC development, as well as to determine the relative expression levels of these genes in tumor tissue and influence of functional polymorphisms on the levels of mRNA expression. Materials and Methods: We genotyped 434 samples (194 patients with CRC and 240 from healthy individuals) of DNA from peripheral blood leukocytes or tumor tissue cells (DNA and RNA), by PCR allele-specific or PCR -RFLP. The multiple logistic regression analysis was performed to evaluate the association between the polymorphisms with risk of CRC, applying the log-additive, dominant and recessive models, adjusted for risk factors. The relative quantification (RQ) of the mRNA was performed by the real time quantitative PCR (qPCR) technique in 40 tumor tissue samples. Results: The polymorphic variant TLR2 -196 to -174del was associated with increased risk of developing CRC according to both dominant (OR=1.72, 95%CI=1.03 to 2.89, p=0.038) and log-additive models (OR=1.59, 95%CI=1.02 to 2.48, p=0.039), but for the TLR4 -1607 T/C and TLR4 +896 A/G polymorphisms no association was found. Age above 60 years old (OR=1.83, 95%CI=1.26 to 2.90, p=0.003) and alcohol consumption (OR=2.78, 95%CI=1.68 to 4.60, p=0.000) are also associated with increased risk for developing of this cancer. Analysis of relative quantification of the mRNA showed a... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2015-04-09T12:28:19Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-11-19Bitstream added on 2015-04-09T12:47:43Z : No. of bitstreams: 1 000815315_20160119.pdf: 119338 bytes, checksum: 5dd73d4aa0b35cd4f1e1bed4b422bee5 (MD5) Bitstreams deleted on 2016-01-19T16:32:48Z: 000815315_20160119.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2016-01-19T16:33:22Z : No. of bitstreams: 1 000815315.pdf: 1570467 bytes, checksum: 33e9ac560c01ca5c2a629a5b0bc77ba7 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Ocâncer de cólon e reto representa a terceira causa mais comum de câncer no mundo, sendo que pesquisas apontam ação benéfica dos probióticos, prebióticos e simbióticos no câncer de cólon. O objetivo desta pesquisa foi definir as etapas da carcinogênese de cólon que são mais afetadas pelo consumo de extrato aquoso de yacon, Lactobacillus acidophilus CRL 1014 e extrato aquoso de yacon + Lactobacillus acidophilus CRL 1014 em ratos induzidos quimicamente ao câncer de cólon com 1,2-dimetilhidrazina (DMH). Cem ratos Wistar machos foram divididos aleatoriamente em cinco tratamentos: G1: ratos não tratados; G2: DMH; G3 (probiótico): DMH + L. acidophilus CRL 1014; G4 (prebiótico): DMH + extrato aquoso de yacon; G5 (simbiótico): DMH + L. acidophilus CRL 1014 + extrato aquoso de yacon. Todos os tratamentos foram administrados via oral durante 8 meses, sendo que o L. acidophilus CRL 1014 foi administrado na quantidade de 3 mL/ kg de peso/ dia na concentração de 109 UFC/ mL e o extrato aquoso de yacon administrado foi calculado em relação ao seu conteúdo de frutooligossacarídeos (FOS). Os animais ingeriram 10% de FOS na dieta. A concentração de FOS no extrato aquoso de yacon foi previamente determinada utilizando kit enzimático (Megazyme®). Cinco animais pertencentes a cada grupo experimental foram sacrificados após a primeira administração de DMH, no terceiro, quinto e oitavo meses. Os tecidos foram submetidos à análise macroscópica, verificando-se o número e volume de massa tumorais, análise de focos de criptas aberrantes (FCA), análise histológica do tecido, ensaio cometa em amostras de sangue periférico, índice de apoptose, imunohistoquímica para p53 e Ki-67. Houve redução no dano no DNA nos tratamentos G3, G4 e G5. Os grupos G5 e G4 apresentaram aumento no índice de apoptose e diminuição da proliferação celular em relação ao G2 (p<0.05). Não houve diferença na marcação de p53 nos grupos G3, G4 e G5 ... / Colorectal cancer is the third commonest type of cancer in both sexes in the world. Research suggests beneficial effects of consuming probiotics and prebiotics on colon cancer. The aim of this project was to define the phases of the development of colon cancer that are more affected by aqueous yacon extract, Lactobacillus acidophilus CRL 1014 and aqueous yacon extract + Lactobacillus acidophilus CRL 1014 ingested by rats chemically treated with 1,2 dimethylhydrazine (DMH) to induce colon cancer. Hundred male Wistar rats were randomly divided into five treatments: G1: untreated rats; G2: DMH; G3 (probiotic): DMH + L. acidophilus CRL 1014; G4 (prebiotic): DMH + aqueous yacon extract; G5 (synbiotic): DMH + L. acidophilus CRL 1014 + aqueous yacon extract. All treatments were administered orally for 8 months, L. acidophilus CRL 1014 was administered at 109 CFU/ mL in 3 mL/ kg body weight and amount of aqueous yacon extract administered was calculated in relation of its fructooligosaccharides (FOS) content using fructan assay kit (Megazyme®). Animals ingested 10% of FOS in diet. Five animals from each treatment group were sacrificed after the first DMH injection and in the third, fifth and eighth months. Tissues were subjected to macroscopic analysis, measuring polyp number, volume and thickness, aberrant crypt foci (ACF) analysis, histological tissue analysis, comet assay in peripheral blood, apoptosis index, and colon samples from the first sacrifice were assessed for K-67 and p53 by immunohistochemical procedures. G3, G4 and G5 showed DNA damage reduction. G5 and G3 groups showed higher apoptosis index and decrease of Ki-67, compared to G2 (p<0.05). p53 staining did not differ among G2, G3, G4, G5. G5 showed fewer ACF number per colon in third month and in the fifth month G3, G4 and G5 showed a reduction of ACF number per colon relative to G2 (p<0.05). In the last month, G3, G4 and G5 showed no effect on ACF number per colon relative to G2..

Made available in DSpace on 2015-06-17T19:34:06Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-27. Added 1 bitstream(s) on 2015-06-18T12:47:25Z : No. of bitstreams: 1 000829940.pdf: 916653 bytes, checksum: 09926f007a66538b3dedd4cb298c6c6a (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / We have recently observed that treatment of colon tumor cells with low concentration of paclitaxel increased the expression of several genes associated with antigen-presenting machinery. Since 5-fluoruracil (5-FU) is the main antineoplastic agent for colon cancer, in this study we aimed to evaluate immunomodulatory properties analyzing: a) if the DC transfection with drug-treated tumor cells RNA, enhances the effectiveness of DC-based vaccine; b) if the modulatory effects of vaccine can be observed in vivo, and c) if the combination of DC with low dose chemotherapy schedule improves the antitumor responsiveness. To achieve these goals s.c. MC-38 bearing C57/Bl-6 mice were treated with DC sensitized with RNA from tumor cells pre-treated with the minimum effective concentration (MEC) of 5-fluorouracil. Our results of studies show that vaccination with tumor RNA-transfected DC delays the tumor growth, increases the percentage of CD86+ (35%) CD40+ (63%) and MHC class II+ (47%) DC and significantly increases the in vitro production of IFN-ɣ. These results suggest that treatment of tumor cells with 5-FU induces transcriptional changes that can be transfered to DC by RNA transfection, enhancing their ability to stimulate the antitumor response / CNPq: 555857/2010-07 / FAPESP: 2009/18331-8