Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-01-11T14:10:54Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Raquel Santos faria - 2015.pdf: 1687258 bytes, checksum: 06640eb0bb4f0895f2f882027093c950 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-01-11T14:11:18Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Raquel Santos faria - 2015.pdf: 1687258 bytes, checksum: 06640eb0bb4f0895f2f882027093c950 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-11T14:11:18Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Raquel Santos faria - 2015.pdf: 1687258 bytes, checksum: 06640eb0bb4f0895f2f882027093c950 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2014-03-30 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / The estimate of IARC indicates that occur 27 million new cases of cancer in the world by 2030. Due to the increase in the number of cancer cases in the world, there was intensification in the search for new chemotherapeutic agents that are effective for the treatment of cancer. The pharmaceutical industry therefore intensified the search for new metal-based drugs that offer the possibility of oral administration, reduction of serious side effects and reduced clinical costs. Due to the foregoing, we assessed the cytotoxic, genotoxic, interference on the cell cycle kinetics and mechanism of cell death of [RuCl(bcn)(phen)(dppb)]PF6, a new complex of ruthenium (II). Cytotoxicity was assessed by the MTT assay and it has shown that the compound tested showed inhibition of tumor cell viability in Sarcoma 180 (S180) in lower concentrations (IC50 8.89 μM ± 3.9) and cytotoxicity at higher concentrations for normal lymphocytes (IC50 17 μM). [RuCl(bcn)(phen)(dppb)]PF6 also showed a significant lethality to brine shrimp nauplii Artemia salina (CL50 300.31 μg mL). The comet assay indicated that the compound is not genotoxic for lymphocytes cells, because there was no significant increase in DNA damage in cells treated, and exhibits low genotoxicity to tumor cells (S180). The Ru complex 25 induced changes in cell cycle identified by flow cytometric test, increasing the number of cells in G0 / G1 phase and lowering synthesis phase within 24 hours of treatment. The complex induced an increase of cells positive for Annexin-V/PI for flow cytometric test, suggesting cell death by apoptosis. By Western Blot assay, it was possible to infere that the complex may be triggering cell death by caspase-independent intrinsic apoptosis. However, others specifics markers are needed to understand the cascade of events which the intrinsic apoptosis pathway that is effecting this process of cell death, and if only this pathway is being activated in apoptosis, thus elucidating the mechanism of action in cells S180. Thus, this compound showed cytotoxicity to tumor cells, high safety of use, due to absent genotoxicity in normal cells, low genotoxicity in tumor cell, and possibly acts by caspase-independent apoptosis intrinsic pathway. / A estimativa do IARC aponta que ocorrerão 27 milhões de novos casos de câncer no mundo até 2030. Em decorrência do aumento no numero de casos de câncer no mundo, houve uma intensificação na busca de novos quimioterápicos que sejam eficientes para o tratamento do câncer. A indústria farmacêutica, portanto, intensificou a busca por novas drogas à base de metal que ofereçam possibilidade de administração oral, diminuição de efeitos colaterais graves e redução de custos clínicos. Devido ao exposto, foi avaliado o potencial citotóxico, genotóxico, a interferência na cinética do ciclo celular e o mecanismo de morte celular de [RuCl(bcn)(phen)(dppb)]PF6,um novo complexo de rutênio (II). A citotoxicidade foi avaliada pelo teste do MTT e este mostrou que o complexo testado apresentou inibição da viabilidade na célula tumoral de Sarcoma 180 (S180) em concentrações baixas (IC50 8.89 μM ± 3.9) e uma citotoxicidade em concentração maior para linfócitos normais (IC50 17 μM). [RuCl(bcn)(phen)(dppb)]PF6 também apresentou letalidade significativa no teste de Artemia salina (CL50 300.31 μg mL). O teste cometa indicou que o composto não é genotóxico para células de linfócitos, pois não apresentou aumento significativo de dano ao DNA nos linfócitos tratados, e apresenta baixa genotoxicidade para as células tumorais (S180). O complexo [RuCl(bcn)(phen)(dppb)]PF6 induziu mudanças no ciclo celular, identificado pelo teste de citometria de fluxo, aumentando a quantidade de células na fase G0/G1 e diminuindo na fase de síntese em 24 horas de tratamento. O complexo também induziu o aumento da quantidade de células positivas para Anexina-V/PI pelo teste de citometria de fluxo, sugerindo morte celular por apoptose. Pelo teste de Western Blot, foi possível inferir que o complexo pode estar desencadeando morte celular por apoptose via intrínseca e independente de caspase. Porém, outros marcadores específicos são necessários para compreender qual a cascata de eventos de apoptose via intrínseca que está efetivando esse processo de morte celular, e se somente esta via está sendo ativada no processo de apoptose, elucidando assim, o mecanismo de ação nas células de S180. Portanto, este composto apresentou citotoxicidade para células tumorais, com alta segurança de uso, devido ausente genotoxicidade em células normais, baixa genotoxicidade em células tumorais, e que possivelmente atua via apoptose intrínseca e independente de caspases.

nÃo hà / Annona muricata, conhecida popularmente como gravioleira, à uma planta usada amplamente na medicina popular na forma de chÃs e infusÃes para o tratamento de diversas doenÃas, como o cÃncer. O objetivo deste trabalho foi avaliar a citotoxicidade e a atividade antitumoral do extrato acetÃnico das sementes de Annona muricata. O presente estudo foi realizado frente a um painel de 4 linhagens de cÃlulas tumorais, as cÃlulas HL-60, HCT-116, SF-295 e OVCAR-8 obtiveram os valores de IC50 0,1944Âg/mL, 0,1488Âg/mL, 0,0601Âg/mL e 0,0987 Âg/mL respectivamente. Na anÃlise frente a eritrÃcitos de camundongos obtivemos a IC50 de 9,23Âg/mL. O estudo de toxicidade aguda foi realizado in vivo e a DL50 foi de 310,2 mg/kg. O estudo da atividade hemolÃtica foi feita utilizando suspensÃo de eritrÃcitos de camundongos nÃo causando lise. O estudo da avaliaÃÃo antitumoral nas doses (7,5; 15 e 30mg/kg/dia por via oral) em camundongos transplantados com Sarcoma 180 revelou atividade em todas as doses, causando uma reduÃÃo de 48,41% do crescimento tumoral na maior dose. As anÃlises do fÃgado e rins revelaram que houve algumas alteraÃÃes no fÃgado, como esteatose e necrose focal sugerindo toxicidade hepÃtica nos camundongos tratados com o extrato acetÃnico das sementes da Annona muricata. Essas alteraÃÃes sÃo, entretanto, consideradas de possÃvel reversÃo do tecido com a descontinuidade do tratamento ou adequaÃÃo da dose. As anÃlises bioquÃmicas, revelaram um aumento nos nÃveis sÃricos da creatinina nas doses de 15 e 30 mg/kg/dia. Nos testes hematolÃgicos nÃo houve alteraÃÃes nos grupos tratados com o extrato acetÃnico das sementes da Annona muricata. Os resultados mostraram poucas alteraÃÃes dos animais nos parÃmetros fÃsicos, bioquÃmicos e hematolÃgicos, mostrando que o extrato à bem tolerado e pouco tÃxico. / Annona muricata, popularly known as soursop, is a plant widely used in folk medicine as teas and infusions for the treatment of various diseases such as cancer. The aim of this study was to cytotoxicity evaluate the antitumor activity of the acetone extract of the seeds of Annona muricata. This study was conducted with a panel of four tumor cell lines, HL-60 cells, HCT-116, SF-295 and OVCAR-8 IC50 values obtained 0.1944 Âg/ ml, 0.1488 Âg/mL, 0.0601 Âg/mL and 0.0987 Âg/mL, respectively. In the analysis across from erythrocytes of mice obtained the IC50 of 9.23 Âg/mL. The acute toxicity study was conducted in vivo and DL50 was 310.2 mg/kg. The study of hemolytic activity was performed using cell suspension from mice without causing lysis. The evaluation study antitumor doses (7.5, 15 and 30mg/kg/day orally) in mice transplanted with Sarcoma 180 showed activity at all doses, causing a reduction of 48.41% of tumor growth at the highest dose . Analyses of liver and kidney revealed that there were some changes in the liver, such as steatosis and focal necrosis suggesting liver toxicity in mice treated with acetone extract of the seeds of Annona muricata. These changes are, however, considered the possible reversal of the tissue with treatment discontinuation or dose adjustment. Biochemical analysis revealed an increase in serum creatinine at doses of 15 and 30 mg/kg/day. In haematological tests there were no changes in the groups treated with acetone extract of the seeds of Annona muricata. The results showed little change in physical parameters of the animal, biochemical and hematological showing that the extract is well tolerated and less toxic

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de NÃvel Superior / Annona muricata, conhecida popularmente como gravioleira no Brasil, à uma planta usada amplamente na medicina popular na forma de chÃs e infusÃes para o tratamento de diversas doenÃas, incluindo o cÃncer. O trabalho teve como objetivo avaliar o perfil toxicolÃgico, genotoxicolÃgico e antitumoral do extrato acetÃnico das folhas de Annona muricata e foi realizado utilizando ensaios de curta e longa duraÃÃo in vivo e in vitro. Inicialmente foi avaliada a citotoxicidade in vitro contra vÃrias linhagens tumorais humanas, havendo resposta tÃxica a muitas delas, principalmente K-562, HCT-8, HCT-116 e SF-295 com concentraÃÃo inibitÃria mÃdia (CI50) de 0,1452 Âg/mL, 0,2457 Âg/mL, 0,2956 Âg/mL e 0,2191 Âg/mL respectivamente. Os estudos de toxicidade aguda foram realizados in vivo e a dose letal mÃdia (DL50) foi de 310,2 mg/Kg. Os estudos de toxicidade crÃnica foram realizados utilizando-se as doses 12,5 mg/Kg, 25 mg/Kg e 50 mg/Kg do extrato acetÃnico. Os resultados mostraram poucas alteraÃÃes nos animais nos parÃmetros fisiolÃgicos, bioquÃmicos e hematolÃgicos, mostrando que o extrato à bem tolerado e pouco tÃxico. Os estudos de genotoxicidade foram realizados in vivo. Os animais foram tratados, por via oral, com trÃs doses do extrato acetÃnico (12,5 mg/Kg, 25 mg/Kg e 50 mg/Kg). ApÃs 24 h e 48 h, o sangue perifÃrico e a medula Ãssea foram coletados. No ensaio do cometa nÃo houve detecÃÃo de nenhum cometa de grau elevado, sendo as doses testadas estatisticamente semelhantes ao controle negativo. No ensaio do micronÃcleo, todas as doses testadas do extrato acetÃnico nÃo induziram a formaÃÃo de micronÃcleos, sendo semelhantes estatisticamente em relaÃÃo ao controle negativo, ao contrÃrio do observado no controle positivo. Os ensaios antitumorais mostraram que o extrato apresenta atividade inibidora do crescimento tumoral, tanto em ratos, no modelo do carcinossarcoma de Walker 256, como em camundongos, no modelo Sarcoma 180. Todos esses resultados indicam que o extrato acetÃnico das folhas de Annona muricata apresenta poucas aÃÃes tÃxicas e significante atividade inibidora do crescimento tumoral nos modelos testados / Annona muricata, popularly known as soursop in Brazil, is a plant widely used in vernacular medicine as teas and infusions for the treatment of various diseases, including cancer. This study aimed to evaluate the toxicological, genotoxicological and antitumor profile of the acetone extract from the leaves of Annona muricata and test it using short-and long-term in vivo and in vitro assays. We initially assessed in vitro cytotoxicity against several human tumor cell lines. There was a toxic response to many of them, especially K-562, HCT-8, HCT-116 and SF-295 with average inhibitory concentration (IC50) of 0.1452 Âg/mL, 0.2457 Âg/mL, 0.2956 Âg/ml and 0.2191 Âg/mL respectively. Acute toxicity studies were performed in vivo and the average lethal dose (LD50) was 310.2 mg/kg. Chronic toxicity studies were performed using doses of 12.5 mg/kg, 25 mg/kg and 50 mg/kg of acetone extract. Results showed little change in animalsâ physical, biochemical and hematological parameters, showing that the extract is well tolerated and not very toxic. Genotoxicity studies were performed in vivo. Animals were given three oral doses of the acetone extract (12.5 mg/kg, 25 mg/kg and 50 mg/kg). After 24 and 48 hours peripheral blood and bone marrow were collected. In the comet assay no high grade comet was detected and tested doses were statistically similar to the negative control. In the micronucleus test, none of the tested acetone extract doses induced the formation of micronuclei. They were statistically similar to the negative control, unlike what was observed in the positive control. Antitumor testing showed that the extract has tumor growth inhibitory activity, both in rats, in the Walker 256 carcinosarcoma model, and in mice, in the Sarcoma 180 model. All such results indicate that the acetone extract from the leaves of Annona muricata has little toxic action and significant activity inhibiting tumor growth in the models we tested.

Made available in DSpace on 2014-06-12T16:28:31Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo2095_1.pdf: 1057308 bytes, checksum: 50b74bfcc18e94fbc43b4e4cb86c8001 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2008 / A família Meliaceae compreende 50 gêneros que estão distribuídos predominantemente nos trópicos de todo mundo. São plantas geralmente arbóreas, as flores são pequenas em inflorescência, hermafroditas. A espécie Azadirachta indica A. Juss, conhecida popularmente por nim e amargosa é originária da Ásia. Diferentes partes da planta apresentam propriedades medicinais como atividade antiviral, antibacteriana, antifúngica, antidiabética, antiinflamatória, antiséptica, contra doenças de pele, anti-úlcera e antitumoral. O nim apresenta atividade contra insetos causando repelência e atraso no desenvolvimento. Este trabalho teve por objetivo avaliar a toxicidade aguda (CL50 e DL50) e as atividades farmacológicas (antiinflamatória e antitumoral) em roedores do extrato hidroalcoólico das folhas de A. indica. Foram realizados ensaios de toxicidade aguda, por via oral, observação das alterações comportamentais resultantes da administração de cada dose. Os animais tratados apresentaram reações tóxicas, sendo comportamentais estimulantes os efeitos mais pronunciados. Em todas as doses administradas não houve óbito dos animais. De acordo com os resultados obtidos pode-se concluir que o extrato hidroalcoólico das folhas de A. indica possui baixa toxicidade quando administrado por via oral. Também foi avaliada a concentração letal 50% (CL50) em larvas de Artemia salina e o valor encontrado da CL50 foi de 617,25537 μg/ml indicando que o extrato possui toxicidade moderada em larvas de Artemia salina. Na avaliação da atividade antiinflamatória foi utilizado o modelo de edema de pata induzido por carragenina em ratos, com administração por via oral. Os resultados obtidos indicam que o extrato das folhas de A.indica apresenta atividade edematogênica, sendo capaz de aumentar o tamanho do edema durante o processo inflamatório. No estudo da atividade antitumoral, o extrato hidroalcoólico das folhas de A. indica foi analisado frente às linhagens Carcinoma de Ehrlich e Sarcoma 180. O extrato produziu uma redução dos tumores, com 63,8% e 18,01% (não significativa) de inibição tumoral para os animais portadores de Carcinoma de Ehrlich tratados com doses de 250 e 500mg/kg/v.o respectivamente e para dose de 1000mg/kg/v.o houve um aumento não significativo dos pesos dos tumores. Para o animais portadores de Sarcoma 180 não foi observada inibição tumoral significativa para as doses de 250, 500 e 1000mg/kg/v.o

Made available in DSpace on 2014-06-12T16:29:32Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo2150_1.pdf: 1894355 bytes, checksum: 6f7ca672c3632bec7bb7871d1166a10e (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2009 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / As plantas contêm princípios ativos capazes de curar diversas doenças, no entanto, são poucos os estudos que possibilitam uma visão ampla da grande diversidade das espécies com propriedades terapêuticas. Himatanthus drasticus (Janaguba) pertence à família Apocynaceae, é de ocorrência restrita ao Brasil, é usada popularmente como antitumoral, antifúngica, vermífuga, antianêmica e diversos males estomacais. No Nordeste é bastante utilizado no tratamento do câncer, porém quase sem registro na literatura. Este estudo avaliou o perfil fitoquímico, a toxicidade aguda e a atividade antitumoral in vivo frente aos tumores Sarcoma 180 e Carcinoma de Ehrlich do látex e do extrato metanólico das folhas de Himatanthus drasticus. O material foi coletado na Chapada do Araripe no município de Jardim-CE. A determinação da toxicidade aguda foi realizada segundo a metodologia da OECD 423 e o transplante dos tumores sólidos Sarcoma 180 e Carcinoma de Ehrlich foram realizados de acordo com Stock. Todos os ensaios foram realizados por via oral. No estudo fitoquímico para o extrato metanólico das folhas constatou-se a presença de flavonóides (quercetina e rutina), terpenos, proantocianidinas condensadas e leucoantocianidinas. No látex, foi encontrado terpenos (-sitosterol e -amirina). No ensaio de toxicidade aguda tanto para o extrato metanólico das folhas como para o látex foram verificadas reações estimulantes seguidas por reações depressoras sobre o Sistema Nervoso Central. Não houve óbitos em nenhuma das doses testadas. A atividade antineoplásica frente ao Sarcoma 180 do extrato metanólico das folhas apresentou uma inibição tumoral significativa em relação ao grupo controle nas doses de 300mg/Kg e 400mg/Kg de peso do animal com um percentual de inibição de 67,7% e 68% respectivamente. Já para o Carcinoma de Ehrlich apresentou inibição tumoral significativa para todas as doses testadas chegando a 86,8% para a dose de 300mg/Kg. Para a avaliação antitumoral frente ao Carcinoma de Ehrlich, apenas os animais tratados com a maior dose do látex apresentou redução significativa dos tumores chegando a um percentual de 76,9% de inibição. Para o Sarcoma 180, apesar de ter apresentado uma redução dos pesos médios dos tumores, o látex não apresentou resultado estatisticamente significativo. Na análise histológica foram observadas alterações a nível renal e hepático principalmente para os animais tratados com o látex

Submitted by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2015-03-23T21:19:32Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Wanessa Carvalho Pires - 2014.pdf: 2557007 bytes, checksum: e5dedf168f3f361061e50ee3f6c2466e (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2015-03-23T21:20:57Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Wanessa Carvalho Pires - 2014.pdf: 2557007 bytes, checksum: e5dedf168f3f361061e50ee3f6c2466e (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-23T21:20:57Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Wanessa Carvalho Pires - 2014.pdf: 2557007 bytes, checksum: e5dedf168f3f361061e50ee3f6c2466e (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2014-03-12 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / It is estimated that 27 million new cancer cases will occur in the world until 2030. Due to this high number of cases, researches for new chemotherapeutic agents that are efficient for the malignant neoplastic disease treatment have intensified. Ruthenium complexes have been highlighted from those metal complexes that are being contemplated for the cancer treatment, because they exhibit the characteristics of selectivity for tumor cells and thus be less toxic to normal cells. Consequently, we evaluated the cytotoxic potential of six new complexes of ruthenium (II) and two of those with promising activity were selected to assess the genotoxic potential, the mechanism of death and interference on cell cycle dynamics. The cytotoxicity of these complexes was evaluated by MTT assay showing that for all six ruthenium complexes there was a reduction of viability of the tumor cells K562 and S-180 at low concentrations and cytotoxicity at higher concentrations to normal cells L-929 and lymphocyte. The ruthenium II complexes Ru 05 and Ru 08 got the best resolutions in the MTT assay and were selected for testing genotoxicity and mechanism of death. Data indicate that the Ru 05 and 08 induced changes in cell cycle through test performed by flow cytometry, increasing the number of cells in G0/G1 phase and decreasing into the synthesis phase at 24 and 48 hours of exposure. For the complex Ru 05 there was an increase in the number of cells in sub-G1 phase, which is indicative of apoptosis and cell damage, yet, neither the complex Ru 05 nor the Ru 08 showed significant DNA damage in the Comet assay during 24 and 48 hours. Both complexes increased the number of positive cells for Annexin-V, however the complex Ru 05 had induced changes in mitochondrial membrane potential, increased expression of the gene Bax, Tp53 and Caspase 9 and decreased the amount of active anti-apoptotic Bcl2 protein in the S-180 cells, leading to a reasonable supposes that this complex may cause the triggering of the cell death by apoptosis through intrinsic caspase-dependent manner. On the other hand, the complex Ru 08 did not statistically alter the mitochondrial membrane potential. Ru 08 increased the gene expression of Caspase 3, 8, 9 and Tp53 and the amount of active Caspase-3 protein in the S-180 treated cells, and decreased the amount of anti-apoptotic Bcl2 protein, which allows inferring that this complex may be acting by the extrinsic pathway. Despite the new ruthenium complexes studied have shown a promising future as chemotherapy for cancer treatment, other specific markers are needed to understand the cascade of events which the extrinsic apoptosis pathway is being triggered, elucidating the mechanism of action in S-180 cell line. / Até 2030 estima-se que ocorrerão 27 milhões de novos casos de câncer no mundo. Em decorrência deste alto número de casos, estudos em busca de novos quimioterápicos que sejam eficientes para o tratamento do câncer têm se intensificado. Os complexos de rutênio têm-se destacado dentre os complexos de metais que têm sido estudados para o tratamento do câncer por demonstrarem características de seletividade para as células tumorais e, consequentemente, serem menos tóxicos para as células normais. Diante disso foi avaliado o potencial citotóxico de seis novos complexos de rutênio (II) e dois desses com atividade promissora foram selecionados para avaliar o potencial genotóxico, o mecanismo de morte e a interferência na cinética do ciclo celular. A citotoxicidade foi avaliada pelo teste do MTT que mostrou que todos os complexos testados apresentaram inibição da viabilidade nas células tumorais de S-180 e K562 em concentrações baixas e uma citotoxicidade em concentrações maiores para células normais de L-929 e linfócitos humanos. Os complexos de rutênio denominados Ru 05 e Ru 08 obtiveram os melhores resultados no teste de MTT e foram selecionados para os testes de mecanismo de morte celular e de genotoxicidade. Os dados indicaram que os Ru 05 e Ru 08 induziram mudanças no ciclo celular através do teste realizado por citometria de fluxo, aumentando a quantidade de células na fase G0/G1 e diminuindo na fase de síntese em 24 e 48 horas de tratamento. Para o Ru 05 houve um aumento na quantidade de células na fase Sub-G1, levando ao indicativo de morte celular por apoptose e dano celular, entretanto, nem o Ru 05 quanto o Ru 08 apresentaram dano significativo ao DNA no teste Cometa em 24 e 48 horas. Ambos os complexos induziram o aumento da quantidade de células positivas para Anexina-V pelo teste de citometria de fluxo, sugestivo de morte celular por necrose ou apoptose, no entanto, o Ru 05 induziu alteração no potencial de membrana mitocondrial, aumentou a expressão dos genes Bax, Caspase 9 e Tp53 realizado por PCR em tempo real e diminuiu a quantidade da proteína anti-apoptótica Bcl2 ativa nas células de S-180, levando a inferir que o complexo pode estar desencadeando morte celular por apoptose via intrínseca dependente de caspase. Já o Ru 08 não alterou estatisticamente o potencial de membrana mitocondrial celular, aumentou a expressão dos genes de Caspase 3, 8, 9 e Tp53, reduziu a quantidade de proteína anti-apoptótica Bcl2 ativa e aumentou a quantidade da proteína Caspase 3 ativa nas células de S-180 tratadas, permitindo inferir que esse complexo pode estar atuando pela via extrínseca. Porém, outros marcadores específicos são necessários para compreender qual a cascata de eventos da apoptose via extrínseca que está sendo necessária para efetivar esse processo de morte celular, elucidando o mecanismo de ação nas células de S-180 desses novos complexos de rutênio estudados, que se mostraram promissores quimioterápicos no tratamento do câncer.

Choi Pui-yu. / Thesis (M.Phil.)--Chinese University of Hong Kong, 2002. / Includes bibliographical references (leaves 113-123). / Abstracts in English and Chinese. / Abstract --- p.i / Abstract (Chinese Version) --- p.iii / Acknowledgements --- p.v / List of Abbreviations --- p.vi / Table of Contents --- p.viii / List of Tables --- p.xii / List of Figures --- p.xiii / Chapter Chapter 1 --- Introduction --- p.1 / Chapter Chapter 2 --- Literature Review / Chapter 2.1 --- Mushroom Polysaccharides with Antitumor Activities --- p.7 / Chapter 2.1.1 --- Antitumor β-Glucans --- p.7 / Chapter 2.1.2 --- Antitumor Heteroglycans --- p.9 / Chapter 2.1.3 --- Antitumor Polysaccharide-Protein Complexes --- p.12 / Chapter 2.2 --- Antitumor Activities and Structural Characteristics of Mushroom Polysaccharides --- p.15 / Chapter 2.3 --- Antitumor Effects of Mushroom Polysaccharides In Vitro --- p.19 / Chapter 2.4 --- Antitumor Effects of Mushroom Polysaccharides In Vivo --- p.21 / Chapter 2.5 --- Immunomodulatory Activities --- p.24 / Chapter 2.6 --- Activation of Cytokines by Mushroom Polysaccharides --- p.28 / Chapter 2.7 --- Induction of Nitric Oxide Synthase by Mushroom Polysaccharides --- p.32 / Chapter 2.8 --- Tremella aurantialba --- p.34 / Chapter Chapter 3 --- Materials and Methods --- p.35 / Chapter 3.1 --- Extraction --- p.35 / Chapter 3.1.1 --- Extraction of Crude Tremella aurantialba Polysaccharide --- p.35 / Chapter 3.1.2 --- Fractionation --- p.38 / Chapter 3.1.3 --- Polysaccharide and Protein Content Determination --- p.38 / Chapter 3.1.3.1 --- Phenol-Sulfuric Assay --- p.39 / Chapter 3.1.3.2 --- Lowry-Folin Method --- p.39 / Chapter 3.1.4 --- Gas Chromatography (GC) --- p.40 / Chapter 3.1.5 --- Modified Carbazole Assay --- p.41 / Chapter 3.1.6 --- High Performance Liquid Chromatography (HPLC) --- p.42 / Chapter 3.2 --- In Vitro Studies --- p.43 / Chapter 3.2.1 --- Maintenance of Cell Lines --- p.43 / Chapter 3.2.2 --- Effect on Cancer Cell Lines --- p.43 / Chapter 3.2.2.1 --- Trypan Blue Exclusion Methods --- p.44 / Chapter 3.2.2.2 --- MTT Assay --- p.44 / Chapter 3.2.3 --- Effect on Normal Cell Line --- p.45 / Chapter 3.2.4 --- Coulter Counter --- p.46 / Chapter 3.3 --- In Vivo Studies --- p.47 / Chapter 3.3.1 --- Animals --- p.47 / Chapter 3.3.2 --- Maintenance of Sarcoma 180 Cell Line --- p.47 / Chapter 3.3.3 --- Effect of TAP Fractions on Sarcoma 18 Solid Tumor --- p.48 / Chapter 3.3.3.1 --- Injection of TAP Fractions 24 h After Transplantation --- p.48 / Chapter 3.3.3.2 --- Injection of TAP Fractions 72 h After Transplantation --- p.49 / Chapter 3.4 --- Effect of TAP Fractions on Modulating mRNA Expression of Cytokines and Nitric Oxide Synthase --- p.51 / Chapter 3.4.1 --- Treatment of Mice --- p.51 / Chapter 3.4.2 --- Isolation of Splenocytes and Peritoneal Exduate Cells --- p.51 / Chapter 3.4.3 --- Extraction of Total mRNA from Splenocyte and Peritoneal Exduate Cells --- p.52 / Chapter 3.4.4 --- Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction (RT-PCR) --- p.53 / Chapter 3.4.4.1 --- Reverse Transcription --- p.53 / Chapter 3.4.4.2 --- Polymerase Chain Reaction --- p.56 / Chapter 3.4.5 --- DNA Sequencing --- p.57 / Chapter 3.5 --- Statistical Analysis --- p.58 / Chapter Chapter 4 --- Results --- p.59 / Chapter 4.1 --- Isolation and Characterization of TAP Fractions --- p.59 / Chapter 4.1.1 --- Percentage Yield of TAP Fractions --- p.59 / Chapter 4.1.2 --- Polysaccharide and Protein Content of TAP Fractions --- p.59 / Chapter 4.1.3 --- Relative Monosaccharide Contents in TAP Fractions --- p.60 / Chapter 4.1.4 --- Results of HPLC --- p.60 / Chapter 4.2 --- Effects of TAP Fractions In Vitro --- p.69 / Chapter 4.2.1 --- Effects of TAP Fractions on Suspension Cancer Cell Lines --- p.69 / Chapter 4.2.2 --- Effects of TAP Fractions on Adhesion Cancer Cell Lines --- p.69 / Chapter 4.2.3 --- Effects of TAP Fractions on Normal Cell Line --- p.70 / Chapter 4.2.4 --- Effect of TAP 2 on HL-60 Cell Line as Evaluated by Coulter Counter --- p.70 / Chapter 4.3 --- Antitumor Effect of TAP Fractions In Vivo --- p.78 / Chapter 4.4 --- Effect of TAP Fractions on Modulating mRNA Expressions of Cytokines and Nitric Oxide Sythase (NOS) --- p.83 / Chapter 4.4.1 --- Results of RT-PCR --- p.83 / Chapter 4.4.2 --- Sequencing --- p.84 / Chapter Chapter 5 --- Discussion --- p.91 / Chapter 5.1 --- Characterization of TAP Fractions --- p.91 / Chapter 5.2 --- Antitumor Effects of TAP Fractions In Vitro --- p.96 / Chapter 5.3 --- Furhter Study --- p.109 / Chapter Chapter 6 --- Conclusion --- p.111 / References --- p.113

Poon Shuk-ching. / Thesis (M.Phil.)--Chinese University of Hong Kong, 2002. / Includes bibliographical references (leaves 113-125). / Abstracts in English and Chinese. / Acknowledgements --- p.i / Abstract --- p.ii / Abstract (Chinese Version) --- p.iv / Table of Contents --- p.vi / List of Tables --- p.x / List of Figures --- p.xi / List of Abbreviations --- p.xiii / Chapter Chapterl 1 --- ntroduction --- p.1 / Chapter Chapter 2 --- Literature Review --- p.5 / Chapter 2.1 --- Mushroom Polysaccharides From Basidiomycetes --- p.5 / Chapter 2.1.1 --- Antitumor and Immunomodulatory Activity --- p.6 / Chapter 2.1.2 --- Antiviral Activity --- p.9 / Chapter 2.1.3 --- Hypoglycermic Activity --- p.11 / Chapter 2.1.4 --- Free Radical Scavenging Activity --- p.11 / Chapter 2.2 --- Mushroom Dictyophora indusiata --- p.13 / Chapter 2.2.1 --- Nutritional Value --- p.13 / Chapter 2.2.2 --- Structural Characteristic of Dictyophora indusiata Polysaccharides --- p.14 / Chapter 2.2.3 --- Biological Activity --- p.16 / Chapter 2.3 --- In vivo Antitumor Study --- p.19 / Chapter 2.4 --- Induction of Cytokines Production in Immune System --- p.21 / Chapter 2.5 --- In vitro Antitumor Study --- p.25 / Chapter 2.6 --- Cell Cycle Regulation --- p.28 / Chapter Chapter 3 --- Materials & Methods --- p.34 / Chapter 3.1 --- Extraction --- p.34 / Chapter 3.1.1 --- Extraction of Dictyophora indusiata Polysaccharides --- p.34 / Chapter 3.1.2 --- Purification of Dictyophora indusiata Polysaccharides --- p.35 / Chapter 3.1.2.1 --- Preparation of DEAE-cellulose Ion Exchanger --- p.35 / Chapter 3.1.2.2 --- Fractionation --- p.35 / Chapter 3.2. --- Characterization of Dictyophora indusiata Polysaccharides --- p.39 / Chapter 3.2.1 --- Polysaccharide Content Determination --- p.39 / Chapter 3.2.2 --- Protein Content Determination --- p.39 / Chapter 3.2.3 --- Gas Chromatography (GC) --- p.40 / Chapter 3.2.4 --- Uronic Acid Content Determination --- p.42 / Chapter 3.2.5 --- High Performance Liquid Chromatography (HPLC) --- p.43 / Chapter 3.3 --- In vivo Studies --- p.44 / Chapter 3.3.1 --- Animals --- p.44 / Chapter 3.3.2 --- Maintenance of Sarcoma 180 Cell Line --- p.44 / Chapter 3.3.3 --- Effect of DI3 Fraction on Sarcoma 180 Solid Tumor --- p.45 / Chapter 3.3.4 --- Effect of DI3c Fraction on Tumor Necrosis Factor-Alpha (TNF-α) and Interleukin 2 (IL-2) Production --- p.47 / Chapter 3.3.4.1 --- Treatment of Mice --- p.47 / Chapter 3.3.4.2 --- Preparation of Mouse Serum --- p.47 / Chapter 3.3.4.3 --- Enzyme-linked Immunosorbent Assay (ELISA) for TNF-α Production --- p.48 / Chapter 3.3.4.4 --- Enzyme-linked Immunosorbent Assay (ELISA) for IL-2 Production --- p.49 / Chapter 3.4 --- In vitro Studies --- p.51 / Chapter 3.4.1 --- Maintenance of Cell Lines --- p.51 / Chapter 3.4.2 --- Effect on Cancer Cell Lines --- p.52 / Chapter 3.4.3 --- Cytotoxicity on Normal Cell Line --- p.52 / Chapter 3.4.4 --- Trypan Blue Exclusion Method --- p.53 / Chapter 3.4.5 --- MTT Assay --- p.54 / Chapter 3.4.6 --- BrdU Incorporation --- p.55 / Chapter 3.5 --- Statistical Analysis --- p.56 / Chapter Chapter 4 --- Results --- p.57 / Chapter 4.1 --- Extraction and Fractionation of Polysaccharides from Dictyophora indusiata --- p.57 / Chapter 4.1.1 --- Percentage Yield of Crude DI Polysaccharides --- p.57 / Chapter 4.1.2 --- Percentage Yield of DI3 Fractions --- p.57 / Chapter 4.2 --- Characterization of DI3 Fractions --- p.62 / Chapter 4.2.1 --- Polysaccharide and Protein Contents of DI3 Fractions --- p.62 / Chapter 4.2.2 --- Relative Monosaccharide and Uronic Acid Content in Different DI3 Fractions --- p.62 / Chapter 4.2.3 --- Estimated Molecular Weight of DI3 Fractions --- p.65 / Chapter 4.3 --- Antitumor Effect of Dictyophora indusiata Polysaccharides In vivo --- p.70 / Chapter 4.3.1 --- In vivo Antitumor Effect of Crude DI Polysaccharides --- p.70 / Chapter 4.3.2 --- In vivo Antitumor Effect of Various Fractions of DI3 --- p.70 / Chapter 4.3.3 --- Effect of DI3c on TNP-α and IL-2 Production in Mice --- p.78 / Chapter 4.4 --- In vitro Effects of DI3 Fractions on Cell Density and Viability on Normal and Cancer Cell Lines --- p.86 / Chapter 4.4.1 --- Effects of DI3 Fractions on Cell Density and Viability of Human Leukemic HL-60 and K-562 and Mouse Sarcoma 180 Cells --- p.86 / Chapter 4.4.2 --- Effects of DI3 Fractions on the Growth of Human Liver Cancer HepG2 and Normal Monkey Kidney Vero Cells --- p.86 / Chapter 4.4.3 --- Effect of DI3b Fraction on Proliferation of HL-60 Cells Determined by BrdU Incorporation --- p.94 / Chapter Chapter 5 --- Discussions --- p.96 / Chapter 5.1 --- Extraction and Characterization of DI3 Fractions --- p.96 / Chapter 5.2 --- Antitumor Effects of Dictyophora indusiata Polysaccharides --- p.101 / Chapter 5.3 --- Further Studies --- p.109 / Chapter Chapter 6 --- Conclusion --- p.111 / References --- p.113

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