Submitted by Fernanda Rodrigues de Lima (fernanda.rlima@ufpe.br) on 2018-08-20T20:59:24Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Fabíola Bernardo Carneiro.pdf: 3023831 bytes, checksum: 529d070bb96efe5eb6775ad4f7dbc996 (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-08-28T18:16:05Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Fabíola Bernardo Carneiro.pdf: 3023831 bytes, checksum: 529d070bb96efe5eb6775ad4f7dbc996 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-28T18:16:05Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Fabíola Bernardo Carneiro.pdf: 3023831 bytes, checksum: 529d070bb96efe5eb6775ad4f7dbc996 (MD5) Previous issue date: 2017-04-27 / medicina tradicional e a medicina complementar e alternativa reforçando o compromisso de estimular o desenvolvimento de políticas públicas a fim de inseri-las no sistema oficial de saúde. As iniciativas do Ministério da Saúde, em parceria com órgãos do governo e sociedade civil, visam viabilizar a utilização racional de plantas medicinais e fitoterápicos, tendo como linhas condutoras à preservação da biodiversidade, o desenvolvimento sustentável, a repartição de benefícios, além do benefício à população brasileira. A qualidade da matéria-prima vegetal tem um importante papel na obtenção de produtos fitoterápicos, já que esta apresenta como características a complexidade e a variabilidade da sua composição. A Schinus terebinthifolius Raddi é popularmente conhecida por aroeira pertence à família Anacardiaceae e apresenta atividades antiinflamatória, antidiarréica, diurética e antipirética. Neste trabalho aSchinus terebinthifolius Raddi, coletada em diferentes estados do nordeste brasileiro, foi caracterizada por métodos cromatográficosaplicados em um estudo de monitorização quantitativa dos extratos vegetais obtidos pelo processo de turbólise. A análise química mostrou que os exemplares estudados apresentaram compostos químicos majoritários distintos, α-pineno, limoneno, felandreno e careno, infere-se que, as variações obtidas possam estar relacionadas às condições ambientais, a diferença de solo, além da idade fisiológica das plantas. Estudo quimiométrico de análise de componentes principais (PCA)foi realizado para confirmar as semelhanças químicas entre as plantas coletadas. Os ensaios realizados por cromatografia gasosa acoplada a detector de massas e tratados por PCA demonstraram que o grupo A formado pelos estados de RN, PB, SE, PE, AL, grupo B formado pelo estado do CE e o grupo C formado pelos estados de PI, MA, BA apresentaram respectivamente careno, felandreno e limoneno, como marcadores que influenciaram na formação dos grupos por similaridade, podendo-se afirmar que as plantas pertencentes ao mesmo grupo são semelhantes porque apresentam os mesmos metabólitos secundários. A Análise realizada por CCD-AE revelou a presença de ácido gálico e catequina confirmado por CLAE-DAD e foi útil na separação e identificação de taninos e flavonoides em folhas de S. terebinthifolius. Em função dos resultados encontrados pode-se concluir que os métodos empregados neste trabalho permitiram alcançar os objetivos propostos de caracterização qualitativa e quantitativa do extrato bruto de folhas deS. terebinthifolius. Para avaliar a atividade biológicados extratos,sobre o crescimento das cepas de bactérias e de fungos, foi realizado o teste de concentração inibitória mínima (CIM) nas concentrações de 1024 μg/mL a 32 μg/mL, os quais não produziraminibição nesta concentração, o que não quer dizer que a amostra vegetal não tenha atividade contra os micro-organismos testados em concentrações superiores a esta. / In Brazil, the federal government has invested in the global strategy for traditional medicine, complementary and alternative medicine through number programs, reinforcing the commitment to stimulate the development of public policies in order to introduce them into the official health system. The Ministry of Health initiatives, in partnership with government agencies and civil society, aim to enable the rational use of medicinal plants and phytotherapics, having as a guideline the preservation of biodiversity, sustainable development, health and economic benefits to the population. The quality of the vegetal raw material has an important role in the production of herbal products due to the complexity and variability of its composition. Schinus terebinthifolius Raddi is popularly known as aroeira belongs to family Anacardiaceae and has anti-inflammatory, antidiarrheal, diuretic and antipyretic activities. In the present work, Schinus terebinthifolius Raddi collected in different states of northeastern Brazil, was characterized by chromatographic methods and used in a quantitative monitoring study of the plant extracts obtained by the turbo extraction process. The chemical analysis showed that the studied specimens presented different chemical compounds, α-pinene, limonene, phellandrene and carene, it is inferred that, the variations obtained could be related to the environmental conditions, the soil differences, in addition to the physiological age of the plants. A major component analysis (PCA) was performed to confirm the chemical similarities between the collected plants. The tests performed by gas chromatography coupled to mass detector and treated by PCA, demonstrated that the group A formed by the strains collected on the states of RN, PB, SE, PE, AL, group B formed by the strains collected on the state of the EC and group C formed by the strains collected ont the states of PI , MA, BA, presented carene, phellandrene and limonene as markers that influenced the formation of groups by similarity, and it is correct to say that plants belonging to the same group are similar because they have the same secondary metabolites. Analysis by high-performance thin-layer chromatography revealed the presence of gallic acid and catechin, which was confirmed by high performance liquid chromatography. Such techniques were useful in the separation and identification of tannins and flavonoids presents in the leaves of S. terebinthifolius. Based on the results, it can be concluded that the methods peformed in this work made it possible for us to characterize the raw extracts of S. terebinthifolius leaves. In order to evaluate the biological activity of the extracts on the growth of bacterial and fungal strains, a minimum inhibitory concentration (MIC) test was performed at concentrations from 1024 μg / mL to 32 μg / mL. No inhibition was observed at these concentrations. The fact that there was no CIM does not mean that the plant sample has no activity. Concentrations higher than tested may exhibit antibacterial and fungicidal activity.

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:47:43Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Objetivos: (i) avaliar a diversidade genética de amostras de Staphylococcus aureus resistentes à meticilina (MRSA) no complexo UNIFESP/HSP isolados de hemocultura; (ii) avaliar possíveis fatores de risco associados à bacteremia e mortalidade causada pelo Clone Epidêmico Brasileiro (CEB) e por outros clones de MRSA. Material e Métodos: Estudo retrospectivo de isolados de MRSA do período de 2002 a 2005. Coletou-se dados epidemiológicos nos prontuários dos pacientes e os tipos de SCCmec foram caracterizados pela reação em cadeia da polimerase (PCR) multiplex. Caso fosse pertinente, foi realizada a detecção de produção de leucocidina PantonValentine (PVL). A presença de possíveis clones foi investigada por PFGE (pulsed field gel eletrophoresis). Resultados: Foram avaliados 148 episódios de bacteremia por MRSA. A maioria das infecções foi considerada relacionada à assistência à saúde (92,6%); 77% dos pacientes receberam antibioticoterapia prévia e 74,3% fizeram uso de catater venoso central. O SCCmec tipo III foi encontrado em 87% das amostras e 19 amostras carreavam SCCmec I, II ou IV. Dentre as 10 amostras portadoras de SCCmec IV apenas uma foi produtora de PVL, e quatro foram detectadas em pacientes pediátricos. O dendograma obtido pelo perfil de bandas de PFGE identificou quatro principais clusters dentre as amostras. CEB (SCCmec III) foi relacionado a 128 amostras, e o clone pediátrico (SCCmec IV). Além disso, duas amostras foram relacionadas ao USA300 e USA400. Antibioticoterapia prévia foi considerado fator de risco para aquisição de bacteremia por MRSA SCCmec III. Não houve diferença entre as taxas de sobrevida de acordo com o tipo de SCCmec. Conclusões: O SCCmec tipo III foi o tipo predominante de MRSA causador de bacteremias no HSP. CEB continua a ser o clone predominante apesar da emergência de novas linhagens. Antibioticoterapia prévia foi o único fator de risco relacionado à aquisição de MRSA portador de SCCmec tipo III em nosso meio. / Objectives: (i) to evaluate the genetic diversity among methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) isolates from bloodstream infections (BSIs) from UNIFESP/HSP complex; (ii) to evaluate risk factors and mortality associated with bacteremia caused by Brazilian Epidemic Clone (BEC) and other MRSA lineages. Methods: Retrospective study selecting with MRSA causing BSIs during 2002 to 2005. Patient demographic information was obtained, and SCCmec types were performed by polymerase chain reaction (PCR) multiplex. Detection of Panton Valentine Leukocidin (PVL) was performed when necessary. Genetic relatedness among clinical isolates was assessed by PFGE (pulsed field gel eletrophoresis). Results: A total of 148 MRSA bacteremia episodes were investigated. Most infections were considered nosocomial (92.6%); 77.0% of patients have previously used antimicrobial therapy and 74.3% had a central venous line. SCCmec type III was found in 87.0% (n=129) of isolates and 19 carried either SCCmec I, II, IV. Only one out of 10 samples harboring SCCmec type IV carried PVL, and 4 samples were isolated from pediatric patients. The dendogram based PFGE analysis identified four major MRSA clusters. Most SCCmec III isolates were related to the BEC, (n=128), and seven SCCmec IV isolates were associated to the pediatric clone. Two isolates SCCmec IV were related to USA300 and USA400 clones. Previous antimicrobial therapy was considered a risk factor for SCCmec III MRSA bacteremia. No difference between survival rates was observed according to SCCmec types. Conclusions: SCCmec III was the predominant lineage associated to MRSA bacteremia in HSP. Although BEC continues to be the predominant clone in our nosocomial environment, new lineages of SCCmec were observed in the study period. Previous antimicrobial therapy was the only risk factor associated with acquisition of type III MRSA bacteremia. / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2015-02-27T17:39:04Z (GMT). No. of bitstreams: 2 72.pdf: 596399 bytes, checksum: 73031b2896fa6d41d8df381fdbbbe46d (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2010 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. / Diversos relatos indicam que queijos Minas Frescal comercializados no Brasil são amplamente contaminados, sendo o gênero Staphylococcus spp. incriminado em diversos surtos de toxinfecção alimentar. Os objetivos deste estudo são a pesquisa de características fenotípicas e genotípicas de resistência a antimicrobianos de Staphylococcus spp. isolados a partir de queijo Minas Frescal, verificando a presença dos genes mecA e qacA/B através da técnica de reação em cadeia da polimerase (PCR). Estes isolados, caracterizadas como estafilococos coagulase positiva e estafilococos coagulase negativa por Freitas (2005), neste estudo passaram por verificação de sua pureza, através de características macroscópicas das colônias em crescimento em Triptic Soy Agar, coloração de Gram, prova da catalase e da coagulase. Após a seleção de culturas puras de estafilococos foi realizado teste de suscetibilidade a antimicrobianos (mupirocina, ampicilina, tetraciclina, clindamicina, sulfazotrim, norfloxacina, cefotaxima, piperacilina+tazobactam, meropenem, penicilina G, cefepima, cloranfenicol, gentamicina, eritromicina, oxacilina e cefoxitina), extração de DNA e pesquisa dos genes mecA e qacA/B através da reação em cadeia da polimerase. Os resultados foram que apenas 14 (14,7por cento) dos isolados analisados pelo antibiograma se mostraram sensíveis a todos os antibióticos testados. Encontrou-se 27 (28,4por cento) dos isolados multiresistentes e suscetíveis à meticilina e 15 (15,8por cento) eram multiresistentes e resistentes à meticilina. O gene mecA foi detectado em 21 (22,1por cento) dos 95 isolados pesquisados, e dentre estes, 9 (9,5por cento) apresentaram-se como resistentes pelo teste de suscetibilidade a antimicrobianos (incluindo dois isolados coagulase negativos). Dentre os isolados 74 (77,9por cento) não apresentaram o gene mecA e 6 (6,3por cento) apresentaram-se resistentes à meticilina pelo antibiograma...

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:04Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-06-26Bitstream added on 2014-06-13T18:09:03Z : No. of bitstreams: 1 carretto_cfp_me_sjc.pdf: 497400 bytes, checksum: d99ffecf6efc0f5d533c014904f3a1d1 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Leveduras do gênero Candida são patógenos oportunistas que podem causar infecções superficiais ou sistêmicas. A investigação de plantas medicinais contra Candida spp. tem aumentado significativamente nos últimos anos. O presente estudo teve como objetivos avaliar a ação antimicrobiana do extrato hidroalcoólico e do óleo essencial de Mentha piperita L. sobre isolados clínicos de Candida spp. e observar o efeito da infusão de Mentha piperita L. sobre a aderência de leveduras do gênero Candida à resina acrílica. O extrato hidroalcoólico e o óleo essencial de Mentha piperita L. foram avaliados quanto à atividade antimicrobiana sobre diferentes espécies do gênero Candida, sendo cinqüenta amostras de C. albicans, dez C. glabrata, dez C. tropicalis, oito C. parapsilosis e duas C. krusei. A concentração inibitória mínima (CIM) e concentração fungicida mínima (CFM) do extrato hidroalcoólico (500 g de planta fresca/1 L de etanol) foram determinadas pelo método da diluição em caldo. O grupo controle constituiu-se de etanol na mesma concentração do extrato (79°GL). A atividade antimicrobiana do óleo essencial foi realizada por meio do teste de difusão em ágar. Foi observado o efeito da infusão de Mentha piperita L. sobre a aderência de cepas padrão de C. albicans, C. glabrata, C. tropicalis e C. krusei à resina acrílica. Os resultados demonstraram que o extrato hidroalcoólico de Mentha piperita L. apresentou atividade fungistática para algumas cepas de C. albicans, C. tropicalis e C. glabrata e atividade fungicida sobre cepas de todas as espécies de Candida estudadas em relação ao grupo controle. O óleo essencial mostrou maior atividade inibitória para cepas de C. albicans, seguida por C. tropicalis e C. parapsilosis. A infusão de Mentha piperita L. não foi capaz... / Fungi belonging to Candida species are opportunistic pathogens that can cause local and systemic infections. The investigation of natural products against Candida spp. increased significantly in the last few years. In this present study, the ethanolic extract and essential oil from Mentha piperita L. were evaluated for antimicrobial activity against Candida spp., being fifty strains from C. albicans, ten from C. glabrata, ten from C. tropicalis, eight from C. parapsilosis and two C. krusei. The minimal inhibition concentration (MIC) and minimal fungicidal concentration (MFC) of the ethanolic extract (500 g of fresh plant / 1 L of ethanol) were determined by the broth dilution method. The control group was constituted by ethanol in the same proportion of the extract (79ºGL). The antimicrobial activity of the essential oil was performed by the agar diffusion method. Besides, it was observed the effect of Mentha piperita L. infusion on the adherence of standard strains of C. albicans, C. glabrata, C. tropicalis and C. krusei to the acrylic resin. The results showed that ethanolic extract of Mentha piperita L. presented fungistatic activity to some strains of C. albicans, C. glabrata and C. tropicalis, and also fungicidal activity on strains of all Candida species in comparison with the control group. The essential oil of Mentha piperita L.was more active to strains of C. albicans followed by C. tropicalis and C. parapsilosis. The infusion of Mentha piperita L. was not effective to inhibit the Candida adherence to the acrylic resin. It was concluded that Mentha piperita L. was more active to strains of C. albicans and C. tropicalis, but was not effective to have any effect on the adherence of these microorganisms to the acrylic resin.

Submitted by PAULA FERNANDA KRELING DOMINGUES null (pfkreling@yahoo.com.br) on 2016-10-24T11:38:23Z No. of bitstreams: 1 tese paula final versão defesa.pdf: 1294870 bytes, checksum: 4d22aa7bfdd639ed01df314565834ea9 (MD5) / Approved for entry into archive by Juliano Benedito Ferreira (julianoferreira@reitoria.unesp.br) on 2016-10-31T13:00:08Z (GMT) No. of bitstreams: 1 domingues_pfk_dr_arafo.pdf: 1294870 bytes, checksum: 4d22aa7bfdd639ed01df314565834ea9 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-31T13:00:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 domingues_pfk_dr_arafo.pdf: 1294870 bytes, checksum: 4d22aa7bfdd639ed01df314565834ea9 (MD5) Previous issue date: 2016-09-05 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O sistema imune tem diversas formas de defesa contra microrganismos patogênicos. As membranas da mucosa são uma fonte de peptídeos catiônicos antimicrobianos contra uma ampla variedade de bactérias, fungos e vírus encapsulados. O objetivo deste estudo foi avaliar a citotoxicidade e atividade antimicrobiana em condições planctônicas e de biofilme de fragmentos derivados de peptídeos catiônicos (PC): LL-37 (originário de hCAP-18), D6-17 e D1-23 (originários de ortólogo da β-defensina-3 humana) contra bactérias cariogênicas. Para análise citotóxica, duas linhagens de células epiteliais foram expostas a diluições seriadas de fragmentos de PC. Ensaios de MTT e coloração de DAPI foram realizados para avaliar o metabolismo e a morfologia celular, respectivamente. A concentração inibitória mínima (CIM) e a concentração bactericida mínima (CBM) foram determinadas para fragmentos de PC e controle (digluconato de clorexidina - CHX) contra Streptococcus mutans (Sm), S. mitis, S. oralis, S. salivarius, S. sanguinis, Lactobacillus acidophilus, L. casei, L. rhamnosus, L. brevis, L. fermentum e Actinomyces israelii. A concentração inibitória fracionada (FIC) foi obtida pelas combinações de fragmentos de CP para S. mutans. O ensaio de biofilme foi conduzido com CHX e o melhor fragmento de CP contra cepas de S. mutans. Microscopia confocal a laser foi realizada para avaliar a quantidade de células mortas em relação as células vivas e também a espessura do biofilme. Os resultados indicaram que D6-17 não afetou o metabolismo de nenhuma das linhagens celulares. D1-23, LL-37 e CHX não foram tóxicos para ambas as células utilizadas, quando de concentrações abaixo de 0,2, 0,02 e 0,01mM, respectivamente. Combinações dos PC não mostraram efeito sinérgico contra S. mutans. A coloração DAPI demonstrou fragmentação nucleica para LL-37 e CHX, e aspecto semelhante ao controle (meio de cultura) para D1-23 e D6-17. D1-23 apresentou a melhor atividade bactericida contra S. mutans, S. mitis e S. salivarius. LL-37 apresentou melhor efeito contra espécies de Lactobacillus e Actinomyces. D6-17 mostrou atividade bactericida apenas contra S. mutans, L. brevis e L. fermentum. Combinações de fragmentos de PC não mostraram efeito sinérgico contra S. mutans. D1-23 (10x CBM) apresentou atividade contra biofilme de S. mutans superior a CHX. A microscopia confocal mostrou alta taxa de células mortas em relação a células vivas para D1-23 e CHX quando comparado ao grupo controle (meio de cultura). D1-23 também diminuiu a espessura do biofilme em relação ao grupo controle. Conclui-se que D1-23 mostrou relevante atividade antimicrobiana/antibiofilme contra bactérias cariogênicas e baixa toxicidade em células epiteliais. / The immune system has several forms of defense against pathogenic microorganisms. The mucous membranes are a source of potent antimicrobial cationic peptides against a broad range of bacteria, fungi and enveloped viruses. The aim of study was evaluated the cytotoxicity and antimicrobial activity under planktonic and biofilm conditions of fragments derived from cationic peptides (CP): LL-37 (from hCAP-18), D6-17 and D1-23 (from β-defensin-3 derivative) against cariogenic bacteria. For cytotoxicity analysis, two lines of epithelial cells were exposed to serial dilutions of the CP fragments. MTT assays and DAPI staining were performed to evaluate cell metabolism and morphology, respectively. Minimum inhibitory concentration (MIC) and minimal bactericidal concentration (MBC) were determined for the CP fragments and control (Chlorhexidine digluconate-CHX) against Streptococcus mutans (Sm), S. mitis, S. oralis, S. salivarius, S. sanguinis, Lactobacillus acidophilus, L. casei, L. rhamnosus, L. brevis, L. fermentum and Actinomyces israelii. Fractional inhibitory concentration (FIC) was obtained for the combinations of CP fragments on S. mutans. Biofilm assays were conducted with CHX and the best antimicrobial CP fragment against S. mutans strains. Confocal Laser Scanning Microscopy (CLSM) was used to analyze the Live/Dead cells and biofilm thickness. The results indicated that D6-17 did not affect the metabolism of either cell line. D1-23, LL-37 and CHX were not toxic for both cells, in concentrations below 0.2, 0.02 and 0.01mM, respectively. DAPI-staining cells demonstrated nuclei fragmentation for LL-37 group and cells with the aspect of apoptosis in the CHX group. Cells treated with D1-23 and D6-17 presented morphology similar to the control group (culture medium). D1-23 presented the best bactericidal activity against S. mutans, S. mitis and S. salivarius. LL-37 had a better effect against Lactobacillus and Actinomyces species. D6-17 showed bactericidal activity only against S. mutans, L. brevis and L. fermentum. Combinations of CP fragments did not show a synergic effect against S. mutans. D1-23 (10x MBC) presented a higher effect against S. mutans biofilm compared to CHX. CLSM analysis showed that D1-23 and CHX groups presented higher quantification of dead cells when compared to control (culture medium). The biofilm thickness were lower in the D1-23 group compared to CHX and control groups. We concluded that D1-23 showed a remarkable antimicrobial/anti-biofilm effect against cariogenic bacteria and low toxicity for epithelial cells. / FAPESP: 2013/12285-0

Submitted by JAIME GAZOLA FILHO (DINTER) null (jaime@saolucas.edu.br) on 2017-01-13T22:14:56Z No. of bitstreams: 1 Tese Jaime pdf.pdf: 1161900 bytes, checksum: 88085fe3b7f98950a6283f7926a857fd (MD5) / Approved for entry into archive by Juliano Benedito Ferreira (julianoferreira@reitoria.unesp.br) on 2017-01-17T19:27:19Z (GMT) No. of bitstreams: 1 gazolafilho_j_dr_araca.pdf: 1161900 bytes, checksum: 88085fe3b7f98950a6283f7926a857fd (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-17T19:27:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 gazolafilho_j_dr_araca.pdf: 1161900 bytes, checksum: 88085fe3b7f98950a6283f7926a857fd (MD5) Previous issue date: 2016-12-16 / Streptococcus mutans é conhecido por sua capacidade de aderir, colonizar e formar biofilme nas superfícies dentárias. Para sobreviver na cavidade bucal, S. mutans coordena a expressão de vários genes em resposta aos fatores ambientais, como na presença de agentes antimicrobianos. Os objetivos deste estudo foram: 1) avaliar a influência de concentrações subinibitórias (sub-MIC) de fluoreto de sódio (NaF) e digluconato de clorexidina (Chx) sobre o crescimento planctônico; 2) avaliar a influência desses antimicrobianos em concentrações sub-MIC na formação de biofilme das cepas de S. mutans; 3) avaliar a expressão dos genes covR e vicR de cepas de S. mutans expostas aos sub-MIC de Chx e NaF. Cepas de S. mutans padrão (ATCC 25175 e UA159) e isolada de criança com cárie precoce da infância (3FV2) foram reativadas em BHI caldo e expostas a Chx e NaF para determinação da MIC e MBC. A partir desses valores, curvas de crescimento foram obtidas para as cepas de S. mutans expostas a concentrações sub-MIC de Chx (0,25 x MIC a 0,75 x MIC) e NaF (0,125 x MIC a 0,75 x MIC). Ensaios de biofilme foram realizados para as cepas de S. mutans expostas ou não aos sub-MIC dos agentes antimicrobianos (0,25 x MIC; 0,5 x MIC e 0,75 x MIC). A expressão dos genes covR e vicR foram avaliadas por PCR quantitativo para as cepas de S. mutans em condições planctônicas expostas a 0,125/0,25/0,5 x MIC de NaF e Chx. Os dados obtidos foram submetidos à análise estatística considerando p≤0,05. Os resultados mostraram que sub-MIC de Chx e de NaF afetaram o crescimento planctônico das cepas de S. mutans, de maneira dose-dependente. Sub-MIC de Chx afetou somente a formação de biofilme de 3VF2 e valores de NaF acima de 0,5 x MIC causaram redução do crescimento do biofilme para todas as cepas testadas, de maneira dose-dependente, com exceção da cepa ATCC 25175, que foi afetada igualmente por todas as concentrações avaliadas. Concentrações sub-MIC gradativas de Chx induziram a expressão crescente do gene vicR das cepas avaliadas. Quando NaF e Chx foram associados, o gene covR teve sua expressão reduzida quando expostas a 0,5 x MIC. Conclui-se que concentrações sub-MICs de NaF acima de 0,5 x MIC causaram redução do crescimento planctônico e em biofilme das cepas de S. mutans. Concentrações sub-MIC de Chx induzem a expressão de vicR podendo favorecer a formação de biofilme pelas cepas de S. mutans. / Streptococcus mutans is known for its ability to adhere, colonize and form biofilm on dental surfaces. To survive in the oral cavity, S. mutans coordinates the expression of several genes in response to environmental factors, such as in the presence of antimicrobial agents. The objectives of this study were: 1); to evaluate the influence of subinhibitory concentrations (sub-MIC) of chlorhexidine (Chx) and sodium fluoride (NaF) on planktonic growth 2) to evaluate the influence of sub-MIC of these agents on biofilm formation of S. mutans strains; 3) to evaluate the expression of the covR and vicR genes of S. mutans strains exposed to sub-MIC of Chx and NaF. Standard strains of S. mutans (ATCC 25175 or UA159) and clinical strain isolated from child with caries (3FV2) were reactivated in BHI broth and exposed to Chx and NaF for determination of MIC and MBC. From these values, growth curves were obtained for S. mutans strains exposed to sub-MIC concentrations of Chx (0.25 x MIC to 0.75 x MIC) and NaF (0.125 x MIC to 0.75 x MIC). Biofilm assays were performed for S. mutans strains exposed or not to the sub-MIC of antimicrobial agents (0.25, 0.5 and 0.75 x MIC). Expression of covR and vicR genes were evaluated by quantitative PCR for strains of S. mutans under plankton conditions exposed to 0.125 / 0.25 / 0.5 x MIC of NaF and Chx. The data were submitted to statistical analysis considering p≤0.05. The results showed that Chx and NaF sub-MIC affected planktonic growth of S. mutans strains in a dose-dependent manner. Sub-MIC of Chx only affect the biofilm formation for ATCC 25175, and, NaF values above 0.5 x MIC caused reduction of the biofilm growth for all tested strains, in a dose-dependent manner, except for ATCC 25175, which was also affected by all concentrations evaluated. Gradual sub-MIC concentrations of Chx induced increasing expression of the vicR gene of the strains evaluated. When NaF and Chx were related, the covR gene had its expression reduced when exposed to 0.5xMIC. It is concluded that sub-MICs concentrations of NaF above 0.5 x MIC caused reduction of planktonic and biofilm growth of S. mutans strains. Sub-MICs concentrations of Chx induce vicR expression and may favor biofilm formation by S. mutans strains.

Submitted by Daniella Sodre (daniella.sodre@ufpe.br) on 2015-04-08T18:47:28Z No. of bitstreams: 2 TESE Isabelle da Silva Luz.pdf: 2533844 bytes, checksum: ef1a1e69d6d1ea40a549974b8e76af50 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-08T18:47:28Z (GMT). No. of bitstreams: 2 TESE Isabelle da Silva Luz.pdf: 2533844 bytes, checksum: ef1a1e69d6d1ea40a549974b8e76af50 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2014-02-12 / CNPq; FACEPE / A crescente demanda por alimentos saudáveis isentos de conservantes químicos tem estimulado a pesquisa de tecnologias alternativas para a produção de alimentos seguros. Neste cenário, os óleos essenciais surgem como possíveis agentes antimicrobianos para uso em alimentos, em especial aqueles obtidos da espécie Origanum vulgare L. (OEOV). A ação antimicrobiana do OEOV tem sido atribuída aos compostos fenólicos naturalmente presentes em sua constituição, sendo o carvacrol (CAR) frequentemente citado como seu constituinte majoritário. Considerando estes aspectos, este estudo foi desenvolvido com objetivo de investigar a capacidade de adaptação e de desenvolvimento de tolerância ao OEOV e CAR em algumas cepas de bactérias contaminantes de alimentos (Listeria monocytogenes, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa e Salmonella Typhimurium) e avaliar a ocorrência de injúria e alterações na composição de ácidos graxos da membrana citoplasmática de S. Typhimurium quando exposta a concentrações subletais destes agentes. A determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM) foi realizada por macrodiluição em caldo. Para os ensaios de tolerância direta e cruzada (45oC; pH 5.2; NaCl 5-15 g/100 mL), as cepas foram expostas a concentrações subletais (1/2 CIM e 1/4 CIM) do OEOV ou do CAR em caldo base carne (18 h) e em modelo base carne (72 h). Para os ensaios de verificação de injúria subletal, S. Typhimurium foi exposta a concentrações subletais do OEOV ou CAR e semeadas em meios adicionados de agentes seletivos. O perfil de ácidos graxos da membrana citoplasmática foi determinado por meio de cromatografia gasosa. Os valores da CIM frente às bactérias testadas variaram entre 0.62 μL/mL e 5.0 μL/mL para OEOV e entre 0.62 μL/mL e 2.5 μL/mL para CAR. Ensaios de indução de tolerância direta e cruzada em caldo base carne revelaram ausência do desenvolvimento de tolerância em todas as cepas bacterianas ensaiadas. Resultados semelhantes foram observados para P. aeruginosa em modelo base carne. Ensaios adicionais de indução de tolerância direta nas cepas bacterianas quando em caldo base carne adicionado de concentrações crescentes (1/16 CIM - 2 CIM) dos compostos também não evidenciaram desenvolvimento de tolerância bacteriana. A exposição de S. Typhimurium a concentrações subletais de OEOV ou CAR revelou injúria à membrana citoplasmática e à membrana externa, bem como alterações em sua composição de ácidos graxos, especialmente relacionadas ao aumento da razão ácidos graxos insaturados:ácidos graxos saturados. Os resultados obtidos neste estudo demonstram que a exposição das cepas bacterianas a concentrações subletais do OEOV ou CAR não induziu o desenvolvimento de tolerância bacteriana direta e cruzada quando cultivadas em meio base carne. Ainda, sugeriram que estes compostos podem induzir uma resposta adaptativa em S. Typhimurium, relacionada à mudanças no perfil de ácidos graxos de membrana. Estes achados revelam o potencial antimicrobiano do OEOV e do CAR em sistemas de conservação de alimentos, quando considerada a sua destacável capacidade de inibição do crescimento das cepas utilizadas no estudo, concomitante ao não desenvolvimento de tolerância bacteriana direta e cruzada, considerando avaliações de uso em concentrações subletais.

Infecções fúngicas invasivas estão associadas a altos índices de morbidade e mortalidade, sendo causadas principalmente por leveduras do gênero Candida. A formação de biofilmes tem sido considerada um dos principais fatores associados à virulência destas leveduras, devido, principalmente, à maior resistência às terapias antimicrobianas apresentada pelas células sésseis em comparação às células planctônicas. Torna-se necessária a seleção de antifúngicos eficazes na terapêutica das infecções associadas a biofilme. O presente estudo tem por objetivo avaliar e comparar o efeito de antifúngicos sintéticos (Fluconazol e Anfotericina B) e bioativos vegetais (Guttiferona A e 7-Epiclusianona) em biofilmes e suspensões celulares de Candida spp. isoladas de ambiente hospitalar. Foram coletadas 180 amostras, havendo uma frequência de distribuição de 17,8% de isolados de Candida spp., provenientes principalmente das mãos de profissionais (28% das amostras), locais de preparo e armazenamento de medicamentos (16%) e leitos de pacientes (16%). As espécies mais isoladas foram do complexo C. parapsilosis (59%), C. tropicalis (19%), consideradas as espécies mais associadas à candidemia na América Latina, e C. guilliermondii (13%), associada a fenômenos de resistência cruzada e multirrestistência, não sendo isolada amostra de C. albicans. Todas as amostras isoladas foram capazes de produzir biofilme, com biofilmes metabolicamente ativos. Biofilmes do complexo C. parapsilosis e C. tropicalis apresentaram menor atividade metabólica em relação aos isolados de C. famata, C. glabrata e C. guilliermondii. Os isolados não apresentaram resistência a Fluconazol e Anfotericina B e os bioativos demonstraram atividade. Os resultados dos testes de sensibilidade em biofilmes demonstram um grande aumento dos valores de IC quando comparados aos valores obtidos para células planctônicas, variando de 256 a >2.048 vezes no caso do Fluconazol e de 16 a 256 vezes para Anfotericina B. Os bioativos vegetais estudados apresentaram boa atividade sobre biofilmes, especialmente a Guttiferona-A. Os resultados demonstram a importância da implementação de técnicas padronizadas de ensaio de sensibilidade antifúngica em biofilmes e a importância da pesquisa de contaminação ambiental, auxiliando no estabelecimento da cadeia epidemiológica de infecções em ambientes hospitalares. / Invasive fungal infections are associated with high morbidity and mortality, mainly caused by Candida. The formation of biofilms has been considered one of the main factors associated with the virulence of these strains, primarily due to increased resistance to antimicrobial therapies presented by sessile cells compared to planktonic cells. It is necessary to select the effective antifungal therapy for infections associated with biofilm. The present study aims to evaluate and compare the effect of synthetic antifungals (Fluconazole and Amphotericin B) and plant bioactives (Guttiferone-A and 7-Epiclusianone) in biofilms and cell suspensions of Candida spp. isolated from the hospital environment. 180 samples were collected, with an incidence of 17.8% of isolates of Candida spp., isolated mainly from the hands of professionals (28% of samples), drug storage and preparation places (16%) and beds of patients (16%). The isolated Candida species were mainly Candida parapsilosis complex (59%) and C. tropicalis (19%), the species considered most associated with candidemia in Latin America, and C. guilliermondii (13%), associated with cross-resistance, not being isolated any sample of C. albicans. All isolates were able to produce biofilm, with metabolically active biofilms. The biofilms of C. parapsilosis complex and C. tropicalis showed lower metabolic activity in relation to isolates of C. famata, C. glabrata and C. guilliermondii. The isolates showed no resistance to Fluconazole and Amphotericin B and bioactives demonstrated activity. Results of Susceptibility Tests in biofilms showed a large increase in IC in biofilms for all tested substances. The plant bioactives studied showed good activity against biofilms, especially Guttiferone-A. The results demonstrate the importance of implementing standardized techniques for antifungal susceptibility testing in biofilms and of environmental contamination research, helping to establish the epidemiological chain of infections in hospital environments.

O uso indiscriminado de antimicrobianos pode estar associado ao fenômeno da resistência microbiana, levando ao insucesso no tratamento das infecções e impulsionando a busca por novas alternativas terapêuticas, dentre elas, os bioativos obtidos a partir de fontes vegetais. Foi avaliada a atividade antimicrobiana de extratos hidroetanólicos de plantas sobre bactérias Gram positiva, Gram negativa, leveduras, Mycobacterium tuberculosis H37 e Mycobacterium bovis pela técnica de difusão em agar e microdiluição em caldo. Dentre os extratos avaliados pelo método de difusão em agar, o extrato de Bidens pilosa folha apresentou a mais expressiva média de halos de inibição de crescimento frente aos microrganismos utilizados, seguido por Bidens pilosa flor, E. pyriformis folha, M. cauliflora folha e E. pyriformis semente que apresentaram estatisticamente a mesma média de formação de halos inibitórios sobre bactérias Gram positivas, Gram negativas e leveduras. Os extratos de Heliconia rostrata não apresentaram atividade. Mycobacterium tuberculosis H37 e Mycobacterium bovis mostraram-se resistentes a todos os extratos. Dos microrganismos avaliados, as bactérias Gram positivas M. luteus e S. aureus apresentaram o mesmo perfil de sensibilidade (p>0.05). As bactérias Gram negativas E. coli, E. cloacae, S. marcescens e P. aeruginosa também apresentaram o mesmo perfil de sensibilidade frente aos extratos (p>0.05). O perfil de senbilidade dos fungos C. albicans e S. cerevisiae foram comparáveis entre si e entre as bactérias Gram positivas B. subtilis, E. faecalis e Gram negativa S. typhimurium (p>0.05). Os extratos que apresentaram ação inibitória através do ensaio de microdiluição em caldo foram os mesmos extratos ativos no teste de difusão em agar. A avaliação da citotoxicidade foi realizada sobre células C6-36 de larvas de mosquito Aedes albopictus. Os extratos de caule e flor de Heliconia rostrata, folha e caule de Plinia cauliflora, semente de Anonna crassiflora e caule, flor e raiz de Bidens pilosa não apresentaram toxicidade nas concentrações avaliadas. Os maiores índices de seletividade foram apresentados pelos extratos de A. crassiflora caule e B. pilosa flor para S. aureus, apresentando potencial para estudos como futuros candidatos a fármacos. Dos microrganismos avaliados, as bactérias Gram positivas M. luteus e S. aureus apresentaram o mesmo perfil de sensibilidade (p>0.05). Dos microrganismos que apresentaram alguma sensibilidade a qualquer um dos extratos, M. bovis, P. aeruginosa, S. marcescens, E. cloacae e E. coli foram estatisticamente, igualmente os menos sensíveis. Apenas os extratos de B. pilosa folha apresentou igualdade, estatisticamente significativa, da média de efetividade inibitória quando comparado ao controle positivo, a clorexidina / The indiscriminate use of antibiotics may be associated with the phenomenon of microbial resistance, leading to infections treatment failure and boosting the search for new therapeutic alternatives, among them, the bioactive obtained from plant sources. We evaluated the antimicrobial activity of hydroethanolic extracts of plants on Gram positive, Gram negative bacteria, yeasts, Mycobacterium tuberculosis and Mycobacterium bovis H37 through agar diffusion and broth microdilution techniques. Among the extracts evaluated through agar diffusion method, the leaf extract of Bidens pilosa showed the most significant average halos of growth inhibition against microorganisms used, followed by flower of Bidens pilosa leaf E. pyriformis, sheet M. cauliflora seed and E. pyriformis showed that statistically the same average formation of inhibitory halos on Gram positive bacteria, Gram negative bacteria and yeast. Extracts of Heliconia rostrata showed no activity. Mycobacterium bovis and Mycobacterium tuberculosis H37 were resistant to all extracts. Of the tested microorganisms, Gram positive bacteria M. luteus and S. aureus showed the same sensitivity profile (p> 0.05). Gram negative bacteria E. coli, E. cloacae, S. marcescens and P. aeruginosa also showed the same sensitivity profile compared to extracts (p> 0.05). The sensitivity profile of the fungi C. albicans and S. cerevisiae and were comparable between the Gram-positive B. subtilis, E. faecalis and Gram negative bacteria S. typhimurium (p> 0.05). The extracts which showed inhibitory action by microdilution sample test were the same active extracts as in agar diffusion test. The Cytotoxicity assessment was performed on cell C6-36 larvae of Aedes albopictus. The extracts of Heliconia rostrata’s stem and flower, Plinia cauliflora’s leaf and stem, crassiflora Annona’s seed and stem, Bidens pilosa's root and flower showed no toxicity at the evaluated concentrations. The highest selectivity were presented by stem extracts of A. crassiflora and Bloom B. pilosa as for S. aureus there is potential for studies on future drug candidates. Of the tested microorganisms, Gram positive bacteria M. luteus and S. aureus showed the same sensitivity profile (p> 0.05). The sensitivity profile of the fungi C. albicans and S. cerevisiae and were compared one another and to B. subtilis, E. faecalis Gram positive and S. typhimurium Gram negative bacteria (p> 0.05). Among the microorganisms which showed some sensitivity to any of the extracts, M. bovis, P. aeruginosa, S. marcescens, E. and E. cloacae coli were statistically also less sensitive. Only the leaf extracts of B. pilosa showed statistically significant equality of the average inhibitory effectiveness when compared to the positive control and chlorhexidine

Atualmente, S. aureus meticilina resistente (MRSA) é o mais importante patógeno nosocomial, devido à sua multirresistência aos antimicrobianos disponíveis, o que direciona esforços na busca de novas alternativas terapêuticas. Neste estudo foi avaliada a ação antimicrobiana de extratos vegetais contra isolados MRSA do ambiente aéreo, identificados previamente. Os extratos de Annona crassiflora, Bidens pilosa, Eugenia pyriformis, Heliconia rostrata e Plinia cauliflora foram obtidos por maceração em álcool etílico a 70%, submetidos à rota evaporador e liofilizados. Estes foram testados quanto à ação antimicrobiana pela técnica de difusão em ágar. Posteriormente, realizou-se a concentração inibitória mínima (CIM) pela técnica de microdiluição em caldo. Testes de toxicidade em cultura celular e análise fitoquímica dos extratos complementaram a análise, onde a maioria dos extratos apresentou baixa toxicidade, presença de alcalóides, flavonóides, taninos e saponinas. Os extratos da folha, casca do fruto e caule de Plinia cauliflora, caule e folha de Eugenia pyriformis, caule, polpa, casca do fruto e folha de Annona crassiflora e flor, caule e folha de Bidens pilosa foram efetivos contra as amostras multirresistentes analisadas, sendo que o extrato de Bidens pilosa folha apresentou a melhor atividade antibacteriana in vitro por ambos os métodos avaliados. / Currently S. aureus methicillin resistant (MRSA) is the most important nosocomial pathogen due to multidrug resistance to available antimicrobials, which directs efforts in the search for new therapies. In this study we evaluated the in vitro antimicrobial activity of plant extracts against ambient aerial isolates of MRSA previously identified. The hydroethanolic extracts of Annona crassiflora, Bidens pilosa, Eugenia pyriformis, Heliconia rostrata and Plinia cauliflora were obtained by steeping in ethyl alcohol, 70%, evaporated and lyophilized. The antimicrobial activity was evaluated by agar diffusion and determination of minimum inhibitory concentration (MIC) by microdilution broth. Toxicity testing in cell culture and phytochemical analysis complemented the analysis where most of the extracts showed low toxicity, presence of alkaloids, flavonoids, tannins and saponins. The extracts of leaf, stem and fruit rind of Plinia cauliflora, stem and leaf of Eugenia pyriformis, stem, pulp, fruit rind and leaf of Annona crassiflora and flower, stem and leaf of Bidens pilosa were effective against multidrug-resistant samples analyzed being that the leaf extract of Bidens pilosa showed the best in vitro anti-MRSA activity by both methods evaluated. / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais - FAPEMIG