Made available in DSpace on 2015-12-06T23:44:26Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006 / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2016-03-15T14:19:05Z (GMT). No. of bitstreams: 2 valter_neto_ioc_dout_2013.pdf: 5032159 bytes, checksum: 09d4b19d84fdc8d6bc1295312fe03ccd (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015-04-14 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Os tripanossomatídeos não sintetizam o colesterol e sim esteróis com o esqueleto ergostano, porém um percentual significativo de colesterol exógeno é encontrado em todas as espécies de Leishmania, sugerindo um papel biológico para esta molécula. Esta tese tem como objetivo estudar a importância do uso de colesterol para Leishmania spp. em várias situações, avaliando o potencial deste sistema como um possível alvo farmacológico. A atividade dos inibidores de biossíntese de ergosterol associado com inibidores de transporte de colesterol derivado de LDL, foi avaliada em promastigotas e amastigotas intracelulares. A associação entre LBqT01 e cetoconazol, miconazol ou terbinafina mostrou sinergia. A associação entre a imipramina ou progesterona e cetoconazol ou terbinafina indicaram um efeito aditivo. O cetoconazol e miconazol demonstraram uma diminuição de até duas vezes o valor de IC50 nas formas amastigotas, quando combinado com os inibidores de transporte de colesterol. Foi observado também alteração da biossíntese de ergosterol após tratamento dos parasitos com os inibidores de transporte de colesterol, demonstrado por CG/MS. A combinação de LBqT01 e cetoconazol mostrou ser mais ativa in vivo do que cada fármaco individualmente. Estudamos também o mecanismo de resistência desses inibidores, avaliando a modulação de enzimas da via de biossíntese de esteróis e a utilização de colesterol exógeno pelos parasitos. Promastigotas de Leishmania amazonensis, Leishmania braziliensis e Leishmania guyanensis foram cultivadas com concentrações crescentes de sinvastatina, terbinafina e miconazol Estes inibidores mostraram um índice de resistência de 2,5 - 8 vezes. A resistência cruzada também foi avaliada, com estes inibidores e fármacos de referência (miltefosina, anfotericina B e antimônio trivalente). A expressão de genes da biossíntese de esterol e utilização do colesterol exógeno entre as cepas selvagens e resistentes, foram avaliadas por PCR em tempo real e CG/MS, respectivamente. As enzimas HMGCoA e C -14 desmetilase foram as mais moduladas, independente do fármaco utilizado, variando sua expressão nas cepas resistentes. Promastigotas de L. braziliensis resistentes à terbinafina apresentaram alteração no perfil de esteróis, L. amazonensis resistente aos três inibidores e L. guyanensis resistente ao miconazol mostraram alteração da biossíntese de esteróis e aumento na absorção do colesterol exógeno. Os resultados mostram que alguns genes foram amplificados na cepa resistente em relação à cepa selvagem. Juntos estes resultados sugerem que o colesterol desempenha um papel importante na atividade e resistência aos inibidores da biossíntese de esteróis e que o bloqueio da sua utilização pela Leishmania spp. pode ser um alvo para a síntese de novos fármacos para o tratamento da leishmaniose / The trypanosomes do not synthesize cholesterol sterols but with ergostane skeleton, but a significant percentage of exogenous cholesterol is fou nd in all species of Leishmania , suggesting a biologica l rol e for this molecule. This work aims to study the importance of use cholesterol to Leishmania spp . in several cases , evaluating the potential of the s ystem as a possible drug target . The activity of the inhibitors of ergosterol biosynthesis inhibitors associated with transport of LDL cholesterol derivative was evaluated in intracellula r amastigotes and promastigotes . The association between LBqT01 and ketoconazole , miconazol e or terbinafine showed synergy . The association bet ween imipramine or progester one, and ketoconazole , or terbinafine indica ted an additive effect . The ketoconazole and miconazole showed a reduction of up to twice the IC50 value in amastigotes when combined with the inhi bitors of cholesterol transport . Change of ergosterol biosynthesi s of parasites after treatment with inhibitors of cholesterol transport as demonstrat ed by GC/MS was also observed . The combination of LBqT01 and ketoconazole was more active in vivo than either drug individually. We also studied the mechanism of resistanc e of these inhibitors by evaluating the modulation of enzymes of the sterol biosynthesis pathway and use of exo genous cholesterol by parasites . Promastigotes of Leishmania amazonensis , Leishmania braziliensis and Leishmania guyanensis were cultured with in creasing concentrations of simvastati n, terbinafine and miconazole . These inhibitors showed resis tance index from 2.5 to 8 times . Cross - resistance was evaluated with these inhibitors an d reference drugs (miltefosine , amphot ericin B and trivalent antimony) . The expression of sterol biosynthesis genes and use of exogenous cholesterol in the wild and resistant strains were analyz ed by real - time PCR and GC / MS , respectively. The HMGCoA C and - 14 demethyl ase enzymes were more modulated, regardless of the drug u sed , varying its expression in resistant strains . Promastigotes of L. braziliensis resistant to terbinafine pres ented changes in sterol profile, L. amazonensis resistant to all three inhibitors amazonensis and L. guyanensis miconazole resistant showed alte rations in the biosynthesis of sterols and increase in the absorption of exogenous cholesterol. The results show that some genes were amplified in the resistant strain c ompared to the wild type strain . Together these results suggest that cholesterol plays an important role in the activity and resistance to inhibitors of sterol biosynthesis and blocking their use Leishmania spp . may be a target for the synthesis of new drugs for the treatment of leishmaniasis.

Orientadora : Profª Drª Sheila M.B. Winnischofer / Coorientador : Prof. Dr. Marina Trombetta Lima / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Ciências : Bioquímica. Defesa: Curitiba, 28/03/2017 / Inclui referências : f. 69-75 / Resumo: Gliomas são os tumores mais comuns derivados do Sistema Nervoso Central. Dentre seus tipos, o glioblastoma (GBM) é o mais agressivo e que apresenta pior prognóstico, com tempo de sobrevida dos pacientes que varia de 12 a 15 meses. O tratamento para GBM consiste na retirada cirúrgica da massa tumoral, seguida de radioterapia e quimioterapia, sendo a temozolomida (TMZ) a droga padrão utilizada. No entanto, apesar das estratégias terapêuticas atuais, esse tipo de tumor frequentemente se mostra resistente, apresentando altas taxas de recorrência. Um dos motivos dessa recidiva justifica-se pela presença das CSCs (Cancer Stem Cells). Essas células possuem propriedades características de células tronco, como a capacidade de crescer in vitro como agregados celulares, através do cultivo em substratos não aderentes, meios de cultura definidos, crescimento em constante movimento e ainda por meio das hanging drops. A técnica de hanging drop baseia-se no cultivo das células que ficam suspensas em uma tampa de placa de cultura devido à tensão superficial, então a gravidade induz a agregação de células. Hipóteses atuais sugerem que as CSCs seriam as responsáveis pela recidiva da massa tumoral, mesmo após o tratamento, já que esse é direcionado às células tumorais já diferenciadas. Nesse sentido, a procura por terapias combinadas que atinjam tanto as células diferenciadas quanto as CSCs torna-se uma alternativa interessante aos tratamentos atuais. Dados na literatura mostram uma correlação entre o uso das estatinas e uma menor incidência de gliomas. Os efeitos anti-tumorais da sinvastatina (SVA) tem sido investigados, no entanto ainda não se sabe qual sua ação em células tronco tumorais. Sendo assim, os objetivos desse trabalho foram: padronizar condições de cultivo de CSCs e investigar quais os efeitos do tratamento conjunto de TMZ e SVA nessa subpopulação de GBM. Primeiramente, foi demonstrado que o cultivo das células U87MG por 3 dias em hanging drop e 5 dias em substrato não aderente foi capaz de enriquecer a neuroesfera em CSCs, através da presença do marcador CD133 em microscopia confocal e aumento da expressão de CD133, CD15 e Sox-2, por q-PCR. Essas esferas enriquecidas, quando tratadas com a combinação de fármacos, não sofreram diminuição de tamanho, porém tiveram sua morfologia alterada após tratamento com SVA e TMZ+SVA. Ainda, o uso da SVA e a combinação de TMZ e SVA foi capaz de impedir a formação das esferas quando adicionados durante o período de 72h em hanging drop. Em paralelo, foi realizado o cultivo de CSCs de GBM com o meio definido NSC e foram também avaliados os efeitos da combinação dos fármacos nas esferas formadas. Foi visto um padrão de diminuição no número e no tamanho das esferas formadas, aumento da dupla marcação de anexina e PI e diminuição da expressão de CD133, CD15 e Sox-2 após tratamento conjunto TMZ e SVA. Nossos resultados mostram a efetiva padronização da metodologia de hanging drop e substrato não aderente para o cultivo das CSCs de GBM e também a potencialização do efeito citotóxico da TMZ quando em conjunto com a SVA nas neuroesferas de GBM. Palavras-chave: Glioblastoma. Células tronco tumorais. Neuroesferas. / Abstract: Gliomas are the most common tumors derived from the Central Nervous System. Among its types, glioblastoma (GBM) is the most aggressive, with median survival ranging from 12 to 15 months. Treatment for GBM consists of maximal surgical resection followed by radiotherapy and chemotherapy, with temozolomide (TMZ). However, despite current therapeutic strategies, this type of tumor is often resistant, presenting high rates of recurrence. One of the reasons for this recurrence is justified by the presence of CSCs (Cancer Stem Cells). These cells present properties of stem cells, such as the ability to grow in vitro as cell aggregates, through non-adherent substrates culture, defined culture media, growth in constant movement and through hanging drops. The hanging drop technique is based on culturing cells suspended in a plate cap due to surface tension, and then gravity induces cell aggregation. Current hypotheses suggest that CSCs are responsible for restructuring tumor mass, even after treatment, since current therapies are directed to already differentiated tumor cells. In this sense, the search for combined therapies that aim differentiated and non-differentiated tumor cells become an interesting alternative to current treatments. Some studies show a correlation between the use of statins and a lower incidence of gliomas. The antitumor effects of simvastatin (SVA) have been investigated, however it is not yet known what are their action on tumor stem cells. Therefore, this work's objectives were to standardize conditions for CSC culture and investigate the effects of the combined treatment of TMZ and SVA in CSCs of GBM. First, U87MG cells were cultured for 3 days in hanging drop and 5 days on non-adherent substrate, this protocol was shown to enrich the neurosphere in CSCs by the presence of CD133 marker in confocal microscopy and increased expression of CD133, CD15 and Sox-2, by q-PCR. These enriched spheres were treated with the combination of drugs, but did not showed decrease in their size. However, their morphology was altered when treated with SVA and TMZ + SVA. Also, the SVA and the combination of TMZ and SVA was able to inhibit the formation of spheres when plated in hanging drop. In parallel, culture of GBM CSCs with the defined medium NSC was performed and the effects of the combination of both drugs on the spheres formed were evaluated. A decreasing pattern in the number and size of spheres formed was observed, with an increase in the levels of annexin and PI, and a decrease on CD133, CD15 and Sox-2 mRNA expression after TMZ and SVA treatment. Our results show the effective standardization of the hanging drop and non-adherent substrate technique for GBM CSCs culture and also the potentiation of the cytotoxic effect of TMZ when combined with SVA in GBM neurospheres. Key-words: Glioblastoma. Cancer Stem Cells. Neurospheres.

Comportamento doentio (sickness behavior) é a expressão usada para definir o conjunto das alterações comportamentais que são desencadeadas durante um processo infeccioso. Além disso, estas alterações são consideradas como respostas adaptativas do animal com a finalidade de combater a infecção, propiciando desta forma, um ambiente apropriado ao estabelecimento de uma resposta imune eficaz e desfavorável ao patógeno. Diversos estudos tem abordado os efeitos pleiotrópicos da sinvastatina, isto é, efeitos que estão além de sua função hipocolesterolêmica. Dentre estes efeitos, podemos citar sua ação antioxidante, anti-inflamatória, imunomoduladora e antitrombogênica. Partindo dessas assertivas, o intuito deste trabalho foi investigar a influência da sinvastatina sobre o comportamento doentio. Inicialmente, testamos as doses de 100, 200 e 500 µg/Kg de lipopolissacarídeo (LPS), 2, 6 e 24 horas após a aplicação. Feito isso, os camundongos Swiss foram pré-tratados durante sete dias com veículo ou Sinvastatina 10 mg/Kg ou Sinvastatina 40 mg/Kg através de gavagem (p.o.) e no oitavo dia, receberam a dose de 200 µg/kg de LPS ou solução salina (i.p.) e as respostas comportamentais foram avaliadas após 2 horas. Nos camundongos pré-tratados com a sinvastatina 10 mg/Kg, não observamos diferença significativa em relação ao grupo veículo+LPS em nenhum dos aparatos e parâmetros analisados. Contudo, nos animais pré-tratados com a sinvastatina 40 mg/Kg observou-se redução do tempo de latência e aumento no número de cruzamentos e do tempo de permanência no lado claro no Teste Claro-Escuro, diminuição do número de floatings no Nado Forçado e do tempo de imobilidade no Teste de Suspensão pela Cauda e aumento do número de cruzamentos centrais, periféricos e totais e de rearings no Teste de Campo Aberto. Quanto aos níveis séricos das citocinas dosadas, notamos que o pré-tratamento com a sinvastatina nas doses de 10 e 40 mg/Kg, não foi capaz de atenuar o aumento de TNF-α induzido pelo LPS, todavia, as concentrações plasmáticas de IL-1β, apresentaram-se aumentadas com o pré-tratamento com a sinvastatina 10 mg/Kg e reduzidas quando os animais foram pré-tratados com a sinvastatina 40 mg/Kg. Na telemetria, pudemos notar uma hipotermia branda seguida de febre em animais que receberam veículo+LPS e sinvastatina 10+LPS. Já em animais que receberam sinvastatina 40+LPS, observamos a hipotermia, porém não seguida de quadro febril. Estes resultados demonstram que o pré-tratamento com a sinvastatina 40 mg/Kg (durante 7 dias), antes de aplicação i.p. de LPS, é capaz de modificar as respostas comportamentais ao desafio imunológico, sugerindo que este fármaco influencia a manifestação do comportamento doentio durante a endotoxemia. / Sickness behavior is the term used to define the set of behavioral changes that are triggered during an infectious process. Furthermore, these changes are considered the animal's adaptive responses in order to fight the infection, providing thereby an environment suitable for the establishment of an effective and unfavorable immune response to the pathogen. Several studies have addressed the pleiotropic effects of simvastatin, ie, effects that are beyond their hypocholesterolemic function. Among these effects, we can mention its antioxidant, anti-inflammatory, immunomodulatory and anti-thrombogenic action. Based on these assertions, the aim of this study was to investigate the influence of simvastatin on the sickness behavior. Initially, we tested doses of 100, 200 and 500 ug / kg of lipopolysaccharide (LPS), 2, 6 and 24 hours after application. Then, the Swiss mice were pre-treated for seven days with vehicle or Simvastatin 10 mg/kg or Simvastatin 40 mg/kg via gavage (p.o.) and on the eighth day, they received a dose of 200 µg/kg LPS or solution saline (i.p.) and behavioral responses were evaluated after 2 hours. In mice pretreated with simvastatin 10 mg/kg, no significant difference from the vehicle+LPS group in any of the apparatuses and analyzed parameters. However, in animals pretreated with simvastatin 40mg/kg there was a reduction of latency and increase in the number of crossings and the time spent in the light side in Bright-Dark Test, decreased floatings number in Forced Swimming and the immobility time in Tail Suspense Test and increased number of central, peripheral and total crossings and rearings in Open Field Test. The serum levels of the measured cytokines, we note that pre-treatment with simvastatin at doses of 10 and 40 mg/kg, was not able to attenuate the increase in TNF-α induced by LPS, however, the plasma concentrations of IL- 1β showed increased up to the pre-treatment with simvastatin 10 mg/kg and reduced when animals were pre-treated with simvastatin 40 mg/kg. In telemetry, we noticed a mild fever followed by hypothermia in animals that received LPS+vehicle and simvastatin 10+ LPS. Already in animals that received simvastatin 40+LPS, hypothermia observed but is not followed by fever. These results demonstrate that pre-treatment with simvastatin 40mg/kg (for 7 days) before application i.p. LPS is able to modify the behavioral responses to immune challenge, suggesting that this drug influences the manifestation of sickness behavior during endotoxemy. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

Submitted by MARIA LUISA DE ALENCAR E SILVA LEITE null (marialuisa_asl@hotmail.com) on 2017-03-17T12:03:46Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Maria Luisa (BIBLIOTECA 14.03.2017 - FINAL).pdf: 2625811 bytes, checksum: b80c111f48c8d556c975f527dd44ca85 (MD5) / Approved for entry into archive by Juliano Benedito Ferreira (julianoferreira@reitoria.unesp.br) on 2017-03-21T19:05:48Z (GMT) No. of bitstreams: 1 leite_mlas_me_arafo.pdf: 2625811 bytes, checksum: b80c111f48c8d556c975f527dd44ca85 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-21T19:05:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 leite_mlas_me_arafo.pdf: 2625811 bytes, checksum: b80c111f48c8d556c975f527dd44ca85 (MD5) Previous issue date: 2017-02-23 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O objetivo geral da presente pesquisa foi avaliar se o pré-tratamento da dentina com sinvastatina (SV) antes de aplicar o cimento de inômero de vidro (CIV) permitiria a difusão transdentinária desta droga em concentrações capazes de promover aumento da capacidade de células odontoblastóides em depositar e mineralizar matriz de dentina. No Estudo 1, foram determinadas concentrações de sinvastatina que fossem bioativas e citocompatíveis quando em contato com células odotoblastóides MDPC-23. Duas concentrações (0,01 e 0,1 μM) e três tempos de tratamento (24 h, 72 h e contínuo – até 14 dias) foram avaliados. No Estudo 2, diante da confirmação da hipótese da difusão transdentinária da SV por análise em cromatografia liquida em espectro de massa (LC-MS/MS), concentrações de 2,5 e 1,0 mg/mL foram selecionadas para avaliação do efeito bioativo transdentinário sobre células odontoblastóides MDPC-23 após pré-tratamento ou não da superfície dentinária com EDTA. Também nesse estudo foi avaliada a ação antimicrobiana (teste de disco-difusão) das concentrações de 2,5 e 1,0 mg/ml de SV sobre Streptococcus mutans e Lactobacillus acidophilus. No Estudo 3, a concentração que apresentou os melhores resultados no estudo anterior foi selecionada para avaliação do efeito bioativo transdentinário sobre células MDPC-23 associado ao protocolo de forramento cavitário com Ketac Molar (3M ESPE). Nos estudos que avaliaram o efeito bioativo da SV foram analisados os seguintes parâmetros celulares: viabilidade celular (MTT), atividade de ALP (timolftaleína monofosfato) e deposição de matriz mineralizada (alizarin red) (n = 6). A concentração de 2,5 mg/ml de SV também foi selecionada para avaliação da resistência de união ao microcisalhamento do CIV Ketac Molar à dentina, aplicando-a sobre a dentina pré-tratada ou não com EDTA. Os dados foram submetidos aos testes ANOVA e Tukey (p < 0,05). Os resultados do Estudo 1 demonstraram que baixas concentrações de SV em curto período de tratamento apresentaram efeito bioativo e citocompatível sobre células odontoblastóides MDPC-23. Em sequência, os estudos transdentinários demonstraram aumento na atividade de ALP e na deposição de matriz mineralizada quando a dentina foi tratada com SV; no entanto, apenas a SV 2,5 mg/mL, associada ou não ao EDTA, resultou em valores significativamente superiores ao controle negativo, para ambos os parâmetros testados. Desta forma, a concentração de 2,5 mg/mL de SV foi selecionada para realização dos experimentos subsequentes, onde foi possível observar que o forramento da dentina com CIV, realizado após tratamento do substrato com EDTA e SV apresentou a melhor resposta quanto a expressão dos marcadores fenotípicos testados. De modo complementar, observou-se ação antimicrobiana da SV nas concentrações testadas contra as linhagens avaliadas e que o pré-tramento da dentina com EDTA previamente a aplicação da SV resultou em valores de resistência de união significativamente superiores comparado ao tratamento isolado com SV. Assim, conclui-se que o tratamento da dentina com SV previamente ao forramento do substrato com CIV é capaz de aumentar a capacidade de células odontoblastóides em depositar matriz mineralizada rica em cálcio. / The aim of the present study was to determine whether the treatment of dentin with simvastatin (SV) before application of glass-ionomer cement (GIC), allows transdentinal diffusion of this drug at bioactive concentration capable of increasing the potential of odontoblast-like cells to deposit and mineralize dentin matrix. In the 1st study, the dose-response and time-course of SV were determined for the odontoblast-like MDPC-23 cells. Two concentrations (0.01 and 0.1 μM) of SV and three treatment times (24 h, 72 h and continuous – up to 14 days) were evaluated. In the 2nd study, the SV transdentinal diffusion hypothesis was confirmed by liquid chromatography mass spectrometry (LC-MS / MS). Then, concentrations of 2.5 and 1.0 mg/ml were selected to evaluate the transdentinal bioactivity of this drug with MDPC-23 cells, when dentin was treated or not with EDTA. Also in this study the antimicrobial activity (disc diffusion assay) of 2.5 and 1.0 mg/ml SV against Streptococcus mutans and Lactobacillus acidophilus was evaluated. In the 3rd study, the 2.5 mg/mL SV was selected to analyze the bioactivity of dentin treatment with SV followed by lining with Ketac Molar (3M ESPE). In all the studies, the following cell parameters were analyzed: cell viability (MTT), ALP activity (thymolphthalein monophosphate) and mineralized matrix deposition (alizarin red) (n=6). The concentration of 2.5 mg/ml SV was selected to evaluate dentin microshear-bond strength of GIC Ketac Molar when applied on dentin conditioned or not with EDTA. Data were submitted to ANOVA and Tukey test’s (p<0.05). The results of the 1st study demonstrated that exposing MDPC-23 to low concentrations of SV during short periods of time resulted in a bioactive effect associated with no toxicity to cultured cells. In the transdentinal study, it was detected an increase on ALP activity and mineralized matrix deposition when dentin was treated with SV; however, only SV 2.5 mg/ml, associated or not to EDTA, resulted in values significantly higher than negative control for both cell parameters. Finally, it was observed that lining dentin with GIC associated with pre-treatment with EDTA and SV 2.5 mg/ml resulted in the best cell responses regarding the expression of odontoblastic phenotypic markers. In addition, SV featured antimicrobial activity at both tested concentrations against the bacterial strains evaluated. Finally, pre-treatment of dentin with EDTA + SV resulted in significantly higher bond strength values compared to SV treatment. Therefore, based upon the methodology employed in the present in vitro, it was possible to concluded that the treatment of dentin substrate with a specific concentration of simvastatin before application of glass-ionomer cement enhances the capability of odontoblast-like cells to deposit calcium-rich mineralized matrix / CNPq: 131183/2015-0 / FAPESP: 2015/15635-7

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pos-Graduação em Farmacologia, Florianópolis, 2009. / Made available in DSpace on 2012-10-24T16:26:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 274371.pdf: 1326584 bytes, checksum: 12b9b7b6de2ab10d89572ecba7378d63 (MD5) / A osteoartrite é uma doença articular degenerativa, progressiva e irreversível para a qual não há, atualmente, alternativas terapêuticas eficazes. O objetivo do presente estudo foi investigar se o tratamento com sinvastatina poderia exercer efeitos sobre a evolução e os sintomas da osteoartrite. Para tanto, foi utilizado o modelo de osteoartrite em joelhos induzida por ressecção dos ligamentos cruzado anterior e colateral medial e do terço anterior do menisco medial em ratos Wistar-Hanover machos. Os animais foram divididos em grupos de acordo com a realização de cirurgia (não operados, falso-operados ou operados) e o tratamento recebido (salina, sinvastatina nas doses de 1, 10 ou 20 mg/kg/dia ou cetoprofeno 10 mg/Kg/dose). A sinvastatina foi administrada por gavage por 45 dias, enquanto que o cetoprofeno foi administrado por via subcutânea 1 hora antes dos testes. A avaliação dos sintomas foi realizada por teste de incapacitância, teste de hipersensibilidade tátil, teste de hipernocicepção térmica e teste de campo aberto. O teste de incapacitância demonstrou que animais com osteoartrite apresentam menor apoio de peso no membro afetado pela osteoartrite quando comparados aos animais falso-operados. Os tratamentos com sinvastatina 20 mg/Kg/dia e com cetoprofeno 10mg/Kg aumentaram significativamente a proporção de peso apoiado sobre o membro operado. Não foi possível demonstrar diferenças significativas entre os animais operados e os não-operados nos testes de hipersensibilidade tátil, hipersensibilidade térmica e de campo aberto. A avaliação histológica pelo escore de OARSI demonstrou o desenvolvimento de osteoartrite no modelo utilizado e que o tratamento com sinvastatina 20 mg/kg/dia reduziu significativamente a lesão condral quando comparado aos animais operados que receberam salina. A avaliação dos cortes histológicos através de imuno-histoquímica para NFkappaB p65 fosforilado, caspase 1 e IL-17 demonstrou que as articulações osteoartríticas apresentaram, em comparação com articulações não-operadas, aumento da expressão de NFkappaB p65 e de caspase 1 na cartilagem hialina tibial, bem como de NFkappaB p65 fosforilado e IL-17 na membrana sinovial. Não foram encontrados níveis significativos de NFkappaB p65 e de IL-17 na cartilagem hialina. O tratamento com sinvastatina reduziu significativamente a expressão de caspase 1 na cartilagem hialina e de NFkappaB p65 fosforilado, caspase 1 e IL-17 na membrana sinovial. Em conjunto, os resultados do presente estudo demonstrou que sinvastatina reduz a progressão da osteoartrite e seus sintomas em um modelo experimental, sugerindo e que as estatinas podem ser úteis para o tratamento dessa doença.

Os conhecimentos atuais têm mostrado que a Esteato-Hepatite não alcoólica (EHNA), é a mais importante forma epidemiológica e clínica da Doença hepática gordurosa não alcoólica (DHGNA). Até o momento não existe terapia comprovada e conclusiva para o tratamento da EHNA. As estatinas são uma importante classe de agentes para tratar dislipidemia, mas ainda há relutância de usar esse medicamento em pacientes com doenças crônicas estabelecidas ou suspeita de doença hepática, EHNA inclusive. Objetivo: Avaliar o efeito da sinvastatina (SIM) sobre o tecido hepático em camundongos C57BL6 com EHNA, induzida por dieta MCD, na tentativa de elucidar a ação desse fármaco sobre as complicações desse modelo experimental. Métodos: Foram utilizados camundongos machos C57BL/6 com 8 semanas. Os animais foram divididos em 4 grupos (n=13): CO+V (I – ração controle + veículo de carboximetilcelulose), SIM 4 (II- ração controle + 4mg/Kg de SIM), EHNA+V (III- dieta MCD mais veículo), EHNA+SIM 4 (IV- dieta MCD mais sinvastatina). As dietas foram administradas por 4 semanas e a SIM (na dose de 200 μL, intragastricamente) durante as 2 últimas semanas. Foram realizadas análises séricas de aspartato aminotransferase (AST), alanina aminotransferase (ALT), colesterol e triglicerídeos, teste anatomopatológico, avaliação do dano ao DNA através do ensaio cometa, avaliação da lipoperoxidação (substâncias que reagem ao ácido tiobarbitúrico- TBARS) e da atividade das enzimas antioxidantes superóxido dismutase (SOD) e glutationa peroxidase (GPx), bem como os parâmetros moleculares de estresse oxidativo e reticular, dano celular, inflamação, disfunção endotelial e fibrose através da expressão proteica de NQO1, KEAP1, Nrf2, ATF6, GRP78, TGF- β , eNOS, iNOS, IL-12, HSF1 e HSP70 respectivamente, por Western blotting, avaliando o efeito da SIM. Resultados: Após o tratamento com sinvastatina observou-se melhora na integridade hepática e diminuição nos lipídios hepáticos. No teste anatomopatológico todos os animais doentes apresentam inflamação, esteatose microvacuolar e macrovacuolar além de balonização hepatocelular e a sinvastatina foi capaz de reduzir significativamente esta alteração. Quanto ao dano ao DNA, o ensaio cometa revelou que a dose de 4mg/Kg de sinvastatina não foi capaz de induzir dano ao DNA. Constatou-se também uma redução do dano oxidativo e às enzimas antioxidantes mantiveram seus valores semelhantes aos controles. A SIM ativou enzimas antioxidantes via Nrf2 e inibiu o estresse do retículo endoplasmático além de reduzir a fibrose, melhorar a função endotelial, diminuir a inflamação e o dano celular. Conclusão: Os resultados obtidos sugerem que a administração da sinvastatina, após estabelecimento da EHNA, desempenhou um papel protetor no fígado a julgar pelos parâmetros analisados, possivelmente devido as suas propriedades antioxidantes e anti-inflamatórias. / Current knowledge have shown that non-alcoholic steatohepatitis (NASH) is the most important epidemiological and clinic nonalcoholic fatty liver disease (NAFLD). So far there is no proven efficient therapy for the treatment of NAFLD. Statins are an important class of agents to treat dyslipidemia, but there is still reluctance to use this drug in patients with established or suspected chronic liver disease, including NASH. Objective: To evaluate the effect of simvastatin (SIM) on liver tissue in C57BL6 mice with NASH induced by MCD diet in an attempt to elucidate the action of this drug on the complications of this experimental model. Methods: Male C57BL/6 mice were used at 8 weeks. The animals were divided into 4 groups (n=10): CO+V (I- control diet + vehicle carboxymethylcellulose), SIM 4 (II-control diet + 4mg/kg SIM), NASH+V (IIIMCD diet plus vehicle), NASH+SIM 4 (IV-MCD diet plus simvastatin). The diets were administered for 4 weeks and the SIM (200 μl, intragastrically) for the last 2 weeks. Analyzes of serum aspartate aminotransferase (AST), alanine aminotransferase (ALT), cholesterol and triglycerides, pathology testing, assessment of DNA damage by comet assay, assessment of lipid peroxidation (substances that react to TBARSthiobarbituric acid) and activity of the antioxidant enzymes superoxide dismutase (SOD) and glutathione peroxidase (GPx), as well as the molecular parameters of oxidative and reticular stress, fibrosis, endothelial dysfunction, inflammation and cellular injury through the expression protein of NQO1, KEAP1, Nrf2, ATF6, GRP78, TGF- β, eNOS, iNOS, IL-12, HSF1 and HSP70 respectively, for Western blotting, assessing the effect of the SIM. Results: After treatment with simvastatin was observed an improvement in liver integrity and decrease in hepatic lipids. Pathology test all sick animals exhibit inflammation, micro and macrovesicular steatosis, hepatocellular ballooning. SIM was able to significantly reduce this change. For the DNA damage, the comet assay revealed that the dose of 4mg/kg simvastatin was unable to induce DNA damage. We also observed a reduction of oxidative damage and antioxidant enzymes maintained their values similar to controls. SIM activated antioxidant enzymes via Nrf2 and inhibited endoplasmic reticulum stress, reduce the fibrosis, improve endothelial function, inflammation and reduce cellular damage. Conclusion: The results suggest that the administration of simvastatin after establishment of NASH, played a protective role in the liver according the parameters, possibly due to its antioxidant and anti-inflammatory properties.

Orientador: Carlos Alberto de Souza Costa / Resumo: O objetivo geral da presente pesquisa foi avaliar se o pré-tratamento da dentina com sinvastatina (SV) antes de aplicar o cimento de inômero de vidro (CIV) permitiria a difusão transdentinária desta droga em concentrações capazes de promover aumento da capacidade de células odontoblastóides em depositar e mineralizar matriz de dentina. No Estudo 1, foram determinadas concentrações de sinvastatina que fossem bioativas e citocompatíveis quando em contato com células odotoblastóides MDPC-23. Duas concentrações (0,01 e 0,1 μM) e três tempos de tratamento (24 h, 72 h e contínuo - até 14 dias) foram avaliados. No Estudo 2, diante da confirmação da hipótese da difusão transdentinária da SV por análise em cromatografia liquida em espectro de massa (LC-MS/MS), concentrações de 2,5 e 1,0 mg/mL foram selecionadas para avaliação do efeito bioativo transdentinário sobre células odontoblastóides MDPC-23 após pré-tratamento ou não da superfície dentinária com EDTA. Também nesse estudo foi avaliada a ação antimicrobiana (teste de disco-difusão) das concentrações de 2,5 e 1,0 mg/ml de SV sobre Streptococcus mutans e Lactobacillus acidophilus. No Estudo 3, a concentração que apresentou os melhores resultados no estudo anterior foi selecionada para avaliação do efeito bioativo transdentinário sobre células MDPC-23 associado ao protocolo de forramento cavitário com Ketac Molar (3M ESPE). Nos estudos que avaliaram o efeito bioativo da SV foram analisados os seguintes parâmetros celulares: viabili... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / The aim of the present study was to determine whether the treatment of dentin with simvastatin (SV) before application of glass-ionomer cement (GIC), allows transdentinal diffusion of this drug at bioactive concentration capable of increasing the potential of odontoblast-like cells to deposit and mineralize dentin matrix. In the 1st study, the dose-response and time-course of SV were determined for the odontoblast-like MDPC-23 cells. Two concentrations (0.01 and 0.1 μM) of SV and three treatment times (24 h, 72 h and continuous - up to 14 days) were evaluated. In the 2nd study, the SV transdentinal diffusion hypothesis was confirmed by liquid chromatography mass spectrometry (LC-MS / MS). Then, concentrations of 2.5 and 1.0 mg/ml were selected to evaluate the transdentinal bioactivity of this drug with MDPC-23 cells, when dentin was treated or not with EDTA. Also in this study the antimicrobial activity (disc diffusion assay) of 2.5 and 1.0 mg/ml SV against Streptococcus mutans and Lactobacillus acidophilus was evaluated. In the 3rd study, the 2.5 mg/mL SV was selected to analyze the bioactivity of dentin treatment with SV followed by lining with Ketac Molar (3M ESPE). In all the studies, the following cell parameters were analyzed: cell viability (MTT), ALP activity (thymolphthalein monophosphate) and mineralized matrix deposition (alizarin red) (n=6). The concentration of 2.5 mg/ml SV was selected to evaluate dentin microshear-bond strength of GIC Ketac Molar when applied on dentin conditioned or not with EDTA. Data were submitted to ANOVA and Tukey test's (p<0.05). The results of the 1st study demonstrated that exposing MDPC-23 to low concentrations of SV during short periods of time resulted in a bioactive effect associated with no toxicity to cultured cells. In the transdentinal study, it was detected an increase on ALP activity...(Complete abstract electronic access below) / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:55Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-07-07Bitstream added on 2014-06-13T19:47:52Z : No. of bitstreams: 1 castro_mjd_me_sjc.pdf: 292516 bytes, checksum: 4537a19f3141bee87f8f83796feffbe9 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Devido ao aumento na taxa de óbitos relacionados à aterosclerose e AVC a sinvastatina tornou-se o medicamento eleito pelo SUS, por sua eficácia no combate às altas taxas de colesterol plasmático e diabete melitos. Enfermidades estas, decorrentes tanto de histórico familiar de hipercolesterolemia, quanto devido a hábitos de vida sedentária e de alimentação desregrada, que vem acometendo adultos jovens e mulheres em idade fértil; que já fazem uso de um ou mais medicamentos. Associado às vezes a uma gravidez não planejada, afetando também o feto. Inúmeros trabalhos têm sido feitos com o intuito de conhecer melhor sobre a atuação desse fármaco utilizado durante o período gestacional, tanto que, diversos medicamentos em princípio são contra indicados, principalmente nos primeiros três meses. Entretanto a sinvastatina, embora controversa a sua contra indicação, é o fármaco de escolha nos postos de saúde e essas jóvens mulheres grávidas estão fazendo uso dos mesmos. O objetivo desse trabalho foi o de fornecer maior embasamento a essa contra indicação. Foram utilizadas 24 ratas em período gestacional, onde desde o primeiro dia da prenhez confirmada as mesmas receberam por gavagem o fármaco manipulado pela farmácia de manipulação “A Especialista”. Os animais foram divididos em 4 grupos: as ratas controle, que receberam óleo de amêndoas doce e as ratas que receberam 10, 20 e 40 mg/kg de sinvastatina diariamente. Os resultados foram plotados em planilhas do Excel e submetidos aos testes estatísticos não paramétricos e serviram para corroborar a contra indicação do fármaco pois houve aumento significativo do número de reabsorções fetais nos cornos uterinos comprometendo a prenhez, reduzindo o número de fetos gerados nas ratas que receberam 40 mg/kg, além de diminuir o peso e comprimento dos fetos em geral / Simvastatin is currently the medicine chosen actually due to hight atherosclerosis death index and its effectiveness in combating high rates of plasma cholesterol and diabetes mellitus. Diseases caused both by family histories of hypercholesterolemia as well, due to sedentary lifestyles and eating disorders, which are affecting young adults and women of childbearing age who, due to this family history, had used one or more drugs which interact intensifying their effect, .associated some times to, an unplanned pregnancy, and drug interaction, affecting both. Several studies have been done in order to learn and get better foundation about the actions of these drugs during pregnancy, so that several medications, in principle, are contraindicated. However simvastatin, controversial contraindication, is the choosen drug in health care, and those pregnant women with a family history of hypercholesterolemia are making use of them. Therefore, the purpose of this study is to confirm this contraindication. The sample consisted of 24 female rats with confirmed pregnancy from day one. The entire sample received by gavage the drug - manipulated by the Specialist pharmacy. The animals were divided into four groups: 1. control (SC), where the rats received sweet almond oil and three other groups (S10, S20 and S40) where the rats received simvastatin 10, 20 and 40 mg / kg daily, respectively. The results were plotted in an excel spreadsheet and submitted to a nonparametric statistical test. They served to confirm our initial goal confirming the simvastatin contraindication drug due to uterin reabsortion increased number reducing little rats number, wheight and size. Thus compromising pregnancy

Os conhecimentos atuais têm mostrado que a Esteato-Hepatite não alcoólica (EHNA), é a mais importante forma epidemiológica e clínica da Doença hepática gordurosa não alcoólica (DHGNA). Até o momento não existe terapia comprovada e conclusiva para o tratamento da EHNA. As estatinas são uma importante classe de agentes para tratar dislipidemia, mas ainda há relutância de usar esse medicamento em pacientes com doenças crônicas estabelecidas ou suspeita de doença hepática, EHNA inclusive. Objetivo: Avaliar o efeito da sinvastatina (SIM) sobre o tecido hepático em camundongos C57BL6 com EHNA, induzida por dieta MCD, na tentativa de elucidar a ação desse fármaco sobre as complicações desse modelo experimental. Métodos: Foram utilizados camundongos machos C57BL/6 com 8 semanas. Os animais foram divididos em 4 grupos (n=13): CO+V (I – ração controle + veículo de carboximetilcelulose), SIM 4 (II- ração controle + 4mg/Kg de SIM), EHNA+V (III- dieta MCD mais veículo), EHNA+SIM 4 (IV- dieta MCD mais sinvastatina). As dietas foram administradas por 4 semanas e a SIM (na dose de 200 μL, intragastricamente) durante as 2 últimas semanas. Foram realizadas análises séricas de aspartato aminotransferase (AST), alanina aminotransferase (ALT), colesterol e triglicerídeos, teste anatomopatológico, avaliação do dano ao DNA através do ensaio cometa, avaliação da lipoperoxidação (substâncias que reagem ao ácido tiobarbitúrico- TBARS) e da atividade das enzimas antioxidantes superóxido dismutase (SOD) e glutationa peroxidase (GPx), bem como os parâmetros moleculares de estresse oxidativo e reticular, dano celular, inflamação, disfunção endotelial e fibrose através da expressão proteica de NQO1, KEAP1, Nrf2, ATF6, GRP78, TGF- β , eNOS, iNOS, IL-12, HSF1 e HSP70 respectivamente, por Western blotting, avaliando o efeito da SIM. Resultados: Após o tratamento com sinvastatina observou-se melhora na integridade hepática e diminuição nos lipídios hepáticos. No teste anatomopatológico todos os animais doentes apresentam inflamação, esteatose microvacuolar e macrovacuolar além de balonização hepatocelular e a sinvastatina foi capaz de reduzir significativamente esta alteração. Quanto ao dano ao DNA, o ensaio cometa revelou que a dose de 4mg/Kg de sinvastatina não foi capaz de induzir dano ao DNA. Constatou-se também uma redução do dano oxidativo e às enzimas antioxidantes mantiveram seus valores semelhantes aos controles. A SIM ativou enzimas antioxidantes via Nrf2 e inibiu o estresse do retículo endoplasmático além de reduzir a fibrose, melhorar a função endotelial, diminuir a inflamação e o dano celular. Conclusão: Os resultados obtidos sugerem que a administração da sinvastatina, após estabelecimento da EHNA, desempenhou um papel protetor no fígado a julgar pelos parâmetros analisados, possivelmente devido as suas propriedades antioxidantes e anti-inflamatórias. / Current knowledge have shown that non-alcoholic steatohepatitis (NASH) is the most important epidemiological and clinic nonalcoholic fatty liver disease (NAFLD). So far there is no proven efficient therapy for the treatment of NAFLD. Statins are an important class of agents to treat dyslipidemia, but there is still reluctance to use this drug in patients with established or suspected chronic liver disease, including NASH. Objective: To evaluate the effect of simvastatin (SIM) on liver tissue in C57BL6 mice with NASH induced by MCD diet in an attempt to elucidate the action of this drug on the complications of this experimental model. Methods: Male C57BL/6 mice were used at 8 weeks. The animals were divided into 4 groups (n=10): CO+V (I- control diet + vehicle carboxymethylcellulose), SIM 4 (II-control diet + 4mg/kg SIM), NASH+V (IIIMCD diet plus vehicle), NASH+SIM 4 (IV-MCD diet plus simvastatin). The diets were administered for 4 weeks and the SIM (200 μl, intragastrically) for the last 2 weeks. Analyzes of serum aspartate aminotransferase (AST), alanine aminotransferase (ALT), cholesterol and triglycerides, pathology testing, assessment of DNA damage by comet assay, assessment of lipid peroxidation (substances that react to TBARSthiobarbituric acid) and activity of the antioxidant enzymes superoxide dismutase (SOD) and glutathione peroxidase (GPx), as well as the molecular parameters of oxidative and reticular stress, fibrosis, endothelial dysfunction, inflammation and cellular injury through the expression protein of NQO1, KEAP1, Nrf2, ATF6, GRP78, TGF- β, eNOS, iNOS, IL-12, HSF1 and HSP70 respectively, for Western blotting, assessing the effect of the SIM. Results: After treatment with simvastatin was observed an improvement in liver integrity and decrease in hepatic lipids. Pathology test all sick animals exhibit inflammation, micro and macrovesicular steatosis, hepatocellular ballooning. SIM was able to significantly reduce this change. For the DNA damage, the comet assay revealed that the dose of 4mg/kg simvastatin was unable to induce DNA damage. We also observed a reduction of oxidative damage and antioxidant enzymes maintained their values similar to controls. SIM activated antioxidant enzymes via Nrf2 and inhibited endoplasmic reticulum stress, reduce the fibrosis, improve endothelial function, inflammation and reduce cellular damage. Conclusion: The results suggest that the administration of simvastatin after establishment of NASH, played a protective role in the liver according the parameters, possibly due to its antioxidant and anti-inflammatory properties.