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Estudo de análogo da subtância P para desenvolvimento de radiofármaco com aplicação na terapia de tumores cerebrais / Study of analog of substance P for development of radiopharmaceutical with application in therapy of cerebral tumors.Guilherme Luiz de Castro Carvalho 02 July 2015 (has links)
Atualmente os gliomas representam cerca de 81% dos tumores cerebrais malignos, com aumento na incidência tanto em crianças, como em adultos acima dos 45 anos. Um número elevado de receptores neuroquinina tipo 1 (NK-1) estão expressos em células de glioma, estando a ligação da Substância P (SP) a esses receptores, envolvida no desenvolvimento e progressão desse tipo de tumor. A SP quelada ao DOTA (SP-DOTA), radiomarcada, vem sendo testada para utilização na terapia de gliomas, sendo o lutécio-177 (177Lu), devido a seu menor alcance tecidual, o radioisótopo mais indicado para tumores localizados em áreas críticas do cérebro. No entanto, estudos indicam a necessidade da adição de um excesso de metionina para prevenção da oxidação peptídica da SP-DOTA-177Lu, visando aumentar a estabilidade e a capacidade de ligação às células tumorais. Para superar esse desafio, surge a perspectiva da utilização de um novo análogo da SP, com estrutura modificada, para prevenir a oxidação peptídica. Neste contexto, o objetivo desse trabalho foi estudar a marcação de um novo análogo da SP com 177Lu e caracterizar suas propriedades in vitro e in vivo, visando a obtenção de um radiofármaco inédito e com potencial aplicação na terapia de tumores cerebrais e realizar estudos preliminares de marcação deste novo análogo com Ítrio-90 (90Y). O novo análogo foi obtido pela troca do aminoácido metionina (Met) pelo aminoácido norleucina (Nle) na posição 11 da cadeia peptídica da SP, sendo esses peptídeos denominados respectivamente SP(Met11)-DOTA e SP(Nle11)-DOTA. Após análise da oxidação peptídica dos dois peptídeos, os parâmetros da radiomarcação da SP(Nle11)-DOTA, com 177LuCl3, foram estudados para determinar a melhor condição de marcação. As estabilidades in vitro da SP(Nle11)-DOTA-177Lu sob refrigeração (2-8°C), no freezer (-20°C) e em soro humano (37°C) foram determinadas após radiomarcação com alta atividade, quanto ao uso de agentes estabilizantes e após diluição. A SP(Nle11)-DOTA também foi radiomarcada com 90Y, utilizando-se a condição padrão determinada, sendo a estabilidade in vitro da SP(Nle11)-DOTA-90Y sob refrigeração (2-8°C) e em freezer (-20°C), avaliada após radiomarcação com alta atividade e quanto a utilização de agente estabilizante. A capacidade de ligação in vitro às células tumorais (U-87 MG e M059J) e a biodistribuição in vivo em camundongos BALB/c sadios foram determinadas para a SP(Nle11)-DOTA-177Lu e comparadas à SP(Met11)-DOTA-177Lu. A ligação às proteínas plasmáticas e a biodistribuição em camundongos Nude com modelo tumoral também foram avaliadas. Os resultados obtidos na análise da oxidação peptídica comprovaram a importância da adição de excesso de metionina para prevenção da oxidação peptídica e indicaram uma alta estabilidade da SP(Nle11)-DOTA, durante e após o processo de radiomarcação. A adição de 148 MBq (4 mCi) da solução de 177LuCl3 em HCl 0,05N à 10 μg de SP(Nle11)-DOTA diluída em tampão acetato de sódio 0,4 M pH 4,5 seguida pela incubação a uma temperatura de 90ºC por 30 minutos, sob agitação de 350 rpm foi definida com condição padrão de marcação. O congelamento (-20°C), o uso de agentes estabilizantes e a diluição apresentaram-se como métodos efetivos para garantir uma alta estabilidade in vitro da SP(Nle11)-DOTA-177Lu, após a marcação com alta atividade. Bons resultados também foram observados para a marcação da SP(Nle11)-DOTA com 90YCl3 e para a estabilidade in vitro da SP(Nle11)-DOTA-90Y, após congelamento (-20°C) e quando utilizado ácido gentísico como estabilizante. A SP(Nle11)-DOTA-177Lu apresentou uma boa especificidade pelas células tumorais, principalmente pelas células de glioma humano M059J, sugerindo que a substituição do aminoácido metionina por norleucina na posição 11 não compromete a capacidade de ligação da SP(Nle11) às células tumorais. Uma baixa porcentagem de ligação às proteínas plasmáticas e um rápido clareamento sanguíneo foram observados para a SP(Nle11)-DOTA-177Lu, sendo esse radiofármaco eliminado preferencialmente por via renal. A SP(Nle11)-DOTA-177Lu apresentou uma boa estabilidade in vivo e se mostrou incapaz de atravessar a barreira hematoencefálica, sendo seu uso indicado por injeção intratumoral ou intracavitária. O estudo de biodistribuição em animais com modelo tumoral, mostrou que esse radiofármaco se liga às células tumorais por ligações receptor específicas. Com base nesse dados conclui-se que a SP(Nle11)-DOTA-177Lu, apresenta-se como um radiofármaco inédito que devido às suas propriedades in vitro e in vivo favoráveis, apresenta potencial aplicação na terapia de tumores cerebrais, representando uma nova possibilidade dentro do limitado arsenal terapêutico para esse tipo de tumor. / Currently gliomas represent about 81% of malignant brain tumors with increased incidence in children and in adults over 45 years. A large number of type 1 neurokinin receptor (NK-1) are expressed in glioma cells, being the binding of substance P (SP) to these receptors, involved in the development and progression of this tumor type. The SP conjugated at DOTA chelator (SP-DOTA), radiolabeled, have been tested for use in the treatment of gliomas, and the lutetium-177 (177 Lu), due to its lower tissue range, has been the most suitable radioisotope for tumors located in critical areas brain. However, studies indicate the necessity of adding an excess of methionine to prevent the peptide SP-DOTA-177Lu oxidation in order to increase the stability and capacity to bind to tumor cells. To overcome this challenge, there is the prospect of using a new analog of SP with a modified structure, to prevent peptide oxidation. In this context, the aim of this work was study the labeling of a new analog of SP with 177Lu and characterize their properties in vitro and in vivo, in order to obtain a novel radiopharmaceutical with potential application in brain tumor therapy, and perform preliminary studies labeling of this new analog with yttrium-90 (90Y). The new analog was obtained by replacement of the amino acid methionine (Met) by the amino acid norleucine (Nle) at position 11 of the peptide chain of SP, and these peptides were called SP(Met11)-DOTA and SP(Nle11)-DOTA respectively. After analysis of the oxidation for the two peptides, the radiolabeling parameters of the SP(Nle11)-DOTA with 177LuCl3 were studied to determine the best labeling condition. The SP(Nle11)-DOTA was also radiolabeled with 90Y, using standard condition, and the stability in vitro of the SP(Nle11)-DOTA-90Y assessed under refrigeration (2-8 °C) and under freezing (-20° C), after radiolabeling with high activity and use of stabilizing agent. The stabilities in vitro of the SP (Nle11)-DOTA-177Lu under refrigeration (2-8 °C), under freezing (-20 °C) and in human serum (37 °C) were determined after radiolabeling with high activity, with use of stabilizing agents and after dilution. The ability of in vitro binding to tumor cells (U-87 MG and M059J) and the biodistribution in vivo in healthy BALB/c mice were determined for the 177Lu-DOTA-SP(Nle11) and compared to 177Lu-DOTA-SP(Met11). The plasma protein binding and biodistribution in Nude mice with tumor model were also evaluated. The results obtained from analysis of oxidation for the two peptides confirmed the importance of adding excess methionine to prevent peptide oxidation and indicated a high stability of the DOTA- SP(Nle11), during and after the radiolabeling process. The addition of 148 MBq (4 mCi) of 177LuCl3 solution in 0.05N HCl at 10 μg DOTA-SP(Nle11) diluted in 0.4 M sodium acetate buffer pH 4.5 followed by incubation at a temperature of 90 °C for 30 minutes under constant agitation to 350 rpm was defined as standard labeling condition. The freezing (-20 °C), the use of stabilizing agents and the dilution were presented as effective methods to ensure high stability in vitro 177Lu-DOTA-SP(Nle11), after labeling with high activity. Good results were also observed for labeling DOTA-SP(Nle11) with 90YCl3 and for stability in vitro of the 90Y-DOTA-SP(Nle11) after freezing (-20 °C) and when gentisic acid was used as a stabilizer. The 177Lu-DOTA-SP(Nle11) showed good specificity to tumor cells, particularly human glioma cells (M059J), suggesting that substitution of the amino acid norleucine for methionine at position 11 does not compromise the capacity of SP(Nle11) binding to tumor cells. A low percentage of plasma protein binding and rapid blood clearance were observed for the 177Lu-DOTA-SP(Nle11), being this radiopharmaceutical preferably eliminated by the kidney. The 177Lu-DOTA-SP(Nle11) showed good stability in vivo and inability to cross the blood brain barrier, being its use indicated through intratumoral or intracavitary injection. The biodistribution studies in animals with tumor model showed that the radiopharmaceutical binds to the tumor cells by specific receptor binding. Based on this data was concluded that the 177Lu-DOTA-SP(Nle11), can be presented as a novel radiopharmaceutical that due to its favorable properties in vitro and in vivo, presents a potential application in the therapy of brain tumors, representing a new possibility within the limited therapeutic options for this type of tumor.
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Expressão da substância P e de seu receptor Neuroquinina-1 em carcinomas espinocelulares de boca e sua implicação na atividade proliferativa tumoral / Expression of the substance P and its receptor NK-1 in oral squamous cell carcinoma and its tumor proliferative activityBrener, Sylvie 04 December 2009 (has links)
A substância P (SP) é um neuropeptídeo da família das taquicininas que regula numerosas funções biológicas por meio da ligação ao seu receptor altamente específico neuroquinina-1 (NK-1R). Este complexo SP/NK-1R está envolvido em diversos processos relacionados à oncogênese, como a mitogênese, angiogênese, migração celular e metástase. O objetivo deste trabalho foi investigar a expressão de substância P e de seu receptor NK-1 e sua correlação com o índice de proliferação celular em 73 pacientes portadores de 90 carcinomas espinocelulares de boca, diagnosticados e tratados no Hospital General e Hospital de La Princesa, Jaen, Espanha, durante o período de 1995 a 2008. Todos os tumores foram corados pela técnica imunoistoquímica da estreptavidina-biotina-peroxidase com os anticorpos anti-SP, anti-NK-1R e anti-Ki-67. As alterações celulares epiteliais das margens cirúrgicas livres de doença também foram registradas. A expressão imunoistoquímica da substância P e do seu receptor neurokinina-1 foi avaliada na membrana, no citoplasma e no núcleo das células epiteliais malignas e do epitélio da mucosa bucal adjacente ao tumor, nos linfócitos e nos vasos sanguíneos dos tumores. O índice de proliferação celular tumoral foi determinado pela expressão imunoistoquímica de Ki-67 identificada no núcleo das células neoplásicas. As correlações entre as diversas localizações da SP, de seu receptor NK-1R e do índice de proliferação tumoral determinado pelo Ki-67 foram determinadas estatísticamente utilizando-se o Crosstab, Regress e Descript de SUDAAN. A expressão de SP foi identificada no estroma de 77% dos tumores, na membrana de 71% das células malignas e no citoplasma de 81,2% dos tumores. A maioria dos tumores apresentou altas taxas de proliferação das células neoplásicas com mais de 50% das células imunopositivas para o Ki-67. Ao analisar as margens cirúrgicas livres de doença, observou-se expressão da SP, sobretudo no terço inferior e médio, tanto no núcleo, como no citoplasma e na membrana celular. A expressão concomitante de substância P e do receptor neurokinina-1 no citoplasma das células neoplásicas ocorreu mais frequentemente nas células tumorais em proliferação. Verificou-se que expressão de SP no câncer bucal ocorre juntamente com o aumento da expressão de NK-1R, sugerindo que as células neoplásicas epiteliais bucais podem utilizar esta via para tornarem-se mais susceptíveis aos estímulos mediados pela SP. A expressão de substância P nos linfócitos do infiltrado inflamatório e vasos sanguíneos intratumorais e peritumorais se associaram a tumores de menor tamanho, menor estádio clínico e com menor frequência metástase ganglionar. Concluiu-se que as células neoplásicas epiteliais bucais podem utilizar a via substância P/NK-1R para tornarem-se mais susceptíveis aos estímulos mediados pela SP, particularmente aqueles associados à proliferação celular. Além disso, a expressão epitelial, citoplasmática e nuclear da substância P é um evento precoce na carcinogênese bucal podendo ser considerado um marcador da presença e intensidade de displasia epitelial. / The substance P (SP) is a neuropeptide of the tachykinin family that regulates multiple biological functions by binding to the highly specific receptor neurokinin-1. This complex SP/NK-1 is involved in several processes related to oncogenesis, such as mitogenesis, angiogenesis, cell migration and metastasis. This study investigated the expression of substance P and its receptor NK-1 and its correlation with the cell proliferation index in 73 patients with oral squamous cell carcinoma, diagnosed and treated at the General Hospital and Princess Hospital at Jaen, Spain, during the period 1995 to 2008. All tumors were stained immunohistochemically by the streptavidin-biotin-peroxidase technique using the antibodies anti-SP, anti-NK-1R and anti-Ki-67. The epithelial cell alterations on the disease-free surgical margins were registered. The immunohistochemical expression of SP and its receptor neurokinin-1 were evaluated on the membrane, cytoplasm and nucleus of malignant epithelial cells and cells of healthy oral mucosa adjacent to the tumor, as well as on the infiltrating lymphocytes and peritumoral or intratumoral blood vessels. The tumor cell proliferation index was determined by the immunohistochemical expression of Ki- 67 identified on the malignant cell nucleus. The correlations between the distinct localizations of SP, its receptor NK-1 and the proliferation index Ki-67 were statistically analyzed using the Sudaan Crosstab, Regress and Descript tests. The SP expression was identified on the stroma of 77% of tumors, on the membrane of 71% of malignant cells and cytoplasm of 81.2% of tumors. Most tumors presented high proliferation rates of neoplastic cells, with more than 50% of cells immunopositive for Ki-67. Analysis of the disease-free surgical margins revealed SP expression especially on the lower and medium third, both on the nucleus, cytoplasm and cell membrane. The simultaneous expression of substance P and its receptor NK-1 on the cytoplasm of neoplastic cells occurred more frequently in proliferating malignant cells. The expression of SP in oral cancer occurred simultaneously to an increased expression of NK-1R, suggesting that the oral malignant epithelial cells might use this pathway to become more susceptible to the stimuli mediated by the SP. The substance P expression on infiltrating lymphocytes and intratumoral or peritumoral blood vessels was associated with tumors of small size, lower clinical stage and less frequent node metastasis. It was concluded that the oral neoplastic epithelial cells may use the pathway SP/NK-1R to become more susceptible to the stimuli mediated by the SP, particularly those associated with cell proliferation. Additionally, the epithelial, cytoplasmic and nuclear expression of substance P is an early event in oral carcinogenesis and may be considered a marker of the presence and intensity of epithelial dysplasia.
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Expressão da substância P e de seu receptor Neuroquinina-1 em carcinomas espinocelulares de boca e sua implicação na atividade proliferativa tumoral / Expression of the substance P and its receptor NK-1 in oral squamous cell carcinoma and its tumor proliferative activitySylvie Brener 04 December 2009 (has links)
A substância P (SP) é um neuropeptídeo da família das taquicininas que regula numerosas funções biológicas por meio da ligação ao seu receptor altamente específico neuroquinina-1 (NK-1R). Este complexo SP/NK-1R está envolvido em diversos processos relacionados à oncogênese, como a mitogênese, angiogênese, migração celular e metástase. O objetivo deste trabalho foi investigar a expressão de substância P e de seu receptor NK-1 e sua correlação com o índice de proliferação celular em 73 pacientes portadores de 90 carcinomas espinocelulares de boca, diagnosticados e tratados no Hospital General e Hospital de La Princesa, Jaen, Espanha, durante o período de 1995 a 2008. Todos os tumores foram corados pela técnica imunoistoquímica da estreptavidina-biotina-peroxidase com os anticorpos anti-SP, anti-NK-1R e anti-Ki-67. As alterações celulares epiteliais das margens cirúrgicas livres de doença também foram registradas. A expressão imunoistoquímica da substância P e do seu receptor neurokinina-1 foi avaliada na membrana, no citoplasma e no núcleo das células epiteliais malignas e do epitélio da mucosa bucal adjacente ao tumor, nos linfócitos e nos vasos sanguíneos dos tumores. O índice de proliferação celular tumoral foi determinado pela expressão imunoistoquímica de Ki-67 identificada no núcleo das células neoplásicas. As correlações entre as diversas localizações da SP, de seu receptor NK-1R e do índice de proliferação tumoral determinado pelo Ki-67 foram determinadas estatísticamente utilizando-se o Crosstab, Regress e Descript de SUDAAN. A expressão de SP foi identificada no estroma de 77% dos tumores, na membrana de 71% das células malignas e no citoplasma de 81,2% dos tumores. A maioria dos tumores apresentou altas taxas de proliferação das células neoplásicas com mais de 50% das células imunopositivas para o Ki-67. Ao analisar as margens cirúrgicas livres de doença, observou-se expressão da SP, sobretudo no terço inferior e médio, tanto no núcleo, como no citoplasma e na membrana celular. A expressão concomitante de substância P e do receptor neurokinina-1 no citoplasma das células neoplásicas ocorreu mais frequentemente nas células tumorais em proliferação. Verificou-se que expressão de SP no câncer bucal ocorre juntamente com o aumento da expressão de NK-1R, sugerindo que as células neoplásicas epiteliais bucais podem utilizar esta via para tornarem-se mais susceptíveis aos estímulos mediados pela SP. A expressão de substância P nos linfócitos do infiltrado inflamatório e vasos sanguíneos intratumorais e peritumorais se associaram a tumores de menor tamanho, menor estádio clínico e com menor frequência metástase ganglionar. Concluiu-se que as células neoplásicas epiteliais bucais podem utilizar a via substância P/NK-1R para tornarem-se mais susceptíveis aos estímulos mediados pela SP, particularmente aqueles associados à proliferação celular. Além disso, a expressão epitelial, citoplasmática e nuclear da substância P é um evento precoce na carcinogênese bucal podendo ser considerado um marcador da presença e intensidade de displasia epitelial. / The substance P (SP) is a neuropeptide of the tachykinin family that regulates multiple biological functions by binding to the highly specific receptor neurokinin-1. This complex SP/NK-1 is involved in several processes related to oncogenesis, such as mitogenesis, angiogenesis, cell migration and metastasis. This study investigated the expression of substance P and its receptor NK-1 and its correlation with the cell proliferation index in 73 patients with oral squamous cell carcinoma, diagnosed and treated at the General Hospital and Princess Hospital at Jaen, Spain, during the period 1995 to 2008. All tumors were stained immunohistochemically by the streptavidin-biotin-peroxidase technique using the antibodies anti-SP, anti-NK-1R and anti-Ki-67. The epithelial cell alterations on the disease-free surgical margins were registered. The immunohistochemical expression of SP and its receptor neurokinin-1 were evaluated on the membrane, cytoplasm and nucleus of malignant epithelial cells and cells of healthy oral mucosa adjacent to the tumor, as well as on the infiltrating lymphocytes and peritumoral or intratumoral blood vessels. The tumor cell proliferation index was determined by the immunohistochemical expression of Ki- 67 identified on the malignant cell nucleus. The correlations between the distinct localizations of SP, its receptor NK-1 and the proliferation index Ki-67 were statistically analyzed using the Sudaan Crosstab, Regress and Descript tests. The SP expression was identified on the stroma of 77% of tumors, on the membrane of 71% of malignant cells and cytoplasm of 81.2% of tumors. Most tumors presented high proliferation rates of neoplastic cells, with more than 50% of cells immunopositive for Ki-67. Analysis of the disease-free surgical margins revealed SP expression especially on the lower and medium third, both on the nucleus, cytoplasm and cell membrane. The simultaneous expression of substance P and its receptor NK-1 on the cytoplasm of neoplastic cells occurred more frequently in proliferating malignant cells. The expression of SP in oral cancer occurred simultaneously to an increased expression of NK-1R, suggesting that the oral malignant epithelial cells might use this pathway to become more susceptible to the stimuli mediated by the SP. The substance P expression on infiltrating lymphocytes and intratumoral or peritumoral blood vessels was associated with tumors of small size, lower clinical stage and less frequent node metastasis. It was concluded that the oral neoplastic epithelial cells may use the pathway SP/NK-1R to become more susceptible to the stimuli mediated by the SP, particularly those associated with cell proliferation. Additionally, the epithelial, cytoplasmic and nuclear expression of substance P is an early event in oral carcinogenesis and may be considered a marker of the presence and intensity of epithelial dysplasia.
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Lidocaina, bupivacaina e ropivacaina sobre a quantidade do peptídeo relacionado com gene de calcitonina e substância P na pele incisada de ratos / Lidocaine, bupivacaine and ropivacaine on the amount of neuropeptides CGRP and SP in incised rat skinLapin, Guilherme Abbud Franco [UNIFESP] January 2013 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2015-12-06T23:46:07Z (GMT). No. of bitstreams: 0
Previous issue date: 2013 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A inflamacao neurogenica (IN) e um dos primeiros eventos da cicatrizacao. Diante de um estimulo nociceptivo na pele, ocorre a liberacao de neuropeptideos (NP´s) cutaneos pro-inflamatorios, que sao substancias produzidas pelos neuronios dos ganglios da raiz dorsal e secretadas de terminacoes nervosas na pele, deflagrando a fase inflamatoria da cicatrizacao. Os anestesicos locais (AL´s) tem amplo uso devido a sua efetividade e seguranca, mas ha evidencias de que eles poderiam bloquear o inicio da inflamacao neurogenica ao inibir a secrecao de NP´s, potencialmente retardando as fases iniciais da cicatrizacao. OBJETIVO: Avaliar o efeito dos AL´s lidocaina, bupivacaina e ropivacaina na secrecao de NP´s CGRP (Calcitonin Gene-Related Peptide) e SP (Substance P) na pele incisada de ratos. METODOS: Foram utilizados 28 ratos Wistar distribuidos igualmente em quatro grupos (n=7): grupo controle (C) com solucao salina 0,9%, grupo (L) (lidocaina 2%), grupo (B) (bupivacaina 0,5%) e grupo (R) (ropivacaina 0,75%). Apos anestesia geral, o farmaco de cada grupo foi injetado ao longo de uma linha reta com dois centimetros no tecido subcutaneo da linha mediana do dorso de cada rato e, apos 30 minutos, foi realizada uma incisao (estimulo nociceptivo) da extensao desse segmento. A seguir, cada rato foi submetido a morte induzida indolor e uma amostra de pele de cada rato, com area e volume padronizados, foi retirada do centro da reta incisada com ajuda de dermatomo eletrico e punch cutaneo de oito milimetros. Essa amostra foi enviada para quantificacao de CGRP e SP por Western blotting e os resultados foram submetidos a analise estatistica. RESULTADOS: em relacao a presenca de NP´s na pele de ratos, no grupo L e no grupo R houve reducao da quantidade de SP nas amostras, sem diferenca entre si; no grupo B nao houve reducao da quantidade de SP; em todos os grupos houve diminuicao da quantidade de pro-CGRP, sem diferenca entre si; e em nenhum grupo houve diminuicao da quantidade de CGRP. CONCLUSAO: a lidocaina e a ropivacaina diminuem os niveis de SP na pele incisada de ratos, enquanto a bupivacaina nao tem influencia sobre os NP´s estudados. Nenhum AL demonstrou influencia sobre a presenca de CGRP na pele incisada de ratos no tempo avaliado / Neurogenic inflammation (NI) is one of the earliest trigger in wound
healing. After a nociceptive stimulus in the skin, occurs the release of skin pro-inflammatory neuropeptides (NP's), which are substances produced by the neurons of the dorsal root ganglia and secreted by nerve endings in the
skin, triggering the inflammatory phase of wound healing. Local
anesthetics (LA's) have widespread use due to its effectiveness and safety,
but there is evidence that they could block the onset of neurogenic
inflammation by inhibiting the secretion of NP's, potentially delaying the
early stages of healing. OBJECTIVE: To evaluate the effect of LA's
lidocaine (L), bupivacaine (B) and ropivacaine (R) in the secretion of SP
and CGRP in incised rat skin. METHODS: We used 28 Wistar rats divided
into 4 groups (n = 7), Group C (control saline 0.9%), L group (lidocaine
2%), group B (bupivacaine 0.5%) and group R (0.75% ropivacaine). After
general anesthesia, the LA´s were injected in each group in a straight line
in the subcutaneous tissue of the dorsal midline of each rat, and after 30
minutes, an incision was made (nociceptive stimulus) along that
segment.Then, each rat was subjected to induced painless death, and a
square of skin, with the incised line inside, was taken with the aid of an
electric dermatome. Finally, a skin sample from the midpoint of the incised
line was removed with a skin punch of 8mm, to achieve standardized area
and volume. This sample was submitted to a quantification of CGRP and SP by Western Blotting and followed for statistical analysis. RESULTS: regarding NP's in the skin of rats, group L and group R showed a reduction of SP in the samples; group B showed no reduction in the amount of SP; all groups showed reduction in the amount of pro-CGRP, with no difference
between them; and neither group showed a decrease in the amount of
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CGRP. CONCLUSION: The lidocaine and ropivacaine reduced secretion
of SP by the nerve endings, the bupivacaine had no effect on secretion of
SP; and no local anesthetic inhibited the secretion of CGRP in rat skin
incision. / FAPESP: 2012/19163-4. / BV UNIFESP: Teses e dissertações
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Peptídeos CGRP e SP em pele de ratos após expansão cutânea / Neuropeptides SP and CGRP in rat skin after skin expansionFreitas, Jose Octavio Gonçalves de [UNIFESP] January 2013 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2015-12-06T23:46:29Z (GMT). No. of bitstreams: 0
Previous issue date: 2013 / A inflamacao neurogenica e um dos primeiros eventos de cura. Apos um estimulo nociceptivo na pele, ocorre a liberacao de neuropeptideos (NP 's) u substancias pro-inflamatorias u que sao produzidas pelos neuronios do ganglio da raiz dorsal e secretadas nas terminacoes nervosas da pele, provocando a fase inflamatoria da cicatrizacao das feridas. A expansao da pele e amplamente utilizada em cirurgia plastica como um recurso para ganho real de pele para rotacao de retalho e, assim, cobrir grandes defeitos decorrentes da perda de pele na remocao de tumores, acidentes de varias origens e reconstrucao de partes do corpo humano; mas nada se sabe sobre a acao dos neuropeptideos CGRP e SP nessas areas de tecido cutaneo expandido. OBJETIVO: Investigar os neuropeptideos SP e CGRP na pele cutanea expandida. METODOS: 28 ratos Wistar, separados em quatro grupos (n = 7): Grupo CO - (expansor vazio); Grupo EN - (expansao normal, 15 dias); Grupo ME - (meia expansao, 11 ml) e o Grupo EI - (expansao instantanea no dia da coleta). Depois de anestesia geral, cada grupo apresentou um expansor de pele de 22 ml de capacidade e o Grupo CO apenas o expansor vazio; o Grupo EN, o expansor inflado com metade da capacidade (11 ml) no implante e uma semana depois, inflado com mais 11 ml; Grupo ME igual ao grupo EN, mas com apenas metade da capacidade do expansor (11 ml) imediatamente apos o implante e o Grupo EI, expansor sendo insuflado com a capacidade total (22 ml) no dia da coleta. Em seguida, cada rato foi submetido a morte induzida, indolor, antes da coleta de amostras, que foram padronizadas quanto ao volume e area, utilizando-se dermatomo eletrico fixado em 500 μm e punch de oito milimetros. Esta amostra foi enviada para a quantificacao de CGRP e SP por Western blotting. RESULTADOS: Em relacao a presenca de NPÆs na pele de ratos, diminuiu a concentracao do neuropeptideo SP, sendo a maior concentracao do grupo CO, e tendo a seguir o grupo ME, o grupo EI e o grupo EN; o neuropeptideo CGRP obteve valores semelhantes na avaliacao de CGRP-5kDa (neuropeptideo efetivo) e a manutencao das concentracoes dos grupos CO, ME e EI. Houve uma queda acentuada na concentracao do grupo EN. CONCLUSAO: A lenta e progressiva expansao da pele inibe a liberacao de neuropeptideos SP, reduzindo a resposta inflamatoria independente do volume observado / The neurogenic inflammation (IN) is one of the first events of healing.
Before a nociceptive stimulus in the skin, there is release of neuropeptides (NP's) skin pro-inflammatory substances that are produced by the neurons of the dorsal root ganglia and secreted nerve endings in the skin, triggering the inflammatory phase of wound healing. The expansion skin, widely used in plastic surgery as a resource to gain real skin to skin flap rotation and thus cover large skin defects arising out of the loss is the removal of
tumors, accidents of various origins and reconstructions of parts of the
human body, but nothing is known about the action of neuropeptides
CGRP and SP in these skin areas expanded. OBJECTIVE: To evaluate the
effect of expanding the skin secretion of NP's SP and CGRP in the skin of
mice. METHODS: 28 Wistar rats divided into 4 groups (n = 7): group C
(empty Expander), EN group (Normal Expansion 15days), group (Half
Expansion) and group EI (Instant Expansion on the collection day). After
general anesthesia, each group has introduced a skin expander of 22ml
capacity with the CO group only without the expander breathes it in no
time, EM Group expander inflated with half capacity (11ml) after
introducing a week later inflated with 11ml more, equal to group ME but
with only half the capacity of the expander (11ml) and nothing else, and EI
group expander being inflated with total capacity (22ml), waited a minute
before the death of the animal and data collection . Next, each mouse was
subjected to induced death painless and a skin sample from each mouse
with standardized area and volume were taken from the center line incision
with the aid of electric dermatome and 8mm dermal punch. This sample
was sent for quantification of CGRP and SP by Western Blotting and
followed for statistical analysis. RESULTS: In relation to the presence of
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NP's in the skin of rats in relation to neuropeptide SP was decreasing
concentration being the highest concentration of CO Group and so on with
the following GE Group ME and EI, as the neuropeptide CGRP have
similar values in the evaluation of CGRP-5kDa (actual measure) and
maintenance of the concentrations of CO Groups, ME and EI, as a sharp
drop in the concentration EN group (normal expansion). CONCLUSION:
It was observed that the slower expansion less concentration of
neuropeptides soon denervation can be observed. Thus, the slow and
progressive cutaneous expansion inhibits the release of neuropeptides
reducing the inflammatory response. / BV UNIFESP: Teses e dissertações
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Ressonância magnética e ativação neuronal supraespinal em modelo de dor neuropática crônica em ratos. / Magnetic resonance imaging and supraspinal neuronal activation in chronic neuropathic pain model in rats.Silva, Joyce Teixeira da 18 November 2016 (has links)
O fator de crescimento neural (NGF) está relacionado à dor e ao aumento de Substância P (SP). Ressonância magnética funcional de forma não invasiva investiga áreas cerebrais. O Anti-NGF é um tratamento para dor, porém não investigado em dor neuropática. Nós avaliamos no modelo CCI a resposta comportamental e o envolvimento do NGF e da SP após tratamento com o Anti-NGF. Nós observamos NGF aumentado a longo prazo no gânglio da coluna posterior (DRG) e na medula espinal, já a SP aumentada no DRG em ambos os tempos e apenas tardiamente na medula espinal. O tratamento com Anti-NGF diminuiu a nocicepção dos animais. O Anti-NGF reverteu os altos níveis de NGF e SP no DRG e na medula espinal. Houve aumento de Fos no grupo CCI e diminuição após tratamento com Anti-NGF no córtex cingulado anterior. Observamos modificações da conectividade do tálamo, córtex somatossensorial primário e córtex cingulado com todo o encéfalo. Esperamos que estes resultados possam ser usados para o desenvolvimento de uma estratégia terapêutica que auxilie pacientes com dor neuropática crônica. / Nerve growth factor (NGF) is related to pain and increase of Substance P (SP). Non-invasively functional magnetic resonance imaging investigates brain areas. Anti-NGF is a treatment for pain, but not investigated in neuropathic pain. We evaluated the behavioral response and the involvement of NGF and SP in the CCI model after Anti-NGF treatment. We observed increased long-term NGF in the dorsal root ganglion (DRG) and spinal cord, as well as increased SP in DRG at both time and only late in the spinal cord. Treatment with Anti-NGF decreased the nociception of the animals. Anti-NGF reversed high levels of NGF and SP in DRG and spinal cord. There was an increase in Fos in CCI group and a decrease after Anti-NGF treatment in the anterior cingulate cortex. We observed changes in the connectivity of the thalamus, primary somatosensory cortex and cingulate cortex with the entire brain. We hope that these results can be used to develop a therapeutic strategy that will help patients with chronic neuropathic pain.
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Doença periodontal grave em pacientes com e sem queixa de dor crônica crânio-facial: correlação dos aspectos clínicos com a análise quantitativa da substância P e do óxido nítrico do tecido gengival inflamado / Severe Periodontal Disease in patients with and without chronic complaint of craniofacial pain: correlation with clinical aspects with the quantitative analysis of substance P and nitric oxide of inflamed gingival tissueFabri, Gisele Maria Campos 13 December 2007 (has links)
Objetivos: Avaliar a implicação da doença periodontal (DP) avançada, e da expressão da NOS e sP dos tecidos gengivais inflamados, na intensidade de dor e na qualidade de vida de pacientes com dor crônica crânio-facial. Casuística e Métodos: foram avaliados e tratados 20 pacientes com queixas de dores crônicas crânio-faciais e DP (Grupo de Estudo), comparativamente com 20 pacientes que tinham somente DP (Grupo Controle). Todos os pacientes receberam tratamento cirúrgico periodontal. A avaliação foi realizada pré e pós-tratamento periodontal (7, 30 e 180 dias). Instrumentos de avaliação: ficha clínica EDOF-HC, Escala Visual Analógica (EVA), questionário de dor McGill, Índices de Placa (IP), Sangramento (IS), Profundidade Clínica de Sondagem (PCS) e de Inserção (PCI); questionário de qualidade de vida WHOQOL-bref e análise imunohistoquímica para a expressão da óxido nítrico sintase (NOS) e da substância P do tecido gengival inflamado. A avaliação da dor foi realizada por investigador independente. Resultados: Os grupos apresentaram evolução clínica semelhante pelos parâmetros da DP: IP (p=0,0934), IS (p=0,8657), PCS (p=0,1728) e PCI (p=0,7406) nos três momentos avaliados. Houve redução da EVA no Grupo de Estudo aos 30 dias (p<0,05) e 180 dias (p<0,05), comparativamente ao pré-operatório. Aos 180 dias houve melhora significativa das queixas iniciais (p=0,005 para o Grupo de Estudo e p = 0,027 para o Grupo Controle), comparativamente ao pré-operatório, entretanto, houve diferença significativa entre os dois grupos nos três momentos da avaliação, seja para o percentual de melhora (p<0,001), seja para os descritores de melhora Edof-HC (p=0,004 aos 30 dias e p=0,001 aos 180 dias). No Grupo de Estudo, houve redução significativa dos descritores afetivos de dor (questionário de dor McGill) aos 180 dias (p = 0,014). Os escores de qualidade de vida do Grupo de Estudo foram inferiores aos do Grupo Controle nos domínios psicológico e físico (p<0,001 e p=0,007, respectivamente). As expressões da nNOS e da iNOS foram maiores nas gengivas inflamadas do Grupo de Estudo (p<0,001 e p= 0,003, respectivamente) e a expressão da sP foi semelhante nos dois grupos (p=0,363). Conclusões: Houve redução da intensidade da dor crônica crânio-facial dos pacientes que receberam tratamento para doença periodontal avançada. A expressão da substância P foi semelhante nos tecidos gengivais inflamados dos dois grupos, mas a expressão da nNOS e iNOS foi superior na gengiva inflamada dos pacientes com dor crônica crânio-facial. Pelos dados deste estudo a Doença Periodontal avançada pode ter implicação nas queixas de dor dos pacientes com dor crônica crânio-facial. / Aims: To assess the implications of advanced periodontal disease (PD), and the expression of NOS and sP of inflamed gingival tissue, in the intensity of pain and the quality of life in patients with chronic craniofacial pain. Casuistic and Methods: Were evaluated and treated 20 patients with complaints of chronic craniofacial pain and DP (Study Group), compared with 20 patients who had only DP (Control Group). All patients received surgical periodontal treatment. The evaluation was performed at pre-operative and post-operative periodontal treatment (7, 30 and 180 days). Tools for evaluation: clinical record EDOF-HC, Visual Analogic Scale (VAS), McGill Pain Questionnaire, Scores of Plaque (IP), Bleeding (IS), Clinical Probing Depth (CPD) and Insertion (CPI), the quality of life questionnaire WHOQOL-Bref and immunohistochemical analysis for the expression of nitric oxide synthase (NOS) and substance P from inflamed gingival tissue. The assessment of pain was conducted by independent researcher Results: The groups had similar clinical evolution by parameters of the PD: IP (p=0.0934), IS (p=0.8657), PCS (p=0.1728) and PCI (p=0.7406) in the three moments evaluated. There was reduction in the VAS of Study Group at 30 days (p<0.05) and 180 days (p<0.05), compared to preoperative. At 180 days there was significant improvement of the initial complaints (p=0.005 for the Study Group and p=0.027 for the Control Group), compared to preoperative, but there was significant difference between the two groups in the three moments of assessment, for the percentage of improvement (p<0.001), and either for the improvement descriptors Edof-HC (p=0.004 at 30 days and p=0.001 for 180 days). In Study Group, there was significant reduction of pain affective descriptors (McGill Pain Questionnaire) to 180 days (p=0.014). The scores of quality of life of the Study Group were lower than the Control Group in the psychological and physical (p<0.001 and p=0.007, respectively). The nNOS and iNOS expressions were higher in inflamed gingival Study Group (p<0.001 and p=0.003, respectively) and the expression of sP was similar in the two groups (p=0.363). Conclusions: There was reduction in the intensity of chronic craniofacial pain of patients receiving treatment for advanced periodontal disease. The expression of substance P was similar in inflamed gingival tissue of the two groups, but the expression of iNOS and nNOS was higher in inflamed gingival of patients with chronic craniofacial pain. The data of this study show that advanced periodontal disease can have involvement in complaints of pain in patients with chronic craniofacial pain.
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Avaliação histológica e imuno-histoquímica do complexo dentino-pulpar em modelo de recessão gengival com diferentes formulações de biovidros nanoparticulados para a obliteração de túbulos dentinários – estudo em ratosDalmolin, Ana Cláudia 22 February 2018 (has links)
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Previous issue date: 2018-02-22 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A hipersensibilidade dentinária cervical (HSDC) ocorre devido à exposição dentinária
da região cervical por fatores como perda de minerais do esmalte ou da própria
dentina, ou por recessão gengival. A exposição dos túbulos dentinários, conforme a
teoria hidrodinâmica, facilita a transmissão de estímulos desde a superfície dentinária
até a polpa. Os biovidros são biomateriais que inicialmente foram desenvolvidos para
reparo e regeneração óssea, e que passaram a ser empregados também no
tratamento da HSDC. Considerando a falta de compreensão quanto a condição
pulpar, e a lacuna existente entre os biomateriais e a eficácia no tratamento, foi
proposta a utilização de um modelo in vivo em ratos, em que, através da exposição
dentinária cervical, pudesse demonstrar o processo neuroinflamatório no tecido
pulpar, bem como testar e avaliar os efeitos de duas formulações de biovidros
experimentais para a obliteração de túbulos dentinários. Desta forma, foram utilizados
29 ratos Wistar machos, os quais receberam cirurgias de indução de recessão
gengival, com instalação de dispositivo de permanência temporária, assim
promovendo a manutenção da condição de túbulos dentinários cervicais expostos.
Prosseguiu-se com a aplicação dos tratamentos de acordo com os grupos de estudo:
Naive (N) - sem recessão gengival e sem tratamento; Sham (S) – com recessão
gengival e sem tratamento; Verniz cavitário (V) - recessão gengival e tratamento com
verniz cavitário; Biosilicato® (BV-BS) - recessão gengival e tratamento com
Biosilicato®; Biovidro de estrôncio (BV-Sr) - recessão gengival e tratamento com
biovidro de estrôncio; Biovidro de potássio (BV-K) - recessão gengival e tratamento
com biovidro de potássio. Os tratamentos foram aplicados sobre a superfície
dentinária exposta dos primeiros molares superiores esquerdos, a cada 4 dias durante
28 dias, totalizando 7 aplicações. Realizou-se processamento histológico das
hemimaxilas esquerda e direita, com posterior coloração de hematoxilina e eosina
(HE) para avaliar alterações no complexo dentino-pulpar, além de coloração imunohistoquímica
(IHQ) para identificação de substância P (SP). Os resultados apontaram
que não houve diferenças significativas (p>0,05, teste de Kruskal-Wallis) entre os
grupos, considerando os critérios para alterações dentino-pulpares; tampouco foram
observadas diferenças na imuno-marcação para SP. Concluiu-se que não há
alterações no complexo dentino-pulpar ou aumento de substância P em dentes com
exposição radicular e túbulos expostos em ratos. Nas condições em que foram
aplicados, os biovidros experimentais não são capazes de causar danos na polpa
dental. No entanto, sugere-se a continuidade das pesquisas, com a avaliação de
outros parâmetros no modelo animal para a melhor compreensão do mecanismo da
HSDC. / Cervical dentin hypersensitivity (CDH) occurs due to dentin exposure of the teeth’s
cervical region by factors such as loss in enamel or dentin minerals, or gingival
recession. Dentin tubules exposure, according to the hydrodynamic theory, facilitates
the transmission of stimuli from the dentin surface to the pulp. Bioactive glasses are
biomaterials that were initially developed for bone repair and regeneration, but they
could also be used for CDH treatment. There is no understanding about pulp conditions
when dentin is exposed, neither about the efficacy of biomaterials used to CDH
treatment. It was proposed an in vivo model of cervical dentin exposure in rats. This in
vivo model demonstrates the pulp neuroinflammatory process and tests the efficacy of
Biosilicate® and of two others experimental formulations of bioglasses in dentinal
tubules obliteration. Thus, 29 male Wistar rats were submitted to exposure of the
dentinal tubules, through gingival recession surgery. A temporary device was installed
to keep the dentinal tubules exposure. Then, the treatments were applied over the
exposed dentin surface of the upper left first molars every 4 days during a 28 days
period, with the total of 7 applications. The treatments were applied according to the
study groups: Naive (N) – no recession and no treatment; Sham (S) – recession but
no treatment; Cavity varnish (V) – gingival recession and treatment with varnish;
Biosilicate® (BV-BS) – gingival recession and treatment with Biosilicate®; Strontium
bioglass (BV-Sr) – gingival recession and treatment with strontium bioglass; Potassium
bioglass (BV-K) – gingival recession and treatment with potassium bioglass. The
dentin-pulp complex changes and investigation of substance P (SP) were evaluated
through hematoxylin and eosin (HE) and immunohistochemical (IHC) stainings after
histological processing and paraffin sectioning of the left and right hemi-maxilae. The
results showed that there were no significant differences (p>0.05, Kruskal-Wallis test)
among the groups considering the conditions of the dentin-pulp complex. No
differences were observed in immunostaining for SP. It was concluded that teeth with
cervical root exposition and opened tubules in rats do not have changes in the dentinpulp
complex or in the pattern of immunotracing for SP. Experimental bioactive glasses
are not capable of causing damage to the dental pulp under the conditions in which it
was applied. Nevertheless, new animal model studies could be conducted using others
histological and immunohistochemical parameters in order to understand the
mecanisms of the CDH.
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Identificação dos neurotransmissores das fibras mielínicas e amielínicas do nervo depressor aórtico de ratos: uma abordagem imunohistoquímica / Identification of the neurotransmitters of myelinated and unmyelinated fibers from aortic depressor nerve: an immunohistochemical approachCarvalho, Carolina da Silva 01 September 2016 (has links)
O nervo depressor aórtico (NDA) é, primariamente, um conjunto de fibras aferentes que transmitem informações oriundas de alterações da pressão arterial (PA) a partir dos barorreceptores arteriais (mecanorreceptores localizados no arco da aorta ou seio carótico) aos centros de controle cardiovascular localizados no sistema nervoso central (SNC). Este mecanismo é responsável pela regulação reflexa da função cardíaca e vascular, promovendo ajustes nos centros vasoconstritor e vasodilatador, atuando simultaneamente sobre os sistemas simpático e parassimpático. Fato este que, contribui para o aumento da atividade vagal cardíaca e inibição de descargas simpáticas para vasos e coração, garantindo a manutenção dos níveis pressóricos dentro de uma faixa de normalidade. Diversos neurotransmissores foram descritos atuando nos centros de controle cardiocirculatório localizados no tronco encefálico, mais especificamente no bulbo, participando da regulação da PA. Nestas regiões centrais, os neurotransmissores glutamato, GABA (Àcido Gama Aminobutírico) e substância P (SP) foram amplamente investigados. Entretanto, em nenhum destes trabalhos foi realizado um estudo detalhado, investigando a presença da SP em nervos depressores aórticos de forma direta, sendo esta informação ainda desconhecida. Acredita-se que a SP seja um transmissor do reflexo barorreceptor, atuando na modulação deste circuito, na tentativa de atenuar elevações da pressão sanguínea. Existe portanto a necessidade de uma investigação morfológica e imunohistoquímica com o intuito de promover o esclarecimento sobre os neurotransmissores presentes no NDA. Os nervos frênicos foram utilizados como controle positivo, já que neste território a SP já se encontra caracterizada. Inúmeros são os estudos que descrevem a existência da SP em nervos frênicos, fato este que justifica a aplicação do referido nervo como controle do NDA, foco de estudo deste projeto. Baseados nestas necessidades, o objetivo do presente estudo foi primeiramente o de promover a padronização da técnica imunohistoquímica (IHQ), bem como a verificação da viabilidade de utilização do glutaraldeído à 2,5% como um fixativo primário, auxiliando na identificação de neurotransmissores dentro do sistema nervoso periférico. Em seguida, a identificação e quantificação da SP em NDA de ratos normotensos através do método imunohistoquímico indireto (3,3\'- Diaminobenzidina \"DAB\") foram realizados. O referido estudo foi desenvolvido em duas etapas. A primeira parte corresponde a padronização e otimização da técnica de imunohistoquímica em nervos frênicos de ratos Wistar através da localização e caracterização da SP e da enzima colina acetiltransferase (CAT). A segunda fase, trata-se da identificação e quantificação da SP no NDA, sendo este, um possível neurotransmissor ou neuromodulador do reflexo barorreceptor. Para este estudo foram utilizados no total 38 ratos da linhagem Wistar (Rattus Norvegicus), normotensos, com 20 semanas de idade, machos e fêmeas. Deste total, 16 animais machos foram destinados à padronização da técnica de IHQ em nervos frênicos. E para a caracterização e quantificação da SP no NDA foram utilizados 22 ratos Wistar, sendo 12 machos e 10 fêmeas. Nossos resultados demonstram de forma inédita a presença da SP em fibras amielínicas (tipo C) e fibras de pequeno diâmetro (A-delta) no NDA de forma bastante pontualizada em segmentos proximais e difusa distalmente, sugerindo a existência de subpopulações de fibras amielínicas do tipo C. Estes achados confirmam inúmeras suposições de que a SP atue como um dos neurotransmissores de aferências barorreceptoras, podendo participar na modulação do Sistema Nervoso Autônomo (SNA), uma vez que encontra-se localizada em centros responsáveis pela regulação reflexa da PA. Adicionalmente, a análise do percentual de marcação positiva à SP entre os gêneros apresentou um aparente predomínio da SP em machos mas sem diferença significativa entre os grupos. De forma semelhante, a padronização imunohistoquímica em cortes transversais e longitudinais de nervos frênicos apresentaram uma imunomarcação positiva e aleatória da SP em conjuntos de fibras amielínicas (tipo C) e em fibras de pequeno diâmetro localizadas próximo a periferia do espaço endoneural, corroborando com a localização relatada em estudos morfológicos e ultraestruturais, assegurando a especificidade e a reprodutibilidade do método. Distintamente, as fibras de grande e médio diâmetro (A-alfa, beta e gama), consideradas fibras mielinizadas de condução rápida, foram imunorreativas à CAT em nervos frênicos. Por fim, espera-se que a identificação deste neuropeptídeo sirva de gatilho para que futuras pesquisas envolvendo a liberação de neurotransmissores em aferências barorreceptoras sejam explorados. Fato este, que contribuirá para a agregação de informações pertinentes à modulação ou transmissão da informação neural, propiciando desta forma melhor entendimento da comunicação e atividades barorreflexas associadas a mecanismos cardiovasculares. / The aortic depressor nerve (ADN) is primarily a set of afferent fibers that transmit derived information of changes in arterial blood pressure (BP) from arterial baroreceptors (mechanoreceptors located in the aortic arch and carotid sinus) to sites of cardiovascular control located into central nervous system (CNS). This mechanism is responsible for the reflex regulation of cardiac and vascular function, promoting adjustments of vasoconstrictor and vasodilator centers, simultaneously acting on the sympathetic and parasympathetic systems. In addition, contributes to increased cardiac vagal activity and inhibition of sympathetic discharges to vessels and heart, ensuring the maintenance of blood pressure levels within the normal range. Many neurotransmitters have been described operating in cardio-circulatory control centers located in the brainstem, more specifically in the bulb, participating in the regulation of BP. In these central regions, the neurotransmitters glutamate, GABA (Gamma Aminobutyric Acid) and substance P (SP) have been widely investigated. However, none of these works was carried out a detailed study, investigating the presence of SP in aortic depressor nerves directly, and this information is still unknown. It is believed that SP can be a transmitter at the synapse of the baroreceptor reflex, operating in the modulation of this circuit in an attempt to attenuate elevation of blood pressure. Therefore, there is a need to investigate a morphological and immunohistochemical approach in order to promote the clarification on the present neurotransmitters into ADN. The phrenic nerves were used as a positive control, already as substance P (SP) is characterized in this territory. There have been numerous studies describing the existence of SP in phrenic nerves, a fact that justifies the application of the nerve as control of the ADN, study focus of this project. Based on these requirements, the aim of the present study is two-fold. Firstly, it attempts to promote the standardization of the immunohistochemical (IHC) technique as well as the verification of the feasibility of using glutaraldehyde fixative as a primary, assisting in the identification of neurotransmitters in the peripheral nervous system (PNS). Subsequently, the identification and quantification of SP immunoreactivity in the ADN of normotensive rats by indirect immunohistochemical method (3,3\'-Diaminobenzidine \"DAB\") were done. The study was developed in two stages. The first part corresponds to standardization and optimization of immunohistochemical technique in phrenic nerves of Wistar rats through location and characterization of the SP and enzyme choline acetyltransferase (ChAT). The second phase is about the identification and quantification of the SP into ADN, being a possible neurotransmitter or neuromodulator from the baroreceptor reflex. For this study we used a total of 38 Wistar rats (Rattus norvegicus), normotensive, 20 weeks old, male and female. From this total, 16 male animals were used for standardization of IHC technique in the phrenic nerves. Nonetheless, for the characterization and quantification of SP in ADN were used 22 Wistar rats, 12 males and 10 females. Our results showed an unprecedented manner the presence of SP in unmyelinated fibers (type C) and small diameter fibers (A-delta) into ADN, being quite focused on proximal segments and diffuse distally, suggesting the existence of subsets of unmyelinated fibers. These findings confirm numerous assumptions that the SP acts as a neurotransmitter from afferent baroreceptor and may participate in the modulation of the Autonomic Nervous System (ANS), since it is located in centers responsible for regulating reflex of BP. Further, an analysis of the percentage of positive SP staining between genders, presented an apparent predominance of SP in males but no significant difference between the groups were found. Similarly, IHC standardization in transverse and longitudinal sections of phrenic nerves showed a positive random and immunostaining of SP in sets of unmyelinated fibers (type C) and small diameter fibers located near the periphery of endoneural space, corroborating location reported on morphological and ultrastructural studies, ensuring the specificity and reproducibility of the method. Distinctly, the fibers of large and medium diameters (A-alpha, beta and gamma), considered myelinated fibers of fast conducting, were immunoreactive to ChAT in phrenic nerves. Finally, it is expected that the identification of neuropeptide serve as a trigger for that future studies involving the release of neurotransmitters into afferent baroreceptors be explored. These results could contribute to the aggregation of relevant information for the modulation and transmission of neural information, thus providing better understanding of communication and baroreflex activities associated with cardiovascular mechanisms.
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Terapia LASER de baixa intensidade no controle da dor neuropática crônica e na regeneração do nervo isquiático de ratos. / Low intensity LASER therapy in the control of chronic neuropatic pain and the regeneration of the ischial nerve of rats.Silva, Mara Evany de Oliveira 12 March 2019 (has links)
A técnica de laserterapia é um método não invasivo utilizado por diversas áreas da saúde, e tem se mostrado eficaz no tratamento da diminuição da sensibilidade a dor. O presente estudo visa elucidar os efeitos desta terapia nas alterações moleculares induzida pela constrição crônica (CCI) do nervo isquiático de ratos. Esta técnica é aplicada em dias intercalados e tem a duração de 10 sessões. Ao finalizarmos o tratamento com laserterapia os animais foram eutanasiados e os gânglios das raízes posteriores (DRG L4L6) e o nervo isquiático foram retirados para posterior análise. Os DRGs foram processados para detecção da Substância P (SP) e do receptor de potencial transitório vanilóide tipo I (TRPV1). Ainda submetemos o nervo isquiático para a detecção do fator de crescimento neural (NGF) e proteína zero (P0). Nossos resultados demonstraram uma reversão da hipernocicepção dos animais tratados com LASER. Ainda, observamos um aumento da expressão de SP e TRPV1 nos animais com lesão e uma diminuição após o tratamento com LASER. Com relação aos ensaios referente ao nervo isquiático, podemos observar que houve um aumento da densidade óptica para o NGF e para a P0 após tratamento. Esses resultados podem ser observados de modo qualitativo por meio da técnica de imunohistoquímica de fluorescência. Nossos resultados em conjunto, demonstram a eficácia da laserterapia para reversão da hipernocicepção dos animais com lesão. Ainda, esta técnica é capaz de modular liberação de mediadores que participação do processo álgico, além de induzir a regeneração do nervo isquiático. / The laser therapy technique is a noninvasive method used by several health areas, and has been shown to be effective in treat pain sensitivity. The present study aims to elucidate the effects of this therapy on molecular changes induced by chronic constriction (CCI) in rats. This technique was applied every other day, during 10 sessions. At the end of treatment, the animals were euthanized and the posterior root ganglia (DRG L4-L6) and sciatic nerve were removed for further analysis. The DRG\'s were processed for the detection of Substance P (SP) and transient potential receptor type I (TRPV1). In addition, we submit the sciatic nerve for the detection of neural growth factor (NGF) and zero protein (P0). Our results demonstrated a reversal of hypernociception in animals treated with LASER. Furthermore, we observed an increase in SP and TRPV1 expression in animals with lesion and a decrease after LASER treatment. With respect to the tests referring to the sciatic nerve, we could observe that there was an increase in the optical density for NGF and P0 after treatment. These results can be observed qualitatively by fluorescence immunohistochemistry. Our results together demonstrate the efficacy of laser therapy for the reversal of hypernociception of animals with lesions. Furthermore, this technique is able to modulate the release of mediators that participate in the algic process; in addition, this technique is also able to induce regeneration of sciatic nerve in rats.
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