Orientadores: Raquel Franco Leal, Marciane Milanski Ferreira / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-23T07:39:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rodrigues_VivianeSoares_M.pdf: 3712403 bytes, checksum: 2d823f7642defb3fa237170182d5fb32 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: A doença de Crohn (DC) é caracterizada por uma inflamação de etiologia ainda desconhecida. A hipertrofia do tecido adiposo mesentérico reflete a atividade da doença, uma vez que o mesmo recobre toda a área acometida pela doença. Além disso, os adipócitos sintetizam leptina e adiponectina, adipocinas com ações pró e antiinflamatórias. Objetivo: Avaliar as concentrações séricas de leptina e adiponectina na DC em remissão e em atividade, como também a expressão tecidual de adiponectina na DC em atividade. Casuística e Método: Dezesseis pacientes com DC ileocecal atendidos no ambulatório de Doenças Inflamatórias Intestinais da Universidade Estadual de Campinas participaram do estudo. A análise de leptina e adiponectina foi realizada por ELISA nos pacientes com DC em atividade (grupo DCAT), DC em remissão (grupo DCR) e seis controles saudáveis. Também dez pacientes com DC ileocecal em atividade (grupo DCG) e oito controles (grupo CG) com doença não inflamatória participaram do estudo, para avaliação da adiponectina tecidual. As biópsias foram armazenadas em nitrogênio líquido, e a expressão de adiponectina foi realizada por imunoblot de extrato protéico total. Resultados: Os níveis de proteína C reativa foram maiores no grupo DCAT quando comparado aos demais grupos (p<0,05). Os níveis séricos de adiponectina foram menores no grupo DCAT comparado ao controle, porém não houve diferença entre os grupos DCAT e DCR. A expressão de adiponectina no tecido mesenterial foi significantemente menor no grupo DCG quando comparado ao controle (grupo CG). A leptina sérica foi similar entre os grupos (p>0,05). Os níveis de colesterol total e pré-albumina foram menores no grupo DCAT (p<0,05), quando comparados com o controle. O índice de massa corporal e o nível sérico de triglicérides foram similares entre os grupos. A % de gordura corporal foi menor no grupo DCAT em relação ao controle, e a avaliação subjetiva global mostrou desnutrição no grupo DCAT quando comparado ao DCR. Conclusão: Baixos níveis de adiponectina sérica e mesenterial na DCAT sugerem defeito nos mecanismos antiinflamatórios, o que pode ser responsável pela manutenção do processo inflamatório e hipertrofia da gordura mesenterial próximo à área intestinal afetada, mesmo na presença de baixos níveis de % de gordura corporal / Abstract: Crohn's disease (CD) is characterized by inflammation and an etiology that is still unknown. Hypertrophy of mesenteric fat is a reflect of disease activity, since this fat covers the entire length of the affected area. Also, adipocytes synthesize leptin and adiponectin, adipokines responsible for pro and anti-inflammatory effects. Aim: To evaluate serum levels of adiponectin and leptin, as well as mesenterial expression of adiponectin in active CD and those in remission. Casuistic and Methods: Sixteen patients with ileocecal CD followed at the Outpatient Clinic, Coloproctology Unit of University of Campinas Clinical Hospital, participated of the study. Analysis of serum adiponectin and leptin by enzyme linked immunosorbent assay were performed in patients with active CD (DCAT Group), remission CD (DCR Group) and in six healthy controls. Ten patients with active ileocecal CD (DCG Group) and eight patients (CG Group) with non-inflammatory disease selected for surgery were also studied. The specimens were snap-frozen and the expression of adiponectin was determined by immunoblot of protein extracts. Results: Serum C-reactive protein levels were higher in DCAT Group when compared to the others (p<0.05). Serum adiponectin was lower in the DCAT Group when compared to control (p<0.05), but no differences were seen when comparing the DCAT and DCR Groups. Mesenteric adiponectin expression was lower in DCG group when compared to CG group (p<0.05). Serum leptin was similar in all groups (p>0.05). Serum total cholesterol and pre-albumin were lower in the DCAT group when compared to controls (p<0.05). Body Mass Index (BMI) and serum triglycerides were similar among the groups. The percentage of body fat was lower in the DCAT group compared to controls, and the global subjective evaluation showed malnourishing in the DCAT group when compared to DCR group. Conclusion: The lower level of serum and mesenteric adiponectin in active CD suggests a defective regulation of anti-inflammatory pathways, which could be responsible to the maintenance of inflammatory process and hypertrophy of the mesenteric fat tissue nearby the affected intestinal area, even in the presence of low percentage of body fat / Mestrado / Fisiopatologia Cirúrgica / Mestra em Ciências

A aplicação terapêutica de Células Tronco (CT) em equinos é um campo emergente. Nestes animais, as CT são promissoras para o tratamento de lesões nos tendões e rupturas de ligamentos. Apesar das características e do potencial na restauração de tecidos lesionados, bem como dos efeitos parácrinos destas células, não existem dados a respeito do seu uso no tratamento de desordens sistêmicas que podem acometer os equinos, tais como a endometrose. A endometrose é uma doença progressiva e irreversível que leva a degeneração do endométrio e a formação de um tecido fibroso periglandular, sendo de grande relevância na medicina veterinária, por ser uma das maiores causas de infertilidade. Apesar dos constantes avanços na busca de um tratamento, nenhum obteve sucesso. Levando-se em consideração a importância da doença, o objetivo deste projeto foi utilizar CT, previamente isoladas e caracterizadas pelo nosso grupo, no tratamento da endometrose, visando diminuir o processo inflamatório e a formação do tecido fibroso periglandular. Seis éguas com endometrose foram sincronizadas. Em quatro foram infundidas CT previamente marcadas com Vybrant, e nas outras duas (controle) apenas solução fisiológica. Antes da infusão, foram coletadas biópsias uterinas e amostras para citologia. Após 7, 21 e 61 dias da infusão, foram coletadas novas biópsias e amostras citológicas. Por meio da fluorescência direta observamos a presença das CT marcadas enxertadas tanto no corpo quanto nos cornos uterinos das éguas. Através de análises histológicas observamos uma significativa melhora no aspecto morfológico e na organização do tecido uterino, bem como, das glândulas endometriais, após a infusão das CT, tal resultado foi observado progressivamente ao longo dos dias. Notamos também uma diminuição no processo de fibrose do tecido periglandular. As análises de citologia demonstraram a ausência de inflamação uterina antes e após a infusão das CT. Nossos dados sugerem que existem benefícios na utilização de CT de tecido adiposo de equinos no tratamento do tecido uterino acometido pela endometrose, que clinicamente só poderão ser validados após a prenhez desses animais. / In horses, Stem Cell (SC) therapies are a promising tool to the treatment of many injuries, as tendon lesions and ligaments rupture. Besides the characteristics and the potential in tissue restoration, as well as, paracrine effects of SC, there is no information about the use of them for the treatment of systemic disorders which can commit horses, such as endometrosis. Endometrosis is a progressive and irreversible disease which is defined as active or inactive periglandular and stromal endometrial fibrosis, including glandular alterations within fibrotic foci. Modifications induced by this disease alter the surface of endometrium which, in consequence, led to infertility. Conventional treatments do not reduce the fibrotic process or even help to restore fertility. Considering the importance of this disease, the goal of this project is to use SC, previously isolated and characterized by our group, in the treatment of endometrosis, in order to reduce inflammatory process and periglandular fibrous tissue formation, typical of this disease. Six mares with confirmed endometrosis were synchronized for the use as animal model in this work. In four of animals we infused stem cells previously marked with Vybrant, and the other two (control group) were infused with saline solution. Before the infusion, uterine biopsies and also samples for cytology were collected. After 7, 21 and 61 days of cells infusion new biopsies and cytology samples for analysis were collected. We observed, by direct fluorescence, the presence of marked cells grafted in both body and uterine horns of treated animals. Through histological analysis we observed a significant improvement in morphology and organization of uterine tissue, as well as endometrial glands, after infusion of stem cells, this result was observed progressively throughout the days. Furthermore, we noted a decrease in the process of periglandular tissue fibrosis, after infusion of cells. Cytology analysis showed that the animals have no uterine inflammation before or after infusion of SC. Our data suggest that there are benefits of using stem cells from equine adipose tissue in the treatment of uterus tissue affected by endometriosis, which can only be clinically validated after pregnancy of these animals.

Orientadores: Regina Celia Spadari-Bratfisch, Dora Maria Grassi-Kassisse / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-07T15:56:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Hatore_EdgarTeruhiko_M.pdf: 10729043 bytes, checksum: a8e99d57d617133d73cabb8f544052b9 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: Os efeitos do estresse por natação sobre marcadores metabólicos diferem daqueles do estresse por choques nas patas. Estas diferenças poderiam ser conseqüências da natureza do estressor, que difere nos dois modelos, ou da intensidade de estresse, que parece ser menor quando os animais são submetidos à natação do que quando submetidos a choque nas patas. O objetivo deste trabalho é avaliar o efeito da intensidade do estressor sobre a mobilização de substratos metabólicos. Ratos Wistar adultos foram distribuídos em grupos: controle, não submetido à natação; e ratos submetidos à natação em água a 35°C, 24°C ou 18°C. As sessões de natação ocorreram em três dias consecutivos com 5, 15 e 15 min de duração, respectivamente. Os ratos foram pesados antes da primeira e da última sessão de natação e após a última sessão sua temperatura retal foi determinada por um tele-termômetro; foram anestesiados e uma amostra de sangue foi coletada por punção cardíaca. Foram retiradas amostras do fígado e dos músculos gastrocnêmio, sóleo e ventricular cardíaco. Adipócitos foram isolados do tecido adiposo epididimal e incubados com agonistas adrenérgicos. O glicerol e o lactato liberados no meio infranadante foram considerados como indicadores da sensibilidade das respostas lipolítica e glicolítica aos agonistas, respectivamente. Foram determinadas também as concentrações plasmáticas de glicose, lactato, ácidos graxos livres, glicerol e corticosterona, além da concentração muscular e hepática de glicogênio. O peso corporal dos ratos dos quatro grupos não apresentou diferença estatisticamente significativa antes da primeira ou da terceira sessão de natação. Após natação em temperaturas de 24°C e 18°C os ratos apresentaram hipotermia (30,7 +/- 0,7°C e 24,0 +/- 0,5°C, respectivamente) em relação os grupos controle (37,2 +/- O,12°C) e natação a 35°C(36,7 +/- 0,2°C), entre os quais não houve diferença estatisticamente significativa. Após a terceira sessão de natação, a concentração plasmática de corticosterona aumentou significativamente nos grupos submetidos à natação em 18°C (294,7 +/-17,9 ng/mL) e 24°C (289,5 +/- 27,1 ng/mL) do que 35°C (166,3 +/- 11,8 ng/mL), sendo os três significativamente diferentes do controle (57,2 +/- 10,0 ng/mL), enquanto que as concentrações sanguíneas de lactato e de ácidos graxos livres estavam significativamente elevadas em relação ao controle, mas não diferiram entre os grupos de ratos submetidos à natação. As concentrações de glicogênio das amostras hepáticas, cardíacas e do músculo sóleo de ratos submetidos à natação não diferiram significantemente do grupo controle. Porém, as concentrações de glicogênio nas porções branca e vermelha do músculo gastrocnêmio estavam reduzidas após natação. Em adipócitos isolados de ratos submetidos à natação houve aumento da liberação basal de glicerol e de lactato, mas as respostas ao d-butiril-AMPc, à noradrenalina e à adrenalina, assim como a sensibilidade às duas catecolaminas,não diferiu significantemente do controle. Concluímos que a intensidade do agente estressor pode ser modulada pela temperatura da água em protocolos de estresse por natação, de modo que as temperaturas mais baixas em relação à temperatura corporal do rato determinam respostas de estresse mais intensas, evidenciadas pela concentração plasmática de corticosterona. Entretanto, as alterações observadas nos marcadores metabólicos analisados são independentes da intensidade do estressor, no paradigma de estresse utilizado neste trabalho / Abstract: The effects of swimming stress on metabolic markers are different than those induced by foot-shock stress. These differences might be due either to stress intensity, which seems to be minor when the rats are submitted to swimming than foot-shock stress, or to the type of stressor agent. The aim of this work is to evaluate the effect of the stressor intensity on metabolic markers. Adult Wistar rats were distributed in groups: control, not submitted to swimming; or swimming stressed rats with the water temperature at 35°C, 24°C or 18°C. Swimming sessions occurred daily, for 3 days, with 5, 15 and 15 min duration, respectively. Before the first and last sessions the rats were weight and after the last swimming session the rat's rectal temperature was determined using a tele-thermometer; then the rats were anesthetized and a blood sample was collected through cardiac puncture. Samples of the liver, as well as the gastrocnemius, soleus and cardiac muscles were also collected. Adipocytes were isolated from the epididimal adipose tissue and were incubated with adrenergic agonists: The glycerol and lactate released in the infranatant were considered as indicative of in vitro lipolytic and glycolytic sensitivity to the agonists,respectively. The plasma concentrations of glucose, lactate, free fat acids, glycerol and corticosterone, as well as the muscular and hepatic glycogen concentrations were determined. The results have shown that the rat' s body weights were not altered by swimming. After swimming at 24 C and 18 C the rats showed severe hypothermia (30.7+/-0.7°C and 24.0+/- 0.5 C, respectively, p<0.05), whereas swimming at 35C did not alter the rats rectal temperature (36.7 +/-0.2°C) compared to control (37.2 +/- 0.12C). The plasma levels of corticosterone significantly enhanced in 18°C (294.7 +/- 17.9 ng/mL), 24°C (289.5+/- 27.1 ng/mL) and 35°C (166.3 +/-11.8 ng/mL) swimming groups, compared to control (57.2 +/- 10.0 ng/mL). The glucose and glycerol plasma levels were not altered, whereas the blood lactate and free fat acids levels significantly increased after swimming, with no difference between the stressed groups. Swimming did not alter the glycogen concentrations of the liver as well as cardiac and soleus muscle, but caused a decrease in the white and red gastrocnemius compared to control, with the decrease being independent of the water temperature. The in vitro basal glycerol and lactate release by adipocytes increased, similarly in all swimming groups. The lipolytic response to d-butiryl cAMP,norepinephrine and epinephrine were not different between groups. Catecholamines determined a biphasic effect on lactate release by adipocytes with the concentrations in the range up to 10 nM being stimulant and those higher than 10 nM being inhibitory of lactate release. No differences were observed between groups. We conclude that the stress intensity might be modulated by the water temperature in protocols of swimming stress, with lower temperatures being more stressful than those similar to the rats body temperature, as determined by the plasma levels of corticosterone. We also conclude that the swimming stress paradigm altered the analyzed metabolic markers in a manner that was independent of the stressor intensity (homotypic), in the stress paradigm used in this work / Mestrado / Fisiologia / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Ilza Maria Urbano Monteiro / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-27T21:47:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Souza_NataliaDal'Avade_D.pdf: 1420906 bytes, checksum: a2935c71ee1a1153564862074a4b592f (MD5) Previous issue date: 2015 / Resumo: INTRODUÇÃO: O ganho de peso associado ao uso de métodos contraceptivos contendo apenas progestágenos pode levar à descontinuação do uso. A avaliação da composição corporal (CC) pode auxiliar na compreensão e monitoração do ganho de peso. A mensuração da CC pela técnica de absorciometria de duplo feixe de raios-X (DEXA) permite quantificar os diferentes componentes da CC - massa gorda (MG), massa magra (MM). OBJETIVOS: Estimar a CC de mulheres na menacme e avaliar sua variação entre usuárias de acetato de medroxiprogesterona de depósito (AMPD) comparadas com usuárias de dispositivo intrauterino TCu380A (DIU TCu380A). SUJEITOS E MÉTODOS: Foram realizados dois estudos de avaliação da CC pela técnica DEXA. As participantes dos estudos foram selecionadas no Ambulatório de Planejamento Familiar do Departamento de Tocoginecologia da UNICAMP. Estudo 1: Estudo de corte transversal com 639 mulheres, entre 20 e 50 anos, divididas por faixas etárias (20-25, 26-30, 31-35, 36-40, 41-45, 46-50), no qual foi avaliado o peso corporal (kg), índice de massa corpórea (IMC kg/m2) e as variáveis de CC: MG (kg) e MM (kg), percentual de MG e de MM, índice de MG (IMG kg/m²) e índice de MM (IMM kg/m²). Estudo 2: Estudo de coorte prospectivo com acompanhamento de um ano, composto por dois grupos: 26 usuárias de AMPD como grupo-estudo e 26 usuárias de DIU TCu380A como grupo-controle , pareadas por peso (±2kg) e idade (±2 anos). Para avaliação da mudança de CC utilizaram-se variações percentuais de MG e MM e do peso (kg). A primeira avaliação foi realizada antes de se iniciar o uso do método contraceptivo e a segunda após 12 meses de uso. RESULTADOS: Estudo 1: Houve aumento absoluto de peso de 8kg (p=0,0001), 4,7kg de MG (p=0,003) e 1,9kg de MM (p=0,124) concomitante com a idade, embora não tenha ocorrido mudança significativa nos percentuais de MG e MM. O IMC(kg/m²) médio foi de 26,18(±4,6), sendo que as mulheres apresentaram sobrepeso desde a faixa etária de 26 a 30 anos e altos percentuais de gordura, atingindo valor médio de 41,6%(±7,4). O IMG médio das mulheres foi 10,5(±3,5). Estudo 2: Aos 12 meses de uso, as usuárias de AMPD tiveram aumento de peso de 1,9kg (p=0,02), resultante do ganho de 1,6kg (p=0,03) de MG. Nas usuárias de DIU TCu380A não houve alteração de peso; entretanto, houve ganho de 1,2kg de MM aos 12 meses de uso (p=0,001). O número de mulheres praticantes de atividade física aumentou neste grupo. Houve diferença significativa entre os grupos na variação do percentual de gordura central (p=0,04). CONCLUSÕES: As mulheres avaliadas apresentaram sobrepeso desde a idade jovem e ganho de peso, concomitantemente ao aumento da idade. Embora os percentuais de MG e MM não tenham se modificado, a quantidade absoluta de MG e de MM aumentou com o aumento da idade. O ganho de peso ocorrido nas usuárias de AMPD deveu-se ao ganho de MG, enquanto que as usuárias de DIU TCu380A tiveram aumento de MM e diminuição na MG abdominal / Abstract: INTRODUCTION: Weight gain associated with the use progestin-only contraceptive methods can lead women to discontinue the use. The boody composition assessment (BC) could assist to understand and to monitor weight gain. Evaluation of body composition by the technique dual-energy X-ray absorptiometry (DXA) allows to quantify the different components of CC: fat mass (FM) and lean mass (LM). OBJECTIVE: This study estimated body composition in women at reproductive age and evaluated body composition (BC) changes in users of depot medroxyprogesterone acetate (DMPA) and compared to TCu380A intrauterine device (IUD) users. SUJEITOS E MÉTODOS: It was performed two studies of BC assessment by DXA. Women of both studies were recruited at Woman Hospital of University of Campinas (Unicamp). Study 1: Cross-sectional study assessed BC of 639 women, between 20 - 50 years into age brackets (20-25, 26-30, 31-35, 36-40, 41-45, 46-50). It was evaluated weight, body mass index (BMI kg/m²), fat (FM) and lean mass (LM), percentage of fat (%FM) and lean mass (%FFM), fat mass index (FMI kg/m²) and fat-free mass index (FFMI kg/m²). Study 2: Prospective study was performed to compare body weight (BW) and BC in DMPA and IUD users at baseline and after one year of use. We enrolled 26 new DMPA users and age (± 2) and weight (± 2) matched 26 new IUD users. Weight and height were measured, BC (fat and lean mass), and physical activity was assessed at baseline and at 12 months. RESULTS: Study 1: It was an increase of 8kg of BW (p=0.0001), 4.7kg of FM (p= 0.003) of 1.9kg of LM (p= 0.124) concomitantly with increasing age, however it was no significant changes in %FM and %LM. Mean BMI (kg/m²) was 26.18 (±4.6), and women presented overweight since 26 years and elevated %FM, mean of 41.6% (±7.4). Mean FMI was (kg/m²) 10.5 (±3.5). Study 2: An increase of 1.9 kg occurred in BW (p=0.02) in DMPA users at 12 months of use, resulting from an increase in fat mass of 1.6 kg (p=.03). Weight remained stable in IUD users; however, there was an increase in lean mass of 1.2kg at 12 months of use (p=0.001). The number of women practicing physical activity increased in this group. There was a significant difference between the groups regarding the variation in the percentage of central fat (p=0.04). CONCLUSIONS: The women evaluated were overweight from the range of 26-30 years and presented weight gain concomitantly with increasing age. Although the percentage of fat and lean body mass has not changed, the absolute amount of fat and lean body mass increased with increasing age. Weight gain in the DMPA group resulted from an increase in fat mass. Weight remained stable in the IUD group; however, an increase in lean mass and a reduction in localized abdominal fat mass occurred / Doutorado / Fisiopatologia Ginecológica / Doutora em Ciências da Saúde

Atualmente, a obesidade pode ser classificada como uma pandemia. Com a clonagem do gene ob e do seu receptor, foi descoberta a leptina. Secretada principalmente pelo tecido adiposo, está diretamente correlacionada à quantidade de gordura corporal. Entretanto, diversos fatores influenciam sua expressão e síntese, tais como jejum, atividade simpática, exercício físico e alterações no balanço energético. Os efeitos do treinamento aeróbio sobre este hormônio são ainda contraditórios. Desta forma, este estudo teve como objetivo a verificação dos efeitos do treinamento aeróbio nas concentrações plasmáticas de leptina. Ratos Wistar machos foram divididos em dois grupos: treinado (T) e controle (C). Não houve diferença na ingestão energética e no gasto energético de repouso. Ratos treinados apresentaram menor peso corporal final, conteúdo de gordura corporal, insulinemia e melhora na resposta glicêmica. Houve maior expressão do mRNA da leptina no tecido adiposo visceral do que no subcutâneo nos dois grupos. Não houve, entretanto, diferença na expressão da leptina entre os grupos em ambos os depósitos. A menor concentração de leptina plasmática nos animais treinados ocorreu, principalmente, devido ao menor conteúdo de gordura corporal deste grupo. No entanto, após a correção da concentração de xiii leptina pelo conteúdo de gordura corporal, ainda foi observada diferença significativa entre os grupos, sugerindo que exista(m) outro(s) fator(es) de modulação das concentrações de leptina após o treinamento aeróbio, sendo a principal candidata a tal regulação a insulina / Obesity currently qualifies as a worldwide health epidemic. With the cloning of mouse ob gene and its receptor leptin was discovered. Leptin is expressed and secreted primarily by adipose tissue and is highly correlated to body fat mass. Nevertheless many factors can regulate leptin synthesis and expression, such as fasting, sympathetic activity, insulin, exercise and changes in energy balance. Endurance training effects on leptin are still contradictory. Therefore the aim of the present study was to verify the effects of endurance training on leptin levels. Male Wistar rats were separated in two groups: trained (T) and sedentary control (C). Energy intake and basal energy expenditure were not different between groups. Trained rats had lower final body weight, body fat mass, insulin levels and improved glycemic response. Leptin mRNA expression was higher in visceral than in subcutaneous adipose tissue in both groups. However, no difference in leptin expression between groups in either fat depot was found. Lower leptin levels in trained rats were due primarily to their lower body fat mass. Nonetheless, after correction for body fat mass leptin levels were still lower in exercised rats, suggesting that there might be other regulators of leptin levels in response to endurance training, being insulin the main candidate for such role

As Distrofias Musculares Progressivas (DMP) constituem um grupo de doenças genéticas caracterizadas por uma degeneração progressiva e irreversível da musculatura esquelética. A Distrofia Muscular de Duchenne (DMD) é a forma mais comum e grave de DMP. Obedece a herança recessiva ligada ao X e é caracterizada pela ausência de distrofina na membrana das fibras musculares. Atualmente não existe nenhum tratamento efetivo para este grupo de doenças. Deste modo, este trabalho tem como objetivo principal avaliar o potencial terapêutico das células-tronco mesenquimais de tecido adiposo humano (human Adipose-derived Stem Cells - hASCs) visando à regeneração ou diminuição da degeneração muscular. Para tanto, verificamos o potencial miogênico destas células in vitro, utilizando células musculares de pacientes DMD e in vivo utilizando como modelo camundongos distróficos e cães da raça Golden Retriever portadores de distrofia muscular (GRMD - Golden Retriever Muscular Dystrophy). Demonstramos neste estudo que hASCs são capazes de restaurar a expressão de distrofina in vitro, quando co-cultivadas com células musculares de pacientes DMD. Frente a estes resultados, continuamos nossos estudos em modelos animais, in vivo, e demonstramos que as hASCs são capazes de chegar à musculatura de camundongos distróficos e de cães GRMD, quando injetadas por via venosa, e de restaurar a expressão da proteína muscular defeituosa. Foi possível observar uma melhora funcional nos camundongos injetados. Nos cães GRMD encontramos distrofina humana seis meses após a última injeção entretanto é difícil julgar se houve melhora clínica. Todos esses experimentos de xenotransplantes foram feitos sem imunosupressão e não observamos rejeição. Concluímos que o tecido adiposo é uma fonte de células-tronco com potencial para regeneração muscular in vivo. Contudo é de extrema importância repetir os experimentos em um número maior de cães GRMD e ainda investigar novas estratégias visando melhorar os resultados obtidos neste trabalho, antes de começar qualquer teste clínico. / Progressive muscular dystrophies (PMD) are a clinically and genetically heterogeneous group of disorders caused by the deficiency or abnormal muscle proteins, resulting in progressive degeneration and loss of skeletal muscle function. As effective treatments for these diseases are still unavailable, they have been widely investigated as possible candidates for stem cell therapy. Duchenne Muscular Dystrophy (DMD), a lethal X-linked disorder, is the most common and severe form of muscular dystrophies, affecting 1 in 3000 male births. Mutations in the DMD gene lead to the absence of muscle dystrophin. The aim of this study is to evaluate the therapeutic potential of human Adipose-derived Stem Cells (hASCs) for muscle regeneration. First we verified the myogenic potential of these cells in vitro co-culturing them with muscle cells from DMD patients and verifying that hASCs are able to restore dystrophin expression in vitro. Subsequently we repeated this experiment in vivo using the dystrophic mice SJL and the dystrophic golden retriever dogs (GRMD - Golden Retriever Muscular Dystrophy) as animal models. We demonstrated that the hASCs are able to reach the muscles of the dystrophic mice and the GRMD dogs when injected systemically and restore expression of absent muscle protein, without any immunosupression. We observed a functional improvement in the injected mice. We found human dystrophin in injected dogs up to 6 months after the last injection. However it is difficult to evaluate if there was clinical improvement in the GRMD dogs due to their great phenotypic variability. We conclude that the adipose tissue is a source of stem cells with potential for muscle regeneration in vivo and that human cells are not rejected even in xenotransplants without immunosuppression. However it is important to repeat the experiments on a larger number of GRMD dogs and to investigate new strategies to improve our findings before starting any clinical trial.

Objetivo do estudo foi estudar a participação dos adipócitos e do fígado na inflamação e o papel da microbiota ao longo da progressão da caquexia. Para verificar o comportamento dos adipócitos e do fígado utilizamos ratos Wistar macho de 8 semanas, divididos em dois grupos: i) controle; ii) tumor. Este último foi subdividido em 2 grupos: a) 7º. e b) 14º. dia após a inoculação das células tumorais. Para avaliar o comportamento da microbiota durante o quadro de caquexia utilizamos camundongos C57Bl/6 convencional e germ free de 8-10 semanas, divididos em quatro grupos: i) Convencional controle; ii) Germ Free controle; iii) Convencional tumor; iv) Germ Free tumor. A célula tumoral usada para esse modelo foi Lewis Lung Carcinoma. Adipócitos isolados dos TAB, mesentérico, mais o fígado, mostraram que a via do inflamassoma esta ativa na fase terminal da caquexia. No modelo Germ Free, observamos que a caquexia apresenta-se é acelerada no tecido adiposo epididimal comparado aos camundongos convencionais tumor. Em conclusão, os adipócitos e o fígado desempenha papel importante no estabelecimento da inflamação, enquanto que a simbiose da microbiota parece ser essencial para combater a redução do tecido adiposo. / The goal of this study the role of adipocytes and liver inflammation and the role of microbiota along the progression of cachexia. The main aspects evaluated were increased of the inflammation, alteration in both pathways NF-kB and the inflammasome, and importance of the microbiota during progression of cachexia. To verify the behavior of adipocytes and liver I used Eight weeks-old male rats, I divided into two main groups: i) control; ii) tumor. The latter was divided into 2 groups: a) 7º. and b) 14º. day after tumor cell. To assess the microbial behavior during the development of cachexia I used C57BL/6 conventional mice and Germ Free 8-10 weeks, they were divided into four groups: i) Conventional control; ii) Germ Free control; iii) Conventional tumor; iv) Germ Free tumor. The tumor cell used in this model was Lewis Lung Carcinoma. Adipocytes isolated from TAB, mesenteric further the liver, showed that the inflammasome pathway is active in the terminal phase of cachexia. In model of Germ free mice we observed that cachexia is accelerated in epididymal adipose tissue compared to conventional tumor. In conclusion, adipocytes and liver seem to play a relevant role in the establishment of inflammation, while the microbial symbiosis seems to be essential for combating the reduction of adipose tissue.

A hipótese de que peptídeos gerados como produtos de proteólise intracelular poderiam modular cascatas de sinalização, foi originalmente proposto pelo nosso grupo. Um estudo realizado por Heimann et al. (2005) mostrou que camundongos geneticamente modificados e submetidos à dieta hiperlipídica, apresentavam uma diferença no conteúdo intracelular de peptídeos e uma melhora da resistência à insulina. Neste trabalho, investigamos o conteúdo peptídico intracelular do tecido adiposo de animais que desenvolveram obesidade e resistência à insulina, após serem submetidos à dieta cafeteria. Duas sequências peptídicas apresentaram 100% de aumento no tecido adiposo de animais submetidos à dieta cafeteria, em relação aos controles, tendo sido analisadas por ensaios de cinética enzimática, captação de glicose, western blot e cromatografia de afinidade. Os resultados obtidos corroboram os dados de Heimann et al. (2005) de que peptídeos intracelulares podem estar envolvidos na resistência à insulina, modulando o transporte de glicose no tecido adiposo. / The hypothesis that peptides generated as degradation products of intracellular proteolyses could modulate signaling pathways, was originally proposed by our group. A study by Heimann et al. (2005) showed that mice genetically modified and fed with high-fat diet, showed a difference in intracellular content of peptides and an improvement of insulin resistance. In this study, we investigated the intracellular peptide content from adipose tissue of animals that developed obesity and insulin resistance after being treated with the Western diet. Two peptide sequences showed 100% increase in adipose tissue of animals submitted to the Western diet compared to controls, and were analyzed by enzymatic assays, glucose uptake, western blot and affinity chromatography. Altogether, these results corroborate previous suggestions that intracellular peptides may be involved in insulin resistance, modulating glucose transport in adipose tissue.

A caquexia é um síndrome para neoplástica que interfere na morfologia e fisiologia do tecido adiposo. O objetivo do presente estudo foi avaliar os efeitos do treinamento de força e da suplementação de tributirina sobre os parâmetros da caquexia em animais inoculados com células do tumor de Walker 256. Ratos Wistar (n=7) foram randomizados em grupos experimentais: Controle (CT), Tumor (TB), Tumor tratado com tributirina (TBTrib), Treinado com Tumor (TFTB) e Tumor Treinado e suplementado com tributirina (TFTBTrib). Os parâmetros: peso tumoral, peso total carregado, quantidades de glicogênio, perfil plasmático, quantidades de citocinas, histologia do tecido adiposo foram analisados. Os grupos TBTrib e TFTBTrib tiveram menores quantidades de massa tumoral quando comparado com o grupo TB. O glicogênio muscular de TFTB e TFTBTrib estavam 37% e 35% maiores comparados com TB. As proteínas musculares aumentaram 48% e 50% para os grupos TFTB e TFTBTrib, sendo diferentes comparados com os grupos CT e TB. Se observou melhor balanço de IL-10/TNF-a nos grupos TFTB e TFTBTrib, sendo que a secção transversa diminuiu nos grupos TB e TBTrib. Se propõe que o treinamento de força e a suplementação de tributirina podem ser usados em trabalhos futuros com humanos. / Cachexia is a syndrome to neoplastic interfering in the morphology and physiology of adipose tissue. The aim of this study was to evaluate the effects of strength training and supplementation of tributyrin on the parameters of cachexia in animals inoculated with tumor cells of Walker 256 . Wistar rats (n = 7) were randomized into experimental groups : control (CT) , tumor (TB) , tumor treated with tributyrin (TBTrib) Trained with Tumor (TFTB) and Tumor Trained and supplemented with tributyrin (TFTBTrib). The parameters : tumor weight , total weight loaded amounts of glycogen , plasma levels , amounts of cytokines, histology of adipose tissue were analized. The TBTrib and TFTBTrib groups have smaller amounts of tumor mass compared to TB group. Muscle glycogen and TFTB TFTBTrib were 37% and 35% when compared to BD. The muscle proteins were 48% and 50%, respectively for TFTB and TFTBTrib groups being different when compared with TB and TC groups. Better balance was observed in groups IL-10/TNF-a TFTB and TFTBTrib , and the cross-section decreased in the groups TBTrib and TB. Proposes that resistance exercise and tributyrin supplementation can be used in future studies with humans.

A sepse é uma disfunção orgânica causada por uma resposta do hospedeiro à infecção desregulada, com risco de morte. Quando o tratamento da sepse não é efetivo, o quadro pode progredir para hipotensão severa. O tecido adiposo perivascular (perivascular adipose tissue - PVAT) é reconhecido como um elemento regulador na biologia vascular, com implicações na fisiopatologia de doenças cardiovasculares. No entanto, em relação à sepse, pouco se sabe acerca dos efeitos desta sobre a ação modulatória que o PVAT exerce no tônus vascular. Dessa maneira a hipótese do presente trabalho foi a de que a sepse poderia aumentar o efeito anti-contrátil do PVAT. Portanto, o objetivo do trabalho foi avaliar o efeito da sepse experimental na ação modulatória que o PVAT exerce sobre tônus vascular e os possíveis mecanismos envolvidos nessa resposta. Para isso foram utilizados ratos Wistar Hannover com idade entre 60 e 70 dias (270 a 300g). Os ratos foram distribuídos aleatoriamente em 2 grupos: 1) Grupo Sham: foi realizada apenas uma laparotomia sem os procedimentos de ligadura e punção do ceco; 2) Grupo CLP (Cecal Ligation and Puncture) : a sepse letal foi induzida utilizando o modelo CLP no qual foi realizada uma laparotomia para exposição do ceco, onde foi feito uma ligadura e 20 punções intermediárias entre a ligadura e a ponta do ceco com agulha de calibre 18 gauge (G). Os animais foram anestesiados com quetamina/xilasina (80/10 mg/kg, i.p.) e mortos 6 h após a indução da sepse. A aorta torácica foi coletada para realização das análises bioquímicas e funcionais. A sepse letal reduziu a taxa de sobrevida, a pressão arterial média (PAM), não alterou os níveis de leucócitos e neutrófilos, mas aumentou a contagem de bactérias no sangue e no lavado peritoneal, aumentou os níveis plasmáticos de nitrato, uréia e CK-MB. A sepse diminuiu a contração induzida pela fenilefrina e serotonina nas aortas PVAT(-)/Endo(+) ou Endo (-) do grupo CLP, quando comparada ao Sham. Porém nas artérias PVAT(+)/Endo(+) ou Endo (-), o CLP induziu redução mais pronunciada da contração induzida tanto pela fenilefrina, quanto pela serotonina. O aumento do efeito anti-contrátil do PVAT na condição séptica não foi encontrado nas artérias após a incubação com L-NAME, 7-nitroindazol, 1400W, A779, carboxy-PTIO, ODQ, apamina, RO11384552 e indometacina. Tiron, catalase, 4-aminopiridina, glibenclamida e caribdotoxina não alteraram a contração induzida pela fenilefrina no grupo CLP. A sepse aumentou a concentração de H2O2 na aorta, mas não afetou a concentração no PVAT. Aumento dos níveis de ânion superóxido (O2-) e prostaglandina (PG)I2 foram detectados tanto na aorta, quanto no PVAT do grupo CLP. A sepse não alterou os níveis de PGE2 ou angiotensina (1-7) na aorta ou PVAT. Portanto, a sepse letal induzida por CLP aumenta a ação anti-contrátil do PVAT por um mecanismo que envolve a produção de NO pelas enzimas iNOS e nNOS, a participação de canais para KCa de baixa condutância e ativação da enzima guanilato ciclase solúvel. Além disso, sugere-se o envolvimento da PGI2 e angiotensina (1-7) na hiporresponsividade vascular mediada pelo PVAT durante a sepse / Sepsis is an organic dysfunction caused by an unregulated host response to lifethreatening infection. When treatment of sepsis is ineffective, the condition may progress to severe hypotension that is drug-irresponsive. Perivascular adipose tissue (PVAT) is recognized as a regulatory element in vascular biology that is implicated in the pathophysiology of cardiovascular diseases. However, little is known about the effects of sepsis in the modulatory action of PVAT. Thus, the hypothesis of the present study was that sepsis could increase the anti-contractile effect of PVAT. Therefore, the objective of the study was to evaluate the effect of experimental (lethal) sepsis in the modulatory action that PVAT exerts on vascular tone and the possible mechanisms underlying this response. With this purpose, male Wistar Hannover rats (250-300g) were divided in 2 groups: 1) Sham: the cecum was exteriorized without ligation and puncture; 2) CLP: lethal sepsis was induced using the cecal ligation and puncture (CLP) model. The thoracic aorta was isolated 6 h after sepsis for functional and biochemical assays. Lethal sepsis reduced survival rate, mean arterial pressure (MAP), did not alter leukocytes and neutrophils migration, but increased bacterial count in the blood and peritoneal cavity, increased plasma levels of nitrate, urea and CK-MB. We found that in aortas PVAT(-)/Endo(+) or Endo(-), sepsis decreased the contraction induced by phenylephrine or serotonin, when compared to sham. In PVAT(+)/Endo(+) or Endo (-) arteries sepsis induced a more pronounced reduction of phenylephrine-induced contraction. Sepsis-induced increase of anti-contractile action of PVAT was not found after incubation of arteries with L-NAME, 7-nitroindazole, 1400W, A779, carboxyPTIO , ODQ, apamin, indomethacin and RO1138452. Tiron, catalase, charybdotoxin, 4- aminopyridine and glibenclamide did not alter phenylephrine-induced contraction in the CLP group. Sepsis increased H2O2 concentration in the aorta, but did not affect H2O2 concentration in PVAT. Increased levels of superoxide anion (O2-) and prostaglandin (PG) I2 were detected in both aorta and PVAT. Sepsis did not alter the levels of PGE2 or angiotensin (1-7) in the aorta or PVAT. Conclusion: Lethal sepsis increases the anticontractile action of PVAT by a mechanism that involves the production of nitric oxide (NO) by iNOS and nNOS, the participation of calcium-dependent K+ channel of low conductance and activation of the enzyme soluble guanylate cyclase. Angiotensin (1-7) and PGI2 also contribute to the increased anti-contractile effect displayed by PVAT during sepsis. Financial Support: CAPES