Orientador: Fernando Lopes Alberto / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-07T09:04:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Peres_TarcisiodeSouza_M.pdf: 2330056 bytes, checksum: 66c1d9241ad60e2d973cfb7361a5eb7c (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: Durante todo o século XX, a pesquisa do câncer se desenvolveu de maneira sistemática, porém os últimos 25 anos foram notadamente caracterizados por rápidos avanços que geraram uma rica e complexa base de conhecimentos, evidenciando a doença dentro de um conjunto dinâmico de alterações no genoma. Desta forma, o entendimento completo dos fenômenos moleculares envolvidos na fisiopatologia das neoplasias depende do conhecimento dos diversos processos celulares e bioquímicos característicos da célula tumoral e que, porventura, a diferenciem da célula normal (GOLUB e SLONIM, 1999). Nesse trabalho buscamos o melhor entendimento das vias moleculares no processo neoplásico por meio da análise dos dados do Projeto Genoma Humano do Câncer (CAMARGO, 2001) com vistas à identificação de genes diferencialmente expressos nas neoplasias dos seguintes tecidos: mama, cólon, cabeça e pescoço, pulmão, sistema nervoso central, próstata, estômago, testículo e útero. A metodologia de geração dos transcritos utilizada pelo Projeto Genoma Humano do Câncer é conhecida como ORESTES (DIAS et al, 2000). Inicialmente, os dados de seqüenciamento (fragmentos ORESTES) foram agrupados por meio de uma técnica conhecida em Bioinformática como ¿montagem¿, utilizando o pacote de programas de computador PHRED/PHRAP (EWING e GREEN P., 1998). A comparação de cada agrupamento com seqüências conhecidas (depositadas em bases públicas) foi realizada por meio do algoritmo BLAST (ALTSCHUL et al, 1990). Um subconjunto de genes foi selecionado com base em critérios específicos e submetido à avaliação de seus níveis de expressão em diferentes tecidos com base em abordagem de inferência Bayesiana (CHEN et al, 1998), em contraposição às abordagens mais clássicas, como testes de hipótese nula (AUDIC e CLAVERIE, 1997). A inferência Bayesiana foi viabilizada pelo desenvolvimento de uma ferramenta computacional escrita em linguagem PERL (PERES et al, 2005). Com o apoio da literatura, foi criada uma lista de genes relacionados ao fenômeno neoplásico. Esta lista foi confrontada com as informações de expressão gênica, constituindo-se em um dos parâmetros de um sistema de classificação (definido para a seleção dos genes de interesse). Desta forma, parte da base de conhecimento sobre câncer foi utilizada em conjunto com os dados de expressão gênica inferidos a partir dos fragmentos ORESTES. Para contextualização biológica da informação gerada, os genes foram classificados segundo nomenclatura GO (ASHBURNER et al, 2000) e KEGG (OGATA et al, 1999). Parte dos genes apontados como diferencialmente expressos em pelo menos um tecido tumoral, em relação ao seu equivalente normal, integram vias relacionadas ao fenômeno neoplásico (HAHN e WEINBERG, 2002). Dos genes associados a estas vias, 52% deles possuíam fator de expressão diferencial (em módulo) superior a cinco. Finalmente, dez entre os genes classificados foram escolhidos para confirmação experimental dos achados. Os resultados de qPCR em amostras de tecido gástrico normal e neoplásico foram compatíveis com com os dados de expressão gênica inferidos a partir dos fragmentos ORESTES / Abstract: The XXth century showed the development in cancer research in a systematic way, most notably in the last 25 years that were characterized by rapid advances that generated a rich and complex body of knowledge, highlighting the disease within a dynamic group of changes in the genome. The complete understanding of the molecular phenomena involved in the physiopathology of neoplasia is based upon the knowledge of the varied cellular and biochemical processes which are characteristic of the tumor and which make it different from the normal cell (GOLUB e SLONIM, 1999) In this work, we investigated the molecular pathways in the neoplasic process through data analyses of the cDNA sequences generated on the Human Cancer Genome Project (CAMARGO, 2001). The following neoplasias were included: breast, colon, head and neck, lungs, central nervous system, prostate gland, stomach, testicle and womb. The methodology of generation of transcripts used by the Genome Project of Human Cancer is known as ORESTES (DIAS et al, 2000). Initially, the sequence of data (ORESTES fragments) were grouped and assembled according to similarity scores. For this purpose, we used the package of computer programs PHRED/PHRAP (EWING e GREEN P., 1998). The resulting consensus sequences, each representing a cluster, were compared to known sequences (deposited in public databanks) through the BLAST algorithm (ALTSCHUL et al, 1990). A subgroup of genes was selected based on specific criteria and their levels of expression in different tissues were evaluated by a bayesian inference approach (CHEN et al, 1998), as compared to more classical approaches such as null hypothesis tests (AUDIC e CLAVERIE, 1997). The Bayesian inference tool was represented as a PERL script developed for this work. A list of genes, putatively related to the neoplasic phenotype, was created with the support of the literature. This list was compared to the gene expression information, becoming one of the parameters of a ranking system (defined for the selection of genes of interest). Therefore, part of the knowledge related to cancer was used together with the data of gene expression inferred from ORESTES fragments. For a more accurate understanding of the molecular pathways involved in the generated information, the genes were classified according to the Gene Ontology (ASHBURNER et al, 2000) and KEGG (OGATA et al, 1999) nomenclatures. Additional global analyses by pathways related to the neoplasic phenomenon (HAHN e WEINBERG, 2002) demonstrated differential expression of the selected genes. About 52% of the genes in this pathways were differentially expressed in tumor tissue with at least a 5-fold. Finally, ten genes were selected for experimental validation (in vitro) of the findings with real-time quantitative PCR, confirming in silico results / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestre em Ciências Médicas

Orientadores: Antonio Carlos Boschero, Kleber Luiz de Araujo e Souza / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-13T04:48:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Paula_FlaviaMariaMourade_M.pdf: 2651405 bytes, checksum: 255d59533f2d09ff678a30dd27fdc45f (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: INGAP (Islet Neogenesis Associated Protein), um peptídeo primeiramente dentificado em hamsters, cujo pâncreas foi previamente embrulhado em papel celofane, tem como função principal induzir neogênese e diferenciação de células beta pancreáticas, além de melhorar a secreção de insulina induzida por glicose e aminoácidos. Existem poucas informações a respeito dos mecanismos intracelulares desencadeados pelo INGAP em células beta. Assim, este trabalho teve como objetivo estudar tais mecanismos em 2 linhagens de células beta pancreáticas produtoras de insulina, denominadas RINm5F e MIN6. Para isso foi utilizado o INGAP-PP (INGAP104-118) constituído por uma seqüência de 15 aminoácidos e que mantém as mesmas propriedades da molécula do INGAP. Durante o procedimento experimental foi realizado um "screening" dos elementos responsivos a alguns fatores de transcrição. A expressão de algumas proteínas como receptor muscarínico M3, p85, AKT, p70S6k, PCNA e NF?B foi analisada, assim como a secreção de insulina estimulada por glicose, a mobilização de cálcio intracelular e a medida de viabilidade celular. A exposição das células MIN6 ao INGAP-PP aumentou a secreção de insulina induzida por glicose assim como a mobilização intracelular de cálcio. INGAP-PP ativou os fatores de transcrição c-Myc, SRE e em especial o NF?B nas duas linhagens celulares. A viabilidade celular também foi aumentada nas células expostas ao INGAP-PP a qual foi acompanhada de aumento na expressão de PCNA, proteína diretamente relacionada com a progressão do ciclo celular. Ainda, a expressão protéica do receptor muscarínico M3 foi aumentada na presença de INGAP-PP. Esse efeito foi bloqueado pela pré-exposição das células a um inibidor farmacológico do NF?B. Pode-se concluir que a ativação moderada do c-Myc e o aumento na expressão de PCNA estão relacionados com o aumento na viabilidade celular. Adicionalmente, conclui-se que a ativação moderada do NF?B induzida pelo INGAP-PP controla direta ou indiretamente a expressão do receptor M3 e tal processo pode estar relacionado sinergicamente com o aumento na proliferação celular. / Abstract: The pentadecapeptide comprising the 104-118 aminoacid sequence of the ilotropin-derived Reg3- related islet neogenesis associated protein (INGA-PP) has been implicated in pancreatic beta-cell neogenesis and enhancement of the insulin secretion in pancreatic islets. There is little information regarding the mechanism of action of the polypeptide. The aim of this study was to investigate intracellular pathways by which INGAP-PP signs insulin-producing cells. The results show that INGAP-PP increased the insulin secretion and induced mobilization of intracellular calcium in MIN6 cells. INGAP-PP exposure activated c-Myc, serum response element (SRE) and particularly nuclear factor kappa B (NF?B) in both MIN6 and RINm5F insulin-producing cells. There was an increase in the proliferation rate of viable cells that was accompanied by an increase in the proliferating cell nuclear antigen (PCNA) protein expression following INGAP-PP treatment. In addition, INGAP-PP increased the expression of the muscarinic M3 receptor subtype. This effect was impaired by blocking NF?B signaling pathway. Cells incubated in the presence of foetal calf serum (FCS) also showed increased M3 receptor expression. In conclusion, these data show that activation of c-Myc signaling pathway and increased PCNA expression might be involved in the increased proliferation rate of insulin-producing cells following incubation with INGAP-PP. NF?B signaling plays an essential role in controlling the expression of the acetylcholine M3 receptor. / Mestrado / Fisiologia / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Fernando Ferreira Costa / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-08T01:23:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Hollanda_LucianaMariade_D.pdf: 4424025 bytes, checksum: 8c238f31a49b17fab4715981e3919ca2 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: Várias mutações hereditárias no gene GATA1 localizadas no éxon 4 e conseqüentemente que afetam o domínio dedo de zinco N-terminal foram descritas em algumas famílias que apresentavam graus variáveis de plaquetopenia com ou sem anemia. Por outro lado, mutações adquiridas no éxon 2 deste gene foram observadas em quase todos os casos estudados de pacientes com Síndrome de Down e que apresentavam TMD ou AMKL. Essas mutações impedem a síntese da proteína total, mas permite a síntese da isoforma menor da proteína, denominada GATA-1s. Experimentos em camundongo sugeriram que a síntese única da isoforma GATA-1s seria suficiente para induzir hemopoese normal nesses animais. Neste trabalho descrevemos em pacientes e portadores de uma família a mutação 332G--C localizada no éxon 2 do gene GATA 1 que conduz a produção apenas da proteína GATA-1s nos homens afetados. Os perfis hematológicos desses pacientes demonstraram anemia macrocítica, neutropenia em vários casos e número normal de plaquetas. Em seu conjunto, esses dados sugerem que a proteína GATA -1s, produzida em níveis normais ou baixos não é suficiente para conduzir à eritropoese normal. Além disso, este é o primeiro estudo onde uma mutação hereditária no éxon 2 do gene GATA1 origina apenas a proteína GATA-1s e não provoca AMKL ou TMD em indivíduos não portadores de síndrome de Down. Desta forma este estudo indica que outros eventos cooperativos, como outras mutações ou a trissomia do cromossomo 21 provavelmente podem ser os responsáveis por essas anomalias em crianças com síndrome de Down / Abstract: Inherited mutations in exon 4 of the GATA1 gene, which codes for the N-terminal zinc finger domain of GATA-1, have been found in some families, leading to a familial dyserythropoietic anemia with thrombocytopenia, X-linked thrombocytopenia and X-linked thalassemia with thrombocytopenia. Acquired somatic mutations in exon 2 of the hematopoietic transcription factor GATA-1 have been found in individuals with Down syndrome with both transient myeloproliferative disorder and acute megakaryoblastic leukemia . These mutations prevent the synthesis of the full-length protein but allow the synthesis of its short isoform, GATA-1s. Experiments in mice suggest that GATA-1s supports normal adult megakaryopoiesis, platelet formation and erythropoiesis. Here we report a mutation, 332G-C, in exon 2 of GATA1, leading to the synthesis of only the short isoform in seven affected males from two generations of a family. Hematological profiles of affected males demonstrate macrocytic anemia, normal platelet counts and neutropenia in most cases. Altogether, data suggest that GATA-1s alone, produced in low or normal levels, is not sufficient to support normal erythropoiesis. Moreover, this is the first study to indicate that a germline splicing mutation does not lead to leukemia in the absence of other cooperating events, such as Down syndrome / Doutorado / Genetica Animal e Evolução / Doutor em Genetica e Biologia Molecular

Submitted by Franciele Moreira (francielemoreyra@gmail.com) on 2017-09-25T17:25:32Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Luís Cláudio Cabral da Silveira Ranna - 2017.pdf: 12669016 bytes, checksum: 4bf73dbfcd3055ae874881dd107cd2af (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-09-26T12:05:42Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Luís Cláudio Cabral da Silveira Ranna - 2017.pdf: 12669016 bytes, checksum: 4bf73dbfcd3055ae874881dd107cd2af (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-26T12:05:42Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Luís Cláudio Cabral da Silveira Ranna - 2017.pdf: 12669016 bytes, checksum: 4bf73dbfcd3055ae874881dd107cd2af (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2017-03-29 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / This research proposes the realization of seven transcriptions for voice and guitar of songs by the nationalist composer Dinora de Carvalho (1895-1980). The chosen works are part of various compositional tendencies of the works for voice and piano, resulting from the composer's 46 years of training for this formation, each with its influence. We began our procedure by reflecting on the concerns expressed by transcription scholars, to base the characteristics and limits that were adopted in our intervention. For the technical-instrumental adaptation to the guitar we chose the notes on the transcription by Daniel Wolff and Pedro Rodrigues, allied to the works developed around the thematic language, proposed by Scarduelli and Fernandes. To complement the arguments used, the concepts of Intentio Operis and Overinterpretation proposed by Umberto Eco were used during the text, as well as in the general conception we promote about the work. Flávio Carvalho's master's dissertation runs through the work as essential material for consultation. / A presente pesquisa propõe a realização de sete transcrições para Canto e Violão de Canções da compositora nacionalista Dinorá de Carvalho (1895-1980). As obras escolhidas fazem parte de variadas tendências composicionais das canções para Canto e Piano, resultado de 46 anos de metiê da compositora para essa formação, cada qual com sua influência. Iniciamos nosso procedimento realizando uma reflexão acerca de inquietações manifestadas por estudiosos em transcrição, com o intuito de embasarmos as características e limites que foram adotados em nossa intervenção. Para a adaptação técnico-instrumental ao violão adotamos os apontamentos sobre transcrição de Daniel Wolff e Pedro Rodrigues, aliados aos trabalhos desenvolvidos em torno da temática idiomatismo, propostos por Scarduelli e Fernandes. Para complementação das argumentações utilizadas, os conceitos de Intentio Operis e Superinterpretação propostos por Umberto Eco foram utilizados no decorrer do texto, assim como na concepção geral que promovemos sobre a obra. A dissertação de mestrado de Flávio Carvalho perpassa por todo o trabalho como material essencial de consulta.

A transição endotélio-mesenquimal (EndMT) é uma forma especializada da transição epitéliomesenquimal (EMT) e é caracterizada pela alteração da morfologia celular para um formato fibroblastoide, perda da expressão dos marcadores endoteliais e ganho da expressão dos marcadores mesenquimais, bem como a aquisição de propriedades invasivas e migratórias. Entretanto, o mecanismo molecular envolvido nesse processo ainda não está totalmente elucidado. O objetivo desse trabalho foi avaliar os fatores indutores da EMT em células endoteliais (CEs) de fontes distintas por meio da superexpressão do fator de transcrição SNAIL e do tratamento com TGF-?2, bem como identificar os mecanismos moleculares envolvidos nesse processo. Para tal, as linhagens de CE da artéria pulmonar (HPAEC), pool de CE primária de veia de cordão umbilical (PHUVEC), CE da aorta (PAEC) e CE da artéria coronária (CAEC) foram induzidas em três condições distintas: I) TGF-?2; II) superexpressão do fator de transcrição SNAIL; III) superexpressão do fator de transcrição SNAIL associado ao tratamento com TGF-?2 (SNAIL+TGF-?2). Após a indução, a expressão dos genes relacionados com a EndMT foi analisada por PCR em tempo real (qPCR) e as CAECs foram as células que apresentaram maior mudança no perfil de expressão gênica, no qual o grupo SNAIL+TGF-?2 apresentou um aumento dos marcadores mesenquimal FN1, SM22, CNN1 e CD90. O grupo SNAIL+TGF-?2 também mostrou uma diminuição dos marcadores endoteliais CD31 e CDH5 por Western blot. Em seguida, a técnica de microarray foi realizada nas CAECs induzidas à EndMT e as análises revelaram um dendrograma cujo perfil mostrou que SNAIL e SNAIL+TGF-?2 se agrupam separadamente das outras condições. Os dados de microarray resultaram em uma rede na qual os genes mesenquimais COL1A1, COL1A2, FN1 e CNN1 estavam aumentados no grupo SNAIL+TGF-?2 comparado com o grupo controle. Os genes diferencialmente expressos entre a análise CT vs. SNAIL+TGF-?2 foram analisados quanto a participação em vias canônicas e a via de regulação da EMT foi uma das mais representadas, a qual inclui a via de sinalização Notch e Wnt. Nos dados de microarray, NOTCH3 e WNT5B estavam superexpressos no grupo SNAIL+TGF-?2 comparado com o controle. Sabendo que Wnt5b pode inibir a via ?-catenina, a expressão de NOTCH3, WNT5B e ?-CATENINA foi avaliada por qPCR e a expressão de NOTCH3 e WNT5B confirmou os dados do microarray e nenhuma diferença estatística foi observada na expressão de ?- CATENINA. Ainda, as CAECs induzidas foram submetidas ao ensaio de migração e de capacidade de formação de estruturas semelhantes a capilares. Foi observado que as CAECSNAIL+ TGF-?2 migraram significativamente comparadas com as outras condições e nenhuma das células induzidas (TGF-?2, SNAIL e SNAIL+TGF-?2) foram capazes de formar estruturas semelhantes a capilares. Alguns microRNAs foram selecionados e avaliados por qPCR. O miR-let7a foi significativamente expresso no grupo SNAIL e SNAIL+TGF-?2. O ensaio de perda e ganho de função do miR-let7a foi realizado, entretanto, a repressão ou a indução do miR-let7a não alterou a EndMT. Esses resultados sugerem que as CEs de fontes anatômicas distintas apresentam respostas diferentes quando estimuladas a sofrerem EndMT. Ademais, a associação entre SNAIL+TGF-?2 é um potente indutor para EndMT e essa indução pode ser mediada pelas vias de sinalização Notch e Wnt não canônica. / Endothelial-mesenchymal transition (EndMT) is a specialized form of epithelialmesenchymal transition (EMT) which is characterized by changes in cell morphology as a fibroblastoid conversion, expression of endothelial markers decreased, expression of mesenchymal markers increased and acquirement of invasive and migratory properties. However, the molecular mechanism associated with this process is not completely elucidated. The aim of this study was to evaluate the EMT-inducing factors in the endothelial cells (ECs) from different sources through the overexpression of the transcription factor SNAIL and through the treatment with TGF-?2, as well as to identify the molecular mechanisms involved in EndMT. For this purpose, primary pulmonary artery EC (HPAEC), primary pooled umbilical vein EC (PHUVEC), primary aortic EC (PAEC), primary coronary artery EC (CAEC) lineages were induced under three distinct conditions: I) TGF-?2; II) ectopic expression of SNAIL; III) ectopic expression of SNAIL associated with TGF-?2 (SNAIL+TGF- ?2). After the EndMT induction, the expression of the genes associated with EndMT was analyzed by Real time PCR (qPCR) and CAECs showed the most prominent alterations on their gene expression profile which showed that SNAIL+TGF-?2 group presented an increase of mesenchymal markers FN1, SM22, CNN1, and CD90 expression. CAEC-SNAIL+TGF-?2 group also showed a decrease of endothelial markers CD31 and CDH5 by western blot. Then, microarray was performed in CAECs after EndMT induction and hierarchical clustering analysis showed that the ectopic expression of SNAIL and SNAIL+TGF-?2 clustered separately from the other conditions. Microarray data resulted in a network which presented an upregulation of the mesenchymal genes such as COL1A1, COL1A2, FN1, and CNN1 in the CAEC-SNAIL+TGF-?2 compared to control cells. We analyzed the canonical pathways related to the differentially regulated genes between CAEC- SNAIL+TGF-?2 and control cells and the regulation of EMT pathways was the most represented, which includes Notch and Wnt signaling pathway. In the microarray data, NOTCH3 and WNT5B were overexpressed in CAEC-SNAIL+TGF-?2 compared to control. It is known that Wnt5b might inhibit the ?- catenin pathway. Therefore, NOTCH3, WNT5B and ?-CATENIN gene expression were analyzed by qPCR. NOTCH3 and WNT5B gene expression confirmed the microarray data and no statistical difference were observed in ?-CATENIN expression. Moreover, all the CAECs conditions were subjected to scratch migration assay and the formation of capillary-like structures assay. CAEC-SNAIL+TGF-?2 had a significant migration compared to other conditions and the three EndMT inductions (TGF-?2, SNAIL, and SNAIL+TGF-?2) were not able to form capillary-like structures. Some microRNAs were selected and evaluated by qPCR. The miR-let7a was significantly expressed in the SNAIL and SNAIL+TGF-?2 groups. The assay of gain or loss of function of miR-let7a was realized; however, the repression or induction of miR-let7a did not change the EndMT. These results suggest that endothelial cells from distinct anatomical sources have different responses when stimulated to undergo the EndMT. Moreover, the association between SNAIL+TGF-?2 is a potent inductor for EndMT and this induction can be mediated by Notch and non-canonical Wnt signaling pathway activation.

Dados da literatura e do nosso grupo evidenciam que a desnutrição protéica compromete órgãos linfo-hematopoéticos e modifica a resposta imune. Sabendo que animais desnutridos apresentam hipoplasia severa de órgãos hematopoéticos e que o microambiente medular apresenta distintos moduladores que atuam sinergicamente para influenciar a sobrevivência, proliferação e o desenvolvimento das células hematopoéticas em todos os seus níveis de diferenciação, avaliamos em um modelo de desnutrição, alguns aspectos da complexa regulação do microambiente medular avaliando a expressão de fatores de transcrição envolvidos no processo de diferenciação da Célula Tronco Mesenquimal (CTM) e capacidade de produção de citocinas importantes para o controle da hematopoese. Camundongos Balb/C machos, adultos, adaptados em gaioleiros metabólicos foram separados nos grupos controles e desnutridos recebendo, respectivamente, ração normoprotéica (12% de proteínas) e hipoprotéicas (2% de proteínas). Após o grupo desnutrido perder cerca de 20% do peso inicial, os animais foram sacrificados para a avaliação nutricional e hematológica caracterizando a desnutrição. As células mesenquimais foram isoladas da medula óssea (MO) e caracterizadas imunofenotipicamente por citometria de fluxo mostrando populações de células em ambos os grupos com marcação positiva para CD90, CD271, Sca1, CD49e, CD13, baixa marcação para CD34 e negativa para CD14, CD45. Na quantificação de fatores de transcrição por Western Blot verificou-se que células mesenquimais medulares de animais desnutridos apresentaram maior expressão de PPARγ e RUNX2, fato este que pode ser explicado, em parte, pelo remodelamento microambiental observado nesses animais. Sobrenadantes de células mesenquimais de animais desnutridos quantificados por Elisa apresentaram uma maior concentração de SCF e uma redução na concentração de G-CSF e GM-CSF. As alterações encontradas nos permitem concluir que a desnutrição compromete as células mesenquimais tanto no aspecto regulatório de fatores de transcrição, bem como na capacidade de produção de citocinas, contribuindo para o comprometimento do microambiente hematopoético e induzindo a falência medular comumente observada em situações de desnutrição protéica. / Data from literature and our group showed that protein malnutrition compromises lympho-hematopoietic organs and modifies the immune response. Knowing that malnourished animals show severe hypoplasia of hematopoietic organs and the bone marrow microenvironment has distinct modulators that act synergistically to influence survival, proliferation and development of hematopoietic cells in all levels of differentiation, we evaluated in a model of protein malnutrition, some aspects of the complex regulation of bone marrow microenvironment evaluating the expression of transcription factors involved in the differentiation of Mesenchymal Stem Cells, and the production capacity of cytokines which are important in the regulation of the hematopoiesis. BALB/c mice, males, adults adapted in metabolic cages were separated in two groups: control and malnourished groups receiving, respectively, normal protein diet (12% protein) and low protein (2% protein). After the malnourished group lost about 20% of initial weight, the animals were sacrificed and evaluated the nutrition status, as well as hematological parameters. Mesenchymal Stem Cells were isolated from bone marrow and immunophenotypically characterized by flow cytometry showing cells populations in both groups stained positive for CD90, CD271, Sca1, CD49e, CD13, low marking for CD34 and negative for CD14, CD45. In the measurement of transcription factors by Western Blot found that Mesenchymal Cells of bone marrow malnourished animals showed higher expression of RUNX2 and PPARγ. This fact can be explained, in part, by microenvironmental remodeling observed in these animals. Mesenchymal stem cells supernatants of malnourished mice quantified by Elisa presented a higher concentration of SCF and a reduced concentration of G-CSF and GM-CSF. The alterations found in malnourished animals allow us to conclude that malnutrition commits Mesenchymal Stem Cells on the expression of transcription factors involved in the regulatory aspects of the differentiation process, as well as at the capacity of cytokine production, contributing to an impaired hematopoietic microenvironment and inducing the bone marrow failure commonly observed in protein malnutrition states.

Altas concentrações de ácidos graxos saturados desencadeiam resistência à insulina no músculo esquelético e o estresse de retículo endoplasmático (RE) é sugerido neste processo. Este estudo objetivou investigar, em células musculares L6, os efeitos do tratamento com palmitato sobre o estresse de RE e a ativação do NF-kB, relacionando-os com o prejuízo na expressão do GLUT4. Pelos resultados, observou-se que o tratamento com 0,75 mM de palmitato induziu redução no conteúdo de GLUT4 e Slc2a4. Os marcadores de estresse como GRP78, PERK/EIF2a e IRE1a/XBP-1/TRAF2 apresentaram pouca ativação. O fator transcricional NF-kB apresentou-se aumentado em seu conteúdo proteico e RNAm. A atividade de ligação do NF-kB à região promotora do Slc2a4 mostrou aumento independente do grau de fosforilação de IKK. Em suma, observou-se que o palmitato reprime a expressão do Slc2a4 e que induz pouco estresse de RE em células L6. Por outro lado, a participação do NF-kB parece ser importante no controle deste fenômeno reduzindo a expressão do Slc2a4 e prejudicando a homeostasia da glicose. / High concentrations of saturated fatty acids trigger insulin resistance in skeletal muscle and endoplasmic reticulum stress (ER) is suggested in this process. This study aimed to investigate, in L6 muscle cells, the effects of palmitate treatment on ER stress pathways and activation of NF-kB, relating them to the impaired expression of GLUT4. The results showed that treatment with 0.75 mM of palmitate induced reduction in the amount of GLUT4 and Slc2a4. Stress markers such as GRP78, PERK/EIF2a and IRE1a/XBP-1/TRAF2 showed little activation. The transcription factor NF-kB were increased in protein content and mRNA. The binding activity of NF-kB to the promoter region of Slc2a4 showed increased independent from the phosphorylation of IKK. Finally, it was observed that palmitate represses the expression of Slc2a4 and that this fatty acid induces little activation of reticulum stress pathways in L6 cells. On the other hand, the involvement of NF-kB appears to be important to control this phenomenon, reducing the expression of Slc2a4 and impairing glucose homeostasis.

As mutações no gene PROP1 são a causa genética mais comum da deficiência combinada de hormônios hipofisários. Até o momento, diversas mutações missense e pequenas deleções foram descritas sendo a mutação 301-302 delAG a mais freqüente. Nosso objetivo foi estudar as mutações em DNA de pacientes com hipopituitarismo e padronizar a extração de DNA de células de swab oral, usando um método com NaCl e comparar com um kit comercial (Purigene, Minneapolis, EUA). Amplificamos os 3 exons do gene PROP1 do DNA obtido de células orais e de sangue periférico. Identificamos a mutação 301-302delAG em 6 pacientes, 4 em homozigose (33%) e 2 em heterozigose (16%) e a mutação G51A em heterozigose em um único paciente. Em dois irmãos, filhos de pais consangüíneos, não foi possível amplificar os 3 exons do gene PROP1 enquanto que os os genes LHX3 e LHX4 foram amplificados com sucesso. Para confirmar a hipótese de deleção do PROP1, o Southern blotting foi realizado usando como sonda o produto de PCR do exon 2 do gene PROP1 e um fragmento do gene CYP21A2 como sonda controle. A banda referente ao CYP21A2 estava presente nos pacientes e nos controles enquanto a banda referente ao PROP1 estava ausente nos irmãos e presente na mãe e nos controles. Para definir a extensão da deleção usamos um mapa de STS próximos ao gene e o STS GDB:314805 localizado a 6,0 kb a montante do PROP1 não foi amplificado nos pacientes. Entretanto, o gene Q8N6H0 a 18 kb a juzante e o STS WI-16216 a 59 kb a montante do PROP1 foram amplificados com sucesso nos pacientes e controles indicando que a deleção está localizada dentro de 81 Kb. Para determinar os limites da deleção, várias reações de PCR foram realizadas com primers desenhados progressivamente distantes de gene PROP1, cobrindo toda a região. Isto nos permitiu determinar a região deletada de 9,6 kb a juzante e 11 kb a montante do gene PROP1, com o tamanho máximo deletado de 18,4 kb. Por ambos os métodos de extração obtivemos um DNA de boa qualidade, permitindo o amplificação dos 3 exons do gene PROP1. A extração com NaCl foi mais rápida e mais barata resultando em maior quantidade de DNA quando comparada com o kit comercial. Em conclusão, descrevemos a deleção completa do gene PROP1 em dois irmãos com o fenótipo clássico de hipopituitarismo associado à hipófise hipoplásica ou aumentada e padronizamos a extração de DNA de células de mucosa oral com NaCl, que apresentou custo mais baixo e resultado mais rápido quando comparado a extração por um kit comercial, indicando que o swab oral é uma fonte prática de obtenção de DNA para estudos genéticos. / PROP1 gene mutations are the most common cause of genetic combined pituitary hormone deficiency. To date, several missense mutations and small deletions have been described and the 301-302 del AG is the most frequent. Our objective was to study PROP1 mutations in patients with hypopituitarism and standardize DNA extraction from an oral swab, using the NaCl method, comparing it with a commercial kit (Purigene, Minneapolis, USA). We amplified the 3 exons of PROP1 gene in DNA obtained from oral cells and peripheral blood cells. We identified the delAG301-302 mutation in 6 patients, 4 in homozygous (33%) and 2 in heterozygous (16%) state and G51A mutation in heterozygous state in a single patient. In two siblings, a boy and a girl, born to consanguineous parents we failed to amplify PROP1 gene by PCR whereas LHX3 and LHX4 genes were successfully amplified. To confirm the hypothesis of PROP1 gene deletion, Southern blotting was performed using PROP1 exon 2 gene PCR product as a probe and a fragment of CYP21A2 gene as a control probe. The CYP21A2 band was present in patients and controls whereas PROP1 band was absent in both siblings and present in their mother and in controls. To define the extension of this deletion we used STS mapping approach and no amplification for a STS GDB:314805 6.0 kb downstream of PROP1 was found. However, Q8N6H0 gene located 18 kb upstream and the STS WI-16216 located 59 kb downstream of PROP1 were successfully amplified indicating that the deletion is placed within 81 Kb. To determine the limits of the deletion a number of PCR covering this region were then carried out with primers located progressively distant from PROP1. This allowed us determine the deleted region from 9.6 kb upstream to 11 kb downstream of PROP with a maximum deletion size of 18.4 kb. Both methods yielded good quality DNA, allowing the amplification of 3 exons of PROP1 gene. The NaCl method showed to be faster and less expensive, resulting in a larger amount of DNA when compared with the commercial kit. In conclusion, we describe a complete deletion of PROP1 gene in two siblings with classical hypopituitarism phenotype associated with hypoplastic or enlarged pituitary gland and standardized the DNA extraction of oral cells with NaCl, which presented lower costs and faster results, when compared with the extraction by a commercial kit indicating that oral swabs are a reliable DNA source for genetic studies.

Esta dissertação apresenta uma edição anotada de um livro inédito de contos de Valdomiro Silveira, Mucufos. A introdução situa historicamente esse livro, expõe as visões críticas a respeito do conjunto da obra do escritor, que envolvem aspectos sociais, humanos, estéticos e lingüísticos. Descreve o conjunto de contos de Mucufos encontrados em duas pastas denominadas Mucufos e Originaes manuscriptos de Papae (preciosíssimos), no Arquivo Valdomiro Silveira, no IEB/ USP, e explicita os critérios adotados na edição. Tal edição tem por finalidade estabelecer, a partir do confronto entre o apógrafo de CLSD (Carmen Lydia de Souza Dias), os autógrafos, os datiloscritos e os impressos encontrados nas pastas e no Arquivo do Estado, uma edição fidedigna. Para tanto, além do confronto referido, foi escolhida a transcrição crítica dos contos, procurando preservar os arcaísmos e os regionalismos presentes neles. A partir da transcrição, foram estabelecidos dois tipos de notas de rodapé. O primeiro, denominado de Nota CLSD, indica jornais de época em que foi publicada a maior parte dos contos, local e data de publicação, assim como local e data da escritura dos contos. O segundo, denominado Nota da edição, indica a pasta onde foi encontrado o conto e explica algumas palavras de cunho regional. Nas análises dos contos, buscou-se problematizar o teor de realismo, com a contribuição da categoria do realismo, segundo Georg Lukács; também foram analisadas as características estéticas, o grau de descrição de elementos da natureza e os principais temas e motivos. Entre estes últimos, destaca-se a violência e seu tratamento estético. Das análises, depreende-se a visão de Brasil por parte do escritor. A presente dissertação, pelo que foi exposto, busca resgatar uma parte do legado artístico de um escritor que muito se preocupou em humanizar um sujeito até então marginalizado em nossa literatura, o caipira, e discutir as principais questões estéticas e ideológicas surgidas nas análises dos 24 contos que constituem a edição. / This dissertation focuses on the annotated edition of an unpublished book of short stories, Mucufos, by Valdomiro Silveira. The introduction situates this book in a historical context, explaining critical views on the collected works of the writer, involving social, human, esthetical and linguistic aspects. It describes the short story collection of Mucufos found in two files named Mucufos and Originaes manuscriptos de Papae (especially valuable) in the Valdomiro Silveira Archive (IEB/ USP), and explains the criteria adopted for the edition. The aim of this edition was to establish an authentic edition emanating from a comparison between a reproduction by CLSD (Carmen Lydia de Souza Dias), autographs, typewritten sheets and printed papers found in the files and in the Office of Public Records. Apart from this comparison, a critical transcript of the short stories was chosen, in an attempt to preserve archaisms and regionalisms in these stories. Two types of footnotes were established from the transcript. The first note, named CLSD Note, indicates newspapers of the time period when most of the short stories were published, with publication date and location, as well as location and date when the stories were written. The second note, named Edition Note, indicates the file where the story was found, explaining some words of regional character. In an analysis of the short stories, there was an attempt to put in doubt the tenor of realism, with contribution from the category of realism, according to Georg Lukács; esthetical features, description of the elements, and main topics and motives were also analyzed. In the latter, violence and its esthetical treatment are highlighted. The writer\'s view of Brazil can be inferred from the analyses. Therefore, the current dissertation seeks to salvage part of the artistic legacy of a writer who was very concerned with humanizing an individual who had been marginalized in our literature until then, i.e. the hillbilly, and discuss the main esthetical and ideological issues that appear in the analyses of the 24 short stories of the edition.

O presente estudo teve como objetivo demonstrar a relevância da reestruturação técnica de uma obra, ou seja, uma reelaboração musical às particularidades de novos meios, focando o clarinete baixo como instrumento central, desencadeando um futuro aprimoramento e adequação aos novos recursos do instrumento e à sua linguagem. Além deste, o trabalho teve como finalidade apontar a proposição de um experimento deste instrumento a um repertório original não idiomático. Para tanto, o procedimento metodológico utilizado observou como referências as reelaborações já realizadas e compreendeu as maneiras com que foram concebidas. O trabalho contribuiu com o desenvolvimento teórico e prático da pesquisa em reelaborações para clarinete baixo, desta forma, favorecendo a disposição de um novo vetor experimental, baseado nas reelaborações feitas. Assim, conclui-se que esta pesquisa, diferentemente do rigor e fidelidade a qual geralmente a reelaboração é aplicada, enfatizou o processo como ferramenta criativa e dialógica. / The present study aimed to demonstrate the relevance of the technical restructuring of a work, that is, a musical reelaboration to the particularities of new media, focusing on the bass clarinet as a central instrument, triggering a future improvement and adaptation to the new resources of the instrument and its language. Besides this, the purpose of the work was to point out the proposition of an experiment of this instrument to an original non-idiomatic repertoire. In order to do so, the methodological procedure used observed references as reworkings already performed and understood the ways in which one was carried out. The work contributed to the theoretical and practical development of the research in reelaborations for bass clarinet, in this way, favoring the arrangement of a new experimental vector, based on the reelaborations made. Thus, it is concluded that this research, in contrast to the rigor and fidelity to which the reelaboration is usually applied, emphasized the process as a creative and dialogical tool.