Este estudo objetivou investigar a distribuição e a relação entre os genes envolvidos com a virulência e formação de biofilme em 196 Enterococcus faecalis isolados de alimentos, clínicos e suabes cloacais de frangos de corte que receberam oocistos de Eimeria maxima e Eimeria acervulina e ração suplementada ou não com anticoccidiano. No primeiro experimento foi investigada a frequência dos genes agg, ace, tet(M), tet(L) e do operon bopABCD; e foi analisada a produção da enzima gelatinase em duas temperaturas de crescimento (36°C e 42°C). Assim como a capacidade de formar biofilme em meio de cultura suplementado com 10% de sangue, 10% de urina ou 0,75% de glicose por 70 Enterococcus faecalis isolados de frangos. Os Enterococcus faecalis isolados de frangos de corte que receberam oocistos de Eimeria maxima e Eimeria acervulina e ração suplementada ou não com anticoccidiano apresentaram capacidade de se adaptar a diferentes nichos biológicos, como por exemplo, sangue e urina. Foi observado um alto percentual dos genes dos fatores de virulência. No segundo experimento, foi avaliada a diversidade filogenética, com base no método de PCR, de 182 cepas isoladas de humanos, frangos de corte e alimentos. Estas cepas formaram quatro grupos filogenéticos (A, B, C e D) e quatro subgrupos (A1, A2, B1 e B2) com índice de similaridade entre 65 a 100%, demonstrando a adaptação de Enterococcus faecalis a diferentes ambientes. No terceiro experimento, foi determinada a capacidade de formação de biofilme de isolados clínicos e alimentares em diferentes meios de cultivo. Observou-se que o meio suplementado com 0,75% de glicose demonstrou ser o mais adequado para estabelecimento de forte aderência e, consequente formação do biofilme microbiano nos isolados de todas as origens. Em contrapartida, o meio suplementado com 10% de sangue foi o que registrou as maiores taxas de fraca formação de biofilme. Os estudos conduzidos demonstram características fenotípicas e genotípicas de Enterococcus faecalis que sugerem uma ampla adaptação ambiental entre os isolados pesquisados. / This study aimed to investigate the distribution and the relationship between genes involved in virulence and biofilm formation in 196 Enterococcus faecalis isolates from food, clinical and cloacal swabs of broilers that received oocysts of Eimeria maxima and Eimeria acervulina and diet supplemented or not with anticoccidial. The first experiment investigated the frequency of agg, ace, tet(M), tet(L) genes and bopABCD operon; production of gelatinase enzyme was analyzed at two growth temperatures (36°C and 42°C). Thus the ability to form biofilm in culture medium supplemented with 10% of blood, 10% of urine and glucose 0.75% for 70 Enterococcus faecalis isolates of chicken. The Enterococcus faecalis isolates from broilers that received oocysts of Eimeria maxima and Eimeria acervulina and supplemented or not with anticoccidial showed the ability to adapt to different biological niches, such as blood and urine. A high percentage of genes of virulence factors were observed. In the second experiment, we evaluated the phylogenetic diversity based on PCR method of 182 strains isolated from humans, broilers and food. These strains formed four phylogenetic groups (A, B, C and D) and four subgroups (A1, A2, B1 and B2) with similarity index between 65 and 100%, demonstrating the adaptation of Enterococcus faecalis to different environments. In the third experiment, the ability of biofilm formation of clinical and food isolates in different culture media was determined. It was observed that the medium supplemented with 0.75% glucose was shown to be more suitable for the establishment of strong adhesion and subsequent formation of the biofilm isolates from all sources. In other hand, medium supplemented with 10% blood was reported that the highest rates of weak biofilm formation. Studies conducted show phenotypic and genotypic characteristics of Enterococcus faecalis that suggest a broad environmental adaptation among the isolates studied.

Submitted by Lucelia Lucena (lucelia.lucena@ufpe.br) on 2015-03-13T19:07:33Z No. of bitstreams: 2 dissertaçaofinalAndréa- COMPLETA.pdf: 1298422 bytes, checksum: 5c25bfcc0731b18f44f5b7703e5e752c (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-13T19:07:33Z (GMT). No. of bitstreams: 2 dissertaçaofinalAndréa- COMPLETA.pdf: 1298422 bytes, checksum: 5c25bfcc0731b18f44f5b7703e5e752c (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2012 / Introdução: Staphylococcus aureus resistente a meticilina (MRSA) são atualmente um grave problema de saúde pública. Este micro-organismo além de produzir diversos fatores de virulência tornando-o altamente patogênico, é resistente à quase todos os antimicrobianos utilizados na clínica médica, restando poucas alternativas terapêuticas. Diante deste fato, torna-se urgente a busca por novos agentes antimicrobianos e nesta perspectiva, os compostos de origem vegetal têm sido alvo de várias pesquisas em todo o mundo. Objetivos: Avaliar a atividade antimicrobiana da β-lapachona e sua ação inibitória sobre a biossíntese de catalase, hemolisinas e biofilme por 12 cepas MRSA. Métodos: A concentração inibitória mínima (CIM) da β-lapachona foi determinada frente às cepas MRSA através da técnica de microdiluição em caldo. A biossíntese de catalase foi avaliada semi-quantitativamente através do teste em tubo, colocando em contato o inóculo bacteriano exposto ou não exposto à β-lapachona com o peróxido de hidrogênio a 3% e em seguida foi realizada a aferição da altura da efervescência gerada pela liberação de oxigênio gasoso. Para determinação das hemolisinas extracelulares, foi realizado um teste utilizando hemácias de carneiro para avaliação da atividade hemolítica do sobrenadante das culturas expostas ou não expostas à β-lapachona. A formação de biofilme foi determinada em placas de microtitulação de poliestireno utilizando cristal violeta para coloração do biofilme formado e procedendo-se à leitura espectofotométrica da densidade óptica no comprimento de onda de 595nm. Resultados: A CIM de β-lapachona para as cepas MRSA avaliadas variou de 8μg/mL a 32μg/mL. A biossíntese dos fatores de virulência avaliados foi reduzida significativamente em todas as cepas MRSA. Conclusão: a β-lapachona possui atividade antiestafilocócica e que foi capaz de reduzir a biossíntese de fatores de virulência nas cepas MRSA avaliadas. Assim este composto pode ser incluído no arsenal de substâncias naturais bioativas com potencial de serem utilizadas como alternativa na terapêutica antimicrobiana contra MRSA após estudos de compatibilidade in vivo e toxicidade. Pode servir também como protótipo para produção de novas moléculas mais ativas e menos tóxicas.

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2016-07-28T13:08:05Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Tese_EDUARDA_versãoFinalDigital.pdf: 2657877 bytes, checksum: 2ce4a0aa738737b2947e45ed5fb9e912 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-28T13:08:05Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Tese_EDUARDA_versãoFinalDigital.pdf: 2657877 bytes, checksum: 2ce4a0aa738737b2947e45ed5fb9e912 (MD5) Previous issue date: 2016-02-29 / FACEPE / Devido à crescente resistência de isolados clínicos de Staphylococcus spp. a antimicrobianos e a consequente diminuição de opções terapêuticas eficazes, este estudo investigou a influência in vitro de sub-Concentrações Inibitórias Mínimas (sub-CIM) de oxacilina e tigeciclina, isoladamente e em combinação, no crescimento bacteriano e na expressão dos genes mecA, ica e tst em isolados clínicos de Staphylococcus spp.Para realização da primeira etapa deste estudo 45 isolados,identificados quanto a espécie de Staphylococcus spp. e susceptibilidade pelo Vitek2, foram obtidos de dois hospitais públicos de Recife-PE e avaliados pelas técnicas de MALDI-TOF MS e sequenciamento do rDNA 16S para confirmação das espécies bacterianas. A relação clonal dos isolados de Staphylococcus spp. foi determinada pela análise da Região Intergênica 16S-23S para posterior determinação do tipo de SCCmec e do perfil de virulência. O MALDI-TOF MS e sequenciamento do 16S se mostraram mais concordantes na identificação das espécies bacterianas quando comparadas ao Vitek2, sendo identificados isolados de Staphylococcus aureus, S. epidermidis, S.hominis, S. haemolyticus e S. saprophyticus. Trinta e um ribotipos foram determinados, demonstrando grande variabilidade genética. Os ribotipos foram encontrados dispersos nos diferentes setores dos dois hospitais investigados. A maioria dos isolados apresentaram SCCmec tipo IV (51%), seguido pelo tipo III (26%), tipo II (16%) e tipo V (7%). Foi possível encontrar nove perfis de virulência, onde o gene luk foi observado em 80% dos isolados, seguido de 51% para o gene ica, 35,5% para o hlg e 33,3% para o tstratificando a crescente evidência da presença de isolados tradicionalmente comunitários no ambiente hospitalar. Na segunda fase do estudo quatro isolados clínicos com diferentes tipos de SCCmece baixa relação clonal foram analisados in vitro para a determinação da CIM frente a oxacilina e tigeciclina. A influência in vitro destes antimicrobianos no crescimento bacteriano foi avaliada isoladamente e em associação, assim como a expressão dos genes mecA, ica e tst por RT-qPCR. O ensaioin vitro dos diferentes isolados de Staphylococcus spp. frente a tigeciclina associada à oxacilina resultou em inibição de crescimento bacteriano maior em relação a utilização isolada dos antimicrobianos, além de não influenciar ou diminuir a expressão de todos os genes analisados, dando suporte à ideia de que o uso associado da tigeciclina e oxacilina no tratamento de infecções por isolados MRS portadores dos genes tst e ica possivelmente poderiam promover benefícios na modulação destes genes. / Due to the increasing resistance of clinical isolates of Staphylococcus spp. to antimicrobial and the consequent decrease of effective therapeutic options, this study determined the in vitro influence of sub-minimum inhibitory concentrations (sub-MIC) of oxacillin and tigecycline, alone and in combination, on bacterial growth and expression ofvirulence genes in clinical isolates of Staphylococcus spp. To perform the first stage of this study 45 isolates of Staphylococcus sppwere obtained from two public hospitals of Recife-PE and evaluated by MALDI-TOF MS techniques and 16S sequencing for confirmation of bacterial species. The clonal profile Staphylococcus spp. isolates was determined by PCR-Ribotyping for subsequent determination of the type of SCCmec and virulence profile. The MALDI-TOF MS and sequencing of 16S were more effective in the identification of bacterial species when compared to Vitek2, being identified Staphylococcus aureus, S. epidermidis, S.hominis, S. haemolyticus e S. saprophyticus.Thirty-one ribotypes could be determined among the strains tested, with most harboring the SCCmec type IV (51%), followed by type III (26%), type II (16%) and type V (7%).%). 80% of the isolates presented the luk gene, 51% icaAD, 35.5% hlg and 33.3% tst. These results demonstrate a wide variability and dispersion of the isolates analysed, in different sectors of the hospitals confirming the growing evidence of the presence of traditionally community isolates in the hospital environment. In the second phase of the study, four clinical isolates were selected according to different types of SCCmec were analyzed in vitro to determine the MIC front oxacillin and tigecycline. The antimicrobial effect in vitro tests on bacterial growth was evaluated separately and in combination, as well as the expression of the mecA, ica and tst genes by RT-qPCR. Subjecting the different Staphylococcus spp. isolates in vitro to tigecycline in association with oxacillin resulted in inhibition of bacterial growth that was more potent than subjecting them to the antimicrobials separately, and this also did not influence or decrease the expression of any of the genes analyzed. The present study supports the idea that the associated use of tigecycline and oxacillin for treating infections caused by methicillin-resistant Staphylococcus that is positive for tst and ica could promote possible benefits in modulating these genes.

Made available in DSpace on 2014-06-12T18:28:52Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo1139_1.pdf: 1823767 bytes, checksum: 3c97dca6c1335d6168c89fcfde1d6c4c (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2011 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Pseudomonas aeruginosa é um patógeno oportunista frequentemente associado a infecções nosocomiais e resistência a diversos antimicrobianos. O surgimento de mecanismos de resistência aos carbapenêmicos, como a produção das enzimas carbapenemases MBL (metalo-β- lactamase) e KPC (Klebsiella pneumoniae carbapenemase), tem se destacado devido ao amplo espectro de degradação de antibióticos, levando à redução das opções terapêuticas. Este trabalho teve por objetivo caracterizar fenotipicamente e genotipicamente isolados nosocomiais de P. aeruginosa procedentes de cinco hospitais públicos do Recife coletados no período de 2006 a 2010. Características fenotípicas como morfologia da colônia, produção de pigmento, gelatinase e hemolisina, assim como o perfil de susceptibilidade a antimicrobianos foram avaliados pelo crescimento em meios específicos e pelo método de disco difusão padronizado pelo CLSI (2008), respectivamente. Os isolados resistentes aos carbapenêmicos foram submetidos à pesquisa de genes blaKPC, e os resistentes a ceftazidima (CAZ) e/ou imipenem (IPM) foram investigados quanto à produção de MBL utilizando o método de disco aproximação com o ácido 2-mercaptopropiônico (2-MPA), seguido pela pesquisa de genes blaSPM-1, blaIMP, blaVIM dentre os isolados MBL positivos no teste fenotípico. A investigação da relação clonal das amostras de P. aeruginosa foi realizada utilizando o método de sequências consenso intergênicas repetitivas de enterobactérias (ERIC PCR). Durante o período da pesquisa foram obtidos 61 isolados de P. aeruginosa, dos quais 36,96% eram mucoides; 69,81% eram produtores de piocianina; 92,86% eram gelatinase positivos e 71,70% hemolisina positivo. A sensibilidade aos antimicrobianos variou entre 44,26% e 81,97%, para o aztreonam e polimixina B, respectivamente. Observou-se também que 4,92% dos isolados eram panresistentes e 54,09% multirresistentes, dos quais 34,14% eram sensíveis apenas a polimixina B. Dentre os 26 isolados resistentes aos carbapenêmicos, 7,65% foram positivos para o gene blaKPC, enquanto que dentre os 29 isolados resistentes ao IPM e/ou CAZ, 44,83% foram positivos para pesquisa de MBL, e destes, 46,15% foram positivos para o gene blaSPM-1, não havendo detecção dos genes blaIMP e blaVIM. A tipagem molecular dos isolados revelou 21 perfis genéticos distintos. Os isolados KPC positivos pertenciam a um mesmo clone e dos isolados SPM-1 positivos, três apresentaram o mesmo perfil clonal e eram procedentes do mesmo hospital, enquanto os outros três isolados SPM-1 positivos apresentaram perfis clonais distintos. A capacidade de produção de MBL por P. aeruginosa tem sido detectada com elevada prevalência em hospitais da cidade do Recife nos últimos anos, porém a detecção de P. aeruginosa KPC positivas ainda é rara em todo o um mundo, sendo esse o primeiro relato no Brasil

ARAÚJO, Rayza Lima. Quantificação de bactérias entéricas em sítios anatômicos e líquido intervalvar de ostras (Crassostrea rhizophorae) e caracterização de isolados de Escherichia coli. 2013. 72 f. : Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Ceará, Centro de Ciências Agrárias, Departamento de Engenharia de Pesca, Fortaleza-CE, 2013 / Submitted by Nádja Goes (nmoraissoares@gmail.com) on 2016-07-21T12:44:56Z No. of bitstreams: 1 2013_dis_rlaraújo.pdf: 1057950 bytes, checksum: 1d6c5772a5e213e790c01a58e0b1adca (MD5) / Approved for entry into archive by Nádja Goes (nmoraissoares@gmail.com) on 2016-07-21T12:45:12Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_dis_rlaraújo.pdf: 1057950 bytes, checksum: 1d6c5772a5e213e790c01a58e0b1adca (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-21T12:45:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_dis_rlaraújo.pdf: 1057950 bytes, checksum: 1d6c5772a5e213e790c01a58e0b1adca (MD5) Previous issue date: 2013 / Fecal coliforms have been described as one of the best indicators of pollution in the aquatic environments by human wastes, and it is widely used as a parameter for classifying areas where oysters are farmed or extracted. Among Enterobacteriaceae members, E. coli stands out as potential pathogenic specie, representing risk for public healthy when associated with consumption of raw or undercooked bivalves. However, little is known about this colonization in the bivalve tissues and/or distribution of these enteric bacteria. The objective of the present study was to: (i) quantify fecal coliforms from body fluid and anatomical sites, separately; (ii) isolate and identify E. coli in oysters commercialized in natura in Praia do Futuro beach, Fortaleza-Ceará; (iii) evaluate the virulence profile and resistance to antimicrobial agents of E. coli isolates. The study covered ten samples, from February to April 2012, by analyzing twelve oysters for sample, divided into a body fluid (intervalvar liquor) and two anatomical sites (mantle and gastrointestinal tract). Fecal coliforms concentration was higher than allowed by legislation nº 12/2001 of ANVISA in three samples, and intervalvar liquor presented higher MPN in six samples. Out of 137 E. coli strains isolated, 19% was resistant to both tetracycline and oxytetracycline, and MAR ranged from 0,250 to 0,625. It is further noted producing expended spectrum beta lactamases strains, however none showed biofilm production. The major frequency resistance to oxytetracycline suggests a selective pressure to mangrove ecosystem microbiota that could be directly affected by farming shrimp activity, practiced in a region next to Parnaíba city, located in Piauí state, where oysters are extracted. In addition, the presence of multiple resistance can be a risk for in natura oyster consumers. / Os coliformes termotolerantes têm sido descritos como um dos melhores indicadores de contaminação de ambientes aquáticos por resíduos humanos, sendo amplamente utilizado como parâmetro para classificação de áreas onde se cultiva ou extrai ostras. Dentre os membros deste grupo, a Escherichia coli se destaca como uma espécie potencialmente patogênica, representando risco para a saúde pública quando associada ao consumo de moluscos bivalves crus ou parcialmente cozidos. Entretanto, pouco é sabido sobre a colonização nos tecidos desses moluscos e/ou distribuição dessas bactérias entéricas. O presente estudo teve como objetivos:(i) quantificar coliformes termotolerantes do fluido corporal e dos sítios anatômicos, separadamente;(ii) isolar e identificar E. coli de amostras de ostras comercializadas in natura na Praia do Futuro, Fortaleza-Ceará;(iii) avaliar o perfil de virulência e resistência a antimicrobianos dos isolados de E. coli. Foram realizadas dez coletas no período de fevereiro a abril de 2012, sendo analisadas dez ostras por coleta, divididas em um fluido corporal (líquido intervalvar) e dois sítios anatômicos (músculo e trato gastrointestinal). Os resultados apontaram três amostras com contagens de coliformes acima do limite estabelecido pela legislação nº 12 de 2001 da ANVISA, tendo o líquido intervalvar apresentado o NMP mais elevado em seis amostras. Das 137 cepas de E. coli isoladas, verificou-se maior incidência de resistência à tetraciclina e oxitetraciclina (19%), com variação do Índice de Múltipla Resistência (MAR) entre 0,250 e 0,625. Observou-se ainda a presença de cepas produtoras de enzimas beta-lactamases de espectro estendido, porém nenhuma das cepas testadas apresentou produção de biofilme. A elevada frequência de resistência à oxitetraciclina sugere uma pressão seletiva sobre a microbiota do ecossistema manguezal, que pode ser afetada diretamente pela atividade de carcinicultura, praticada na região próxima à cidade de Parnaíba, localizada no Estado do Piauí, de onde as ostras são extraídas. Além disso, a presença de múltipla resistência aos antimicrobianos observada pode ser indicativa de risco para os consumidores de ostra in natura.

Submitted by Alexandre Sousa (alexandre.sousa@incqs.fiocruz.br) on 2014-11-13T16:54:59Z No. of bitstreams: 1 Mestrado_Liliane.pdf: 3975589 bytes, checksum: b28cad812013dd5908acfaa1941f39a0 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-11-13T16:54:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mestrado_Liliane.pdf: 3975589 bytes, checksum: b28cad812013dd5908acfaa1941f39a0 (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde. Programa de Pós-Graduação em Vigilância Sanitária. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. / Corynebacterium ulcerans têm sido cada vez mais responsáveis por quadros de difteria zoonótica, além de outras infecções de humanos e de animais de companhia, incluindo cães. Uma vez que animais de companhia assintomáticos são capazes de transmitir o patógeno para os humanos em áreas urbanas e que escassas são as investigações sobre o potencial de virulência e o relato de casos dessas zoonoses em países em desenvolvimento, nesse sentido o presente estudo teve como objetivo o isolamento, caracterização e avaliação do potencial de virulência de amostras de C. ulcerans oriundas de animais domésticos domiciliados na área metropolitana do Rio de Janeiro. Os dados indicaram a presença de C. ulcerans em diferentes municípios. Além de humanos e de animais de abrigo, foram isoladas amostras não produtoras de toxina diftérica de cães assintomáticos domiciliados. As amostras isoladas (BR-AD41 e BR-AD61) apresentaram moderada sensibilidade a penicilina G e resistência a clindamicina. Os sistemas de fenotipagem Api-Coryne e Vitek 2 não permitiram a correta identificação de C. ulcerans em algumas oportunidades. Os microrganismos foram inicialmente caracterizados quanto à espécie e a presença do gene tox pela técnica de PCR multiplex. A confirmação do diagnóstico foi feita pelo sequenciamento dos genes 16S rRNA e rpoB. A relação genética entre amostras isoladas de humanos e cães assintomáticos no Rio de Janeiro (Brasil) foram analisadas pela técnica de eletroforese de campo pulsado (PFGE). Dentre os cinco pulsotipos demonstrados, os perfis IV e V exibindo ≥85% de similaridade foram expressos pelas amostras BR-AD41 e BR-AD61 de cães residentes em um mesmo município. A heterogeneidade dos pulsotipos indicaram endemicidade de C. ulcerans no Rio de Janeiro. Independente da capacidade de produção de toxina diftérica, o potencial de virulência para humanos de amostras de C. ulcerans foi evidenciado pela habilidade de produzir biofilme em superfícies abióticas inclusive catéteres de poliuretano e a presença de gene rpb que codifica a toxina Shiga-like. C. ulcerans mostrou capacidade de aderir, invadir e sobreviver no interior de células epiteliais humanas em níveis variados, independente da presença de TD. Adicionalmente, a afinidade de C. ulcerans ao fibrinogênio (Fbg), fibronectina (Fn) e colágeno tipo I de humanos e a capacidade de causar rede de fibrina e lesões cutâneas em murinos foram também demonstradas. Concluindo, potencial patogênico de natureza multifatorial foi demonstrado para amostras de C. ulcerans que também podem ser encontradas colonizando a população de cães domiciliados e portanto em contato estreito com o homem na região metropolitana do Rio de Janeiro. / Corynebacterium ulcerans have been increasingly responsible for zoonotic diphtheria and other infections in humans and companion animals, including dogs. Since asymptomatic pets are able to transmit the pathogen to humans in urban areas and there are few investigations about virulence factors and case reports of this emerging zoonosis in development countries, this study aimed the isolation, identification and detection of candidate virulence factors of C. ulcerans isolates from domestic animals living in the metropolitan area of Rio de Janeiro. Data indicated the ocurrence of C. ulcerans in different cities. Besides humans and dog shelter, sample of non-toxigenic isolates were detected from asymptomatic companion dogs. The isolates (BR-AD41 e BR-AD61) showed moderate susceptibility to penicillin G and resistance to clindamycin. In some cases, a correct identification of C. ulcerans by the phenotypic assays API-Coryne and Vitek 2 was not conceivable. Species and toxigenicity of micro-organisms were initially characterized by a multiplex PCR assay. The diagnoses confirmation was made by 16S rRNA and rpoB genes sequencing. The genetic relationship between human and asymptomatic dogs isolates was analyzed by pulsed-fiel gel electrophoresis (PFGE) assay. Among the five types classified, the types IV and V exhibited similarity ≥85% and were expressed by BR-AD41 and BR-AD61 isolates of companion dogs living in the same neighborhood. Heterogeneity of PFGE types indicated endemicity of C. ulcerans in Rio de Janeiro metropolitan area. Despite the ability of diphtheria toxin (DT) production, the virulence potential of C. ulcerans to humans was demonstrated by biofilm formation over abiotic surfaces, including polyurethane catheter and by the presence of rpb gene coding Shiga-like. Moreover, C. ulcerans demonstrated the ability to adhere to and survive within human epithelial cells at various levels, despite DT production. C. ulcerans affinity to human fibrinogen (Fbg), fibronectin (Fn) and type I collagen and formation of fibrinous skin lesions in mice were also observed. In conclusion, a multifactorial nature of the pathogenic potential was also demonstrated for C. ulcerans colonizing companion dogs in close contact to humans in the Rio de Janeiro metropolitan area.

Orientador: José Paes de Almeida Nogueira Pinto / Banca: Márcio Garcia Ribeiro / Banca: Vera Lúcia Mores Rall / Resumo: A carne bovina pode ser um importante veículo de vários patógenos para os humanos, com destaque à Escherichia coli produtora de Shiga-toxina (STEC), associada com diarreia em animais e humanos. Neste estudo, investigou-se em bovinos abatidos no estado de São Paulo, a prevalência dos diferentes patótipos de E. coli diarreiogênica e o perfil de virulência dos isolados de STEC. De um total de 431 animais, STEC foi identificada em 116 (26,9%) amostras de fezes, das quais 111 (25,8%) STEC eae- e 5 (1,2%) STEC eae+. O patótipo EPEC foi detectado em 20 (4,6%) amostras de fezes dos animais testados. Os demais patótipos de E. coli diarreiogênica não foram identificados. Dos 95 isolados de STEC analisados quanto ao perfil de virulência, todos albergavam stx2, enquanto que 28 (29,5%) continham stx1. Os genes iha e saa, que codificam adesinas, foram encontrados em 93,7% (89/95) e 66,3% (63/95), respectivamente. O gene espP, que codifica uma protease que auxilia na colonização intestinal, foi detectado em 61,1% (58/95) e a hemolisina ehxA em 54,7% (52/95). Também foram identificados em menores frequências os genes subAB, nleE e nleB. STEC está amplamente disseminada nos rebanhos bovinos de São Paulo, carreando genes comumente isolados de patógenos humanos, o que reforça a importância da inspeção e fiscalização nos abatedouros / Abstract: Beef can be an important vehicle for various pathogens to humans, especially Shiga toxin-producing Escherichia coli (STEC), associated to human and animal diarrhea. In this study, the prevalence of different pathotypes of diarrheagenic E. coli, and virulence profiles of STEC were investigated among feces of cattle slaughtered in São Paulo state, southeast of Brazil. From a total of 431 animals, STEC was identified from 116 (26,9%) samples, being 111 (25,8%) STEC eae- and 5 (1,1%) STEC eae+. EPEC pathotype was detected among 20 (4,6%) of animals. The other pathotypes of diarrheagenic E. coli were not identified. Of the 95 STEC isolates assessed for virulence profile, all harbored stx2, while 28 (29,5%) contained stx1. Iha and saa, genes encoding adhesins, were found at 93,7% (89/95) and 66,3% (63/95), respectively. EspP, gene which encoding a protease related with intestinal colonization, was detected in 61,1% (58/95) and ehxA hemolysin was present in 54,7% (52/95). SubAB, nleE and nleB genes were also detected in lower rates. STEC is widespread in cattle herds of São Paulo, containing commonly isolated genes from human pathogens, which reinforces the importance of inspection and surveillance in the slaughterhouses / Mestre

Orientador: Jesus Aparecido Ferro / Banca: Henrique Ferreira / Banca: Rafael Marini Ferreira / Banca: Fabricio José Jaciani / Banca; Helen Alves Penha / Resumo: Diante da importância do cancro cítrico para a citricultura mundial, a bactéria Xanthomonas citri subsp. citri, o agente causal da doença, tem sido amplamente estudada. Pesquisadores brasileiros realizaram o sequenciamento completo do genoma da X. citri subsp. citri isolado 306 (Xac306), com o intuito de elucidar os genes e mecanismos envolvidos na patogenicidade e/ou virulência da bactéria. As ORFs XAC2361 e XAC3898 possuem tamanhos e locais diferentes no genoma da Xac306, mas têm em comum o domínio Peptidase_M23, cujo processo biológico predito é de hidrolase de parede celular, mas a real função destas proteínas em Xac ainda é desconhecida. Este trabalho teve como objetivo avaliar, por meio da mutação sítio-dirigida, se as ORFs XAC2361 e XAC3898 estão relacionadas com a virulência e/ou patogenicidade de X. citri subsp. citri 306 e com o desenvolvimento do cancro cítrico. Para isso, foram realizados testes in vitro e in planta dos mutantes obtidos, visando observar alterações fenotípicas. Devido a presença de peptídeo sinal, a ORF XAC2361 foi fundida à proteína fluorescente mCherry (XAC2361-mCherry) para expressão in vivo e avaliação por microscopia de fluorescência. As análises fenotípicas demonstraram que o mutante ΔXAC2361 não apresentou alterações nos sintomas quando avaliado em limoeiro cravo (Citrus limonia Osbeck), porém apresentou menor capacidade de crescimento in vitro, menor motilidade swimming e swarming e menor capacidade de sobrevivência em SDS. Por outro lado,... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: In view of the importance of citrus canker in citrus culture worlwide, the bacterium Xanthomonas citri subsp. citri, the causal agent of this disease, has been extensively studied. Brazilian researchers performed the complete sequencing of the genome of X. citri subsp. citri isolate 306 (Xac306), in order to elucidate the genes and mechanisms involved in the pathogenicity and/or virulence of Xac. The ORFs XAC2361 and XAC3898 have different sizes and location in the genome, but have in common the M23 Peptidase domain, whose biological process is predicted to act as cell wall hydrolase, but the actual function of these proteins in Xac is still unknown. This work aimed to evaluate, through site-directed mutagenesis, whether XAC2361 and XAC3898 ORFs are related to the virulence and / or pathogenicity of Xac306 and the development of citrus canker. In order to observe phenotypic changes, in vitro and in planta tests of the mutants were carried out. Due to the presence of signal peptide, the ORF XAC2361 was fused to the mCherry fluorescent protein (XAC2361-mCherry) for in vivo expression and fluorescence microscopy evaluation. Phenotypic analyzes demonstrated that the ΔXAC2361 mutant showed no change in symptoms when evaluated in Mexican lime (Citrus limonia Osbeck), but presented lower in vitro growth capacity, lower swimming and swarming motility, and lower survival capacity in SDS. On the other hand, the ΔXAC3898 mutant showed a significant reduction in virulence, lower in plant... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Salmonella do grupo paratifóide é responsável por toxi-infecção alimentar no homem, veiculada por alimentos contaminados. Este estudo determinou o perfil genotípico de nove amostras de S. Typhimurium, a sua patogenicidade, assim como sua capacidade de colonização e invasão em aves SPF. Verificou-se pela análise dos genes: agfA, avrA, cdtB, fimA, fliC, invA, iroN, lpfC, mgtC, pefA, sefC, sifA, sipB, sipC, sitC, slyA, sopB, sopE1, sptP ou spvC em amostras de Salmonella Typhimurium que todas foram negativas para os genes sopE1 ou spvC. O gene cdtB estava presente em apenas uma amostra (11,11%) e o gene pefA em duas amostras (22,22%). O gene sefC foi encontrado em três amostras (33,33%). Em oito amostras (88,88%) os genes agfA, fimA, lpfC ou sptP estiveram presentes. Os genes avrA, fliC, invA, iroN, mgtC, sifA, sipB, sipC, sitC ou slyA ou sopB estiveram presentes em 100% das amostras analisadas. Determinou-se quatro perfis genotípicos. No ensaio de patogenicidade observou-se que as amostras inoculadas por via oral, não causaram mortalidade de pintinhos SPF de um dia de idade, com a exceção da amostra SA 633 e SA 006 que apresentaram 30 e 10%, respectivamente. No entanto, observou-se que a infecção por via subcutânea provocou uma maior mortalidade de pintinhos, sendo que as amostras SA 003, SA 004, SA 005 e a amostra vacinal mostraram somente 10% de mortalidade, a amostra SA 002 30%, as amostras SA 632 e SA 634 70% e a amostra SA 633 100%. A amostra SA 006 não provocou nenhuma mortalidade. A amostra mais patogênica pela via subcutânea foi a SA 633. O ensaio de colonização foi realizado em pintinhos SPF, com as amostras SA 002, SA 003, SA 004, SA 005, SA 006, SA 632, SA 633, SA 634 e amostra vacinal. Verificou-se ausência de invasão no fígado e baço 24 horas pós- infecção, exceto para as amostras SA 632 (30%) e amostra vacinal (20%). Após sete dias da infecção houve invasão em dois pintinhos com a amostra SA 002 e um pintinho com as amostras SA 004 e SA 005. Apenas na amostra SA 632 constatou-se colonização em ceco após 24 horas em 10% das amostras e após 7 dias em 70% pós-infecção. Concluiu-se que entre as amostras de Salmonella Typhimurium analisadas existiam diferentes perfis genotípicos baseando-se na presença ou ausência de genes de virulência, e que a amostra vacinal assemelha-se a amostras de S. Typhimurium estudadas quanto a presença dos genes. Os resultados do teste de patogenicidade das amostras de ST indicaram que a via de inoculação modifica a patogenicidade de uma mesma amostra e que a mortalidade após a inoculação pela via subcutânea é sempre superior que pela via oral. / Parathyphoid Salmonella are major food-borne pathogens spread by contaminated food products. This study determined the genotypic profile of nine samples of S. Typhimurium, pathogenicity, colonization and invasion in SPF chicks. It was found by analysis of genes: agfA, avrA, cdtB, fimA, fliC, invA, iroN, lpfC, mgtC, pefA, sefC, sifA, sipB, sipC, sitC, slyA, sopB, sopE1, sptP or spvC samples of S. Typhimurium all were negative to sopE1 or spvC. The cdtB gene was identified in one sample and pefA gene in two samples (22,22%). Sef C gene was detected in three samples (33,33%). In eight samples (88,88%) agfA, fimA, lpf or sptP were detected. AvrA, fliC, invA, iroN, mgtC, sifA, sipB, sipC, sitC, slyA and sopB were detected in all samples evaluated. Four genotypic profiles were established. Pathogenicity tests showed that samplesinoculated by oral gavage did not present mortality in one day old SPF chicks, except samples SA 633 and SA006 with 30 and 10%, respectively. However, it was observed that subcutaneous inoculation showed high mortality in SPF chicks than oral inoculation, and samples SA 003, SA004, SA005 and vaccinal strain showed 10% of mortality, 30% for sample SA002, 70% in the samples SA632 and SA 634 and 100% when the sample SA 633 was inoculated. No mortality was observed in sample SA006. Colonization test was performed in SPF chicks using the samples: SA002, SA 003, SA 004, SA005, SA006, SA 632, SA 633, SA 634 and vaccinal strain. The more pathogenic strain subcutaneously was the SA 633. There was not invasion in liver and spleen 24 hours p.i., except for sample SA 632 (30%) and vaccinal strain (20%). Seven days p.i. invasion was detected in two chicks inoculated with samples identified as SA 004 and SA 005. Sample SA 632 showed 10% of cecal colonization 24 hours p.i. and 70% after one week p.i. It was concluded that Salmonella Typhimurium strains including the vaccinal strain, showed different genotypical profiles, based on the presence or absence of genes of virulence genes. The results of the pathogenicity test indicated that inoculation route modify the pathogenicity of the same strain, and the mortality post-inoculation was always higher in chicks inoculated by subcutaneous route when compared to the oral route.

A proteína dispersina, codificada pelo gene aap, é um dos fatores de virulência de Escherichia coli enteroagregativa (EAEC). A detecção de aap tem sido utilizada juntamente com aggR e aatA no diagnóstico molecular de EAEC. Para verificar sua especificidade, esses genes foram pesquisados em 243 amostras de E. coli diarreiogênica (DEC). Todas as amostras foram negativas para os genes aggR e aatA, enquanto 26 amostras foram positivas para aap. Estas amostras haviam sido descritas como E. coli enteropatogênica atípica, entretanto essa classificação não foi confirmada, uma vez que elas não apresentaram o gene eae. Três amostras aderiram em células HEp-2 no padrão agregativo e foram classificadas como EAEC. O restante constituiu um grupo de amostras sem marcadores que caracterizam os patótipos de DEC. O seqüenciamento do gene aap de 6 amostras demonstrou alta homologia entre as seqüências obtidas e a seqüência da amostra protótipo de EAEC 042. Este estudo revelou que o gene aap não é exclusivo de EAEC. / The protein dispersin, encoded by aap, is one of the virulence factors of enteroaggregative Escherichia coli (EAEC). Detection of aap has been employed along with aggR and aatA in the molecular diagnosis of EAEC. In order to verify their specificity, these genes were searched in a collection of 243 diarrheagenic E. coli (DEC) strains. All of them were negative for aggR and aatA, whereas 26 were positive for aap. These strains have been described as atypical enteropathogenic E. coli. However, this classification was not confirmed since they did not harbor the eae gene. Three strains showed the aggregative adherence pattern to HEp-2 cells and were classified as EAEC. The remaining strains were part of a group that did not harbor any specific markers of DEC pathotypes. The DNA sequence analysis of 6 aap-harboring strains showed high homology between the sequence of these strains and the aap sequence of the EAEC prototype strain 042. This study revealed that aap is not exclusive of EAEC.