A relação entre as alterações estruturais cerebrais e a resposta ao tratamento da depressão em idosos continua a ser uma área intrigante de pesquisa. Neste estudo, foram investigadas diferenças quanto ao volume total e regionalizado de substância cinzenta e branca em exames de ressonância magnética (RM) de idosos com depressão (de acordo com os critérios do DSMIV-TR) e de controles. Além disso, para melhor compreender a fisiopatologia da depressão no idoso, o volume total das hiperintensidades em substância branca foi quantificado e comparado entre os grupos. A amostra foi composta por 30 idosos com depressão e 22 controles. Os idosos com depressão foram divididos em grupos de acordo com o uso prévio de antidepressivos, a resposta ao tratamento farmacológico, assim como de acordo com a idade de início da depressão. As imagens de RM foram processadas utilizando o programa Statistical Parametric Mapping e a morfometria baseada em voxel (DARTEL). A quantificação do volume total das hiperintensidades em substância branca foi realizada através de uma variação do método automático conhecido como Expectation Maximization Segmentation (EMS). Na análise do cérebro inteiro, encontramos uma redução volumétrica significativa no giro reto e no córtex orbitofrontal bilateralmente em pacientes em comparação com os controles.Além disso, os pacientes que não estavam em uso de antidepressivos no momento da aquisição da RM apresentaram uma redução volumétrica ainda maior no giro reto e no córtex orbitofrontal bilateralmente. Pacientes com uso prévio de antidepressivos mostraram uma redução volumétrica no giro reto e córtex orbitofrontal bilateralmente em comparação com os controles e pacientes sem uso prévio de antidepressivos apresentaram uma redução ainda maior no giro reto e no córtex orbitofrontal bilateralmente em comparação com os controles. De acordo com seu estado de remissão após o uso de um algoritmo de tratamento farmacológico da depressão em idosos, os pacientes foram classificados nos grupos remissão e não remissão. O grupo remissão apresentou uma redução volumétrica no giro reto e no córtex orbitofrontal bilateralmente e no pólo temporal médio direito, em comparação com o grupo controle. O grupo não remissão mostrou uma redução volumétrica ainda maior no giro reto e no córtex orbitofrontal bilateralmente em comparação com o grupo controle. Para investigar fatores preditores de remissão, foi utilizada uma regressão logística. A pontuação inicial do Mini Exame do Estado Mental e o volume corrigido (para o volume total de substância branca) inicial do córtex orbitofrontal superior lateral esquerdo classificaram os pacientes de acordo com a resposta ao tratamento farmacológico. As mesmas análises estatísticas foram realizadas em relação ao volume de substância branca. Pacientes sem uso prévio de antidepressivos mostraram uma redução volumétrica no giro frontal superior direito em comparação com os controles. Além disso, o grupo com depressão de início tardio apresentou um aumento volumétrico no lóbulo posterior esquerdo do cerebelo em comparação com o grupo controle. Em relação ao volume total das hiperintensidades de substância branca, a amostra final processada com o EMS foi constituída por 22 pacientes e 19 controles. As mesmas comparações entre grupos descritas anteriormente foram realizadas e não foi encontrada diferença estatisticamente significante entre os grupos. Foi realizada uma nova regressão logística para investigar fatores preditores de remissão nessa amostra menor, incluindo o volume total de hiperintensidades de substância branca e não foi encontrado resultado estatisticamente significante. Em conclusão, os idosos com depressão apresentam redução volumétrica no giro reto e no córtex orbitofrontal bilateralmente e isso pode ser uma característica da depressão em idosos e um potencial biomarcador dessa condição. O uso de antidepressivos pode proteger contra a redução volumétrica de substância cinzenta e branca e parece ter um efeito neurotrófico nesses pacientes. Além disso, déficit cognitivo e redução de substância cinzenta no córtex orbitofrontal superior lateral esquerdo no início do estudo podem ser preditores de pior resposta ao tratamento farmacológico da depressão no idoso. Estudos longitudinais, com amostras maiores e com pacientes com depressão mais grave poderão contribuir para uma melhor compreensão da fisiopatologia da depressão em idosos / The association between structural brain changes and treatment response in patients with late-life depression (LLD) remains an intriguing area of research. This magnetic resonance imaging (MRI) study investigated the baseline gray and white matter volume of elderly with and without major depression (according to the DSM-IV-TR criteria). Moreover, to better understand the pathophysiology of LLD, white matter hyperintensities total volume was quantified and compared among groups. The sample consisted of 30 elderly patients with depression and 22 elderly healthy controls. Depressed patients were classified according to their previous use of antidepressants, to their response to pharmacological treatment, and to their age of depression onset. Brain MRI scans were processed using statistical parametric mapping and voxel-based morphometry (DARTEL). White matter hyperintensities total volume was conducted with a variation of an automatic method known as Expectation Maximization Segmentation (EMS). In the whole-brain analysis, we found a significant volumetric reduction in the gyrus rectus and in the orbitofrontal cortex (OFC) bilaterally in patients in comparison with controls. Additionally, patients who were not taking antidepressants at the time of the MRI had an even greater volumetric decrease in the gyrus rectus and in the orbitofrontal cortex bilaterally. Besides, we classified patients according to their previous antidepressant use (with or without) and compared them with controls. Patients with previous antidepressant use had a volumetric reduction in the gyrus rectus and in the OFC bilaterally in comparison with controls and patients without previous antidepressant use had an even greater reduction in the gyrus rectus and in the OFC bilaterally in comparison with controls. According to their remission status after the use of a pharmacologic algorithm treatment, patients were classified in remitted or not remitted. In comparison with controls, remitted patients showed a volumetric reduction in a cluster that included the gyrus rectus and in the OFC bilaterally and in another cluster that included the right middle temporal pole. Non-remitted patients showed an even greater volumetric reduction in the gyrus rectus and in the OFC bilaterally compared with controls. A logistic regression was used to investigate baseline predictive factors of remission. Baseline Mini Mental State Examination scores and the left superior lateral OFC standardized (to the total gray matter volume) volume classified patients with respect to their remission status. Regarding white matter volume, the same statistical analyses were conducted. Patients without previous antidepressant use showed a volumetric reduction in the right superior frontal gyrus in comparison with controls. In addition, late onset depression group had a volumetric increase in the left posterior cerebellum lobe in comparison with controls. In relation to the white matter hyperintensities total volume, 22 patients and 19 controls were processed with EMS. The same comparisons among groups were conducted and no statistical significant difference was found. A logistic regression was conducted to investigate baseline predictive factors of remission in this smaller sample, including the white matter hyperintensities total volume and no statistically significant result was found. In conclusion elderly with depression have volumetric reduction in the gyrus rectus and in the OFC bilaterally and this may be characteristic of late life depression and a potential biomarker of this condition. Antidepressant use seems to protect against gray matter reduction and to have a neurotrophic effect. In addition, cognitive deficits and regional gray matter abnormalities at baseline seem to be predictors of worse response to antidepressant treatment. Further longitudinal studies with larger sample size and more severe depression intensity may contribute to a better understanding of the pathophysiology of depression in the elderly

Este trabalho versa sobre o desenvolvimento de um polímero de impressão molecular restrito à ligação com macromoléculas por meio de revestimento com albumina (RAMIP-BSA) para a extração direta de antidepressivos inibidores da receptação de serotonina (ISRS) em plasma humano em sistema cromatográfico multidimensional. A síntese do material foi realizada em três etapas. Primeiramente os sítios seletivos foram formados empregando síntese por precipitação e os seguintes reagentes: fluoxetina, ácido metacrílico, etileno glicol dimetacrilato, 2,2 – azo-isso-butironitrila, e metanol como, molécula modelo (MM), monômero funcional (MF), etileno glicol dimetacrilato como agente de ligação cruzada (ALC), iniciador radicalar (IR) e solvente, respectivamente. A segunda etapa consitiu na formação de uma camada hidrofílica pelo recobrimento químico da superfície do material com os monômeros hidrofílicos hidróxi etil metacrilato e glicidil metacrilato. Na terceira etapa o polímero foi revestido com albumina bovina utilizando glutaraldeído como agente de ligação cruzada, formando assim uma cápsula protéica ao redor das partículas. O RAMIP-BSA obtido foi capaz de excluir cerca de 99% das proteinas por ele percoladas, além de apresentar capacidade máxima adsortiva para fluoxetina de cerca de 69 mg g-1, e comprovada seletividade à fluoxetina frente os outros fármacos ISRS. Uma coluna com o RAMIP-BSA foi empregada como fase extratora em um sistema de cromatografia líquida multidimensional para análise direta de ISRS em plasma humano. Foram construídas curvas de calibração para os fármacos venlafaxina (VEN), citalopram (CIT), fluvoxamina (FLUV), duloxetina (DUL), fluoxetina (FLUO) e sertralina (SER) utilizando um pool de plasma humano (n=6) de indivíduos que não utilizam nenhum dos fármacos. Todas as curvas apresentaram r > 0,99 na faixa linear de 20 a 500 μg L-1. A precisão e exatidão foram avaliadas com base no desvio relativo do padrão e no erro relativo respectivamente. Os limites de detecção e quantificação foram de 10 e 20 μg L-1. A recuperação absoluta foi de 85% à 93%. Todos os resultados estão de acordo com as normas do FDA mostraram-se aceitáveis de acordo com as normas do FDA. / In this work, we developed a new restricted access molecularly imprinted polymer coated with albumin (RAMIP-BSA) for the direct extraction of antidepressants receiving serotonin inhibitors (SSRIs) in human plasma in a multidimensional chromatographic system. The synthesis of the material was performed in three steps. Firstly, the selective binding sites were formed by using fluoxetine, methacrylic acid, ethylene glycol dimethacrylate, 2-2'-azoisobutyronitrile, and methanol as template, functional monomer, cross linking agent, radical initiator and solvent, respectively. In the second step, the polymer was chemically covered with a hydrophilic layer by using the monomers hydroxyethyl methacrylate and glycidyl methacrylate. In the third step, the polymer particles were coated with an albumin capsule by using glutaraldehyde as cross linker. The obtained RAMIP -BSA was able to exclude about 99% of the proteins percolated through it, with a maximum adsorption capacity of 69 mg g-1 for the fluoxetine, and good selectivity for the fluoxetine in comparison with other SSRIs. A RAMIP-BSA column was employed as extraction phase in a multidimensional liquid chromatography system for the analyses of SSRIs in human plasma samples. Validation calibration curves were constructed for venlafaxine (VEN) , citalopram (CIT), fluvoxamine (FLUV) , duloxetine (DUL) , fluoxetine (FLUO) and sertraline (SER) using pooled human plasma (n=) individuals who do not use any of drugs. The analytical curves ranged from 20 to 500 mg L-1, with correlation coefficients larger than 0.99 for all the analytes. The precisions and accuracies (intra and inter-day) were evaluated as relative standard deviation and relative error, respectively. The limits of detection and quantification were 10 and 20 mg L-1 for all the analytes. All the validation parameters are in accordance with the FDA recommendation.

A análise de compostos orgânicos em matrizes complexas requer a aplicação de metodologias com boa seletividade e detectabilidade, que levem a resultados confiáveis. Baseando-se nesta demanda, a química analítica tem proposto soluções viáveis e inovadoras para tornar esses ensaios mais dinâmicos. Dentre elas podemos destacar as técnicas cromatográficas, a espectrometria de massas e os sistemas multidimensionais. Acompanhando este desenvolvimento, sorventes seletivos como os polímeros de impressão molecular (MIP), os materiais de acesso restrito (RAM), os polímeros de impressão molecular de acesso restrito revestidos com monômeros hidrofílicos (RAMIP) e os polímeros de impressão molecular de acesso restrito revestidos com monômeros hidrofílicos e albumina sérica bovina (RAMIP-BSA) vêm sendo adotados com sucesso no preparo de amostras. Neste contexto, essa tese de doutorado teve como objetivo sintetizar, caracterizar e avaliar as potencialidades do emprego de diferentes tipos de polímeros molecularmente impressos na extração fármacos em amostras biológicas, bem como associar estes materiais a técnicas de preparo de amostras online à cromatografia e/ou espectrometria de massas. O primeiro artigo trata de um estudo comparativo de polímeros de impressão molecular seletivos a beta- bloqueadores. Os polímeros foram sintetizados pelo método de precipitação utilizando ácido metacrílico como monômero funcional, hidróxi-etilmetacrilato e glicidil dimetacrilato, como comonômeros hidrofílicos, etilenoglicol dimetacrilato como agente de ligação cruzada, 2,2-azoisobutironitrila como iniciador radicalar e acetonitrila como solvente. Parte dos materiais obtidos foi revestida com BSA (albumina sérica bovina). Os polímeros foram caracterizados e pode-se concluir que a maneira pela qual a síntese dos materiais é conduzida influencia na forma e tamanho de partículas e que a adição de co-monômeros hidrofílicos, bem como o revestimento com BSA não altera a estrutura química dos mesmos. Os estudos de adsorsão mostraram que os polímeros alcançam o equilíbrio de adsorção em 60 min, que o revestimento com BSA não altera o perfil de adsorção dos mesmos, que é evidente a diferença de adsorção entre polímeros impressos e não impressos e que o modelo que melhor se adequa, a fim de descrever o perfil de adsorção, é o modelo de Langmuir. O RAMIP foi o polímero que melhor adsorveu os beta-bloqueadores, comparado à MIP, MIP-BSA (polímero molecularmente impresso revestido com BSA) e RAMIP-BSA, sendo esta a razão pela qual ele foi escolhido para o desenvolvimento da metodologia que é trazida no segundo artigo, no qual beta-bloqueadores são analizados em urina para monitoramento de doping. No método desenvolvido, uma pré-coluna de HPLC vazia foi preenchida com RAMIP e utilizada para a montagem de um sistema Column Switching acoplado à espectrometria de massas. As fases móveis utilizadas foram tampão formiato de amônio 10 mmol L-¹, como fase de carregamento e recondicionamento e uma solução ácido fórmico 0,01% - metanol (v/v) na proporção 30:70 (v/v) como fase de eluição e lavagem; ambas a uma vazão de 0,4 mL min-¹. O sistema foi utilizado para a extração online e simultânea de oxprenolol (1,0-75,0 µg L-¹), atenolol, propranolol, nadolol, pindolol, labetalol e metoprolol (todos na faixa de 3,0-50,0 µg L-¹), em amostras de urina. O coeficiente de correlação foi superior a 0,99 para todos os analitos. O método foi otimizado, validado e apresentou todos os parâmetros em conformidade com o que exigido pela legislação. No terceiro artigo um RAMIP seletivo a antidepressivos tricíclicos foi sintetizado pelo método in bulk, usando amitriptilina como molécula modelo, ácido metacrílico como monómero funcional e glicidilmetacrilato como co-monômero hidrofílico. Posteriormente, foi realizada a abertura do anel epóxido e o polímero foi recoberto com BSA. Uma pré-coluna de HPLC foi preenchida com RAMIP-BSA e foi acoplada a um detector de ultravioleta/visível e a um espectrômetro de massas. Foram usadas água como fase de carregamento e recondicionamento e uma solução aquosa de ácido acético a 0,01% (v/v) - acetonitrila 30:70 (v/v) como fase de eluição. O sistema foi utilizado para a extracção online e identificação/quantificação de nortriptilina, desipramina, amitriptilina, imipramina, clomipramina (faixa de 15,0 a 500,0 µg L-¹), simultaneamente, a partir de amostras de plasma. O coeficiente de correlação foi superior a 0,99 para todos os analitos. Os valores de desvio padrão relativo variaram de 1,34% a 19,13% para precisão intra-dias e de 1,32% a 19,77% para precisão inter-dias. Os valores de erro relativo variaram de -19,15% a 19,51% para exatidão intra-dias e -9,04% a 16,22% para exatidão inter-dias. / Analysis of organic compounds in complex matrices requires the application of methods with good selectivity and detectability, to lead reliable results. Based on this demand, analytical chemistry has proposed viable and innovative solutions to make these tests more dynamic. Among them, we can highlight the chromatographic techniques, mass spectrometry and multidimensional systems. Following this development, selective sorbents such as molecularly imprinting polymers (MIPs), restricted access materials (RAM), restricted access molecularly imprinting polymers obtained by covering the surface with hidrofilic comonomers (RAMIP) and restricted access molecularly imprinting polymers obtained by covering the surface with hidrofilic comonomers and bovine serum albumin (RAMIP-BSA), have been successfully used in sample preparation. In this context, this PhD thesis aimed to synthesize, characterize and evaluate the different types of molecularly imprinted polymers potentialities for drugs extraction from biological samples and associate these materials with online sample preparation techniques, combined to chromatography and/or mass spectrometry. In paper one we proposed a comparative study of different molecularly imprinted polymers selective to beta-blockers. The polymers were synthesized by precipitation method using methacrylic acid as functional monomer, hydroxy-ethyl methacrylate and glycidyl dimethacrylate, as hydrophilic co-monomer, ethylene glycol dimethacrylate as crosslinking agent, 2,2-azoisobutironitrile as radical initiator and acetonitrile as solvent. One part of the obtained materials was coated with BSA (bovine serum albumin). The polymers were characterized and it was possible to conclude that the synthesis procedure influences the size and shape of particles and that hydrophilic co-monomer addition as well as coating with BSA do not alter the chemical recognition ability of the material. The difference between imprinted and non-imprinted polymers’ adsorption was evident (suggesting that imprinted polymers have a better capacity to bind the template than the non-imprinted ones). The Langmuir model presents the best fit to describe the materials’ adsorption profile. The polymer covered with hydrophilic monomers presented the best adsorption for the template in an aqueous medium, probably due to a hydrophilic layer on its surface. We also concluded that an association of the hydrophilic monomers with the BSA coating is important to obtain materials with higher capacity of macromolecule exclusion. In paper two, the RAMIP selective to oxprenolol was chosen as sorbent in a online method for beta blockers analyses from human urine for doping monitoring. A column filled with RAMIP was coupled to an LC-MS/MS instrument under the multidimensional configuration, with 10.0 mmol L−¹ ammonium formate buffer (pH 5.0) as the loading and reconditioning mobile phase and a 0.01% formic acid aqueous solution – methanol (30:70 v/v) as the elution mobile phase. The system was used for on-line extraction and quantization of oxprenolol (from 1.0 to 75.0 μg L−¹), atenolol, propranolol, nadolol, pindolol, labetalol and metoprolol (all from 3.0 to 50 μg L−¹) simultaneously, from urine samples. The correlation coefficient was higher than 0.99 for all the analytes. Suitable precision and accuracy were obtained. In paper three a RAMIP, selective to tricyclic antidepressant, was synthesized by the in bulk method. Amitriptyline was used as template molecule, methacrylic acid as the functional monomer and glycidyl methacrylate as hydrophilic co-monomer. Afterwards the epoxide ring opening was made and the polymer was covered with BSA. A column filled with RAMIP-BSA was coupled to an MS/MS instrument under the multidimensional configuration, with water as the loading and reconditioning mobile phase and a 0.01% acetic acid aqueous solution - acetonitrile at 30:70 as the elution mobile phase. The system was used for online extraction and quantization of nortriptyline, desipramine, amitriptyline, imipramine and clomipramine, simultaneously, from plasma samples. The correlation coefficient was higher than 0.99 for all the analytes. The RSD (relative standard deviation) values ranged from 1.34% to 19.13% for intra assay precision and 1.32% to 19.77% for inter assay precision. The E% (relative error) values ranged from -19.15% to 19.51% for intra assay accuracy and from -9.04% to 16.22% for inter assay accuracy. / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais - FAPEMIG

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:50:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 385855.pdf: 1436770 bytes, checksum: 28e687e815170b42a1f16566092ecf39 (MD5) Previous issue date: 2006-12-19 / O monitoramento terap?utico, compreendido como a determina??o de concentra??es plasm?ticas de f?rmacos e a aplica??o destas determina??es ? individualiza??o da farmacoterapia, ? uma abordagem ?til quando da utiliza??o de amitriptilina, considerando que faixas de concentra??o terap?utica e t?xicas est?o propostas. Entretanto, a obten??o de n?veis plasm?ticos terap?uticos ? fortemente impactada pela variabilidade fenot?pica do metabolismo. Freq?entemente, o gen?tipo metabolizador n?o permite prever o fen?tipo. Um dos fatores mais comuns de inconsist?ncia entre gen?tipo e fen?tipo ? a intera??o entre f?rmacos. Considerando que uma parcela significativa dos pacientes n?o relatam o uso corrente de medicamentos e fitoter?picos aos m?dicos assistentes, procedimentos de an?lise toxicol?gica sistem?tica podem ser ?teis para avaliar a co-administra??o de f?rmacos. Neste estudo, foi desenvolvido um sistema informatizado para c?lculo de par?metros cromatogr?ficos e busca em bases de dados previamente publicadas, dispon?vel na rede mundial de computadores. Este sistema permite a identifica??o de subst?ncias de interesse toxicol?gico com elevada probabilidade, mesmo com a utiliza??o de m?todos anal?ticos simples e de baixo custo. Tamb?m foi desenvolvida e validada uma metodologia para determina??o simult?nea de omeprazol, 5-hidr?xi-omeprazol e omeprazol sulfona em plasma por HPLC-DAD, permitindo a avalia??o do fen?tipo metabolizador para CYP2C19 e CYP3A4 em um grupo de 38 volunt?rios saud?veis. Foram identificados tr?s indiv?duos considerados metabolizadores pobres para CYP2C19 e um indiv?duo com fen?tipo metabolizador ultra-r?pido. Foi desenvolvido e validado um m?todo por HPLC-DAD para determina??o simult?nea de amitriptilina, nortriptilina, desmetilnortriptilina, E-10-hidr?xi-amitriptilina, Z-10-hidr?xi-amitriptilina, E-10-hidr?xi-nortriptilina e Z-10-hidr?xi-nortriptilina.Posteriormente, 5 volunt?rios com diferentes fen?tipos metabolizadores para CYP2C19 (1 ultra-r?pido, 3 extensivos e 1 pobre) receberam uma dose oral de 1mg.kg-1 de amitriptilina e forneceram amostras de sangue nos tempos 0, 1, 2, 3, 4, 5, 7, 24 e 48 horas p?s-dose. Foram observadas diferen?as nos par?metros farmacocin?ticos e nas raz?es metab?licas de hidroxila??o entre os diferentes fen?tipos para CYP2C19. Deste forma, o c?lculo do ?ndice metab?lico de desmetila??o a partir das concentra??es de amitriptilina e nortriptilina, determinadas em uma amostra coletada 3 horas ap?s uma dose ?nica ou ap?s a primeira dose oral de amitriptilina, pode ser utilizada para determinar o fen?tipo metabolizador para CYP2C19, permitindo um ajuste precoce da posologia.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 442629.pdf: 4545565 bytes, checksum: 75785599771804ca3f6535bc606e1454 (MD5) Previous issue date: 2012-08-09 / The clinical depression treatment faces serious obstacles as the disease mechanism is not fully elucidated. In addition, there are no effective means to predict and prevent depression as well as any biological method of diagnosis. The use of antidepressants is still the basis of the treatments for depression. Lithium has been used clinically as effective drug to treat all phases of bipolar disorder, including major depression. The Selective serotonin re-uptake inhibitors (SSRIs), such as fluoxetine and citalopram, and Tricyclic antidepressant (TCA) as clomipramine are drugs constantly used for depression treatment. Recent evidence has shown an involvement of adenosine and its receptors in the pathophysiology of depression. ATP can be stored and co-released with other neurotransmitters like serotonin and can be hydrolyzed by a cell-surface enzyme family known as ectonucleotidases. Among these members, we highlight the nucleoside triphosphate diphosphohtdrolases (NTPDases) and ecto-5'-nucleotidase. They are able to control the availability of ligands such as ATP and adenosine to its specific receptors. Adenosine deaminase (ADA) can promote the hydrolytic deamination of adenosine to inosine, modulating the extracellulr levels of this neuromodulator. In cholinergic signaling, after its release, acetylcholine (ACh) promotes the activation of specific muscarinic or nicotinic receptors and thus, it promotes diverse cellular responses. ACh is hydrolyzed by acetylcholinesterase (AChE) in acetate and choline in synaptic cleft. The zebrafish has been used in research behavioral neuroscience and is also a choice model for elucidating the development and function of neuronal circuitry. Considering the cholinergic and purinergic signaling are important participation in the CNS and these neurotransmitter pathways have been identified and characterized in zebrafish, the objective of this study was to evaluate the effect of antidepressants on ectonucleotidases, ADA and ACh activities, which are essential enzymes in the modulation of these signaling pathways in the zebrafish brain. We evaluated the ex vivo effects of fluoxetine (1-10 ?M), clomipramine (1-10 ?M), citalopram (70-300 ?M) on ectonucleotidases and ADA activities. It has been also analyzed the in vitro (1 to 1000 ?M) and ex vivo (1 to 10mg/L) effect of lithium on ectonucleotidases and AChE activities and gene expression. There was a significant inhibition of ADP hydrolysis after ex vivo exposure to lithium at 5 and 10 mg/L, whereas an inhibitory effect was observed for AMP hydrolysis only at 10 mg/L. The same treatment decreased the AChE activity in a concentration of 10mg/L. Lithium did not induce significant changes in the analysis of gene expression patterns in the concentrations tested. In vivo treatment, there were no significant changes inectonucleotidases and AChE activities. Treatment with clomipramine promotes an inhibition ecto-5'-nucleotidase activities at the concentration of 5?M when compared to the control group. For ADA activity, we also observed a significant inhibition in the treatment with clomipramine at concentrations of 5 and 10 ?M in membrane fractions of zebrafish brain. However, treatment with fluoxetine and citalopram did not alter ectonucleotidases and ADA activities in the zebrafish brain. Our findings may contribute to a better understanding of pharmacology of antidepressants and their interaction with the cholinergic and purinergic neurotransmission. / O tratamento cl?nico da depress?o enfrenta s?rios obst?culos j? que o mecanismo da doen?a n?o ? totalmente elucidado. Al?m disso, n?o existem meios eficazes para prever e prevenir a depress?o bem como nenhum m?todo biol?gico de diagn?stico. O uso de f?rmacos antidepressivos ainda ? a base dos tratamentos para depress?o. O l?tio tem sido usado clinicamente como f?rmaco eficaz para tratar todas as fases do transtorno bipolar, incluindo depress?o aguda. Os inibidores seletivos da recapta??o de serotonina (ISRSs), como fluoxetina e citalopram, e os antidepressivos tric?clicos (TCA), como a clomipramina, s?o f?rmacos constantemente utilizados para o tratamento da depress?o. Evid?ncias recentes mostram o envolvimento da adenosina e seus receptores na patofisiologia da depress?o. O ATP pode ser armazenado e co-liberado, juntamente com outros neurotransmissores, como serotonina e noradrenalina, e pode ser hidrolisado at? adenosina por uma fam?lia de enzimas de superf?cie celular, conhecidas como ectonucleotidases. Dentre elas, destacam-se as Nucleos?deo Trifosfato Difosfoidrolases (NTPDases) e a ecto-5?-nucleotidase, capazes de controlar a disponibilidade de ligantes como ATP e adenosina aos seus receptores espec?ficos. A Adenosina desaminase (ADA) pode promover a desamina??o hidrol?tica da adenosina em inosina, modulando os n?veis extracelulares deste neuromodulador. Na sinaliza??o colin?rgica, a acetilcolina (ACh), ap?s liberada, promove a ativa??o de receptores muscar?nicos ou nicot?nicos, e desta maneira a ACh promove diversas respostas celulares. A ACh que permanece na fenda sin?ptica ? hidrolisada pela acetilcolinesterase (AChE) em acetato e colina. O peixe-zebra tem sido utilizado na pesquisa da neuroci?ncia comportamental, sendo tamb?m um modelo de escolha para elucidar o desenvolvimento e a fun??o do circuito neuronal. Considerando que as sinaliza??es purin?rgica e colin?rgica t?m importante participa??o no sistema nervoso central e que essas vias de neurotransmiss?o j? est?o caracterizadas em peixe-zebra, o objetivo desse estudo foi avaliar o efeito de f?rmacos antidepressivos na atividade das ectonucleotidases, ADA e AChE, enzimas essenciais na modula??o destas vias de sinaliza??o em c?rebro de peixe-zebra. Foram avaliados os efeitos ex vivo da fluoxetina (1-10 ?M), clomipramina (1-10 ?M) e citalopram (70-300 ?M) na atividade das ectonucleotidases e ADA. Foi analisado tamb?m o efeito in vitro (1 a 1000 ?M) e ex vivo (1-10mg/L) do l?tio sobre a atividade e express?o g?nica das ectonucleotidases e AChE.A exposi??o ao l?tio inibiu a hidr?lise de ADP nas concentra??es de 5 e 10mg/L e inibiu a hidr?lise de AMP na concentra??o de 10mg/L quando comparado ao grupo controle. Este mesmo tratamento diminuiu a atividade da AChE na concentra??o de 10mg/L.O l?tio n?o induziu altera??es significativas na an?lise do padr?o de express?o g?nica. No tratamento in vitro, n?o foram observadas altera??es na atividade das ectonucleotidases e AChE. O tratamento com a clomipramina mostrou uma inibi??o na atividade da ecto-5?-nucleotidase na concentra??o de 5 ?M quando comparado ao grupo controle. Na atividade da ADA tamb?m observamos uma inibi??o significativa no tratamento com a clomipramina nas concentra??es de 5 e 10 ?M em fra??es de membrana de c?rebro de peixe-zebra. Entretanto, o tratamento com fluoxetina e citalopram n?o alterou a atividade das ectonucleotidases e ADA no c?rebro do peixe-zebra. Nossos resultados podem contribuir para uma melhor compreens?o da farmacologia dos f?rmacos antidepressivos e a sua intera??o com a neurotransmiss?o colin?rgica e purin?rgica.

Submitted by Setor de Tratamento da Informa??o - BC/PUCRS (tede2@pucrs.br) on 2015-05-06T16:55:06Z No. of bitstreams: 1 467931 - Texto Completo.pdf: 1649223 bytes, checksum: 97061538af6c3abdd1bf13692fc0be12 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-05-06T16:55:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 467931 - Texto Completo.pdf: 1649223 bytes, checksum: 97061538af6c3abdd1bf13692fc0be12 (MD5) Previous issue date: 2015-02-25 / Depression is a serious and recurrent disease characterized by anhedonia, loss of interest in daily activities, appetite, and sleep disturbances, reduced concentration and psychomotor agitation. Antidepressant drugs currently used have a very slow onset of action, with that comes the need for fast-acting treatments. Therefore, there is a growing interest in NMDA antagonists as a target for the development of new antidepressant drugs. Considering that the purinergic and dopaminergic systems are involved in anxiety, depression, and sleep, we characterize the role of these signaling pathways on antidepressant effects induced by MK-801 in zebrafish. The animals treated with MK-801 at 5, 10, 15, and 20 ?M during 15, 30, and 60 minutes showed higher permanence in the top area of the tank, in comparison with the control group, indicating an antidepressant effect induced by this drug. The animals treated with MK-801 remained within 2 hours in the top of the tank when treated with 5 ?M MK-801 and 4 hours when treated with 20 ?M MK-801, returning to basal levels 24 hours after exposure.The repeated treatment did not induce cumulative effects, since animals treated daily for seven days showed the same pattern of behavioral response observed from the first day until the 7th day. In order to investigate the action of agonists and antagonists of A1 and A2A receptors and the influence of modulation on adenosine levels in antidepressant effects induced by MK-801, animals were pretreated with Caffeine, DPCPX, CPA, ZM 241385, CGS 21680, AMPCP, EHNA, dipyridamole, and NBTI before the exposure to MK-801 for 30 minutes. The nonselective adenosine receptor antagonist Caffeine (50 mg/kg) and the selective A1 adenosine receptor antagonist DPCPX (15 mg/kg) blocked the behavioral changes induced by MK-801. Dipyridamole (10 mg/kg), a selective inhibitor of nucleoside transport (NT), exacerbates the behavioral changes induced by MK-801. Dopamine receptor antagonists (sulpiride and SCH23390) did not induce changes on the behavioral alterations induced by MK-801. Our results have shown that the antidepressant effects induced by MK-801 in zebrafish are mediated by the activation by A1 adenosine receptor. / A depress?o ? uma doen?a grave, recorrente, caracterizada por anedonia, perda de interesse em atividades di?rias, dist?rbios do apetite e do sono, concentra??o reduzida e agita??o psicomotora. Os f?rmacos antidepressivos utilizados atualmente t?m um in?cio de a??o muito lento, com isso, surge a necessidade de tratamentos de a??o r?pida. Portanto, h? um interesse crescente em antagonistas de receptores NMDA como um alvo para o desenvolvimento de novos f?rmacos antidepressivos. Considerando-se que os sistemas purin?rgicos e dopamin?rgicos est?o envolvidos na ansiedade, sono e depress?o, caracterizamos o papel destas vias de sinaliza??o sobre os efeitos antidepressivos induzidos por MK-801, um antagonista NMDA, em peixe-zebra. Os animais tratados com MK-801 em doses de 5, 10, 15 e 20 ?M durante 15, 30 e 60 minutos apresentaram maior perman?ncia na ?rea superior do aqu?rio, em compara??o com o grupo controle, indicando um efeito antidepressivo induzido por este composto.Os animais tratados com MK-801 permaneceram at? 2 horas na parte superior do aqu?rio quando tratados com 5 ?M de MK-801 e 4 horas quando tratados com 20 ?M MK-801, retornando aos par?metros basais ap?s 24 horas de exposi??o. O tratamento repetido n?o induziu efeitos cumulativos, uma vez que os animais tratados diariamente durante sete dias apresentaram o mesmo padr?o de resposta comportamental observada desde o primeiro at? o dia 7? dia. Com o objetivo de investigar a a??o dos agonistas e antagonistas dos receptores A1 e A2A e a influ?ncia da modula??o dos n?veis de adenosina nos efeitos antidepressivos induzidos por MK-801, os animais foram pr?-tradados com cafe?na, DPCPX, CPA, ZM 241385, CGS 21680, AMPCP, EHNA, Dipiridamol e NBTI por 30 minutos antes da exposi??o ao MK-801. O antagonista n?o seletivo de receptores de adenosina cafe?na (50 mg/kg) e o antagonista seletivo do receptor A1 DPCPX (15 mg/kg) bloquearam as altera??es comportamentais induzido pelo MK-801.O Dipiridamol (10 mg/kg), um inibidor n?o seletivo do transportador de nucleos?deo (NT), exacerbou as altera??es comportamentais induzidos pelo MK-801. Os antagonistas dos receptores de dopamina (sulpirida e SCH23390) n?o apresentaram modifica??es nas altera??es comportamentais induzidas por MK-801. Os nossos resultados sugerem que o efeito antidepressivo induzido por MK-801 em peixe-zebra ? mediado principalmente pela ativa??o do receptor de adenosina A1.

Submitted by Setor de Tratamento da Informa??o - BC/PUCRS (tede2@pucrs.br) on 2015-10-26T11:19:38Z No. of bitstreams: 1 475882 - Texto Completo.pdf: 18258562 bytes, checksum: 5b76b66a03e3116f7e13505a183443a8 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-10-26T11:19:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 475882 - Texto Completo.pdf: 18258562 bytes, checksum: 5b76b66a03e3116f7e13505a183443a8 (MD5) Previous issue date: 2015-08-31 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / The major depressive disorder (MDD) is a psychiatric condition which profoundly alters with the brain metabolism and neurochemistry characterized by a state of deep, chronic sadness, accompanied by anhedonia, sensation of worthlessness and lack of motivation, often leading the patient to suicide. The ventral tegmental area (VTA) is an important dopaminergic region intimately associated with the pathophysiology of MDD. Ketamine is a drug that antagonizes the glutamatergic NMDA receptors which has been shown to exert an immediate antidepressant effect and the treatment with ketamine is a promising new alternative for MDD therapeutic. Furthermore, the small animal positron emission tomography (microPET) is a technique which allows the assessment of the temporal-spatial distribution of radiolabelled molecules in vivo, and the utilization of 18F-Fluorodeoxyglucose (18F-FDG) as a radiotracer for this analysis still needs standardization in our University. In this sense, this thesis has been divided into two stages. Firstly, we standardized the brain metabolic assessment technique using 18F-FDG associated with microPET in Wistar rats, and with it, we rendered a neurometabolic atlas of the distribution of 18F-FDG in 56 brain regions. We compared our neurometabolic data with data from five other scientific articles which assessed the biochemical and immunohistochemical activity of cytochrome c oxidase (COX), these techniques are traditionally used for assessment of ex vivo brain metabolism. Thus, we ranked the regions analyzed in our study and the regions from the selected COX studies, and correlated the rankings with the Spearman test for non-parametric ranked data correlation. In this study we detailed the distribution of 18F-FDG in the brain of Wistar rats. On four of the selected studies we did not find a correlation, only on Shumake at al.?s study we found a moderate correlation (r=0.56, p=0.023). In the second stage, we analyzed the influence of acute ketamine treatment on the depressive-like behavior, the glucose metabolism and tyrosine hydroxylase activity (TH) (a rate-limiting dopamine synthesis enzyme) in the VTA of animals exposed to the chronic unpredictable stress (CUS). In this study, 48 Wistar rats were divided into four groups: 1-Control, 2-Ketamine, 3-CUS, 4-CUS+Ketamine. The animals undergone the CUS protocol were expose to several stressors, twice-daily, for 28 consecutive days. The treatment consisted of a single intraperitoneal injection of 10mg/kg of ketamine. For the behavioral analysis the sucrose preference test, the open field test, and the forced swim test were executed. The glucose metabolism and TH immunoreactivity in the VTA were analyzed by 18F-FDG-microPET and immunohistochemistry for TH, respectively. The CUS groups showed a decrease in sucrose solution intake and an increase in the immobility time on the forced swim test, and ketamine treatment was able to reverted the depressive-like behavior (p<0.05. The CUS protocol and ketamine treatment did not influence upon the 18F-FDG uptake or the TH immunoreactivity in the VTA. The results obtained in this thesis aid on the standardizing of the use of 18F-FDG with microPET, for the analyses on brain metabolism in our university. Furthermore, with the CUS protocol, we confirmed the acute, antidepressant effect of ketamine, however, our finds indicated that this effect is not related to metabolic or dopaminergic physiology in the VTA. / O transtorno depressivo maior (MDD) ? um dist?rbio psiqui?trico que altera profundamente a neuroqu?mica e o metabolismo encef?lico; caracterizado clinicamente por um estado de tristeza profunda cr?nica, acompanhada por anedonia, sensa??o de desvalia e falta de motiva??o, podendo levar o paciente a cometer suic?dio. A ?rea tegmental ventral (VTA) ? uma importante regi?o dopamin?rgica intimamente relacionada com a patofisiologia do MDD. A cetamina ? um f?rmaco antagonista de receptores NMDA glutamat?rgicos que apresenta um r?pido efeito antidepressivo e o tratamento agudo com cetamina ? uma promissora alternativa terap?utica para os pacientes com MDD. Ademais, a tomografia por emiss?o de p?sitrons para pequenos animais (microPET) ? uma t?cnica que permite avaliar a distribui??o temporal-espacial de mol?culas radiomarcadas in vivo, e a utiliza??o do 18F-Fluorodeoxiglicose (18F-FDG) como r?dio-tra?ador para este tipo de an?lise ainda necessita ser padronizada junto a nossa Universidade. Deste modo, esta tese de doutorado foi dividida em duas etapas. Primeiramente, padronizamos a t?cnica de an?lise do metabolismo encef?lico de ratos Wistar com uso de 18F-FDG associada ao microPET, e com isso confeccionamos um atlas neurometab?lico detalhado da distribui??o de 18F-FDG em 56 regi?es encef?licas. Comparamos os dados neurometab?licos obtidos com dados de cinco artigos da literatura cient?fica que realizaram avalia??es bioqu?micas e imunoistoqu?micas da atividade do citocromo c oxidase (COX), t?cnicas tradicionalmente utilizadas para an?lise do metabolismo encef?lico ex vivo. Para a compara??o, ordenamos as regi?es analisadas em nosso estudo e as regi?es dos estudos de COX selecionados, ent?o correlacionamos estas ordena??es atrav?s do teste n?o param?trico de correla??o para dados ordenados de Spearman. Neste estudo detalhamos a distribui??o de 18F-FDG no enc?falo de ratos Wistar. Em quatro dos estudos selecionados n?o encontramos correla??o, somente com o estudo de Shumake et al. encontramos uma correla??o moderada (r=0,56, p=0,023). Na segunda etapa, analisamos a influ?ncia do tratamento agudo com a cetamina sobre o comportamento s?mil-depressivo, o metabolismo de glicose e a atividade da enzima tirosina hidroxilase (TH) (uma enzima limitante na s?ntese de dopamina) na VTA de animais submetidos protocolo de estresse cr?nico imprevis?vel (CUS). Neste estudo, 48 ratos Wistar foram divididos em quatro grupos: 1-Controle, 2-Cetamina, 3-CUS, 4-CUS+Cetamina. Os animais submetidos ao protocolo CUS foram expostos a estressores variados, duas vezes ao dia, por 28 dias consecutivos. O tratamento foi uma ?nica administra??o intraperitoneal de 10mg/kg de cetamina. Para an?lise comportamental foram realizados os testes de prefer?ncia a sacarose, campo aberto e nado for?ado. O metabolismo da glicose e a imunorreatividade para TH na VTA foram analisadas por meio do 18F-FDG-microPET e imunoistoqu?mica para TH, respectivamente. Os grupos CUS apresentaram uma diminui??o do consumo de solu??o de sacarose e um aumento no tempo de imobilidade no teste de nada for?ado e o tratamento com cetamina foi capaz de reverter o comportamento s?mil-depressivo (p<0,05). O protocolo CUS e o tratamento com cetamina n?o exerceram influ?ncia sobre a capta??o de 18F-FDG e a imunorreatividade para TH na VTA. Os resultados obtidos com esta tese de doutorado possibilitaram a padroniza??o do uso de 18F-FDG com microPET, para an?lise do metabolismo encef?lico de ratos Wistar em nossa Universidade. Ademais, com o uso do protocolo CUS, confirmou-se o efeito antidepressivo agudo da cetamina, contudo nossos achados indicam que este n?o ? relacionado a altera??es metab?licas ou da histofisiologia dopamin?rgica da VTA.

O curso longitudinal do transtorno bipolar é altamente variável, mas um subconjunto de pacientes parece apresentar uma evolução progressiva associada a alterações cerebrais e comprometimento funcional. Em nosso primeiro artigo, discutimos a teoria da neuroprogressão no transtorno bipolar. Este conceito considera a resposta ao estresse que ocorre nos episódios de humor e déficits no funcionamento e cognição, bem como alterações neuroanatômicas nos estágios tardios da doença. Discutimos também refratariedade ao tratamento que pode ocorrer em alguns casos de transtorno bipolar. Foi executada uma busca na base de dados PubMed para artigos publicados em qualquer idioma até 04 de junho de 2016. Foram encontrados 315 resumos e 87 estudos foram incluídos em nossa revisão. Somos da opinião de que o uso de estratégias farmacológicas específicas e remediação funcional pode ser potencialmente útil em pacientes bipolares em estágios tardios. Novas abordagens analíticas que utilizam dados multimodais têm o potencial para ajudar na identificação de assinaturas de subgrupos de pacientes que irão desenvolver um curso neuroprogressivo. Com base em nossa hipótese de neuroprogressão, decidimos realizar um ensaio clínico randomizado com o antidepressivo tianeptina como tratamento adjuvante para o transtorno bipolar, a fim de melhorar o comprometimento funcional, desfechos clínicos e aumentar os níveis do Brain-Derived Neurothrofic Factor (BDNF). Tianeptina é um fármaco seguro, que atua sobre o sistema glutamatérgico e tem um efeito antidepressivo. Esse estudo teve como objetivo avaliar a eficácia e tolerabilidade da tianeptina como tratamento adjuvante para a depressão bipolar. Foi realizado um ensaio clínico duplo-cego randomizado de manutenção controlado por placebo com tianeptina 37,5 mg/dia. Os participantes (n = 161) tinham uma pontuação na Montgomery Asberg Depression Rating ≥12 no início do ensaio. Após oito semanas de tratamento com tianeptina na fase aberta, aqueles que responderam a tianeptina foram randomizados para o placebo ou tianeptina adjuvante. Os participantes foram recrutados na rede pública de saúde. Tempo para qualquer intervenção foi o desfecho primário do estudo. Mudanças nos sintomas de humor, funcionamento, ritmos biológicos, qualidade de vida, taxas de virada maníaca e níveis séricos de BDNF foram considerados como desfechos secundários. Houve uma diminuição importante nos sintomas depressivos, assim como melhoras no funcionamento, qualidade de vida e pontuações no ritmo biológico durante a fase aberta de tratamento com tianeptina por oito semanas. Durante as 24 semanas do ensaio duplo-cego randomizado e controlado por placebo, não houve diferença em relação ao desfecho primário: tempo para qualquer intervenção. Além disso, não houve diferenças significativas entre os grupos em relação aos sintomas de humor, funcionamento e níveis de BDNF. Tianeptina foi bem tolerada e não foi associada a virada maníaca em comparação com o placebo. Estes achados sugerem que tianeptina é um medicamento seguro e pode ser eficaz no tratamento da depressão bipolar aguda. No entanto, tianeptina não mostrou efeitos benéficos na fase de manutenção. Este é o primeiro ensaio clínico duplo-cego randomizado de manutenção e de longo prazo com antidepressivo no transtorno bipolar. / The longitudinal course of bipolar disorder is highly variable, and a subset of patients seems to present a progressive course associated with brain changes and functional impairment. In our first article, we discussed the theory of neuroprogression in bipolar disorder. This concept considers the systemic stress response that occurs within mood episodes and late-stage deficits in functioning and cognition as well as neuroanatomic changes. We also discuss treatment refractoriness that may take place in some cases of bipolar disorder. We searched PubMed for articles published in any language up to June 4th, 2016. We found 315 abstracts and included 87 studies in our review. We are of the opinion that the use of specific pharmacological strategies and functional remediation may be potentially useful in bipolar patients at late-stages. New analytic approaches using multimodal data hold the potential to help in identifying signatures of subgroups of patients who will develop a neuroprogressive course. Based on our hypothesis of neuroprogression, we decided to perform a randomized clinical trial with tianeptine as adjunctive treatment for bipolar disorder in order to improve functional impairment and increase serum Brain-Derived Neurothrophic Factor BDNF levels. Tianeptine is a safe medication that acts on the glutamatergic system and has an antidepressant effect. The present study aimed at assessing the efficacy and tolerability of tianeptine as an adjunctive treatment for bipolar depression. We performed an enriched maintenance multi-center double-blind randomized controlled trial of tianeptine 37•5mg/day. Participants (n = 161) had a Montgomery Asberg Depression Rating Score ≥12 at trial entry. After eight weeks of open-label tianeptine treatment, those who responded to tianeptine were randomized to adjunctive tianeptine or placebo in addition to usual treatment. Participants were recruited from public health services and through advertisement. Time to any intervention was the primary endpoint of the study. Changes in mood symptoms, functioning, biological rhythms, quality of life, rates of mania switch and serum BDNF assessments were considered as secondary outcomes. There was a robust decrease in depressive symptoms along with improvements in functioning, quality of life and biological rhythms scores during the eight-week open-label tianeptine treatment phase. During the subsequent 24-week double-blind controlled phase, there was no difference regarding the primary outcome: time to intervention. In addition, there were no significant differences between groups in mood symptoms, functioning and BDNF levels. Tianeptine was well tolerated and not associated with mania switch as compared to placebo. These findings suggest that tianeptine is a safe medication and may be effective in the treatment of acute bipolar depression. However, tianeptine did not show beneficial effects in the maintenance phase. This is the first long-term randomized, double-blind maintenance trial of antidepressant augmentation in bipolar disorder.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:34:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 405785.pdf: 2288139 bytes, checksum: 644cf231b9b0a06c87f37c99963f903a (MD5) Previous issue date: 2008-10-03 / A sepse ? um estado fisiopatol?gico multifatorial agressivo, caracterizado por uma resposta inflamat?ria decorrente da rea??o do sistema imunol?gico a infec??es, causando, assim, uma doen?a com implica??es cl?nicas relevantes, cujas taxas de incid?ncia v?m aumentando nos ?ltimos anos, com alto ?ndice de mortalidade, se tratando de uma das maiores causas de ?bito nas unidades de terapia intensiva. Estudos recentes demonstram que mesmo os sobreviventes ? sepse de unidades de terapia intensiva apresentam altera??es de mem?ria, de aten??o e de concentra??o. Nesse contexto, al?m dos estudos que envolvem humanos, os modelos animais de liga??o e perfura??o cecal (CLP) s?o clinicamente relevantes, pois produzem uma inflama??o generalizada similar ?quela observada durante a s?ndrome da resposta inflamat?ria sist?mica e a sepse, mimetizando diversos aspectos da sepse polimicrobiana em humanos e permitindo um estudo mais aprofundado da rela??o entre altera??es metab?licas e inflama??o, e altera??es do sistema nervoso central. Atrav?s de tr?s experimentos se avaliou: as altera??es comportamentais em ratos sobreviventes de sepse ap?s 10, 30 e 60 dias; a resposta dos facilitadores de mem?ria em ratos sobreviventes de sepse ap?s 10 e 30 dias; e o efeito do antidepressivo imipramina no nado for?ado em ratos sobreviventes de sepse ap?s 10 dias. No primeiro experimento foram utilizados seis testes comportamentais: habitua??o ao campo aberto; mem?ria de reconhecimento de objetos; esquiva inibit?ria; esquiva inibit?ria de treinos cont?nuos; labirinto em cruz elevado e de nado for?ado. No segundo experimento os animais receberam inje??es de salina, de epinefrina (25&#956;/kg), de nolaxone (0,4,mg/kg), de dexametazona (0,3,mg/kg) e de glicose (320mg/kg), e realizaram o teste de esquiva inibit?ria. No terceiro experimento receberam inje??es de imipramina (10mg/kg) e realizaram o teste do nado for?ado. No primeiro experimento, ap?s 10 dias da sepse os ratos apresentaram d?ficits nos testes habitua??o ao campo aberto, esquiva inibit?ria, mem?ria de reconhecimento de objetos, esquiva inibit?ria de treinos cont?nuos e nado for?ado; ap?s 30 dias de sepse apresentaram altera??es nos testes esquiva inibit?ria de treinos cont?nuos, esquiva inibit?ria e nado for?ado; e ap?s 60 dias todos os d?ficits de comportamento foram revertidos. No segundo experimento houve revers?o do dano de mem?ria com a utiliza??o dos facilitadores de mem?ria ap?s 10 e 30 dias de sepse. No terceiro experimento observou-se o aumento no tempo de imobilidade do rato e a revers?o ap?s o uso de imipramina. Assim, os resultados indicam uma piora no aprendizado e na mem?ria dos ratos ap?s 10 dias da sepse, que se reverteu parcialmente em 30 dias, e completamente ap?s 60 dias; que as vias de forma??o de mem?ria nos ratos sobreviventes de sepse responderam aos facilitadores de mem?ria; e que a imipramina reverteu os sintomas de depress?o avaliados no teste de nado for?ado nos ratos sobreviventes de sepse.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:35:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 436189.pdf: 18742545 bytes, checksum: 05749e4aa60fa43b373efcc6ee364d2a (MD5) Previous issue date: 2011-12-26 / Parkinson's disease (PD) is a intriguing neurological disorder that affects the general population, attacking mainly in developing countries.This, it creates the need for discovery of therapeutic agents for the treatment of PD. Monoamine Oxidase (MAO) is an enzyme of major importance in neurochemistry, it catalyzes the oxidative deamination of biogenic amines, such as monoamine neurotransmitters and neuromodulators, as well as exogenous bioactive monoamines. On the basis of their substrate and inhibitor specificities, two isoforms of MAO have been described (A and B). Due to their role in the metabolism of catecholamines neurotransmitters, MAO-A and MAO-B have long been of pharmacological interest, and reversible and irreversible inhibitors of these isoforms are used clinically to treat neurological diseases including PD. Since the demonstration that I2-imidazoline sites are associated with mitochondrial membranes 15 years ago, several studies have provided evidence that these sites represent regions on MAOs. In line with this view, it has been demonstrated that imidazoline derivatives inhibit MAO activity. This effect has been attributed to a high affinity I2 binding site on MAO-B (I2B) and to a similar lower affinity site on MAO-A (I2A).Crystallographic studies have identified the field of imidazoline binding on monoamine oxidase B (MAO-B), which opens the possibility of molecular docking studies devoted to this binding site. Thus, this study aimed to identify new potential inhibitors of MAO-B. We are also interested in establishing a fast and reliable computational methodology for future molecular docking simulations focused on the imidazoline binding site of this enzyme. We used the program 'Molegro Virtual Docker' (MVD) in all simulations described here. All results indicated that the simplex algorithm evolution is able to successfully simulate the protein-ligand for MAO-B, and a function score (score MOLDOCK) implemented in the program MVD has a high correlation coefficient with the experimental activity. / A Doen?a de Parkinson (DP) ? uma doen?a neurol?gica intrigante que afeta a popula??o em geral, atacando principalmente nos pa?ses em desenvolvimento. Com isso, criase a necessidade da descoberta de agentes terap?uticos para o tratamento da DP. A monoamina oxidase (MAO) ? uma enzima de grande import?ncia na neuroqu?mica, pois catalisa a desamina??o oxidativa de aminas biog?nicas, como monoaminas neurotransmissoras e neuromoduladoras, assim como monoaminas bioativas ex?genas. Com base na especificidade a substrato e inibidores, s?o descritas duas isoformas da MAO (A e B). Devido aos seus pap?is no metabolismo das catecolaminas neurotransmissoras, MAO-A e MAO-B s?o consideradas farmacologicamente interessantes, e inibidores revers?veis e irrevers?veis destas isoformas s?o usados clinicamente para tratar doen?as neurol?gicas incluindo a DP.Nos ?ltimos 15 anos, desde a demonstra??o que s?tios I2 est?o associados com fra??es da membrana mitocondrial, muitos estudos provem evid?ncias de que estes s?tios representam regi?es da MAO. Al?m disso, alguns estudos t?m demonstrado que derivados imidazol?nicos s?o capazes de inibir a atividade da MAO. Este efeito tem sido atribu?do a s?tios I2 de alta afinidade na MAO-B (I2B) e a um s?tio similar de baixa afinidade na MAO-A (I2A). Estudos cristalogr?ficos identificaram o dom?nio da liga??o imidazol?nica sobre monoamina oxidase B (MAO-B), que abre a possibilidade de estudos de docking molecular voltadas para este s?tio de liga??o. Assim, este estudo teve como objetivo identificar novos potenciais inibidores da MAO-B.Tamb?m estamos interessados em estabelecer uma metodologia computacional r?pida e confi?vel para futuras simula??es de docking molecular focadas no sitio imidazol?nico de liga??o desta enzima. Foi utilizado o programa Molegro Virtual Docker (MVD) em todas as simula??es aqui descritas. Todos os resultados indicaram que o algoritmo simplex evolution ? capaz de simular com sucesso as intera??es prote?naligante para MAO-B; e que uma fun??o de escore (MOLDOCK score) implementada no programa MVD apresenta alto coeficiente de correla??o com a atividade experimental.