As espécies patogênicas do gênero Colletotrichum apresentam importância mundial, pois causam danos a várias culturas de interesse agronômico. Diversas medidas de controle são empregadas, mas estas nem sempre são eficazes devido à ocorrência de linhagens resistentes. Desta forma, se faz necessário a busca por novos compostos que possam ser utilizados no manejo integrado desta doença. Os produtos naturais isolados de micro-organismos podem ser uma alternativa para o desenvolvimento de novos defensivos agrícolas. Dentre os micro-organismos, as actinobactérias são conhecidas pela produção de inúmeros compostos antimicrobianos. Neste contexto, o presente estudo teve como objetivo o isolamento e a identificação de compostos antifúngicos produzidos por actinobactérias da rizosfera de guaranazeiros. Para isto, a seleção de actinobactérias foi baseada em dois ensaios. No primeiro, as 65 actinobactérias foram avaliadas em ensaio de cultivo pareado frente ao fitopatógeno Colletotrichum gloeosporioides. Destas, os isolados mais promissores foram AM1 (43,78 % de inibição do crescimento micelial), AM3 (43,98 %), AM18 (37,86 %), AM25 (43,17 %), AM30 (47,12 %), AM61 (40,12 %) e AM68 (47,94 %). No segundo ensaio, estes isolados foram cultivados em meio BD e, após o cultivo, o meio metabólico foi submetido a três métodos de extração: (a) partição líquido-líquido com n-butanol; (b) partição líquido-líquido com acetato de etila e (c) coluna sílica gel C18. As frações obtidas a partir das três metodologias foram avaliadas pelo método de difusão em disco de papel contra C. gloeosporioides. Neste ensaio de difusão em disco foram selecionadas as linhagens AM1(n-butanol), AM3 (acetato de etila) e AM25 (C18) para o estudo de bioprospecção. Estas foram identificadas por técnicas moleculares como pertencentes ao gênero Streptomyces. A partir do extrato bruto da Streptomyces sp. AM1 foi isolado um composto análogo do ácido proclavamínico, o qual apresentou atividade mínima inibitória (MIC) de 1,25 mg mL-1 contra o fitopatógeno C. gloeosporioides. Da linhagem Streptomyces sp. AM3 foi isolado o composto streptimidona que apresentou MIC de 1,25 mg mL-1. Já no estudo de Streptomyces sp. AM25 um composto não identificado apresentou MIC de 2,50 mg mL-1. Estes três compostos apresentaram atividade superior aos fungicidas Captan SC® (Captana) e Dithane NT® (Mancozeb), e inferior ao Score® (Difenoconazol). A atividade antifúngica destes compostos ao C. gloeosporioides está sendo relatada pela primeira vez. / The pathogenic species of the genus Colletotrichum present importance worldwide because they cause damage to numerous crops of agronomic interest. Several control methods are employed, but they are not always effective due to the occurrence of resistant strains. Thus, it is necessary searching for new compounds that can be used in the integrated management of this disease. Natural products isolated from microorganisms can be an alternative for the development of new agricultural pesticides. Among microorganisms, actinobacteria are known to produce numerous antimicrobial compounds. In this context, the present study aimed to isolate and identify antifungal compounds produced by actinobacteria from guarana rhizosphere. For this, the selection of actinobacteria was based on two tests. In the first one, the 65 actinobacteria were evaluated in paired cultivation test against the plant pathogen Colletotrichum gloeosporioides. Among them, the most promising isolates were AM1 (43.78% inhibition), AM3 (43.98%), AM18 (37.86%), AM25 (43.17%), AM30 (47.12%), AM61 (40.12%) and AM68 (47.94%). In the second assay, these isolates were cultured in BD medium and, after culturing, the metabolic medium was subjected to three extraction methods: (a) liquid-liquid partition with n-butanol; (B) liquid-liquid partition with ethyl acetate and (c) silica gel column C18. The fractions obtained from the three methodologies were evaluated by paper disc diffusion method against C. gloeosporioides. In this disk diffusion assay, the strains AM1 (n-butanol), AM3 (ethyl acetate) and AM25 (C18) were selected for the bioprospecting study. These were identified by molecular techniques as belonging to the genus Streptomyces. From the crude extract of Streptomyces sp. AM1 the analogous compound proclavaminic acid was isolated, which presented minimal inhibitory activity (MIC) of 1.25 mg mL -1 against the plant pathogen C. gloeosporioides. From Streptomyces sp. AM3, the compound streptimidone was isolated, which presented MIC of 1.25 mg mL-1. In the study of Streptomyces sp. AM25 an unidentified compound had MIC of 2.50 mg mL-1. These three compounds presented superior activity to the fungicides Captan SC® (Captan) and Dithane NT® (Mancozeb), and inferior to the Score® (Difenoconazole). The antifungal activity of these compounds to C. gloeosporioides is being reported here for the first time.

A levedura Saccharomyces cerevisiae tem potencial para o controle de doenças em algumas plantas, devido à capacidade de induzir resistência e de elicitar mecanismos de defesa. Entretanto, no processo de purificação de compostos elicitores presentes na parede celular de S. cerevisiae foi observado um baixo rendimento, dificultando a realização de experimentos, principalmente em campo. Assim, com o objetivo de otimizar o processo de extração do (s) elicitor (es) presentes na parede celular da levedura, células em suspensão foram autoclavadas por minutos ou horas, uma vez ou seqüencialmente. Em seguida, foi avaliado o conteúdo de carboidratos e de proteínas destas preparações que foram testadas na produção de fitoalexinas em mesocótilos de sorgo, previamente tratados ou não com abrasivo carborundum, e na germinação de conídios e formação de apressórios por Colletotrichum lagenarium e Colletotrichum sublineolum. Em função da maior concentração de carboidratos e da atividade elicitora em mesocótilos de sorgo, a preparação de levedura autoclavada por 4 horas seqüencialmente foi submetida ao processo de purificação. Cromatografias de troca iônica (CTI), com tampão Tris-HCl ou bicarbonato de amônio na eluição da coluna DEAE-Celulose, foram realizadas para separar as frações com maior poder elicitor das de baixo poder elicitor. Frações de ambas as cromatografias, induziram o acúmulo de fitoalexinas em mesocótilos de sorgo, previamente tratados ou não com abrasivo carborundum. Entretanto, frações provenientes da cromatografia com tampão bicarbonato de amônio foram capazes de inibir em 100% a germinação de conídios e a formação de apressórios dos fitopatógenos. Na proteção de pepino em câmara de crescimento, houve redução da área lesionada somente quando as plântulas de pepino receberam as frações provenientes da CTI com tampão Tris-HCl, dois dias antes da inoculação com o patógeno. Em casa-de-vegetação, fração proveniente da CTI com tampão bicarbonato de amônio conferiu proteção às plântulas de pepino contra C. lagenarium, mas sem aumento na atividade de peroxidases. Plantas de sorgo tratadas com as frações de ambas as cromatografias, apresentaram tendência a uma redução da área lesionada nas folhas tratadas e folhas superiores, com produção de fitoalexinas. A maior produção de fitoalexinas em plantas de sorgo foi observada em folhas tratadas com a preparação bruta da levedura autoclavada por 4 horas seqüencialmente. Os resultados do presente trabalho indicam a existência de compostos termoestáveis na parede celular da levedura, liberados em maior concentração em função da autoclavagem seqüencial, capazes de induzir o acúmulo de fitoalexinas em mesocótilos e folhas de sorgo, com atividade antifúngica sobre C sublineolum e C. lagenarium e potencial para induzir resistência local em pepino contra C. lagenarium e resistência local e sistêmica em sorgo contra C. sublineolum. / The yeast Saccharomyces cerevisiae has potential in the control of diseases in some plants by the ability to induce resistance and elicits defence mechanisms. However, in the process of purification of elicitor (s) present in the cell wall of S. cerevisiae a low efficiency was observed during the process, making difficult to carry out experiments, mainly in field. Thus, to optimize the process of extraction of the elicitor (s) present in the cell wall of the yeast, cells in suspension were autoclaved by minutes or hours, once or in sequence. After autoclaving the carbohydrate and proteins content of these preparations were determinate and they were tested in phytoalexin accumulation in sorghum mesocotyls, previously treated or not with the abrasive carborundum, and conidia germination and appressorium formation by Colletotrichum lagenarium and Colletotrichum sublineolum. Because of the higher carbohydrate content and the highest elicitor activity in sorghum mesocotyls, the preparation autoclaved by 4 hours in sequence was selected for the purification process. Ion exchange chromatography (IEC) using Tris-HCl or ammonium bicarbonate buffer for column elution, were used to separate fractions with higher elicitation activity from those exhibiting lower elicitation activity. Fractions from the chromatography obtained using either buffer induced the accumulation of phytoalexin in sorghum mesocotyls, previously treated or not with the abrasive carborundum. However, the fractions from the chromatography with ammonium bicarbonate buffer were able to inhibit in 100% the conidia germination and appressorium formation by the phytopathogens. In the protection of cucumber in growth chamber, there was a reduction in symptoms only when the cucumber seedlings were treated with the fractions from the IEC with Tris-HCl buffer, two days before the inoculation with the fungus. In greenhouse, fraction from the IEC with ammonium bicarbonate buffer was able to protect cucumber seedlings against C. lagenarium, but without increase peroxidases activity. Sorghum plants treated with the fractions, obtained using either buffer, exhibited reduced infection in the treated leaves and leaves just above, with phytoalexin production. The highest phytoalexin production in sorghum plants was observed in leaves treated with the crude preparation of the yeast autoclaved by 4 hours sequentially. The results of the present study indicate the presence of termoestable compounds in the cell wall of the yeast, released in higher concentrations in function of the sequential autoclavage, that are able to induce phytoalexin accumulation in sorghum mesocotyls and leaves, with antifungal activity on C. sublineolum and C. lagenarium and potential to induce local resistance in cucumber against C. lagenarium and local and systemic resistance in sorghum against C. sublineolum.

As espécies patogênicas do gênero Colletotrichum apresentam importância mundial, pois causam danos a várias culturas de interesse agronômico. Diversas medidas de controle são empregadas, mas estas nem sempre são eficazes devido à ocorrência de linhagens resistentes. Desta forma, se faz necessário a busca por novos compostos que possam ser utilizados no manejo integrado desta doença. Os produtos naturais isolados de micro-organismos podem ser uma alternativa para o desenvolvimento de novos defensivos agrícolas. Dentre os micro-organismos, as actinobactérias são conhecidas pela produção de inúmeros compostos antimicrobianos. Neste contexto, o presente estudo teve como objetivo o isolamento e a identificação de compostos antifúngicos produzidos por actinobactérias da rizosfera de guaranazeiros. Para isto, a seleção de actinobactérias foi baseada em dois ensaios. No primeiro, as 65 actinobactérias foram avaliadas em ensaio de cultivo pareado frente ao fitopatógeno Colletotrichum gloeosporioides. Destas, os isolados mais promissores foram AM1 (43,78 % de inibição do crescimento micelial), AM3 (43,98 %), AM18 (37,86 %), AM25 (43,17 %), AM30 (47,12 %), AM61 (40,12 %) e AM68 (47,94 %). No segundo ensaio, estes isolados foram cultivados em meio BD e, após o cultivo, o meio metabólico foi submetido a três métodos de extração: (a) partição líquido-líquido com n-butanol; (b) partição líquido-líquido com acetato de etila e (c) coluna sílica gel C18. As frações obtidas a partir das três metodologias foram avaliadas pelo método de difusão em disco de papel contra C. gloeosporioides. Neste ensaio de difusão em disco foram selecionadas as linhagens AM1(n-butanol), AM3 (acetato de etila) e AM25 (C18) para o estudo de bioprospecção. Estas foram identificadas por técnicas moleculares como pertencentes ao gênero Streptomyces. A partir do extrato bruto da Streptomyces sp. AM1 foi isolado um composto análogo do ácido proclavamínico, o qual apresentou atividade mínima inibitória (MIC) de 1,25 mg mL-1 contra o fitopatógeno C. gloeosporioides. Da linhagem Streptomyces sp. AM3 foi isolado o composto streptimidona que apresentou MIC de 1,25 mg mL-1. Já no estudo de Streptomyces sp. AM25 um composto não identificado apresentou MIC de 2,50 mg mL-1. Estes três compostos apresentaram atividade superior aos fungicidas Captan SC® (Captana) e Dithane NT® (Mancozeb), e inferior ao Score® (Difenoconazol). A atividade antifúngica destes compostos ao C. gloeosporioides está sendo relatada pela primeira vez. / The pathogenic species of the genus Colletotrichum present importance worldwide because they cause damage to numerous crops of agronomic interest. Several control methods are employed, but they are not always effective due to the occurrence of resistant strains. Thus, it is necessary searching for new compounds that can be used in the integrated management of this disease. Natural products isolated from microorganisms can be an alternative for the development of new agricultural pesticides. Among microorganisms, actinobacteria are known to produce numerous antimicrobial compounds. In this context, the present study aimed to isolate and identify antifungal compounds produced by actinobacteria from guarana rhizosphere. For this, the selection of actinobacteria was based on two tests. In the first one, the 65 actinobacteria were evaluated in paired cultivation test against the plant pathogen Colletotrichum gloeosporioides. Among them, the most promising isolates were AM1 (43.78% inhibition), AM3 (43.98%), AM18 (37.86%), AM25 (43.17%), AM30 (47.12%), AM61 (40.12%) and AM68 (47.94%). In the second assay, these isolates were cultured in BD medium and, after culturing, the metabolic medium was subjected to three extraction methods: (a) liquid-liquid partition with n-butanol; (B) liquid-liquid partition with ethyl acetate and (c) silica gel column C18. The fractions obtained from the three methodologies were evaluated by paper disc diffusion method against C. gloeosporioides. In this disk diffusion assay, the strains AM1 (n-butanol), AM3 (ethyl acetate) and AM25 (C18) were selected for the bioprospecting study. These were identified by molecular techniques as belonging to the genus Streptomyces. From the crude extract of Streptomyces sp. AM1 the analogous compound proclavaminic acid was isolated, which presented minimal inhibitory activity (MIC) of 1.25 mg mL -1 against the plant pathogen C. gloeosporioides. From Streptomyces sp. AM3, the compound streptimidone was isolated, which presented MIC of 1.25 mg mL-1. In the study of Streptomyces sp. AM25 an unidentified compound had MIC of 2.50 mg mL-1. These three compounds presented superior activity to the fungicides Captan SC® (Captan) and Dithane NT® (Mancozeb), and inferior to the Score® (Difenoconazole). The antifungal activity of these compounds to C. gloeosporioides is being reported here for the first time.

A antracnose, que tem como agentes causais os fungos Colletotrichum gloeosporioides e C. acutatum, é uma das principais doenças que afetam a cultura da goiabeira. Não há no Brasil, fungicidas registrados para o controle da doença em pós-colheita. Em vista disso e da preocupação em relação à saúde humana e o respeito ao ambiente vem crescendo pesquisas envolvendo a utilização de agentes alternativos para o controle de doenças. Foi verificado em trabalho prévio que a levedura S. cerevisiae, apresentou atividade antagônica in vitro contra vários fitopatógenos, dentre eles C. gloeosporioides. Essa inibição foi atribuída à produção de uma mistura de compostos orgânicos voláteis (COVs), sendo que os álcoois 3-metil-1-butanol (3M1B) e 2-metil-1-butanol (2M1B) foram apontados como os principais responsáveis por essa atividade. Considerando a importância do manejo pós-colheita e o potencial da utilização de COVs no controle da antracnose, os objetivos desse trabalho foram avaliar o efeito in vitro dos COVs 3M1B e 2M1B identificados a partir de S. cerevisiae no desenvolvimento de Colletotrichum sp, elucidar alguns dos possíveis mecanismos de ação atuantes no processo inibitório e avaliar a utilização dos COVs no controle pós-colheita da antracnose em frutos de goiaba. Foi observado aumento da inibição do crescimento micelial dos fitopatógenos à medida que houve aumento da concentração dos compostos, chegando a 100% a partir da dose de 1µL mL-1 de ar. Os menores valores de MIC50 para C. gloeosporioides e C. acutatum, foram 0,34 e 0,31 quando tratados com os compostos 3M1B e a mistura 3M1B:2M1B (10:1; v/v), respectivamente. Ambos os fitopatógenos retomaram o crescimento quando transferidos para novo meio na ausência dos COVs, caracterizando a natureza fungistática da inibição. A esporulação de C. acutatum também foi totalmente inibida nas doses testadas. Também foram observados efeitos negativos sobre a produção de biomassa fúngica por C. gloeosporioides e C. acutatum, em média 64,9% e 55,4% menores, respectivamente, após a exposição aos COVs. Com relação aos possíveis mecanismos de ação atuantes no processo inibitório, os ensaios indicam que os voláteis podem causar aumento na permeabilidade da membrana plasmática, tendo como consequência a perda de eletrólitos. Foram verificados maiores níveis de peroxidação dos lipídios de membrana quando expostos aos voláteis, indicando um possível processo de estresse oxidativo. Não foram verificadas alterações significativas no conteúdo de proteínas do micélio dos fitopatógenos. O potencial de utilização do 3M1B no controle da antracnose em pós-colheita foi avaliado em frutos inoculados com C. acutatum e posteriormente tratados com o volátil por 10h. A incidência e a severidade da doença nos frutos tratados alcançaram valores 5 e 6,25 vezes maiores, respectivamente, quando comparado com o controle no último dia de avaliação. Também foi avaliado o efeito do tratamento sobre qualidades físico-químicas dos frutos, e não foram observadas alterações em nenhum dos parâmetros avaliados. Os COVs utilizados nesse estudo são capazes de interferir no desenvolvimento de C. gloeosporioides e C. acutatum, porém nas condições experimentais do trabalho, mostraram-se inadequados para o controle da antracnose em goiaba. / The anthracnose, which has as causal agents the fungi Colletotrichum gloeosporioides and C. acutatum, is one of the main diseases that affect guava plants. In Brazil, there are not fungicides registered for the control of the disease in post-harvest conditions. This aspect and the concern about human health and the environment, made increase researches involving the use of alternative agents to control diseases. In a previous study, it was shown that the yeast S. cerevisiae exhibited antagonistic activity in vitro against several pathogens, including C. gloeosporioides. This inhibition was attributed to the production of a mixture of volatile organic compounds (VOCs), and the alcohols 3-methyl-1-butanol (3M1B) and 2-methyl-1-butanol (2M1B) were identified as the main ones, responsible for the activity. Considering the importance of post-harvest management and the potential use of VOCs in the anthracnose control, the objectives of this study were the evaluation of the in vitro effect of 3M1B and 2M1B VOCs identified from S. cerevisiae on the development of Colletotrichum, the elucidation of some of the possible mechanisms acting during the inhibitory process and the evaluation of the use of VOCs in postharvest anthracnose control of guava fruits. An increased inhibition was observed in mycelial growth of the pathogens as the concentration of the compounds increased, reaching 100% of inhibition in the dose 1L mL-1 of air. The lowest values of MIC50 for C. gloeosporioides and C. acutatum were 0.34 and 0.31, respectively when treated with the compound 3M1B and the mixture 3M1B:2M1B (10:1; v/v). Both pathogens regained growth when transferred to a new medium in the absence of VOCs, thus characterizing the fungistatic nature of the inhibition. The sporulation of C. acutatum was also completely inhibited at all tested doses. There were negative effects on the production of fungal biomass by C. gloeosporioides and C. acutatum, being 64.9% and 55.4% lower on average, respectively, after exposure to VOCs. Regarding the possible mechanisms actinng in the inhibitory process, the results indicated that the volatiles could increase the permeability of the plasma membrane, resulting in the loss of electrolytes. It was observed higher levels of peroxidation of membrane lipids when exposed to volatiles, suggesting a oxidative stress process. There were not significant alterations in protein content of the pathogen mycelium. The potential use of 3M1B in postharvest anthracnose control was evaluated in fruits inoculated with C. acutatum and subsequently treated for 10h with the volatile. The incidence and severity of disease in the treated fruits showed values 5 and 6.25 higher, respectively, when compared to the control treatment on the last day of evaluation. The effect of treatment was evaluated on the physico-chemical quality of the fruits, and no changes were observed in any of the parameters. The VOCs used in this study are able to interfere on the development of C. gloeosporioides and C. acutatum, but, under the experimental conditions of the work, the VOCs were not adequate to control the anthracnose of guava.

Made available in DSpace on 2017-07-25T19:30:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Filipe Lemos Jacques.pdf: 1809213 bytes, checksum: 1b9bf06273f6c5ed90c39c3f54589c48 (MD5) Previous issue date: 2015-08-07 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The anthracnose of corn caused by Colletotrichum graminicola can occur both on leaves and stems of the plant and can cause extensive damage to the culture. In search of alternatives to the use of fungicides associated with the use of resistant varieties, main disease control method, the objective of this study was to evaluate the potential of control of C. graminicola in in vitro tests and the induction of resistance in corn plants in greenhouse conditions using different products abiotic and biotic. For in vitro tests were tested foliar fertilizer High Roots®, V6®, Maxi Flor®, Max Fruit®, Foskalium® 30-20 and manganese phosphite, the Ascophyllum nodosum extract (Acadian®), organic products Bacillus subtilis (Serenade®) and Bacillus thuringiensis (Dipel WP®) and control (without adding products). The products were incorporated into the oat medium melting at concentrations of 1, 10, 100 and 1000 ppm, which was added to the center of Petri dishes a fungi mycelium plug. The treatment control consisted of petri dishes without the incorporation of the treatments with a pathogen mycelial plug in the center. Daily was determined the diameter of the colonies to assess the mycelial growth of the fungus. With the data we calculated the percentage of inhibition of mycelial growth and the mycelial growth rate index. The treatment with B. thuringiensis and B. subtilis were the only ones that controlled at 100% the development of C. graminicola. Other treatments had total control at the dose of 1000 ppm. In tests in the greenhouse, in addition to the treatments used in vitro at concentrations that presented greater control, it was added acibenzolar-S-methyl (Bion®), which were sprayed on corn plants in V4 stage. After 72 hours of spraying the treatments was sprayed a suspension of spores of C. graminicola and after the first appearance of lesions were evaluated the severity and number of 2 cm lesions on the leaves. These data were calculated area under the disease progress curve and the area under the curve for infection frequency. The only treatment which controlled the disease was acibenzolar-S-methyl. / A antracnose do milho causada pelo fungo Colletotrichum graminicola pode ocorrer tanto nas folhas como nos colmos da planta e pode ocasionar grandes danos a cultura. Em busca de alternativas ao uso de fungicidas associados à utilização de variedades resistentes, principal método de controle de doenças, o objetivo deste trabalho foi avaliar o potencial de controle de C. graminicola em testes in vitro e a indução de resistência em plantas de milho em condições de casa de vegetação por meio da utilização de diferentes produtos de origem abiótica e biótica. Para os testes in vitro foram testados os fertilizantes foliares High Roots®, V6®, Maxi Flor®, Max Fruit®, Foskalium® 30-20 e fosfito de manganês, o extrato de Ascophyllum nodosum (Acadian®), os produtos biológicos Bacillus subtilis (Serenade®) e Bacillus thuringiensis (Dipel WP®) e a testemunha (sem adição de produtos). Os produtos foram incorporados em meio de cultura de aveia fundente nas concentrações de 1, 10, 100 e 1000 ppm, onde foi adicionado ao centro das placas de Petri um disco de micélio do fungo. A testemunha consistiu em placas de Petri sem a incorporação dos tratamentos com um disco de micélio do patógeno no centro. Diariamente foi determinado o diâmetro das colônias para avaliação do crescimento micelial do fungo. Com os dados foram calculadas a porcentagem de inibição do crescimento micelial (PIC) e o índice de velocidade de crescimento micelial (IVCM). Os tratamentos com B. subtilis e B. thuringiensis foram os únicos que controlaram em 100% o desenvolvimento de C. graminicola. Outros tratamentos apresentaram controle total apenas na dose de 1000 ppm. Nos testes em casa de vegetação, além dos tratamentos utilizados in vitro na concentração que apresentou maior controle, foi adicionado o produto acibenzolar-S-metílico (Bion®), que foram pulverizados nas plantas de milho no estádio V4. Após 72 horas da pulverização dos tratamentos foi pulverizada a suspensão de conídios de C. graminicola e após o aparecimento das primeiras lesões foram avaliadas a severidade e o número de lesões cm-2 nas folhas. Com os dados foram calculadas a área abaixo da curva de progresso da doença e a área abaixo da curva de frequência de infecção. O único tratamento que controlou a doença foi o acibenzolar-S-metílico.

Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2017-03-20T14:31:46Z No. of bitstreams: 1 Luis Gustavo Chaves da Silva.pdf: 1253285 bytes, checksum: 0a1b6f21c6f4abf5783394812a777ab7 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-20T14:31:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Luis Gustavo Chaves da Silva.pdf: 1253285 bytes, checksum: 0a1b6f21c6f4abf5783394812a777ab7 (MD5) Previous issue date: 2011-02-28 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / The anthracnose, fungal disease caused by Colletotrichum gloeosporioides, stands out as an important disease of cashew (Anacardium occidentale), which may lead to losses of over 40% in production. The cashew nut is the most important agricultural product of the state of Ceará, about 350 thousand hectares, generating more than 100 thousand direct/indirect jobs and exports over 150 million dollars in almonds. It is also important for the states of Piauí and Rio Grande do Norte. There are few and outdated research about disease and the needs basic information for programs improvement and integrated management of diseases. By presenting large morphological and genetic variability, it is difficult to generalize basic aspects of the species. The aim of this study was to characterize populations of C. gloeosporioides occurring on cashew trees in various regions of Brazil. Used 220 isolates obtained from cashew leaves, from 22 different areas of the states: Amazonas, Ceará, Maranhão, Paraíba, Pernambuco, Piauí, Rio Grande do North and São Paulo. Proceeded with pathogenic tests and molecular markers species-specific to all isolates. Then a representative from each collection area was selected to perform the other ratings, which are: morphological, molecular, epidemiological and physiological. The species-specific markers β-tubulin and ITS, noted the existence of only one group of 10 isolates of the same area, not being confirmed for C. gloeosporioides or C. acutatum, but morphological characteristics of C. gloeosporioides. Using seven primers ISSR markers and 100 representatives in 22 areas, it was possible identify the formation of four distinct genetic groups of C. gloeosporioides, where the unmarked isolated by ITS or β-Tubulin, not was contained in one or in groups. With the pathogenic test using 5 clones, it was possible to distinguish three groups and another 3 isolates distinct from other. Conclude that the species C. gloeosporioides is prevalent in cashew plantations in the areas studied. / A Antracnose, doença fúngica ocasionada por Colletotrichum gloeosporioides, destaca-se como doença importante do cajueiro (Anacardium occidentale), podendo levar a perdas de mais 40% na produção. A castanha de caju é o produto agrícola mais importante do estado do Ceará, com cerca de 350 mil hectares plantados, geração de mais de 100 mil empregos diretos e indiretos e exportações acima de 150 milhões de dólares em amêndoas. Também é importante para os estados do Piauí e Rio Grande do Norte. Há poucas e desatualizadas pesquisas sobre a doença, havendo a necessidade de informações básicas para os programas de melhoramento e manejo integrado da fitomoléstia. Por apresentar grande variabilidade morfológica e genética, torna-se difícil a generalização de aspectos básicos da espécie. O objetivo deste trabalho foi caracterizar populações de C. gloeosporioides que ocorrem em cajueiros de diversas regiões do Brasil. Foram usados 220 isolados, obtidos de lesões de folhas de cajueiro, provenientes de plantios de 22 áreas distintas dos estados do Amazonas, Ceará, Maranhão, Paraíba, Pernambuco, Piauí, Rio Grande do Norte e São Paulo. Procedeu-se com testes de patogenicidade e marcadores moleculares espécie específicos para todos isolados. Em seguida, um representante de cada área de coleta foi selecionado para realização das demais avaliações, sendo elas: morfológicas, moleculares, epidemiológicas e fisiológicas. Os marcadores espécie específicos ITS e β-Tubulina, constataram a existência de apenas um grupo de 10 isolados de uma mesma área, não sendo confirmados para C. gloeosporioides ou C. acutatum, porém com características morfológicas de C. gloeosporioides. Usando 7 primers ISSR e 100 marcadores nos representantes das 22 áreas, foi possível identificar a formação de 4 grupos genéticos distintos de C. gloeosporioides, onde o isolado não marcado por ITS ou β-Tubulina, não ficou contido em nem um dos grupos. Com o teste de patogenicidade utilizando 5 clones, foi possível diferenciar 3 grupos e mais outros 3 isolados distintos dos demais. Conclui-se que a espécie C. gloeosporioides é prevalente em plantios de cajueiro nas áreas estudas.

Made available in DSpace on 2017-07-10T17:36:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Lindomar Assi.pdf: 402640 bytes, checksum: 85ec0b36b17f5430a459dd263ecd9fce (MD5) Previous issue date: 2005-10-03 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The concern with the environment and the human health has stimulated the search for methods that reduce the use of fungicides in the control of phytopathogens. Considering many positive results already reached by using induced resistance, and the great demand for new elicitors of resistance to pathogens, this work had the objective to evaluate the fungitoxic effect in vitro of the aqueous extract (EA) of Pycnoporus sanguineus basidiocarp, against Colletotrichum lindemuthianum and evaluate under greenhouse conditions, the control of anthracnose in beans, as well as the induction of resistance by the determination of peroxidases activity. For the assays in vitro were used EAs, in the concentrations of 1, 5, 10, 15 and 20 %, autoiclavated or not. And evaluating the micelial growth and spores germination of C. lindemuthianum. For the in vivo assays, EAs not autoclavated at 5, 10 and 20% were sprayed in 7th´s leaves of beans plants three days before the inoculation of the pathogen (5x104 conidia/mL) that was occurred in 7th´s and 8th´s leaves. Water and fungicide (azoxystrobin 0,6 g. p. c./L) were used as control tratments. For peroxidase, 7th´s and 8th´s leaves were sampled at the moment of treatments and after three, six, nine and twelve days. The results showed direct antimicrobial activity of the EAs of P. sanguineus, with inhibition of up to 96% of the germination in vitro of the spores of C. lindemuthianum, independent of the autoclavation of the extracts. The EAs stimulated in up to 34 % the micelial growth. In the plants, eA 20% controlled the anthracnose with reduction of 70% severity in 7th´s leaf (treated and inoculated), while for the fungicide the reduction was of 73%. For 8 th´s leaf (only inoculated), the EAs at 5, 10 and 20% reduced the severity in 58, 64 and 68%, respectively, while for the fungicide the reduction was of 74%. This reduction in severity can be associated with the activity of peroxidase, which was presented high, in both 7th´s and 8th´s leaves in the moment of the inoculation, it means, three days after the treatment. These results indicate the P. sanguineus extracts potential for control of anthracnose in beans plants, that can occurr by direct antimicrobial activity and/or local and systemic induction. / A preocupação com o ambiente e a saúde humana tem incentivado a busca por métodos que reduzam o uso de fungicidas no controle de fitopatógenos. Considerando-se os vários resultados positivos já alcançados pela utilização da resistência induzida, bem como a grande demanda de novos eliciadores de resistência a fitopatógenos, este trabalho teve como objetivos avaliar o efeito fungitóxico in vitro do extrato aquoso (EA) de basidiocarpos de Pycnoporus sanguineus, sobre Colletotrichum lindemuthianum; e avaliar em de casa de vegetação, o controle da antracnose em feijoeiro por esses extratos, bem como a indução de resistência pela determinação da atividade de peroxidase. Para os ensaios in vitro foram utilizados EAs, nas concentrações de 1, 5, 10, 15 e 20 %, autoclavados ou esterilizados por filtração, avaliando-se o crescimento micelial e a germinação de esporos de C. lindemuthianum. Para os ensaios in vivo, EAs não autoclavados a 5, 10 e 20% foram aplicados nas 7ªs folhas de plantas de feijoeiro três dias antes da inoculação do patógeno (5x104 conídios /mL) que ocorreu nas 7ªs e 8ªs folhas. Água e fungicida azoxystrobin (0,6 g. p. c. / L) foram utilizados como testemunhas. Para a dosagem de peroxidase foram amostradas as 7ªs e 8ªs folhas no momento dos tratamentos e após três, seis, nove e doze dias. Os resultados indicaram atividade antimicrobiana direta dos EAs de P. sanguineus, com inibição de até 96% da germinação in vitro dos conídios de C. lindemuthianum, independente da autoclavagem ou não dos extratos. Os EAs estimularam em até 34 % o crescimento micelial. Nas plantas, apenas o EA a 20% controlou a antracnose, com redução de 70% na severidade na 7ª folha (tratada e inoculada), enquanto que para o fungicida a redução foi de 73%. Para a 8ª folha (apenas inoculada), os EAs a 5, 10 e 20% reduziram a severidade em 58, 64 e 68%, respectivamente, enquanto que para o fungicida a redução foi de 74%. Essa redução na severidade pode estar associada com a atividade de peroxidase, a qual se apresentava alta, tanto na 7ª quanto na 8ª folha, no momento da inoculação, ou seja, três dias após o tratamento. Estes resultados indicam o potencial de controle da antracnose em feijoeiro pelo extrato de P. sanguineus, que pode ocorrer por atividade antimicrobiana direta e/ou indução de resistência local e sistêmica.

Colletotrichum species are considered one of the most economically important plant pathogens. They cause many losses in tropical, subtropical and temperate regions affecting a wide range of plant species. In tropical and subtropical regions C. gloeosporioides and C. acutatum are associated with significant losses on pre and post-harvest anthracnoses. There are still many features to understand about Colletotrichum biology and its systematics. The accurate identification of species involved with each anthracnose is of high relevance to establish management strategies to control the disease. Although the great advances on Colletotrichum systematics, species complex such as C. gloeosporioides and C. acutatum are used in a broad sense in Brazil. These complexes were recently investigated and showed to be highly genetic and geographic variable. In this study multigene analysis were carried out based on ITS, GAPDH, CHS-1, TUB2 and CAL or HIS3 partial sequences for strains of C. gloesporioides and C. acutatum complexes collected from fruit crops in Brazil. Strains from different countries and exepitypes and others sequences available on GenBank from the species accepted on both complexes were added on dataset. Six strains from C. gloeosporiodes complex and five for C. acutatum were selected based on multigene phylogeny to investigate the pathogenicity through inoculations on detached fruit. The multigene phylogenies showed the occurrence of species in Brazil related to those complexes with a high genetic variability among them. The phylogeny of Brazilian strains belonging to the C. gloeosporioides complex showed that C. siamense represents the most genetically and host-specific variable clade. In contrast, C. asianum clade grouped only strains isolated from mango. The strains from this clade used on pathogenic test were not able to infect avocado and one of the strains caused symptoms only on mango. All strains from Brazil grouped in one subclade within the C. fructicola clade and seem to represent a genetically distinct group. C. theobromicola is first reported causing anthracnose on acerola fruit. Three new species (C. polyphialidicum, C. paranaense and C. pruni) belonging to the C. acutatum complex were recognized and their morphologic descriptions were provided. The pathogenic test for the strains in the C. acutatum complex showed their cross infection ability, but in some cases the larger lesions were produced on the original host. Most brazilian strains from C. acutatum complex grouped in one subclade within the C. nymphaeae clade and seem to be genetically distinct. / Fungos do gênero Colletotrichum são considerados um dos mais importantes economicamente na Fitopatologia. Espécies desse gênero são encontradas amplamente disseminadas e estão associadas a diversas espécies de plantas hospedeiras. Em regiões tropicais e subtropicais, espécies dos complexos C. gloeosporioides e C. acutatum são a principal causa das antracnoses em pré e póscolheita de frutos e consequentemente causam significantivas perdas. Ainda há muitos aspectos a serem compreendidos sobre o gênero Colletotrichum, como a biologia e a sistemática. A acurada identificação das espécies associadas a antracnoses é de suma importância para o estabelecimento de estratégias de controle. No entanto, apesar dos grandes avanços na sistemática desse gênero, complexos de espécies como aquelas citadas acima são tratados de modo genérico no Brasil. Estes complexos de espécies foram recentemente estudados e considerados geneticamente e geograficamente variáveis. Neste sentido, o presente trabalho teve como objetivo caracterizar isolados de Colletotrichum spp. associados a diferentes frutos e regiões do Brasil por meio de análise filogenética. Para análise multilocus, foram utilizadas sequências parciais dos genes ITS, GAPDH, CHS-1, TUB2 and CAL ou HIS3. Sequências de espécies-tipos disponíveis no GenBank e de isolados de diferentes países foram adicionadas ao conjunto de dados. Com base nos resultados obtidos por meio de filogenia multilocus, seis isolados do complexo C. gloeosporiodes e cinco do complexo C. acutatum foram escolhidos para testes de patogenicidade cruzada. A espécie C. siamense, pertencente ao complexo C. gloeosporioides, foi a mais variável geneticamente e quanto ao hospedeiro de origem. Diferentemente, apenas isolados obtidos de manga se agruparam no clado C. asianum. Isolados agrupados neste clado não infectaram abacate e um dos isolados (CPC 20969) causou sintomas apenas em manga. No clado C. fructicola, isolados coletados no Brasil se agruparam em um subclado e parecem representar um grupo geneticamente distinto. A espécie C. theobromicola é relatada pela primeira vez em acerola. Foram identificadas três novas espécies, C. polyphialidicum, C. paranaense e C. pruni, pertencentes ao complexo C. acutatum. Isolados brasileiros agrupados no clado C. nymphaeae parecem representar um grupo geneticamente distinto, todos se agruparam em um subclado. Isolados do complexo C. acutatum utilizados no teste de patogenicidade provocaram sintomas nos hospedeiros testados, porém, em algumas inoculações, as lesões foram maiores no hospedeiro de origem.

The aim of this study was to characterize morphological and agronomic, degree of resistance to golden mosaic and anthracnose on bean accessions, was evaluated seventy accessions of Phaseolus lunatus L., from the active germplasm banks of the Federal University of Piauí and the Federal Rural de Pernambuco, and seeds from the states of Alagoas, Pernambuco, Sergipe and Paraíba, all taken directly from fields and / or fairs, planted in crop year 2008. Seeds were sown in early May the waters. The characterization was made with plant characteristics, flower, pod and seed, according to recommendations of IPGRI. To evaluate the impact of the golden mosaic design was randomized blocks with two replicates in characterization and evaluation of resistance to anthracnose utilized is a single block, represented by seventy access, single row, the severity of the fungus was evaluated in leaves of plants, a greater severity during the rainy season, since the action of whitefly and virus incidence occurred in the dry season, causing damage to production of lima bean. The accessions showed different degrees of polymorphism in relation to all traits; incidence of bean golden mosaic and anthracnose resistance. Systematized information might be used in breeding programs, crop management, training and maintenance of germplasm banks bean. / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O objetivo deste trabalho foi realizar a caracterização morfo-agronômica, grau da resistência ao mosaico-dourado e à antracnose em acessos de fava, foi avaliado setenta acessos de Phaseolus lunatus L., provenientes dos bancos ativos de germoplasma das Universidades Federal do Piauí e Federal Rural de Pernambuco, além de sementes oriundas dos Estados de Alagoas, Pernambuco, Sergipe e Paraíba, todas obtidas diretamente de lavouras e/ou em feiras livres, cultivadas no ano agrícola de 2008. A semeadura foi realizada em maio início das águas. A caracterização foi feita com características da planta, flor, vagem e semente, segundo recomendações do IPGRI. Para a avaliação da incidência do mosaico-dourado o delineamento foi em blocos casualizados com duas repetições, na avaliação da caracterização e resistência à antracnose utilizadou-se um bloco único, representado por setenta acessos, em fileiras simples. A severidade do fungo foi avaliada nas folhas das plantas, ocorreu maior severidade na época das chuvas, já a ação de mosca-branca e incidência do vírus ocorreu na época da seca, causando prejuízos à produção da fava. Os acessos apresentaram diferentes graus polimorfismo em relação a todos os caracteres avaliados; incidência de mosaico dourado e resistência à antracnose. As informações sistematizadas puderam ser usadas nos programas de melhoramento, manejo da cultura, formação e manutenção de bancos de germoplasma de fava.

Orientador: Marli de Fátima Stradioto Papa / Banca: Marineide Rosa Vieira / Banca: César Júnior Bueno / Resumo: Plantas apresentam grande diversidade de compostos orgânicos que podem ter ação antifúngica. O objetivo deste estudo foi determinar a atividade antifúngica in vitro e in vivo de extratos de pacari e melão-de-são-caetano sobre o crescimento micelial e a germinação de esporos de Colletotrichum musae. Avaliou-se, também o efeito dos extratos no desenvolvimento de lesões de antracnose em bananas, da variedade Nanicão, sob condições de laboratório e a campo. Os extratos foram obtidos a partir de plantas secas ao sol e em estufa com circulação forçada de ar, moídas, utilizando-se como agente extrator a água ou álcool etílico. Somente o fungicida proporcionaram 100% de inibição do crescimento micelial e da germinação de esporos e o extrato de melão-de-são-caetano hidroetanólico, seco so sol, incorporado a 50% em BDA, proporcionaram 100% de inibição da germinação de esporos. Os extratos de pacari aquoso não diluído proporcionaram as menores percentagens de lesões de antracnose nos frutos. Os extratos hidroetanólicos de pacari retardaram a maturação dos frutos em quatro-cinco dias em relação a testemunha. As propriedades antifúngicas dos extratos de pacari e melão-de-são-caetano detectadas em nosso estudo evidenciaram o uso potencial dos mesmos como uma alternativa aos métodos adotados para o controle da antracnose em banana. / Abstract: Plants present a high diversity of organic compounds that can have antifungal activity. The objective of this study was to determine the in vitro and in vivo antifungal activity of pacari and bitter melon extracts on the mycelial growth and spores germination of Colletotrichum musae. We also aimed to evaluate the effect of these two extracts in the development of anthracnose lesions on bananas variety Nanicão, under laboratory and field conditions. The extracts were obtained by grinding sun- or stews with forced circulation of air plant tissues, using water or ethylic alcohol as extractors. Only the fungicide check inhibited 100% of the mycelial growth and the spores germination, and of bitter melon hydro-ethanolic extracts incorporated at 50% in PDA inhibited 100% of the spores germination. The non-diluted aqueous extracts of pacari provided the lowest percentages of anthracnose lesions on banana fruits. The hydro-ethanolic extract of pacari delayed the maturation of the fruits in at least four to five days in relation to the non-treated checks. The antifungal properties of the pacari and bitter melon extracts detected in our study evidenced their potential use as alternative to the methods commonly adopted for controlling banana anthracnose. / Mestre