Introduction: The neonatal immune system is still immature, which makes them more susceptible to the infectious agents present in that period. Neonatal immune activation is associated with increased permeability of the blood-brain barrier (BBB), causing an inflammatory cascade in the Central Nervous System (CNS) and altering behavioral and neurochemical parameters. One of the hypotheses that has been studied is that neuroinflammation may be involved in neurodegenerative processes, such as in Alzheimer's disease (AD). Objective: To evaluate visuo-spatial memory and the expression of Tau and GSK-3β proteins in hippocampus and cortex of animals exposed to neonatal endotoxemia. Methods: C57BL/6 mice with two days old received a single injection of subcutaneous lipopolysaccharide (LPS). At 60,120 and 180 days old, visual-spatial memory was evaluated through the Morris walter maze and the hippocampus and córtex were dissected to evaluate the expression of Tau and GSK-3β proteins through the use of Western Blot. Results: In the animals exposed to LPS in the neonatal period there were ans visuo-spatial memory impairment at 120 and 180 days old. There was an increase in the expression of GSK-3β in hippocampus of the animals at 60, 120 and 180 days of life. In the cortex, this increase occurred only in 120 and 180 days old. Tau protein expression was high in hippocampus and cortex of animals at 120 days old and only in cortex at 180 days old. Conclusion: The data observed in this study show that neonatal immune activation may be associated with visuo-spatial memory impairment and increased expression of GSK-3β and Tau proteins in long-term. These evidences may base future studies on the relationship between neonatal neuroinflammation and long-term neurodegenerative processes. / Submitted by Paula Dias (paula.dias@unisul.br) on 2018-04-27T14:16:18Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1037 bytes, checksum: 996f8b5afe3136b76594f43bfda24c5e (MD5) Dissertação Paula Dias.pdf: 1153300 bytes, checksum: 9369e92c1914d97d4c1f84f5efb9c319 (MD5) / Approved for entry into archive by Caroline Correa da Cruz (caroline.cruz@unisul.br) on 2018-04-27T20:12:39Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1037 bytes, checksum: 996f8b5afe3136b76594f43bfda24c5e (MD5) Dissertação Paula Dias.pdf: 1153300 bytes, checksum: 9369e92c1914d97d4c1f84f5efb9c319 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-27T20:12:39Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1037 bytes, checksum: 996f8b5afe3136b76594f43bfda24c5e (MD5) Dissertação Paula Dias.pdf: 1153300 bytes, checksum: 9369e92c1914d97d4c1f84f5efb9c319 (MD5) Previous issue date: 2018 / Introdução: O sistema imunológico dos neonatos ainda é imaturo, o que torna-os mais suscetíveis aos agentes infecciosos presentes nesse período. A ativação imune neonatal está associada a um aumento da permeabilidade da barreira hematoencefálica (BHE), provocando uma cascata inflamatória no Sistema Nervoso Central (SNC) e alterando parâmetros comportamentais e neuroquímicos. Uma das hipóteses que vem sendo estudas é que a neuroinflamação possa estar envolvida nos processos neurodegenerativos, como na Doença e Alzheimer (DA). Objetivo: Avaliar o comprometimento da memória visuo-espacial e a expressão das proteínas Tau e GSK-3β em hipocampo e córtex de animais expostos a endotoxemia neonatal. Métodos: Camundongos C57BL/6 com dois dias de vida receberam uma única injeção de lipopolisacarídeo (LPS) subcutânea. Ao completarem 60,120 e 180 dias de vida, a memória visuo-espacial foi avaliada através do Labirinto Aquático de Morris e as estruturas hipocampo e córtex dissecados para avaliação da expressão das proteínas Tau e GSK-3β através da técnica de Western Blot. Resultados: Os animais expostos ao LPS no período neonatal apresentaram um comprometimento da memória visuo-espacial com 120 e 180 dias de vida. Houve um aumento da expressão de GSK-3β em hipocampo dos animais com 60, 120 e 180 dias de vida. Já no córtex, este aumento aconteceu somente em 120 e 180 dias. A expressão da proteína Tau estava elevada em hipocampo e córtex dos animais com 120 dias e apenas em córtex em 180 dias de vida. Conclusão: Os dados observados neste estudo mostram que a ativação imune neonatal pode estar associada a um comprometimento da memória visuo-espacial e a um aumento da expressão das proteínas GSK-3β e Tau tardiamente. Estas evidências podem basear futuros estudos sobre a relação entre neuroinflamação neonatal e processos neurodegenerativos tardios.

Submitted by Pós Imunologia (ppgimicsufba@gmail.com) on 2017-03-13T17:57:30Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_ERICA FARIAS DE OLIVIERA.pdf: 902019 bytes, checksum: 5d6bde605ed80c34917bea18bd246d17 (MD5) / Approved for entry into archive by Delba Rosa (delba@ufba.br) on 2017-03-23T13:38:13Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação_ERICA FARIAS DE OLIVIERA.pdf: 902019 bytes, checksum: 5d6bde605ed80c34917bea18bd246d17 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-23T13:38:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_ERICA FARIAS DE OLIVIERA.pdf: 902019 bytes, checksum: 5d6bde605ed80c34917bea18bd246d17 (MD5) / CAPES / INTRODUÇÃO: A expressão de marcadores de ativação, tais como CD38 e HLA-DR, é frequentemente observada na infecção pelo HIV-1 e tem sido proposto como um marcador de progressão da infecção. OBJETIVO: Analisar os níveis de ativação celular através das frequências destes marcadores em portadores do HIV-1 e coinfecções virais. MATERIAL E MÉTODOS: Foram incluídos 129 pacientes HIV positivos e distribuídos em quatro grupos classificados como, virgem de tratamento (VT), e três diferentes grupos em tratamento e com supressão viral estável, de acordo com o nível de restauração imune: completa (RC, CD4>500 e r CD4/8 >1), parcial (RP, CD4>500 e r<1) e inadequada (RI, CD4<500 e r<1). Indivíduos soronegativos para HIV, HTLV, HBV, HCV e sífilis foram definidos como grupo controle (GC). A frequência de ativação imune celular foi avaliada por citometria de fluxo a partir da expressão dos marcadores CD38 e HLA-DR pelas células TCD4+ e CD8+. Foram realizadas sorologias para CMV e EBV nas amostras de todos os indivíduos, bem como HTLV, HBV, HCV e sífilis nos pacientes infectados pelo HIV-1. RESULTADOS: Os achados demonstraram maior expressão do HLA-DR (17,12%) em comparação ao CD38 (2,02%). Os níveis do HLA-DR foram mais elevados no grupo VT (26,56%) do que no GII (13,01%, p = 0,000), no grupo controle (9,92%, p = 0,000) e no GI (5,40%, p = 0,000). CD38+ esteve aumentado no GII (5,0%), no GC (3,92%) e no GIII (3,14%) comparado ao GI (1,70%, p = 0,007, p = 0,004 e p = 0,029 respectivamente. Células T CD8+ mostraram maior ativação por HLA-DR do que as células T CD4+, enquanto que para o CD38 não houve correlação estatisticamente significante. O resultado mais expressivo das sorologias foi para EBV e CMV, inclusive no GC, seguido por sífilis e HCV nos pacientes. O CONCLUSÃO: Nosso trabalho indica que a razão CD4/CD8 pode ser um bom marcador de ativação imune, em associação ao HLA-DR. / INTRODUCTION: The expression of activation markers, such as CD38 and HLA-DR, is regularly observed in HIV-1 patients and has been proposed as a marker of progression of the infection. OBJECTIVE: Analyze cellular activation levels by measuring the frequencies of these markers among HIV-1 patients. MATERIAL E METHODS: Were included 129 HIV positive patients and divided into four groups classified as virgin treatment (VT) and three different treatment groups and with stable viral suppression, according to the level of immune restoration: full (RC, CD4>500 and r CD4/8>1), partial (RP, CD4>500 and r <1) and inadequate (RI, CD4<500 and r<1). Serum negative individuals for HIV, HTLV, HBV, HCV and syphilis were defined as the control group (GC). The frequency of activated immune cells was assessed by flow cytometry and indicted by expression of CD38 + and HLA-DR markers in CD4 + and CD8 + cells. Foram realizadas sorologias para CMV e EBV nas amostras de todos os indivíduos, bem como HTLV, HBV, HCV e sífilis nos pacientes infectados pelo HIV-1. RESULTS: Results demonstrate a higher expression frequency of HLA-DR (17,12%) compared to CD38 (2,02 %). HLA-DR levels are significantly higher in VT group (26,56%) than in GII (13,01%), p = 0,000, in the control group (9,92%, p = 0,000) and GI (5,40%, p = 0,000). CD38+ presents an increased B group (5,0%), in the control group (3,92%) and in the group C (3,14%) compared to group A (1,70%, p = 0,007, p = 0,004 and p = 0,029 respectively). CD8 T cells showed greater activation by HLA-DR than CD4 cells, whereas for CD38 revealed no statistically significant correlation. The most significant result was the serology for EBV and CMV infections, including GC, followed by syphilis and HCV in patients. CONCLUSION: Our data indicates that the CD4/CD8 ratio may be a good marker of immune activation, in association to marker HLA-DR.

Submitted by Alessandra Portugal (alessandradf@ioc.fiocruz.br) on 2013-09-17T11:44:16Z No. of bitstreams: 1 Debora Batista de Oliveira.pdf: 2887120 bytes, checksum: 263a4a9265044107d6caf01ffb4095e0 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-09-17T11:44:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Debora Batista de Oliveira.pdf: 2887120 bytes, checksum: 263a4a9265044107d6caf01ffb4095e0 (MD5) Previous issue date: 2012-10-29 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / As plaquetas são fragmentos celulares derivados do precursor hematopoiético megacariócito, que desempenham um importante papel na hemostasia, inflamação e resposta imune. Na dengue, as plaquetas constituem uma das populações celulares mais afetadas por mecanismos diretos ou indiretos da infecção. Desta forma, estudos que possam contribuir na compreensão da plaquetopenia, assim como nas alterações funcionais das plaquetas na dengue são de extrema importância para o entendimento da patogenia e no avanço de esquemas terapêuticos durante a infecção humana pelo dengue. O objetivo deste trabalho foi avaliar alterações nas plaquetas durante a infecção humana e ex vivo pelo DENV, observando sua morfologia, perfil de ativação e expressão de receptores do tipo Toll TLR2 e TLR4, interação com o vírus e relação com proteínas plasmáticas associadas à sua ativação e funcionalidade. Para isto, foram utilizados metodologias de citometria de fluxo, microscopia eletrônica de transmissão e ensaios imunoenzimáticos. Utilizando modelo in vitro de ativação em que plaquetas de doadores foram estimuladas com trombina, confirmamos a ativação dessas subpopulações celulares, sem detectar alteração da expressão dos TLR2 e TLR4. Ao avaliarmos o efeito da interação do DENV-2 com plaquetas de doadores, demonstramos evidências morfológicas de ativação e detectamos partículas virais em vesículas citoplasmáticas por microscopia eletrônica. Contudo, nas mesmas condições acima, não detectamos modulação da expressão de marcadores de ativação plaquetária, como CD62P e fibrinogênio, nem de TLR2 ou TLR4 por citometria de fluxo. A análise das plaquetas isoladas de pacientes DENV+ demonstrou maior expressão de CD62P e menor expressão de TLR4 comparado a pacientes com outras doenças febris e controles saudáveis por citometria de fluxo. Não detectamos diferença na expressão de CD40L e TLR2. Morfologicamente, a ativação das plaquetas de pacientes DENV+ foi confirmada. Brevemente, a quantificação de mediadores plasmáticos por ensaios imunoenzimáticos relacionados direta ou indiretamente com a ativação e função plaquetária indicou: (i) níveis aumentados da relação sCD62P/contagem de plaquetas com a gravidade da doença; (ii) envolvimento menor da quantidade de NOx plasmático nos pacientes; (iii) diminuição dos níveis do vasoconstritor TXB2 em pacientes com FD Sem SA comparado aos controles e pacientes Graves; (iv) níveis aumentados de TFPI com a gravidade da doença; (v) níveis diminuídos de CCL5 mas (vi) aumentados de CCL2 com a gravidade da doença. As análises de correlação demonstraram que enquanto os níveis de CCL5 estavam diretamente relacionados com a quantidade de plaquetas, a correlação foi inversa entre TFPI e plaquetas. De forma interessante, níveis aumentados de TXB2 foram vistos em pacientes com extravasamento plasmático comparados aos pacientes sem extravasamento. Nossos resultados confirmaram a capacidade de interação in vitro do DENV e plaquetas, com subsequentes modificações morfológicas. Na infecção natural, plaquetas de pacientes DENV+ são ativadas, inclusive com confirmação do perfil morfológico de ativação. Nós supomos que a diminuição da expressão de TLR4 nas plaquetas da nossa coorte de pacientes poderia estar (i) diretamente relacionado a ativação das plaquetas e/ou (ii) a uma coorte de pacientes clinicamente branda, caracterizada por uma evolução clínica e plaquetopenia pouco agravantes. A relação entre sCD62P/contagem de plaquetas e os níveis de TFPI confirmam a ativação plaquetária e seriam bons marcadores de prognóstico da doença. Além disso, CCL5 e TFPI participariam direta ou indiretamente da plaquetopenia ou da funcionalidade plaquetária. / Platelets are cell fragments derived from the hematopoietic precursor megacaryocyte, which play an important role in hemostasis, inflammation and immune response. In dengue, platelets constitute one of the cell populations most affected by direct or indirect mechanisms of infection. Therefore, studies that may contribute to the understanding of thrombocytopenia, as well as functional changes of platelets in dengue are extremely important for the understanding of the pathogenesis and progress of therapeutics during human infection by dengue. The aim of this study was to evaluate changes in platelets during human and ex vivo infection by DENV, observing its morphology, activation profile and expression of Toll-like receptors TLR2 and TLR4, interaction with the virus and relation with plasma proteins associated to its activation and functionality. To do so, flow cytometry methods, transmission electron microscopy and immunoassays were used. Using in vitro model of platelet activation in which platelets from donors were stimulated with thrombin, we confirmed the activation of these cellular subpopulations without detecting altered expression of TLR2 and TLR4. When evaluating the effect of the interaction of DENV-2 with donor platelets, we demonstrated morphological evidences of activation and detected viral particles in cytoplasmic vesicles by electron microscopy. However, under the same conditions above, we have not detected modulation of the expression of platelet activation markers such as fibrinogen and CD62P or TLR2 or TLR4 by flow cytometry. Analysis of platelets isolated from patients DENV+ demonstrated greater expression of CD62P and lower TLR4 expression compared to patients with other febrile illness and healthy controls by flow cytometry. We did not detect differences in the expression of CD40L and TLR2. Morphologically, the activation of platelet from patients DENV+ was confirmed. Briefly, quantification of plasma mediators by immunoassays related directly or indirectly with activation and platelet function indicated: (i) Increased levels of the relation sCD62P/platelet count in the severity of the disease, (ii) lesser involvement of plasmatic NOx in patients, (iii) decreased levels of vasoconstrictor TXB2 in patients with DF without WS compared to controls and severe patients, (iv) increased levels of TFPI according to the severity of the disease, (v) reduced levels of CCL5 (vi) but increased levels of CCL2 with increased disease severity. Correlation analysis showed that while the CCL5 levels were directly related to the platelet count, inverse correlation between TFPI and platelets occurred. Interestingly, increased levels of TXB2 were seen in patients with plasma leakage compared to patients without leakage. Our results confirmed the ability of in vitro interaction of DENV and platelets, with subsequent morphological changes. In natural infection, platelets from patients DENV+ are activated, even confirming the profile of morphological activation. We hypothesize that the decreased expression of TLR4 in platelets from our cohort of patients could be (i) directly related to platelet activation and/or (ii) to a cohort of patients clinically mild, characterized by clinical progression and thrombocytopenia not aggravated. The relationship between sCD62P/platelet count and levels of TFPI confirm platelet activation and would be good prognostic markers of the disease. Furthermore, CCL5 and TFPI could participate directly or indirectly in thrombocytopenia or in platelet function.

A expressão da HSP70 intracelular está associada a efeitos citoprotetores contra uma variada gama de estímulos estressores, tais como processos inflamatórios, estresse oxidativo, endotoxinas bacterianas, infecções e febre. Este efeito citoprotetor é principalmente atribuído à habilidade de as proteínas de choque térmico estabilizarem estruturas protéicas através de interações reversíveis. A HSP70 foi recentemente detectada no meio extracelular, e sua presença tem sido associada a situações patológicas, nas quais ela exerce efeitos modulatórios sobre células do sistema imunológico. Previamente, nós descrevemos a relação entre os níveis de HSP70 sérica, o estatus oxidante e o desfecho clínico de pacientes sépticos; o grupo de pacientes com maiores níveis pró-oxidantes e maiores níveis de HSP70 sérica também foi aquele que houve maior mortalidade. Afim de investigar a possível associação entre HSP70 oxidada e efeitos citoprotetores ou morte celular, macrófagos da linhagem RAW 264.7 foram incubados com HSP70 e HSP70 oxidada, e a produção de nitrito, proliferação celular, viabilidade celular, produção de espécies reativas de oxigênio, liberação de TNF-α e atividade fagocítica foram avaliadas. Também foram avaliadas as modificações estruturais causadas pela oxidação na HSP70 purificada. Observamos que a oxidação da HSP70 alterou a estrutura da proteína; e que os efeitos modulatórios da HSP70 oxidada sobre a linhagem de macrófagos RAW 264.7 foram diferentes dos efeitos modulatórios da HSP70 nativa. Os macrófagos tratados com HSP70 oxidada apresentaram menor proliferação, maior produção de espécies reativas de oxigênio, menor atividade fagocítica e menor liberação de TNF-α. Estes resultados indicam que a oxidação da HSP70 extracelular modifica suas propriedades sinalizadoras, causando alterações na modulação das funções e da viabilidade dos macrófagos. / Expression of intracellular HSP70 is associated to cytoprotective effects against a wide range extent of stressful stimuli, such as inflammation, oxidative stress, hypoxia, endotoxins, infections and fever. This cytoprotective effect is mainly attributed to their ability to stabilize protein structures through chaperon-like reversible interactions. HSP70 was recently detected in the extracellular medium and its presence in serum is commonly associated with pathological situations, where it exerts modulatory effects on cells of the immune system. Previously, we have described the relationship between serum HSP70 levels, oxidant status and clinical outcome of septic patients; the group of patients with higher pro-oxidant status and higher serum HSP70 had also higher mortality. To investigate the possible association between oxidized HSP70 and cytoprotection or cell death, we incubated RAW 264.7 macrophages with oxidized HSP70 and evaluated nitrite production, cell proliferation, cell viability, reactive oxygen species production, TNF-α release and phagocytic activity. We also evaluated structural modifications caused by oxidation in purified HSP70. Oxidation of HSP70 altered its protein structure; besides, the modulatory effect of oxidized HSP70 on RAW265.7 cells was different from native HSP70. Macrophages treated with oxidized HSP70 presented lower proliferation, higher reactive oxygen species production, lower phagocytic activity and TNF-α release. These results indicate that oxidation of extracellular HSP70 modify its signaling properties, causing alterations on its modulatory effects on macrophage function and viability.

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2015-02-10T16:31:37Z No. of bitstreams: 1 Vinicius Costa Souza Ferreira, Papel do fator... 2014.pdf: 10087481 bytes, checksum: 8c34a10bbc4c46304eaf9166412e6f0f (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2015-02-10T16:31:51Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Vinicius Costa Souza Ferreira, Papel do fator... 2014.pdf: 10087481 bytes, checksum: 8c34a10bbc4c46304eaf9166412e6f0f (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2015-02-10T16:32:18Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Vinicius Costa Souza Ferreira, Papel do fator... 2014.pdf: 10087481 bytes, checksum: 8c34a10bbc4c46304eaf9166412e6f0f (MD5) / Made available in DSpace on 2015-02-10T16:32:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Vinicius Costa Souza Ferreira, Papel do fator... 2014.pdf: 10087481 bytes, checksum: 8c34a10bbc4c46304eaf9166412e6f0f (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / A leishmaniose visceral é causada pelo parasita Leishmania infantum. A infecção ocorre quando flebótomos infectados se alimentam na derme do hospedeiro vertebrado, inoculando o parasita. A infecção produz uma resposta com diversas moléculas inflamatórias, como os mediadores lipídicos. O fator de ativação de plaquetas (PAF) é um potente mediador lipídico derivado de um lisofosfolipídio. PAF participa da fisiologia normal da célula e possui um perfil pró-inflamatório. A participação de mediadores lipídicos, como eicosanóides e PAF, já foi identificada na imunopatogênese das leishmanioses. PAF gerado pelo hospedeiro tem efeito leishmanicida e de controle da infecção por L. amazonensis. PAF-acetilhidrolases (PAF-AH) são fosfolipases A2 que hidrolisam PAF e foi demonstrado que PAF-AH podem ser um fator de virulência devido a essa habilidade. O objetivo desse estudo foi avaliar o papel do PAF e de uma PAF-AH na infecção de macrófagos por L. infantum. Foi observado que PAF 1μM, quando adicionado durante e após a infecção, foi capaz de diminuir 50% da infecção após 72 horas, bem como a viabilidade dos parasitas dentro dos macrófagos num mecanismos independente do seu receptor PAFR e da produção de óxido nítrico. PAF 10μM interrompeu o crescimento de promastigotas de L. infantum em cultura axênica. Uma PAFAH, com elevada identidade e semelhança com PLA2/PAF-AH de outros tripanossomatídeos, foi identificada no genoma de L. infantum. A clonagem e expressão recombinante produziu uma proteína de cerca de 69kDa, com atividade PAF-AH. Frações celulares do parasita, enriquecidas com estruturas de membrana também apresentaram atividade PAF-AH. Os resultados indicam que PAF é capaz de diminuir a infecção de macrófagos por L. infantum e que o parasita possui uma PAF-AH funcional possivelmente envolvida com sua virulência. / Visceral leishmaniasis is caused by Leishmania infantum parasites. Infection occurs when infected sandflies feed on vertebrate host skin delivering the parasite which survive, multiply and spread on the parasitophorous vacuoles of macrophages. The inflammatory response during the infection leads to the production of diverse bioactive molecules, as lipid mediators. The platelet activating factor (PAF) is a lipid mediator derived from a lysophospholipid. PAF has a role in normal cellular physiology, acting as proinflamatory molecule. The participation of some lipid mediators, as eicosanoids and PAF has been identified in leishmaniasis. PAF produced by the host is able to kill the parasite and control the infection by L. amazonensis. PAF-acetylhydrolases (PAF-AH) are phospholipases A2 (PLA2) that hydrolyse PAF, and possibly involved in pathogen virulence. The aim of this study was to evaluate the role of PAF on macrophages infection by L. infantum and identify a PAF-AH expressed by the parasite. PAF 1μM, added during and after the infection, was able to reduce approximately 50% of infection, as well as, the viability of parasites inside macrophages. Apparently this reduction occurs by an classical PAF receptor and nitric oxide production independent mechanism. PAF 10μM inhibited L. infantum promastigotes growing in axenic culture. A PAF-AH with high identity to PLA2/PAF-AH of others trypanosomatids was identified in L. infantum genome. The cloning and recombinant expression produced a 69kDa protein with PAF-AH activity. Cellular fractions from parasites, with membrane structures also presented PAF-AH activity. The results suggest that PAF is able to decrease machophage infection by L. infantum witch has a functional PAFAH possibly related to its virulence

Made available in DSpace on 2016-05-16T12:51:22Z (GMT). No. of bitstreams: 2 natalia_rocha_ipec_mest_2013.pdf: 1339870 bytes, checksum: 1b75fa3998a6ced2d2cf3691a4f88a49 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2013 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Infectologia Evandro Chagas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A infecção pelo HPV é o principal fator de risco para o desenvolvimento do carcinoma cervical. Contudo, a maioria das mulheres permanece assintomática, desenvolvendo lesões intraepiteliais de baixo e alto grau. Estudos demonstram que polimorfismos nas regiões promotoras de genes de citocinas estão associados com a gravidade de muitas doenças infecciosas. Dentre estas, podemos citar a citocina pró-inflamatória TNF-\F061, onde suas atividades celulares são mediadas pela interação entre a citocina e seus receptores (TNFR1 e R2). Assim, tivemos como objetivo neste estudo, identificar polimorfismos dos receptores de TNF-\F061 e associar ao aparecimento e progressão da lesão cervical, além de avaliar a expressao da proteína TNFR1 em lesoes cervicais. As técnicas de PCR e RFLP foram realizadas para identificar o polimorfismo de base única (SNP) do gene TNFR1 na posição +36A/G. Para a expressão da proteína foi realizada a imunohistoquimica em fragmentos de tecido parafinado provenientes de lesões cervicais e histerectomias (controle) Foram incluídas 365 mulheres neste estudo, sendo 183 pacientes e 182 controles. O genótipo AA TNFR1+36A/G foi associado com a proteção ao desenvolvimento de lesões de baixo grau (p=0,03) Para a análise da expressão de TNFR1, foram selecionadas 46 mulheres (17 controles, 15 HSIL e 14 LSIL). Foi observado um aumento na expressão deste receptor em células inflamatórias no corion de mulheres portadores de HSIL quando comparadas com o grupo controle (p=0,001). Ao associarmos os genótipos com a expressão da proteina, foi observado que portadoras de TNFR1+36AA não apresentam alterações na expressão TNFR1 independente do grau de lesão cervical. Assim, a presença de TNFR1 pode estar sendo modulada negativamente pela infecção por HPV e este marcador pode ser utilizado como indicador para a progressão de lesões pré-malignas cervicais / HPV infection is the main risk factor for development of cervical carcinoma. However, most women remain asymptomatic, develo ping high grade and low intraepithelial lesions. Studies demonstrated that polymorphisms in promoter regions of cytokines genes are associated with the severity of many infectious diseases. Among these, we mention the proinflammatory cytokine TNF -  , where their cellular activities are mediated by cytokine and their receptors (TNFR1 and R2) interaction . Thus, in this study, we have the aim to identify TNF -  receptors polymorphisms and associate with the onset and progression of cervical lesions, and to evalu ate the TNFR1 expression in cervical lesions. PCR and RFLP techniques were performed to identify the single base polymorphism (SNP) TNFR1 gene at position +36 A/G. For protein expression , it was performed immunohistochemistry on paraffin tissue fragments f rom cervical lesions and hysterectomies (control). Three hundred and sixty five women were included, 183 patient s and 182 controls. The AA genotype TNFR1 +36 A / G was associated with protection from developing low - grade lesions (p = 0.03) for the analysis of TNFR1 expression, we selected 46 women (17 controls, 15 HSIL and 14 LSIL). It was observed a n increase in the receptor expression o n inflammatory cells from corion of HSIL women when compared with the control group (p = 0.001). By associating genotypes with expression of the protein, it was observed that carriers of TNFR1 +36 AA did not show changes in the TNFR1expression , independent cervical lesion degree. Thus, the TNFR1 presence may be negatively being modulated by HPV infection and this marker can b e used as an indicator of premalignant cervical lesions progression .

Introdução: Macrófagos de fenótipo M1 (ativação clássica) e M2 (ativação alternativa) estão relacionados com diversos processos patológicos como o câncer, a aterosclerose e doenças neurodegenerativas. No microambiente tumoral, os macrófagos associados ao tumor (TAM) têm atuação controversa na progressão da doença. Um modelo in vitro pode servir para avaliar a influência dessa alteração fenotípica em diversas patologias. A linhagem celular monocítica humana U937, sob estímulo de PMA (do inglês, Phorbol 12-myristate 13-acetate), se diferencia em macrófagos típicos. Estes adquirem fenótipos M1 e M2 quando estimulados, respectivamente, por LPS/IFN- e IL-4. Objetivo: Estabelecer um modelo in vitro para o estudo do papel dos macrófagos e seu envolvimento na progressão de doenças, bem como, sua caracterização fenotípica nesses eventos. Para tal, utilizamos: a) meta-análise de dois conjuntos de dados de micro-arranjos para avaliar os genes relacionados e b) análise de marcadores de diferenciação celular, taxa de adesão, alterações morfológicas e níveis de espécies reativas. Métodos: Cultura Celular: Linhagem celular humana U937, cultivada com meio de cultura RPMI 1640 e tratada com 10nM de PMA, por 12, 24, 48 e 72 horas. Quantificação de Espécies Reativas de Oxigênio: Células U937 diferenciadas e indiferenciadas incubadas com a sonda DCF para avaliar a formação de espécies reativas, medida fluorescência por 1h. Ensaio de MTT e Adesão Celular: Células U937 diferenciadas e indiferenciadas foram incubadas com solução de MTT por 1h, para análise da viabilidade celular, foi medida absorbância em 560nm e índice de adesão por método de SRB. Produção de óxido Nítrico: Quantificado pelo método de Griess, a 540nm. Análise Morfológica por meio de Imagens das Células: Imagens obtidas após tempos de tratamento com PMA em 0, 12, 24, 48 e 72 horas. Bioinformática: a) obtidos dois conjuntos de dados de micro-arranjos do Gene Expression Omnibus (GEO) - GSE5099 e GSE15038; b) criamos redes de genes para o fenótipo M1 e M2, com ferramenta on-line STRING e software MEDUSA; c) rede de genes e informações dos micro-arranjos foram combinados e plotados em gráficos de acordo com a sua topologia, com software ViaComplex. Resultados: As imagens mostraram alteração morfológica característica da célula monocítica U937 (célula proliferativa) para macrófago (célula aderida na placa), quando tratadas com PMA. Quanto aos níveis de espécies reativas formadas e a taxa de aderência medida, foi maior nas células tratadas, no decorrer do tempo de tratamento. A taxa de proliferação da célula controle U937 aumentou com o tempo, enquanto que, observamos uma diminuição na proliferação das células tratadas com PMA. A análise bioinformática mostrou um aumento na expressão, tratadas x controle, de genes do fenótipo M1 e M2, nas células U937 diferenciadas por PMA e polarizadas com LPS/IFN gama e IL-4, respectivamente. O fenótipo M1 mostrou aumento na formação de ER e de NO quando tratado com LPS + IFN-gamacombinados. Houve uma diminuição de NO no fenótipo M2 quando ativadas por IL-4. Conclusão: Nosso trabalho descreve um método válido de diferenciação macrofágica da linhagem humana U937 e a possibilidade de sua polarização ao fenótipo M1 e M2 quando estimulada com PMA e posteriormente com LPS/IFN gama e IL-4, respectivamente. A compreensão das relações entre as alterações fenotípicas dos macrófagos e do microambiente gerado é importante para o desenvolvimento de pesquisas para combater/atenuar a agressividade das patologias. / Introduction: In vitro model of macrophages (MF) can be used to evaluate the influence of these cells in human pathologies. Objective: To establish an in vitro model to study macrophages and it’s evaluating M1/M2 polarization. Methods: The human U937 cell line was grown in medium RPMI 1640 and differentiated into functional macrophages by 10 nM phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA)-treatment, with M1 or M2 phenotypes with LPS/IFNg and IL-4, respectively. Reactive Oxigen Species (ROS) (time course of DCF oxidation), nitric oxide (NO) (Griess method), cell proliferation (MTT assay) and adherence (SRB method), and change in cellular morphology were determined. Moreover, two microarray data sets from Gene Expression Omnibus (GEO) (GSE5099 and GSE15038) were used to analyze differential M1/M2 gene expression with the online bioinformatics tools STRING, MEDUSA and Via Complex. Results: Time course experiments (0, 24, 48 and 72h) showed decreased cell proliferation with increase in morphological changes, cell adherence and ROS generation in PMA-treated U937 cells compatible with the acquisition of a macrophage-like phenotype. Bioinformatics approach showed increased expression in M1/M2 genes by PMA-treatment. 24h of LPS/IFNg- treatment induced increased NO, ROS, and the expression of M1 genes (classical activation MF), while 24h IL-4-treatment induced the expression of M2genes (alternative activation MF). Conclusion: This simple human macrophage-like differentiation and M1/M2 activation protocol could be used in vitro to establish the role of these cells in human pathologies.

Submitted by Rodrigo de Araujo Bonetti de Poli (rodrigo.arj93@gmail.com) on 2018-09-20T13:26:47Z No. of bitstreams: 2 Dissertação_VFINAL.pdf: 2348774 bytes, checksum: 06c68b262555ddfea42a18851595512f (MD5) ata de defesa0001.pdf: 1297795 bytes, checksum: 6bd39934b5db02b0b7a81951cbc33ba6 (MD5) / Rejected by Lucilene Cordeiro da Silva Messias null (lubiblio@bauru.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo as orientações abaixo: 1 - A ata de defesa deve ser inserida no corpo no texto. Agradecemos a compreensão. on 2018-09-20T19:08:30Z (GMT) / Submitted by Rodrigo de Araujo Bonetti de Poli (rodrigo.arj93@gmail.com) on 2018-10-03T20:14:11Z No. of bitstreams: 1 Dissertação FINAL.pdf: 2546681 bytes, checksum: 7ecb5edb5c025ff32bea79318c106654 (MD5) / Approved for entry into archive by Lucilene Cordeiro da Silva Messias null (lubiblio@bauru.unesp.br) on 2018-10-04T17:34:41Z (GMT) No. of bitstreams: 1 poli_rab_me_bauru.pdf: 2546681 bytes, checksum: 7ecb5edb5c025ff32bea79318c106654 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-10-04T17:34:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 poli_rab_me_bauru.pdf: 2546681 bytes, checksum: 7ecb5edb5c025ff32bea79318c106654 (MD5) Previous issue date: 2018-08-20 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O objetivo do presente estudo foi investigar os efeitos da potenciação pós ativação (PAP) induzida por drop jumps no tempo até a exaustão a 115% da intensidade associada ao consumo máximo de oxigênio (("iV" ) ̇"O" _"2max" ) em ciclo ergômetro, em aspectos neuromusculares da fadiga (central e periférica) e sobre as vias metabólicas não oxidativas (capacidade anaeróbia, via glicolítica e dos fosfagênios). Para isso, o projeto foi dividido em dois estudos independentes. No Estudo A, 14 ciclistas recreacionais do sexo masculino (34 ± 4 anos) foram submetidos a 5 sessões de avaliações. Na primeira sessão realizaram teste incremental até exaustão (TInc), na segunda e terceira avaliações realizaram familiarização ao esforço supramáximo a 115% da ("iV" ) ̇"O" _"2max" , enquanto que na quarta e quinta sessões os participantes realizaram de maneira randomizada o esforço supramáximo a 115% da ("iV" ) ̇"O" _"2max" com e sem PAP (controle). Como esforço indutor da PAP, foram realizados 5 drop jumps (15s de intervalo entre eles) antes do esforço supramáximo. Nas sessões 4 e 5, a fadiga neuromuscular foi avaliada por meio de contrações voluntárias máximas (CVM) de extensão do joelho e estimulação elétrica periférica (PNS) realizadas antes e após o esforço supramáximo. Além disso, a eletromiografia de superfície foi realizada durante o esforço supramáximo para mensuração da roots mean square (EMGRMS) e a frequência mediana (EMGFM) e analisadas de forma estratificada a cada 25% de tempo total de esforço (0-25%, 25-50%, 50-75% e 75-100%). No Estudo B, 16 ciclistas recreacionais do sexo masculino (33 ± 6 anos) realizaram desenho experimental semelhante ao estudo A, entretanto na quarta e quinta sessões, as contribuições dos sistemas metabólicos foram mensuradas pelo componente rápido do excesso de consumo de oxigênio pós exercício (EPOC) (via dos fosfagênios) e pelo delta de lactato (via glicolítica), assumindo a soma das contribuições dessas vias como capacidade anaeróbia (AC[La-]+EPOCrápido), além disso a capacidade anaeróbia também foi mensurada pelo déficit máximo de oxigênio acumulado. Como resultados, no estudo A foi verificado uma melhora do significativa desempenho no esforço supramáximo após a realização da PAP (p=0,02; Δ%=+9,85%). Ambas condições (controle e PAP) apresentaram quedas significativas na força pico medidas durante a CVM e na força evocada pelo estímulo elétrico duplo na musculatura em repouso (p<0,01 e p<0,01, respectivamente) quando comparado o momento pré e pós esforço, indicando uma fadiga periférica causada pelo esforço. Entretanto não houve interação entre as condições (F=4,19; p=0,06 e F=3,03; p=0,09, respectivamente). A EMGRMS e a EMGFM do último quarto de esforço (75-100%) foi significativamente maior que os momentos 0-25%, 25-50%, 50-75%, para ambas as condições (p<0,02), entretanto não houve interação entre grupos (p<0,05). No Estudo B o desempenho no esforço supramáximo foi significativamente maior na condição PAP (p=0,05; Δ%=+7,44%). A contribuição glicolítica e a capacidade anaeróbia mensurada pelo AC[La-]+EPOCrápido foram maiores após a PAP (p=0,002; Δ%= +9,09% e p=0,04; Δ%= +7,75%, respectivamente), entretanto, a contribuição dos fosfagênios não apresentou diferenças significativas entre condições (p=0,35). Portanto, a PAP foi efetiva em melhorar o desempenho em um esforço supramáximo em ciclo ergômetro, tendo sua melhora acompanhada por um aumento da participação glicolítica e da capacidade anaeróbia, além de causar uma “preservação” do aparato neuromuscular durante o esforço para o vasto lateral e o glúteo máximo. / The aim of the present study was investigating the effects of post activation potentiation (PAP) induced by drop jumps in performance during a supramaximal effort at 115% of the intensity associated with maximal oxygen uptake (iV̇ O2max) on a cycle ergometer, also investigating the influence of PAP on neuromuscular fatigue (central and peripheral) and, on the non-oxidative metabolic pathways (anaerobic capacity, glycolytic pathway and phosphagen). Therefore, the project was divided in two independent studies. In Study A, 14 recreational male cyclists (34 ± 4 years) underwent 5 sessions of evaluations, in the first session they performed a graded exercise test (GXT), in the second and third evaluations they performed familiarization to the supramaximal effort to 115% of the iV̇ O2max. In the fourth and fifth sessions, the participants randomly performed the supramaximal effort at 115% of the iV̇ O2max with PAP and without PAP (control). To induce PAP, the volunteers performed 5 drop jumps (15s interval between them) 2 minutes before the supramaximal effort. In sessions 4 and 5, neuromuscular fatigue was assessed by maximal voluntary contractions (CVM) of knee extension with peripheral electrical stimulation (SNP) performed before and after the supramaximal effort. In addition, surface electromyography was performed during the supramaximal effort to measure roots mean square (EMGRMS) and the median frequency (EMGFM) for every 25% of total effort time (0-25%, 25-50%, 50-75% and 75-100% %). In Study B, 14 male recreational cyclists (33 ± 6 years) performed experimental design similar to study A, however in the fourth and fifth session, the contributions of the non-oxydative metabolic systems were measured by the fast component of the excess post-exercise oxygen consumption (EPOC) and the lactate delta (glycolytic pathway), assuming the sum of the contributions of these pathways as anaerobic capacity (AC[La -] + EPOCfast). In addition, the anaerobic capacity was also measured by the maximum accumulated oxygen deficit (MAOD). In study A, an improvement in the supramaximal effort was observed after PAP (p=0.02, Δ%=+9.85%). Both conditions (control and PAP) showed significant decrease in the peak force measured during the CVM and in the force evoked by the double electric stimulus in the resting muscles (p<0.01 and p <0.01, respectively) when compared to the pre and post moments, indicating peripheral fatigue caused by the supramaximal effort. However, ere was no interaction between the conditions (F=4.19, p=0.06 and F=3.03, p=0.09, respectively). The EMGRMS and EMGFM of the last quarter of effort (75- 100%) was significantly higher than the 0-25%, 25-50%, 50-75%, moments for both conditions (p <0.02), however there was no interaction between groups (p<0.05). In Study B, performance on supramaximal effort was significantly higher in the PAP condition (p=0.05, Δ%=+7.44%). The glycolytic contribution and the anaerobic capacity measured by AC[La -] + EPOCfast was higher after PAP (p=0,002; Δ%= +9,09% e p=0,04; Δ%= +7,75%, respectively), however, the contribution of the phosphagen pathway did not show significant differences between conditions (p = 0.35). Therefore, the PAP was effective in improving the performance in a supramáximo effort in cycle ergometer, having its improvement accompanied by an increase in the glycolytic participation and in anaerobic capacity, in addition to causing a "preservation" of the neuromuscular apparatus during the effort for the vastus lateralis and gluteus maximus / FAPESP: 2016/17836-2

Made available in DSpace on 2016-06-02T19:56:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DissKOR.pdf: 1016506 bytes, checksum: fc76d477ed99b6def21ffb265654fc0c (MD5) Previous issue date: 2005-04-08 / Universidade Federal de Sao Carlos / 15%Ni/Al2O3 catalysts was obtained by impregnation with Ni(NO3)2 aqueous solution and promoted with Au and Ag. The Au was successively impregnated with aqueous solution of [Au(NH3)4](NO3)3. The Ag was coimpregnated with aqueous solution of AgNO3- Ni(NO3)2. The effect of Ag and Au on the catalytic behavior of Ni/Al2O3 catalysts in the reaction of steam reforming of CH4 was elucidate. The catalysts were characterized by temperatureprogrammed reduction (TPR), temperature-programmed dessorption of H2 (TPDH2) and Fourier transform infrared spectroscopy (FTIR) of CO adsorption. TPR results indicated that NiO is in weak interaction with support and the temperature reduction of NiO is independent of Ag and Au presence. FTIR data of CO adsorbed showed that Ag and Au suppress the CO adsorption in poli-coordination relative to the linear CO. Ag or Au on the Ni surface presents a determinant role in the block of graphitic carbon formation in the reaction of steam reforming of CH4. The fit of Arrhenius equation to rate of the total reaction showed a compensation effect between the apparent activation energy (Ea ap) and logarithmic of prefactor (k0). The linear increase of Ea ap with rise of lnk0 is observed increasing Ag and Au loading, which is followed by decreasing of the catalytic activity. Theses results suggest that the CHx intermediates, formed in the determinant stage of global velocity, show low interaction of with surface of Ni. The increase of the resistance for graphite formation by presence of Ag or Au is mainly attributed to the block of highly uncoordinated Ni atoms, which are higher activity to activation of CH4 and act as nucleation site for graphite formation. / Catalisadores de 15%Ni/Al2O3 foram preparados por impregnação com solução aquosa de Ni(NO3)2 e promovidos com Au e Ag. O Au foi adicionado através da impregnação sucessiva da solução aquosa de [Au(NH3)4](NO3)3. A Ag foi adicionada por co-impregnação com solução aquosa de AgNO3-Ni(NO3)2. O efeito da Ag e do Au no comportamento catalítico do Ni/Al2O3 foi verificado na reforma a vapor do CH4. Os catalisadores foram caracterizados por redução a temperatura programada (TPR), dessorção a temperatura programada de H2 (TPDH2) e espectroscopia no infravermelho do CO adsorvido com transformada de Fourier (FTIR). Resultados de TPR indicaram que o NiO está em baixa interação com o suporte e a temperatura de redução do NiO é independe da presença de Ag ou Au. Dados de FTIR do CO adsorvido mostram que a Ag e Au suprimem a adsorção do CO poli-coordenado em relação ao CO linear. Ag ou Au sobre a superfície do Ni apresenta um papel determinante no bloqueio de formação de carbono grafítico na reforma a vapor do CH4. O ajuste da equação de Arrhenius à taxa total de reação mostra um efeito de compensação entre a energia de ativação aparente (Ea ap) e o logarítmico do fator pré-exponencial (k0). O aumento da linar da Ea ap com o aumento do lnk0 é observado aumentando o teor de Ag e Au, o qual é seguido pelo decréscimo da atividade catalítica. Estes resultados sugerem que os intermediários CHx, formados na etapa determinante da velocidade global, mostram uma baixa interação com a superfície do Ni. O aumento da resistência à formação de grafíte pela presença de Ag e Au é atribuído principalmente ao bloqueio dos átomos de Ni de baixa coordenação, os quais são altamente ativos para ativação do CH4 e atuam como sítios nucleadores da formação de grafite.

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:36:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 3142.pdf: 13165024 bytes, checksum: 7811222dc9af6c02f05d9898f33143c4 (MD5) Previous issue date: 2010-07-30 / Universidade Federal de Sao Carlos / The rational development of crystal structures requires consistent and directional formation of its synthons to control the supramolecular arrangement. Hydrogen bonds between atoms with high electronegativity (OH O and N-H...O) have greater strength and directionality compared to other interactions (C-H...N, C-H..._, _..._ ), so they are reliable for the design of these structures. However, some studies show that these interactions are not enough to predict a specific supramolecular arrangement, for example, synthons of carboxylic acids have centrosymmetric dimers {..H-O-C=O}2 in only one third of the structures with the potential to achieve these interactions. In this work several conformers of N, N'-bis (pyridin-n-ylmethyl)ethanediamide and their thioamides analogous were studied theoretically (B3LYP/631-G**) and their stabilities were compared to those of the conformation adopted in the crystal. The origin of the rotational barrier in the C-N bonds of amides and thioamides were analyzed through the changes in geometric parameters, partial charges and bond orders. It was observed that (thio)amide bonds in the gas phase have properties that direct the crystal packing to the ZZ conformation. As to the orientations of the pyridyl rings (Planar, U shaped and S shaped), the electronic structures of individual molecules do not present stabilizing forces that can be carried to the solid state without the influence of intermolecular interactions, thus, the choice of the crystalline conformation related to the pyridyl rings is dictated by intermolecular forces. It was also proved that the origin of the rotational barrier can be described by the classical resonance model. / O desenvolvimento racional de estruturas cristalinas requer a formação consistente e direcional de seus synthons para que haja o controle do arranjo supramolecular. As ligações de hidrogênio entre átomos com elevada eletronegatividade (O-H...O e N-H...O) possuem força e direcionalidade maior quando comparadas com outras interações (C-H...N, C-H..._, _... _), sendo portanto as mais confiáveis para o design dessas estruturas. Porém, alguns estudos mostram que essas interações não são suficientes para a predição de uma determinada estrutura supramolecular, por exemplo, os synthons de ácidos carboxílicos apresentam dímeros centrossimétricos {...H-O-C=O}2 em apenas um terço das estruturas com potencial para realizar essas interações. No presente trabalho diversos confôrmeros de N,N -bis(piridina-nilmetil) etanodiamida e tioamidas análogas foram estudados teoricamente (B3LYP/631-G**) correlacionando suas estabilidades com a conformação adotada no estado cristalino. Paralelamente, analisou-se a origem da barreira rotacional em ligações C-N destas amidas e tioamidas por meio de variações de parâmetros geométricos, cargas parciais e ordens de ligação. A partir de os resultados observou-se que as ligações (tio)amidas apresentam propriedades no estado gasoso que direcionam seus empacotamentos para a conformação ZZ. Já em relação às orientações dos anéis piridila (Plana, em U e em S), as estruturas eletrônicas das moléculas individuais não possuem forças estabilizadoras que podem ser carreadas diretamente para o estado sólido, ou seja, sem que haja influência das interações intermoleculares, que em última instância ditarão a escolha da conformação cristalina dos anéis piridila. Comprovamos que a origem da barreira rotacional pode ser explicada pelo modelo de ressonância clássico.