Submitted by Maria Anália Conceição (marianaliaconceicao@gmail.com) on 2016-07-14T14:23:19Z No. of bitstreams: 1 Publico-05.pdf: 1607531 bytes, checksum: 67899ba37fe0afd3c83933baf91264f2 (MD5) / Approved for entry into archive by Maria Anália Conceição (marianaliaconceicao@gmail.com) on 2016-07-14T14:24:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Publico-05.pdf: 1607531 bytes, checksum: 67899ba37fe0afd3c83933baf91264f2 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-14T14:24:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Publico-05.pdf: 1607531 bytes, checksum: 67899ba37fe0afd3c83933baf91264f2 (MD5) Previous issue date: 2009 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Organização Pan-Americana da Saúde (OPAS) / Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA) / Objetivo. O objetivo desse estudo foi avaliar o efeito microbiocida dos biocidas clorexidina, triclosan, PVP-I e cloreto de benzalcônio contra clones bacterianos resistentes disseminados no território brasileiro. Métodos. O efeito microbiocida do gluconato de clorexidina (nas concentrações de 0,2 e 2%), PVP-I (0,5 e 1%), cloreto de benzalcônio (5 e 10%) e triclosan (0,2 e 0,5%) foi avaliado contra duas amostras de Staphylococcus aureus (MRSA - SCCmec tipos III e IVc); uma amostra de E. faecalis resistente a vancomicina (VRE; vanA); uma amostra de P. aeruginosa produtora de SPM-1; uma amostra de A. baumannii resistente a polimixina e uma amostra de K. pneumoniae produtora de IMP-1. Os testes foram realizados de acordo com "European Standard EN1040 - Quantitative Suspension Test". O neutralizador utilizado também foi preparado de acordo com a padronização EN 1040. Biocidas foram inativados após um minuto e cinco minutos de contato com as amostras testadas. O biocida que demonstrou redução ≥ 5 log no número de UFC/mL foi considerado ativo. As cepas S. aureus ATCC 6538 e P. aeruginosa ATCC 15442 foram utilizadas como controle de qualidade do teste. A relação genética dos isolados que apresentaram redução de sensibilidade aos biocidas testados foi confirmada pela técnica de eletroforese em campo pulsado. Resultados. O gluconato de clorexidina e PVP-I apresentaram redução ≥ cinco log no número de UFC/ml na concentração de 2%. O cloreto de benzalcônio não apresentou efeito microbiocida na concentração de 5% para as amostras de S. aureus ATCC 6538, S. aureus Sccmec IVc, A. baumannii, K. pneumoniae e P. aeruginosa P10093 e ATCC 15442. Na concentração de 10% apresentou efeito microbiocida contra quase todas as amostras do teste, exceto S. aureus ATCC 6538, P. aeruginosa P10093 e K. pneumoniae. Triclosan apresentou atividade contra as amostras Gram positivas, com exceção da amostra de E. faecalis na concentração de 0,2%, entretanto para as amostras de P. aeruginosa, A. baumanii e K. pneumoniae não foi efetivo. Conclusão. PVP-I e clorexidina foram os agentes mais ativos contra os clones bacterianos multirresistentes. Em contraste, triclosan não apresentou efeito microbiocida contra isolados clínicos Gram negativos. A correlação da resistência entre antibióticos e biocidas ainda é pouco esclarecida e pode ser mediada por diversos mecanismos. Estudos adicionais nesse tema são extremamente importantes para determinar a importância epidemiológica dos nossos achados. / Purpose. The aim of this study was to evaluate the microbiocidal effect of distinct concentrations of chlorhexidine gluconate, triclosan, PVP-I and benzalkonium chloride, against multidrug-resistant bacterial clones spread out in the Brazilian territory. Methods. The microbiocidal effect of chlorhexidine gluconate, triclosan, PVP-I and benzalkonium chloride was evaluated against two Staphylococcus aureus (MRSA - SCCmec types III and IVc); one vancomycin-resistant Enterococcus faecalis (VRE; vanA); one SPM-1-producing Pseudomonas aeruginosa isolate; one carbapenem-resistant Acinetobacter baumannii and IMP-1- producing Klebsiella pneumoniae. Tests were carried out according to European Standard EN1040 - Quantitative Suspension Test. Neutralizer was prepared according the EN1040. Biocides were inactivated after one minute and five minutes of contact. S. aureus ATCC 6538 and P. aeruginosa ATCC 15442 were tested as quality control strains. The genetic relatedness of the isolates that showed reduced susceptibility to biocides was confirmed by Pulsed-Field Gel Electrophoresis. Results. Chlorhexidine gluconate and PVP-I showed ≥ 5 log reduction in the number of CFU/mL. Benzalkonium chloride did not demonstrate microbiocidal effect in the 5% concentration against S. aureus ATCC 6538, S. aureus Sccmec type IVc, A. baumannii, K. pneumoniae and P. aeruginosa P10093 and ATCC 15442. The 10% concentration of benzalkonium chloride showed microbiocidal effect against all isolates, except S. aureus ATCC 6538, P. aeruginosa P10093 and K. pneumoniae. Triclosan was active agaist Gram positive isolates, except E. faecalis in the 0,2% concentration, however did not showed activity to P. aeruginosa, A. baumanii and K. pneumoniae. Conclusion. PVP-I and chlorhexidine gluconate were the most active agents tested and kept activity against multidrug resistant clones. In contrast, Triclosan had poor ME against Gram-negative clinical isolates. The correlation between antibiotic and biocide resistance is still unclear and could be mediated by several mechanisms. More studies are necessary to determine the epidemiological importance of our findings.

Submitted by Tatiana Silva (tsilva@icict.fiocruz.br) on 2013-01-24T18:30:13Z No. of bitstreams: 1 mariana_g_a_t_cunha_ioc_bcm_0027_2010.pdf: 1299175 bytes, checksum: da479ef7164acc425c4555fb66d2ee9d (MD5) / Made available in DSpace on 2013-01-24T18:30:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 mariana_g_a_t_cunha_ioc_bcm_0027_2010.pdf: 1299175 bytes, checksum: da479ef7164acc425c4555fb66d2ee9d (MD5) Previous issue date: 2010 / Fundação Oswaldo Cruz.Instituto Oswaldo Cruz. Rio de janeiro, RJ, Brasil / A incidência de sepse nas Unidades de Terapia Intensiva é alta e representa uma das maiores causas de mortalidade. Foi demonstrado pelo nosso laboratório que a atividade da enzima PAF-AH está reduzida no curso da sepse e que animais submetidos à sepse de origem polimicrobiana (CLP) e tratados com rPAF-AH apresentavam uma maior taxa de sobrevida quando comparados com animais não tratados e submetidos ao CLP. O objetivo desse estudo foi analisar o efeito do tratamento com a rPAF-AH sobre a eliminação bacteriana e os mediadores envolvidos nesse processo. Analisamos a eliminação de bactérias na cavidade de animais submetidos ao CLP ou a injeção intraperitoneal da bactéria Salmonella enterica sorotipo Typhimurium (S. Typhimurium), tratados com a rPAF-AH. Analisamos também o crescimento de bactérias em culturas de macrófagos peritoneais tratados com a rPAF-AH e estimulados com a bactéria Escherichia coli. Observamos que o tratamento com a rPAF-AH reduziu de forma significativa o crescimento bacteriano em animais submetidos ao CLP ou desafiados com a bactéria S. Typhimurium quando comparados aos animais sépticos. A rPAF-AH também favorece melhor eliminação de bactérias por macrófagos peritoneais estimulados com Escherichia coli. Nossos resultados sugerem que uma maior produção de MCP-1 e IFN-γ pode estar relacionada a um aumento na síntese de óxido nítrico, o qual poderia aumentar a eficiência da eliminação bacteriana. Portanto, arPAF-AH pode ser uma ferramenta terapêutica importante utilizada no tratamento de pacientes sépticos, pois é benéfica tanto durante infecções polimicrobianas (CLP), bem como em infecções causadas por apenas um microorganismo Gram negativo (como a Escherichia coliouS. Typhimurium). / The incidence of sepsis is high and represents the main cause of death in Intensive Care Units. Our laboratory has demonstrated that the rPAF-AH activity is reduced during sepsis and that animals subjected to polymicrobial sepsis (CLP) and treated with rPAF-AH showed a higher survival rate when compared with untreated animals. The purpose of this study was to analyze the effect of rPAF-AH treatment on bacterial clearance and to characterize the mediators involved on this process. We analyzed the bacterial clearance of mice submitted to CLP or intraperitoneally injected with Salmonella enterica serovar Typhimurium (S. Typhimurium)after the treatment with rPAF-AH. We also analyzed the bacterial growth in peritoneal macrophage culture treated with rPAF-AH and stimulated with Escherichia coli. We observed that rPAF-AH administration significantly reduced the bacterial growth in animals subjected to CLP or challenged with the S. Typhimurium when compared to septic animals. The rPAF-AH promotes better bacterial clearance by peritoneal macrophages stimulated with Escherichia coli. Our results suggest that anincreased production of MCP-1 and IFN- γis related to high synthesis of nitric oxidethat could lead to a more efficient bacterial clearance. Therefore rPAF-AH may be an important therapeutic tool used in treatment of septic patients, because it is beneficial either during polymicrobial infections (CLP) or in infections caused only by one Gram negative microorganism (such as Escherichia colior S. Typhimurium).

Made available in DSpace on 2014-07-22T17:02:52Z (GMT). No. of bitstreams: 4 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 68700.pdf: 2578722 bytes, checksum: 8c5310d6fb306ce43d34892517750ffc (MD5) 68700.pdf.txt: 211841 bytes, checksum: cb3a25da2d45d4cf6b421b83c876f820 (MD5) 68700.pdf.jpg: 1263 bytes, checksum: 09883dde54f8c4065ee9c8c3e8f0cb35 (MD5) Previous issue date: 2013-11-21 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, Brasil / A leishmaniose visceral (LV) é causada no Brasil pela Leishmania (Leishmania) infantum. A fase ativa da LV é caracterizada por uma imunossupressão parasito-específica acompanhada de baixos níveis de células T CD4+. Apesar disso, uma intensa ativação celular e resposta pró-inflamatória são observadas. Em outras doenças deficientes de célula T, tais como o HIV-1/AIDS, o lipopolissacarídeo (LPS), provavelmente oriundos da translocação microbiana são um componente crucial na ativação imune. Resultados recentes do nosso grupo mostraram que o LPS, juntamente com os antígenos parasitários, estão envolvidos na ativação das células T e na produção de citocinas pró-inflamatórias nos pacientes com LV. Nesse contexto, o objetivo do trabalho foi avaliar os níveis plasmáticos de LPS na LV experimental, assim como a influência do tratamento específico anti-Leishmania e/ou o tratamento com antibiótico para bactérias Gram-negativas na evolução clínica desses animais e nos níveis do LPS plasmático. Além disso, avaliou-se a ocorrência da ativação celular e o desenvolvimento da resposta humoral ao longo do acompanhamento e dos diferentes tratamentos. Para isso, foram utilizados 117 golden hamsters (Mesocricetus auratus), que foram divididos em oito grupos: sem infecção (G1), infectado com L. infantum (G2), infectado e tratado com o antimonial pentavalente e/ou com o antibiótico amicacina (G3, G4 e G5, respectivamente). Três grupos sem infecção tratados com os fármacos propostos também foram incluídos (G6, G7 e G8) Na avaliação clínica realizou-se a pesagem dos animais, bem como do fígado e do baço. Os aspectos físicos dos animais infectados e as alterações macroscópicas do intestino delgado também foram avaliados. A carga parasitária esplênica também foi quantificada pelo imprint. Os níveis plasmáticos do LPS foram avaliados através de um kit comercial. As dosagens do anticorpo IgG total anti- Leishmania foram realizada no soro dos animais pela técnica de ELISA. A avaliação do grau de comprometimento do sistema imune dos hamsters foi feita através da quantificação do percentual de células T CD4+ e o grau de ativação celular pela molécula CD25, através da citometria de fluxo. Os hamsters com LV apresentaram parâmetros laboratoriais e imunológicos similares aos da LV humana, exceto pela ausência de sinais clínicos visíveis característicos dessa infecção. Os animais apresentaram um aumento de peso progressivo ao longo dos 101 dias pós-infecção (dpi), mas este foi condizente com seu crescimento e idade. Os tratamentos propostos não influenciaram no peso dos animais avaliados. O fígado e o baço dos hamsters apresentaram também um aumento de peso condizente com seu crescimento, entretanto foram observadas alterações macroscópicas em momentos tardios da infecção pelo parasito, que coincidiram com o aumento da carga parasitária esplênica desses animais. O intestino delgado dos animais infectados mostraram-se mais friáveis à manipulação e observou-se uma diminuição significativa do número de placas de Peyer em toda sua superfície quando comparados ao grupo não-infectado Elevados níveis de LPS plasmático foram observados nos animais infectados a partir de 15 dpi, como já foi descrito na LV humana. Uma intensa ativação celular foi observada nos animais infectados, tanto através da molécula CD25 nos linfócitos T CD4+ quanto pelos níveis de anticorpos IgG total anti-Leishmania, ambos aumentaram com o tempo de infecção. Os níveis de LPS se correlacionaram positivamente com a ativação das células T quando todos os animais infectados tratados ou não foram avaliados, sugerindo que o LPS pode contribuir para a ativação já descrita na LV humana. De modo geral, verificou-se nesse trabalho que o tratamento concomitante com o antimonial pentavalente e o antibiótico amicacina foram benéficos em diversos aspectos, como na recuperação do aspecto acroscópico dos órgãos, na diminuição da carga parasitária esplênica e imunológica (redução dos níveis de ativação) nos hamsters com LV, inferindo um possível sinergismo terapêutico entre esses fármacos. Esses resultados permitem sugerir a elegibilidade dessa estratégia terapêutica para o tratamento da LV humana / Visceral leishmaniasis (VL) is caused in Brazil by Leishmania (Leishmania) infantum. The active phase of VL is characterized by parasite-specific immunosuppression along with low levels of CD4+T cells. Despite this, an intense cellular activation and pro-inflammatory cytokine response is observed. In other T-cell deficient diseases such as HIV-1/AIDS, the lipopolisaccharide (LPS) probably from gut microbial translocation has a crucial role on immune activation. Our recent results showed that LPS along with parasite antigens are implicated in T-cell activation and pro-inflammatory cytokines in VL patients. In this context, our aim was to evaluate whether plasma LPS levels were increased in experimental VL and the influence of the specific treatment anti-Leishmania and/or the treatment with gram-negative antimicrobial in the clinical evolution of this animals and in the LPS levels. Also, we investigated the occurrence of the cellular activation and the development the humoral response during the follow up and under the different treatments. For this, 117 golden hamsters (Mesocricetus auratus) were divided into eight groups: without infection (G1), infected with L. infantum (G2), infected and treated with anti-leishmanial therapy (antimonial) and/or with antibiotic amikacin (G3, G4 and G5, respectively). Three groups without infection treated with the different drugs were also included (G6, G7 and G8). The clinical evaluation included animal weighting as well as spleen and the liver weight. The physical aspects of infected animals and the macroscopic alterations of the small intestine were also evaluated. Parasite load was quantified by the number of stained amastigotes in the spleen imprint. Plasma LPS levels were measured using a commercial kit. The quantification of serum anti-Leishmania IgG levels was performed by ELISA. The assessment of immune system impairment was done by quantifying the percentage of CD4 + T cells and the degree of cell activation by the CD25 molecule by flow cytometry. The infected hamsters presented laboratory and immunological parameters similar to those of a human VL, except for the absence of visible clinical signs characteristic of this infection. The animals also showed a progressive weight gain over the 101 days post-infection (dpi), but this was consistent with their growth and age. The proposed treatments did not affect the weight of the animals evaluated. The liver and spleen of hamsters also showed an increase in weight consistent with its growth, however anatomical changes were observed at late times of parasite infection, which coincided with the increased splenic parasite load in these animals. In addition, the small intestine of infected animals was more friable to handle and showed a significant decrease in the number of Peyer's patches across its surface compared to uninfected group. Elevated plasma levels of LPS were observed in infected animals from 15 dpi, as previously described in human VL. An intense cellular activation was observed in the infected hamsters using the CD25 molecule on CD4+ T lymphocytes and the total IgG anti-Leishmania levels, both of which increased with time of infection. LPS levels were positively correlated with the activation of T cells when all infected animals treated or not were evaluated, suggesting that LPS may contribute to the activation already described in VL patients. In general, this study showed that concomitant treatment with pentavalent antimony and the antibiotic amikacin were beneficial in many aspects, such as the recovery of macroscopic aspects of the organs, the decrease of splenic parasite load and reduced levels of immune activation in hamsters with VL, suggesting a possible therapeutic synergism between these drugs. These results suggest the eligibility of this therapeutic strategy for the treatment of human VL.

Made available in DSpace on 2015-10-16T12:52:51Z (GMT). No. of bitstreams: 2 joaquim_silva_ini_mest_.pdf: 1089850 bytes, checksum: 648b0576ba0c30af1195fbb7289f8a0a (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015-06-10 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Pesquisa Clínica Evandro Chagas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Fundamentos: A endocardite infecciosa (EI) é uma doença infrequente, porém grave na infância. Objetivos: Descrever os achados clínicos, laboratoriais, ecocardiográficos, as complicações, a realização de cirurgia cardíaca, a letalidade e os fatores de risco associados a EI em crianças. Métodos: Estudo prospectivo, observacional descritivo do tipo série de casos, com pacientes na faixa etária abaixo de 18 anos internados de janeiro de 2006 até dezembro de 2011, no Instituto Nacional de Cardiologia, RJ \2013 Brasil. Resultados: Foram identificados 40 pacientes e 43 episódios de EI. Os pacientes estudados foram divididos em grupo A, menores de um ano de idade, e grupo B, com um ano ou mais de idade. Dentre os pacientes analisados, 15 faziam parte do grupo A (37,5%) e 25 do grupo B (62,5%). Trinta pacientes (75%) eram portadores de cardiopatia congênita, enquanto dez (25%) eram pacientes portadores de cardiopatia adquirida. Submetidos à análise estatística, 5/15 (33,33%) casos do grupo A versus 26/28 (92,6%) casos do grupo B apresentaram diagnóstico definitivo de EI (p=0,00007, IC=0-0,28 e OR=0,04) pelos critérios modificados de Duke. A letalidade foi de 8/15 (18,75%) no grupo A contra 10/28 (35,7%) no grupo B (p=0,02 IC=1,11-1,77 OR=1,4). Todos os casos do grupo A apresentaram evolução aguda versus 20/28 casos do grupo B (p=0,02 IC=1,11- 1,77 OR=1,4). A aquisição da doença no ambiente hospitalar se deu em todos os casos do grupo A, 15/15 (100%) versus 11/28 casos do grupo B (39,28%) (p=0,0003 IC=1,6-4,03 RR= 2,55) Todos os casos do grupo A faziam uso de acesso venoso profundo no momento do diagnóstico de EI versus 12/28 (42,86%) casos do grupo B (p=0,0007 IC=1,52-3,58 RR=2,33). Haviam sido submetidos a cirurgia cardíaca recente 13/15 (86.67%) dos casos do grupo A versus 11/28 (39,29%) dos casos do grupo B (p=0,008 IC=1,62-80 OR=10,05). Conclusões: Houve maior incidência de EI nos pacientes pediátricos com menos de um ano de idade com doença cardíaca congênita e hospitalização que envolveu uso de cateteres venosos profundos e realização de cirurgia cardíaca. Contudo neste grupo o diagnóstico de EI definitiva foi significativamente menos frequente que nos maiores de um ano / Background : Infective endocarditis (IE) is an uncommom but severe disease in children . Objectives : To describe clinical, laboratory, and echocardiographic findings, complications, surgical intervention, mortality and risk factors associa ted with infective endocarditis in children. Methods: This is a prospective, observational, descriptive case series study of pa tients less than 18 years old , admitted from January 2006 to December 2011, to the Instituto Na cional de Cardiologia, RJ – Braz il . Result s: There were 40 patients and 43 episodes of IE . Patients were divided as group A, i.e. those less t han 1 year of age, and group B from 1 year old . In the studied patients, 15 were included in group A (37. 5%) and 25 in group B (62. 5%). Thirty patients (75%) had congenital heart disease while ten (25%) had acquired heart disease. Statistica l analysis showed that 5/15 (33. 3%) of cases from group A versus 26/28 (92. 6%) from group B presented a definite diagnosis of IE by the modified Duke criteria ( p=0.00007, IC=0 - 0.28 e OR=0. 04). Mortality was 8/15 (18.8%) in group A vs 10/28 (35.7 %) in group B ( p=0.02 IC=1.11 - 1, 77 OR=1. 4). All cases in group A had an acute presentation of IE vs 20/28 cases in group B ( p=0,02 IC=1.11 - 1. 77 OR =1. 4). All case s we re hospital - acquired in group A versus 11/28 cases in group B (39.3 %) ( p=0.0003 IC 1.6 - 4.03 RR= 2. 55). All cases in group A (15/15) had used deep intravenous access when IE was diagnosed v ersu s 1 2/28 (42.9 %) of cases in group B ( p=0.0007 IC=1.52 - 3.6 RR=2. 33). Thirteen of 15 patients (86.7%) had been submitted to recent cardiac surgery in group A versus 11/28 (39. 3%) in group B (p=0 .008 IC=1.62 - 80 OR=10. 05). Conclusions : A higher incidence of IE was noted in children less than 1 year of age with congen ital heart disease and hospitalization which involved use of deep intravenous access and cardiac surgery. However, in this group, a significantly smaller number of definite diagnosis of IE was made when comparing to those 1 year or more of age

Made available in DSpace on 2016-04-15T12:56:12Z (GMT). No. of bitstreams: 2 maria_freitas_ioc_mest_2015.pdf: 2682437 bytes, checksum: 7716b2371405ae3b8279f9da1f7ec256 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A ativação imune crônica e a depleção linfocitária são marcantes na infecção pelo HIV-1 e pela Leishmania infatum. Esta ativação tem sido associada à exaustão do sistema imune em pacientes infectados pelo HIV e pode contribuir para as frequentes recidivas de leishmaniose visceral (LV) em pacientes LV/HIV-1. Assim, é importante investigar se a manutenção do tratamento anti-Leishmania combinado à terapia antirretroviral (TARV) é capaz de diminuir os níveis de ativação e, consequentemente, reduzir o número de recidivas da LV. Diante disso, o objetivo desse trabalho foi avaliar o grau de ativação celular e o seu impacto sobre o comprometimento imunológico, em pacientes LV/HIV-1, assim como determinar sua influência no prognóstico (recidiva ou remissão clínica) pós-tratamento anti-Leishmania dos pacientes coinfectados. Os pacientes foram divididos em: Não-recidivantes (NR;n=6) e Recidivantes (R;n=11). Ambos os grupos foram seguidos da fase ativa até 12 meses pós-tratamento (mpt), sendo mantidos sob TARV e em uso de profilaxia secundária com anfotericina B (50mg/quinzenal), desde o final do tto da LV. As contagens de TCD4+, grau de ativação (CD38+HLA-DR+), imunosenescência (CD57+CD27-), níveis de CD14 solúvel e anticorpos anti-Leishmania foram avaliados para os pacientes e voluntários sadios Durante a fase ativa da LV, ambos os grupos apresentaram níveis similares de todos os parâmetros avaliados. Entretanto, nos períodos de 6 e 12 mpt, o grupo NR mostrou um ganho significativo de células TCD4+, bem como uma diminuição dos percentuais de linfócitos TCD4 e TCD8 ativados, diferente do grupo R, que manteve uma baixa reconstituição imunológica, um alto grau de ativação em ambas as subpopulações de TCD8+ e CD4+ (p<0,0001 e p<0,01, respectivamente), além de níveis elevados de sCD14 (p<0,05), sugerindo um persistente grau de ativação imune entre pacientes R. As cargas viral e parasitária permaneceram baixas ou indetectáveis sem correlacão com a ativação. Entretanto, tal ativação se correlacionou negativamente com o dano na recuperação imunológica desses pacientes. Apesar dessas diferenças, os percentuais de linfócitos T senescentes foram similarmente elevados entre os grupos R e NR. A menor capacidade do grupo R em reduzir os níveis de ativação celular em comparação ao NR, pode estar relacionada ao comprometimento da resposta efetora, que decai a cada episodio de recidiva. Além disso, a profilaxia secundária parece modificar a história natural dos pacientes coinfectados que estão experenciando o primeiro episódio da doença, ao contrário daqueles que já apresentam várias recidivas / Chronic immune activation and lymphocytic depletion are striking features in HIV-1 and Leishmania infatum infection. Such activation has been associated with the exhaustion of the immune system in HIV+ patients and can contribute to frequent recurrences of visceral leishmaniasis (VL) in coinfected patients. Therefore, it is important to investigate whether maintenance of anti-Leishmania treatment combined with antiretroviral therapy (ART) is able to decrease the levels of cellular activation and hence reduce the number of VL relapses. In this ways, the aim of this study was to evaluate the cellular activation degree and its impact on the immune impairment in VL/HIV patients, as well as to determine their influence on prognosis (relapse or clinical remission) after anti-Leishmania treatment. The patients were divided into non-recurrent (NR; n=6) and recurrent (R; n=11). Both groups were followed by active phase up to 12 months post-treatment (mpt). They were on ART and use of secondary prophylaxis with amphotericin B (50mg/fortnightly) from the end of the VL treatment. CD4+ T cell counts, activation degree (CD38+/HLA-DR+), immunosenescence (CD57+/CD27-), soluble CD14 levels and anti-Leishmania antibodies were evaluated in the patients and healthy controls. During the active phase of VL, both groups had similar levels of all parameters However, at 6 and 12 mpt, the NR group showed a significant gain in CD4+T cells, as well as a decrease in the percentage of activated CD4 and CD8 T lymphocytes. Unlikely, R group kept a low immune reconstitution, a high degree of activation of both CD4 and CD8 subpopulations (p <0.0001 and p <0.01, respectively), and high levels of sCD14 (p <0.05), suggesting a persistent level of immune activation in R coinfected patients. Viral and parasite load remained low or undetectable with no correlation with activation. However, this activation degree was negatively correlated with impaired immune reconstitution of patients. Despite these differences, the percentages of senescent T lymphocytes were similarly high between R and NR groups. The smaller capacity of the R group in reducing cell activation levels compared to NR, may be related to some functional impairment of effector response that has been declining every recurrence episode. In addition, secondary prophylaxis seems to modify the natural history of co-infected patients who are presenting the first episode of the disease, as opposed to those who already have several recurrences

MARTINS, Leonardo Arruda. O significado do infiltrado inflamatório em pacientes diagnosticados com vaginose bacteriana em citologia em meio líquido (SUREPATH). 2015. 51 f. Dissertação (Mestrado em Patologia) – Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2015. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2015-10-16T16:11:55Z No. of bitstreams: 1 2015_dis_lamartins.pdf: 571129 bytes, checksum: f7adee1b6a4f4e8b4daf0c5bdaa7d241 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2015-10-16T16:28:32Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_dis_lamartins.pdf: 571129 bytes, checksum: f7adee1b6a4f4e8b4daf0c5bdaa7d241 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-10-16T16:28:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_dis_lamartins.pdf: 571129 bytes, checksum: f7adee1b6a4f4e8b4daf0c5bdaa7d241 (MD5) Previous issue date: 2015 / Vulvovaginitis ( VV ) are reported since the fi fth century BC as a major health problem in women. Infectious agents are the main causes . The most commons are bacterial vaginosis (BV ) and vulvovaginal candidiasis ( VC ) . BV is the leading cause of VV, characterized by a change in bacterial vaginal popu lation with a prevalence of an aerobes strains. It is been observed in BV , which by defini tion is a non-inflammatory c ondition, some cases with the presence of inflammatory cells. However, this finding is not yet well defined. In the presence of two simultaneous microorganisms the pictur es would be defined as mixed vaginitis, in which cytological features are poorly defined and perhaps to influence the inflammatory infiltration presence. At the same time, it has been suggested that BV may play a role in carcinogenesis of the cervix since it has been observed that cytologic atypia is more frequent in women with shift of the vaginal flora, it is questionable whether th e inflammatory finding deserve the attention of the cyt opathologist . Objective: to ev aluate findings of liquid-based cytology ( SurePath ® ) in patients diagnosed with BV according to the presence of inflammatory cells. It was an observational , an alytical and cross-sectional study conducted in 1132 women diagnosed with BV , in the pe riod of October 2012 to June 2013. For the diagnosis of BV was used criteria of more than 20 % of clue cells in the smear ( SurePath ® ). The smears were evaluated for identification of morphotypes of pathogens, inflammatory infiltration and epithelial cell atypia . Trichom onas vaginalis , Candida sp ., Mobiluncus sp ., Actinomyces sp ., Cytopathy suggestive of Herpes Simplex Virus were searched . The presence of more than five polymorphonuclear leukocytes per epithelial cell in high power field (1000 x ) was considered in flammatory infiltrate . The ag e of patients ranged from 14 to 73 years (mean = 34.3, SD = 10.9) . The number of pregnancies was between 0 and 11 (mean = 1.5, SD = 2.08 ) . Two hundred and nine ( 34 % ) patients reported use of contraception and 828 ( 73.1 % ) were conducting a rou tine examination.The most fr equent clinical complaint was discharge in 130 cases (11.5 % ). Macroscopic ev aluation of vaginal discharge revealed that the white / milky color 115 ( 46,7 % ) pr evailed. On speculum examination was noted that 994 ( 87.8 % ) cases had described finding of normal mucosa and 50 ( 4.4% ) of vaginal mucosa inflamation. The morphotypes associated with bact erial vaginosis were mostly Mobiluncus sp. in 208 cases (66 %) and Candida sp. in 86 cases (27.3%) . The atypical cells were found in 84 cases ( 7.5%) and among these, AS C -US in 43 cases ( 51.2 % ) , LSIL in 31 ( 37 % ) and HSIL in 03 ( 3.6% ) . It was obser ved in the presence of inflammatory infiltrate 55 ( 4.9% ) cases with Mobiluncus sp ( p < 00.1 , RR = 0.61 [ 0.55 to 0.68 ] ) . Candida sp and 81 ( 7.2% ) cases ( p < 0.001, RR = 5.47 [ 2.93-10.19 ] ) . regarding cytological atypia was observed in the presence of leukocyte infiltrate atypia in 51 cases ( 4.5 % ) . RR = 1.27 [ 1.05 to 1.52 ] ) Among these the most frequent atyp ia was ASC -US with 24 ( 2.1% ) cases with leukocyte infiltration and 19 ( 1.7 % ) cases without infiltrate ( p = 0.2729 , RR = 0 , 86 [ 0.63 to 1.18 ] ) . For cases of LSIL observed 11 case s (1.0 % ) in the group w ithout infiltrate and 20 cases ( 1.8 % ) with inflammatory inf iltrate ( p = 0.0298 , RR = 1.346 [ 1.02 to 1.76 ]). In cases of bacterial vaginosis, by its current de finition, the presence of inflammtory infiltration suggests the possibility of mixed vaginitis (with Candida sp ) or epithelial atypia . / As vulvovaginites (VV) são referidas desde o século V a.C. como importantes agravos à saúde da mulher. Os agentes infecciosos estão entre as principais causas. As VV mais comuns são a vaginose bacteriana (VB) e a candidíase vulvovaginal (CV). A VB é a principal causa de VV, caracterizada por mudança de população bacteriana vaginal com predomínio de cepas anaeróbias. Tem sido observado na VB, que por definição é um quadro não inflamatório, alguns casos com presença de células inflamatórias. No entanto, este achado ainda não está bem definido. A associação entre microrganismos seria apontada como um quadro de vaginite mista, cujas características citológicas estão pouco definidas e talvez influenciassem no quadro inflamatório. Ao mesmo tempo tem sido sugerido que a VB, pode desempenhar um papel na carcinogénese do colo do útero uma vez que tem sido observado que atipias citológicas são encontrados mais em mulheres com uma flora vaginal alterada, questiona-se se o achado inflamatório deveria chamar a atenção do citopatologista. O objeitvo do trabalho foi avaliar achados da citologia em meio líquido (SurePath®) em casos com diagnóstico de VB segundo a presença de infiltrado inflamatório.Foi realizado um estudo observacional, analítico e em corte transversal, em 1132 mulheres com diagnóstico de VB, no período de Outubro de 2012 a Junho de 2013. Para o diagnóstico de VB foi utilizado critério de mais de 20% de clue cells no esfregaço de citologia de base líquida (SurePath®). Os esfregaços foram avaliados para identificação de morfotipos de patógenos, infiltrado inflamatório e atipías celulares epiteliais. Foram pesquisados Trichomonas vaginalis., Cândida sp., Mobiluncus sp., Actinomyces sp., citopatia sugestiva de Herpes Vírus Simplex. Foi considerado infiltrado inflamatório a presença de mais de cinco leucócitos polimorfonucleados por célula epitelial em campo de imersão (1.000x). A idade das pacientes variou de 14 a 73 anos (média = 34,3; dp =10,9). O número de gestações ficou entre 0 e 11 (média =1,5; dp=2,08). Duzentos e nove (34,%) pacientes referiam fazer uso de método contraceptivo e 830 (73,1%) estavam realizando exame de rotina. Quando havia uma queixa clínica a mais freqüente foi corrimento em 130 casos (11,5%). A avaliação macroscópica do conteúdo vaginal revelou que o de cor branco/leitoso 115 (46,7%) prevaleceu. No exame especular foi anotado que 994 (87,8%) dos casos descritos tinha achado de mucosa normal e 50(4,4%) de colpite. Os morfotipos de patógenos associados ao quadro de vaginose bacteriana foram principalmente Mobiluncus sp.em 208 casos (66%) e Cândida sp.em 86 casos (27,3%). As atipías celulares foram encontradas em 84 casos (7,5%) e dentre estas, prevaleceram ASC-US em 43 casos (51,2%), LSIL em 31(37%) e HSIL em 03 (3,6%). Observou-se na presença de infiltrado inflamatório 55 (4,9%) casos com Mobiluncus sp. (p<00,1; RR=0.61 (0,55-0,68)] e Cândida sp 81(7,2%) casos (p<0,001; RR=5,47 (2,93-10,19). Com relação às atipias citológicas observou-se na presença de infiltrado leucocitário atipias em 51 casos (4,5%) (RR=1,27 ([1,05-1,52]). Dentre estas a mais frequente foi ASC-US com 24 (2,1%) casos com infiltrado leucocitário e 19(1,7%) casos sem infiltrado (p =0,2729; RR=0,87 ([0,63-1,18]). Já para casos de LSIL observou-se 20 casos (1,8%) com infiltrado e 11 casos (1,0%) no grupo sem infiltrado inflamatório (p=0,0298; RR=1,35 ([1,02-1,76]). Nos casos de vaginose bacteriana, por sua definição atual, a presença de infiltrado inflamatório sugere a possibilidade de vaginite mista (com Cândida sp) ou atipia epitelial.

Acute pancreatitis presents high rates of morbidity and mortality, mainly when it is associated with infection of pancreatic necrosis. The mechanism of this occurrence has not been fully elucidated, but may possibly be due to the bacterial translocation caused by disruption of the intestinal barrier. The objective of the present study was to determine the effect of dietary supplementation with probiotic bacteria (PB) on acute pancreatitis (AP) induced in rats by the inoculation of 5% sodium taurocholate into the biliopancreatic duct. Fifty Sprague-Dawley rats were randomly divided into five groups: 1 sham-operated, with manipulation of intra-abdominal organs; 2 induction of AP, without supplementation with PB; 3 dietary supplementation with PB followed for induction of AP; 4 induction of AP followed by dietary supplementation with PB; and 5 dietary supplementation with PB before and after the induction of AP. 4 x 109 colony-forming units (CFU) of probiotic bacteria were directly administered into the stomach, divided into two stages per day. Blood samples were collected for the determination of serum levels of amylase, lipase, glucose, and calcium and for leukocyte counts immediately before (0 hour) and 24 and 48 hours after the surgical procedure. The animals were sacrificed and ileal lymph nodes and fragments of pancreas, spleen, and liver were obtained. Comparison of the five groups of animals revealed significant differences in leukocyte count at 24 hours and in amylasemia and lipasemia at 24 and 48 hours after AP induction. Considering only the groups with AP induction (groups 2, 3, 4, and 5), there was no difference in any of the parameters assessed or in bacterial colonization of the organs. When considering only the groups of animals that received PB (groups 3, 4, and 5), a greater occurrence of lymph node contamination and of pancreatic hemorrhage was observed compared to the other groups. The present results suggest that dietetary supplementation with this combination of PB in animals submitted to the induction of AP does not modify the profile of the biochemical markers evaluated or the leukocyte count, but increases the rate of bacterial translocation to lymph nodes and the occurrence of pancreatic hemorrhage. / A pancreatite aguda apresenta alta taxa de morbimortalidade, notadamente quando associada a infecção da necrose pancreática. O mecanismo exato para esta ocorrência ainda não foi totalmente elucidado, mas, possivelmente, é oriunda da translocação bacteriana decorrente da disfunção da barreira intestinal. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da suplementação dietética com bactérias probióticas (BP) na resposta a pancreatite aguda (PA) induzida em ratos pela inoculação de taurocolato de sódio a 5% no ducto biliopancreático. Cinqüenta ratos Sprague-Dawley foram aleatoriamente distribuídos em cinco grupos: 1 operação simulada, com manipulação de órgãos intra-abdominais; 2 indução de PA, sem suplementação de BP; 3 suplementação dietética com BP, seguida por indução de PA; 4 indução de PA, seguida por suplementação dietética com BP; e 5 suplementação dietética com BP, antes e após a indução de PA. A suplementação de BP se deu pela administração por via intragástrica de 4 x 109 unidades formadoras de colônias (UFC), divididas em duas etapas por dia. Foram coletadas amostras sangüíneas para análise das concentrações séricas de amilase, lipase, glicose e cálcio, além de contagem leucocitária, imediatamente antes do procedimento, e após 24 e 48 horas. Após a morte dos animais, seguiu-se nova laparotomia para retirada de amostras de líquido peritoneal, linfonodo ileal, pâncreas, baço e fígado, para análise microbiológica e histopatológica. Na comparação simultânea entre os cinco grupos, foram observadas diferenças significativas para contagem leucocitária, na hora 24, e para amilasemia e lipasemia, nas horas 24 e 48 após a indução da PA. Considerando-se somente os grupos de animais em que ocorreu a indução de PA (grupos 2, 3, 4 e 5), não se observou diferença para quaisquer dos parâmetros avaliados. No que concerne à colonização bacteriana dos órgãos, entre estes mesmos quatro grupos, também não se observou diferença. Quando considerados apenas os grupos de animais que receberam BP (grupos 3, 4 e 5), observou-se maior ocorrência de contaminação do linfonodo ileal e de hemorragia pancreática, em comparação aos demais grupos. Nossos resultados sugerem que a suplementação dietética com esta combinação de cepas de BP em animais submetidos a indução de PA não modifica o perfil dos marcadores bioquímicos avaliados e da contagem leucocitária, mas aumenta o índice de translocação bacteriana para o linfonodo ileal e a ocorrência de hemorragia pancreática.

Submitted by Elizabete Silva (elizabete.silva@ufes.br) on 2015-03-26T19:48:31Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Luiz Guilherme Schimidt Castellani.pdf: 1781231 bytes, checksum: 875aa69391e57600531cb990b00dd009 (MD5) / Approved for entry into archive by Elizabete Silva (elizabete.silva@ufes.br) on 2015-04-07T18:30:22Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Luiz Guilherme Schimidt Castellani.pdf: 1781231 bytes, checksum: 875aa69391e57600531cb990b00dd009 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-07T18:30:22Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Luiz Guilherme Schimidt Castellani.pdf: 1781231 bytes, checksum: 875aa69391e57600531cb990b00dd009 (MD5) Previous issue date: 2013-08 / A resistência a fármacos antituberculose tem constituído uma grande ameaça ao controle da tuberculose em âmbito mundial. A sua detecção precoce permite ao médico instituir um esquema de tratamento mais adequado ao paciente e consequentemente quebrar a cadeia de transmissão dos bacilos. Os testes de sensibilidade a antimicrobianos atuais, embora eficientes, são caros e/ou demorados e/ou trabalhosos. Com base nesta premissa, nos propusemos a desenvolver e padronizar um método fenotípico direto para determinação da sensibilidade do Mycobacterium tuberculosis a antimicrobianos de primeira linha do tratamento da tuberculose. Para o desenvolvimento deste novo teste, utilizaram-se os princípios do método das proporções e do exame de cultura pelo método de Ogawa–Kudoh. O estudo foi dividido em duas fases. A primeira, caracterizada pelo desenvolvimento e padronização do método proposto e a segunda, pela análise da concordância entre o método desenvolvido e o método do MGIT (padrão-ouro). Na primeira fase, foram realizados diversos ensaios para definir: os volumes de absorção e de liberação de líquidos de diferentes tipos de swab, o meio de cultura, as concentrações dos antimicrobianos e o tempo de leitura/interpretação das culturas. Além disso, foi verificado se a amostra deveria ou não ser diluída. Com base nos resultados destes ensaios, padronizou-se o método com: swab comercial, em meio de cultura Ogawa- Kudoh contendo separadamente 0,2 μg/mL de isoniazida, 40,0 μg/mL de rifampicina, 10,0 μg/mL de estreptomicina e 500,0 μg/mL de ácido para-nitrobenzóico. Padronizou-se ainda a inoculação da amostra de escarro de forma direta, ou seja, sem diluir e a leitura/interpretação do resultado do teste no período entre 21 e 28 dias. A análise comparativa entre este método e o teste de sensibilidade a antimicrobianos no sistema MGIT realizada na segunda fase do projeto indicou um índice kappa igual a 1,000, ou seja, uma concordância muito boa em relação ao padrão-ouro. Diante desses resultados promissores, acreditamos que o método desenvolvido apresente um grande potencial para ser utilizado em laboratórios com pouca infra-estrutura, por ser de baixo custo, fácil execução e relativamente rápido. / Drug resistance has become a worldwide threat to tuberculosis control. Its early detection allows the doctor to use more appropriate treatment regimens and thereafter to break the transmission chain of the bacilli. Current drug susceptibility tests, though efficient, are expensive and/or lengthy and/or laborious. Based on that premise, we proposed to develop and standardize a direct phenotypic method to determinate the susceptibility of Mycobacterium tuberculosis to first line drugs used on tuberculosis treatment. To develop this new method, it was used the principles of the proportion method and the Ogawa-Kudoh swab culture method. The study was divided in two phases. The first was characterized by the development and standardization of the proposed method and the second by analyzing the agreement between the developed method and the MGIT method (gold standard). In the first phase, several assays were realized to define: the absorption and liberation volumes of liquids from different kinds of swab, the culture medium, the drugs concentrations and the time to read/interpret the cultures. Besides, it was verified if the sample should or should not be diluted. Based on results, the method was standardized with: commercial swab, Ogawa-Kudoh culture medium containing separately 0,2 μg/mL of isoniazid, 40,0 μg/mL of rifampicin, 10,0 μg/mL of streptomycin e 500,0 μg/mL of para-nitrobenzoic acid. It was also standardized that the sample should not be diluted and the cultures should be read/interpreted between 21 and 28 days. The comparative analyzes between this method and the susceptibility test on MGIT system indicated a kappa index equal to 1,000, which means a perfect agreement to gold standard. Given these promising results, we believe that the developed method presents a great potential to be used in laboratories with little infrastructure, because of its low cost, it is easy to perform and relatively fast.

Submitted by Leonardo Biancolino Marino null (leobmarino@hotmail.com) on 2016-03-24T13:21:31Z No. of bitstreams: 1 Tese Leonardo Biancolino Marino versão final.pdf: 7165900 bytes, checksum: b52d4eb1bb81181de6acee83becaa5f9 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-03-24T18:55:38Z (GMT) No. of bitstreams: 1 marino_lb_dr_arafcf.pdf: 7165900 bytes, checksum: b52d4eb1bb81181de6acee83becaa5f9 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-24T18:55:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 marino_lb_dr_arafcf.pdf: 7165900 bytes, checksum: b52d4eb1bb81181de6acee83becaa5f9 (MD5) Previous issue date: 2016-02-29 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Tuberculose (TB), com principal agente etiológico o bacilo Mycobacterium tuberculosis, é uma doença infecciosa passível de cura. Entretanto, é detentora de uma estatística mundial preocupante, e em 2014 apresentou 9,5 milhões de novos casos e 1,5 milhão de mortes. Além dos altos índices estatísticos, a TB aparece ainda associada a dois fatores agravantes: a co-infecção com HIV (“Human Immunodeficiency Virus”) e a crescente emergência de linhagens resistentes aos quimioterápicos como “multi-drug resistant” (MDR) e “extensively drug resistant” (XDR), que dificultam sobremaneira o tratamento, indicando premência na pesquisa de novos fármacos. A resistência do bacilo manifesta-se a partir de eventos adquiridos (como aquisição de mutações cromossomais em genes específicos relacionados ao metabolismo de fármacos) ou intrínsecos, como uma parede celular altamente hidrofóbica (devido à grande quantidade de ácidos micólicos). Estes mecanismos de resistência são discutidos amplamente na literatura. Por outro lado, pouco se sabe a respeito da resistência devido as alterações na expressão dos genes das bombas de efluxo, responsáveis pela exclusão de fármacos, bem como dos mecanismos de resistência relacionados a halotolerância bacteriana. Neste sentido, três assuntos de relevância no combate à tuberculose foram abordados nesta tese. Como primeira frente, avaliou-se inicialmente a expressão de 5 genes codificadores de bombas de efluxo pela técnica de RT-qPCR em 12 isolados clínicos frente ao tratamento com rifampicina, principal fármaco do regime terapêutico da TB. Resultados indicaram que essas proteínas auxiliam na emergência da resistência, sendo indicados pela superexpressão dos genes frente ao tratamento. Como segunda frente avaliou-se a atividade de 15 compostos inéditos de furoxânicos e benzofuroxânicos quanto à capacidade inibitória frente ao M. tuberculosis, citotoxicidade em células VERO, além de ensaios para avaliar seus mecanismos de ação (acumulação de brometo de etídio / inibição de efluxo, liberação de óxido nítrico e microarray). Resultados indicaram que a classe de compostos é promissora para o tratamento, com boa atividade inibitória contra o bacilo e considerado grau de seletividade. Ensaios de mecanismo de ação, indicaram atividade independente da inibição do efluxo, da subunidade de isoniazida ou da liberação de óxido nítrico. Microarray apontou para alteração em grande quantidade de proteínas ribossomais, semelhante ao que ocorre com aminoglicosídeos. Por fim, na terceira frente do estudo avaliou-se os efeitos da halotolerância na emergência de bacilos resistentes a fármacos, tendo como base as diferentes concentrações de cloreto de sódio a que o bacilo é submetido durante o seu ciclo de vida. Os resultados apontaram para aumento da resistência bacteriana com consequente aumento nas concentrações inibitórias de vários fármacos usados para a terapia da TB, quando o bacilo é submetido à concentração de cloreto de sódio encontrada no interior dos macrófagos, indicando uma necessidade de reflexão sobre as novas diretrizes para testes de novos fármacos contra TB. / Tuberculosis (TB) is an infectious disease caused mainly by Mycobacterium tuberculosis bacillus, presenting 9.5 million of new cases and 1.5 million of deaths in 2014. Two aggravating factors are associated with these high statistical indexes: a co-infection with HIV ("Human Immunodeficiency Virus") and the increasing emergence of resistant strains represented by MDR ("multi-drug resistant") and XDR ("extreme drug resistant") strains. The bacillus resistance manifests from acquired events (such as acquisition of chromosomal mutations in specific genes related to drug metabolism) or intrinsic, as a highly hydrophobic cell wall (due to the large amount of mycolic acids) and the action of efflux pumps (responsible for drug extrusion). Thus, the thesis project evaluated the expression of five genes encoding efflux pumps by RT-qPCR technique in 12 clinical isolates against rifampicin, the main anti-TB drug used in the standard treatment. Results indicated that these proteins contribute to the emergence of resistance, indicated by overexpression of these genes after treatment. The second part of the study evaluated the activity of 15 furoxan and benzofuroxan derivative compounds for inhibitory capacity against the M. tuberculosis, cytotoxicity in VERO cells, as well as ethidium bromide accumulation and efflux assays. Aiming evaluate their mechanism of action, microarray and assays of nitric oxide release were also done, as they are supposed nitric oxide donors and may present an action by oxidative stress and/or the activity efflux pumps inhibition. Results indicated that the class of compounds is promising for the treatment, with good inhibitory activity against bacillus and substantial degree of selectivity. Mechanism of action assays indicated activity independent of efflux inhibition, of isoniazid subunit’ or nitric oxide release. Microarray pointed to changes in expression of ribosomal proteins, similar to what occurs with aminoglycosides. Finally, the third part of the study demonstrated that the halotolerance developed by M. tuberculosis might cause the emergence of drug resistant bacilli, based on the different concentrations of sodium chloride that the bacillus faces during its cycle. The results indicate a need for reflection on the new guidelines for testing new TB drugs. The results pointed to an increase in the minimal inhibitory concentrations of various anti-TB drugs, when the bacillus was subjected to the sodium chloride concentration found in macrophages, indicating a need for reflection on the guidelines for discovery of new anti-TB drugs. / CNPq: 140079/2013-0 / FAPESP: 2011/21232-1 / CAPES PDSE: 99999.003125/2014-09

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:24Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-03-01Bitstream added on 2014-06-13T21:06:01Z : No. of bitstreams: 1 marconi_c_dr_botfm.pdf: 879832 bytes, checksum: 484596013b636e51071f8123a73dfe3c (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A vaginose bacteriana (VB) é a alteração de microbiota vaginal mais frequente em mulheres em idade reprodutiva.Inúmeras complicações ginecológicas e obstétricas são associadas à VB, como doença inflamatória pélvica, aumento do risco de aquisição de Doenças Sexualmente Transmissíveis (DSTs), corioamnionite clínica e histológica e baixo peso ao nascimento. A VB se caracteriza pela substituição dos lactobacilos da microbiota vaginal por outras espécies bacterianas, na sua maioria anaeróbias. Estudos recentes demonstraram que várias espécies até então raramente ou nunca isoladas em laboratório são associadas à VB como Atopobium vaginae, Leptotrichia sp. e Megasphaera sp. Essas espécies têm como característica comum a produção de ácido lático. Dessa forma, tem sido observado que mulheres assintomáticas podem apresentar ausência de lactobacilos na microbiota vaginal e predomínio de tais espécies. Portanto, alguns autores sugerem que elas possam contribuir para o equilíbrio do meio vaginal. Tendo em vista que os casos de VB apresentam grande heterogeneidade quanto à composição microbiológica, considera-se que a resposta imune também possa ser variável. A amplificação da resposta imune local na VB é um dos mecanismos que levam a maior suscetibilidade da mucosa vaginal à aquisição de DSTs, dentre as quais a infecção clamidiana que, é bastante frequente em nossa população. Embora estudos tenham demonstrado associação da infecção por Chlamydia trachomatis (CT) com a VB, poucos trabalhos avaliaram o perfil da resposta imune inata local nesses casos. O objetivo deste estudo foi avaliar parâmetros da imunidade inata e atividade de sialidases nos casos de VB em relação a maior ou menor participação das espécies de A. vaginae, Leptotrichia sp. e Megasphaera sp., além de comparar os níveis de citocinas pro-inflamatórias nos casos de VB de acordo com o status... / Bacterial vaginosis (BV) is the most frequent type of abnormal vaginal flora in women in childbearing age. Several gynecological and obstetrical complications are associated with BV, such as pelvic inflammatory disease, increased risk for acquisition of sexually transmitted infections (STIs), clinical and histological chorioamnionitis and low birth weight. Bacterial vaginosis is characterized by the replacement of the vaginal lactobacilli by other bacterial species, mostly anaerobes. Recent studies show that many species, rarely or never isolated by culture, are highly associated with BV, such as Atopobium vaginae, Leptotrichia sp. and Megasphaera sp. In common, these bacteria have the characteristic of producing lactic acid. Study of the vaginal flora of asymptomatic women showed that these species may replace the lactobacilli, dominating the vaginal environment. Thus, some authors suggest that A. vaginae, Leptotrichia sp. and Megasphaera sp. may contribute to a balanced vaginal flora. Considering that BV cases are microbiologically heterogeneous, the immune response is also likely to differ among the women. An imbalanced local immune response is one of the mechanisms leading to increased acquisition of STIs, such as chlamydial infection, which is very frequent in our population. Although studies demonstrated a significant association of BV with Chlamydia trachomatis (CT), few studies evaluated the associated innate immune response. The objective of this study was to evaluate parameters of the innate immunity and sialidase activity in BV, in relation to the larger or samaller participation of A. vaginae, Leptotrichia sp. and Megasphaera sp., and to compare the levels of pro-inflammatory cytokines in BV cases according to the status of CT infection. We evaluated women that presented BV in the period of the study and the control group was composed by women with normal vaginal flora pattern. Vaginal ...