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Engineering Cell-Free Protein Expression Systems for Biotherapeutics and Biosensing

Hunt, John Porter 18 March 2021 (has links)
Therapeutic proteins have become a cornerstone of modern medicine since the FDA approval of recombinant human insulin in 1982. Likewise, biosensors transform chemical detection and disease diagnostics by identifying biomarkers, chemical contaminants, and infective agents. Long-standing methods for creating therapeutics and biosensors employ whole cells such as Escherichia coli (E. coli). Alternatively, cell-free protein synthesis (CFPS) employs the enzymatic reactions necessary for protein production and biosensing within a cell, but in an engineered reactor environment facilitating unprecedented access to and control over biochemical machinery, preservation by cryodesiccation for portable deployment, and functionality in cytotoxic applications. This dissertation reports advances in an E. coli CFPS production platform toward creating therapeutic proteins by this means. First, an endotoxin-free CFPS platform is created by optimizing fermentation and cell-extract harvest of an endotoxin-free E. coli strain. Next, liquid cell growth culture media is specially formulated to change chemical composition during cell culture and provide a streamlined method for producing high-yielding, endotoxin-free E. coli CFPS. Then, novel CFPS bioreactor formats are mathematically validated and developed which employ "hydrofoam" and oxygen to increase therapeutic protein production yield. Additionally, advances are reported in CFPS biosensing technology. First, a chimeric fusion protein incorporating the ligand binding domain of the human estrogen receptor is expressed in CFPS to detect estrogenic chemicals in the presence of human blood and urine. Next, the molecular mechanism of this protein construct is elucidated and the assay readout is optimized with mathematical simulations and CFPS. Then, CFPS is metabolically engineered to create a biosensor of L-glutamine, the most abundant amino acid in the body. Finally, this dissertation reports the development of a synergistic platform for potentially treating Acute Lymphoblastic Leukemia wherein CFPS is engineered to both produce the therapeutic protein crisantaspase and assess its activity in the presence of human serum for improved, potentially even personalized treatment of the disease. It is anticipated that the advances reported herein will contribute to the utility of in vitro or cell-free protein synthesis for therapeutic and diagnostic applications.
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Estrategias para la utilización de la bacteria entomopatógena Bacillus thuringiensis (Berliner) en el control de Ceratitis capitata (Wiedemann)

Vidal Quist, José Cristian 24 May 2010 (has links)
La mosca mediterránea de la fruta, Ceratitis capitata, es la principal plaga de la fruticultura en el mundo. El desarrollo de métodos ambientalmente seguros de control de plagas, como Bacillus thuringiensis (Bt), adquiere cada vez mayor importancia. Esta tesis doctoral evalúa la validez de Bt y sus delta-endotoxinas como agentes de control de C. capitata. El análisis de la biodiversidad de Bt ha reflejado la gran riqueza presente en el agroecosistema de los cítricos. Sin embargo, ninguna de las cepas ensayadas (905) muestra alta toxicidad sobre C. capitata cuando esporas/cristales o sobrenadantes de su cultivo son ensayados. En cambio, la solubilización de los cristales de una selección de 42 cepas de Bacillus sp. ha demostrado que, para las cepas de la subespecie israelensis (Bti), este tratamiento produce una ganancia de función biológica. Adicionalmente, la predigestión de dichas protoxinas con proteasas de otro díptero, Culex pipiens, aumenta su actividad larvicida (CL50 31.26 µg/cm2). Por otro lado, se ha demostrado que, entre las delta-endotoxinas producidas por Bti, la protoxina Cyt1Aa es el factor determinante, con una CL50 sobre larvas de 4.93 µg/cm2. Sobre adultos, Cyt1Aa produce efectos subletales. Complementariamente, esta tesis propone un nuevo método de control basado en el desarrollo de toxinas recombinantes de fusión Cry-anticuerpo. Se ha puesto en práctica un sistema modelo para evaluar esta estrategia: se han desarrollado 4 variantes proteicas por la fusión entre partes de la protoxina Cry1Ab y un anticuerpo específico contra GFP (VHH anti-GFP) y éstas se han ensayado sobre larvas transgénicas de Drosophila melanogaster que expresan GFP en su intestino. Deficiencias en la unión de las toxinas de fusión a GFP, han impedido demostrar, por el momento, la estrategia propuesta. Por último, se han detectado al menos 160 proteínas distintas en las membranas intestinales de C. capitata y se han identificado las siguientes: V-ATPasa subunidades A y B, y alfa-tubulina. / Vidal Quist, JC. (2010). Estrategias para la utilización de la bacteria entomopatógena Bacillus thuringiensis (Berliner) en el control de Ceratitis capitata (Wiedemann) [Tesis doctoral]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/8336
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Impacto do uso rápido dos betabloqueadores sobre a mortalidade e remodelamento ventricular na insuficiência cardíaca avançada / Impact of rapid beta-blockers therapy on mortality and ventricular remodeling in advanced heart failure

Melo, Domingos Sávio Barbosa de 25 March 2011 (has links)
Fundamento: A terapia com betabloqueadores é fundamental para o tratamento da insuficiência cardíaca congestiva. Entretanto, apesar dos dados que documentam os benefícios dos betabloqueadores, a otimização da dose desses medicamentos durante a hospitalização ainda não foi testada. Objetivos: Avaliar a segurança da efetividade do betabloqueio rápido em pacientes hospitalizados por Insuficiência Cardíaca avançada. Métodos: Em estudo clínico randomizado, foram incluídos 92 pacientes com insuficiência cardíaca e fração de ejeção do ventrículo esquerdo <45%: 46 no grupo tratamento e 46 no grupo controle. Do total 59 (64,1%) pacientes eram do sexo masculino, com idade média de 62,25±14,43 anos. Durante o período de internação esses pacientes foram alocados aleatoriamente para receber incrementos da dose de betabloqueadores de forma rápida, a cada dois dias (grupo tratamento), ou a cada 15 dias (grupo controle). O desfecho principal foi a ocorrência de reinternação ou morte por causas diferentes. Foram considerados como efeitos adversos hipotensão arterial, bradicardia e piora da insuficiência cardíaca. Resultados: A fração de ejeção média do ventrículo esquerdo foi de 27,24±9,08, o diâmetro diastólico final médio 66,15±8,65 e o diâmetro sistólico final médio 57,04±9,96. No grupo tratamento, houve redução significativa do DSFVE em três meses e um ano (p<0,001), enquanto no grupo controle permaneceu inalterado (p=0,337). O DDFVE apresentou redução significativa (p=0,036) no grupo tratamento que não foi significativa no grupo controle (p=0,250). Houve aumento significativo da FEVE no grupo tratamento (p<0,001) em três meses, o que não ocorreu no grupo controle (p=0,151), mas não houve diferença entre os grupos em um ano. A distância percorrida no teste de caminhada de 6min aumentou significativamente (p<0,001) no grupo tratamento em relação ao grupo controle. O grupo tratamento apresentou probabilidade livre de internação significativamente maior que a do grupo controle (p=0,045). Com referência à sobrevida, o grupo tratamento apresentou níveis significativamente maiores que a do grupo controle no período avaliado (p=0,002). Conclusões: O incremento rápido da dose de betabloqueador durante a internação por descompensação de insuficiência cardíaca foi segura e melhorou a sobrevida, o remodelamento ventricular e a capacidade de fazer exercícios / Background: The beta-blocker therapy is essential in congestive heart failure treatment. However, despite data documenting, the benefits of beta-blockers, and the optimization of these medications dosage during hospitalization has not been tested. Objectives: To evaluate the safety of the efficiency of acute beta-blockade on hospitalized patients due to advanced heart failure. Methods: In a randomized clinical trial, 92 patients with heart failure and ejection fraction of left ventricle <45% were included: 46 in the treatment group and 46 in the control group. In the assessed group 59 (64.1%) patients were male, with mean age of 62.25 ± 14.43 years. During the hospitalization period and those who were randomized to acute beta-blocker dose increments, every other day (treatment group) or every 15 days (control group) were selected. The main outcome was the occurrence of rehospitalization or death for different causes. Hypotension, bradycardia, and worsening heart failure were considered as adverse effects. Results: The mean ejection fraction of left ventricle was 27.24±9.08, the average end-diastolic diameter 66.15±8.65 and the average end-systolic diameter 57.04±9.96. In the treatment group, significant reduction of DSFVE in three months and one year (p<0.001) has been observed, whereas in the control group remained unchanged (p=0.337). The LVEDD decreased significantly (p=0.036) in the treatment group and in the control group it was not significant (p=0.250). There was a significant increase of the LVEF in the treatment group (p<0.001) in three months, and no difference occurred in the control group (p=0.151), and no difference between groups in a year was observed. During the 6 min walking test the treatment group showed a significant distance increase (p<0.001) when compared with the control group. The treatment group had free admission probability significantly higher than the control group (p=0.045). As to patients survival, the treatment group showed significantly higher levels than the control group during the evaluation period (p=0.002). Conclusions: Fast increase of the beta-blockers dosage during hospitalization in decompensated heart failure was safe and improved survival, ventricular remodeling, and exercise capacity
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Influência dos padrões estruturais da paisagem na comunidade de mamíferos terrestres de médio e grande porte na Região do Vale do Ribeira, Estado de São Paulo / The influence of the landscape structure pattern in assemblages communities of medium and large terrestrial mammals in the Vale do Ribeira Region - SP

Spinola, Conrado Martignoni 18 June 2008 (has links)
Os estudos estabelecendo relações entre os dados biológicos e padrões espaciais têm contribuído para o entendimento de fenômenos ecológicos em escalas regionais e locais, mesmo que, ainda pouco se saiba sobre esses fenômenos. O enfoque dado a este estudo está voltado a uma interpretação da paisagem, no âmbito ecológico, de forma a entender o comportamento das espécies em relação a sua estrutura. A paisagem deste estudo é composta por diversos elementos, naturais e antrópicos, tais como as plantações de eucalipto e Florestas Estacionais Semideciduais, sendo um fator determinante na composição e distribuição espacial das espécies que a compõem. O objetivo principal deste estudo foi avaliar as relações estruturais da paisagem e o comportamento das espécies que compõem a comunidade de mamíferos terrestres de médio e grande porte na região do Vale do Ribeira, Estado de São Paulo. Essas espécies foram avaliadas a partir de levantamentos sistemáticos pelo método de amostragem \"parcelas de areia\", e a estrutura da paisagem caracterizada através das técnicas de geoprocessamento. Fez-se, ainda, a partir do centro de cada linha de amostragem, uma delimitação da paisagem com 1000 metros de raio, denominada área de influência. A partir das observações de campo constatou-se uma grande riqueza de espécies, totalizando 19 espécies. Destas, 17 espécies foram encontradas em ambiente de Florestas Estacionais Semideciduais e 11 espécies em ambiente de eucalipto, verificando-se certa similaridade de ocorrência para as espécies entre os ambientes amostrados. Através da análise da estrutura, por meio das métricas de paisagem (PLAND_NAT - porcentagem de vegetação nativa nas paisagens analisadas, PLAND_EUC - porcentagem de eucalipto nas paisagens analisadas, PLAND_EST - porcentagem de estradas nas paisagens analisadas, ED_NAT - densidade de borda de vegetação nativa, ENN_NAT - distância do fragmento mais próximo das paisagens analisadas), fez-se a caracterização das zonas de influência. Uma vez obtidas as informações acerca dos dados biológicos e dados da paisagem, realizaram-se as análises de regressão logística múltipla, onde foi verificado o poder de predição das variáveis ambientais em relação a algumas espécies da comunidade estudada. Individualmente, nenhuma variável ambiental pôde explicar a probabilidade de ocorrência das espécies, sendo que, quando utilizadas em conjunto, o poder de predição foi significativo para Leopardus sp. (gato-do-mato) Didelphis albiventris (gambá-de-orelha-branca), Nasua nasua (coati) e Sylvilagus brasiliensis (tapiti). Cada espécie percebe a paisagem de maneira diferente, que de acordo com os parâmetros estimados pelos modelos, Leopardus sp. e Didelphis albiventris apresentaram tendências positivas ao poder de explicação das variáveis PLAND_NAT e ENN_NAT, enquanto que, Nasua nasua uma tendência positiva para todas as variáveis e Sylvilagus brasiliensis uma tendência positiva a PLAND_EST e ENN_NAT. Embasar-se em modelos de predição para espécieschaves, seja em ambientes naturais ou antropizados, é bastante recomendado, pois a conservação de outras espécies pode estar diretamente vinculada. Para tanto, estudos de conservação enfocando comunidades e não apenas populações são interessantes, uma vez que podem abranger diferentes espécies com diferentes requerimentos. A configuração da paisagem, a partir das zonas de influência, pode ser uma amostra representativa da paisagem como um todo, auxiliando nas ações de conservação das espécies de maiores requerimentos ecológicos. / Studies establishing relationships among biological data and spatial patterns have contributed to the understanding of ecological phenomena at regional and local scales, even that, little is known about these phenomena. The approach adopetd in this study is focused to an ecological interpretation of the landscape, in order to understand the behavior of the species in relation to its structure. The studied landscape is composed of several natural and anthropic elements, such as Eucalyptus plantations and Seasonal Semideciduous Forests, being a determining factor in the composition and spatial distribution of the species in the landscape. The main objective of this study was to evaluate the structural relationship of the landscape and the behavior of species that compose the community of medium and large terrestrial mammals, in the Vale do Ribeira region, State of São Paulo, Brazil. These species were evaluated through systematic surveys, known as \"sand plots\", and the landscape structure was characterized by geoprocessing techniques. Yet, from the center of each sampling row, a delimitation of the landscape was done, with 1000 meters in radius, denominated influence zones. From field observations, a great richness of species was verified, totaling 19 species. From these, 17 species were found in Seasonal Semideciduous Forests landscape and 11 species in Eucalyptus landscape, which made it possible to verify some similarity in the species occurrence among the sampled environments. Through structure analysis, using landscape metrics (PLAND_NAT - percentage of native vegetation in the analyzed landscape, PLAND_EUC - percentage of Eucalyptus in the analyzed landscape, PLAND_EST - percentage of roads in the analyzed landscape, ED_NAT - edge density in the native vegetation, ENN_NAT - distance from analyzed landscapes to the nearest native vegetation fragment), the characterization of influence zones was made. Once obtained the information concerning the biological data and landscape data, a multiple logistic regression analyses was performed, when it was verified the prediction power of the environmental variables in relation to some species of the studied community. Individually, no environmental variable could explain the probability of species occurrence, but when used together, the prediction power was significant for Leopardus sp., Didelphis albiventris (opossum), Nasua nasua (coati) and Sylvilagus brasiliensis (tapiti). Using prediction models for key-species, whether in natural or anthropic environments, is highly recommended, as the conservation of other species can be directly linked. Therefore, studies on conservation focusing on communities and not only in populations are interesting, because they may cover different species with different requirements. The configuration of the landscape, taken from the influence zones, can be a representative sample of the landscape as a whole, helping in the actions for the conservation of the species with greatest ecological requirements.
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Baixo valor sérico de P1NP: preditor de perda de massa óssea em mulheres na pré-menopausa com Lúpus Eritematoso Sistêmico / Lower P1NP serum levels: a predictive marker of bone loss in premenopausal SLE patients

Seguro, Luciana Parente Costa 21 October 2013 (has links)
Objetivos: Determinar a incidência de perda de massa óssea em um ano em pacientes com lúpus na pré-menopausa e o valor preditor dos marcadores do metabolismo ósseo para essa complicação. Métodos: Sessenta e três pacientes foram avaliadas à entrada no estudo e após um ano de seguimento. Variações na densidade mineral óssea (DXA) acima da mínima variação significativa (MVS) foram consideradas significativas, como recomendado pela Sociedade Internacional de Densitometria Clínica (International Society for Clinical Densitometry). Os níveis séricos dos marcadores do metabolismo ósseo foram determinados no início do estudo: propeptídeo N-terminal do pro-colágeno tipo 1 (P1NP) e telopeptídeo C-terminal do colágeno tipo 1 (CTX) por eletroquimioluminescência; osteoprotegerina (OPG) e ligante do receptor ativador do fator nuclear kB (RANKL) por ELISA. Resultados: 36,5% dos pacientes apresentaram perda de massa óssea e 17,5% ganho de massa óssea na coluna lombar e/ou fêmur. Os pacientes foram divididos em três grupos: perda de massa óssea (P), massa óssea estável (E) e ganho de massa óssea (G). Pacientes com P e E tomaram doses cumulativa, média e máxima de glicocorticoide semelhantes durante o estudo, mas pacientes com G receberam doses menores (G vs. P e G vs. E, p < 0,05). Os níveis séricos basais de P1NP foram diferentes nos três grupos (P: 36,95 ± 23,37 vs. E: 54,63 ± 30,82 vs. G: 84,09 ± 43,85 ng/ml, p=0,001). Análises de múltiplas comparações demonstraram diferenças significativas nos níveis de P1NP entre P vs. E, p=0,031; P vs. G, p < 0,001 e E vs. G, p=0,039. Não houve diferença entre os grupos com relação aos níveis de CTX, OPG/RANKL, fatores de risco para osteoporose ou parâmetros relacionados à doença. Após análise multivariada, apenas níveis baixos de P1NP permaneceram como fator de risco independente para perda de massa óssea (p < 0,013). Conclusão: Este estudo fornece evidência original que níveis mais baixos de P1NP, o marcador de formação óssea mais específico, são preditores de perda de massa óssea em um ano em mulheres com lúpus na pré-menopausa / Objective: To determine the one-year incidence of bone loss in premenopausal lupus patients and the value of bone markers as predictors of this complication. Methods: Sixty-three premenopausal SLE patients were evaluated at baseline and after one-year of follow-up. Bone mineral density changes (DXA) above the least significant change (LSC) were considered significant, as recommended by International Society for Clinical Densitometry. Serum levels of bone markers were determined at baseline: N-terminal propeptide of type 1 collagen (P1NP) and C-terminal telopeptide of type 1 collagen (CTX) by electrochemiluminescence; osteoprotegerin (OPG) and receptor activator of nuclear factor kB ligand (RANKL) by ELISA. Results: 36.5% of patients presented bone loss and 17.5% bone gain at lumbar spine and/or femur. Patients were divided in three groups: bone mass loss (BL), no bone mass change (NC) and bone mass gain (BG). Patients with BL e NC took similar cumulative, mean and maximum GC doses during the study, but patients with BG took lower doses (BG vs. BL and BG vs. NC, p < 0.05). Baseline P1NP levels were different in the three groups (BL: 36.95 ± 23.37 vs. NC: 54.63 ± 30.82 vs. BG: 84.09 ± 43.85 ng/ml, p=0.001). Further multiple comparison analysis demonstrated significant differences in P1NP between BL vs. NC, p=0.031; BL vs. BG, p < 0.001 and NC vs. BG, p=0.039. No difference was observed concerning the levels of CTX, OPG/RANKL, risk factors for osteoporosis or disease related parameters. After multivariate analysis only lower P1NP levels remained as an independent risk factor for bone loss (p < 0.013). Conclusion: This study provides original evidence that lower levels of P1NP, the most specific bone formation marker, are predictive of bone loss in the next year in premenopausal SLE patients
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Remoção de matéria orgânica de águas residuárias com elevada concentração de sulfato pelas vias sulfetogênica e metanogênica combinadas / Organic matter removal from wastewater with high sulphate concentration by sulphidogenic and methanogenic combined pathways

Vilela, Rogerio Silveira 28 September 2012 (has links)
A utilização da tecnologia anaeróbia para tratamento de águas residuárias contendo sulfato foi considerada inadequada até o final da década de 1980, principalmente pela geração de odor desagradável, potencial corrosivo e pela instabilidade causada aos organismos envolvidos no processo de degradação de matéria orgânica. Entretanto, a remoção simultânea e estável de matéria orgânica e sulfato observado em reatores anaeróbios tem incentivado estudos para compreensão e controle do processo. No entanto, ainda existem lacunas sobre a interação das rotas metabólicas para remoção de matéria orgânica e sulfato combinadamente. Diante dessa problemática este estudo teve como objetivo avaliar a remoção de matéria orgânica e redução de sulfato presentes em água residuária sintética pelas vias metanogênica e sulfetogênica combinadas em um reator anaeróbio horizontal de leito fixo com biomassa imobilizada, operado por longo período de tempo, utilizando o etanol como doador de elétrons. Seis fases distintas com diferentes concentrações de sulfato e valor fixo de concentração de matéria orgânica foram adotadas, diminuindo gradativamente a relação DQO/sulfato. O desempenho do reator foi acompanhado por análises físico química do afluente e efluente. A cada troca de fase procedeu-se perfil de concentrações de DQO, sulfato e sulfeto ao longo do reator. Os resultados apontaram que as variações da concentração de sulfato e da relação DQO/sulfato impostas, acarretaram diferenças no desempenho do reator. A degradação da matéria orgânica e remoção de sulfato foram mais eficientes (95,7% e 93,6%, respectivamente) quando a relação DQO/sulfato esteve entre 3 e 1,8. A alta eficiência do reator na remoção de DQO e redução sulfato foram associadas ao sintrofismo e sinergia dos organismos envolvidos na degradação simultânea de DQO e sulfato. A avaliação de relações DQO/sulfato variando de 0,75 a 12,5, ou seja, abaixo e acima das estequiometricamente, evidenciou que as relações de 12,5 e 7,5 favoreceram a metanogênese, enquanto para relações iguais ou menores que 1,0, a sulfetogênese foi uma via importante para remoção de matéria orgânica, durante a redução do sulfato a sulfeto. Durante as fases com DQO/sulfato menor que 1,0, a sulfetogênese foi mantida com eficiência acima de 40%. / Recently (15 - 10 years ago) the simultaneous and stable organic matter removal and biological sulphate reduction from sulphate-rich wastewater in anaerobic reactors has been observed, encouraging studies for understanding and process control. There are gaps on the knowledge of reactors treating wastewater with different COD/sulphate ratio, combining organic matter removal and biological sulphate reduction. This study aimed to evaluate the simultaneous organic matter removal and biological sulphate reduction present in synthetic wastewater by methanogenic and sulphidogenic combined pathways in a horizontal-flow anaerobic immobilized biomass reactor, operated for a long-term, using the ethanol as electron donor. Six distinct stages were used, with fixed organic matter concentration and different sulphate concentration, gradually decreasing COD/sulphate ratio. The stages 1 and 2 were stages of adaptation to sulphidogenic and the stages 3, 4, 5 and 6 were operation reactor stages. The reactor performance was observed by physical and chemical assays of influent and effluent parameters like pH, sulphate, COD and total alkalinity, sulphide and organic volatile acids only in the effluent. In addition the biological MPN technique was used for the inoculum and final stage for the reactor operation to estimate the number of organisms cells involved in the degradation of the compounds. Profile concentrations of COD, sulphate and sulphide along the reactor were taken. The results has been indicated that imposed variations sulphate concentration and the COD/sulphate ratio, results in difference reactor performance. The organic matter removal by methanogenic and sulphidogenic combined pathways (associated biological sulphate reduction) was efficient (95.7% e 93.6%, respectively) when COD/sulphate ratio was between 3 and 1.8. These high efficiencies obtained for sulphate reduction and organic matter removal at different COD/sulphate ratios were attributed to the intense syntrophism and synergy between to organisms involved in the organic matter removal and biological sulphate reduction. The analyses of the COD/sulphate ratio from 0.75-12.5, below and above the stoichiometrically determined for the degradation of the organic matter in a sulphidogenic pathway, pointed that highest removal efficiency of sulphate was obtained when the COD/sulphate ratio was close to 3. During the stage with COD/sulphate ratio less than 1.0, the sulphidogenisis was maintained with efficiency above 40%.
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Espécies de parasitóides (Hymenoptera: Braconidae) de moscas-das-frutas (Diptera: Tephritidae) no estado de São Paulo: caracterização taxonômica, distribuição geográfica e percentagem de parasitismo / Braconid parasitoids (hymenoptera) of fruit flies (diptera: tephritidae) in the state of são paulo: taxonomic characterization, geographic distribution and percentage of parasitism

Marinho, Cláudia Fidelis 22 April 2004 (has links)
A partir de 148 amostras com parasitóides da família Braconidae, provenientes de levantamentos realizados com as moscas-das-frutas no Estado de São Paulo, foi feito estudo taxonômico, de distribuição e de associação com as moscas hospedeiras e fruteiras. Em 33 municípios, foram coletados 3.009 exemplares. A subfamília Opiinae foi a mais abundante com 96,2% dos exemplares. Apenas 3,8% dos parasitóides pertenciam à subfamília Alysiinae. Foram coletadas seis espécies de braconídeos: Doryctobracon areolatus (Szépligeti), Doryctobracon brasiliensis (Szépligeti), Utetes anastrephae (Viereck), Opius bellus (Wesmael) e Opius sp. (Wesmael), além do alisiíneo Asobara anastrephae (Muesebeck). A maior parte dos braconídeos (77,5%) pertencia a D. areolatus. Esta espécie foi associada ao maior número de espécies frutíferas (26), em 7 famílias, e ocorreu na maioria dos municípios amostrados (30). Foi associada a Anastrepha fraterculus (Wied.), A. obliqua (Macquart) e A. amita Zucchi, sendo obtida pela primeira vez de larvas de moscas em frutos de wampi, Clausena lansium (Lour) Skeels, e de canela-batalha, Cryptocarya aschersoniana Mez. Doryctobracon brasiliensis foi associada apenas A. fraterculus, sendo registrado pela primeira vez em ameixa-japonesa, Prunus salicina Lindl. Não foi possível associar as demais espécies de parasitóides às moscas-das-frutas. Opius sp. foi associada às larvas em canela-batalha (primeiro registro de planta associada). A percentagem de parasitismo de tefritídeos nos 33 municípios foi de 7,75%, variando de 0,02% a 40%. Foi elaborada uma chave de identificação para as espécies. / This work presents the results of a survey of braconid fruit fly parasitoids from 33 localities in the State of São Paulo. In addition to the taxonomic studies, data of geographical distribution and association of braconid species to insect hosts and associated plants were also performed. A total of 3,009 specimens were colleted. The subfamily Opiinae was the most abundant with 96.2% of specimens colleted, and only 3.8% of the parasitoids belonged to the subfamily Alysiinae. Six species of braconids were collected: Doryctobracon areolatus (Szépligeti), Doryctobracon brasiliensis (Szépligeti), Utetes anastrephae (Viereck), Opius bellus (Wesmael) and Opius sp. (Wesmael), beyond the alisiíneo Asobara anastrephae (Muesebeck). Most of the braconids (77.5%) belonged to D. areolatus. This species was associated with the highest number of fruit tree species (26), in 7 families, and occurred in the majority of the cities sampled (30). It was associated to Anastrepha fraterculus (Wied.), A. obliqua (Macquart) and A. amita Zucchi, and it is recorded for the first time from fruit fly larvae in wampi, Clausena lansium (Lour) Skeels, and in &#34;canela-batalha&#34; fruits, Cryptocarya aschersoniana Mez. Doryctobracon brasiliensis was associated only to A. fraterculus, and it is recorded for the first time in fruit fly larvae in plum, Prunus salicina Lindl. It was not possible to associate the other parasitoid species to the fruit fly species. Opius sp. was associated with the fruit fly larvae in &#34;canela-batalha&#34; (first record of associate plant). The percentage of tephritid parasitism in the 33 cities was of 7.75%, varying from 0.02% to 40%. A key to identification for the braconid species was elaborated.
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Estratégias para a produção contínua de hidrogênio em reator anaeróbio de leito fixo / Strategies for continuous hydrogen production in fixed-bed, anaerobic reactors

Anzola Rojas, Mélida del Pilar 05 August 2014 (has links)
O reator anaeróbio de leito fixo tem demonstrado viabilidade para produzir hidrogênio a partir de águas residuárias. No entanto, a liberação do biogás não tem sido contínua devido à diminuição constante da carga orgânica volumétrica específica (COVe) causada pelo acúmulo de biomassa no leito ao longo do tempo. A redução da COVe junto com o envelhecimento da biomassa tem sugerido o estabelecimento de microorganismos consumidores dos constituintes do biogás (H2/CO2) responsáveis por cessar a produção de hidrogênio. Neste trabalho, cinco estratégias foram propostas visando a produção de hidrogênio por longo prazo operacional e com estabilidade, mediante a fixação da COVe, as quais incluíram a alteração da estruturação do leito, inverter o escoamento, realizar descartes periódicos de biomassa e variar a carga orgânica volumétrica aplicada (COV) por meio da variação do tempo de detenção hidráulica (TDH) e da concentração do substrato. Os resultados demonstraram que a manutenção da COVe em um valor adequado permite a produção contínua de hidrogênio. A ordenação do leito, utilizando polietileno de baixa densidade e espuma, e o escoamento descendente favoreceram a diminuição do acúmulo de biomassa e junto com os descartes de biomassa foi possível manter a COVe em um valor estável próximo de 5 g sacarose g-1 SSV d-1. A produção volumétrica de hidrogênio (PVH) foi contínua com valor médio de 0,6 L H2 L-1 d-1 e rendimento (YH2) próximo a 0,5 mol H2 mol-1 sc. Por outro lado, o escoamento ascendente e os descartes de biomassa em reator de leito empacotado e ordenado atingiram uma PVH média de 2,2 ± 0,2 e 3,13 ± 0,07 L H2 L-1 d-1 quando a COVe foi mantida em 2,6 e 4,4 g sacarose g-1 SSV d-1, respectivamente. Por último a variação da COV permitiu manter a COVe entre 3,8 e 6,2 g sacarose g-1 SSV d-1, atingindo um YH2 médio de 2 mol H2 mol-1 sc e um incremento da PHV de 2,4 a 8,9 L H2 L-1 d-1 durante 60 dias consecutivos. Ainda que com resultados satisfatórios referentes à manutenção por longo período operacional e estabilidade na produção de hidrogênio, a supersaturação deste gás no meio líquido, devido a limitações de transferência de massa, foi a principal causa de perdas de hidrogênio neste tipo de reator. / Fixed-bed, anaerobic reactor has been shown to be feasible for hydrogen production from wastewater. However, biogas release has not been continuous due to the continuous specific organic load (SOL) decrease, which in turn is caused by biomass accumulation in the bed, through the time. SOL reduction and biomass ageing have indicated the establishment of the microorganisms that consumes the biogas constituents (H2/CO2) as the main cause for ceasing hydrogen production. In this work, five strategies were proposed aiming at obtaining longterm, stable hydrogen production by using SOL maintenance, modifications of the bed structure, flow inversion, periodic biomass discards and diverse organic load rates (OLR), as a function of the hydraulic retention time (HRT) and of the substrate concentration. Results demonstrated that by maintaining the SOL at proper values, continuous hydrogen production can be accomplished. On one hand, structuring the bed by using low-density polyethylene and foam, together with a down-flow and biomass discards were shown to diminish biomass accumulation, which led to keep a stable SOL value close to 5 g sucrose g-1 VSS d-1. Volumetric hydrogen production (VHP) was continuous with an average value of 0.6 L H2 L-1 d-1 and a yield (YH2) close to 0.5 mol H2 mol-1 sc. On the other hand, up-flow with biomass discharges, when implemented structured-bed and packed-bed reactors reached average VHP values of 2.2 ± 0.2 and 3.13 ± 0.07 L H2 L-1 d-1 as SOL was maintained between 2.6 and 4.4 g sucrose g-1 VSS d-1, respectively. Eventually, SOL was kept between 3.8 e 6.2 g sucrose g-1 VSS d-1 by varying the OLR, thus reaching an average YH2 value of 2 mol H2 mol-1 sc and a VHP increase from 2.4 to 8.9 L H2 L-1 d-1, along sixty consecutive days. As a consequence of mass-transfer limitations, oversaturation of hydrogen at the liquid medium was found as the main factor that causes hydrogen losses concerning fixed-bed reactors, even though the proposed strategies did indeed demonstrate long-term and stable hydrogen production.
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Podridão do pé do mamoeiro: infestação em solos de cultivo, controle alternativo com indutores de resistência e Trichoderma e avaliação dos mecanismos de defesa envolvidos

TAVARES, Giltembergue Macedo 10 March 2009 (has links)
Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2017-03-17T12:56:22Z No. of bitstreams: 1 Giltemberg Macedo Tavares.pdf: 1201827 bytes, checksum: f3dc6ee4db4cb245f2d3cd6c71898ad7 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-17T12:56:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Giltemberg Macedo Tavares.pdf: 1201827 bytes, checksum: f3dc6ee4db4cb245f2d3cd6c71898ad7 (MD5) Previous issue date: 2009-03-10 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Brazil is the main papaya’s producer in the world (Carica papaya L.) and it occupies the first position producing 1,65 million tones, thus, it is an important production with economic and social value, and, in this meaning, Bahia stands out as the largest producing state with a Brazilian production of 724 tons. Many diseases cause damage to the crop by increasing the cost of production, in some cases limiting the exploitation of that production, among those we can highlight diseases like papaya root damage caused by Phytophthora palmivora. This present study aimed: 1) to achieve the level of infestation of P. palmivora in soils of plantations of papaya commercial in the Extreme South of Bahia, to better support the measures of control; 2) ) to evaluate the action of biotic and abiotic inducers in order to increase the root rot in seedlings of papaya inoculated with P. palmivora, in the activity of enzymes of defense, 1,3-glucanase, peroxidase and chitinase, as well as the lignin content of roots; and 3) to analyze the effect of species of Trichoderma spp. on control of P. palmivora etiologic agent of root rot of papaya. In evaluating of the results of infestation of the soil of papaya orchards, it was showed that in those 33 areas assessed, only two of them, the presence of P. palmivora was not found. There was also no significant differences (p <0.05) for incidence of that pathogen, as those varieties of papaya grown in samples soil evaluated. In all eight municipalities that had sampled orchards the presence of the pathogen was detected, and it showed its wide distribution in the Extreme South of Bahia. To evaluate the control of foot rot in papaya seedlings, it was noted that the treatments using ASM, except the dosage 0.15 g / L 6 days before inoculation, showed levels of larger control to the other inductors. Plants sprayed with ASM showed increased activity of peroxidase and -1,3-glucanase and a highest concentration of lignin in relation to the witness. However,these treatments have no effect on the activity of chitinase. The ASM is a potential inducer of resistance to P. palmivora for using it in the management of root rot of papaya. As the assessment of agents of biocontrol happened it was noted that as using 33 isolated of Trichoderma only 2 isolated (T70 - T. harzianum, T68 - T. virens) did not differ statistically from that treatment with the standard fungicide and showed the percentage of survival of 58.3 and 52.4 respectively. The effect of these two isolated of Trichoderma on increase of dry mass and fresh in seedlings of papaya was also evaluated and it was noted that those two isolates showed higher increases in these parameters when compared with witness. The isolated T70 and T68 showed an increase of fresh and dry mass total of 110, 73% and 59; 59% respectively, compared with those witnesses only planted in the soil. The isolates of T. harzianum and T. virens presented potential with biocontrol agent of P. palmivora for being used in the management of root rot of papaya. / O Brasil é o principal produtor de mamão (Carica papaya L.) do mundo ocupando a primeira posição com uma produção de 1,65 milhão de toneladas, sendo assim, uma importante cultura tanto de valor econômico como social, e a Bahia se destaca como o maior Estado produtor brasileiro com uma produção de 724 mil toneladas. Várias doenças causam danos à cultura aumentando o custo de produção, sendo em alguns casos limitantes a exploração da cultura, dentre essas doenças podemos destacar a podridão do pé do mamoeiro causada por Phytophthora palmivora. Os objetivos do presente estudo foram: 1) realizar o nível de infestação de P. palmivora em solos de plantações de mamoeiros comerciais na região Extremo Sul da Bahia, para melhor subsidiar as medidas de controle; 2) avaliar a ação de indutores biótico e abióticos na redução da podridão de raízes em mudas de mamoeiro inoculadas com P. palmivora, na atividade das enzimas de defesa, 1,3-glucanase, peroxidase e quitinase, assim como no teor de lignina dasraízes; e 3) avaliar o efeito de espécies de Trichoderma spp. sobre controle de P. palmivora agente etiológico da podridão radicular do mamoeiro. Para a avaliaçãos dos resultados de infestação do solo de pamares de mamoeiro observou-se que das 33 áreas avaliadas apenas em duas não se constatou a presença de P. palmivora. Também não houve diferenças significativas (p<0,05) para incidência do patógeno, quanto às variedades de mamoeiro plantadas nas amostras de solos avaliados. Em todos os oito municípios que tiveram pomares amostrados foi detectada a presença do patógeno, atestando sua ampla distribuição no Extremo Sul da Bahia. Para avaliação do controle da podridão do pé em mudas de mamoeiro constou-se que os tratamentos com ASM, com exceção da dosagem 0,15 g/L 6 dias antes da inoculação, apresentaram níveis de controle supeiores aos demais indutores. Plantas pulverizadas com ASM apresentaram aumento deatividade da peroxidase e 1,3-glucanase e maior concentração de lignina em relação à testemunha. No entanto, estes tratamentos não tiverem efeito sobre a atividade da quitinase. O ASM é um potencial indutor de resistência a P. palmivora para ser usado no manejo da podridão de raízes do mamoeiro. Quanto a avaliação dos agentes de biocontrole observdos ou-se que 33 isolados de Trichoderma utilizados apenas 2 isolados (T70 - T. Harzianum, T68 - T. virens) não diferiram estatisticamente do tratamento com o fungicida padrão, apresentaram o percentual de sobrevivência de 58,3 e 52,4 respectivamente. Foi avaliado também o efeito destes dois isolados de Trichoderma sobre incremento de massa seca e fresco em mudas de mamoeiro e contatou-se que dois isolados apresentaram maiores aumentos nestes dois parâmetros quando comparados com testemunha. O isolado T70 e T68 de apresentaram um incremento de massa fresca e seca total de 110; 73% e 59; 59% respectivamente, comparados com a testemunha apenas plantadas no solo. Os isolados de T. harzianum e T. virens apresentaram potencial com agente biocontroladorde P. palmivora para ser usado no manejo da podridão de raízes do mamoeiro.
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Baixo valor sérico de P1NP: preditor de perda de massa óssea em mulheres na pré-menopausa com Lúpus Eritematoso Sistêmico / Lower P1NP serum levels: a predictive marker of bone loss in premenopausal SLE patients

Luciana Parente Costa Seguro 21 October 2013 (has links)
Objetivos: Determinar a incidência de perda de massa óssea em um ano em pacientes com lúpus na pré-menopausa e o valor preditor dos marcadores do metabolismo ósseo para essa complicação. Métodos: Sessenta e três pacientes foram avaliadas à entrada no estudo e após um ano de seguimento. Variações na densidade mineral óssea (DXA) acima da mínima variação significativa (MVS) foram consideradas significativas, como recomendado pela Sociedade Internacional de Densitometria Clínica (International Society for Clinical Densitometry). Os níveis séricos dos marcadores do metabolismo ósseo foram determinados no início do estudo: propeptídeo N-terminal do pro-colágeno tipo 1 (P1NP) e telopeptídeo C-terminal do colágeno tipo 1 (CTX) por eletroquimioluminescência; osteoprotegerina (OPG) e ligante do receptor ativador do fator nuclear kB (RANKL) por ELISA. Resultados: 36,5% dos pacientes apresentaram perda de massa óssea e 17,5% ganho de massa óssea na coluna lombar e/ou fêmur. Os pacientes foram divididos em três grupos: perda de massa óssea (P), massa óssea estável (E) e ganho de massa óssea (G). Pacientes com P e E tomaram doses cumulativa, média e máxima de glicocorticoide semelhantes durante o estudo, mas pacientes com G receberam doses menores (G vs. P e G vs. E, p < 0,05). Os níveis séricos basais de P1NP foram diferentes nos três grupos (P: 36,95 ± 23,37 vs. E: 54,63 ± 30,82 vs. G: 84,09 ± 43,85 ng/ml, p=0,001). Análises de múltiplas comparações demonstraram diferenças significativas nos níveis de P1NP entre P vs. E, p=0,031; P vs. G, p < 0,001 e E vs. G, p=0,039. Não houve diferença entre os grupos com relação aos níveis de CTX, OPG/RANKL, fatores de risco para osteoporose ou parâmetros relacionados à doença. Após análise multivariada, apenas níveis baixos de P1NP permaneceram como fator de risco independente para perda de massa óssea (p < 0,013). Conclusão: Este estudo fornece evidência original que níveis mais baixos de P1NP, o marcador de formação óssea mais específico, são preditores de perda de massa óssea em um ano em mulheres com lúpus na pré-menopausa / Objective: To determine the one-year incidence of bone loss in premenopausal lupus patients and the value of bone markers as predictors of this complication. Methods: Sixty-three premenopausal SLE patients were evaluated at baseline and after one-year of follow-up. Bone mineral density changes (DXA) above the least significant change (LSC) were considered significant, as recommended by International Society for Clinical Densitometry. Serum levels of bone markers were determined at baseline: N-terminal propeptide of type 1 collagen (P1NP) and C-terminal telopeptide of type 1 collagen (CTX) by electrochemiluminescence; osteoprotegerin (OPG) and receptor activator of nuclear factor kB ligand (RANKL) by ELISA. Results: 36.5% of patients presented bone loss and 17.5% bone gain at lumbar spine and/or femur. Patients were divided in three groups: bone mass loss (BL), no bone mass change (NC) and bone mass gain (BG). Patients with BL e NC took similar cumulative, mean and maximum GC doses during the study, but patients with BG took lower doses (BG vs. BL and BG vs. NC, p < 0.05). Baseline P1NP levels were different in the three groups (BL: 36.95 ± 23.37 vs. NC: 54.63 ± 30.82 vs. BG: 84.09 ± 43.85 ng/ml, p=0.001). Further multiple comparison analysis demonstrated significant differences in P1NP between BL vs. NC, p=0.031; BL vs. BG, p < 0.001 and NC vs. BG, p=0.039. No difference was observed concerning the levels of CTX, OPG/RANKL, risk factors for osteoporosis or disease related parameters. After multivariate analysis only lower P1NP levels remained as an independent risk factor for bone loss (p < 0.013). Conclusion: This study provides original evidence that lower levels of P1NP, the most specific bone formation marker, are predictive of bone loss in the next year in premenopausal SLE patients

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