Orientadora: Maria Izabel Souza Camargo / Coorientadora: Karen Cristiane Martinez de Moraes / Banca: Flavio Flavio Henrique Caetano / Banca: Edson Luis Maistro / Resumo: Os carrapatos, ectoparasitas hematófagos, produzem uma saliva em cuja composição encontram-se moléculas capazes de modular o sistema imuneinflamatório e hemostático do hospedeiro. No presente estudo, foi realizada a caracterização do extrato de glândulas salivares de fêmeas do carrapato Rhipicephalus sanguineus (Latreille, 1806) alimentadas por quatro dias em coelhos hospedeiros, por meio de espectrometria de massas (LCMS-IT-TOF) pela estratégia de Shotgun, que identificou 14 proteínas, com as mais diversas funções como componentes estruturais de junções celulares, do citoesqueleto, do nucleossomo, além de proteínas com ações anticoagulante e anti-inflamatória corroborando os dados presentes na literatura. Neste trabalho buscou-se, ainda, analisar o potencial antitumoral desse extrato em células das linhagens tumorais SK-HEP-1 e HEP-G2, por meio de ensaios de MTT; análise, por técnicas de Microscopia de Confocal de Varredura a Laser, do núcleo e citoesqueleto; e análise do padrão de transcrição de mRNAs envolvidos nos eventos ou mecanismos de morte celular por apoptose, incluindo os produtos dos genes Bax, Bcl-2, Caspases 3 e 9, Fas e Interleucina 1 α. Os resultados obtidos mostraram que o extrato na concentração de 50 μg/mL inibiu significativamente a proliferação celular das duas linhagens testadas. Pela análise dos núcleos e filamentos de actina das células expostas, não foram verificadas características morfológicas que indicassem processos de morte celular por apoptose. Já a análise do padrão de transcrição de mRNAs envolvidos nos mecanismos de morte celular por apoptose, evidenciou a expressão significativa de alguns genes anti e pró-apotóticos nas células tratadas quando comparadas às do grupo controle, sugerindo que a ação do extrato pode causar o desbalanço na homeostase celular, que pode desencadear processos de morte celular por apoptose, corroborando os dados apresentados na... / Abstract: Ticks, hematophagous ectoparasites produces saliva that presents molecules capable of modulating the immune-inflammatory and hemostatic system of the host. The present study was performed to characterize the salivary gland extract of female Rhipicephalus sanguineus (Latreille, 1806) fed for four days in rabbits by mass spectrometry (LCMS-IT-TOF) by shotgun strategy, which identified 14 proteins with diverse functions: as structural components of cell junctions, cytoskeleton, the nucleosome, and protein with anticoagulant and antiinflammatory actions corroborating data in the literature. In this study, we attempted to also examine the antitumor potential of this extract on tumor cell lines SK HEP-1 and HEP-G2, by MTT assay; analysis by Laser Scanning Confocal Microscopy techniques, and pattern analysis of mRNA transcription involved in cell death by apoptosis, including the products of genes Bax, Bcl-2, Caspases 3 and 9 Fas and Interleukin-1 α. The results showed that the extract obtained in concentration of 50 μg/ml significantly inhibited the proliferation of both cell lines tested. In the analysis of cores and actin filaments, of the treated cells were not observed morphological characteristics that indicate cell death processes by apoptosis. The analysis of the pattern of transcription of mRNAs involved in mechanisms of cell death by apoptosis, showed a significant expression of some apoptotic genes, in treated cells compared to the control group, suggesting that the action of the extract can cause an unbalance homeostasis in the cell, which can trigger processes of cell death by apoptosis, confirming the data presented in the literature / Mestre

Orientador: Lucia Helena O'Dwyer / Banca: Elizabeth Moreira dos Santos Schmidt / Banca: Gervásio Henrique Bechara / Resumo: Hepatozoon canis é um hemoparasita transmitido por carrapatos que afeta cães em diversas regiões do mundo. Rhipicephalus sanguineus é considerado seu vetor biológico, entretanto, é possível que existam outros vetores. No Brasil, H. canis é descrito principalmente em áreas rurais, onde cães podem ser infestados por outras espécies, incluindo Amblyomma spp. O objetivo do presente trabalho foi infectar experimentalmente diferentes espécies de carrapatos com H. canis, a partir de cães naturalmente infectados. Para isso, foram utilizadas ninfas de A. cajennense e R. sanguineus e adultos de A. cajennense e A. ovale. Após o ingurgitamento dos espécimes em animal infectado, foi realizada pesquisa de formas evolutivas do protozoário na hemolinfa, intestino e hemocele dos ixodídeos, por técnicas citológicas e histológicas. Alguns carrapatos foram submetidos ao diagnóstico molecular pela técnica de PCR. Somente em duas fêmeas de A. cajennense foram observadas estruturas morfologicamente semelhantes a Hepatozoon spp. e uma fêmea de A. ovale apresentou oocistos na hemocele. Além disso, duas fêmeas de A. ovale e uma de A. cajennense foram positivas na PCR. Entretanto, não é possível caracterizar essas espécies como vetores de H. canis, pois foram usados muitos exemplares nas infecções experimentais e poucos foram capazes de se infectar com o parasita. É provável que R. sanguineus tenha pouca importância epidemiológica na transmissão de H. canis no Brasil, pois este estudo, assim como pesquisas anteriores, demonstraram que a espécie foi incapaz de se infectar experimentalmente com o protozoário / Abstract: Hepatozoon canis is a hemoparasite that afflicts dogs in several regions of the world. Rhipicephalus sanguineus is considered to be the biologic vector of this agent, although other species may act as possible vectors. In Brazil, H. canis is described mainly in rural areas, where dogs are infested by other species, such as Amblyomma spp. The aim of this study was to transmit experimentally H. canis to different species of ticks, using naturally infected dogs. For this purpose A. cajennense and R. sanguineus nymphs and A. cajennense and A. ovale adults were used. After the repletion of specimens fed on a naturally infected animal, we searched for development forms of the protozoa in hemolymph, gut and hemocoel of the ticks by cytological and histopathologic examinations. Some ticks were also examined by molecular detection (PCR). Only two female ticks of the species A. cajennense contained structures morphologically similar to Hepatozoon spp. and oocysts were recovered from the hemocoel of an A. ovale female. In addition, two females of A. ovale and one female of A. ovale were positive through PCR. However, our results are not enough to characterize these species as vectors of H. canis mainly because many ticks were used in experimental infections and few were infected with the parasite. It is likely that R. sanguineus has little epidemiological importance in the transmission of H. canis in Brazil, since this research and previous researchers demonstrated that R. sanguineus was unable to experimentally get infected with the protozoan / Mestre

Orientador: Antonio Carlos Paes / Coorientador: Osimar de Carvalho Sanches / Banca: Maria Lúcia Gomes Lourenço / Banca: Noeme Sousa Rocha / Banca: Erica Engelberg Teixeira da Silva Hucke / Banca: Helder Esteves Thomé / Resumo: Ehrlichiose Monocítica Canina (EMC) é uma enfermidade infecciosa, potencialmente fatal, causada por Ehrlichia canis, transmitida pelo carrapato Rhipicephalus sanguineus. O curso da enfermidade é dividido em três fases: aguda, subclínica e crônica. O objetivo deste estudo foi avaliar as lesões anatomopatológicas que ocorreram no parênquima e no endotélio vascular do encéfalo, coração, pulmão, fígado, rim, baço e linfonodo mesentérico de 16 cães que vieram a óbito acometidos pela EMC na fase crônica. Esses animais apresentaram sinais clínicos neurológicos, porém na avaliação microscópica não exibiam lesões que justificassem esses sintomas. No coração foi possível notar a presença de alterações vasculares visíveis, como Coagulação Intravascular Disseminada, necrose dos miócitos próximos a esses vasos, congestão e hemorragias devido à severa trombocitopenia desenvolvida durante a infecção. No pulmão notou-se pneumonia em grande parte dos animais estudados. O fígado também se apresentou acometido, mas não diretamente pela infecção, mas sim por consequência de outros fatores prejudiciais relacionados à doença. Em todos os rins avaliados a glomerulonefrite se mostrou presente. Em todos os 16 animais pode-se notar a esplenomegalia. O linfonodo mesentérico não é uma estrutura muito estudada em animais com EMC, mas pode-se notar um grande infiltrado plasmocitário. No entanto, cocluiu-se que a vasculite foi responsável por grande parte das lesões, sendo predominante o infiltrado plasmocitário / Abstract: Canine Monocytic Ehrlichiosis (CME) is an infectious disease, potentially fatal, caused by Ehrlichia canis, transmitted by Rhipicephalus sanguineus. The course of the disease is divided into three stages: acute, chronic and subclinical. The aim of this study was to evaluate the pathological lesions that occurred in the parenchyma and the vascular endothelium of the brain, heart, lung, liver, kidney, spleen and mesenteric lymph node of 16 dogs that died affected by CME in the chronic phase. These animals showed neurological signs, but in microscopic evaluation showed no injury to justify these symptoms. In the heart it was possible to notice the presence of visible vascular abnormalities, such as disseminated intravascular coagulation, necrosis of the myocytes near these vessels, congestion and bleeding due to severe thrombocytopenia developed during infection. In the lung was noted pneumonia in most animals studied. The liver also appeared affected, but not directly by infection, but as a result of other harmful factors related to the disease. In all evaluated kidneys showed this glomerulonephritis. In all 16 animals can be noted splenomegaly. The mesenteric lymph node is not a very studied structure in animal CME, but you may notice a large plasma cell infiltrate. However, the vasculitis was responsible for much of the lesions, predominant being the plasma cell infiltrate / Doutor

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Núcleo de Medicina Tropical, Progragama de Pós-graduação em Medicina Tropical, 2012. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2013-01-04T13:40:56Z No. of bitstreams: 1 2012_VivianeMedeirosSilva.pdf: 8808644 bytes, checksum: 9d9dc0f5cdac4641c66122653211e830 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2013-02-04T12:53:57Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_VivianeMedeirosSilva.pdf: 8808644 bytes, checksum: 9d9dc0f5cdac4641c66122653211e830 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-02-04T12:53:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_VivianeMedeirosSilva.pdf: 8808644 bytes, checksum: 9d9dc0f5cdac4641c66122653211e830 (MD5) / No Brasil, a leishmaniose visceral canina (LVC) é causada pelo parasito Leishmania chagasi, (sin. L. infantum). Considera-se que a principal via de transmissão da LV é por meio da picada de flebotomíneos infectados. Entretanto, formas alternativas têm sido investigadas e a picada ou ingestão de carrapatos infectados poderia ter relevância epidemiológica. A presença de L. chagasi em Rhipicephalus sanguineus poderia explicar a transmissão do parasito na população canina em locais onde há baixa frequência de flebotomíneos. O objetivo deste trabalho foi detectar a presença de Leishmania spp. em R. sanguineus coletados em cães naturalmente infectados no Distrito Federal. O projeto foi aprovado pelo Comitê de Ética no Uso de Animais da Faculdade de Medicina da Universidade de Brasília. Os carrapatos foram obtidos de uma amostra de conveniência composta por 48 cães entregues por seus donos à Diretoria de Vigilância Ambiental da Secretaria de Saúde do Distrito Federal com diagnóstico suspeito ou confirmado de LVC, por meio de testes sorológicos, ou cães recolhidos por ocasião da realização do inquérito rotineiro do programa de controle de LVC no DF. Foi coletado sangue venoso dos 48 cães para avaliação sorológica da infecção por Leishmania spp por meio das técnicas imunoenzimática e imunofluorescência indireta, ambas com antígeno bruto de L. major; do teste imunocromatográfico rápido de duplo percurso com antígeno recombinante K28 e aplicação da técnica de PCR para amplificação de alvos de DNA gênero-específicos. Após a identificação dos espécimes de R. sanguineus, os carrapatos foram armazenados em pools de até 10 espécimes, separando-os em grupos de machos, fêmeas e ninfas. Os carrapatos foram dissecados para retirar o intestino e glândulas salivares para extração de DNA e posterior amplificação da região conservada de 120pb de kDNA e 234pb do gene hsp70 de Leishmania spp. por meio da PCR e para cultura em meio NNN modificado. Os produtos amplificados de kDNA foram ainda submetidos à digestão com as endonucleases Hae III e BstUI e ao sequenciamento genético para identificação das espécie do parasito. Foram realizados esfregaços em lâminas coradas com Giemsa para observação direta de formas de Leishmania spp. A positividade das técnicas sorológicas aplicadas ao sangue canino foi de 66,6% pelo ELISA, destes, 81,2% pela RIFI e 56,2% do total pelo DPP, e ainda, 70,8% dos cães apresentaram pelo menos um dos três testes com resultados reagentes ou positivos. Foram coletados 130 espécimes de R. sanguineus dos 27 cães que se apresentaram ectoparasitados. Houve sucesso no isolamento em cultura de Leishmania spp. de cinco pools de glândulas salivares e intestinos de carrapatos coletados em quatro cães. O sequenciamento do kDNA amplificado pela PCR a partir destas amostras demonstrou homologia com sequências de Leishmania spp. Os produtos amplificados de kDNA a partir de amostra sanguínea de um dos cães apresentou homologia com sequência de L. braziliensis, no entanto, a homologia do material amplificado a partir dos carrapatos coletados desse cão foi com uma sequência de L. infantum. A cultura analisada por eletroforese de isoenzimas foi identificada como L. infantum. A infecção por Leishmania nos cães, dos quais foram coletados os pools de carrapatos positivos na cultura, foi confirmada pela PCR. A lâmina do pool de machos de um dos cães foi a única a apresentar formas flageladas de tripanossomatídeos, cuja identificação não foi possível pela morfometria. Os resultados obtidos indicam que R. sanguineus que se alimentam naturalmente em cães naturalmente infectados por L. infantum apresentam DNA do parasito no intestino e glândulas salivares, confirmam a presença de L. infantum viável nestes ectoparasitos,e a possibilidade de isolar L. infantum em meio de cultura. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / In Brazil, canine visceral leishmaniasis (CVL) is caused by the parasite Leishmania chagasi (syn. L. infantum). It is considered that the principal route of transmission of the VL is through the bite of infected sand flies. However, alternative methods have been investigated and bites or ingestion of infected ticks could have epidemiological relevance. The presence of L. chagasi in Rhipicephalus sanguineus could explain the transmission of the parasite in the canine population in areas where there are low frequency of sand flies. The objective of this study was to detect the presence of Leishmania spp. in R. sanguineus collected from dogs naturally infected in the District Federal. The project was approved by the Ethics Committee on Animal Use of the UNB Faculty of Medicine. Ticks were obtained from a convenience sample consisting of 48 dogs delivered by their owners to the Environmental Surveillance Directory of Health Department of the District Federal with suspected or confirmed diagnosis of CVL, through tests, or dogs collected during the day routine investigation of the control program LVC in DF. Venous blood was collected from 48 dogs for serologic evaluation of infection by Leishmania spp. by means of ELISA and indirect immunofluorescence techniques, both with crude antigen of L. major, the immunochromatographic dual path assays with recombinant K28 and amplification of genus specific DNA targets by PCR. After identification of specimens of R. sanguineus ticks were stored in pools of up to 10 specimens, separating them into groups of males, females and nymphs. Ticks were dissected to remove the gut and salivary glands for DNA extraction and subsequent amplification of 120pb of the conserved region of kDNA and 234pb of the hsp70 gene of Leishmania spp. by PCR. Ticks sample were also cultured in modified NNN culture medium. The amplified products of kDNA were further subjected to digestion with restriction endonucleases Hae III and BstUI and gene sequencing to identify the parasite species. Smears were prepared on slides stained with Giemsa for observation of Leishmania spp. forms. The positivity of serological techniques applied to canine blood was 66.6% by ELISA. Among positive samples, 81.2% were also positive by IFA and 56.2% by DPP, then, 70.8% of dogs had at least one of the three tests with positive results. We collected 130 specimens of R. sanguineus of the 27 dogs that had ectoparasites. Isolation of Leishmania spp. was successfull in five pools of salivary glands and intestines of ticks collected from four dogs. Sequencing kDNA amplified by PCR from these samples revealed homology with sequences of Leishmania spp. The amplified products of kDNA in a blood sample from one of the dogs showed sequence homology to L. braziliensis, however, the amplified material from ticks collected from this dog had homology with L. infantum sequence. The isolate analyzed by mulilocus enzyme electrophoresis was identified as L. infantum. The Leishmania infection in dogs where we collected the pools of ticks which had successful parasite isolation in culture was confirmed by PCR. The smear of the pool of male ticks collected from one dog was the only positive for flagellated trypanosomatidae whose identification was not possible by morphometry. Our results indicate that R. sanguineus feeding naturally in dogs naturally infected by L. infantum had parasite DNA present in the intestine and salivary glands, confirm the presence of viable L. infantum in these ectoparasites, and the possibility of isolation of L. infantum in culture medium.

Utilizou-se técnicas de geoprocessamento e imagens geradas pelo Sistema Landsat 7 - ETM+, para identificar áreas favoráveis ao crescimento das populações de Amblyomma cajennense e, conseqüentemente, o risco de infestação humana pelo carrapato no Município de Piracicaba, São Paulo, Brasil. As imagens de satélite permitiram determinar os valores de temperatura e do Índice de Vegetação por Diferença Normalizada (NDVI) que, em associação com as variáveis, densidade de eqüinos e modelo preditivo de distribuição de capivaras (Hydrochoerus hydrochaeris), foram utilizadas para construir um modelo de risco multivariado identificando assim áreas favoráveis ao crescimento de populações do carrapato. Verificou-se que a população humana exposta às regiões altamente desfavoráveis ou desfavoráveis ao crescimento de populações de A. cajennense é de, no mínimo, 70,14% podendo chegar a 96,16%. Por outro lado, de 0,04% a 15,23% da população está exposta a áreas favoráveis ou altamente favoráveis ao longo do ano. / Geoprocessing techniques and Landsat 7 - ETM+ images were used to identify suitable areas for the development of Amblyomma cajennense populations and the resulting risk of human infestation by that tick in Piracicaba, São Paulo, Brazil. Temperature and Normalized Difference Vegetation Index (NDVI) were calculated based on satellite images, and those data were later associated with horse density and a predictive model of spatial distribution of capybaras (Hydrochoerus hydrochaeris) to build a multi-variant risk model. It was observed that the human population exposed to extremely unsuitable or unsuitable areas ranges from 70.14% to 96.16%. On the other hand, 0.04% to 15.23% of the human population is exposed to suitable or extremely suitable areas throughout the year.

Os carrapatos estão distribuídos por todo mundo e impactam tanto a saúde animal quanto humana. A espécie Rhipicephalus (Boophilus) microplus é o principal parasita que afeta a bovinocultura nas regiões tropicais e subtropicais do globo, causando grandes prejuísos econômicos. Os métodos de controle estão baseados no uso de acaricidas químicos, o que resulta na seleção de populações resistentes e no risco de poluição do meio ambiente e dos alimentos. As vacinas têm-se mostrado um método de controle factível, e representam uma alternativa ao uso de acaricidas químicos. No entanto, dez anos após a disponibilização da primeira vacina comercial contra carrapatos, ainda não foi encontrada uma formulação capaz de alcançar a proteção necessária para dispensar o uso de agentes químicos. Sendo assim, estudar a biologia do parasita e conhecer mecanismos de importância fisiológica pode ser uma boa estratégia para encontrar moléculas alvo que possam ser usadas como antígenos no desenvovimento de uma vacina eficaz. Com este objetivo, nesta tese foi estudada a reprodução em carrapatos e avaliada a eficácia de uma enzima evolvida neste processo como antígeno vacinal. Foram abordados os processos de vitelogênese e de embriogênese. Em uma primeira etapa, usando carrapatos da espécie Amblyomma hebraeum como modelo, foi investigada a atuação do hormônio 20- hidroxiecdisona (20E) e de fatores adicionais, presentes na hemolinfa, na captação de vitelogenina (Vg) pelos oócitos. Neste trabalho, verificamos que existem diferentes estratégias de controle da captação de Vg pelo ovário nos carrapatos Ixodide, e que para que ocorra capatação de Vg pelos oócitos de A. hebraeum é necessaário um fator adicional presente na hemolinfa das fêmeas. Uma vez que o desenvolvimento do embrião depende da disponibilidade do material do vitelo estocado nos oócitos, a segunda parte da tese explorou uma cisteíno endopeptidase envolvida na degradação de vitelina (Vt) em ovos do carrapato R. microplus denominada Vitellin Degrading Cysteine endopeptidase (VTDCE). As enzimas da classe das cisteíno endopeptidases estão amplamente distribuidas nas fêmeas deste carrapato. Os estudos com VTDCE mostraram que esta é uma enzima de origem materna, com provável síntese extraovariana e transporte pela hemolinfa, até ser internalizada pelos oócitos. A VTDCE está presente durante todo o desenvolvimento embrionário, assim como em larvas. Interessantemente, esta cisteíno endopeptidase apresenta a propriedade de se associar a Vt por um outro sítio, além do sítio ativo. A VTDCE é a enzima mais eficiente na degradação de vitelina (Vt) em ovos de R. microplus, e devido a sua importância fisiológica, a VTDCE foi testada como antígeno em experimento de vacinação de bovinos e desafio com larvas de R. microplus. Os parâmetros mais afetados nos carrapatos alimentados em bovinos vacinados, com relação aos controles, foram o peso das fêmeas ingurgitadas (19,3 %) e a fertilidade dos ovos (17,6 %). Relacionado os parâmetros análisados, vimos que este antígeno confere uma proteção de 21% aos animais imunizados quando infestados por R. microplus. A proteção parcial alcançada pela VTDCE pode ser complementar a de outros antígenos no desenvolvimento de um coquetel antigênico contra carrapatos, uma vez que nenhum antígeno encontrado até o momento foi capaz de oferecer a proteção necessária para ser empregado individualmente na composição de uma vacina. Estudos como os realizados nesta tese contribuem para o melhor entendimento da biologia dos carrapatos, assim como para o desenvolvimento de novos e melhores métodos de controle desses parasitas. / Ticks are distributed worldwide impacting human and animal health. The cattle tick Rhipicephalus (Boophilus) microplus is the main parasite that affects livestock in tropical and subtropical regions of world, causing large economical losses. Tick control methods are based on the application of chemical acaricides, which has resulted in selection of resistant ticks and a potential risk of environmental pollution and food contamination. Vaccines have been shown to be a feasible tick control method that offers a cost-effective, environmentally friendly alternative to chemical control. However, ten years after the commercialization of the first vaccine against ticks, to identify tickprotective antigens remains a limiting step in the development of an efficient formulation that would avoid the use of chemical acaricides. In face of this situation, to study the parasite biology and understanding physiological important mechanisms could be a good strategy to find new targets to be used in an efficient vaccine. In order that, this thesis subject was to investigate the reproduction process in ticks and to evaluate the efficiency of an enzyme involved in this process as vaccinal antigen. The process of vitellogenesis and embryogenesis were studied. In the first part, using Amblyomma hebraeum ticks as model, the role of 20- hydroxiecdisone and additional hemolymph borne factors in vitellogenin (Vg) uptake by oocytes were investigated. Our findings showed that there are different strategies to control Vg uptake by ovary in Ixodide ticks. Additionally, for Vg uptake in A. hebraeum ovaries, a vitellogenin uptake factor (VUF) present in female hemolymph is required. As embryo development depends on the availability of yolk material stored into the oocytes, in the second part we studied a cysteine endopeptidase involved in Vt digestion in R. microplus eggs, named vitellin-degrading cysteine endopeptidase (VTDCE). Cysteine endopeptidase enzymes are widely distributed in these tick females. Studies with VTDCE demonstrate that it is a maternal derived endopeptidase involved in a route including extraovarian synthesis, transport, and ovary uptake, before internalization by oocytes. VTDCE is present during all tick development, as well as in larva. Interestingly, this cysteine endopeptidase is able to associate with Vt in another site than the active site. VTDCE showed to be the most efficient Vt hydrolytic enzyme in R. microplus eggs. So, supported by its physiological role, VTDCE was used as antigen in bovine vaccination and R. microplus challenge experiment. The most affected biological parameters in ticks fed on vaccinated animals were weight of engorged ticks (19.3 %), and egg fertility (17.6 %). Relating the biological parameters analyzed, bovine vaccination with VTDCE as antigen resulted in an overall protection of 21%. Therefore, this partial protection could be complementary in the formulation of an antigenic cocktail against tick, once there is not one single protein that achieves the protection level necessary for an efficient and practical vaccine development. Studies like that contribute to the better understanding of tick biology, as well as to the development of new and more efficient methods of control.

Orientador: Aricio Xavier Linhares / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-22T09:52:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bossi_DavidEduardoPaolinetti_M.pdf: 5070385 bytes, checksum: 6f921151438dea2442e47fcc5958e867 (MD5) Previous issue date: 1996 / Resumo: Com o objetivo de estudar as associações entre pequenos mamíferos da Mata Atlântica e artrópodes ectoparasitas, este estudo foi desenvolvido na Estação Ecológica de Juréia-Itatins - SP, no período de março de 1989 a fevereiro de 1990. Foram estudados seis hospedeiros, três roedores e três marsupiais e suas relações com 12 espécies de invertebrados, quatro insetos, incluindo uma espécie causadora de miíase e uma associação mutualística, e oito acarinos. A intensidade parasitária, a relação com a época do ano e a pluviosidade foram também correlacionados com a abundância tanto dos hospedeiros quanto dos ectoparasitas. O hospedeiro que apresentou maior freqüência de captura foi roedor Oryzomys intermedius, e o ectoparasita com maior freqüência foi o ácaro Gigantolaelaps gilmorei, que prevalece naquele hospedeiro. O díptero Metacuterebra apicalis provocou miíases em hospedeiros de classes taxonômicas diferentes, o roedor Oryzomys intermedius e o marsupial Metachirus nudicaudatus. O mesmo ocorreu na associação mutualística entre o coleóptero Amblyopinus sp. e seus dois hospedeiros, o roedor Trinomys iheringi e o marsupial Philander opossum / Abstract: In order to study the associations between small marnrnals living in the Atlantic Forest and their parasitic arthropods, a study was undertaken at the "Juréia-Itatins" Ecological Reservation, located in São Paulo State, from march 1989 to february 1990. Six host species were studied: three of rodents and three of marsupiaIs. Twelve species of parasitic arthropods were collected: four of insects, and eight of Acari. The intensity of parasitism , the period of the year and the pluviosity were correlated with the abundances ofthe ectoparasites and their hosts. The most abundant host was Oryzomys intermedius, and the most common parasite was the mite Gigantolaelaps gilmorei. The fly Metacuterebra apicalis caused myiasis in two different hosts: O'yzomys intermedius (Rodentia) and Metachirus nudicaudatus (Marsupialia). The same phenomenon ocorred with the mutualistic association between the staphylinid beetle Amblyopinus sp. and it hosts Trinomys iheringi (Rodentia) and Philander opossum (Marsupialia) / Mestrado / Parasitologia / Mestre em Ciências Biológicas

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2016-12-21T12:49:43Z No. of bitstreams: 1 paulahocayendepaula.pdf: 483329 bytes, checksum: fb02e4ccca0d774566f707ecf9a8926d (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2016-12-22T12:51:44Z (GMT) No. of bitstreams: 1 paulahocayendepaula.pdf: 483329 bytes, checksum: fb02e4ccca0d774566f707ecf9a8926d (MD5) / Made available in DSpace on 2016-12-22T12:51:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 paulahocayendepaula.pdf: 483329 bytes, checksum: fb02e4ccca0d774566f707ecf9a8926d (MD5) Previous issue date: 2000-04-25 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A descrição do comportamento de queda de fêmeas ingurgitadas do carrapato Boophilus microplus foi feita em experimento realizado na Estação Experimental da Embrapa Gado de Leite, em Coronel Pacheco- MG com o objetivo de avaliar as vantagens da modificação do horário de ordenha dos animais, em relação à higienização do pasto, em se tratando do carrapato. O experimento constou de uma fase de verão, com fotoperíodo maior e outra de inverno com fotoperíodo menor. Foram realizadas doze repetições semanais, de vinte e quatro horas de duração, em cada fase, onde oito vacas secas 7\8 holandês x zebu naturalmente infestadas por carrapato B. microplus e mantidas em regime de pasto, eram levadas à área experimental no dia em que se daria a observação, onde ficavam confinadas em baias individuais. A cada hora, durante o período de vinte e quatro horas, as fêmeas ingurgitadas dos carrapatos, desprendidas naturalmente, eram coletadas em cada baia. Os resultados mostraram diferenças significativas no ritmo de queda de fêmeas ingurgitadas entre as fases de verão e inverno. No verão, as fêmeas ingurgitadas apresentaram maior porcentagem de queda entre 7 e 10 horas (35,3%) com pique de queda às 9 horas e no inverno entre 6 e 9 horas (19,69%) com pique de queda às 6 horas e entre 14 e 17 horas (21,79%) com pique de queda às 15 horas. A porcentagem de queda de fêmeas ingurgitadas no período em que os animais estariam estabulados para ordenha é de 35,15% para o sistema atual de ordenha (de 5-8h e 13-16h) e de 45,48% para o sistema de ordenha em estudo para o Brasil-Central (de 8-11h e 16-19h), durante os meses de verão. Nos meses de inverno o porcentual de queda é de 40,51% e de 32,71% para os dois horários de ordenha respectivamente. Considerando o tempo que os animais permanecem estabulados para a suplementação no cocho durante o período entre as ordenhas na época seca do ano na região (maio a setembro), a porcentagem de queda de fêmeas ingurgitadas é de 55,83% para o sistema de ordenha atual (de 5 a 16h) e de 52,36% para o sistema de ordenha em estudo (de 8 a 19h). A correlação entre a queda de fêmeas ingurgitadas e o fotoperíodo foi significativa apenas para o tratamento de verão. Em relação à temperatura média e umidade relativa do ar, não houve correlação significativa tanto para o verão como para o inverno. / A description of the drop-off behaviour of engorged females of the tick Boophilus microplus was carried out as a result of an experiment at the Experimental Station, Embrapa Gado de Leite, Coronel Pacheco, MG, Brazil. Its objective was to evaluate any repercussions of changing the time of milking of cattle in terms of reduced recontamination of the pastures with the tick. Such possible changes in this daily cattle management routine have recently become a reality since the advent of refrigerated on-farm storage of the milk and non-daily collection by tanker truck. The field experiment consisted of a phase in summer, with a longer photoperiod, and in winter, with a shorter photoperiod. Twelve weekly experimental repetitions, of 24 hours duration, were carried out in each of these seasons. For each repetition, eight non-lactating, 7/8 Holstein-Friesian x Zebu cows, naturally infested with B. microplus and maintained on pastures, were removed to an experimental area on the day on which the observations were to be made and maintained in individual stalls. At each hour, over 24 hours, all fully engorged ticks that had dropped off naturally from the cattle were collected from the stalls. The results showed a significant difference in the rhythm of their drop-off in the summer compared to winter. In the summer the greater proportion of ticks dropped off between 07:00 and 10:00 (35.3%) with a maximum at 09:00. In winter, there were two daily periods of greater drop-off of ticks, the first between 06:00 and 09:00 (19.69%) with a maximum at 06:00, and the second between 14:00 and 17:00 (21.79%) with a maximum at 15:00. The percentage of ticks dropping off during the traditional milking time (05:00-08:00 and 13:00-16:00) would have been 35.15%, while those falling during an alternative sytem under consideration for Central Brazil (08:00-11:00 and 16:00-19:00) would be 45.48%, during the summer. During the winter, the proportion of ticks falling from the cattle is 40.51% and 32.71% for the two times of milking, respectively. Considering the time that the animals remain in stalls for feed supplement during the period between milkings during the dry season (May to September), the proportion of ticks falling would be 55.83% for the traditional system (05:00-16:00) and 52.36% for the milking period under consideration (08:00-19:00). The correlation between drop-off of ticks and photoperiod was significant only for the summer, but not so for mean air temperature nor relative humiditty for either of the seasons compared.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2015-11-09T08:55:27Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1029951 bytes, checksum: 361758ed3d2e0d1b698e70ceef444093 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-09T08:55:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1029951 bytes, checksum: 361758ed3d2e0d1b698e70ceef444093 (MD5) Previous issue date: 2007-08-06 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O peptídeo denominado SBm 7462 (Sintético Boophilus microplus 7462) é uma vacina desenvolvida a partir da seqüência da proteína intestinal do carrapato B. microplus denominada Bm 86 apresentando ação imunogênica contra o mesmo. O carrapato B. microplus é um importante artrópode da medicina veterinária devido a perdas econômicas e problemas de saúde causados pelo referido parasita no gado da América Central e do Sul, bem como da Austrália. Este trabalho descreve a obtenção de linhagens de Kluyveromyces lactis recombinantes produtoras do referido peptídeo. Dois vetores de expressão integrativos foram construídos a partir do vetor pKLAC1: pKLAC1-seq1, contendo a seqüência 1 constituída por três cópias da seqüência de nucleotídeos que codifica para o SBm 7462 e o pKLAC1-seq4, contendo a seqüência 4 constituída por uma única cópia da seqüência de nucleotídeos que codifica o SBm 7462. As construções foram confirmadas por sequenciamento. O cassete de integração obtido pela clivagem do vetor com a enzima SacII foi utilizado na transformação da linhagem selvagem de K. lactis CBS2359. A integração dos cassetes por recombinação homóloga no locus LAC4 foi confirmada por PCR. A análise dos recombinantes de K. lactis por RT-PCR e a detecção do peptídeo, utilizando anticorpos monoclonais contra SBm 7462, comprovaram a transcrição e a expressão extracelular dos peptídeos. Os recombinantes foram cultivados em regime de batelada em YPGlicerol, alcançando uma concentração de biomassa de 10 g·L-1. A biomassa obtida foi transferida para o meio YNB com 4% (p/v) de lactose para induzir o promotor LAC4 e a síntese de SBm 7462 recombinante. Amostras foram analisadas quanto à concentração de proteína extracelular, por eletroforese em SDS-PAGE e detecção do imunógeno. A indução da síntese dos peptídeos foi testada sob duas condições: sem pulso adicional de lactose e com pulso de lactose, a cada 24 horas, durante 144 horas de indução. A concentração de proteínas extracelulares na segunda condição foi maior quando comparada com a condição sem pulso adicional de lactose. Atividade proteolítica não foi detectada no sobrenadante. O perfil eletroforético em SDS-PAGE revelando três bandas de aproximadamente 6, 10 e 21 kDa relacionadas ao peptídeo de interesse é discutido. A detecção do peptídeo vacinal com anticorpos monoclonais comprovou a presença extracelular do rSBm 7462. / The peptide designated SBm 7462 (Synthetic Boophilus microplus 7462) induces an immunogenic response against the tick B. microplus, an important arthropods in veterinary medicine due to the economic losses and the health problems caused in cattle production in Central and South America and Australia. Here we describe the construction of recombinant Kluyveromyces lactis yeast strains expressing the gene for rSBm 7462. Two integrative expression cassettes harboring one or three copies of the nucleotide sequence coding for the SBm 7462 were built from the vector pKLAC1. The construction of the expression vectors was confirmed by sequencing. The transformation of wild type K. lactis CBS2359, was performed and the integration of the cassettes by homologous recombination into the LAC4 locus of the transformed K. lactis genomes was verified by PCR. The transcription and extracellular expression of the peptides have been confirmed in recombinants K. lactis strains by RT-PCR and monoclonal antibodies against SBm 7462. The recombinants were cultured in shake-flask YPGlycerol medium generating 10 g·L-1 biomass. The biomass obtained was transferred to mineral medium with lactose 4% (w/v) to induce the LAC4 promoter and the synthesis of recombinant SBm 7462. Samples were analyzed for total protein, SDS-PAGE and immunogenic detection. The peptide production was investigated under two conditions: with additional lactose pulse at 24 hours intervals during 144 hours of induction and with no additional lactose pulse. The extracellular protein concentration in the first condition was higher compared to the condition with no additional pulse of lactose. Proteolytic activity was not detected into the medium. Three major protein bands of approximated 6, 10 and 21 kDa related to the desired peptide were detected by SDS-PAGE.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:57Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-11-29Bitstream added on 2014-06-13T18:56:53Z : No. of bitstreams: 1 000749087.pdf: 1190514 bytes, checksum: 2f296befce1a51e83e431b9d970625ef (MD5) / Ao longo das últimas décadas o controle de Rhipicephalus (Boophilus) microplus tem sido dificultado pelo desenvolvimento da resistência à maioria dos grupos químicos utilizados. Algumas moléculas tem se apresentado como alternativas promissoras, mas mesmo assim, apresentam redução de eficácia com o passar do tempo. As lactonas macrocíclicas, moléculas com atividade endectocida, surgiram como uma dessas opções, mas relatos sobre a resistência, especialmente à ivermectina, se tornam cada vez mais frequentes. O presente estudo objetivou determinar a redução de eficácia da ivermectina contra o R. (B.) microplus, e o consequente surgimento da resistência à esse princípio ativo, por meio de resultados encontrados em várias propriedades rurais, frente às diferentes cepas presentes. Foram realizados testes com bovinos naturalmente infestados da região Sudeste do Brasil, utilizando diferentes concentrações de ivermectina (200 μg/kg, 500 μg/kg e 630 μg/kg). Estes experimentos basearam-se na contagem de partenóginas, entre 4,5 e 8 mm de diâmetro, presentes no lado esquerdo dos bovinos. Das doze propriedades avaliadas, três com a utilização de ivermectina 500 μg/kg (0,5% pour-on), três onde foi testada a ivermectina 200 μg/kg (1% injetável) e seis onde avaliou-se a ivermectina 630 μg/kg (3,15% injetável), apenas uma apresentou valores de eficácia média, entre os dias 7 e 14 pós-tratamento, superior à 90%, sendo classificada como sensível. Nenhum dos demais experimentos atingiu este valor, permitindo a classificação de onze dentre as doze cepas (91,67%) avaliadas, como resistentes. Além disso, o presente estudo confirma a eficiência da avaliação in vivo para o diagnóstico da resistência, assim como reforça a necessidade de maior atenção a esse fenòmeno, amplamente disseminado nessa região do Brasil / Throughout the last decades, the control of Rhipicephalus (Boophilus) microplus has become more difficult due to the development of resistance to most of the products used for its control. Some molecules have been presented as promising alternatives, but nonetheless, their efficacy has shown reduction as time passes. The macrocyclic lactones, molecules with endectocidal activity, appeared as one of these options, but resistance to them, especially to ivermectin, are commonly reported in literature. The present study aimed to determine the decrease in acaricidal efficacy of ivermectin against Rhipicephalus (Boophilus) microplus, and the consequent development of resistance to this active component, by means of several results found in several rural properties, with different tick strains present. Tests were conducted in naturally infested animals originated from farms on the Southeast region of Brazil, using different concentrations of ivermectin (200 μg/kg, 500 μg/kg and 630 μg/kg) applied in different administration methods (pour on and injectable). From all twelve properties evaluated, being three with the administration of 500 μg/kg ivermectin (0.5% pouron), three were 200 μg/kg ivermectin (1% injectable) was tested and six were 630 μg/kg ivermectin (3.15% injectable) was evaluated, only one presented mean efficacy values, between days 7 and 14 post-treatment, superior to 90%, being classified as sensible. None of the other experiments reached or surpassed this index, allowing the classification of eleven amongst twelve (91.67%) evaluated R. (B.) microplus strains, as resistant. Besides, the present study confirms the efficiency of in vivo evaluation for the diagnosis of resistance, as well as reinforces the need for a greater attention to this problem, widely spread in this region of Brazil