Made available in DSpace on 2016-08-17T18:39:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 5183.pdf: 3310130 bytes, checksum: d872fa3e922c8195158611f065b68e7a (MD5) Previous issue date: 2012-11-22 / Universidade Federal de Minas Gerais / Objective: The aim of this study was to evaluate the effects of laser therapy on the degeneratives modifications in articular cartilage after anterior cruciate ligament transection (ACLT). Methods: We used eighty-male rats (Wistar), distributed into four groups: intact, injury control, injury laser treated, at 50 J/cm2 and injury laser treated, at 10 J/cm2. Animals were distributed into 2 subgroups, with different periods of sacrifice 5 and 8 weeks post-surgery. The animals were submitted to the surgery to induce OA by anterior cruciate ligament transection. Laser treatment started 2 weeks after the surgery and it was performed for 15 and 30 sessions. A laser 685 nm, at 10 and 50 J/cm2, 30mW was used. Results: Initial signs of tissue degradation could be observed 5 weeks post- ACLT, with the decrease of proteoglycans concentration and increase of thickness in the CG. After 8 weeks post-surgery, analysis showed a progression in the degenerative process in the CG, revealed by the increase of cellullarity and higher TNF- α, IL1 and MMP-13 immunoexpression. Laser therapy was able of modulating some of the aspects related to the degradative process, such as biomodulation of the number of condrocyte proliferation, prevention of proteogycans loss and decrease of MMP-13 immunoexpression. Conclusion: This study showed that 685nm laser, especially at 10 J/cm2 prevented features related to the articular degenerative process in the knees of rats. / Objetivo: Avaliar os efeitos da terapia laser de baixa intensidade (LLLT) no comprimento de onda 685 nm nas fluências 10 J/cm2 e 50 J/cm2 aplicados na cartilagem articular de joelhos de ratos submetidos a um modelo experimental de osteoartrite (OA) induzida por transecção do ligamento cruzado anterior (TLCA). Materiais e Métodos: Foram utilizados 80 ratos machos (Wistar), que foram aleatoriamente distribuídos em 4 grupos: Grupo Intacto (I); Controle Lesão (C); Lesão tratado com laser na fluência de 10 J/cm2 (L10) e Lesão tratado com laser na fluência de 50 J/cm2 (L50). Os grupos foram subdivididos em 2 subgrupos (n=10), com diferentes datas de sacrifício. O primeiro subgrupo foi sacrificado 5 semanas pós TLCA e foram realizadas 15 sessões de tratamento em 3 semanas. O segundo subgrupo foi sacrificado 8 semanas pós TLCA e foram realizadas 30 sessões de tratamento em 6 semanas. Os tratamentos se iniciaram 2 semanas pós TLCA. Resultados: Na análise semi-quantitativa de celularidade no período de 8 semanas, o grupo C apresentou maior graduação que o grupo I. Em relação ao conteúdo de proteoglicanas, no período de 5 semanas os grupos C, L10 e L50 apresentaram menor quantidade de proteoglicanas que o grupo I, ainda, após 8 semanas, o grupo C apresentou menor quantidade de proteoglicanas que os grupos I e L10, e o grupo L50 apresentou menor quantidade de proteoglicanas que grupo I. Já a análise morfométrica de celularidade, revelou que após 8 semanas o grupo C apresentou maior número de condrócitos que os grupos I, L10 e L50. A análise morfomérica de espessura mostrou que em 5 semanas os grupos C e L50 apresentaram maior espessura que o grupo I, além disso, no período de 8 semanas os grupos C, L10 e L50 apresentaram maior espessura que o grupo I. Não foram encontradas diferenças entre os grupos nas quantidades de fibras totais de colágeno. Em relação às análises semi-quantitativas de imunohistoquímica, no período de 8 semanas os grupos C, L10 e L50 apresentaram maior quantidade de condrócitos imunomarcados para TNF-α, IL1β e MMP-13 em relação ao grupo I. Além disso, os grupos tratados (L10 e L50) apresentaram menor quantidade de condrócitos imunomarcados para MMP-13 que o grupo C. Conclusão: A LLLT no comprimento de onda 685 nm nas fluências de 10 J/cm2 e 50 J/cm2 foi benéfico à cartilagem articular do joelho de ratos submetidos ao modelo experimental de OA por TLCA. Contudo, o laser na fluência de 10 J/cm2 foi mais eficaz, pois promoveu a síntese de proteoglicanas nos animais tratados no período de 8 semanas.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:46:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2724286 bytes, checksum: dfc4a98088cd85fae126679628671081 (MD5) Previous issue date: 2011-02-28 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The aim of this research was to evaluate the influence of chondroprotective veterinary supplement (nutraceutic) composed of glucosamine and chondroitin sulfate in the repair of osteochondral defects induced in femoral lateral condyle of dogs, by clinical, radiographic, macroscopic, histologic and morfometric analysis. We also aimed to test the safety of the supplement with tests of blood glucose, blood count, liver and kidney function, activated partial tromboplastine and time prothrombin time. Fortyeigth adult dogs with body weight ranging from 10 kg to 25 kg were used. They were divided into four treatments (I, II, III and IV), according to the postoperative period of evaluation (15, 30, 60 and 90 days) and each containing six animals. Within each treatment, six animals (GI) received the supplement daily, while the other six formed the control group (GII). No significant differences were observed between groups for each treatment. Therefore, the conditions in which this study was conducted, the chondroprotective did not cause adverse effects and the treated group did not differ from the control on the repair process of such defects. / O presente trabalho teve como objetivo avaliar a influência de um suplemento condroprotetor (nutracêutico) veterinário comercial, à base de sulfato de condroitina e glucosamina, na reparação de falhas osteocondrais induzidas no côndilo femoral lateral de cães, por meio de análises clínica, radiográfica, macroscópica, histológica e morfométrica. Objetivou-se ainda testar a segurança do produto, por meio dos exames de glicemia, hemograma, funções hepática e renal, tempo de tromboplastina parcial ativada e tempo de protombina. Foram utilizados 48 cães adultos, entre 10 e 25 kg de peso corporal e sem raça definida, distribuídos aleatoriamente entre quatro tratamentos (I, II, III e IV), de acordo com o período de pós-operatório (15, 30, 60 e 90 dias) e contendo cada um deles 12 animais. Dentro de cada tratamento, seis animais (GI) receberam diariamente o condroprotetor, enquanto os outros seis constituíram o grupo controle (GII). Não houve diferença significativa entre os grupos de cada tratamento e, portanto, nas condições em que o presente estudo foi realizado, o condroprotetor não ocasionou efeitos adversos e o grupo tratado não diferiu do controle quanto ao processo de reparação dos defeitos.

Orientador: Áureo Evangelista Santana / Coorientador: Elenice Deffune / Banca: Fernando De Biasi / Banca: Raimundo Souza Lopes / Banca: Luis Gustavo Gosuen Gonçalves Dias / Banca: Paola Castro Moraes / Resumo: A cartilagem articular é um tecido que possui capacidade limitada de reparo após uma lesão aguda, e a eficácia dos tratamentos atuais geralmente resulta em alívio dos sintomas, e não em regeneração do tecido lesado. Incidindo sobre esta problemática, o objetivo do presente trabalho, foi avaliar o efeito da terapia com células-tronco mesenquimais (CTM) autólogas na regeneração da cartilagem articular de joelhos de coelhos submetidos a osteoartrite experimental. Foram utilizados 24 coelhos da raça Nova Zelândia Branca, os quais foram divididos aleatoriamente em quatro grupos: GC (grupo controle); GPRP (grupo plasma rico em plaquetas); GCTM (grupo células-tronco mesenquimais autólogas indiferenciadas); GCTMdif (grupo células-tronco mesenquimais autólogas diferenciadas em condrócitos. Todos os animais foram induzidos a osteoartrite por meio da aplicação de solução de colagenase, e após quatro semanas receberam os tratamentos propostos para cada grupo. Após sessenta dias da terapia, os animais foram eutanasiados e as superfícies articulares foram submetidas a avaliações macroscópicas e histomorfológicas. Paralelamente foram realizadas diferenciações adipogênicas, condrogênicas e osteogênicas das CTM, caracterizações das mesmas por meio de análise citométrica, e avaliações de danos citogenéticos pelo Teste do Cometa. Os resultados dos exames macroscópicos e histomorfológicos revelaram um melhor tecido de reparação nos grupos tratados com CTM. As análises citométricas apresentaram resultados de imunomarcações positivos para CTM, e as diferenciações revelaram que as CTM foram capazes de se diferenciar em adipócitos, condrócitos e osteoblastos. Por meio do Teste do Cometa, foi possível notar que os danos citogenéticos aumentaram após a segunda passagem das CTM. Conclui-se que há efeitos benéficos da associação de CTM derivadas do tecido adiposo e plasma rico em plaquetas na regeneração ... / Abstract: The articular cartilage is a tissue that has limited capacity for repair after an acute injury, and the efficacy of current treatments usually results in relief of symptoms, and not in regeneration of damaged tissue. Focusing on this issue, the aim of this work was to evaluate the effect of therapy with autologous mesenchymal stem cells (MSC) in the regeneration of rabbits articular cartilage submitted to experimental knee osteoarthritis. Twenty four adult New Zealand White rabbits were randomly divided into four groups: GC (control group); GPRP (platelet rich plasma group); GCTM (undifferentiated autologous mesenchymal stem cells group); GCTMdif (chondrocyte differentiated autologous mesenchymal stem cells group). All animals were osteoarthritis-induced by application of collagenase solution, and four weeks after induction, they received the specific treatments to each group. After sixty days of therapy, the animals were sacrificed and articular surfaces were submitted to macroscopic and histomorphological evaluations. At the same time were performed adipogenic, chondrogenic and osteogenic differentiation of MSC, characterizations through cytometric analysis, and evaluation of cytogenetic damage by the Comet Assay. The macroscopic and histomorphological examinations revealed a better repair tissue in the groups treated with MSC. Cytometric analyzes showed positive results for MSC immunostaining, and differentiation showed that MSC were able to differentiate into adipocytes, chondrocytes and osteoblasts. Through the Comet Assay, it was noticeable that the cytogenetic damage increased after the second passage of the MSC. It was concluded that there are beneficial effects of the combination of MSC derived from adipose tissue and platelet-rich plasma in the regeneration of articular cartilage in knees of rabbits undergoing experimental osteoarthritis, and there is no difference when MSC are used undifferentiated or differentiated into ... / Doutor

Orientador: João Guilherme Padilha Filho / Banca: Márcia Rita Fernandes Machado / Banca: Gilson Hélio Toniollo / Banca: Gustavo Garkalns de Souza Oliveira / Banca: Raduan Hage / Resumo: A osteoartrose (OA) do joelho é uma doença de caráter inflamatório e degenerativo que provoca a destruição da cartilagem articular e leva à deformidade da articulação. A luxação patelar é um problema ortopédico comum na clínica de pequenos animais. A cirurgia não impede a progressão da OA. O laser de baixa intensidade (LBI) tem sido utilizado para acelerar processos de reparação tecidual, por aumentar o fluxo sangüíneo, possuir ação antiinflamatória, antiedematosa, analgésica e estimular o metabolismo celular. Este trabalho estudou a influência da laserterapia em dois espectros eletromagnéticos, vermelho e infravermelho, na reparação cartilagínea, diferenciando histologicamente o tipo de cartilagem formada durante a reparação articular. Foram utilizados 36 coelhos machos raça Norfolk divididos em 3 grupos com 12 animais cada: G1 (controle, trocleoplastia sem tratamento pós-operatório), G2 (trocleoplastia + irradiação laser 670 nm) e G3 (trocleoplastia + irradiação laser 904 nm). Os animais dos grupos G2 e G3 foram irradiados diariamente, com intervalo de 24 horas, durante 10 dias utilizando um laser In-Ga-Al com comprimento de onda (λ) de 670 e um laser de As-Ga com λ de 904 nm respectivamente, na dose de 2 J por ponto totalizando 4 pontos. Os grupos G2 e G3 apresentaram recuperação funcional mais rápida que G1. Histologicamente, G3 apresentou um aspecto osteocondral mais regular, com formação de cartilagem hialina enquanto em G1 e G2 formou-se fibrocartilagem / Abstract: Stifle osteoarthrosis is an inflammatory and degenerative disease that causes destruction of the articular cartilage and leads to deformity in the articulation. Patellar luxation is a common orthopedic problem in the clinic of small animals. The surgery does not avoid the progression of the osteoarthrosis. Low intensity laser has been used to improve degenerated processes for it increases blood flow, it has antiinflammatory, antiedematous, analgesic effects and stimulates cellular metabolism. This work studied the influence of laser therapy of two electromagnetic spectra, red and infrared, for repairing cartilage, histologically telling apart the kind of cartilage formed during articular regeneration. We use 36 male rabbits bred Norfolk divided into 3 groups with 12 animals each: G1 (control, trochleoplasty without treatment post-operatory), G2 (trochleoplasty + laser therapy 670 nm) and G3 (trochleoplasty + laser therapy 904 nm). The animals from G2 and G3 were irradiated daily with an interval of 24 hours over 10 days using a laser Ga-Al-In with wavelength (λ) of 670 and a Ga-As laser with λ 904 nm respectively. At a dose of 2 J per point total of 4 points. The groups G2 and G3 showed faster functional recovery that G1. Histologically, G3 had a most regular osteochondral aspect, with hyaline cartilage formation while in G1 and G2 formed fibrocartilage / Doutor

Orientador: Daniele Cristina Cataneo / Coorientador: Hamilton da Rosa Pereira / Resumo: A estrutura da cartilagem hialina é muito complexa e por possuir poucas células e não ter vasos sanguíneos, linfáticos ou nervos, tem seu potencial de cicatrização muito limitado. Lesões da cartilagem hialina do joelho são muito comuns, e seu tratamento representa um grande desafio. As opções cirúrgicas disponíveis atualmente para essa lesão, como condroplastia, microfraturas, mosaicoplastia ou transplante autólogo de condrócitos, ainda não tem resultados satisfatórios, principalmente em longo prazo. O Plasma Rico em Plaquetas (PRP) vem sendo usado na ortopedia desde os anos 90 para estimular a cicatrização dos tecidos, devido ao seu potencial de concentrar fatores de crescimento no local desejado. O objetivo da aplicação do PRP seria estimular um melhor ambiente de cicatrização. Em cartilagem o PRP tem sido usado no tratamento de osteoartrose e como coadjuvante em técnicas de tratamento de lesões condrais. Porém a literatura ainda apresenta resultados duvidosos em relação a aplicação do PRP em cirurgias de cartilagem. Essa tese apresenta a aplicação cirúrgica do PRP em pacientes com lesões condrais de joelhos, para avaliar se esse tratamento pode ter o efeito de acelerar e/ou melhorar o resultado cirúrgico destes pacientes. A tese foi dividida em três partes, sendo a primeira a revisão da literatura sobre tratamento de lesões condrais e sobre o plasma rico em plaquetas em ortopedia, a segunda parte um artigo sobre a comparação da avaliação das lesões condrais do joelho pela ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The hyaline cartilage structure is very complex, with few cells, and without blood and lymphatic vessels or nerves. This makes the healing potential very limited. Knee cartilage injuries are very common, and its treatment is a major challenge. Surgical options available nowadays like chondroplasty, microfractures, mosaicplasty and autologous chondrocyte transplantation still doesn't have satisfactory results, mainly in long term. Platelet-Rich Plasma (PRP) has been used in orthopedics since the 90's in order to stimulate tissue healing, because of its potential to concentrate platelet derived growth factors in the target place. The goal of the PRP application is to stimulate a better healing environment. PRP has been used in cartilage to treat osteoarthritis and to support treatment techniques for chondral injuries. However, the literature is still doubtful regarding the surgical results with PRP application. This thesis presents the PRP application in patients with knee chondral injuries to evaluate if this treatment is able to accelerate the healing process and/or to improve the surgical results in these patients. The thesis was divided into three parts, the first one is a literature review about chondral injuries treatments and platelet-rich plasma in orthopedics; the second part is a manuscript comparing the chondral injuries evaluation by arthroscopy and magnetic resonance imaging; and the last part is the main article that analyses the effect of PRP surgical application... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

A incidência de osteoartose, ou degeneração da cartilagem articular aumenta na pós-menopausa, condição esta relacionada à deficiência de estrógeno. Por outro lado, tem sido demonstrado que a atividade física regular e moderada tem efeitos benéficos sobre o sistema esquelético, em qualquer condição, mas especialmente na menopausa. Utilizando ratos Wistar, como modelo experimental, os objetivos deste trabalho são: a) verificar se a ooforectomia produz alterações na estrutura da cartilagem articular da epífise proximal da tíbia e b) verificar se a realização de exercícios físicos aeróbicos tem efeito sobre estas alterações. Para a realização deste estudo foram utilizadas 24 ratas com 6 meses de idade, da linhagem Wistar, distribuídas em 3 grupos de oito ratas cada: GC-Ratas com seis meses de idade, não submetidas à ooforectomia nem atividade física; GOS-Ratas com seis meses de idade, que sofreram ooforectomia bilateral, mas que não fizeram atividade física e, GOT-Ratas com seis meses de idade que foram submetidas à ooforectomia bilateral mais atividade física (corrida em esteira) durante 3 meses. Todos os animais foram eutanasiados com 9 meses de idade. A avaliação foi realizada através de microscopia de luz em cortes histológicos corados pela Hematoxilina-Eosina e pelo Picrossírius e estudos à microscopia eletrônica de varredura. À microscopia de luz, foram feitas medidas da espessura das zonas da cartilagem articular, contado o número de condrócitos por área, determinados os volumes dos núcleos dos condrócitos e a densidade de volume das fibras colágenas e à microscopia eletrônica de varredura foi analisada a superfície da cartilagem nos três grupos. Os dados quantitativos foram comparados estatisticamente pelo ANOVA e teste de Tukey. Os resultados mostraram que houve um aumento de peso nos animais do GOS e GOT em relação ao GC. Quanto ao treinamento, os animais do GOT tiveram melhor rendimento nos TEMs. Quanto à espessura da cartilagem observamos um aumento da espessura da zona superficial no côndilo medial da tíbia no GOS em relação ao GC. O número de condrócitos por campo foi alterado apenas no GOS, que mostrou um aumento de 34% em relação ao GC, o que, ao que parece, se deveu ao aumento do número de condrócitos da camada profunda. O volume nuclear dos condrócitos da zona superficial foi menor no GOS que no GC. O mesmo ocorreu na zona média do côndilo medial. Quanto aos valores da cartilagem da epífise proximal como um todo, observamos que o volume nuclear dos condrocitos do GOS e também do GOT foram menores do que do GC. Para o colágeno observamos um aumento da densidade de volume do colágeno no GOS e no GOT em relação ao GC. A microscopia eletrônica revelou a presença de lesões degenerativas semelhantes tanto para o GOS, quanto para o GOT. Podemos concluir que a depressão dos níveis de estrógeno acarreta alterações importantes na cartilagem articular da epífise proximal da tíbia tanto no componente celular, quanto na matriz e que a realização de exercícios físicos, isoladamente, parece não influenciar essas alterações. / The incidence of osteoarthritis increase in women in the post-menopausal period. This condition is relationed with the estrogen deficiency. Otherwise, it\'s being demonstrated that regular or moderate physical activity have beneficial effects on the skeletal system, in any condition, but especially in the menopause. Using Wistar rats, as an experimental model, the aims of this work are: a) to check if the ovariectomy produces alterations in the articular cartilage structure of the tibial proximal epiphysis and b) To check if aerobic physical exercises have effects on this alterations. To achieve these goals it was used 24 Wistar rats of 6 months of age, distributed in 3 groups of eight rats each: Control group- Rats with six months of age without ovariectomy and physical activity; GOS- Rats with six months of age with ovariectomy bilateral and without physical activity and, GOT- Rats with six months of age with ovariectomy bilateral and physical activity during 3 months. Al rats were euthanasied with 9 months of age. The results were obtained by using light microscopy to observe the histological sections stained with Hematoxylin and Eosin, and Picrosirius stain and the Scanning Electron Microscope. For light microscopy, were measured the thickness of cartilage, counted the number of chondrocytes, determined the volumes nuclei of chondrocytes and the density of volume of the collagens fibers. For the Scanning Electron Microscope, was analyzed the cartilage surface in the three groups. The data were statistically compared for the ANOVA and Tukey´s test. The results showed that there was an increase in the weight in the animals of GOS and of GOT. In relation to training, the animals of GOT obtained the best income in the TEMs. In relation to the thickness of the articular cartilage it was observed a decrease in the superficial layer of the medial condyle in the GOS and GOT. The number of chondrocytes was altered only in the GOS, that obtained an increase of the 34% on GC in the deep layer. The nuclear volume of chondrocytes in the superficial layer was higher in the GC than the GOS .The same occurred in the medium layer when the two tibial condyles, lateral and medial were assessed separately, but when the values of the epiphysial cartilage was considered as a whole, we found that the volume nuclei of chondrocytes in the GC was higher than the GOS and the GOT. For the collagen, the values of density of volume of the collagen fibers was higher in the GOS and in the GOT than the GC. The Scanning Electron microscopy showed the presence of degenerative lesions in both GOS and GOT. We can conclude that the depression levels of estrogen produced important changes in the tibial cartilage and that the physical activity doesn\'t have effects on these changes.

A doença degenerativa da cartilagem articular, ou osteoartrose, pode ser causada por diversos fatores, dentre eles o envelhecimento. Com o aumento da longevidade no Brasil, a prevalência da osteoartrose vai aumentar com o aumento progressivo da idade média da população nas próximas décadas. O estresse do dia a dia, com o avanço da vida moderna, são acompanhados pela má alimentação, sendo essa caracterizada por uma subnutrição ou até uma nutrição excessiva. Utilizando ratos Wistar, como modelo experimental, o objetivo deste trabalho é verificar se a alimentação com baixo nível calórico ameniza ou acelera as alterações na estrutura da cartilagem articular das epífises distal do fêmur e proximal da tíbia, causadas pelo envelhecimento. Para tanto foram utilizadas 15 ratos, separados em três grupos, com 5 animais cada: C- animais de 06 meses alimentados com dieta normal (A); SR- animais de 18 meses alimentados dieta normal (A); RC- animais de 18 meses submetidos à restrição calórica de 31% alimentados com dieta B. A avaliação foi realizada pela microscopia de luz em cortes histológicos corados pela Hematoxilina-Eosina, Picrossírius e por imunohistoquímica com marcação do colágeno tipo II. Foram feitas medidas da espessura das zonas da cartilagem articular, contado o número de condrócitos por área, determinados os volumes dos núcleos dos condrócitos, a morfometria do colágeno, a identificação dos tipos de colágeno e a análise imunohistoquímica. Os resultados mostram que os animais do grupo RC ganharam massa corpórea de maneira significativamente mais lenta que os do SR a partir dos 8 meses. Os animais do SR apresentaram na tíbia, aumento da espessura total bicondilar provocado pelo aumento da zona profunda, aumento do número de condrócitos no côndilo lateral, manutenção do volume dos núcleos e da proporção volumétrica de colágeno, marcação mais heterogenea do colágeno tipo II no côndilo lateral, predominância desse tipo de fibras na zona média do côndilo medial. No fêmur os animais do SR mostraram diminuição da espessura total bicondilar provocada pela diminuição da zona profunda, sendo menor no côndilo medial, diminuição do número de condrócitos causado por diminuição da zona profunda, sendo menor no côndilo medial, diminuição do volume total dos núcleos dos condrócitos no côndilo medial, diminuição da proporção volumétrica do colágeno bicondilar, marcação heterogênea do colágeno tipo II, predomínio desse tipo de fibras nas zonas média e profunda bicondilar. Os animais do RC apresentaram na tíbia, manutenção da espessura, aumento do número de condrócitos bicondilar, manutenção do volume nuclear, aumento da densidade de colágeno, marcação menos heterogênea do colágeno tipo II no côndilo lateral, predominância desse tipo de fibras nas zonas média e profunda do côndilo lateral. No fêmur, os animais do RC mostraram aumento da espessura total pelo aumento da zona profunda no côndilo medial, aumento do número de condrócitos pelo aumento da zona profunda, sendo maior no côndilo medial, aumento do volume total dos núcleos dos condrócitos bicondilar, aumento da proporção volumétrica de fibras colágenas no côndilo medial, marcação heterogênea do colágeno tipo II e predomínio desse tipo de fibras nas três zonas da cartilagem. Dessa maneira, concluímos que os efeitos do envelhecimento e da restrição calórica são diferentes nas cartilagens articulares da tíbia e do fêmur. As alterações naturais do envelhecimento são amenizadas pela restrição calórica na cartilagem articular do fêmur, porém na cartilagem articular da tíbia, essas alterações são compatíveis com início de doença degnerativa sendo intensificadas pela restrição com sinias de avanço de osteoartrose. / A degenerative disease of articular cartilage, or osteoarthritis, can be caused by several factors, including aging. With increased longevity in Brazil, the prevalence of osteoarthritis will increase with the progressive increase of the average age of the population in the coming decades. The stress of everyday life, with the advance of modern life, are accompanied by poor diet, this being characterized by malnutrition or even excessive nutrition. Using Wistar rats as experimental model, the aim of this work is to verify if feeding with low calorie softens or accelerates changes in the structure of articular cartilage of the epiphysis of the distal femur and proximal tibia, caused by aging. For this purpose were used 15 rats divided into three groups with five animals each: C, 6 month animals fed with normal diet (A), SR-18 month animals fed with normal diet (A), RC-18 month animals submitted to calorie restriction of 31% fed with diet B. The evaluation was performed by light microscopy in histological sections stained with Hematoxylin-Eosin, Picrossirius and by immunohistochemistry with tagging of type II collagen. Measurements were made of thick zones of articular cartilage, counted the number of chondrocytes per area, the volumes of certain nuclei of chondrocytes, collagen morphometry, the identification of the types of collagen and immunohistochemical analysis. The results show that the RC group animals gained body mass significantly slower than the SR from 8 months. The SR animals showed increasing of total thickness bicondylar of the tibia caused by the increase in the deep zone, increasing of the number of chondrocytes in the lateral condyle, maintaining the volume of the cores and the volumetric proportion of collagen, the most heterogeneous labeling of type II collagen in the lateral condyle, predominance of such fibers in the middle zone of the medial condyle. In the femur the SR animals showed decreased of total bicondylar thickness caused by the decrease of deep zone, being lower in the medial condyle, decreasing the number of chondrocytes caused by decreased deep zone, being lower in the medial condyle, decreased total volume of nuclei chondrocytes in the medial condyle, decreased volumetric proportion of collagen bicondylar, marking heterogeneous collagen type II predominance of such fibers in the middle and deep zones bicondylar. The RC animals showed in the tibia, maintaining thickness, increasing the number of chondrocytes bicondylar, maintenance of nuclear volume, increased collagen density, less heterogeneous marking of type II collagen in the lateral condyle, the predominance of this type of fiber areas and average deep lateral condyle. In the femur, the animals RC showed increased of total thickness caused by increasing of the medial condyle deep zone, increasing the number of chondrocytes by increasing the deep zone, being greater in the medial condyle, increasing the total volume of the nuclei of chondrocytes bicondylar, increased volumetric proportion of collagen fibers in the medial condyle, heterogeneous marking of type II collagen and prevalence of this type of fiber in the three zones of cartilage. Thus, we conclude that the effects of aging and caloric restriction are different in the articular cartilage of the tibia and femur. The natural changes of aging are attenuated by caloric restriction in the articular cartilage of the femur, but in the articular cartilage of the tibia, these changes are consistent with early degenerative disease being intensified by restriction with signs of advanced osteoarthritis.

Vários estudos demonstraram que o estrógeno exerce um papel fundamental na manutenção da estrutura da cartilagem articular, e que a deficiência em mulheres podem causar um aumento na incidência de degeneração articular. Sabe-se também que a atividade física é capaz de trazer benefícios para este tipo de tecido, reduzindo os riscos de lesão articular. Contudo, existem poucos os trabalhos que relacionam estes dois fatores: deficiência estrogenica e atividade física regular. O objetivo deste trabalho é verificar os efeitos da deficiência estrogênica sobre a cartilagem articular, suas implicações, e se a atividade física regular e moderada é capaz de reverter este processo natural de degeneração articular. Foram utilizadas 12 ratas Wistar adultas, divididas em quatro grupos de três animais, de modo aleatório e sistematizado, sendo eles: ratas controle sedentárias (RCS), ratas controle treinadas (RCT), ovariectomizadas sedentárias (ROS) e ovariectomizadas treinadas (ROT). Cada grupo foi analisado pelas técnicas de microscopia de luz e microscopia eletrônica de transmissão. Os resultados foram obtidos a partir do método estereológico. Os valores foram estatisticamente significantes em relação a deficiencia estrogenica para os parametros: peso, condicionamento físico, densidade numérica de condrócitos, número total de condrócitos, densidade de volume dos condrócitos, densidade de volume da matriz extracelular, volume total de matriz extracelular e densidade de volume de colágeno. Em relação aos efeitos concomitantes da atividade física e da deficiência estrogênica, os resultados foram significativamente diferentes em relação a densidade numérica, volume total da cartilagem, volume médio dos condrócitos e densidade de volume de colágeno. Estes dados nos levam a concluir que a diminuição dos níveis de estrógeno afeta profundamente a cartilagem articular da cabeça do fêmur, enquanto a atividade fisica contínua é benéfica para esta cartilagem, incluseve quando há deficiência estrogênica. / Several studies show that estrogen has an important function in maintaining the structure of articular cartilage and that deficiency in women can cause an increase in the incidence of joint degeneration. It is also known that physical activity can bring benefits to this type of tissue, reducing the risk of joint damage. However, there are few works that relate these two factors: continuous physical activity and estrogen deficiency. The aim of this study is to verify the effects of estrogen deficiency on joint cartilage, its implications, and if frequent and moderate physical activity is able to reverse the natural process of joint degeneration. A total of 12 adult female rats were divided into four groups of three animals in a random and systematic way, as follows: sedentary control rats (RCS), trained control rats (RCT), ovariectomized sedentary rats (ROS) and trained ovariectomized rats (ROT). Each group was analyzed by light microscopy and transmission electron microscopy. Results were obtained from the stereological method. The values were statistically significant in relation to estrogen deficiency for the parameters: weight, physical condition, numerical density of chondrocytes, total number of chondrocytes, chondrocyte volume density, volume density of extracellular matrix, the total volume of the extracellular matrix and volume density of collagen. Regarding the concomitant effects of physical activity and estrogen deficiency, the results were significantly different in numerical density, total volume of cartilage, mean volume of chondrocytes and volume density of collagen. These data take us to conclude that the decrease in estrogen levels profoundly affects the articular cartilage of the femoral head, while the continuous physical activity is beneficial to this cartilage, also in estrogen deficiency.

Tubarões e Raias pertencem à classe dos Chondrichthyes, por serem animais que possuem esqueleto cartilaginoso. O Tubarão-azul (Prionace glauca), popularmente conhecido como \"cação-azul\" dentre todas as espécies de tubarão é a mais abundante no ambiente marinho, podendo ser encontrado em toda a parte do mundo. O estudo teve como objetivo estudar a morfologia das nadadeiras do tubarão-azul (Prionace glauca) e os efeitos sobre células tumorais \"in vitro . Os resultados foram obtidos através da microscopia de luz e Citometria de fluxo. Com os caracteres encontrados na analise macroscópica foi possível identificar as nadadeiras obtidas como sendo do Tubarão-azul (Prionace glauca). A histologia da cartilagem da nadadeira do Tubarãoazul, demonstrou que é formada de cartilagem hialina, apresentando três regiões distintas, sendo no seu interior formado por condrócitos, na periferia de cartilagem calcificada e nas bordas formada por pericôndrio com a presença de colágeno tipo I,II e III. Os resultados obtidos das amostras do Elemento Radial não evidenciam alterações funcionais, quanto ao armazenamento, transporte e obtenção do suprimento celular, estes são viáveis e satisfatórios. O composto da cartilagem de tubarão para o tratamento de tumor \"in vitro\" neste estudo sugeriu que o mesmo apresenta uma atividade anti-tumoral significativa. Mostrou efeito tóxico sobre os tumores de mama murina (TAE) e tumor de mama canino (TMC) em baixas concentrações, não apresentando efeito tóxico nas células de fibroblasto nas mesmas concentrações. / Sharks and rays belong to the Chondrichthyes Class, once they have cartilaginous skeleton. The blue shark (Prionaceglauca), popularly known as \"blue-cation\", among all shark species is the most abundant in the marine environment and can be found everywhere in the world. This study aimed to study the fin morphology in the blue shark (Prionaceglauca) and its effects on \"in vitro\" tumor cells. The results were obtained using light microscopy and flow cytometry. Using the gross morphology we confirm that the fins belonged to the blue shark (Prionaceglauca). The fin cartilage of the blue shark was formed of hyaline cartilage. It showed three distinct regions with chondrocytes inside, calcified cartilage in the periphery, and perichondrium with collagen type I, II and III in the margins. The results obtained from the Radial Element not showed functional changes as storage, transport and cellular supplies obtaining, they were feasible and satisfactory. The use of shark cartilage compound for the treatment of \"in vitro\" tumor cells suggested that it showed a significant anti-tumor activity. It showed a toxic effect on murine breast tumors (MBT) and canine breast tumor (CBT) at low concentrations, with no significant toxic effect on fibroblast cells using the same concentrations.

Orientador: Ibsen Bellini Coimbra / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-12T21:15:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Sartori_AngelicaRossi_D.pdf: 3838547 bytes, checksum: 0be815456ed0b3b8faf496ae6738da31 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: O Fator Induzido por Hipóxia-1 (Hypoxia Inducible Factor-1 - HIF-1) é um fator de transcrição responsável por transcrever genes relacionados às alterações nas concentrações de oxigênio e sobrevivência celular. A cartilagem articular é um tecido avascular e o ambiente dos condrócitos é caracterizado por condições de hipóxia dentro da matriz. Nestas condições a proteína HIF-1alfa do Fator de transcrição Induzido por Hipóxia-1alfa (HIF-1alfa) é necessário para controlar o metabolismo e a integridade funcional da cartilagem. Além da hipóxia algumas citocinas como IL-1? e TNF? são também capazes de estabilizar HIF-1?, além de serem consideradas as principais mediadoras da osteoartrite (OA). Objetivo: Verificar a participação da IL-1? na regulação do HIF-1? em condições normais de oxigênio; Verificar a utilização da via da Fosfatidil-Inositol-3-Kinase (PI-3K) pelo HIF-1? e analisar a participação HIF-1? na expressão de colágeno tipo II e agrecano e a sua regulação pelas citocinas TNF-? e da IL-1?. Material e Métodos: Condrócitos humanos provenientes de pacientes em OA, submetidos à artroplastia de joelho, foram cutivados em suspensão e em monocamada, submetidos ou não ao silenciamento do gene do HIF-1? pela técnica de Interferência por RNA e estimulados com IL-1?, TNF? e LY294002, o inibidor da via da PI-3K em condições normais de oxigênio e em hipóxia e foram submetidos à extração de proteína nuclear, extração de RNA e precipitação das proteínas do meio de cultura das células. A análise das proteínas foi feita por meio da técnica de Western Blotting para a detecção da proteína nuclear HIF-1? e do colágeno tipo II no meio de cultura das células. O RNA foi analisado pela técnica de PCR em Tempo Real para a quantificaçãos dos genes do HIF-1?, Colágeno tipo II e Agrecano. Resultados: IL-1? aumentou a expressão da proteína nuclear HIF-1?, mas não alterou a expressão do RNAm. Essa modulação utilizou a via da PI-3K. A hipóxia aumentou as concentrações do RNAm do HIF-1? em comparação com as condições normais de oxigênio, mas IL-1? e TNF? não alteraram o RNAm do HIF- 1? em condições normais de oxigênio e em associação com a hipóxia, inibiram o efeito regulatório positivo desta sobre o HIF-1?. A hipóxia isoladamente também aumentou RNAm de colágeno tipo II, o que foi anulado pelo estímulo associado com a IL-1?. Nos grupos de condrócitos com deficiência do HIF-1? (silenciados), em quaisquer condições de oxigênio, IL-1? e TNF? não alteraram significativamente a expressão de HIF-1?, mas em hipóxia, a expressão de colágeno tipo II foi regulada negativamente nesses grupos. A associação entre a falta do HIF-1? e as citocinas diminuiu ainda mais a expressão do colágeno tipo II em condições de hipóxia. Em todas as análises não foram observadas diferenças significativas nas expressões do RNAm do agrecano e na análise do colágeno tipo II das proteínas precipitadas dos meios de cultura das células. Conclusão: IL-1? aumentou a expressão da proteína nuclear HIF-1? pós-transcrição. A regulação do HIF-1? pela IL-1? em situação normal de oxigênio ocorreu, ao menos em parte, pela PI-3K. O HIF-1? se relacionou positivamente com a expressão do gene do colágeno tipo II, principalmente em hipóxia, mas não com os níveis da proteína. Não houve associação com a expressão do gene do agrecano / Abstract: Introduction: Hypoxia Inducible Factor -1 (HIF-1) is a transcription factor that regulates the expression of genes related with oxygen concentration e cellular survive. Articular cartilage is a non-vascular tissue and the condrocytes microenviroment are caracterized by hypoxic conditions inside the extracelluar matrix. In this condition, the protein HIF-1?, from HIF-1 is necessary to the metabolism control and cartilage functional intengrity. Some citokines like IL-1? and TNF?, as well as hypoxia, are capable to stabilize HIF-1? and are essential in oateoarthritis (OA) progression disease. Objective: To verify the participation of IL-1? in the HIF-1? regulation under normal conditions of oxygen; To verify if the pathway of phosphatidilynositol-3-Kinase (PI-3K) is used in this modulation; To analyse HIF-1? participation in the collagen type II and aggrecan gene expression and your regulation by TNF-? and IL-1?. Material and Methods: Human OA chondrocytes were obtained from patients with OA that underwent total knee joint replacement surgery, were cultured either in suspension or monolayer. They were submitted to HIF-1? gene silencing by RNA Interference and lately stimulated with IL-1?, TNF? and LY294002, a specific inhibitor to Phosphatidilinosiltol - 3- Kinase (PI-3K) pathway in normal conditions of oxygen and in hypoxia. The condrocytes were submitted to protein nuclear extraction, RNA extraction and protein precipitation of culture media from the experiments. The proteins were analyzed by Western Blotting to HIF-1? detection in nuclear extraction and collagen type II detection in precipitated media. The RNA were analized by Real Time PCR to HIF- 1?, collagen type II and aggrecan gene quantification. Results: HIF-1? expression is up-regulated by IL-1? at the protein level but not in the mRNA expression. This modulation used, at least in part, the PI-3K pathway. Hypoxia enhanced the mRNA concentrations of HIF-1? when compared with normal conditions of oxygen, but in this cases IL-1? and TNF? did not change mRNA expression of HIF-1?. In association with hypoxia, these citokines inhibited the positive regulatory effect under HIF-1? mRNA expression. Hypoxia up-regulated collagen type II gene expression and that was inhibited by the association with IL-1?. In the groups with lack of HIF-1? (silenced), in both oxygen conditions, IL-1? and TNF? did not cause any significant change of the HIF-1? mRNA expression, but in hypoxia, collagen type II was up-regulated in those groups. The association between the lack of HIF- 1? and citokines down-regulated more strongly collagen type II in hypoxia. In all analyzes it was not observed significant differences in the aggrecan mRNA expression and collagen tipe II protein from cultured media of the cells Conclusion: IL-1? post-trancriptionaly up-regulated the HIF-1? protein level. HIF- 1? regulation by IL-1? in normal conditions of oxygen used, at least in part, the PI- 3K pathway. HIF-1? positively related with gene expression, but not with the protein levels, of collagen type II, mainly in hypoxia. There was no relation in the HIF-1? and aggrecan gene expression / Doutorado / Ciencias Basicas / Doutor em Clínica Médica