Esta tese alia dois enfoques principais dentro da Química Farmacêutica. Por um lado, busca explorar uma nova fonte de insumos naturais, cascas de Malus  domestica, com vistas a obtenção dos triterpenos ácidos ursólico (AU) e betulínico (AB); e por outro lado, estuda a relação dos derivados triterpênicos semissintéticos obtidos com a proteína-alvo (PfATP6) destacada atualmente na literatura da terapia da malária com vistas ao planejamento de novos antimaláricos. O primeiro Capítulo inclui o desenvolvimento de um método eficiente, fácil e extremamente rápido onde são combinadas as técnicas de extração por ultrassom (UAE) e análise por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência Acoplada a Detector de Espectroscopia de Massas (LC-MS), para identificação e doseamento dos ácidos ursólico (AU) e betulínico (BA) em extratos de cascas frescas de maçã de cinco clones das cultivares Gala e Fuji (“Baigent”, “Fuji Mishima”, “Fuji Suprema”, “Fuji Select” and “Maxi Gala”) oriundas da Região Sul do Brasil. Os parâmetros cromatográficos do método analítico incluem: ionização por eletro spray em modo positivo (ESI+), fluxo de 1,0 mL/min, em modo de eluição isocrático, consistindo de 80% acetonitrila e 20% acetato de amônio 10 mM em pH 6,0 e temperatura ambiente. O método desenvolvido foi validado e mostrou ser seletivo, sensível (LOD e LOQ de 0,087 e 0,266 μg/mL para BA, e 0,398 e 2,117 μg/ mL para UA), coeficiente de regressão linear (r >0.99), preciso, exato e robusto para os analitos de interesse. A otimização do método combinado de UAE com LC-MS permitiu concluir os procedimentos de extração e análise em tempo inferior a 4 h, uma vez que o método não requer a secagem da amostra, etapa que demanda longos tempos de processamento. Este método foi aplicado e forneceu a primeira caracterização fitoquímica dos cinco clones de maçã estudados. Os resultados demonstraram que o método combinado de UAE-LC-MS é adequado às práticas do controle de qualidade. O segundo Capítulo apresenta o estudo da interação dos ligantes semissintéticos derivados dos AU e AB, sintetizados pelo nosso grupo de pesquisa, com a proteína Ca2+-ATPase do Plasmodium falciparum (PfATP6), através do emprego da técnica de Docking Molecular. A PfATP6 é descrita como um importante alvo para novos antimaláricos como Artemisinina (ART), cujo mecanismo de ação inclui, dentre outros, a modulação da homeostasia do cálcio intracelular. Investigações conduziram à hipótese do extravasamento do cálcio, do interior do retículo sarco-endoplasmático como mecanismo plausível para ação dos derivados triterpênicos do AU e AB. Os escores de energia determinados no Docking, de cada um dos nove ligantes (derivados triterpênicos) e quatro compostos de controle (ácidos ursólico e betulínico, artemisinina (ART) e tapsigargina (TPG) foram determinados (análises realizadas em triplicata) e correlacionados com os valores de IC50, para a atividade antimalárica. Os resultados mostraram excelente correlação entre os escores de energia (com a PfATP6) e os valores de IC50, superior a 80% (r > 0,83360). O estudo fornece fortes evidências de que a PfATP6 pode constituir um alvo para os derivados pentacíclicos do estudo, bem como permitiu identificar o perfil conformacional dos ligantes e os principais resíduos do sítio de ligação (SL) da PfATP6 envolvidos nas interações; bem como, contribuiu para a melhor compreensão das propriedades envolvidas na interação do ligante com o receptor e mecanismo de ação. O terceiro Capítulo faz uso de Métodos Clássicos e Quânticos para descrever as mudanças conformacionais da proteína PfATP6. As simulações de Dinâmica Molecular do receptor na forma isolada e complexada com os ligantes foram realizadas durante 10 ns. As conformações finais obtidas para os receptores foram avaliadas em termos RMSD, efeito da presença dos ligantes no sítio de ligação e tipos de interações estabelecidas entre o ligante e o receptor. Os resultados mostraram que as proteínas PfATP6 e SERCA tendem a manter sua conformação nativa e que o modelo utilizado é adequado aos propósitos do estudo. O monitoramento dos resíduos da região citoplasmática das proteínas permitiu evidenciar o efeito alostérico da presença dos ligantes AU e ART no SL, sobre os domínios A e N, da PfATP6. Esse efeito reproduz as conformações E1 e E2, bem estabelecidas para PfATP6, na presença e ausência de Ca2+. As análises de Dinâmica Molecular corroboram os achados do Capítulo II ao evidenciarem o estabelecimento de interações de hidrogênio com os resíduos importantes do SL da PfATP6. Esses resultados fundamentam os indícios de que as bombas de Ca2+-ATPase (SERCA), possam ser de fato, um alvo para os derivados triterpênicos dos AU e AB. / This thesis combines two main focuses within Pharmaceutical Chemistry. On the one hand, it seeks to explore a new source of natural inputs, bark of Malus domestica, in order to obtain ursolic (UA) and betulinic acid (BA) triterpenes. On the other hand, it studies the relation of the semi-synthetic triterpenic derivatives obtained with the target proteins (PfATP6), currently highlighted in the literature on malaria therapy with a view to planning new antimalarial drugs. The first chapter includes the development of an efficient, easy and extremely fast method where ultrasonic extraction techniques (UAE) and high-performance liquid chromatography coupled to mass spectroscopy (LC-MS) are combined for identification and assay of ursolic acid (UA) and betulinic acid (BA) in fresh apple peel extracts from five clones of the Gala and Fuji cultivars (Baigent, Fuji Mishima, Fuji Suprema, Fuji Select and Maxi Gala ") in the Southern Region of Brazil. Chromatographic parameters of the analytical method include: electrospray ionization (ESI +), flow rate of 1.0 mL/min in isocratic elution mode, consisting of 80% acetonitrile and 20% 10 mM ammonium acetate at pH 6.0 and room temperature. The method was validated and proved to be selective, sensitive (LOD and LOQ of 0.087 and 0.266 μg/mL for BA, and 0.398 and 2.117 μg/mL for UA), linear regression coefficient (r> 0.99), accurate, robust for analytes of interest. The optimization of the combined method of UAE with LC-MS allowed to complete the procedures of extraction and analysis in less than 4 h, since the method does not require drying the sample, a stage that demands long processing times. This method was applied and provided the first phytochemical characterization of the five apple clones studied. The results demonstrated that the combined UAE-LC-MS method is suitable for quality control practices. The second chapter presents the study of the interaction of the semi-synthetic ligands derived from the UA and BA, synthesized by our research group, with the Plasmodium falciparum Ca2+-ATPase protein (PfATP6), using the Molecular Docking technique. PfATP6 is described as an important target for new antimalarials such as Artemisinin (ART), whose action mechanism includes, among others, the modulation of intracellular calcium homeostasis. Investigations led to the hypothesis of extravasation of calcium from the interior of the sarco-endoplasmic reticulum as a plausible mechanism for the action of the triterpenic derivatives of UA and BA. The Docking energy scores (binding energy) of each of the nine ligands (triterpenic derivatives) and four control compounds (ursolic and betulinic acids, artemisinin (ART) and tapsigargine (TPG)) with PfATP6, were calculated (analyses performed in triplicate) and correlated with its antimalarial IC50 value. The results showed an excellent correlation between energy scores (with PfATP6) and IC50 values, higher than 80% (r > 0.83360). The study supplies strong evidence that PfATP6 may be a target for the pentacyclic derivatives of the study, and also allowed identifying the conformational profile of the ligands and the main residues of the PfATP6 binding site (BS) involved in the interactions. It further contributed to a better understanding of the properties involved in the interaction of the ligand with the receptor and its action mechanism. The third chapter uses Classical and Quantum Methods to describe the conformational changes of the PfATP6 protein. The Molecular Dynamics simulations of the receptor in the isolated and complexed form with the ligands were performed for 10 ns. The final conformations obtained for the receptors were evaluated in RMSD terms, effect of the presence of ligands at the binding site and types of interactions established between the ligand and the receptor. The results showed that the PfATP6 and SERCA proteins tend to maintain their native conformations and that the model used is adequate for the purposes of the study. The monitoring of the residues of the cytoplasmic region of the proteins allowed evidencing the allosteric effect of the presence of UA and ART ligands in BS, on the A- and N-domains of PfATP6. This effect reproduces the well-established E1 and E2 conformations for PfATP6, in the presence and absence of Ca2+, respectively. Molecular Dynamics analyses corroborate the findings of Chapter II, by showing the possibility of establishing hydrogen interactions with the important residues of PfATP6 BS. These results support the evidence that Ca2+-ATPase (SERCA) pumps may be a target for the triterpenic derivatives of UA and BA.

This thesis was developed in order to determine whether the selected species most commonly kept feeding insects affect fertility in captive bred assassin bugs \kur{Platymeris biguttatus}. Used feeding insects were \kur{Blaptica dubia} roaches, \kur{Acheta domestica} crickets and larvae of \kur{Tenebrio molitor} bugs. The reason of using assassin bugs \kur{Platymeris biguttatus} was their popularity among breeders, their easy care needs and their superior fertility. Assassin bugs were kept in an air conditioned room with a constant temperature conditions and light regime. It has been shown that the given diet has no effect on fertility in this kind of bugs, also that breeding in groups has negative impact on fertility of this assassin bugs species. The results of this study could demonstrate the importance of proper feeding in keeping these bugs and help breeders to have better results.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Filosofia e Ciências Humanas. / Made available in DSpace on 2012-10-18T10:35:04Z (GMT). No. of bitstreams: 0Bitstream added on 2014-09-25T23:15:04Z : No. of bitstreams: 1 176999.pdf: 4002424 bytes, checksum: fef9aabd7dd8a4f418d997dcdfe118d7 (MD5) / As transformações ocorridas no meio rural brasileiro tanto nos aspectos econômicos como sociais (esses principalmente) têm gerado alterações nas relações interpessoais dos membros da unidade de produção familiar rural, nas formas de organização do trabalho dentro e fora destas unidades, além das alterações no sistema de uso das terras e nos processos de sucessão das mesmas. A partir deste processo de transformação, surgem outras atividades no meio rural que não podem mais ser consideradas exclusivamente agrícolas. A juventude rural faz parte deste quadro de mudanças e crises do seu meio e , precisa, pois, ser reconhecida como um sujeito heterogêneo e um agente social. O objetivo deste estudo de caso é investigar como os(as) jovens do meio rural do município de Camboriú estão enfrentando esta realidade e de que maneira sua relação com a família, com os agentes externos à propriedade rural e com as novas formas de organização do trabalho dentro e fora da unidade de produção familiar (pluriatividade) poderão ou não contribuir para a elaboração de um projeto de vida individual seja no meio rural - local que pode adquirir vários significados para a juventude - seja no meio urbano.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:41Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005-06-20Bitstream added on 2014-06-13T20:15:27Z : No. of bitstreams: 1 moreira_gc_me_botfca.pdf: 522936 bytes, checksum: 59249a8e43961d1234678ad95d42c9af (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O presente trabalho teve por objetivo verificar os efeitos do ácido ascórbico e da radiação gama na conservação pós-colheita de maçã Royal Gala minimamente processada, submetida à refrigeração, visando estender a sua vida útil, retardando seu amadurecimento e reduzindo a incidência de patógenos, sem prejuízo das suas características físicas, químicas e organolépticas. Foram realizados 4 experimentos: Experimento 1 - os frutos processados em cubos de 2 x 2 cm; Experimento 2 - os frutos processados em rodelas de 1 cm; Experimento 3 - os frutos cortados em 4 partes. Para os experimentos 1, 2 e 3, após o processamento nos diferentes cortes, os frutos foram acondicionadas em bandejas de isopor envolvidas em filme plástico e submetidas a diferentes concentrações de ácido ascórbico (0%, 1%, 2%, 3% e 4%); Experimento 4 - os frutos processados em cubos de 2 x 2 cm, imersos em solução de 3% de ácido ascórbico, acondicionados em bandejas de isopor envolvidas em filme plástico e irradiadas com diferentes doses de radiação gama (T1 - Testemunha (0,0kGy), T2 - 0,1kGy, T3 - 0,2kGy, T4 - 0,3kGy, T5 - 0,4kGy, T6 - 0,5kGy). As frutas foram irradiadas na EMBRARAD, localizada em Cotia - SP. Foram utilizadas nessa pesquisa maçãs Royal Gala, provenientes da Empresa Agroban (Vacaria - RS). Os frutos foram transportados ao Laboratório de Frutas e Hortaliças, pertencente ao Departamento de Gestão e Tecnologia Agroindustrial, da Faculdade de Ciências Agronômicas - UNESP - Câmpus de Botucatu, SP. Para cada experimento, os frutos após receberem cada tratamento, foram armazenados em câmara fria a 5l1ºC e 85 - 90% de umidade relativa. As avaliações foram realizadas a cada dois dias, durante 10 dias de armazenamento. As alterações na qualidade pós-colheita foram detectadas por meio das análises de perda de massa fresca... / The present work had as objective to verify the effects of the ascorbic acid and the gamma radiation in the postharvest conservation of the minimally processed apple 'Royal Gala' minimally processed, submitted to the refrigeration aiming to extend its useful life, delaying its ripening and reducing the microorganisms incidence, without damage of its physical, chemistries and sensorial characteristics. Four experiments were accomplished: Experiment 1 - the fruits processed in cubes of 2 x 2 cm; Experiment 2 - the fruits processed in slices of 1 cm; Experiment 3 - the fruits cut in 4 parts. For the experiments 1, 2 and 3, after the processing in the different cuts, the fruits were conditioned in isopor trays involved in plastic film and submitted to different concentrations of ascorbic acid (0%, 1%, 2%, 3% and 4%); Experiment 4 - the fruits processed in cubes of 2 x 2 cm, immersed in solution of 3% of ascorbic acid, conditioned in isopor trays involved in plastic film and irradiated with different gamma radiation doses (T1 - control (0,0kGy), T2 - 0,1kGy, T3 - 0,2kGy, T4 - 0,3kGy, T5 - 0,4kGy, T6 - 0,5kGy). The fruits were irradiated in EMBRARAD, located in Cotia - SP. Apples ' Royal Gala' were used in this research, coming from the Company Agroban (Vacaria - RS). The fruits were transported to the Laboratory of Fruits and Vegetables, belonging to the 'Departamento de Gestão e Tecnologia Agroindustrial', of 'Faculdade de Ciências Agronômicas - UNESP - Campus of Botucatu, SP'. Each fruit after receiving treatment, was stored for each experiment in a cold camera to 5l1ºC and 85 - 90% of relative humidity. The evaluations were accomplished every other day, for 10 days of storage. The alterations in the quality postharvest were detected through the analyses of loss of fresh mass... (Complete abstract, click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:36Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-20Bitstream added on 2014-06-13T18:42:25Z : No. of bitstreams: 1 curcelli_f_dr_botfca.pdf: 404578 bytes, checksum: ca98af9172e92ded24238514275c687c (MD5) / A mandioca, por ser concentradora de amido na raiz, fonte de energia, e proteína na parte aérea, tem sido usada na alimentação de animais domésticos. A prática da poda da parte aérea da mandioca é comum em lavouras destinadas à produção de raízes para a indústria, porém esta prática ainda é pouca estudada. Com objetivo de avaliar o potencial do uso da planta de mandioca, podada em diferentes épocas, na alimentação animal, por meio de análises bromatológicas, foi realizado entre os anos de 2008/2010, na UNESP-Botucatu, experimento, em blocos completos casualizados, envolvendo podas da parte aérea da variedade IAC-14. As plantas foram podadas mês a mês, do sétimo ao décimo quinto mês após o plantio (MAP) e uma testemunha sem poda. As análises bromatológicas foram efetuadas no momento da colheita, ou seja, 22 MAP. Foram analisadas a produção, produtividade em massa seca e fresca da raiz e parte aérea, o conteúdo e produtividade de proteína bruta (PB) e as porcentagens de fibra bruta (FB), fibra em detergente neutro (FDN), fibra em detergente ácido (FDA), nutrientes digestíveis totais (NDT), extrato livre de nitrogênio (ELN) e açúcares totais da parte aérea e da raiz, além do conteúdo e produtividade do amido de raiz. Foi calculado, a partir de equações matemáticas, valores de energia metabolizável para aves e coelhos e digestível para ruminantes, tanto da parte aérea quanto da raiz. Não foi observada diferença na produtividade de matéria fresca de raiz entre os tratamentos estudados. Podas realizadas anteriormente ao período de repouso fisiológico causaram nas raízes: menores porcentagens de amido e a mesma produtividade. Em relação à parte aérea, tecidos mais jovens, ou seja, plantas podadas tardiamente tiveram menores porcentagens de PB e FB. Com relação à... / The cassava, to be concentrating starch on the root, source of energy and protein in the shoot, has been used in feed for livestock. The practice of pruning is common in cassava crops for the production of roots for the industry, but this practice is still little studied. In order to evaluate the potential use of the cassava plant, pruned at different times, in animal feed, through chemical analysis was performed between the years 2008/2010, at UNESP-Botucatu, research, in a randomized block design, pruning of shoots involving the IAC-14. The plants were pruned every month, on the seventh of the fifteenth month after planting (MAP) and a control without pruning. The chemical analyzes were performed at harvest, 22 MAP. Were analyzed the production, productivity in fresh and dry matter of roots and shoots, content and productivity of crude protein (CP), crude fiber (CF), neutral detergent fiber (NDF), acid detergent fiber (ADF), total digestible nutrients (TDN), nitrogen free extract (ELN) and total sugars of shoot and root, and the root starch. Were calculated from mathematical equations, metabolizable energy values for poultry and rabbits and digestible for ruminants, such as roots as aeral part. We analyzed the production, productivity in fresh and dry matter of roots and shoots, content and productivity of crude protein (CP) and the percentages of crude fiber (CF), neutral detergent fiber (NDF), acid detergent fiber (ADF), total digestible nutrients (TDN), nitrogen free extract (NFE) and total sugars of shoot and root, beyond the content and productivity of root starch. Were calculated, from mathematical equations, the metabolizable energy values for poultry and rabbits and digestible for ruminants of the shoot and root. There was no difference in the productivity of fresh root among treatments. Pruning before the rest period... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-02-01Bitstream added on 2014-06-13T18:45:07Z : No. of bitstreams: 1 sousa_e_dr_jabo.pdf: 731084 bytes, checksum: 8b5b74e4f498844e65d919aeece86e5e (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Para a manutenção da avicultura brasileira e conservação dos seus altos índices de produção e exportação de produtos avícolas, são exigidas medidas de prevenção e controle de alguns agentes etiológicos nas granjas, como por exemplo, a Salmonella spp. O objetivo deste trabalho foi isolar e classificar Salmonella spp., em materiais colhidos de instalações avícolas, sunícolas e avifauna selvagem local, inocular posteriormente os sorotipos isolados em pintos de frangos de corte verificando sua patogenicidade.. Foram capturadas 36 aves selvagens de diferentes espécies nas instalações avícolas de uma granja integrada de frango de corte. Foi isolado Salmonella Heidelberg dos órgãos e conteúdo intestinal de um pica-pau-do-campo (Colaptes campestris),. As amostras positivas provenientes das aves de produção foram: cama aviária (Salmonella enterica subsp. enterica sorotipo 4,5,12:R:-; Salmonella Heidelberg; Salmonella Infantis), fezes de frangos de corte (Salmonella Heidelberg; Salmonella enterica subsp. enterica sorotipo 6,7:R:-; Salmonella enterica subsp. enterica sorotipo 4,5,12:R:-; Salmonella Tennessee); água (Salmonella Glostrup; Salmonella enterica subsp. enterica sorotipo 6,8:d:-;) e cascudinhos (Alphitobius diaperinus) encontrados na cama aviária (Salmonella Tennessee). Em fezes de suínos criados em galpões na mesma propriedade, foram isolados Salmonella Panama e Salmonella Typhimurium. Quanto à infecção experimental, em todos os nove grupos de aves foi observado entre o 3° dpi (dia pós-infecção) e o 12° dpi, fezes amolecidas no chão das gaiolas, ao redor da cloaca e na penugem das aves. Aos 15 e 21 dpi, os diferentes sorotipos de Salmonella foram isolados do conteúdo cecal, do baço e do fígado. Nas necropsias não foram encontradas alterações macro nem microscópicas relevantes / For maintenance of the high levels of production in Brazil and the export of poultry products, preventive measures and control of some etiologic agents on farms, such as Salmonella spp., are required. The purpose of the present study was to initially investigate the presence of Salmonella spp.through bacterial culture in poultry houses materials collected from local poultry and wild birds and subsequently inoculate the isolated serotypes in broiler chicks and verify the effect on these. From the 36 wild birds captured in the poultry houses, Salmonella Heidelberg were isolated from the organs and intestinal contents from one woodpecker (Colaptes campestris) From the poultry houses the positive samples were: litter (Salmonella enterica subsp. enterica sorotipo 4,5,12:R:-; Salmonella Heidelberg; Salmonella Infantis), feces of broiler (Salmonella Heidelberg; Salmonella enterica subsp. enterica sorotipo 6,7:R:-; Salmonella enterica subsp. enterica sorotipo 4,5,12:R:-; Salmonella Tennessee), water (Salmonella Glostrup; Salmonella enterica subsp. enterica sorotipo 6,8:d:-;) and lesser mealworm (Alphitobius diaperinus) found in litter (Salmonella Tennessee). From the feces of swine also produced in sheds on the same farm were isolated Salmonella Typhimurium and Salmonella Panama. In the experimental infection done in nine avian groups (n=15) was observed between the 3rd dpi (days post-infection) and 12th dpi the presence of soft feces on the floor of the cages, around the cloaca and on feathers of the birds. On 15 and 21 dpi the different serotypes of Salmonella were isolated from the cecal contents, spleen and liver. At the necropsies weren’t observed relevant macro or microscopic alterations

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:26Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-07-31Bitstream added on 2014-06-13T21:06:05Z : No. of bitstreams: 1 furuta_pi_dr_jabo.pdf: 1073038 bytes, checksum: 5e772861c92b1e24fce5e65feea5cf02 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A neosporose é uma doença causada pelo protozoário Neospora caninum, e causa um grande impacto econômico na pecuária mundial. Sabe-se que muitos mamíferos são considerados hospedeiros intermediários, e que recentemente, foi confirmado o papel das aves no ciclo de vida de N. caninum como hospedeiros intermediários. O presente trabalho teve como finalidade estudar o ciclo evolutivo e patogenia de N. caninum em cães alimentados com ovos embrionados de Gallus gallus domesticus previamente inoculados com taquizoítas. Realizou-se diariamente o exame de fezes dos animais, pela técnica de flutuação, constatando a presença de oocistos nas fezes a partir de 7 dia apósinfecção. Anticorpos anti- N. caninum foram pesquisados semanalmente nos cães pela RIFI, sendo observados anticorpos a partir dos 14dai. Semanalmente um cão foi eutanasiado e durante a necropsia observou-se em todos os cinco animais, aumento dos linfonodos mesentéricos e das tonsilas, presença de muco no duodeno e jejuno e hepatoesplenomegalia, com hiperplasia de polpa branca do baço. Pelo exame histopatológico detectou-se reatividade dos linfonodos, lesões no fígado, coração, pulmão, baço e rim. Pelas técnicas de imunoistoquímica, imunofluorescência indireta dos tecidos e no Real-time PCR, observou-se a presença do parasito. Os resultados obtidos apontam que, os ovos embrionados infectados pelo parasito mostraram eficiência como modelo experimental para infectar cães, que eliminaram oocistos nas fezes, mesmo não apresentando sinais clínicos da neosporose. Ademais, os cães infectados apresentaram prematura soroconversão pela prévia administração de bicarbonato de sódio e o uso das técnicas citadas tornou possível a detecção do parasito nos tecidos analisados. / Neosporosis is a protozoan disease caused by Neospora caninum and affects the reproductive system in cattle worldwide. Infection by the parasite has been widely described in mammals, and recently the role of birds in its lifecycle was confirmed as intermediate hosts. This work aimed to study the life cycle of N. caninum and the pathogeny in dogs that were fed with embryonated eggs inoculated with tachyzoites. The tested dogs were followed up for oocyst shedding, by flotation technique, and it was detected at 7 days after infection. Antibodies anti- N. caninum were detected at 14dai. Once a week, one dog was euthanized and at the necropsy alterations was observed on the mesenteric lymph nodes and tonsils, presence of mucus at duodenum and jejunum portions, and hepatosplenomegaly. At the histopathological examination lymph nodes alterations were noticed ranging from moderate to intense. In addition, there were alterations in liver, heart, lung, spleen and kidney. The parasite was detected by immunochemistry and indirect immunofluorescense tests as well as by Real-time PCR. The results herein presented suggest that inoculated embryonated eggs showed to be an efficient model to infect dogs, because of shedding oocysts, and no clinical alterations. Moreover, the infected dogs presented earlier seroconvertion because of sodium bicarbonate solution administration and the parasite detection in the analyzed tissues was successful by the techniques used.

[pt] As mulheres vivem em sociedades onde as relações de poder são assimétricas e desiguais e estereótipos de gênero definem os papéis dentro das esferas públicas e privada da sociedade. A partir desse contexto, o trabalho pretende analisar, sob as críticas feministas as teorias procedimentais e substantivas da autonomia, como ocorre e quais as influências da socialização opressiva das mulheres na formação de suas preferências, valores e desejos. Na conjuntura brasileira a Ação Direita de Inconstitucionalidade - ADI número 4424 foi julgada procedente no STF em 2012 e tinha como objetivo conferir aos artigos 12, I, 16 e 41, da Lei Maria da Penha (Lei 11.340/2006), interpretação conforme a Constituição Federal, no sentido de que as lesões corporais leves contra mulheres no contexto doméstico e familiar serão processadas por ação penal pública incondicionada à representação, assim, buscou-se compreender se a decisão do STF diminuía a autonomia da mulher ao retirar dela a opção de processar seu agressor, além de avaliar até que ponto os contextos de socialização de submissão, como a violência doméstica, podem diminuir as práticas autônomas em razão da internalização de valores opressivos. / [en] Women live in societies where power relations are asymmetrical and unequal and gender stereotypes define roles within the public and private spheres of society. From this context, the study aims to examine, under feminist critiques the procedural and substantive theories of autonomy, as it occurs and what influences the oppressive socialization of women in shaping their preferences, values and desires. In the Brazilian context the Direct Action of unconstitutionality number 4.424 was upheld in the Supreme Court in 2012 and aimed to regard Article 12 , I , 16 and 41, the Maria da Penha Law ( Law 11.340/2006 ) , interpretation according to the Constitution Federal , in the sense that slight injury against women in the home and family context will be processed by public criminal action representation, so we sought to understand whether the decision of the Supreme Court undermines woman s autonomy when take from her the option to sue her abuser , and to evaluate the extent to which socialization contexts submission , such as domestic violence, may decrease the autonomy because of the internalization of oppressive values .

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:21Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-07-06Bitstream added on 2014-06-13T20:16:37Z : No. of bitstreams: 1 piza_vmt_me_jabo.pdf: 496784 bytes, checksum: 8e82f3b02d746dfe3daa52fd23b8be9e (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Nesse estudo foi desenvolvido e aplicado o procedimento de imunocaptura para realizar a reação de transcrição reversa seguida pela reação em cadeia da polimerase (IC-RT-PCR) a fim de ser amplificada uma região 5'_ proximal do gene 81 do vírus da bronquite infecciosa (VBI) com 228 pb e de forma a fazer a detecção e a diferenciação desse vírus, comparando-se os resultados dessa metodologia com os obtidos na técnica convencional de RT-PCR. Todas as 11 estirpes do VBI testadas foram amplificadas pelas duas técnicas moleculares, enquanto que nenhum dos vírus heterólogos (Pneumovírus Aviário do grupo A e B, Vírus da Doença de Gumboro e o Vírus da Doença de Newcastle) ensaiados levaram a amplificação específica do gene 81. O limiar de detecção para a técnica de IC-RT-PCR foi idêntico ao do método de RT-PCR e correspondeu a 102.8 Doses Infectantes Embrionárias 50%. Para um total de 35 amostras de tecidos do trato respiratório testadas e provenientes de aves infectadas experimentalmente, 32 foram positivas pela técnica de IC-RT-PCR e também pela RT-PCR convencional, enquanto que o isolamento viral foi obtido para 22 dessas amostras. A análise do produto amplificado do gene 81 na IC-RT-PCR através da técnica de RFLP (restriction fragment length polymorphism), com as enzimas Alul e Mboll, permitiu a diferenciação das 5 estirpes de referências e dos 6 isolados de campo analisados em 4 diferentes genótipos, correspondentes às estirpes de referência M41, Connecticut, ou 8E-17, ou a um isolado de campo. Portanto, a técnica de IC¬RT -PCR demonstrou um grande potencial para ser aplicada no diagnóstico direto do VBI, apresentando vantagens sobre a técnica convencional de RT-PCR, as quais foram derivadas da combinação da especificidade da imunocaptura em fase sólida com a sensibilidade da reação de PCR, o que pode proporcionar ganho de tempo e menor custo para a manipulação de um maior número de amostras. / In this study, the immunocapture procedure followed by reverse transcription and polymerase chain reaction (IC-RT-PCR) technique was standardized and applied for the amplification of 5'- proximal pari of 81 gene of infectious bronchitis virus (IBV) in infected f1uid or tissue samples, which were collected from embryonating chicken eggs or experimentally infected birds. The results of this technique were compared with those obtained in conventional RT-PCR. Ali eleven IBV strains tested were amplified, while none of the heterologous avian viral pathogens (Groups A and B Avian Pneumovirus, Newcastle Disease Virus and Gumboro Disease Vírus) gave positive results. The limit of detection for IC-RT¬PCR was identical to the common RT-PCR and corresponded to 102.8 50% embryonic infectious doses. Thirty two out of thirty five respiratory tissue samples collected from experimentally infected chickens were positive by both molecular techniques (IC-RT-PCR I common RT-PCR), whereas the vírus isolation test detected IBV in twenty two of these samples. The AluL and Mobll RFLP analysis of the 228 bp amplicon generated from IC-RT-PCR led to the discrimination of the 5 reference strains and 6 field IBV isolates in four genotypes; which were associated to the M41, to Connecticut, ar to 8E-17 strain, or to a field isolate. Therefore, the IC-RT-PCR demonstrated in this study a high potential for the application in the direct diagnosis of IBV and has relevant advantages over the conventional RT¬PCR, because it combines the specificity of the immunocapture in a solid phase with the sensitivity of the PCR, providing simplicity, rapidity and low cost for the manipulation of a high number of samples.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:23Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-12-22Bitstream added on 2014-06-13T18:56:05Z : No. of bitstreams: 1 fernandes_cc_me_jabo.pdf: 1349174 bytes, checksum: b0d752648346a29041d0fbd5f330fbf6 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Anticorpos monoclonais se constituem na base de vários testes usados na detecção e na identificação de antígenos. Nesse contexto, tais imuno-reagentes têm sido extensivamente empregados na identificação de estirpes virais envolvidas na etiologia de surtos de bronquite infecciosa a campo, permitindo o aperfeiçoamento das técnicas de detecção e caracterização antigênica do vírus da bronquite infecciosa das galinhas (VBI). No presente estudo, uma biblioteca de fragmentos de anticorpos de galinha originalmente preparada por “phage display” contra a estirpe vacinal (H120) do VBI, foi usada para a seleção de fragmentos de anticorpos recombinantes com reatividade cruzada para as estirpes heterólogas IBVPR01, IBVPR05, isoladas de surtos a campo no Brasil e SE-17, isolada nos Estados Unidos. Após três ciclos de “panning”, foi identificado pelo ELISA um conjunto de 15 anticorpos scFv expressos em fagos e com reatividade cruzada para essas mesmas estirpes do VBI. A análise por Western-blotting revelou que três desses clones apresentavam fagos expressando fragmentos de anticorpos monoclonais com reatividade cruzada para a nucleoproteína N das três estirpes do VBI e também para a forma recombinante dessa nucleoproteína derivada da estirpe M41. Concluindo, os fragmentos de anticorpos monoclonais recombinantes scFv-N produzido em fagos interagem com um epítopo mais conservado da proteína N do VBI e apresentam um grande potencial para utilização na detecção e no diagnóstico direto desse vírus e no estudo de evolução de variantes desse vírus. / Monoclonal antibodies are the basis of various techniques used for antigen detection or characterization, and their use is specially recommended for the identification of viral strains involved in the etiology of outbreaks of infectious bronchitis, because these antibodies are homogeneous, highly specific and fully characterized, allowing the improvement of detection of immunological techniques and antigenic characterization of avian infectious bronchitis virus strains (IBV). We used a phage display library prepared previously against the IBV vaccine strain (H120) for the selection of new scFv antibody fragments reacting with heterologous IBV strains isolated from outbreaks in Brazil (IBVPR01, IBVPR05) and USA (SE-17). After three cycles of panning a set of 15 scFv antibodies was expressed in phages and exhibited crossreaction in ELISA with these three viral strains. Western-blotting analysis showed that three of this clone set were expressing scFv specific for the nucleoprotein of these IBV strains, as well as to the recombinant form of this protein derived from M41 strain of IBV. In conclusion, the recombinant fragments of monoclonal antibodies expressed by phage-display technique have a great potential for future use in immunodiagnostic techniques and study the evolution of variant strains of this virus.