<p>An <i>in vitro</i> method was developed for measuring aromatase, based on binding of competitive aromatase inhibitor [¹¹C]vorozole to the active site of the enzyme. [¹¹C]Vorozole displayed high, specific binding <i>in vitro</i> to human placenta and human granulosa cells (GC), both fresh and frozen/thawed cells, provided correct procedures were used. High, specific binding was also observed in pig and rat ovaries, whereas binding in other tissues was unspecific and usually low. Aromatase concentrations measured by [¹¹C]vorozole binding correlated well to aromatase activity measured by [³H]water release from 1β[³H]androstenedione. </p><p>In human GC <i>in vitro</i>, low concentrations of 5α-dihydrotestosterone (DHT), but not of other androgens, stimulated aromatase activity measured by [³H]water release but had no effects on aromatase concentration measured by [¹¹C]vorozole binding. DHT may interact with aromatase differently than other androgens, perhaps by changing aromatase affinity to precursor. </p><p>In the rat estrous cycle, aromatase activity in ovarian homogenate, measured by [³H]water release, together with serum androstenedione and estradiol-17β, peaked between 6 and 13 h after onset of the light period of proestrus, the former activity being independent of radioactive substrate concentration. [¹¹C]Vorozole binding characteristics changed more rapidly than <i>de novo</i> synthesis of the enzyme. [¹¹C]Vorozole binding K_dshowed close inverse correlation to aromatase activity in ovarian homogenate and to serum estradiol-17β. Rapid changes in substrate affinity rather than changes in substrate concentration or <i>de novo</i> synthesis of the enzyme may thus be important for regulation of ovarian aromatase. </p><p>The [¹¹C]vorozole <i>in vivo</i> technique yields additional information compared with traditional in vitro techniques. </p>

An in vitro method was developed for measuring aromatase, based on binding of competitive aromatase inhibitor [11C]vorozole to the active site of the enzyme. [11C]Vorozole displayed high, specific binding in vitro to human placenta and human granulosa cells (GC), both fresh and frozen/thawed cells, provided correct procedures were used. High, specific binding was also observed in pig and rat ovaries, whereas binding in other tissues was unspecific and usually low. Aromatase concentrations measured by [11C]vorozole binding correlated well to aromatase activity measured by [3H]water release from 1β[3H]androstenedione. In human GC in vitro, low concentrations of 5α-dihydrotestosterone (DHT), but not of other androgens, stimulated aromatase activity measured by [3H]water release but had no effects on aromatase concentration measured by [11C]vorozole binding. DHT may interact with aromatase differently than other androgens, perhaps by changing aromatase affinity to precursor. In the rat estrous cycle, aromatase activity in ovarian homogenate, measured by [3H]water release, together with serum androstenedione and estradiol-17β, peaked between 6 and 13 h after onset of the light period of proestrus, the former activity being independent of radioactive substrate concentration. [11C]Vorozole binding characteristics changed more rapidly than de novo synthesis of the enzyme. [11C]Vorozole binding Kd showed close inverse correlation to aromatase activity in ovarian homogenate and to serum estradiol-17β. Rapid changes in substrate affinity rather than changes in substrate concentration or de novo synthesis of the enzyme may thus be important for regulation of ovarian aromatase. The [11C]vorozole in vivo technique yields additional information compared with traditional in vitro techniques.

Submitted by Socorro Pontes (socorrop@ufersa.edu.br) on 2017-05-03T11:53:29Z No. of bitstreams: 1 GleidsonBO_TESE.pdf: 11466529 bytes, checksum: bbaaa583c7710c45dac218fe4cb14279 (MD5) / Approved for entry into archive by Vanessa Christiane (referencia@ufersa.edu.br) on 2017-05-04T16:03:53Z (GMT) No. of bitstreams: 1 GleidsonBO_TESE.pdf: 11466529 bytes, checksum: bbaaa583c7710c45dac218fe4cb14279 (MD5) / Approved for entry into archive by Vanessa Christiane (referencia@ufersa.edu.br) on 2017-05-04T16:04:05Z (GMT) No. of bitstreams: 1 GleidsonBO_TESE.pdf: 11466529 bytes, checksum: bbaaa583c7710c45dac218fe4cb14279 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-04T16:04:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 GleidsonBO_TESE.pdf: 11466529 bytes, checksum: bbaaa583c7710c45dac218fe4cb14279 (MD5) Previous issue date: 2016-09-22 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The morphological knowledge and data about the composition of glycosaminoglycans (GAGs) in the female reproductive system and placental of agouti are essential to the understanding of reproductive events. In addition to these, the knowledge of embryonic and fetal development in the specie, provides as the basis for application of ultrasound examination and reproductive biotech, contributing directly to conservation of the specie and commercial exploitation. Therefore, the objective describe the anatomohistological characteristics of the reproductive tract of agoutis females, as well as identify the profile of glycosaminoglycans in reproductive organs and placenta during the pregnancy. Were utilized agoutis 25 adult females at different stages of the estrous cycle and pregnancy, obtained in Centre of Multiplication of Wild Animals of the Universidade Federal Rural do Semi-Árido. After eutanasiados, abdominal and pelvic cavities were opened, the reproductive organs and fetuses when gifts were photographed in situ and ex situ and analysed to morphometric. Each body fragments were fixed in 4% paraformaldehyde solution and 2.5% glutaraldehyde and submitted to histological technique of light and scanning electron microscopy. Fragments of organs were also placed in acetone to remove the lipids and then the sample subjected to agarose gel electrophoresis. Blades for light microscopy, were stained with hematoxylin-eosin, Gomori stain, Alcian-Mallory and Periodic Acid Schiff (PAS). It was observed that he ovary of the Dasyprocta leporina is coated by simple cubic to squamous epithelium that rests on the tunica albuginea, showing a cortical and medular zone. The uterine tube is organized in three layers, a mucous membrane (simple ciliated columnar epithelium), the lamina propria (loose connective) and serosa. The villus height and muscle layer thickness varying between the areas of infundibulum, isthmus and ampulla. In pregnancy this organ has profile variable, with predominance of dermatan sulfate (DS) and heparan sulfate (HS) in early gestation and DS and chondrotin sulfate (CS) in the middle and final thirds with sharp reduction at term. The uterus is classified as partial double, consisting of two horns and a cervix with two distinct ostia that communicate with the body and a single ostium that opens into the vagina. The uterine horn presented throughout pregnancy a predominance of CS and DS, with small amount of HS. The vagina has three layers, the outer adventitia (connective tissue), muscular and mucous membrane composed of epithelium that varies from little pavimentoso storied without keratinization (luteal phase) the storied pavimentoso keratinized and cornified (follicular phase) enough frilled and with leukocytes cells. In the vagina, the main GAG found was the DS, with small concentration of HS analyzed throughout of the pregnancy. The vulva is located between the anus (dorsal) and the ostium and the vestibule urethral absent in the species. The clitoris is external to vagina, in which in its peak protrude sideways two spicules corneas and the urethra centered, in the absence of a common part between the urinary and genital tracts. Embryos at 30 days after copulation had form of "C" with limb buds paddle-shaped, Crown-Rump (CR) of 10.75 ± 0.11 mm and weight of 0.17 ± 0.03 g; 40 days the skin was smooth and transparent and liver boss and curvature of reduced body, CR 19.5 ± 0,007 mm and weight 1.34 ± 0.01 g; after 65 days, the genital tubercle was already differentiated and CR was 83 ± 0.08 mm and weight of 29.22 ± 0.46 g; 85 days, presence of stubble throughout the body, eyes partly open, CR of 127.7 ±0.6 mm and weight of 96.56 ± 7.37 g; 100 days, mature fetus with long hair and the whole body, fully formed tooth and nail and open auditory meatus, CR was 164.3 ± 10.4 mm and weight of 166.5 ± 7.79 g; the infants had the open eyes and bristling at birth, with CR 179.1 ± 0.5 and weight of 201.88 ± 1.89 g. Concluded that the profile and concentration of GAGs varies as to the organ and gestation period and that the age of the embryo/fetus can be evaluated during pregnancy, allowing to estimate gestational age and the data can be used as parameters to ultrasound examinations, helping in the identification of diseases throughout development / O conhecimento morfológico e os dados sobre a composição dos glicosaminoglicanos (GAGs) no sistema reprodutor feminino e tecido placentário de cutia são essenciais para a compreensão dos eventos reprodutivos. Soma-se a estes, o conhecimento sobre o desenvolvimento embrionário/fetal na espécie, que serve como base para aplicação do exame ultrassonográfico e biotécnicas reprodutivas, contribuindo diretamente para conservação da espécie e exploração comercial. Portanto, objetivou-se descrever as características anatomohistológicas do sistema reprodutor de cutias fêmeas, bem como identificar o perfil dos GAGs presentes nos órgãos reprodutivos e placenta ao longo da gestação. Para tanto, foram utilizadas 25 cutias, adultas em diferentes fases do ciclo estral e gestação, obtidas no Centro de Multiplicação de Animais Silvestres da Universidade Federal Rural do Semi-Árido (CEMAS/UFERSA). Após eutanasiados, as cavidades abdominal e pélvica foram abertas, os órgãos do sistema reprodutor e fetos quando presentes foram fotografados in situ e ex situ e realizado a análise morfométrica. Fragmentos de cada órgão foram fixados em solução de paraformaldeído 4% e glutaraldeído 2,5% e destinados à microscopia de luz e eletrônica de varredura. Fragmentos dos órgãos também foram colocados em acetona para realização do processo de delipidação e em seguida a amostra submetida à eletroforese em gel de agarose. Observou-se que o ovário da cutia é revestido por epitélio simples cúbico a pavimentoso que repousa sobre a túnica albugínea, evidenciando-se uma zona cortical e uma medular. A tuba uterina está organizada em três camadas, uma mucosa (epitélio colunar simples, ciliado e viloso), uma lâmina própria (conjuntivo frouxo) e uma camada serosa, estando o tamanho das vilosidades e a espessura da camada muscular variando entre as áreas de infundíbulo, ampola e istmo. Na gestação, este órgão teve perfil variável, com predomínio de DS e HS no início da gestação e DS e CS nos terços médio e final e redução acentuada a termo. O útero é classificado como duplo parcial, formado por dois cornos e uma cérvix com dois óstios distintos que se comunicam com o corpo e um único óstio que se abre na vagina. O corno uterino apresentou ao longo da gestação uma predominância de CS e DS, com pequena quantidade de HS. A vagina possui três camadas, adventícia externa (tecido conjuntivo), muscular e a mucosa composta por epitélio que varia de pavimentoso pouco estratificado sem queratinização (fase lútea) a estratificado pavimentoso queratinizado e cornificado (fase folicular) bastante pregueado e com presença de células leucocitárias. Na vagina, o principal GAG encontrado foi o DS, com pequena concentração de HS analisados ao longo da gestação. A vulva localiza-se entre o ânus (dorsal) e o óstio uretral, estando o vestíbulo ausente na espécie. O clitóris encontra-se externo a vagina, no qual em seu ápice projetam-se lateralmente duas espículas córneas e uma uretra centralizada, não existindo uma parte comum entre os tratos urinário e genital. Os embriões aos 30 dias pós cópula possuíam forma de “C”, com brotos dos membros em forma de remo, Crown-Rump de 10,75 ± 0,11 mm e peso de 0,17 ± 0,03; aos 40 dias a pele foi lisa e transparente e saliência hepática e curvatura do corpo reduzidas, CR de 19,5 ± 0,007 mm e peso 1,34 ± 0,01 g; aos 65 dias, o tubérculo genital já estava diferenciado e CR observado foi de 83 ± 0,08 mm e peso de 29,22 ± 0,46 g; aos 85 dias, presença de pelos curtos distribuídos pelo corpo, olhos parcialmente abertos, CR de 127,7 ± 0,6 mm e peso de 96,56 ± 7,37 g; aos 100 dias, feto maduro com pêlos longos e em todo o corpo, unhas e dentes completamente formados e conduto auditivo aberto, CR foi de 164,3 ± 10,4 mm e peso de 166,5 ± 7,79 g; os neonatos apresentaram pêlos eriçados e olhos abertos ao nascer, com CR de 179,1 ± 0,5 e peso de 201,88 ± 1,89 g. Conclui-se que o perfil e a concentração dos GAGs varia quanto ao órgão e período de gestação e que a idade do embrião/feto pode ser avaliada durante gestação, permitindo estimar idades gestacionais, e os dados podendo ser usados como parâmetros para exames ultrassonográficos, ajudando na identificação de patologias ao longo do desenvolvimento / 2017-04-25

Submitted by Socorro Pontes (socorrop@ufersa.edu.br) on 2017-05-03T13:11:41Z No. of bitstreams: 1 AndreMV_TESE.pdf: 15675614 bytes, checksum: fe55971bec8a35c1310c8ede4fbbf2f5 (MD5) / Approved for entry into archive by Vanessa Christiane (referencia@ufersa.edu.br) on 2017-05-04T16:04:13Z (GMT) No. of bitstreams: 1 AndreMV_TESE.pdf: 15675614 bytes, checksum: fe55971bec8a35c1310c8ede4fbbf2f5 (MD5) / Approved for entry into archive by Vanessa Christiane (referencia@ufersa.edu.br) on 2017-05-04T16:04:48Z (GMT) No. of bitstreams: 1 AndreMV_TESE.pdf: 15675614 bytes, checksum: fe55971bec8a35c1310c8ede4fbbf2f5 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-04T16:05:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 AndreMV_TESE.pdf: 15675614 bytes, checksum: fe55971bec8a35c1310c8ede4fbbf2f5 (MD5) Previous issue date: 2017-02-17 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The gestation period, the characteristics of the reproductive cycle, including the selection of the influence of the male effect, the description of the female reproductive system, placentation, embryonic and fetal development – added of the morphometric analysis - and the expression of sulfated glycosaminoglycans (GAGs) in the reproductive and placental organs were the ways to contribute with the conservation of the species. For this, 45 non-pregnant females were used in the following experiments: 15 females were distributed in three experimental groups, followed by the addition of one male in each group, so that after the copulation and fertilization the females were separeted in accordance with the compatible dates of begining (days 5, 10 and 15), middle (days 20, 25, 30 and 35) and end (days 40, 45, 50 and 55) of gestation. This condition was obtained to obtain fragments of gestational sacs, placentas and organs of the female reproductive system, which were fixed in 4% paraformaldehyde and submitted to light microscopy techniques. The samples fixed in glutaraldehyde were performed in scanning and transmission electron microscopy techniques. In addition, prozima was used for GAG extraction, followed by agarose gel electrophoresis and subsequent quantification by densitometry. The second experiment consisted of the use of five females, housed in a room that contained a male to monitor the duration of gestation. The third experiment aimed to characterize the estrous cycle in a group containing five females plus one male, which was found trapped in a cage and another five, in a box exempt from the latter. The fourth experiment was performed by means of the morphometric analysis of embryos with 20, 25, 30 and 35 days plus fetuses on days 40, 45, 50, 55, 60 and newborns. The results revealed the presence of an incomplete double uterus, formed by two horns, a septate body and a cervix. The organs of the reproductive system presented macroscopic and histological characteristics similar to those reported for other rodents. The duration of gestation showed an average of 59 ± 2,7487 days and the sexual cycle was classified as continuous polystyric, with a mean period of 14.8 ± 0.73 days for females submitted to the male effect and 14.6 ± 0.75 days for those of the other group. In addition, the male presence significantly influenced (D <0.05) the duration of the diestrus, making it longer. The yolk sac inversion occurred on the 14th day of gestation and the visceral endoderm was placed in apposition to the uterine tissues. The chorioallantoic placenta presented a discoidal shape and had well defined regions of spongiotrophoblast, labyrinth and subplacenta from the intermediate gestation. Embryonic development was similar to that observed in histricognatis rodents, being the transition to the fetal phase, occurring at 40 days of gestation. Morphometric data allowed the establishment of correlations with gestational age. Dermatan sulfate was the predominant GAG in samples of uterine tubes, vaginas and placentas, whereas heparam expressed more in the body of the uterus at the beginning of gestation. There were also high concentrations of GAGs in the pregnant uterus and still in the reproductive system in the estrogenic phase when compared to the diestrus. It is concluded that the reproductive events presented characteristics of the species correlated with others of the order Rodentia, fact that indicates a set of evolutionary strategies related to its maintenance / O período de gestação, características do ciclo reprodutivo, incluindo verificação da influência do efeito macho, descrição do sistema reprodutor feminino, placentação, desenvolvimento embrionário e fetal – acrescido de análises morfométricas - e expressão dos glicosaminoglicanos (GAGs) sulfatados nos órgãos reprodutivos e placentários foram caracterizados em fêmeas de preás como forma de contribuir para a conservação da espécie. Para tanto, utilizaram-se 45 fêmeas não gestantes nos seguintes experimentos: 15 fêmeas foram distribuídas em três grupos experimentais, seguido da adição de um macho em cada grupo de modo que após a cópula e fecundação, as fêmeas eram separadas segundo datas compatíveis com início (dias cinco, 10 e 15), meio (dias 20, 25, 30 e 35) e fim (dias 40, 45, 50 e 55) da gestação. Tal condição visou à obtenção de fragmentos dos sacos gestacionais, placentas e órgãos do sistema reprodutor feminino, os quais foram fixados em paraformaldeído 4% e submetidos às técnicas de microscopia de luz. As amostras fixadas em glutaraldeído foram destinadas à realização de técnicas de microscopia eletrônica de varredura e transmissão. Além disto, usou-se a prozima para extração dos GAGs, seguida da eletroforese em gel de agarose e posterior quantificação por densitometria. O segundo experimento consistiu na utilização de cinco fêmeas, alocadas em recinto que continha um macho para o acompanhamento da duração da gestação. O terceiro experimento objetivou a caracterização do ciclo estral em um grupo contendo cinco fêmeas mais um macho, o qual encontrou-se preso em gaiola e outras cinco, em box isento deste último. O quarto experimento foi realizado por meio da análise morfométrica de embriões com 20, 25, 30 e 35 dias além de fetos nos dias 40, 45, 50, 55, 60 e recém-nascidos. Os resultados revelaram a presença de um útero duplo incompleto, formado por dois cornos, um corpo septado e uma cérvice. Os órgãos do sistema reprodutor apresentaram características macroscópicas e histológicas semelhantes as relatadas para outros roedores. A duração da gestação demonstrou média de 59 ± 2,7487 dias e o ciclo sexual foi classificado como poliéstrico contínuo, com período médio de 14,8 ± 0,73 dias para as fêmeas submetidas ao efeito macho e 14,6 ± 0,75 dias para aquelas do outro grupo. Além disto, a presença do macho influenciou significativamente (P<0,05) a duração do diestro, tornando-o mais longo. A inversão do saco vitelino ocorreu no décimo quarto dia de gestação e o endoderma visceral situou-se em aposição aos tecidos uterinos. A placenta corioalantoide apresentou forma discoidal e possuiu regiões bem definidas de espongiotrofoblasto, labirinto e subplacenta a partir da gestação intermediária. O desenvolvimento embrionário foi semelhante ao observado em roedores histricognatis, sendo a transição para a fase fetal, ocorrida aos 40 dias de gestação. Os dados morfométricos possibilitaram o estabelecimento de correlações com a idade gestacional. O dermatam sulfato foi o GAG predominante em amostras de tubas uterinas, vaginas e placentas, ao passo que o heparam expressou-se mais no corpo do útero, no início da gestação. Houve ainda elevadas concentrações de GAGs no útero gestante e no sistema reprodutor na fase estrogênica quando comparada ao diestro. Conclui-se que os eventos reprodutivos apresentaram características da espécie correlacionáveis com outras da ordem Rodentia, fato este que indica um conjunto de estratégias evolutivas relacionadas com a sua manutenção / 2017-05-03

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:18Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-08-10Bitstream added on 2014-06-13T19:35:12Z : No. of bitstreams: 1 cortejunior_ao_me_araca.pdf: 654847 bytes, checksum: bc307df312fdd42315035ada00da030f (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Seis novilhas Nelore tiveram seus ciclos estrais acompanhados durante diferentes estações do ano (outono n=11; inverno n=8; primavera n=9; verão n=9) com exames ultrassonográficos diários para contar e mensurar folículos ≥3mm. Amostras de sangue foram colhidas a cada 12h para hormônio luteinizante (LH) e progesterona (P4), e a cada 3h do estro até a ovulação para caracterizar o pico de LH. Cinco novilhas ovariectomizadas receberam 17β-estradiol (2μg/kg/p.v.) em cada estação, e amostras de sangue foram colhidas depois disso a cada 3h para quantificação de LH. A diferença percentual mensal ( %) do peso não variou entre as estações. A concentração média de P4 no ciclo estral foi maior (p=0,001) e o número de folículos menor (p=0,001) durante o outono (2,5±0,2ng/mL; 7,8±0,1) e verão (2,9±0,3ng/mL; 6,8±0,2) comparado com o inverno (1,4±0,2ng/mL; 9,6±0,3) e primavera (1,6±0,2ng/mL; 9,7±0,3). Durante o inverno houve mais ciclos estrais com três (5 de 8) e durante o verão somente ciclos com duas ondas foliculares (p=0,009). Como a secreção de LH não variou, apesar da variação sazonal na concentração de P4, e como houve correlação negativa entre os valores máximos de P4 e a variação percentual do fotoperíodo (p=0,0056; r = -0,4465), uma variação sazonal na sensibilidade das células luteínicas ao LH precisa ser avaliada. Nas novilhas ovariectomizadas, a concentração circanual de LH sem o estímulo de estradiol foi significante (p=0,0214). A resposta de LH ao tratamento de estradiol foi menor no verão (0,8±0,2ng/mL vs 1,3±0,5ng/mL). Nós supomos que existe variação sazonal na sensibilidade hipotalâmica ao estradiol. / Six Nelore heifers had their estrous cycle followed during different seasons of the year (autumn n=11; winter n=8; spring n=9 and summer n=9) with daily ultrasonographic exams to count and measure follicles ≥3mm. Blood was collected every 12h for luteinizing hormone (LH) and progesterone (P4), and every 3h from estrus until ovulation to characterize the LH peak. Five ovariectomized heifers were injected with 17β-estradiol (2μg/kg/LW) every season and blood samples were collected thereafter at 3h intervals for LH quantification. The monthly body weight percentile difference ( %) did not vary between seasons. Average P4 concentration for the cycle was higher (p=0.001) and follicle number lower during autumn (2.5±.2ng/ml; 7.8±.1) and summer (2.9±.3ng/ml; 6.8±.2) (p=0.001) compared to winter (1.4±.2ng/ml; 9.6±.3) and spring (1.6±.2ng/ml; 9.7±.3). During winter there were more estrous cycles with three follicle waves (5 out of 8) and during summer only cycles with two follicular waves (p=0.009). As LH secretion did not vary despite seasonal variation in P4 concentration and as there was a negative correlation between higher P4 values and daily percentile variation of photoperiod ( %, p=0.0056; r= -0.4465), a seasonal variation in luteal cell sensitivity to LH needs to be evaluated. In the ovariectomized Nelore heifers, the LH circanual concentration without estradiol stimulus was significant (p=0.0214). The LH response to estradiol treatment was lower in summer (0.8±.2ng/ml vs 1.3±.5ng/ml). We hypothesize there exists seasonal variation in hypothalamic sensitivity to estradiol.

Made available in DSpace on 2016-06-02T19:23:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 6454.pdf: 1517132 bytes, checksum: 7b7709a440e2df5e824c4e22e76d991c (MD5) Previous issue date: 2014-11-11 / Universidade Federal de Sao Carlos / Sex hormones may influence many physiological processes. However, it is still unclear whether sex hormones and hormonal fluctuations that occur during the estrous cycle can affect breathing. Our study aimed to evaluate the ventilation (VE), tidal volume (VT), respiratory frequency (fR), oxygen consumption (VO2) ventilatory equivalent (VE/VO2) and body temperature (Tc) of rats at different stages of estrous cycle (proestrus, estrus, metaestrus and diest responses of intact and orchidectomized (ORX) rats to females in estrous phase (when plasma concentrations of estradiol and progesterone are lower) and ovariectomized (OVX) rats during normocapnia and hypercapnia (7% CO2). VE, VT, fR, VO2 and VE/VO2 were not different among animals in different stages of the estrous cycle in normocapnia and hypercapnia. However, Tc was higher in female rats in estrus. Hormone replacement in females did not change the ventilatory and metabolic parameters. Nevertheless, OVX, OVX+E2 and OVX+EP presented lower ventilatory responses to hypercapnia compared to intact females in estrus phase. Intact animals - both males and females in estrus - showed a higher VE and VE/ VO2 in hypercapnia than castrated animals. We also observed that females in estrus had a higher ventilatory response compared to intact male rats. Thus, our data demonstrated that the different phases of the estrous cycle did not change ventilation in normocapnia and hypercapnia. We also observed that gonadectomy reduces the ventilatory response to CO2. Additionally, rats in estrus have higher ventilatory responses to hypercapnia than males. / Os hormônios sexuais podem influenciar diversos processos fisiológicos. No entanto, ainda não estão claros os efeitos dos hormônios sexuais e também se as variações hormonais durante o ciclo estral podem afetar a respiração. Nosso estudo teve como objetivos avaliar a ventilação (VE), volume corrente (VT), frequência respiratória (fR), consumo de oxigênio (VO2) e equivalente respiratório (VE/VO2) e temperatura corporal (Tc) de ratas nas diferentes fases do ciclo estral (proestro, estro, metaestro e diestro) e em ratas ovarectomizadas (OVX) e com reposição hormonal com estrógeno (OVX+E2) e estrogeno+progesterona (OVX+EP). Adicionalmente, foi comparada a resposta ventilatória e metabólica durante normocapnia e hipercapnia de ratos intactos e orquidectomizados (ORX) com ratas intactas em estro (fase que as concentrações plasmáticos de estradiol e progesterona estão mais baixas) e ovarectomizadas (OVX) durante a normocapnia e hipercapnia (7% CO2). A VE, VT, fR, VO2 e VE/VO2 não foram diferentes entre as ratas nas diferentes fases do ciclo estral em normocapnia e hipercapnia. Contudo, a Tc foi maior nas ratas em estro comparando com as demais fases do ciclo estral. A reposição hormonal em fêmeas não alterou os parâmetros ventilatórios e metabólicos. Entretanto, fêmeas OVX, OVX+E e OVX + EP apresentaram uma resposta ventilatória à hipercapnia menor quando comparadas com fêmeas intactas em estro. Animais intactos, tanto machos quanto fêmeas em estro, apresentaram a VE e VE/VO2 significativamente maiores em hipercapnia, do que animais castrados. Observamos também que fêmeas no estro apresentaram uma maior resposta ventilatória que ratos intactos. Desta forma, nossos dados demonstram que as diferentes fases do ciclo estral não alteram a ventilação em normocapnia e hipercapnia e que a gonadectomia reduz a resposta ventilatória ao CO2. Adicionalmente, ratas em estro apresentam maior resposta ventilatória à hipercapnia que machos.

Made available in DSpace on 2014-12-17T15:37:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 LuaneMSF_DISSERT.pdf: 1389510 bytes, checksum: 8552b7721296822725c28f11de3be41a (MD5) Previous issue date: 2012-07-30 / GABAergic neurotransmission has been implicated in many aspects of learning and memory, as well as mood and anxiety disorders. The amygdala has been one of the major focuses in this area, given its essential role in modulating emotionally relevant memories. However, studies with male subjects are still predominant in the field. Here we investigated the consequences for an aversive memory of enhancing or decreasing GABAergic transmission in the basolateral nucleus of the amygdala (BLA). Wistar female rats were trained in the plus-maze discriminative avoidance task, in which they had to learn to avoid one of the enclosed arms where an aversive stimulus consisting of a bright light and a loud noise was given (day 1). Fifteen minutes before the test session (day 2) animals received 0,2 &#956;L infusions of either saline solution, the GABAergic agonist muscimol (0,05 mg/ml), or the GABAergic antagonist bicuculine (0,025 mg/ml) bilaterally intra-BLA. On the test day, females in proestrous or estrous presented adequate retrieval and did not extinguish the task, while females in metestrous or diestrous presented impaired retrieval. In the first group, muscimol infusion impaired retrieval and bicuculline had no effect, suggesting naturally low levels of GABAergic transmission in the BLA of proestrous and estrous females. In the second group, muscimol infusion had no effect and bicuculline reversed retrieval impairment, suggesting naturally high levels of GABAergic transmission in the BLA of metestrous and diestous females. Additionally, proestrous and estrous females presented higher anxiety levels compared to metestrous and diestrous females, which could explain better performance of this group. On the other hand, BLA GABAergic system did not interfere with the innate fear response because drug infusions had no effect in anxiety. Thus, retrieval alterations caused by the GABAergic drugs were probably related specifically to memory processes / A transmiss?o GABA?rgica est? envolvida em diversos aspectos do aprendizado e da mem?ria, assim com em transtornos de humor e ansiedade. Um dos grandes focos nessa ?rea tem sido a am?gdala, uma estrutura essencial para a modula??o de mem?rias emocionais. Entretanto, os estudos na ?rea s?o majoritariamente feitos em machos. Nesse trabalho foi investigado em ratas as consequ?ncias de uma transmiss?o GABA?rgica aumentada ou reduzida na am?gdala basolateral (BLA) para uma mem?ria aversiva. Ratas Wistar foram treinadas na esquiva discriminativa no labirinto em cruz elevado, aprendendo a evitar um dos bra?os fechados, onde recebiam um est?mulo aversivo consistindo de uma luz forte e um som alto (dia 1). Quinze minutos antes do teste (dia 2) os animais receberam 0,2&#956;L de solu??o salina, do agonista GABA?rgico muscimol (0,05 mg/ml), ou do antagonista GABA?rgico bicuculina (0,025 mg/ml) bilateralmente intra-BLA. F?meas testadas em proestro e estro evocaram adequadamente e n?o extinguiram a tarefa, enquanto f?meas testadas em metaestro e diestro tiveram um d?ficit na evoca??o. No primeiro grupo, a infus?o de muscimol prejudicou a evoca??o e a infus?o de bicuculina n?o teve efeito, indicando n?veis naturalmente baixos de transmiss?o GABA?rgica na BLA de f?meas em proestro e estro. J? no segundo grupo, a infus?o de muscimol n?o teve efeito e a infus?o de bicuculina reverteu o d?ficit na evoca??o, indicando n?veis naturalmente altos de transmiss?o GABA?rgica na BLA de f?meas em metaestro e diestro. F?meas em proestro e estro apresentaram maiores n?veis de ansiedade quando comparadas ?s f?meas em metaestro e diestro, o qu? poderia explicar o melhor desempenho desse grupo. Entretanto, o sistema GABA?rgico da BLA provavelmente n?o interfere com o medo inato, uma vez que os f?rmacos n?o tiveram efeito na ansiedade. Dessa forma, as altera??es na evoca??o causadas por eles parecem estar relacionadas especificamente a processos mnem?nicos

Orientador: Sebastião Roberto Taboga / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-17T17:10:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rochel-Maia_SabrinaSantos_D.pdf: 11931909 bytes, checksum: 6487540b50b593f34ec82d39617d9a12 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: O presente trabalho teve por objetivos: 1) Avaliar a atividade das MMPs na próstata de gerbilos machos e fêmeas adultos intactos, procurando comparar a glândula prostática de machos e fêmeas nas diferentes fases do ciclo estral (artigo I); 2) Avaliar o efeito da testosterona sobre o lobo ventral masculino e sobre a próstata feminina quanto à localização de MMP-2 e TIMP-2, enzimas envolvidas na remodelação estromal e na progressão do câncer (artigo II) e 3) Caracterizar a distribuição dos receptores de estrógeno, ER? e ER?, nos tecidos prostáticos de gerbilos machos e fêmeas controles e submetidos à manipulação hormonal (artigo III). Foram realizados experimentos de castração (7 ou 21 dias) nos gerbilos machos adultos, além de experimentos de aplicação hormonal (7 ou 21 dias) em fêmeas adultas na fase de proestro (cipionato de T, 1 mg/kg ou DHEA, 1 mg/kg). Os tecidos foram avaliados por análises bioquímicas, histológicas e imuno-histoquímicas. A atividade gelatinolítica das MMPs obtida por zimografia difere entre os lobos prostáticos masculinos e a glândula feminina, que apresenta os níveis mais altos para MMP-2 e -9, provavelmente devido à constante remodelação estromal promovida pelo ciclo estral. Com relação ao ciclo estral, a maior atividade de MMP-2 e -9 foi encontrada na fase estro, indicando influência do estrógeno. A castração elevou a expressão de MMP-2 na próstata ventral masculina, e o mesmo efeito foi observado após 21 dias de aplicação de T nas fêmeas, indicando que MMPs e TIMPs são influenciados por andrógenos, mas de forma distinta entre machos e fêmeas uma vez que tanto a falta como o excesso de T levaram ao mesmo efeito, provavelmente, devido a machos e fêmeas apresentarem diferentes padrões de expressão para os receptores nucleares, responsáveis por regular a resposta hormonal pelos tecidos. Segundo o estudo há notável diferença na imunolocalização de ER? entre machos e fêmeas, cujas células estromais prostáticas apresentaram duas vezes mais ER? do que as células estromais da próstata ventral masculina. Esse número foi reduzido drasticamente após aplicação de T por 21 dias nas fêmeas, mas não após a castração dos machos. A reação ao ER? foi similar entre machos e fêmeas intactos, mas a castração dos machos ou a aplicação hormonal nas fêmeas promoveu resposta específica, como total ausência após 21 dias de T nas fêmeas ou intensa imunoreação em algumas regiões da próstata após 21 dias de castração nos machos. Adicionalmente, lesões epiteliais presentes nos grupos experimentais tiveram reação ER?-positivas e ER?-negativas, corroborando os estudos que relacionam o ER? com o desenvolvimento e progressão de doenças prostáticas e o ER? como um fator de prevenção e tratamento do câncer. Os resultados obtidos reforçam o conceito de que o equilíbrio estrógeno/testosterona é essencial para a homeostase prostática, e que tanto andrógenos quanto estrógenos atuam sobre as células epiteliais, através dos receptores nucleares, mas também sobre o compartimento estromal, regulando componentes como as MMPs. No caso da próstata feminina, essa interação é ainda mais complexa pois envolve as alterações cíclicas do ciclo estral / Abstract: The present study aimed to: 1) Acess the activity of MMPs in the prostate gland of intact adult male and female gerbils, trying to compare the male prostate lobes with the female gland in different phases of the estrous cycle (Article I); 2) Evaluate the effect of testosterone on ventral prostate of males and on female prostate in the proestrus phase over the location of MMP-2 and TIMP-2, enzymes involved in stromal remodeling and cancer progression (Article II); and 3) Characterize the distribution of estrogen receptors, ER? and ER? in prostatatic tissue of male and female controls and under hormonal manipulation (Article III). Castration experiments (7 and 21 days) were conducted in adult male gerbils as well as hormone injection experiments (7 and 21 days) in adult females in the proestrus phase (T cypionate, 1 mg/kg or DHEA, 1 mg/kg). Tissues were evaluated by biochemical, histological and immunohistochemical methods. The gelatinolytic activity of MMPs, measured by zymography gel, differs from male prostatic lobes and the female gland, which presents the highest levels of MMP-2 and -9, probably due to its constant stromal remodeling promoted by the estrous cycle. Regarding the estrous cycle, the highest activity of MMP-2 and -9 was found in the estrus phase, indicating the influence of estrogen. Castration increased the expression of MMP-2 in the male ventral prostate, and this same effect was observed after 21 days of T injection in females, indicating that MMP and TIMP regulatory mechanism is also influenced by androgens, although differently between males and females since both the failure as the excess of T lead to the same effect, probably due to males and females presenting different patterns of expression for nuclear receptors, which are responsible for regulating the hormonal response by the tissues. According to our results, there is a remarkable difference in the immunolocalization of ER? between males and females, whose stromal cells presented two times more ER? than stromal cells of the male ventral prostate. This number was drastically reduced after 21 days of T injection in females, but not after castration of males. The immunoreaction to ER? was similar between intact males and females, but the castration of males or the hormonal injection in females promoted specific response, such as total absence of reaction after 21 days of T treatment in females or intense immunoreaction in some regions of ventral prostate after 21 days of castration. Additionally, epithelial lesions found in the experimental groups, were ER?-positives and ER?-negative, corroborating studies that relate ER? with the development and progression of prostatic diseases and ER? as a factor in preventing and treating cancer. The results obtained in this study therefore reinforce the concept that the estrogen/testosterone balance is essential for prostate homeostasis, and that either androgens or estrogens have an effect on the prostatic epithelial cells, via nuclear receptors, but also on the stromal compartment by regulating components such as MMPs. In the case of the female prostate, this interaction is even more complex since it involves the cyclical changes of the estrous cycle / Doutorado / Biologia Celular / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Os ratos-de-espinho são abundantes nas florestas úmidas Neotropicais. Trinomys yonenagae (ROCHA, 1995) constitui uma exceção entre as espécies do gênero por habitar o campo de dunas fixas da Caatinga, ser colonial e fossorial. Tanto o ambiente seco, como a socialidade e o hábito fossorial podem alterar o padrão reprodutivo das espécies. Diante do fato desses roedores serem coloniais, por exemplo, espera-se a influência de co-específicos (fêmeas ou machos) no ciclo estral. Estudos-piloto na natureza e em cativeiro mostraram que a fase de diestro pode ocorrer com a vagina aberta, um fato que merece ser mais investigado, já que se considera que a abertura vaginal ocorra somente durante a transição da fase proestro-estro. O objetivo deste trabalho é, portanto, o de estudar aspectos dos ritmos reprodutivos infradianos (ciclo estral e gestação) e circadiano (temperatura corporal) em rabos-de-facho, mantidos em cativeiro, alojados individualmente, e pareados com fêmeas e com machos. Nesses grupos são caracterizados os esfregaços e o estado de abertura da vagina, buscando conhecer aspectos da fisiologia reprodutiva, tais como, a idade de maturidade sexual (cap. 1), a relação entre a fase do ciclo estral e o estado vaginal (cap. 2), e as características da citologia esfoliativa durante a gravidez (cap. 3). Os dados da citologia são correlacionados com o padrão comportamental durante o acasalamento, caracterizando a existência de estro pós-parto (cap. 3). Analisa-se ainda a distribuição de todos os nascimentos ocorridos ao longo de dez anos. O ritmo de temperatura corporal das fêmeas é aferido a partir de acompanhamento da temperatura retal com uso de termômetro digital durante 72h (cap. 4). Embora de maneira geral Trinomys yonenagae siga os padrões reprodutivos de outros membros da família Echimyidae, tais como, gestação longa (90d), ninhadas pequenas (média de 2 filhotes) e maturidade sexual tardia (ao redor dos 90d) é possível identificar a influência de co-específicos (dominância entre fêmeas) no ciclo estral. Este ciclo parece ser espontâneo, do tipo poliéstrico, com fases muito curtas de proestro e estro (< 24h). A condição vaginal não é um bom indicativo de atividade reprodutiva (ocorre abertura no diestro e na gravidez); a presença do macho não garante fecundação; também se confirma a ocorrência de estro pós-parto, igualmente breve. O comportamento de acasalamento é elaborado, o que é esperado de espécies com estro curto ou de vida social e subterrânea. A distribuição dos nascimentos não é sazonal, confirmando dados de campo. Quanto ao ritmo de temperatura corporal, ele é circadiano com picos noturnos e com relação positiva de fase com o ritmo de atividade/repouso, o que segue o padrão geral de roedores / Spiny rats are among the most numerous group of mammals in Neotropical rainforests. Trinomys yonenagae (ROCHA, 1995) is an exception because it is colonial, fossorial and inhabits the semiarid Caatinga. The dry environment and the underground and colonial life styles are known to affect reproductive patterns. So it is expected, for example, that social life may influence the estrous cycle especially through the presence of conspecific (females and males). It is considered that vaginal opening occurs only during the estrus. Previous field studies or in captivity have shown the unexpected occurrence of vaginal opening and diestrus, a fact that deserves further investigation. The aim of this work is verify the reproductive infradian rhythms (estrous cycle and pregnancy) and the circadian body temperature rhythm, in T. yonenagae kept individually or in pairs (male-female and female-female) in captivity. In these groups vaginal smears and the presence of the vaginal membrane is studied aiming to characterize aspects of its reproductive life, such as, the age of sexual maturity (chapter 1), the relationship between the vaginal opening and the phase of the estrous cycle (chapter 2), and the smear cytology during pregnancy (chapter 3). The cytological data are correlated with the mating behavioral, characterizing the post-partum estrus (chapter 3). All birth that occurrence during 10 years are analyzed. The body temperature rhythm is measured during 72h by rectal temperature with a digital thermometer (chapter 4). Although Trinomys yonenagae follows the reproductive patterns of other members of Echimyidae, such as prolonged gestation( 90d), small sized litter (mean of 2) and delayed sexual maturity (around 90d), it is possible to identify the influence of conspecifics (female dominance) upon the estrous cycle. This cycle seems to be spontaneous, poliestric, having very short proestrus and estrus phases (< 24h). The vaginal condition is not a good indicative of the reproductive status (vaginal opening may occur during the diestrus phase and the pregnancy); the presence of males does not guarantee pregnancy. We also confirm the occurrence of post-partum estrus, which is also short-lived. The mating behavior is complex, which is expected in species were the duration of estrus is short, or in species of social and subterranean life. The birth distribution is non seasonal, which is in agreement with field data. The body temperature rhythmicity is circadian with peaks at night; and shows a positive phase relationship with the rest/activity rhythm, both cycles follow the pattern known for other nocturnal rodents

A matriz extracelular (MEC) dos tecidos uterinos é altamente remodelada na gestação de camundongos. Os objetivos deste estudo foram avaliar a influência dos hormônios ovarianos estrógeno (E2) e progesterona (P4) sobre a estrutura dos tecidos uterinos de camundongo e a deposição dos proteoglicanos decorim, biglicam, fibromodulim, lumicam, perlecam e versicam nestes tecidos. Para isto, utilizamos um modelo de castração e reposição hormonal, e o ciclo estral como parâmetro fisiológico. Verificamos que, como na gestação, durante o ciclo estral ocorre intensa remodelação na estrutura e na MEC dos tecidos uterinos. Verificamos ainda que a resposta aos hormônios ovarianos é: compartimento-específica; hormônio-específica e molécula-específica. Notável foi a modulação do versicam pelos hormônios ovarianos. P4 induz a deposição de versicam no estroma, enquanto o miométrio responde apenas a E2. A modulação dos proteoglicanos pelos hormônios ovarianos mostra a relevância destas moléculas para a composição de um ambiente uterino propício para o desenvolvimento do embrião. / The extracellular matrix (ECM) of the mouse uterine tissues is highly remodeled during pregnancy. The aim of this study was to demonstrate the influence of estrogen (E2) and progesterone (P4) on the uterine structure and on the deposition of the proteoglycans decorin, biglycan, fibromodulin, lumican, perlecan and versican in these tissues. For that purpose, we used a model of castration e hormone replacement as main strategy, and the estrous cycle as physiological parameter. We verified that, as in pregnancy, during the estrous cycle an intense remodeling occurs on the structure and the ECM of the uterine tissues. We also showed that the response to the ovarian hormones is: compartment-; hormone- and molecule- specific. Noteworthy was the modulation of versican by the hormones: P4 induces the deposition of versican in the stroma, whereas the myometrium responds only to E2. The modulation of proteoglycans by the ovarian hormones indicates the relevance of these molecules for the composition of a proper microenvironment for embryo development.