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51	Imagerie des déclins de fluorescence pour l'étude de la dynamique et des interactions de macromolécules en cellules vivantes Tramier, Marc 27 April 2001 (has links) (PDF) Le but de notre travail est de développer une imagerie des déclins de fluorescence et d'en démontrer les potentialités pour l'étude de la dynamique macromoléculaire et des interactions entre macromolécules en cellules vivantes. Notre approche repose sur la mesure de la corrélation temporelle de photons uniques de fluorescence (TCSPC) simultanément à la détermination de la localisation spatiale (le long d'une ligne) de la région d'émission. Des images monodirectionnelles de déclins de fluorescence ont ainsi été obtenues représentant la cinétique de fluorescence en différentes régions subcellulaires. Nous avons également mis au point la mesure de déclins d'anisotropie de fluorescence provenant d'un petit volume subcellulaire (1 µm3) sous microscope en mode confocal. Les résultats présentés dans ce mémoire démontrent l'intérêt de cette approche technologique pour des problématiques de biologie cellulaire. Le marquage fluorescent endogène de protéines a été réalisé en les fusionant à la GFP ou un de ses variants spectraux. Les interactions protéine-protéine ont été étudiées soit par hétéroFRET en mesurant la diminution de la durée de vie de fluorescence du chromophore donneur, soit par homoFRET en mesurant la cinétique de dépolarisation de la fluorescence. Nous avons mis en évidence (i) la formation d'hétérodimères de p45 du facteur de transcription NF-E2 avec deux partenaires dans différents compartiments subcellulaires par hétéroFRET, et (ii) l'homodimérisation de la thymidine kinase du virus de l'herpès simplex type 1 de façon plus concluante par homoFRET que par hétéroFRET. Par ailleurs, la mesure des déclins d'anisotropie de fluorescence de l'éthidium comme sonde de la dynamique torsionnelle de l'ADN a révélé l'existence d'une très forte restriction de cette dynamique dans la chromatine non perturbée. Les développements supplémentaires de notre système pour une imagerie bi-dimensionnelle puis tri-dimensionnelle sont prometteurs. [SDV:BC] Life Sciences/Cellular Biology microscopie de fluorescence durée de vie de fluorescence anisotropie de fluorescence FLIM cellules vivantes FRET GFP
52	Etude et Imagerie de la polymerisation de l'actine Spitz, Jean-Alexis 08 November 2006 (has links) (PDF) L'objet de l'étude présentée ici est le cytosquelette d'actine. Cet arrangement polymère dynamique est très impliqué à la fois dans la morphologie cellulaire mais aussi dans les phénomènes d'adhérence et de motilité cellulaires. La perturbation de cette dynamique et des fonctions qui lui sont associées est caractéristique de la transformation tumorale, ce qui fait de l'actine une cible pharmacologique anti-cancéreuse.<br />La thématique générale de ce manuscrit est l'étude et l'imagerie de la polymérisation de l'actine. <br />La première partie de ce manuscrit est consacrée au développement et à la validation théorique et expérimentale d'un test de mesure de la polymérisation in vitro de l'actine à partir d'extraits cellulaires. La polymérisation de l'actine est suivie grâce à l'augmentation de l'anisotropie de fluorescence d'un marqueur fluorescent, l'Alexa488, utilisé comme traceur dans les échantillons.<br />La deuxième partie présente le montage et la caractérisation d'un nouveau système d'imagerie de la durée de vie de fluorescence (FLIM) sous microscope par comptage monophotonique ainsi qu'un développement de cet instrument pour faire l'imagerie de l'anisotropie de fluorescence résolu dans le temps (trFAIM). Cet instrument, qui nous a déjà permis de faire l'imagerie de polymères d'actine, ouvre également des perspectives pour de nombreuses autres applications à la fois dans l'imagerie cellulaire (polymérisation de l'actine in vivo, calcium intracellulaire3, ...) mais également dans d'autres thématiques développées au PPSM (cristaux organiques fluorescents, nanolatex, ...).<br />Enfin, le troisième chapitre propose une technologie originale pour faire l'étude in vivo de la polymérisation de l'actine mettant en oeuvre une instrumentation de pointe issue de la physique appliquée des lasers. L'emploi d'un laser femtoseconde permet la nano-dissection, dans une cellule vivante, d'une fibre de stress d'actine dont on peut ensuite étudier le rétablissement. [CHIM:OTHE] Chemical Sciences/Other [SDV:BC] Life Sciences/Cellular Biology cytosquelette actine polymerisation de l'actine anisotropie de fluorescence FLIM trFAIM nano-dissection par laser femtoseconde
53	Microscopie de fluorescence résolue en temps et en polarisation pour le suivi d'interactions protéiques en neurobiologie Devauges, Viviane 15 December 2011 (has links) (PDF) Le suivi des interactions entre protéines, localisées à la membrane plasmique ou à l'intérieur de cellules, a été réalisé au cours de cette thèse par imagerie de fluorescence et par l'analyse de processus dits de FRET (Forster Resonance Energy Transfer). Pour quantifier le FRET entre nos protéines d'intérêt, nous avons choisi le contraste de durée de vie de fluorescence car cette méthode est indépendante de la concentration et de l'intensité de fluorescence. Afin d'obtenir une résolution suffisante pour des problématiques neurobiologiques, un microscope TIRFLIM (Total Internal Reflection Fluorescence Lifetime Imaging Microscopy) avait préalablement été développé. Celui-ci nous permet de faire de l'imagerie en plein champ avec une résolution axiale sub-longueur d'onde. Ce dispositif a été calibré et optimisé au cours de cette thèse pour répondre au mieux à des problématiques biologiques. Différentes approches ont ainsi été testées dans le but de calibrer la profondeur de pénétration de l'onde évanescente. Des surfaces plasmoniques ont entre autres été utilisées pour augmenter la sélectivité axiale du montage. Notre microscope a été dédié à l'étude de l'effet du cholestérol sur l'interaction entre la protéine précurseur de l'amyloïde APP, protéine transmembranaire impliquée dans la maladie d'Alzheimer et une de ses enzymes de clivage BACE1. Nous avons ainsi effectué un suivi dynamique de l'effet du cholestérol sur l'interaction entre APP et BACE1 dans des cellules HEK-293 et dans des cultures primaires de neurones d'hippocampe d'embryons de rat, de la membrane plasmique à l'intérieur des cellules grâce à notre dispositif TIRFLIM. La mesure d'anisotropie de fluorescence résolue en temps a également été implémentée sur notre montage. Ces mesures résolues en temps et en polarisation ont permis de mesurer le temps de corrélation rotationnelle de fluorophores et de mettre en évidence de manière qualitative différents niveaux d'homodimérisation de protéines impliquées dans la maladie d'Alzheimer. TIRF FLIM FRET Surfaces plasmoniques Interactions protéiques Neurobiologie Anisotropie de fluorescence HomoFRET
54	Homeostasis and volume regulation in the Plasmodium falciparum infected red blood cell Mauritz, Jakob Martin Andreas January 2011 (has links) The thesis reports on the application of advanced microanalytical techniques to answer a fundamental open question on the homeostasis of Plasmodium falciparum infected red blood cells, namely how infected cells retain their integrity for the duration of the parasite asexual reproduction cycle. The volume and shape changes of infected cells were measured and characterized at femtolitre resolution throughout the intraerythrocytic cycle using confocal microscopy. Fluorescence lifetime imaging and electron probe X-ray microanalysis were applied for the quantification of intracellular haemoglobin and electrolyte concentrations. The cytomechanical properties of uninfected and infected red cells were studied using a novel optical stretcher device, which enabled individual cells to be trapped and manipulated optomechanically in microfluidic channels. Combined, these methods offered a unique insight into the homeostatic and rheological behaviour of malaria-infected red cells. The results were analysed by comparison with predictions from a detailed physiological model of the homeostasis and volume regulation of infected cells, providing broad support to the view that excess haemoglobin consumptions by the parasite was necessary for the integrity of infected cells (the colloidosmotic hypothesis). The dissertation is introduced with an overview of malaria, red blood cells homeostasis and the changes induced by Plasmodium falciparum infection. In the following, this description is extended to an in-depth theoretical analysis of the infected red blood cell homeostasis, from which the need to characterise certain parameters arises. The subsequent chapters address sequentially the assessment of the haemoglobin and electrolyte concentration, cell shape and volume changes and ultimately alterations in cell elasticity. The experimental part is complemented with a comparison of the resulting data to the predictions from the theoretical analysis and an outlook on future work. 616.9883
55	Hodnocení doby života a změn konfokální mikroskopií / Realisation of method for fluorescence lifetime and spectral changes evaluation using advanced confocal microscopy techniques Rúbal, Radek January 2015 (has links) Content is focused on fluorescence lifetime imaging techniques. Fluorescence lifetime is computed from data acquired with using of Leica TCS SP8X confocal microscope sequential scanning. Algorithms and software for the computation, imaging and analysis of fluorescence lifetime is presented. Software is allowing both 2D and 3D imaging of fluorescence lifetime. Techniques are used for fluorescence lifetime imaging of mesenchymal cells and fibroblasts tainted with SPIO-Rhodamin complex.
56	Développement instrumental pour la microscopie de fluorescence résolue en temps: applications biomédicales Blandin, Pierre 07 November 2008 (has links) (PDF) Pour certaines problématiques biomédicales, notamment en neurobiologie, l'imagerie des échantillons exige des résolutions spatiale et temporelle élevées, et seules des techniques de microscopie optique innovantes vont permettre d'imager la cellule dans des conditions physiologiques. Pour répondre à ces contraintes nous avons développé en intégralité un dispositif de microscopie de fluorescence en réflexion totale interne et résolue en temps. En effet, l'imagerie de fluorescence résolue en temps (FLIM) permet, en complément des informations de localisation et de topologie apportées par la microscopie conventionnelle, une analyse dynamique de processus moléculaires et métaboliques au sein des cellules. Associée à la technique de microscopie en réflexion totale interne, qui confère au système d'imagerie une résolution axiale sub-longueur d'onde tout en acquérant des images en champ large, la technique FLIM permet d'analyser l'activité membranaire des cellules en s'affranchissant de la fluorescence des autres entités de la cellule.<br />Ce travail s'est articulé autour de trois axes principaux : l'étude et le développement d'un dispositif d'excitation de la fluorescence basé sur un oscillateur laser solide picoseconde dont le spectre est élargi par effets non linéaires dans des fibres optiques microstructurées ; le développement et la caractérisation d'un dispositif de microscopie de fluorescence par onde évanescente (TIRF) couplé à une détection résolue en temps en plein champ ; et l'application de ce dispositif à l'étude d'un précurseur membranaire du peptide amyloïde impliqué dans la maladie d'Alzheimer. [PHYS:PHYS] Physics/Physics [PHYS:PHYS] Physique/Physique microscopie de fluorescence laser impulsionnel génération de supercontinuum TIRF FLIM
57	Fauxtopia Kampf, Raymond William 01 January 2004 (has links) To all who come to this fictitious place:Welcome.Fauxtopia is your land. Here, age relives distorted memories of the past, and here, youth may savor the challenge of trying to understand the present. Fauxtopia is made up of the ideals, the dreams and the fuzzy facts which have re-created reality... with the hope that it will be a source of edutainment for all the world.Ray KampfFauxtopia DedicationApril 1st, 2004 swindle subterfuge story stooge stereotype stratagem spurious spiel soft-soap snow job simulated aspersion adventure artificial anecdote allegory advertising assumptions belie bluff bogus brainwash calumniation canard cheat chronicle cliche cliffhanger con man conceal counterfeit crooked deal deceit deception disguise dishonest distort double cross ersatz evangelism exaggerate fabrication facade fake falsehood fantasy fib fiction flim flam fool folktale forgery frame up fraudulence fudge gag grifter guile guise history hoax hokey hype hyperbole knavery legend likeness make believe malign mask memoir misrepresentation mockery myth parable parody performance perjury phony placebo player ploy potboiler prevarication propaganda publicity puppet put-on quasi record reproduction romance routine ruse saga scam shtick semblance sequel show serial synthetic tall story trick unnatural untruth veneer verisimilitude white lie whopper Disney politics hyper reality theme park entertainment Art and Design Arts and Humanities

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