A crescente introdução de variados poluentes em matrizes ambientais de áreas urbanas causa prejuízos ao ecossistema e dificulta as medidas de controle ambiental. Essas substâncias, após liberadas, se distribuem e interagem de acordo com suas características e as do meio receptor. Indicadores precoces de contaminação permitem a adoção de medidas preventivas aos danos causados pela poluição ambiental. O presente estudo teve por objetivo investigar a ação de substâncias genotóxicas em diferentes frações de material particulado atmosférico e solos, analisando a presença de contaminantes orgânicos e inorgânicos. Para este fim, foi empregado o ensaio Salmonella/microssoma em amostras de áreas urbanas caracterizadas como urbano-residencial e urbano-industrial, na cidade de Rio Grande, RS. Amostras de material particulado atmosférico (PTS e PM2,5) e de solo superficial (composição granulométrica total e fração <0,5mm) foram preparadas por diferentes métodos de extração. Este estudo apresenta uma primeira caracterização de PM2,5, através do ensaio Salmonella/microssoma, no Brasil. O estudo de extratos orgânicos e aquosos de PTS e PM2,5 evidenciou a presença de compostos metálicos na fração aquosa, potencialmente biodisponíveis, bem como maior risco de exposição associado à fração de compostos orgânicos das partículas finas. A mutagênese foi detectada, mesmo em amostras de particulados que se encontravam em conformidade com os parâmetros de qualidade recomendados. A análise das extrações ácidas dos solos mostrou que as chuvas da região podem atuar como rota de contaminação ambiental, com risco adicional na disponibilização de substâncias tóxicas nos eventos de precipitação ácida. O estudo mostrou que o emprego do solo com mínima alteração é mais apropriado para os ensaios de mutagênese. A utilização conjunta de diferentes métodos de extração de compostos orgânicos e inorgânicos permite uma avaliação integradora da qualidade de matrizes ambientais complexas, favorecendo a adoção de medidas preventivas para a proteção do ecossistema. / The increasing introduction of different pollutants into the environmental matrices of urban areas damages the ecosystem and makes it difficult to perform environmental control. After these substances are released, they are distributed and interact according to their own characteristics and those of the receiving environment. Early indicators of contamination allow measures to be adopted to prevent damage caused by environmental pollution. The purpose of this study was to investigate the action of genotoxic substances in different fractions of atmospheric particulate matter and soils, analyzing the presence of organic and inorganic contaminants. For this, the Salmonella/microsome assay was used on samples of urban areas characterized as urban-residential and urban-industrial, in the city of Rio Grande, RS. Samples of atmospheric particulate matter (TSP and PM2.5) and of surface soil (total grain size composition and fraction <0.5mm) were prepared using different extraction methods. This study presents a first characterization of PM2.5 in Brazil, through the Salmonella/microsome assay. The study of organic and aqueous extracts of TSP and PM2.5 showed the presence of potentially bioavailable metallic compounds in the aqueous fraction, as well as a greater risk of exposure associated with the fraction of organic compounds of the fine particles. Mutagenesis was detected even in samples of particulates that were in accordance the recommended quality parameters. Analysis of acid extractions from the soils showed that rainfall in the region may act as an environmental contamination route, with an additional risk of making toxic substances available in acid precipitation events. The study showed that the use of minimally altered soil is more appropriate for mutagenesis assays. The joint use of different methods for organic and inorganic compound extractions allows an integrated evaluation of the quality of complex environmental matrices, favoring the adoption of preventive measures to protect the ecosystem.

O estudo do processo da peroxidação de lipídios tem aumentado nos últimos anos, principalmente devido à implicação dos hidroperóxidos de lipídios (LOOH) em diversos processos patológicos. A decomposição destes LOOH é capaz de gerar subprodutos capazes de promover danos em biomoléculas, incluindo proteínas e DNA. No presente trabalho, utilizando hidroperóxidos de ácido linoléico isotopicamente marcado com átomo de oxigênio-18 (LA18O18OH), fomos capazes de demonstrar que estas moléculas gerararam oxigênio singlete marcado [18(1O2)] em células em cultura. A detecção de tal espécie foi possível através da utilização de uma nova metodologia utilizando um derivado antracenico. Para este propósito foi utilizado o derivado de antraceno 3,3\'-(9,10-antracenodiil) bisacrilato (DADB), cujo produto especifico da reação com o 1O2 (o endoperóxido do DADB DADBO2) do pode ser facilmente detectado por HPLC-MS/MS. De forma a expandir a compreensão dos efeitos tóxicos desses LOOH, investigamos o efeito destes compostos gerados intracelularmente. Para tal, foi utilizado o Rosa bengala (RB), um fotosensibilizador que tem afinidade por espaços apolares como membranas e lisossomos. A fotosenssibilização deste composto foi capaz de induzir a morte celular, e esta morte estaria relacionada a uma maior formação de 1O2 e a um maior acumulo de peróxidos. Nestes estudos foi possível demonstrar que carotenóides e sistemas antioxidantes dependentes de glutationa foram capazes de proteger contra os efeitos tóxicos da fotosensibilização na presença de RB. Adicionalmente foram avaliados os efeitos da hemoglobina (Hb) e do hidroperóxido do ácido linoléico (LAOOH) em uma série de parâmetros toxicológicos, como citotoxicidade, estado redox, a peroxidação lipídica e dano ao DNA. Nós demonstramos que a pré-incubação das células com Hb e sua posterior exposição à LAOOH (Hb + LAOOH) levou a um aumento na morte celular, a oxidação do DCFH, formação de malonaldeído e fragmentação do DNA e que esses efeitos estavam relacionados com o grupo peróxido e ao heme presentes na Hb. Foi demonstrado que as células incubadas com LAOOH e Hb apresentaram um nível maior das lesões de DNA; 8-oxo-7,8-diidro-2 \'desoxiguanosina e 1,N2-etheno-2\'-desoxiguanosina. Além disso, as incubações com Hb levaram a um aumento nos níveis de ferro intracelular, e este alto nível de ferro correlacionada com a oxidação do DNA, avaliadas através da medida de sitios EndoIII e Fpg sensíveis. Nossos resultados comprovam que os LAOOHs apresentaram efeito citotóxico e genotóxico, mesmo em concentrações muito baixas, podendo contribuir para o desencadeamento de processos patologicos como o câncer e doenças cardiovasculares e neurodegenerativas. / The study of the process of lipid peroxidation has increased in recent years, mainly due to the involvement of lipid hydroperoxide (LOOH) in a series of pathological processes. The decomposition of LOOH is able to generate products that can promote damage to biomolecules, including proteins and DNA. In the present work, using linoleic acid hydroperoxide isotopically labeled with 18O2 (LA18O18OH), we demonstrate that these molecules were able to generate labeled singlet oxygen [18(1O2)] in cultured cells. The detection of such species was possible using a new methodology using an anthracene derivative .For this purpose we used the anthracene derivative of 3,3\'-(9,10-antracendiil) bisacrilate (DADB), whose specific reaction product with 1O2 (DADB endoperoxide DADBO2) can be easily detected by HPLC-MS/MS. In order to expand the understanding of the toxic effects of LOOH, we investigated the effect of these compounds generated intracellularly. For this porpoise, we used Rose Bengal (RB), a photosensitizer that has affinity for apolar spaces such as membranes and lysosomes. The photosensitization of this compound was able to induce cell death, and this death was related to increased formation of 1O2 and a higher accumulation of peroxides. In these studies we have shown that carotenoids and glutathione-dependent antioxidant systems were capable of protecting against the toxic effects of photosensitization in the presence of RB. Additionally, we evaluated the effects of hemoglobin (Hb) and linoleic acid hydroperoxide (LAOOH) in a series of toxicological endpoints such as cytotoxicity, redox status, lipid peroxidation and DNA damage. We demonstrated that preincubation of cells with Hb and its subsequent exposure to LAOOH (Hb + LAOOH) led to an increase in cell death, DCFH oxidation, formation of malonaldehyde and DNA fragmentation, and that these effects were related to the peroxide and the heme group. It was demonstrated that cells incubated with LAOOH and Hb showed a higher level of the DNA lesions, 8-oxo-7,8-dihydro-2\'deoxyguanosine and 1,N2-etheno-2\'-deoxyguanosine. Furthermore, incubations with Hb led to an increase in intracellular iron levels, and this high level of iron correlates with the oxidation of DNA, measured as EndoIII and Fpg-sensitive sites. Our results show that the LOOHs showed cytotoxic and genotoxic, even at very low concentrations and may contribute to the onset of chronic malignancies like cancer, cardiovascular and neurodegenerative diseases.

This study aims to evaluate the effect of a drug in order to avoid the appearance of side effects of human pulp fibroblasts. The groups were divided into: CTR with culture medium with fibroblasts; CL, FTL only; AA, Aloe vera with distilled water; AL, Aloe vera with distilled water and FTL; HA, calcium hydroxide P.A. With distilled water; HL, calcium hydroxide P.A. With distilled water and FTL; HAA, calcium hydroxide P.A. With Aloe vera and distilled water; HAL, calcium hydroxide P.A. With Aloe vera, distilled water and FTL. Cytotoxicity evaluation was performed with the MTT reagent at 24, 48 and 72 h, for the evaluation of genotoxicity the micronucleus test was used in 24 h. At 24 h, the CL group presented a greater media of cellular viability, and the HA showed lower mean but stimulated greater number of cell division. At 48 h, the CL group presented a higher medium of cellular viability of high genotoxicity, and the HAL showed lower mean. The AL group showed a higher percentage of surviving cells in 72 h with statistic different from the HA and HL groups (p <0.05). (P <0.001) and to the AA group (p <0.01). The AL group exhibited high genotoxicity with significant results when the CTR group (p <0.001) and the AA group (p <0.01). It is concluded that Aloe vera allowed a greater cell viability in human pulp fibroblasts in the presence of calcium hydroxide, with the increase of the genotoxicity increase in this association. Calcium hydroxide and an FTL showed higher cytotoxicity. / Este estudo objetiva avaliar in vitro o efeito da Aloe vera associada a medicamento de uso endodôntico combinados ou não a FTL em fibroblastos pulpares humanos FP6. Os grupos foram divididos em: CTR com meio de cultura com fibroblastos; CL, apenas FTL; AA, Aloe vera com água destilada; AL, Aloe vera com água destilada e FTL; HA, hidróxido de cálcio P.A. com água destilada; HL, hidróxido de cálcio P.A. com água destilada e FTL; HAA, hidróxido de cálcio P.A. com Aloe vera e água destilada; HAL, hidróxido de cálcio P.A. com Aloe vera, água destilada e FTL. A avaliação da citotoxicidade sucedeu-se com o reagente MTT em 24, 48 e 72 h e, para avaliação da genotoxicidade utilizou-se o teste de micronúcleo em 24 h. Em 24 h, o grupo CL apresentou a maior média de viabilidade celular, e o HA mostrou menor média mas estimulou maior número de divisão celular. Em 48 h, o grupo CL apresentou a maior média de viabilidade celular apesar da elevada genotoxicidade, e o HAL mostrou menor média. O grupo AL demonstrou maior percentual de células sobreviventes em 72 h com diferença estatística dos grupos HA e HL (p<0,05). O grupo AL exibiu alta genotoxicidade tendo resultados significantes quando em comparação com o grupo CTR (p<0,001) e ao grupo AA (p<0,01). Conclui-se que a Aloe vera permitiu uma maior viabilidade celular em fibroblastos pulpares humanos na presença do hidróxido de cálcio, contudo houve aumento da genotoxicidade nessa associação. Já o hidróxido de cálcio e a FTL apresentaram maior citotoxicidade.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:16:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Carol pdf.pdf: 1930051 bytes, checksum: b9c82e79bb7e104735c36e05b2702150 (MD5) Previous issue date: 2008-02-25 / The plant Duguetia furfuracea (St. Hil.) Benth and Hook. f. (1862), belongs to the family Annonaceae, is popularly known as sofre&#8208;do&#8208;rim&#8208;quem&#8208;quer, araticum&#8208;do&#8208;cerrado and ata&#8208;do&#8208;mato. This plant occurres in several Brazilian states, as Amazonas, Bahia, Distrito Federal, Goiás, Minas Gerais, Mato Grosso, Mato Grosso do Sul and São Paulo. It is commonly used by people as anti&#8208;rheumatic and to cure renal colic. Previous studies have described therapeutic activity of this plant with trypanocidal, antiplasmodial and antiprotozoal effects. Due to the large utilization of this plant by the local people, the present work aimed to evaluate the genotoxic/mutagenic, antigenotoxic/antimutagenic and cytotoxic activities of lyophilized leaf extract of D. furfuracea by the lisogenic induction test (Inductest) and the mice bone marrow micronucleus assay (Micronucleus Test). The lisogenic induction test was performed according Moreau et al., (1976) using E. coli WP2s(&#955;) and RJF013 strains. To evaluate the genotoxic and toxic activities, the doses employed were 1 mg, 2 mg, 5 mg e 10 mg, while to evaluate the antigenotoxic action the doses were of 0,5 mg, 1 mg, 2 mg, 5 mg e 10 mg co&#8208;treated with 0,5 &#956;g de mitomycin C. Micronucleus test in the bone marrow of mice was performed according to Schmid (1975). To evaluate mutagenic activity, mice were treated with three different doses of plant extract (100, 200 and 300 mg/Kg body weight), to evaluate antimutagenic activity, mice were treated with the same doses co&#8208;administered with 4 mg/kg of mitomycin C. The genotoxic action was evaluated by the frequency of micronucleated polychromatic erythrocytes (MNPCE) and cytotoxicity was evaluated by the polychromatic and normochromatic erythrocytes ratio (PCE/NCE). The results obtained from the evaluation of mutagenicity of this plant showed that the extract of D. Furfuracea didn t increase significantly (p>0.05) the frequency of MNPCE compared to negative control. Cytotoxicity was evident in all applied doses (p<0.05). Concerning antimutagenicity, all doses of extract reduced significantly the frequency of MNPCE compared to the positive control group (p<0.05). In both tests, the results obtained demonstrated that the extract of D. furfuracea presented cytotoxicity; however, it didn t show genotoxic or mutagenic effects in bacteria and mice bone marrow respectively. In the other hand, it was observed a antigenotoxic and antimutagenic action. / A planta Duguetia furfuracea (St. Hil.) Benth e Hook. f. (1862), pertence à família Annonaceae, é conhecida popularmente como sofre&#8208;do&#8208;rim&#8208;quem&#8208;quer, araticum&#8208;do&#8208;cerrado e ata&#8208;do&#8208;mato. Esta planta ocorre em vários estados brasileiros, como Amazonas, Bahia, Distrito Federal, Goiás, Minas Gerais, Mato Grosso, Mato Grosso do Sul e São Paulo. É comumente utilizada pela população como anti&#8208;reumática e para combater cólicas renais. Estudos anteriores têm descrito a atividade terapêutica da planta com ação tripanomicida, antiprotozoárica e antiplasmódica. Devido à grande utilização da planta D. furfuracea pela população, o presente trabalho teve como objetivo avaliar as atividades genotóxica/mutagênica, antigenotóxica/antimutagênica e citotóxica do extrato liofilizado de folhas de D. furfuracea pelo teste de indução do profago &#955; (Induteste) em cepas de E. coli e pelo teste do micronúcleo em medula óssea de camundongos (Teste do Micronúcleo). O teste de indução do profago &#955; foi realizado de acordo com Moreau et al. (1976), utilizando as cepas de E. coli WP2s(&#955;) e RJF013. Para a avaliação das atividades genotóxica e tóxica foram empregadas as doses de 1 mg, 2 mg, 5 mg e 10 mg, enquanto que na avaliação da ação antigenotóxica foram testadas as doses de 0,5 mg, 1 mg, 2 mg, 5 mg e 10 mg co&#8208;tratadas com 0,5 &#956;g de mitomicina C. O teste do micronúcleo em medula óssea de camundongos foi realizado de acordo com a metodologia de Schmid (1975). Para a avaliação da atividade mutagênica, os animais foram tratados com três diferentes doses do extrato da planta (100, 200 e 300 mg/Kg p.c.), enquanto que para a avaliação da atividade antimutagênica foram administradas as mesmas doses (100, 200 e 300 mg/Kg p.c.) concomitantemente de uma dose de 4 mg/Kg de mitomicina C. A genotoxicidade foi avaliada pela freqüência de eritrócitos policromáticos micronucleados (EPCMN) e a citotoxicidade foi analisada pela razão eritrócitos policromáticos e normocromáticos (EPC/ENC). Os resultados obtidos na avaliação da mutagenicidade mostraram que todas as doses do extrato de D. furfuracea não aumentaram significativamente o número de EPCMN (p>0,05), quando comparados com o grupo controle negativo. A citotoxicidade foi evidente em todas as doses testadas (p<0,05). Em relação à antimutagenicidade, todas as doses administradas reduziram significativamente a freqüência de EPCMN, em relação ao grupo controle positivo (p<0,05). Em ambos os testes, os resultados obtidos mostraram&#8208;se concordantes, nos quais o extrato de D. furfuracea apresentou atividade citotóxica; porém, não demonstrou atividade genotóxica em bactérias e ação mutagênica em camundongos. Por outro lado, foi observada ação antigenotóxica e antimutagênica.

Submitted by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2015-01-29T17:22:15Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Dissertação - Francyelli Mariana dos Santos Mello - 2014.pdf: 1908256 bytes, checksum: 0b0b96161a9770cff17f951fe907cadc (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2015-01-29T17:43:57Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Dissertação - Francyelli Mariana dos Santos Mello - 2014.pdf: 1908256 bytes, checksum: 0b0b96161a9770cff17f951fe907cadc (MD5) / Made available in DSpace on 2015-01-29T17:43:58Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Dissertação - Francyelli Mariana dos Santos Mello - 2014.pdf: 1908256 bytes, checksum: 0b0b96161a9770cff17f951fe907cadc (MD5) Previous issue date: 2014-03-13 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG / Ruthenium complexes represent a new alternative anticancer chemotherapeutics, with activity against several types of cancer, including those resistant to cisplatin, low toxicity and selectivity for tumor cells. The new amino acids/ruthenium(II) complexes (RuAA) w ere tested against Ehrlich ascitic tumor (TAE) cells, murino mammary carcinoma, in vitro and in vivo . The concentration that inhibits 50% of cell viability (IC 50 ) was determined by MTT assay to TAE and L929 cells. Based on the values of IC50 value was determined selective potential of RuAA and selected two complexes most promising, estimated the LD50 (median lethal dose). The toxicological profile of RuMet and RuTrp was determined by acute oral toxicity following the class method, hippocratic screening, and determination of the genotoxic potential evaluated by the comet assay. The effectiveness of the antitumor potential of RuMet and RuTrp was established by the percentage of inhibition of tumor growth and increased survival in vivo after 24 hours of inoculation of TAE. Swiss mice were treated at doses of 2 and 6 mg/kg/day v.ip for 7 days. Hippocratic screening, assessment the viability of TAE cells after treatment, and hematological and biochemical parameters also were performed. Complexes RuAA are cytotoxic to TAE cells in vitro with IC50 value ranging from 8.70 to 90.41 µM. RuMet and RuTrp complexes showed selective and potent for tumor cells. The estimated in vitro LD50 for RuMet and RuTrp were higher than 1000 mg/kg, and in vivo these complexes have low toxicity and genotoxicity. RuMet and RuTrp complexes showed moderate to high antitumor activity compared to the vehicle group, with increased median survival time (from 23.6 to 27.4 days) and percentage increase in survival (from 31 to 52%). RuMet and RuTrp increased the percentage of cells killed by apoptosis initial. There were no signs of toxicity or changes in the behavior of animals. Hematological parameters showed alterations in platelet count at doses of 6 mg/kg/day complexes of RuMet and RuTrp. The dosage of lactate dehydrogenase showed a change in the assessment of biochemical parameters. Complexes of RuMet and RuTrp are efficient, selective and potent for ascitic tumor cells presenting in vitro cytotoxicity and in vivo antitumor activity, with increased survival time, with low toxicity and genotoxicity. / Complexos de rutênio representam uma nova alternativa de quimioterápicos para o tratamento do câncer, com atividade em vários tipos de tumores, inclusive os resistentes a cisplatina, baixa toxicidade e seletividade para as células tumorais. Novos complexos de rutênio(II)/aminoácido (RuAA) foram testados contra células do tumor ascítico de Ehrlich (TAE), um carcinoma de mama murino, in vitro e in vivo. A concentração que inibe 50% o crescimento celular (IC 50 ) foi determinada pelo teste de MTT para as células de TAE e L929, fibroblasto murino. Com base nos valores de IC50 foi determinado o potencial seletivo dos complexos de RuAA e selecionados dois complexos de RuAA, denominados RuMet e RuTrp, mais promissores e a DL50 (dose letal mediana) foi estimada in vitro. O perfil tóxico dos complexos RuMet e RuTrp foi determinado pela toxicidade oral aguda pelo método de classe, screening hipocrático e a determinação do potencial genotóxico foi avaliada pelo ensaio cometa. A eficácia antitumoral dos complexos RuMet e RuTrp foi estabelecida pelo percentual de inibição do crescimento tumoral e o aumento da sobrevida in vivo após 24 h de inoculação do TAE. Camundongos Swiss foram tratados nas doses de 2 e 6 mg/Kg/dia, via intraperitoneal por 7 dias. Screening hipocrático, avaliação da viabilidade das células do TAE após tratamento, avaliação dos parâmetros hematológicos e bioquímicos também foram realizados. Os complexos de RuAA foram citotóxicos para as células do TAE in vitro com valor de IC 50 variando de 8,70 a 90,41µM. Os complexos de RuMet e RuTrp apresentaram potencial seletivo para as células do TAE. A estimativa in vitro de DL50 para os complexos RuMet e RuTrp foram superiores a 1000 mg/Kg, e in vivo estes complexos apresentaram baixa toxicidade e genotoxicidade. Os complexos RuMet e RuTrp apresentaram atividade antitumoral moderada a elevada em relação ao grupo veículo, com aumento do tempo médio de sobrevida (de 23,6 a 27,4 dias) e aumento percentua l de sobrevida (de 31 a 52%). Os complexos RuMet e RuTrp aumentaram o percentual de células de TAE mortas por apoptose. Não foram observados sinais de toxicidade ou alteração no comportamento dos animais. Parâmetros hematológicos apresentaram alteração na contagem de plaquetas nas doses de 6 mg/Kg/dia dos complexos de RuMet e RuTrp. A dosagem de lactato desidrogenase apresentou alteração na avaliação bioquímica. Os complexos de RuMet e RuTrp são eficientes, seletivos e potentes para células do tumor ascítico de Ehrlich apresentando citotoxicidade in vitro e atividade antitumoral in vivo, com aumento do tempo de sobrevida, com baixa toxicidade e genotoxicidade.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-03-30T12:51:22Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Cínthia Aparecida da Silva - 2014.pdf: 2057414 bytes, checksum: 3a65cd2a7eaaff35dc8c70ad7c422050 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-03-30T15:40:29Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Cínthia Aparecida da Silva - 2014.pdf: 2057414 bytes, checksum: 3a65cd2a7eaaff35dc8c70ad7c422050 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-30T15:40:29Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Cínthia Aparecida da Silva - 2014.pdf: 2057414 bytes, checksum: 3a65cd2a7eaaff35dc8c70ad7c422050 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2014-02-18 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG / The species Eugenia uniflora L. belongs to the Myrtaceae family and is known as “pitangueira”. It is characterized by small fruit trees that have great therapeutic potential. The leaves of E. uniflora are rich in hydrolyzable tannins, and the ellagitannin oenothein B has been studied for its remarkable antitumor activity, representing a possibility for the treatment of some cancers. However, there is a need for evaluation of possible mutagenic, genotoxic and toxic effects, which may result in damage to the human body. Three doses of oenoteina B (25, 50 and 75 mg/kg) were used in the micronucleus test, and the same doses along with mitomycin C. Five doses of oenoteina B were used in SOS inductest (10, 20, 50, 100 and 200 μg/plate) to evaluate the possible genotoxic or antigenotoxic action and examining the cytotoxic or anticytotoxic activity of this tannin. Our data showed that oenoteina B did not exhibit genotoxic effects, and furthermore, this ellagitannin demonstrated protective action against micronucleus formation induced by mitomycin C in mice. The possible use of oenoteina B as a chemopreventive and/or therapeutic agent still needs further studies using different tests for genotoxicity, applied to longterm, pre- and post-treatments, to investigate the mechanism of action of this compound. / A espécie Eugenia uniflora L. pertencente à família Myrtaceae, conhecida por pitangueira, é caracterizada por árvores frutíferas de pequeno porte que possuem grande potencial terapêutico. As folhas de E. uniflora são ricas em taninos hidrolisáveis, sendo que o elagitanino oenoteina B tem sido estudado por apresentar notável atividade antitumoral, representando uma possibilidade para o tratamento de alguns tipos de câncer. Contudo, há a necessidade de uma avaliação dos possíveis efeitos mutagênicos, genotóxicos e tóxicos, que podem provocar no organismo humano. Foi realizado o teste do micronúcleo, no qual foram utilizadas três doses do tanino (25, 50 e 75 mg/Kg) e as mesmas doses juntamente com mitomicina C. Também foram utilizados diferentes doses de oenoteina B no induteste SOS (10, 20, 50, 100 e 200 μg/placa) com objetivo de avaliar a possível ação genotóxica ou antigenotóxica e ainda analisar a atividade citotóxica ou anticitotóxica deste tanino. Nossos dados mostraram que oenoteina B não exibe efeitos genotóxicos e, além disso, este elagitanino demonstra ação protetora contra a formação de micronúcleos, induzidos por mitomicina C em camundongos. O possível uso de oenoteina B como um agente quimiopreventivo e/ou terapêutico ainda necessita de mais estudos usando diferentes testes de genotoxicidade, aplicados em longo prazo, além de ensaios com pré e póstratamentos, para a investigação do mecanismo de ação deste composto.

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:30:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao_Luciana_Conceicao.pdf: 1166387 bytes, checksum: 74e97c6a817eb6fb90d26b94051d237d (MD5) Previous issue date: 2012-12-20 / The application of a material after periodontal surgery is recommended to reduce postoperative bleeding, to protect the wound area and to avoid the formation of excessive granulation tissue. The current trend is the development of new biomaterials eugenol-free for surgical application. The aim of this study was to develop and characterize a periodontal dressing based on photopolymerizable methacrylate monomers. For this purpose, a screening was made to determine the best formulation based on the ease of handling and the use of Exothane 8 , camphorquinone, silica and quartz particles. Three groups were tested: Gperio (Group of periodontal dressing Periobond®, Dentsply); Gbar (Group of periodontal dressing Barricaid®, Caulk), which served as the reference group and Gexp (Group of experimental material). The physical-mechanical performance of the experimental composite and the commercial references Periobond® and Barricaid® (control group) were tested using in vitro tests of tensile strength (n = 15) and sorption and solubility (n = 10). Cytotoxicity (MTT colorimetric assay) and genotoxicity by micronuclei (MN) tests were performed in a cell lineage of mouse fibroblasts 3T3/NIH, in triplicate, in order to characterize the biological response of these materials. Microbiological test assess the amount of viable bacteria of Enterococcus faecalis anaerobic and aerobic and total microorganisms. Data were subjected to statistical analysis based on the model of normal distribution and equal variance One-Way ANOVA, considering the value of P<0.05 as statistically significant. There were no statistically significant differences between the median values of Gexp and Gbar, for ultimate tensile strength. Regarding the sorption there was statistical difference between Gperio and Gexp and between Gperio and Gbar (P=<0.001). There was no difference when comparing Gbar and Gexp. The solubility showed no statistical difference between groups. In general, the cytotoxic effects of the materials were time dependent according to eluate extraction periods (24h, 48h and 7 days). No statistical difference at 24h between Gexp and Gperio. At 72h, differences were observed between Gexp and Gperio (P<0.001) with Gexp showing the best results. Similar results were seen between Gbar and Gperio (P<0.001). At 7 days, statistical difference was observed between Gbar and Gperio (P<0.05). In genotoxicity test no difference was found among the groups. In microbiological assay no statistical difference was found for E. faecalis anaerobic, E. faecalis aerobic and for total microorganisms. We conclude that Gexp experienced similar behavior to the commercial samples and can be possibly used as a periodontal dressing; however, more studies are needed at pre-clinical and clinical levels / A aplicação de um material após a cirurgia periodontal é recomendada para reduzir o sangramento pós-operatório, proteger a área da ferida e evitar a formação excessiva de tecido de granulação. A tendência atual é o desenvolvimento de novos biomateriais para aplicação cirúrgica livres de eugenol. O objetivo do presente estudo foi desenvolver e caracterizar um material cirúrgico periodontal baseado em monômeros metacrilatos fotopolimerizável com formação de polímero de alta flexibilidade. Para isso, foi realizado um screening para se determinar a melhor fórmula baseada na facilidade de manuseio do material e considerando a utilização de Exothane 8 , canforoquinona, e partículas de sílica e quartzo. Três grupos foram testados; Gperio (Grupo cimento periodontal Periobond®, Dentsply); Gbar (Grupo cimento periodontal Barricaid®, Caulk, que serviu como grupo de referência comercial) e Gexp (Grupo do material experimental). Foi avaliado o desempenho físico-mecânico do compósito experimental e das referências comerciais: Periobond® e Barricaid® (grupos controle), através dos ensaios in vitro de resistência à tração (n=15) e sorção e solubilidade (n=10). Testes de citotoxidade (ensaio colorimétrico com MTT) e de genotoxicidade através do ensaio de micronúcleos (MN) em linhagem celular de fibroblastos de camundongo 3T3/NIH, foram realizados em triplicata, com o intuito de caracterizar a resposta biológica desses materiais. Teste microbiológico para avaliar a quantidade de bactérias viáveis de Enterococcus faecalis anaeróbicos, aeróbicos e micro-organismos totais. Os dados obtidos foram submetidos ao método estatístico baseado no modelo de distribuição normal e igualdade de variância (ANOVA 1 via), considerando-se o valor de P<0,05 como estatisticamente significante. Não foram encontradas diferenças estatisticamente significantes entre os valores medianos do Gexp e Gbar, em relação à resistência máxima a tração. Em relação à sorção houve diferença estatística entre Gperio e Gexp e entre Gperio e Gbar (P<0,001). Não houve diferença estatisticamente significante quando comparamos Gbar e Gexp. Em relação à solubilidade não houve diferença estatística entre os grupos. Em geral, os efeitos citotóxicos dos materiais foram dependentes do tempo de extração do eludato (24h, 48h e 7 dias). Foi encontrada diferença estatística no tempo de 24h entre Gexp e Gperio. No tempo de 72h houve diferença entre Gexp e Gperio (P<0,001), tendo o primeiro melhor comportamento, da mesma forma entre Gbar e Gperio (P<0,001). Em 7 dias, houve diferença estatística entre Gbar e Gperio, tendo resultado de P<0,05. No teste de genotoxicidade não foi encontrada diferença estatística entre os grupos. No ensaio microbiológico não foi encontrada diferença estatística para E. faecalis anaeróbicos, E. faecalis aeróbicos ou micro-organismos totais. Concluímos que Gexp teve comportamento semelhante aos controles podendo ser utilizado como material para recobrimento de feridas cirúrgicas periodontais, sendo necessários mais estudos de fase pré-clínica e clínica.

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:30:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao_Maria_Raquel_Fernandez_Morinigo.pdf: 1321282 bytes, checksum: 91f2eb8e65e4b67c642c6df035df822a (MD5) Previous issue date: 2009-04-28 / Aim: To evaluate the cytotoxicity and genotoxicity of sodium percarbonate in comparison with bleaching agents used in discolored pulpless teeth from a mouse fibroblast cell culture. Methodology: The bleaching agents cytotoxicity and genotoxity were evaluated both in their pure form of products as well as in concentration commonly used in clinical practice. Hydrogen peroxide (HP), carbamide peroxide (CP), sodium perborate (SP) and sodium percarbonate (SPC) were diluted in DMEM in series. To evaluate the cytotoxicity, the survival of 3T3 mouse fibroblasts were measured photometrically by using MTT assay after a 24h exposure period. Genotoxicity was indicated by the micronuclei (MN) formation and the modification of the normal cell was analyzed by light microscopy (400x). The statistical analysis was performed by one-way ANOVA, followed by a multiplecomparison Tukey post hoc test (p < 0.05). Results: All tested groups exhibited a dose-dependent cytotoxicity. However, CP has showed a similar cytotoxic effect when compared with DMEM untreated control (UC) group. PH and SPC were significantly more cytotoxic than SP. Genotoxicity test has showed that SPC and SP have presented an intermediate rate of MN frequency over the UC group. The mean rate of MN frequency to HP was higher and statistically more significant than other groups tested. No difference was observed when CP and UC groups were compared. Conclusions: The results suggest that the cytotoxicity of SPC was similar to HP and significantly more cytotoxic than SP and CP. On the other hand, SPC and SP has shown an intermediate genotoxic effect, lower than HP and higher than CP, which was non-genotoxic / Objetivo: Avaliar a citoxicidade e genotoxidade do percarbonato de sódio e comparar com os agentes clareadores comumente utilizados no tratamento de dentes despolpados em cultura celular. Metodologia: A citotoxidade e genotoxicidade dos agentes clareadores foram avaliadas tanto na forma pura de cada produto quanto nas concentrações utilizadas na prática clínica. Peróxido de Hidrogênio (PH), peróxido de carbamida (PC), perborato de sódio (PS) e percarbonato de sódio (PCS) foram diluídos em DMEM. A viabilidade de fibroblastos da linhagem 3T3/NIH após 24h de exposição aos diferentes agentes foi medida fotometricamente por meio do teste colorimétrico com MTT. A genotoxicidade foi indicada pela formação e contagem de micronúcleos (MN) analisados em microscópio óptico comum (400x). A análise estatística dos dados foi feita utilizando o teste ANOVA de uma via complementado com o teste de comparações múltiplas Tukey post hoc (p < 0, 005). Resultados: Todos os grupos testados apresentaram um efeito citotóxico dosedependente. Entretanto, o PC mostrou citotoxicidade semelhante ao grupo controle (GC). PH e PCS foram significativamente mais citotóxicos que PS. O teste de genotoxicidade mostrou que PCS e PS apresentaram uma frequência intermediária de MN quando comparados ao GC. Por outro lado, a frequência média de MN usando PH foi significantemente superior aos outros grupos testados (p < 0, 005). Não houve diferença estatística entre PC e o GC. Conclusão: A citotoxicidade do PCS foi similar ao PH e significantemente maior do que o PS. Por outro lado, PCS e PS apresentaram um efeito genotóxico intermediário, inferior ao PH, porém superior ao PC que não teve efeito genotóxico

Les amines hétérocycliques aromatiques (AHA) sont des contaminants de l'environnement et de l'alimentation, majoritairement formés lors de la cuisson de viande et poisson ainsi que dans la fumée de cigarette et les gaz d'échappements. Les AHA sont mutagènes chez la bactérie, cancérogènes multi-sites chez le rongeur et sont classées comme cancérogènes possibles ou probables chez l'Homme par l'IARC. Il est aujourd'hui indispensable de caractériser des biomarqueurs d'exposition dérivés des AHA (adduits à l'ADN et métabolites) pour améliorer l'estimation du risque chez l'Homme. Des résultats de l'équipe ont démontré que le 2-amino-9H-pyrido[2,3-b]indole (AαC) forme des niveaux d'adduits à l'ADN élevés dans les hépatocytes humains. Ces niveaux sont plus élevés que ceux formés par les autres AHA. L'objectif de cette thèse est de mieux comprendre le potentiel génotoxique d'AαC chez l'Homme. Nos travaux ont démontré que les adduits à l'ADN dérivés d'AαC sont persistants dans les hépatocytes humains et formés à des doses aussi faibles que 1nM. De plus, le CYP1A2 a été confirmé comme enzyme majoritaire dans la bioactivation d'AαC dans le foie humain. Nous avons également caractérisé les métabolites majeurs dérivés d'AαC dans les hépatocytes humains. Cette étude a permis d'établir pour la première fois une corrélation entre l'activité catalytique du CYP1A2, la formation d'AαC-HN2-O-Gl et la formation des adduits à l'ADN dérivés d'AαC. Le métabolite AαC-HN2-O-Gl étant réactif vis-à-vis de l'ADN in vitro, nos travaux confortent l'hypothèse que la voie des UDP-Glucuronosyltransférases (UGTs) est une nouvelle voie de bioactivation d'AαC dans le foie humain. De plus, nous avons montré que les adduits à l'ADN dérivés des AHA sont formés dans les lymphocytes T humains activés et en particulier les adduits en position C8 de la guanine dérivés d'AαC. Au total, ces travaux ont permis l'identification de métabolites stables et des adduits à l'ADN, potentiels biomarqueurs d'exposition à AαC, qui sont indispensables pour une meilleure estimation du risque génotoxique d'AαC chez l'Homme. / Heterocyclic aromatic amines (HAA) are environmental and food contaminants, mainly formed during meat and fish cooking, but also in cigarette smoke and exhaust gaz. HAA are mutagenic in bacteria, carcinogenic in rodents and are classified as possible or probable human carcinogens by IARC. Today it is essential to characterize exposure biomarkers i.e. DNA adducts and metabolites, to assess the human risk associated with HAA. The research team has previously demonstrated that 2-amino-9H-pyrido[2,3-b]indole (AαC) form high levels of DNA adducts in human hepatocytes. These levels are greater that those derived from other HAAs. Thus, the aim of this thesis was to better understand the genotoxic potential of AαC in human. We demonstrated that in human hepatocytes, DNA adducts derived from AαC are persistent and formed at doses as low as 1nM. Moreover, we confirmed that CYP1A2 is the major enzyme implicated in the bioactivation of AαC in human liver. We have also characterized the major metabolites derived from AαC formed in human hepatocytes. This study allows, for the first time, the establishment of a correlation between the catalytic activity of CYP1A2, AαC-HN2-O-Gl formation and AαC derived DNA adducts formation. AαC-HN2-O-Gl being reactive toward DNA in vitro, our work reinforces the hypothesis that the UDP-glucuronosyltransferase (UGTs) pathway is a new bioactivation pathway for AαC in human liver. Moreover, we demonstrated the formation of HAA derived DNA adducts, especially those derived from AαC at position C8 of guanine, in activated human T lymphocytes. Taken together, our data lead to the identification of stable metabolites as well as DNA adducts which are potentials AαC exposure biomarkers in human. These biomarkers are essential for a better assessment of the genotoxic risk of AαC in human.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The irrigated rice crop has economic and social importance for the state of Rio Grande do Sul. It is considered an environment rich in biological diversity, it is home for a range of animal communities, especially invertebrates. However, the intensive use of pesticides has led to concerns about the impact on non-target aquatic organisms. The objective in this study was to evaluate the effects of fungicides and insecticides currently used in irrigated rice crop on the community of benthic macroinvertebrate. For this, field and laboratory experiments were conducted. Two field experiments (seasons 2012/13 and 2013/14), in an experimental lowland area, in the Federal University of Santa Maria, RS, Brazil were carried out in 10m2 plots cultivated with rice plants and control plots with and without rice plants, with a water depth of 10 cm. The treatments: trifloxystrobin + tebuconazole (50 + 100 g a.i. ha-1), tricyclazole (225 g a.i ha-1), lambda-cyhalothrin + Thiamethoxam (15.9 + 21.1 g a.i ha-1) and diflubenzuron (19.2 g a.i ha-1) were applied as a single dose on rice plants at stage R3. Soil samples were collected to evaluate the richness and density of benthic macroinvertebrate fauna. Physical and chemical water parameters such as temperature, pH and dissolved oxygen, and the persistence of pesticides in water and soil were evaluated during the experiments. The sample sufficiency for studies of the benthic macroinvertebrate community in rice crop areas was set. Two laboratory tests were carried out to complement the field studies. The first experiment aimed to verify the cytotoxic and genotoxic effects of tricyclazole through the bioindicator Allium cepa and the second experiment, aimed to verify the acute toxicity of the lambda-cyhalothrin and thiamethoxam active ingredients, alone and in combinations, on the species Chironomus dilutus organisms. The results showed that the establishment of the benthic macroinvertebrate community is favored in the natural environment without pesticides and rice plants. However, the application of a single dose of trifloxystrobin + tebuconazole fungicides and tricyclazole and lambda-cyhalothrin insecticide thiamethoxam + diflubenzuron causes no significant effects on the macroinvertebrate richness and density. Tebuconazole, tricyclazole and thiamethoxam had high persistence in irrigation water of the rice crop. Also, tricyclazole increased the genotoxic activity in the irrigation water of the rice crop, through the emergence of chromosomal alterations, without, however, causing significant effects on the mitotic index. The tested doses of lambda-cyhalothrin pyrethroid and thiamethoxam neonicotinoid, alone or in combinations, did not cause significant changes on organisms of the species Chironomus dilutus in laboratory studies. / A lavoura de arroz irrigado apresenta importância econômica e social para o estado do Rio Grande do Sul. É considerado um ambiente rico em diversidade biológica, pois abriga uma gama de comunidades de animais, especialmente invertebrados. Entretanto, a utilização intensiva de agrotóxicos tem levado a preocupações quanto ao impacto sobre os organismos aquáticos não alvos. Objetivou-se na presente pesquisa avaliar os efeitos de fungicidas e inseticidas utilizados na cultura do arroz irrigado sobre a comunidade de macroinvertebrados aquáticos bentônicos. Para isso, foram realizados experimentos de campo e laboratoriais. Dois experimentos de campo (safras 2012/13 e 2013/14) foram realizados em área didático experimental de várzea, da Universidade Federal de Santa Maria, RS, em parcelas experimentais de 10m2 cultivadas com arroz irrigado e parcelas controle com e sem plantas de arroz, com lâmina de água de 10 cm de altura. Os tratamentos: trifloxistrobina + tebuconazol (50 + 100 g i.a.ha-1), triciclazol (225 g i.a.ha-1), lambda-cialotrina + tiametoxam (15,9 + 21,1 g i.a.ha-1) e diflubenzuron (19,2 g i.a.ha-1) foram aplicados em dose única sobre as plantas de arroz em estádio R3. Amostras de solo foram coletadas para avaliação da riqueza e densidade da fauna de macroinvertebrados bentônicos. Parâmetros físico-químicos da água, tais como temperatura, pH e oxigênio dissolvido e a persistência dos agrotóxicos na água e no solo foram avaliados durante os experimentos. A suficiência amostral para estudos com a comunidade de macroinvertebrados bentônicos em áreas de cultivo de arroz irrigado foi definida. Dois ensaios laboratoriais foram realizados a fim de complementar os estudos de campo. O primeiro experimento objetivou verificar os efeitos citotóxicos e genotóxicos de triciclazol, através do bioindicador Allium cepa e, o segundo experimento, objetivou verificar a toxicidade aguda dos princípios ativos lambda-cialotrina e tiametoxam, isolados e em misturas, sobre organismos da espécie Chironomus dilutus. Os resultados mostraram que o estabelecimento da comunidade de macroinvertebrados bentônicos é favorecido quando em ambiente natural, livre de agrotóxicos e sem plantas de arroz. Entretanto, a aplicação de apenas uma dose dos fungicidas trifloxistrobina + tebuconazol e triciclazol e dos inseticidas lambda-cialotrina + tiametoxam e diflubenzuron não ocasionou efeitos significativos sobre a riqueza e densidade de macroinvertebrados. Tebuconazol, triciclazol e tiametoxam apresentaram elevada persistência na água de irrigação da lavoura de arroz irrigado. Triciclazol causou também aumento da atividade genotóxica na água de irrigação da lavoura de arroz, através do aparecimento de alterações cromossômicas, sem, contudo, causar efeitos significativos sobre o índice mitótico. As doses testadas do piretróide lambda-cialotrina e do neonicotinóide tiametoxam, isolados ou em misturas, não causaram alterações significativas sobre organismos da espécie Chironomus dilutus, em estudos laboratoriais.