Objetivos: Avaliar os resultados das coletas de células hematopoéticas CD34+, por aférese, em crianças portadoras de neuroblastoma tratadas no Serviço de Oncologia e Hematologia do Instituto da Criança do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo; estudar os fatores (idade, peso, estimulação com quimioterapia, dose do G-CSF, uso terapêutico de 131I-MIBG e tempo entre exposição à quimioterapia prévia) que influenciaram na mobilização e no rendimento da coleta de células CD34+ no sangue periférico e associar a quantidade de células CD34+ obtidas com a evolução clínica do paciente. Métodos: Trata-se de um estudo retrospectivo de pacientes com neuroblastoma submetidos à coleta de células-tronco hematopoéticas entre janeiro de1989 e junho 2012. Resultados: Avaliados 45 prontuários de crianças com idade mediana de 3,1 anos (0-12 anos), 26 (57%) apresentavam metástase em medula óssea ao diagnóstico. O tempo entre diagnóstico e o início da mobilização foi em média 19,7 ± 12 meses (mediana de 15,8 meses). Dos pacientes estudados, 11/45 (24,4%) receberam 131I-MIBG terapêutico antes da mobilização. Somente cinco pacientes (11,1%) receberam quimioterapia associada ao G-CSF para mobilização; as demais 40 crianças (88,9%) receberam exclusivamente G-CSF na dose média 26,5 ± 5,3 ug/kg/dia (mediana 28 ug/kg/dia). Não houve correlação entre o número máximo de células CD34+ no sangue periférico com a idade (p=0,9), com o peso (p=0,63), com a dose do G-CSF (p=0,46) ou com o intervalo entre o diagnóstico e o início da mobilização (p=0,09). A mediana da quantificação de células CD34+/uL no sangue periférico foi de 36,6 células, média de 45,2 ± 42,6 (mínimo 1,7 e máximo 236,3). Pacientes que haviam recebido 131I-MIBG previamente à mobilização apresentaram menor número de células CD34+/uL no sangue periférico (p=0,04). Em 26 pacientes (57,8%) foi possível coletar mais de 2,0x106 células CD34+/Kg na primeira coleta e em 19 pacientes (42,2%) foram necessárias mais de uma coleta, sendo que, oito pacientes (17,8%) apresentaram falha de mobilização. Os pacientes que apresentaram menor quantidade de células CD34+/uL no sangue periférico (<= 12) não conseguiram número maior ou igual a 2,0x106 células CD34+/Kg em 81,8% das coletas. O número mediano de células infundidas foi de 2,66 x106 células CD34+/Kg (média 3,38 ±1,6; mínimo 1,8; máximo 8,74 x106 CD34+/Kg). Os pacientes apresentaram contagem de leucócitos maior que 1000/mm3 e de plaquetas maior 50000/mm3 por dois dias consecutivos em média, no dia 13 ± 10 e no dia 46 ± 33, respectivamente, após infusão. Conclusões: A coleta de células-tronco hematopoéticas por aférese foi factível em todos os pacientes do estudo. Não houve influência significativa da idade, do peso, da dose do G-CSF e do tempo entre diagnóstico e inicio da mobilização, no número máximo de células. O uso prévio à coleta de 131I-MIBG terapêutico parece influenciar negativamente no pico de células CD34+ no sangue periférico (p=0,04). A contagem de células CD34+ no sangue periférico é importante fator preditivo do resultado das coletas de células progenitoras hematopoéticas CD34+ por aférese / Objectives: To evaluate the results of peripheral hematopoietic CD34+ stem cells harvesting in children with neuroblastoma treated at Serviço de Oncologia e Hematologia do Instituto da Criança do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo; regarding age, weight, stimulation with chemotherapy, G-CSF dose, time between diagnosis and the mobilization beginning and therapeutic 131I-MIBG use and the influence in mobilization and peripheral harvesting of autologous hematopoietic stem cells and to associate the amount of CD34+ cells obtained with the patient\'s clinical evolution. Methods: Between January 1989 and June 2012, children with neuroblastoma underwent to mobilization and peripheral hematopoietic stem cell harvesting and were retrospectively analyzed. Results: The charts of 45 children were reviewed. Median age was 3.1 years (0-12years), and 26 (57%) had metastases in bone marrow at diagnosis. Average time between diagnosis and mobilization was 19.7 ± 12 months (median, 15.8 months). 11/45 (24.4%) received therapeutic 131I-MIBG prior to mobilization. The average G-CSF dose was 26.5 ± 5.3mg/kg/day (mean 28mg/kg/day). There was no correlation between the absolute number of peripheral CD34+ cells and age (p=0.9), weight (p=0.63), G-CSF dose (p=0.46) or the range between diagnosis and early mobilization (p=0.09). The median quantification of CD34+ cells/uL in peripheral blood was 36.6, average 45.2 ±42.6 (minimum 1.7 and maximum 236.3 CD34+ cells/uL). Patients who had received therapeutic 131I-MIBG prior to mobilization, showed fewer absolute amount of CD34+/uL cells in peripheral blood (p=0.04). In 26 patients (57.8%) it was possible to harvest more than 2.0 x106 CD34+ cells/kg at first apheresis and in 19 patients (42.2%) more than one collection were necessary, and eight patients (17.8 %) failure to mobilize. Patients presenting less than 12 CD34+ cells/uL in peripheral blood on the harvesting day failed to reach more then 2.0x106 cells CD34+/kg in 81.8% of the apheresis procedures. It was infused a median number of 2.66 x106 CD34+ cells/kg (mean 1.6 ± 3.38; min 1.8; max 8.74 x106 CD34+ cells/kg). After the stem cells infusion, patients had white blood cells count greater than 1000/mm3 and platelet greater than 50,000/mm3 for two consecutive days on average after 13 ±10 and 46 ± 33 days, respectively. Conclusions: The hematopoietic stem cells harvesting was feasible in all patients included in this report. The G-CSF dose, age, weight and the period between harvesting and diagnosis showed no influence in mobilization and harvesting of autologous hematopoietic stem cells, however the absolute number of peripheral blood CD34+ cells/uL is an important predictive factor for the harvesting outcome. Additionally our findings support for the first time the notion that the use of therapeutic 131I-MIBG could have a negative impact in mobilization of peripheral blood stem cells in children with neuroblastoma

O diabetes mellitus do tipo 1 (T1D) é uma doença autoimune mediada por células T e caracterizada pela destruição seletiva das células ? pancreáticas produtoras de insulina. Células estromais mesenquimais (MSCs) e células tronco hematopoéticas (HSCs) são os principais componentes do nicho hematopoético na medula óssea. Estas células vêm sendo utilizadas nos últimos anos em transplantes autólogos para tratamento do T1D. O objetivo geral do presente trabalho foi avaliar o perfil de expressão gênica global de MSCs e HSCs de pacientes com T1D e compará-lo com células isoladas de indivíduos saudáveis através da técnica de microarray e programas específicos de bioinformática. As MSCs e HSCs foram isoladas da medula óssea de pacientes com T1D antes e após o tratamento com imunossupressão em altas doses seguida pelo transplante autólogo de células tronco hematopoéticas (AHSCT). As MSCs apresentaram valor elevado de expressão absoluta de diversas moléculas potencialmente relacionadas com suas funções de suporte à hematopoese. MSCs de pacientes diabéticos apresentaram perfil de expressão gênica global distinto das isoladas de indivíduos saudáveis, com hiper-regulação da sinalização via proteína G e hiporregulação da atividade transcricional. O receptor ?3 adrenérgico, assim como a sinalização simpática, foram hiper-expressos nas células dos pacientes. Genes que codificam moléculas que suportam a hematopoese e regulados pelo sistema nervoso simpático, VCAM1 e CXCL12, foram hiporregulados em nossa análise. Após o AHSCT, houve atenuação do perfil de expressão diferencial das MSCs dos pacientes, entretanto elas permaneceram com hiperatividade da sinalização via proteína G e déficit da atividade transcricional. As HSCs apresentaram altos níveis de expressão absoluta de diversas integrinas e receptores de citocinas e fatores de crescimento, potencialmente relacionados com funções na hematopoese. HSCs de pacientes com T1D apresentaram perfil de expressão gênica global distinto das de indivíduos saudáveis, com hiper-regulação de genes associados com a atividade transcricional. Os fatores de transcrição TCFL2 e p53, que têm papel fundamental na regulação do ciclo celular das HSCs, foram diferencialmente expressos entre as HSCs de pacientes diabéticos e controles. Assim, nossos resultados de expressão gênica global apontaram alterações intrínsecas nas HSCs e MSCs de pacientes diabéticos que podem estar relacionadas com a falha terapêutica dos transplantes autólogos. A implicação dessas alterações no desenvolvimento e patogênese do T1D permanece desconhecida e a realização de ensaios funcionais poderá esclarecer o significado biológico das mesmas. / Type 1 diabetes mellitus (T1D) is a T cell-mediated autoimmune disease, characterized by selective destruction of insulin-producing pancreatic ? cells. Mesenchymal stromal cells (MSCs) and hematopoietic stem cells (HSCs) are the main components of hematopoietic niches. In the last years, these cells are being used in autologous transplantation settings for T1D treatment. The main goal of this study was to evaluate the global gene expression profile of MSCs and HSCs from T1D patients, by using microarrays and bioinformatics specific programs. MSCs and HSCs were isolated from bone marrow of T1D patients before and after treatment with high dose immunossupression followed by hematopoietic stem cell transplantation. MSCs showed high absolute expression values of several molecules potentially related to their function of hematopoiesis support. MSCs from T1D patients exhibited distinct gene expression profile from control MSCs and presented up-regulation of the G protein-coupled receptor signaling pathway and down-regulation of transcriptional activity. The ?3 adrenergic receptor, as well the sympathetic nervous system signaling were up-regulated on patient´s cells. Genes that codify molecules which support hematopoeisis and are regulated by the symphatic nervous system, VCAM1 and CXCL12, were downregulated on our analysis. After AHSCT, there was an attenuation of the differential expression profile of MSCs from T1D patients, however they remained with G proteincoupled receptor signaling pathway hyperactivity and transcriptional activity deficit. HSCs exhibited high absolute expression values of integrins, cytokine receptors and growth factors, molecules potencially related to hematopoietic functions. HSCs from T1D patients showed distinct expression profile from control HSCs and demonstrated up-regulation of genes related to transcriptional activity. The transcription factors TCFL2 and p53, which have important role in regulating HSC cycle, were differentially expressed between HSCs from T1D patients and controls. Thus, our global gene expression analysis has revealed intrinsic alterations on MSCs and HSCs from T1D patients that could be related to the autologous transplant therapeutic failures. The implications of these alterations on the development and pathogenesis of T1D remain unknown and functional assays could unravel their biological meaning.

Submitted by Fabiana Gonçalves Pinto (benf@ndc.uff.br) on 2015-12-03T17:07:24Z No. of bitstreams: 1 Dulcinea Luzia de Oliveira Lima Marques.pdf: 1782106 bytes, checksum: 004f6a4a517b9e777f74bc04168ea7c5 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-12-03T17:07:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dulcinea Luzia de Oliveira Lima Marques.pdf: 1782106 bytes, checksum: 004f6a4a517b9e777f74bc04168ea7c5 (MD5) Previous issue date: 2011 / Mestrado Acadêmico em Ciências do Cuidado em Saúde / As atividades desenvolvidas pelo enfermeiro nos Bancos de Sangue de Cordão Umbilical Placentário demanda alta complexidade assistencial e funcional, fato que imputam a responsabilidade de identificar situações que devam ser avaliadas, pesquisadas e reformuladas, como por exemplo os critérios de doação de sangue de cordão umbilical e placentário (SCUP), critérios de inclusão e exclusão de doadoras, padronização de técnicas e demais situações que envolvem a atuação do enfermeiro. A celularidade tem sido alvo de atenção por parte dos enfermeiros, devido a necessidade de obtenção de um número adequado células-tronco hematopoiéticas. Este estudo objetivou discutir a associação entre a celularidade do sangue do cordão umbilical e placentário e a hipertensão arterial e; traçar perfil das gestantes com hipertensão arterial e sem hipertensão arterial. A metodologia correspondeu a um estudo observacional do tipo caso-controle. O local da pesquisa foi o Hospital Maternidade Oswaldo de Nazareth e o Laboratório de Processamento e Criopreservação do Instituto Nacional de Câncer e os sujeitos do estudo foram setenta de três gestantes internadas, e que tiveram o sangue de cordão umbilical e placentário coletados após a dequitação. A análise estatística foi processada pelo software estatístico SAS® System, versão 6.11 e o critério de determinação de significância adotado foi o nível de 5%. A análise estatística apresentou resultados satisfatórios, constatamos que a celularidade inicial do sangue do cordão umbilical de gestantes hipertensas não apresentou diferença significativa comparado com a celularidade de gestantes não-hipertensas. Das bolsas de SCUP coletas de gestantes hipertensas, 80% apresentou celularidade ≥ 5 x 108 e 20% celularidade < 5 x 108 (de acordo com padrão estabelecido pela RDC 56). A partir deste estudo, podemos concluir que gestantes com hipertensão arterial apresentaram uma quantidade adequada no total de células nucleadas, atendendo aos critérios estabelecidos pela RDC 56. Com base nestes resultados e com a intensificação de pesquisas neste campo, sugerimos a reavaliação dos critérios de doação do sangue do cordão umbilical e placentário das gestantes com hipertensão arterial. A celularidade do SCUP apresentou uma relação positiva com alguns fatores neonatais e características da placenta/cordão, o conhecimento destes fatores permitirá as equipes dos BSCUP, a identificação de características importantes relacionadas à mãe, ao recém-nascido e as características da placenta e do cordão que possam otimizar o quantitativo de células obtidas do SCUP. / The activities performed by nurses in the Blood Banks Umbilical Cord Placental high demand and functional complexity of care, a fact that indirectly responsible to identify situations that should be evaluated, researched and reworked, such as the criteria for donation of umbilical cord blood and placental (SCUP), inclusion and exclusion criteria for donors, standardization of techniques and other situations that involve the performance of nurses. WBC has been the subject of attention from nurses, due to the need to obtain an adequate number of hematopoietic stem cells. This study aimed to discuss the relation between cellularity and cord blood and placental and hypertension, a profile of pregnant women with hypertension and no hypertension. The methodology corresponded to an observational case-control. The research site was the Maternity Hospital and Oswaldo de Nazareth Processing and Cryopreservation Laboratory of the National Cancer Institute and the study subjects were pregnant women admitted seventy three, and had the blood of the umbilical cord and placenta collected after dequitação. Statistical analysis was performed with SAS ® System software, version 6.11 and the criterion for determining significance was set at 5%. Statistical analysis showed satisfactory results, we found that the initial cellular cord blood of pregnant women with hypertension showed no significant difference compared with the cellularity of pregnant women not hypertensive. SCUP collections of the stock of pregnant women with hypertension, 80% had WBC ≥ 5 x 108 and 20% cellularity <5 x 108 (according to standards established by the DRC 56). From this study, we conclude that pregnant women with hypertension had an adequate amount of total nucleated cells, meeting the criteria established by the RDC 56. Based on these results and the intensification of research in this field, we suggest a reassessment of the criteria for donation of umbilical cord blood and placenta of pregnant women with hypertension. The cellularity of the SCUP presented a positive relationship with some factors and characteristics of neonatal placental / cord, the knowledge of these factors will allow teams of BSCUP, the identification of important features related to the mother, the newborn and the characteristics of the placenta and umbilical that can optimize the quantity of cells obtained from SCUP.

O Transplante de Células-Tronco Hematopoéticas (TCTH) é uma terapia complexa que expõe o paciente a inúmeras vulnerabilidades, das quais se destaca a infecção relacionada ao Cateter Venoso Central (CVC). Entre as coberturas oclusivas, o Curativo Impregnado com Gel de Clorexidina (CIGCHX) é uma tecnologia promissora que tem demonstrado eficácia superior na prevenção dessas infecções. Uma característica inovadora é a presença da almofada gel de clorexidina, que mantém ação antimicrobiana, a despeito da presença de matéria orgânica, permitindo permanência de sete dias por propiciar controle do crescimento da microbiota local. Diante disto, propôs-se descrever o uso do CIGCHX como cobertura do CVC inserido em adultos e crianças submetidos ao TCTH e a ocorrência de infecção relacionada ao cateter na vigência deste curativo. Foi conduzido um estudo quantitativo, observacional, descritivo com corte transversal. A casuística compôs-se de 25 pacientes que se submeteram a observações diárias de aspectos relacionados ao CIGCHX até 45 dias após a inserção do primeiro CVC, ou antes, caso este curativo tenha sido suspenso ou o cateter removido, entre setembro de 2013 a fevereiro de 2014. As variáveis foram analisadas por meio de estatística descritiva. O CIGCHX teve permanência média de 4,62 dias, variando entre 0,5 e sete dias. A remoção programada do mesmo ocorreu em 43 dos 104 curativos acompanhados. A presença de sangue foi o principal motivo para remoção não programada do CIGCHX. A presença de bolha de ar sob a almofada gel de clorexidina foi a observação mais frequente sobre o aspecto diário do curativo, presente em 56,7% das avaliações realizadas. O CVC teve permanência média de 14,73 dias, variando entre cinco e 33 dias, com DP 6,78 dias. A infecção relacionada ao cateter foi o principal motivo para sua remoção. Nas culturas de sangue e ponta de cateter, os microrganismos isolados foram todos bactérias gram negativas. Os sinais e sintomas de irritação cutânea na região do CIGCHX ocorreram em cinco pacientes. Os achados relacionados à irritação cutânea podem apontar que o uso do CIGCHX exige cautela na população estudada. A presença de sangue como principal motivo para remoção não programada do curativo revela a especificidade dos pacientes e indica que os fatores relacionados devem ser considerados para o uso do CIGCHX nesta população. O desenvolvimento de estudos experimentais que investiguem as causas e implicações da presença da bolha de ar, bem como dos outros aspectos observados no curativo, é essencial para certificar a eficácia do uso do CIGCHX sob essas condições e propor medidas para manejo, se necessário, para que seja implementado em sua maior potencialidade. Ademais, tais resultados contribuirão para centros de transplante gerenciar o uso do CIGCHX e desenvolver protocolos para sua utilização, com atenção às diversas nuances que seu uso implica. / Hematopoietic Stem-Cell Transplantation (HSCT) is a complex treatment that exposes patients to uncountable vulnerabilities, particularly central venous catheter (CVC) infections. Among the many occlusive dressings, the chlorhexidine-gel-impregnated dressing (CHXGID) is a promising technology that has proven superior effectiveness in preventing CVC infections. One innovative feature of CHXGID is the presence of a chlorhexidine-gel pad that maintains an antimicrobial action despite of the presence of organic material. The dressing can remain on the patient for seven days, thus controlling local microbiota growth. Therefore, it was proposed to describe the use of CHXGID as a dressing of the CVC of adult and child patients undergoing HSTC and the occurrence of catheter-related infections while using that dressing. A quantitative, observational, descriptive and cross-sectional study was conducted. The study sample consisted of 25 patients who agreed to daily observations of aspects related to the CHXGID for 45 days after first CVC insertion, or less in case the dressing or catheter were removed, from September of 2013 to February of 2014. The variables were analyzed using descriptive statistics. The mean CHXGID permanence was 4.62 days, ranging between 0.5 and seven days. Scheduled removal occurred in 39 of the 104 studied dressings. The presence of blood was the main reason for unscheduled CIGCHX removal. The presence of air bubbles under the chlorhexidine-gel pad was the most frequent observation regarding the daily aspect of the dressing, observed in 56.7% of the assessments. The mean CVC permanence was 14.73 days, ranging between five and 33 days, with a SD of 6.78 days. Catheter-related infection was the main reason for its removal. The microorganisms isolated in the blood and catheter tip cultures were all gram negative bacteria. Five patients showed signs and symptoms of skin irritations in the CHXGID area. The findings related to skin irritations suggest that special care is required when using CHXGID in the studied population. The presence of blood as the main reason for unscheduled removing the dressing reveals the specificity of the patients and indicates that the associated factors must be considered for using CHXGID in this specific population. Further experimental studies that investigate the causes and implications of air bubbles, as well as other aspects observed on the dressings, are essential to verify the effectiveness of CHGID under these conditions and to propose any necessary handling measures, so the highest effectiveness of CHGID use can be achieved. Furthermore, such results will help transplant centers manage the utilization of CHXGID and develop specific utilization protocols, with particular care to the diverse levels of implications involved.

O Transplante de Células-Tronco Hematopoéticas (TCTH) trata-se da substituição das Células-Tronco Hematopoéticas (CTH) doentes de um indivíduo por CTH normais com o objetivo de normalizar a hematopoese do receptor. O cateter venoso central (CVC) tornou-se indispensável para viabilizar tal terapêutica pela segurança na infusão das CTH e dos quimioterápicos. Para o TCTH são utilizados cateteres do tipo Hickman ou duplo lúmen, ambos de longa permanência. O curativo adesivo utilizado no sítio de inserção do cateter é essencial para a fixação do cateter, proteção contra agentes externos e prevenção de infecção. Há forte evidência clínica no uso do filme transparente gel de clorexidina (CHX) como uma alternativa no controle de infecções relacionadas ao cateter. A adesividade deste curativo confere-lhe uma possível permanência de até sete dias aderido à pele, o que evita repetidas aplicações e remoções do curativo, diminui a frequência na manipulação do cateter, a ocorrência de infecção e irritação cutânea local. Observa-se que a adesividade do curativo nem sempre permite a permanência por sete dias, sendo necessárias trocas não planejadas, podendo causar lesões à integridade cutânea. Neste estudo, objetivou-se avaliar a adesividade e a irritação cutânea do filme transparente gel de CHX aplicado no sítio de inserção do CVC por meio de um estudo transversal, prospectivo, realizado em um hospital público de ensino, no período de novembro de 2013 a junho de 2014, com crianças e adultos de ambos os sexos com doenças autoimunes ou onco-hematológicas submetidos ao TCTH. A amostra desta pesquisa foi constituída por 25 pacientes. Onze (44%) apresentaram irritação cutânea caracterizada por perda de pele de extensão <=0,5cm, perda de pele de extensão > 0,5cm, placa eritematosa e vesículas. Destes, seis tiveram necessidade de suspensão do uso do curativo. A pele fragilizada devido ao uso de agentes quimioterápicos pode aderir fortemente ao curativo adesivo, sendo desprendida com o mesmo quando este é removido. A perda da integridade cutânea com remoção da camada protetora da pele facilita a entrada de microrganismos aumentando a susceptibilidade a infecções em pacientes imunossuprimidos. Em 55,6% das avaliações foi observado desprendimento do curativo e a região da fenda foi onde mais ocorreu desprendimento (43,4%). Esta é uma região da margem do curativo, assim denominada por possuir uma abertura no adesivo onde são posicionadas as vias do cateter. Infere-se que devido à mobilidade do paciente e manuseio das vias do cateter, com o passar dos dias, essa região da borda do curativo apresenta maior desprendimento. Em 8,4% das observações havia bolha de ar no gel de clorexidina envolvendo o sítio de inserção do cateter. A bolha de ar no gel de clorexidina significa que este não está em contato com a pele do paciente o que é preocupante quando envolve o sítio de inserção do cateter, pois a CHX não está exercendo sua função antisséptica neste local, onde há possibilidade de migração extra- lúmen de microrganismos à corrente sanguínea / Hematopoietic stem cell transplantation (HSCT) involves the replacement of sick hematopoietic stem cells (HSC) from an individual with normal HSC, with the aim to restore the recipient\'s hematopoiesis. Central venous catheters (CVC) have become indispensable to make this therapy feasible due to the safety of infusion of the HSC and the chemotherapeutic agents. In HSCT, long-term Hickman or long-term double lumen catheters are used. The adhesive dressing used in the site of insertion of the catheter is essential for the catheter fixation, protection against external agents and prevention of infection. There is strong clinical evidence on the use of transparent film dressing with chlorhexidine gel (CHX) as an alternative in the control of catheter-related infections. The adhesiveness of this dressing allows it to be used up to seven days once it adheres to the skin, which avoids repeated dressing applications and removals, and reduces the frequency of catheter handling, the occurrence of infection, and local skin rash. However, as observed, the dressing adhesiveness does not always allow it to be used for seven days, and unplanned replacements may be needed, which can cause lesions to the skin integrity. The objective of this study was to evaluate the adhesiveness and skin rash related to the transparent film dressing with CHX gel applied at the site of insertion of the CVC by means of a cross-sectional, prospective study developed at a public teaching hospital, between November 2013 and June 2014, with children and adults of both genders with autoimmune or onco-hematological diseases who were submitted to HSCT. The sample comprised 25 patients. Eleven (44%) presented skin rash characterized by skin loss to an extension of <=0.5 cm, skin loss to an extension of > 0.5 cm, erythematous plaque and vesicles. Of these, six had to interrupt the use of the dressing. Frail skin due to the use of chemotherapeutic agents can adhere strongly to the adhesive dressing, coming off with the dressing at its removal. The loss of skin integrity with the removal of the skin\'s protective layer facilitates the entrance of microorganisms, increasing susceptibility to infections in immunosuppressed patients. In 55.6% of the evaluations, there was dressing detachment, and it was greater in the opening region (43.4%), which is a region in the dressing border with a break in the adhesive where the catheter is placed. Given the mobility of the patient and the handling of the catheter, over the days, this region of the dressing border presents greater detachment. In 8.4% of the observations there were air bubbles in the chlorhexidine gel involving the site of insertion of the catheter. Air bubbles in the chlorhexidine gel means that it is not in contact with the patient\'s skin, which is a cause of concern when the site of insertion of a catheter is involved, since CHX is not exerting its antiseptic function in this location, which can lead to extra-lumen migration of microorganisms to the bloodstream

O transplante de células tronco hematopoéticas(TCTH) consiste na infusão intravenosa de células tronco hematopoéticas, destinadas a restabelecer a função medular e imune em pacientes com uma série de doenças malignas e não malignas, herdadas ou adquiridas, sendo considerado um procedimento de alta complexidade, alto custo financeiro e alta morbi-mortalidade . O sucesso do TCTH resultou em um grande número de pacientes sobreviventes livres de doença, trazendo como grande questão colocada pelos candidatos a essa terapêutica como será sua qualidade de vida após o procedimento. O objetivo desse estudo longitudinal consistiu em avaliar a qualidade de vida relacionada à saúde (QVRS) de pacientes submetidos ao TCTH autólogo e alogênico em três momentos distintos: no pré, após 30 e 180 dias pós TCTH e correlacionar com dados clínicos e sócio-demográficos. Para a coleta de dados foram utilizados dois questionários: o primeiro para obtenção de dados clínicos e sócio-demográficos, e o segundo uma escala específica traduzida e validada para o português o Functional Assessment Cancer Therapy (FACT-BMT). A amostra inicial foi constituída por 30 pacientes, 26 avaliados nos três momentos. O conjunto de resultados permitiu visualizar um impacto positivo da QVRS em pacientes com neoplasias e doenças hematológicas submetidos ao TCTH, ao final dos seis meses pós TCTH, apesar de algumas funções se apresentarem mais prejudicadas como a função física, funcional e preocupações adicionais com 30 dias pós TCTH, houve melhora nos escores do FACT-BMT em todos os componentes quando comparado ao do pré TCTH, especialmente nos aspectos físicos, emocionais e relacionamento com o médico.Conhecer essas implicações auxiliam a equipe interdisciplinar e o paciente na decisão de submeter-se a esse procedimento e auxiliam no planejamento de uma assistência que visa a melhora da QVRS desses pacientes. / The Hematopoietic Stem Cells Transplantation (HSCT) consists of infusing stem cells intravenously, aiming to reestablish the spinal cord and immune functions in patients with a series of, inherent or acquired, malignant and nonmalignant diseases. It is considered a highly complex procedure, with high financial costs and morbidity and mortality. The HSCT success resulted in a large number of patients who survived and were healed, which in turn lead potential candidates to question how good quality of life can be after the procedure. This study evaluates the Health- Related Quality of Life (HRQoL) of patients submitted to the autologous and allogenic HSCT in three different points in time: before, 30 and 180 days after the HSCT and correlated clinical and socio-demographic data. Two questionnaires were used for data collection: the first addressed clinical and socio-demographic data and the second was the Functional Assessment Cancer Therapy (FACT-BMT) translated and validated to Portuguese. The initial sample was composed of 30 patients; 26 were evaluated in the three points. The set of results indicated a positive impact on HRQoL in patients with neoplasias and hematologic diseases six months after the HSCT. Despite the fact there were additional concerns and some functions, such as physical and functional, were affected 30 days after the HSCT, the FACT-BMT scores improved in all components reaching levels above those pre HSCT, especially in physical and emotional aspects and relationship with the physician. Knowledge concerning these implications helps patients to decide whether to submit to the procedure and the interdisciplinary team to plan care with a view to improve the HRQoL of these patients.

A mucosite oral, também chamada recentemente de mucosite do trato gastrointestinal, continua sendo um importante efeito colateral que pode comprometer o resultado do transplante de células tronco hematopoéticas. Ela pode ocorrer em 100% dos pacientes submetidos ao transplante alogênico de células-tronco e a maior incidência neste pode ser atribuída à administração de metotrexate. A ocorrência de mucosite ulcerativa está relacionada ao aumento dos custos hospitalares, a redução da sobrevida em 100 dias e infecção sistêmica aumentando o risco de sepse. A última década foi muito importante para a compreensão da mucosite oral, incluindo a predisposição genética dos indivíduos e alterações nas enzimas responsáveis a metabolização de quimioterápicos. Recentemente, o polimorfismo C677T no gene metilenotetrahidrofolato redutase (MTHFR) têm ganhado enfoque na relação com a incidência da mucosite. Esta enzima metaboliza o metotrexate e a ela é atribuída maior ou menor atividade levando a modificações na metabolização do fármaco. Poucos trabalhos prospectivos e caso-controle são encontrados na literatura corrente com relação ao polimorfismo C677T e a incidência da mucosite. O objetivo deste estudo foi uma análise prospectiva caso-controle da relação do polimorfismo MTHFR C677T com a incidência da mucosite. Além disso, a influência da condição de saúde bucal (presença de placa dental e inflamação gengival) com a incidência de mucosite oral foi analisada. Foram inseridos 97 pacientes divididos em 2 grupos: 35 pacientes submetidos ao transplante alogênico e 62 pacientes submetidos ao transplante autólogo. A mediana de idade foi de 41,5 anos. O regime de condicionamento consistiu de busulfano e melfalano ou regime BEAM - becenum, etoposide, citarabina e melfalano (para a Doença de Hodgkin e Linfoma não Hodgkin). A profilaxia da doença do enxerto contra o hospedeiro foi feita com ciclosporina e metotrexate, no transplante alogênico. Não foi feito resgate com ácido folínico durante a administração de metotrexato. Os resultados mostraram que o polimorfismo C677T não foi significativo no grupo de estudo em comparação com o grupo controle na previsão de incidência e severidade da mucosite oral. No entanto, a incidência e gravidade da mucosite oral foram influenciadas pela condição de saúde bucal. Em conclusão, o polimorfismo C677T da MTHFR não foi relacionado ao oral mucosite, mas o estado de saúde oral foi um fator importante no desenvolvimento da mucosite. Estes resultados reforçam a importância de um dentista na equipe multiprofissional de assistência a estes pacientes. / Oral mucositis remains an important side-effect and life-threatening complication of hematopoietic stem cell transplantation. It can occurs in 100% of patients underwenting allogeneic stem cell transplantation. The differences in incidence between allogeneic and autologous transplantation may be due to methotrexate administration in the first. Ulcerative mucositis is related to increase hospitalar costs, reduced 100-days survival and systemic infections leading to sepsis risk. The last decade was very important to the understanding of oral mucositis, including genetics changes in enzymes responsible to drug metabolization, as the C677T polymorphism in the methylenetethrahidrofolate reductase gene (MTHFR). A prospective evaluation of oral mucositis in relation to the C677T MTHFR polymorphism was done. Also, the influence of oral health condition (presence of dental plaque and gingival inflammation) with the incidence of oral mucositis was analyzed. A cohort of 97 patients (35 allogeneic-study group and 62 autologous-control group) with median age of 41.5 years was evaluated. Conditioning regimen comprised busulfan and melphalan or becenum based conditioning regimen (BEAM becenum, etoposide, cytarabin and melphalan. GVHD prophylaxis comprised cyclosporine A plus short course of methotrexate in allogeneic transplantation. No rescue with folinic acid was done in the methotrexate administration. Results showed that C677T polymorphism was not significant in the study group compared with control group in predicting incidence and severity of oral mucositis. However, the incidence and severity of oral mucositis was influenced by oral health condition. In conclusion, C677T MTHFR polymorphism was not related to oral mucositis, but oral health status was an important factor in developing mucositis. These findings reinforce the importance of a dentist in the multiprofessional team to assist these patients.

RESUMO BALDISSERA, J.L.C. Avaliação das diferentes metodologias de realização do ensaio clonogênico e validação do método de criopreservação e ressuspensão do sangue de cordão umbilical e placentário criopreservado. 2015, 78 f. Dissertação. Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto, Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2015. O sangue de cordão umbilical e placentário (SCUP) tem sido utilizado como fonte de célulastronco hematopoéticas (CTHs) para transplante. A qualidade desse produto pode ser afetada durante as várias etapas do seu processamento. Neste estudo, foi avaliada a melhor metodologia de preparo da amostra para a realização do ensaio clonogênico (pura, diluída ou lavada) e validado o método de criopreservação e de ressuspensão das bolsas de SCUP. Foi avaliada também a funcionalidade da enzima aldeído desidrogenase (ALDH) como método para determinar a função das CTHs do SCUP, em 15 unidades criopreservadas pelo Laboratório de Criobiologia e Terapia Celular do Centro de Hematologia e Hemoterapia de Santa Catarina (HEMOSC). As unidades foram descongeladas em quatro etapas. O conteúdo dos segmentos e da bolsa foi coletado e ressuspenso com solução de albumina 5%, ACD 5% e solução fisiológica. A suspensão celular obtida foi utilizada para realização do ensaio clonogênico, avaliação da viabilidade celular, quantificação das células nucleadas (CN), CD34+ e das ALDH br . Os parâmetros tempo, custo e o resultado do ensaio clonogênico, utilizados para avaliar a metodologia, indicaram que a suspensão celular diluída é o melhor método a ser utilizado para a realização do ensaio clonogênico. A quantificação das CN e das células CD34+ totais pré-criopreservação e pós-criopreservação/descongelamento foi 8,3 (±1,9) x 10 8 e 8,2 (±2,0) x 10 8 (p = 0,3388) e 3,3 (±2,7) x 10 6 e 3,2 (±2,1) x10 6 (p = 0,4455), respectivamente. A quantificação das CN e das células CD34+ viáveis pré-criopreservação e pós-criopreservação/descongelamento foi 8,1 (±1,9) e 6,3 (±1,7) x 10 8 (p < 0,0001) e 3,27 (±2,0) x 10 6 e 2,8 (±1,8) x 10 6 (p = 0,0063), respectivamente. A porcentagem de células nucleadas e CD34+ viáveis no segmento proximal e na bolsa de 20 mL foi, respectivamente, 66,3 (±11,8) e 75 (35-93); 76,5 (±11,6) e 89 (75-100). No ensaio clonogênico foi observado crescimento médio de 31,8 (±7,6) unidades formadoras de colônias granulócito-macrófago (CFU-GM) x 10 5 CN plaqueadas obtidas da bolsa pós-criopreservação/descongelamento. Não foi encontrada correlação entre as células ALDH br /CD45 + viáveis e a quantificação das CFUGM ou das células CD34+ viáveis da bolsa pós-criopreservação/descongelamento. O coeficiente de correlação entre as células nucleadas e as células ALDEFLUOR bright da bolsa e do segmento pós-criopreservação/descongelamento foi (r) = 0,9399 com p < 0,0001 e (r) = 0,5478 com p = 0,0426, respectivamente. Foi encontrada correlação entre quantificação das células CD34+ e das CFU-GM da bolsa e do segmento pós-criopreservação/descongelamento. Esses dados indicam que o método utilizado para a realização da criopreservação e o descongelamento das unidades de SCUP encontra-se validado, e que o segmento pode ser utilizado como uma ferramenta de controle de qualidade para a seleção da unidade de SCUP para transplante. Palavras-chave: Validação. Sangue de cordão umbilical e placentário. Aldefluor. Célulastronco hematopoéticas. / ABSTRACT BALDISSERA, J.L.C. Evaluation of different methods of performing clonogenic assay and validation of the method of cryopreservation and resuspension of cryopreserved umbilical cord and placental blood. 2015. 78 f. Master Dissertation. Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto, Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2015. Umbilical cord and placental blood (UCPB) has been used as a source of hematopoietic stem cells (HSCs) for transplant. The quality of this product may be affected during the various stages of processing it. In this study, the author reviewed the best preparation methodology for performing the clonogenic assay (pure, diluted or washed) and validated the method of cryopreservation and resuspension of UCPB bags. The author also evaluated the functionality of the aldehyde dehydrogenase enzyme (ALDH) as a method to determine the function of umbilical cord and placental blood HSCs, in 15 cryopreserved units by the Laboratory of Cryobiology and Cell Therapy of the Center for Hematology and Hemotherapy of Santa Catarina (HEMOSC). The units were thawed in four steps. The content of the segments and the bag was collected and resuspended in a 5% albumin solution, 5% acid ci trate dextrose and saline solution. The cell suspension obtained was used to conduct the clonogenic assay, the assessment of cell viability, the quantification of nucleated cells (NC), CD34 + and ALDH br . The parameters of time, cost and the result of the clonogenic assay, used to evaluate the methodology, indicated that the diluted cell suspension is the best method to be used when performing a clonogenic assay. The quantification of the nucleated cells (NC) and the total CD34+ cells pre-cryopreservation and post-cryopreservation/thawing was 8,3 (±1,9) x 10 8 and 8,2 (±2,0) x 10 8 (p = 0,3388) and 3,3 (±2,7) x 10 6 and 3,2 (±2,1) x10 6 (p = 0,4455), respectively. The quantification of the NC and CD34+ viable cells pre-cryopreservation and post-cryopreservation/thawing was 8,1 (±1,9) and 6,3 (±1,7) x 10 8 (p < 0,0001) and 3,27 (±2,0) x 10 6 and 2,8 (±1,8) x 10 6 (p = 0,0063), respectively. The percentage of viable nucleated cells and CD34+ viable cells in the proximal segment and in the 20mL bag was 66,3 (±11,8) and 75 (35-93); 76,5 (±11,6) and 89 (75-100), respectively. In the clonogenic assay an average growth of 31,8 (± 7,6) colony-forming granulocyte-macrophage units (CFUGM) x 10 5 NC plated, obtained from the post-cryopreservation/thawing bag was observed. No correlation between the ALDH br /CD45 + viable cells and the quantification of CFU-GM or CD34+ viable cells obtained from the bag post cryopreservation was found. The coefficient of correlation between nucleated cells and ALDEFLUOR bright cells from the bag and segment after cryopreservation were (r) = 0, 9399 with p < 0, 0001 and (r) = 0, 5478 with p = 0,0426, respectively. A correlation between quantification of CD34+ cells and CFU-GM bag and segment cells after cryopreservation/thawing was found. This data indicates that the method used to perform the cryopreservation and thawing of the UCPB unit has been validated, and that the segment can be used as a tool for quality control when making the selection of UCPB for transplant. Keywords: Validation. Umbilical cord and placental blood. Aldefluor. Hematopoietic stem cells.

O saco vitelino é o único anexo embrionário presente em todas as espécies dos embriões vertebrados, répteis, aves e mamíferos. Em mamíferos domésticos o saco vitelino é inicialmente grande, pois nestas espécies ele é transitório. Após a implantação, surge no mesênquima lateral à notocorda agrupamentos de células, denominados ilhotas sanguíneas, que representam os progenitores dos sistemas vascular e hematopoético: os hemangioblastos. Os hemangioblastos centrais das ilhas sanguíneas formam as primeiras células-tronco hematopoéticas, enquanto os hemangioblastos periféricos se diferenciam em angioblastos, os precursores dos vasos sanguíneos. O desenvolvimento inicial da atividade hematopoética no saco vitelino conduz a hipótese de que esse tecido é o local primário de desenvolvimento hematopoético e que as células-tronco derivadas dele semeiam os outros sítios intraembriônicos. Foi possível observar nas análises microscópicas que realmente existe uma relação entre ambas linhagens. Nas análises de expressão gênica, alguns genes expressos pelo hemangioblasto apresentaram alta expressão nas análises D+0 e outros genes também específicos do hemangioblasto, porém em estágios secundários de diferenciação como os encontrados na região aórtica, a nível de endotélio hemogênico apresentaram altos níveis de expressão após 3 dias em cultivo. Concluímos portanto, que o saco vitelino por ser o local primário de formação das células sanguíneas e endoteliais nos estágios iniciais da embriogênese, por serem primitivas e, portanto não expressarem marcadores de células maduras na sua superfície, tornam estas células uma importante fonte de células-tronco relevante para a Terapia Celular para hemofilia e muitas outras doenças humanas. / The yolk sac is the single attachment embryo present in all species of vertebrate embryos, reptiles, birds and mammals. In domestic mammals the yolk sac is initially large, since these species it is transient. After implantation, appears in the lateral mesenchyme to the notochord cell clusters, called \"blood islands\" that represent the progenitors of vascular and hematopoietic systems: the hemangioblasts. The central islands hemangioblasts form the first blood hematopoietic stem cells, while peripheral hemangioblasts, the angioblastic differentiate into the precursors of blood vessels. The initial development of the yolk sac hematopoietic activity leads to the hypothesis that this tissue is the primary site of development and that hematopoietic stem cells derived from them sow other intraembryos sites. It was observed in the microscopic analysis that there is indeed a relationship between the two lineages. In the analysis of gene expression, some genes expressed by hemangioblasts showed high expression in D+0 and other specific genes also hemangioblasts, but in secondary stages of differentiation as found in the aortic region, the level of hemogenic endothelium showed high levels of expression after 3 days in culture. We therefore conclude that the yolk sac to be the primary site of formation of blood and endothelial cells in the early stages of embryogenesis, for its cells be primitive and therefore do not express markers of mature cells on the surface, these cells become an important source of cells relevant to stem cell therapy for hemophilia and many other human diseases.

O transplante de células- tronco hematopoéticas (TCTH) é uma modalidade terapêutica capaz de reconstituir os sistemas hematopoético e imunológico em uma variedade de doenças malígnas e não malígnas. O TCTH é um procedimento agressivo, que pode tanto recuperar a vida do paciente quanto conduzí-lo a óbito. Além das vivências e angústias dos pacientes, considera-se o estresse dos profissionais. A equipe de saúde trava uma luta incessante por esses pacientes. Não conseguir evitar ou adiar a morte, ou mesmo aliviar o sofrimento, pode trazer ao profissional do TCTH a vivência de seus limites, de sua impotência e de sua finitude. Esta pesquisa qualitativa objetivou conhecer o significado da morte dos pacientes para os profissionais da Unidade de Transplante de Células-Tronco Hematopoéticas de um Hospital Oncológico. Trata-se de um estudo clínico-qualitativo realizado sobre amostra intencional (fechada por saturação e variedade de tipos) de oito profissionais de saúde (médico, enfermeiro, técnico de enfermagem, psicólogo, fisioterapeuta, nutricionista, assistente social, cirurgiã dentista) de uma unidade de TCTH de um hospital especializado em tratamento oncológico. Foram realizadas entrevistas semidirigidas com questões abertas. O material transcrito foi submetido à análise qualitativa de conteúdo e organizado em três temas: vinculação com os pacientes, luta pelo tratamento e sentimentos envolvidos nessa relação. Os profissionais demonstraram que se vinculam aos pacientes durante o tratamento do transplante, apresentando a vivência do luto após sua perda. Descreveram que sofrem quando há agravamento do quadro clínico dos pacientes, quando verificam processos lentos de morte e quando o sofrimento dos pacientes se torna muito intenso. Para esses profissionais, a morte dos pacientes gera sentimentos de pesar, injustiça, alívio, cobrança quanto aos limites da assistência, choque, medo e impotência. A proximidade dos profissionais de saúde junto aos pacientes do TCTH é prolongada e pode acarretar implicações emocionais na equipe. Evidencia-se a necessidade de se abordar a temática da morte e do luto nas unidades de TCTH de forma a acolher os sentimentos e as angústias dos profissionais, promover a divulgação e a consolidação das abordagens de intervenção nesse contexto. / The hematopoietic stem-cell transplantation (HSCT) is a therapeutic modality capable of reconstituting the hematopoietc and immune systems in a variety of malignant and non malignant diseases. The HSCT is an agressive procedure, wich can either restore the patient´s life or lead him to death. In addition to the experiences and anxieties of patients, it is the feelings of professionals. The health team waged a ceaseless struggle for these patientes. Can not avoid or postpone death, or even alleviate suffering, can bring the professional experience of HSCY to the edge, his impotence and his finitude. This qualitative study aimed to know the meaning of death of patients for professionals in the Unit of Hematopoietic Stem Cells Transplant in a Cancer Hospital. This is a clinical-qualitative study carried out on an intentional sample (selected through saturation an variety os types) of eight professionals (doctor, nurse, practical nurse, psychologist, physiotherapist, dietitian, social worker and dentist) of an HSCT unit os a hospital specializing in cancer treatment. Semi structured interviews were conducted with open questions. The transcripts were subjected to qualitative content analysis and organizes into three themes: the link with the patients, the fight for treatment and feelings involved in this relationship. The professionals showes that bind to patients during the treatment of transplantation, presenting the experience of mournig after his loss. Reported the suffer when there is worsening of clinical symptoms of patients when they check the slow process of death and suffering of patients becomes intense. For these professionals, the patient´s death generates fellings of mournig, injustice, relief, recovery and limits of care, shock, fear and powerlessness. The proximity of health professionals with patients of HSCT is prolonged and may cause emotional implications on the team. This study highlights the need to adress the theme of death and mourning in HSCT units in order to accommodate the fellings and anxieties of professionals, promote the dissemination and consolidation of approaches to intervention in that context.