Orientador: Elenice Aparecida de Moraes Ferrari / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-24T19:42:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Canova_Fernando_D.pdf: 2567655 bytes, checksum: 90b1604e178613eecc7fb38539152db1 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: A memória espacial tem importante valor para a sobrevivência do organismo. Está relacionada com sua habilidade em utilizar informações que possibilitam a formação de mapas espaciais de acordo com a relevância das relações entre as pistas ambientais. A memória espacial envolve alterações plásticas no hipocampo de roedores e de aves, dentre essas a indução da transcrição de genes de expressão imediata, tais como o zenk, que regula a expressão de inúmeros outros genes e proteínas. O gene zenk atua na regulação da expressão da proteína Sinapsina. A expressão de sinapsinas também parece estar relacionada com mecanismos sinápticos mediados por receptores GABAB. O presente trabalho teve como objetivo avaliar, em pombos, a aprendizagem, a consolidação e a persistência da memória espacial em situação de escolha alimentar. A plasticidade neural foi investigada pela análise da imunorreatividade para as proteínas Zenk e Sinapsina I no hipocampo. Foram realizados dois experimentos com pombos (Columba livia): No Experimento I foi avaliada a aprendizagem e memória espacial em animais submetidos ao treino de escolha alimentar em 2 ou 7 sessões de treino. Cada sessão teve 6 tentativas experimentais, numa arena circular com 4 comedouros onde apenas um tinha alimento. A resposta de escolha foi definida como orientar-se, aproximar-se e bicar um comedouro. Foi aplicado também o teste de estratégia espacial, que consistiu em 1 sessão, com 3 tentativas experimentais onde na terceira tentativa foram retirados os comedouros e os animais foram colocados na arena circular para análise do tempo de permanência no quadrante onde antes existia o comedouro com alimento. No Experimento II foram avaliados os efeitos do antagonista do receptor GABAB, faclofeno administrado (i.p) imediatamente após as sessões de treino. O teste de persistência da memória espacial foi realizado 7 dias após o treino. A análise imunoistoquímica foi utilizada para avaliação da expressão das proteínas Zenk e Sinapsina I no hipocampo. O número de escolhas corretas aumentou em função do treino, variando entre 50 e 88% na primeira e sétima sessões respectivamente (ANOVA, p < 0,001). O número de núcleos Zenk - positivos e células Sinapsina I - positivas aumentou no hipocampo de pombos treinados durante 7 sessões (ANOVA, p < 0,001). O tratamento com o inibidor do receptor GABAB teve um efeito facilitador nas sessões de treino em comparação com os grupos controles (ANOVA, p < 0,001). Os dados indicam que a experiência em escolha espacial desencadeia a ativação de mecanismos sinápticos que resultam na expressão de Zenk e Sinapsina I no hipocampo de pombos, os quais estão envolvidos na consolidação da memória espacial de escolha alimentar. Os efeitos do tratamento com faclofeno sugerem que o receptor GABAB participa destes mecanismos. Em conjunto os presentes dados demonstraram que o pombo é um modelo experimental importante para a análise de mecanismos de plasticidade neural no hipocampo que são conservados entre espécies de mamíferos e aves / Abstract: The spatial memory has important value for the organism's survival, because it is related with ability to acquire and use space information, enabling the formation of cognitive and spatial maps. The experience with the environment triggers behavioral, cellular and molecular changes in central nervous system that an essential to the formation and consolidation of spatial memory. Therefore, acquisition, consolidation and stability of spatial memory involve plastic changes in the hippocampus of rodents and birds, among these the induction of the expression of early gene transcription such as zenk gene which regulates the expression of numerous other genes and the proteins they control. The gene zenk acts in the formation of new memories and has a role in the regulation of the synapsin protein expression. The expression of synapsins also seems to be related with synaptic mechanisms mediated by the GABAB receptor. This study aimed to evaluate, in pigeons, consolidation and persistence of spatial memory in a situation of food location. The underlying neural plasticity was investigated through the analysis of immunoreactivity for Zenk and Synapsin I proteins in neurons of the hippocampus. Adult, male pigeons (Columba livia) were used in two experiments. Experiment I investigated learning and spatial memory during short (2 sessions) or long duration training (7 sessions). Sessions had 6 experimental trials and were conducted in a arena with 4 feeders. In each trial the bird was released at a different point of the arena, and the time between the release of the bird and the first feeder pecking response (latency of the choice response) was recorded. Testing for spatial strategy was conducted in the arena without any feeder and the time spent in each quadrant was analyzed. Experiment II analyzed the effects of the post-training administration of phaclofen on the consolidation and persistence of spatial memory. Testing of memory persistency occurred 7 days after the 7th training session. Immunohistochemistry of hippocampal tissue was used for the analysis of expression of Zenk and Synapsin I proteins. Number of correct choice increased across training, with values varying between 50 and 88% in the first and 7th session respectively (Anova, p < 0.001). Treatment with GABABantagonist had a facilitatory effect on choice performance which was indicated by lower latency values and higher accuracy values (Anova < 0.001). The values of Zenk positive and Synapsin I positive cells counting were higher in the hippocampus of pigeons that were trained during 7 days and in pigeons treated with phaclofen as compared to their respective controls (Anova p < 0.001). These data indicated that experience with spatial learning of food choice induced expression of Zenk and Synapsin I proteins in the hippocampus of pigeons during the consolidation of spatial memory. Post-training administration of phaclofen suggested a role of GABAB receptor in these experience-dependent synaptic mechanisms. The present results point to the pigeon as interesting animal model for the analysis of neuroplastic mechanisms involved with spatial memory, which are conservative across mammalian and birds species / Doutorado / Fisiologia / Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Orientadoesr: Patrícia Aline Boer, José Antônio Rocha Contijo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-21T03:17:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_AgnesdaSilvaLopes_M.pdf: 2796027 bytes, checksum: 870f793968de3a84abd8d4b40ecd4034 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: Estudos têm demonstrado que a deficiência de nutrientes durante a gravidez ou nos primeiros anos de vida pós-natal resultam em anormalidades estruturais no hipocampo da prole, bem como comprometimento cognitivo em animais com 16 semanas de vida. Na tentativa de analisar se a restrição protéica gestacional pode induzir a déficits de aprendizagem e perda de memória associada a alterações estruturais no hipocampo, realizou-se teste de water maze (MWM) e uma análise detalhada morfométrica da citoarquitetura dendrítica do hipocampo de ratos machos adultos. Além disso, analisamos no hipocampo dorsal e ventral a expressão e localização de receptores de mineralocorticóides (MR) e glicocorticóides (GR), angiotensina II receptor tipo 1 (AT1) e receptores específicos de serotonina (5HT1A e 5HT2A). No MWM não foram encontradas diferenças significativas entre os grupos LP e NP, em qualquer um dos parâmetros analisados no teste de memória espacial, sugerindo que tais funções de hipocampo não foram alteradas com a restrição proteica gestacional. No entanto, através da aplicação da técnica de Gogi-Cox realizamos a reconstrução dendrítica nos neurônios do hipocampo dorsal. Nossos resultados demonstram que a restrição proteica gestacional leva a uma diminuição do comprimento dos dendritos basais e no número de intersecções dos dendritos apicais de CA3. A citoarquitetura de CA1 e do giro denteado não foi alterada. O presente estudo revelou uma clara dissociação entre a resposta do teste comportamental e alterações de neurônios do hipocampo, como conseqüência da programação fetal. Encontramos diferentes padrões de expressão dos receptores analisados no hipocampo dorsal e ventral o que sugere que redução na expressão de GR e 5HT1A paralelamente a maior expressão de 5HT2A estão envolvidos no comportamento ansioso e que a significativa diminuição na expressão de AT1 pode ter um efeito protetor. Essas alterações neuroquímicas podem ter consequências importantes para comportamento de ansiedade e depressão. Nosso estudo não é capaz de responder se as alterações encontradas estão relacionadas com subdesenvolvimento no útero ou resulta de uma adaptação pós-natal para a fisiologia programada na vida adulta. Outros estudos devem ser feitos para responder essas questões / Abstract: Studies have demonstrated that maternal nutritional restriction during pregnancy or in early postnatal life results in hippocampus cognitive impairment and structural abnormalities in the 16-wk-old offspring. In an attempt to analyze whether gestational protein restriction might induce learning and memory impairment associated with structural changes in the hippocampus we carried out MWM test and a detailed morphometric analysis of dendritic cytoarchitecture of the hippocampus from male adult rats. In addition, we analyzed the dorsal and ventral hippocampal expression and localization of mineralo- (MR) and glucocorticoid (GR), type 1 angiotensina II receptor (AT1) and serotonin specific receptors (5HT1A and 5HT2A). By MWM we did not found significant differences between LP and NP groups, in any of the parameters analyzed, suggesting that such functions of hippocampus were not altered by gestational protein restriction. However, by applying 3-dimensional analysis of dendrites from the dorsal hippocampus, this study demonstrates that gestational protein restriction leads to decreases in total basal dendritic length and inapical intersections of CA3 pyramidal neurons. The dendritic architecture of CA1 and dentate gyros was unchanged. The current study revealed a clear dissociation between behavioral test response and hippocampal neuron changes as consequence of fetal programming. We found different patterns of dorsal and ventral expression of analyzed receptors and we suggests that reduced GR and 5HT1A and enhanced 5HT2A expression are involved in anxious behavior and that AT1 down regulation may has a protective effect. These neurochemical alterations may have important consequences for anxiety- and depressive-like behavior. Our study is not able to answer the question whether these alterations are related to in uteri underdevelopment or results from a postnatal adaptation to programmed physiology in adult life. Further time-course studies should be done to answer this question / Mestrado / Clinica Medica / Mestre em Clinica Medica

Orientadores: Li Li Min, Fernando Cendes / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-04T03:09:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bonilha_LeonardoFatorGouvea_D.pdf: 8420238 bytes, checksum: 016f0b30e07800517df57c5fc2672c09 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: A esclerose hipocampal (EH) é a alteração histológica mais comum em pacientes com epilepsia do lobo temporal medial (ELTM). A Ressonância Magnética (RM) de crânio possibilita a detecção in vivo de sinais associados à EH, permitindo que pacientes com EL TM reftatária à medicação sejam submetidos à ressecção cirúrgica do hipocampo para tratamento de crises epilépticas. As causas de reftatariedade à medicação e ao tratamento cirúrgico ainda são desconhecidas, porém supõe-se que um dos motivos seja a presença de lesão neuronal acometendo outras áreas cerebrais além do hipocampo. O uso da morfometria por RM permite avaliação do dano neuronal tanto no hipocampo como em outras estruturas cerebrais através da avaliação e quantificação da atrofia presente nestas estruturas. Para avaliação pormenorizada das estruturas cerebrais foi realizada a implementação e validação de um protocolo anatômico para mensuração da região mesial do lobo temporal, com uso de RM tridimensional de alta definição. Foi também definido um protocolo para volumetria automatizada baseada em voxel de todo o cérebro. Foi observado que o dano neuronal em pacientes com EL TM se estende além do hipocampo e acomete regiões que se conectam funcionalmente e anatomicamente ao hipocampo. Tál achado sugere que exista lesão abrangendo uma rede neuronal, o que pode ser responsável em conjunto pelas manifestações clínicas observadas nesses pacientes / Abstract: Hippocampal sclerosis (HS) is the most common histological finding in patients with media! temporal lobe epilepsy (MTLE). Magnetic resonance imaging (MRl) permits in vivo detection of signs that are associated to HS, permitting the surgical treatment for these patients. The causes of medical and surgical reftactoriness observed in patients with MTLE are still unknown. One possible explanation is the fact that the neuronalloss encountered in these patients spans over other brain areas beyond the hippocampus. The use of morphometric quantification of brain structures through MRI is a powerful tool to investigate the neuronalloss in the hippocampus and in other areas of the brain. In order to assess the neuronal damage in brain structures of patients with MTLE, we developed a protocol for manual MRI morphometry of the media! temporallobe structures. We also developed an automatic protocol to assess the concentration of gray matter in the whole brain of these patients through the use of Voxel Based Morphometry. We observed that patients with MTLE exhibit neuronal loss that is not restricted to the hippocampus, but affects di:fferent areas throughout the brain that are functionally and anatomica1ly connected to the hippocampus. These findings suggest that a lesion of a network of neural structures may be responsible for the clinical symptomatology exhibited by patients with MTLE / Doutorado / Neurologia / Doutor em Ciências Médicas

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Neurociências, Florianópolis, 2015. / Made available in DSpace on 2016-05-31T04:05:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 339614.pdf: 2590718 bytes, checksum: 1167194006e4630cfa0a4984aba90e64 (MD5) Previous issue date: 2015 / As proteínas cinases ativadas por mitógenos (MAPKs) representam uma família de serina/treonina cinases ativadas por fosforilação em resposta a sinais extracelulares que incluem ERK 1/2, JNK p54/p46 e p38MAPK. No sistema nervoso central (SNC) estas enzimas medeiam eventos associados ao desenvolvimento e neuroplasticidade. No período inicial do desenvolvimento pós-natal ocorrem alterações significativas na estrutura do cérebro e sinalização intracelular. No hipocampo de roedores as MAPKs têm sido apontadas como proteínas fundamentais na modulação do desenvolvimento neural e plasticidade sináptica. Apesar dessas evidências a ontogenia pós-natal das MAPKs em estruturas específicas, bem como o seu papel, em determinadas fases do desenvolvimento, para o estabelecimento de funções motoras e cognitivas no adulto tem sido pouco caracterizada. A compreensão do padrão de ativação das MAPKs durante o neurodesenvolvimento é essencial, uma vez que pequenas alterações na atividade dessas proteínas em janelas específicas do desenvolvimento podem implicar em alterações funcionais tardias. No presente estudo foi determinado, em uma primeira etapa, o perfil ontogenético da fosforilação e conteúdo total das MAPKs no hipocampo de ratos Wistar machos durante o período pós-natal (PN) 1-60. Para isso a fosforilação e o conteúdo total das MAPKs foram avaliados por western blotting nas idades: PN1, PN4, PN7, PN10, PN14, PN21, PN30 e PN60. Os resultados foram expressos como percentual relativo à PN1 e demonstraram: (1) aumento significativo na fosforilação de p38MAPK de forma bimodal em PN4 e PN10-60; (2) aumento na fosforilação de ERK1 (PN4) e ERK2 (PN14) dependente da idade; (3) variação do conteúdo total de JNKp54 com perfil similar ao da ativação de p38MAPK; 4) ausência de variação na taxa de fosforilação de JNK p54/p46 nas idades analisadas. Em uma segunda etapa foi determinado o papel da atividade de ERK 1/2 durante o desenvolvimento em relação às alterações comportamentais, da estrutura sináptica e na proliferação celular hipocampal na vida adulta do animal. Para isso, foi utilizado um protocolo de inibição de MEK/ERK com U0126 (5 mg/kg; i.p.) durante um período crítico de sinaptogênese (PN7-14). Os resultados mostraram que o tratamento com o U0126 foi efetivo, pois foi observado inibição significativa da fosforilação de ERK 1, avaliada no hipocampo em PN7 e 6 h após a administração do inibidor. Adicionalmente, demonstraram que o tratamento com U0126 em PN7-14, quando comparado ao controle (DMSO 1%), tem consequências relevantes na vida adulta dos animais que incluem: (i) modificações na estrutura sináptica no hipocampo em PN30, com diminuição do diâmetro da densidade pós-sináptica e no número de vesículas no terminal pré-sináptico; (ii) danos permanentes na memória de curta duração; (iii) diminuição na proliferação celular analisado pela quantidade de células positivas para Ki-67 no giro denteado do hipocampo; e (iv) aumento na expressão de GFAP no hipocampo dos ratos quando comparado ao grupo controle (DMSO 1%). Em conjunto os resultados mostram a existência de um perfil específico de atividade das MAPKs durante o desenvolvimento pós-natal de ratos e sugerem que alteração da atividade dessas enzimas, por fatores ambientais diversos, podem acarretar alterações funcionais e estruturais permanentes do SNC.<br> / Abstract : The mitogen-activated protein kinases (MAPK) represent a family of serine/threonine kinases activated by phosphorylation in response to extracellular signals that includes ERK 1/2, JNK p54/p46 and p38MAPK. In the central nervous system (CNS), these enzymes mediate events associated with development and neuroplasticity. The early postnatal development is characterized by significant changes in brain structure, and intracellular signaling. In the hippocampus of rodents MAPKs have been identified as key proteins in the modulation of neural development and synaptic plasticity. Despite these evidences, studies characterizing the postnatal ontogeny of MAPKs in specific structures in the early periods of postnatal development in rodents are scarce. Thus, understanding the pattern of MAPK activation during brain development is critical, since minor changes in the activity of these proteins in specific developmental windows can result in later functional disorders. Accordingly, our study initially determined the profile of phosphorylation and total content of MAPKs in the hippocampus of male Wistar rats during the postnatal period (PN) 1-60. In order to target this aim MAPKs were evaluated by western blotting at ages: PN1, PN4, PN7, PN10, PN14, PN21, PN30 and PN60. The results were expressed as percentage related to PN1 and demonstrated: (1) significant increment in phosphorylation of p38MAPK displayed in two peaks one PN4 and a second at PN10-60; (2) age dependent increase in the phosphorylation of ERK1 (PN4) and ERK2 (PN14); (3) change in the total content JNKp54 with similar profile to that of p38MAPK activation; (4) no variation in the content of JNKp46 nether in the rate of phosphorylation of JNK p54/p46 in the ages analyzed. In a second stage we determined the role of ERK 1/2 activity during development regarding changes in synaptic structure, behavioral and cellular proliferation in the adult life. For this, rats were treated in the developmental period PN7-14 with the MEK/ERK inhibitor U0126 (5 mg/kg; ip). The results showed that the treatment with U0126 was effective, since it was detected a significant inhibition of ERK 1 phosphorylation, evaluated at PN7 and 6 h after the administration of the inhibitor. Moreover, the results demonstrated that the treatment with U0126 at PN7-14, as compared to the control (DMSO 1%), bring consequences for adulthood that include: (i) changes in hippocampal synaptic structure at PN30, decreasing the diameter of postsynaptic density and the number of vesicles in the presynaptic terminal; (ii) permanent damage in short term memory; (iii) a decrease in cell proliferation assessed by the number of cells positive for Ki-67 in the dentate gyrus of the hippocampus); and (iv) increased expression of GFAP in the hippocampus of rats compared with the control group (1% DMSO). Taken together the results show a specific profile of MAPKs activity during the postnatal development of rats and suggest that alteration of the activity of these enzymes by environmental factors may cause permanent functional changes in the CNS.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:04Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-02-04Bitstream added on 2014-06-13T20:41:17Z : No. of bitstreams: 1 amaral_vcs_dr_arafo.pdf: 3128795 bytes, checksum: 3d66997069eddcbbbf04cf4e7e70700f (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Quando os animais são confrontados com estímulos ambientais ameaçadores como a exposição ao predador ou estímulos como altura, iluminação e estímulos nociceptivos, exibem reações de defesa coordenadas e específicas. Nas últimas décadas, observa-se um crescente interesse pela utilização de estímulos naturalísticos para o estudo das bases neurais de emoções como o medo e ansiedade. Nesse contexto, o teste de exposição ao rato (RET), um novo modelo etológico de interação presa-predador, utilizando camundongos (presa) e ratos (predador), foi desenvolvido para avaliar a expressão de diferentes comportamentos defensivos na presa. Entretanto, poucos estudos foram conduzidos com esse modelo no intuito de investigar as bases neurais das respostas defensivas de camundongos expostos ao rato. Adicionalmente, evidências da literatura destacam que o hipocampo ventral (HV) e o complexo amidalóide (CA) parecem contribuir diferencialmente na modulação de respostas defensivas frente a estímulos proximais (predador) ou potenciais. Assim, o presente estudo foi conduzido para investigar o papel do HV e do CA nas respostas defensivas de camundongos exibidas diante do predador (rato) e do contexto associado ao predador. Para tal, o presente estudo foi dividido em quatro etapas. Na primeira delas, investigamos se o estresse da exposição ao predador no RET altera a secreção de corticosterona em camundongos e determinamos a magnitude e a duração desta secreção. Na segunda etapa, avaliamos o papel do HV e do CA, através da injeção local do agonista de receptores GABAA muscimol (0,1 μg/0,1 μl), na mediação de respostas comportamentais defensivas de camundongos expostos ao RET (situação proximal) e comparamos com aquelas apresentadas durante a exposição ao labirinto em cruz elevado (LCE - situação potencial). Subsequentemente, investigamos se camundongos expostos... / When animals are confronted with environmental threatening situations such as exposure to a predator as well as to height, high illumination and nociceptive stimuli they exhibit defensive behaviors. Over the past decades there has been a growing interest by the neuroscientists in the use of naturalistic stimuli to the study of the neural systems of the emotions such as fear and anxiety. In this context, the Rat Exposure Test (RET) which is a new ethological model of prey-predator interaction using mice (prey) and rats (predator) was developed in order to evaluate the expression of different defensive behaviors in the prey. However few studies using this model have been carried out with the objective of investigating the neural systems of the defensive behaviors in mice exposed to rats. In addition, evidence in literature has shown that the ventral hippocampus (VH) and the amygdaloid complex (AC) contribute differentially in the modulation of defensive behaviors during exposure to either potential or immediate stimuli (predator). Thus, the present study was aimed at investigating the role of VH and AC in the modulation of defensive behaviors of mice when exposed to predators (rats) as well as the predatory context. The experiment comprised four parts: (i) to investigate both whether stress regarding the exposure to the predator alters the corticosterone secretion in mice and to determine the magnitude and the duration of this secretion; (ii) the role of VH and AC was evaluated through local microinjection of the GABAA receptor agonist muscimol (0,1 μg/0,1 μl) in the modulation of defensive behavioral responses of mice exposed to RET (proximal aversive situation). The responses then were compared to those presented during to the exposure to the elevated plus-maze (EPM - potential aversive situation); (iii) to investigate whether mice exposed to natural predator (rat) in RET exhibit... (Complete abstract click electronic access below)

Os endocanabinóides (ECs) são neuromoduladores lipídicos que são produzidos por demanda tendo ação retrógrada. Existem duas moléculas que são atualmente reconhecidos como os principais ECs, a anandamida (AEA) e 2-araquidonoilglicerol (2-AG). O hipocampo sintetiza endocanabinóides e expressa seus receptores (CB1, CB2, TRPV1).Existe uma discrepância de efeitos dos 2 endocanabinóides na potenciação á longo prazo (LTP) hipocampal que pode ser um resultado da AEA agir tanto em receptores CB1 quanto em receptores TRPV1.Tendo em vista que a ativação dos receptores TRPV1 potenciam a LTP hipocampal, e não a inibem como é observado com a AEA, então qual seria o mecanismo de ação da AEA em inibir a LTP? Seria possível que a AEA estivesse preferencialmente inibindo a produção de 2-AG e assim inibindo a LTP? Para testar essa hipótese usamos inibidores farmacológicos da degradação hidrolítica do 2-AG e da AEA e também usamos antagonistas dos receptores TRPV1 e um animal knock-out para o receptor TRPV1. Camundongos machos BlackC57 e knockout(KO) para TRPV1 com idade entre 35 a 49 dias foram utilizados para obtenção de fatias do hipocampo (400µm), e a potenciação a longo prazo na via Schaffer-CA1 estudada. Não observamos efeito dos inibidores da degradação hidrolítica e oxidative dos endocanabinóides na LTP. A LTP do camundongo knock-out era inibida, porem o antagonismo farmacológico dos receptores TRPV1 não minetizou esse efeito. Já o agonista dos receptors canabinóides WIN55212-2 inibiu a indução da LTP. Concluimos que o aumento dos endocanabinóides pela inibição da sua degradação não foi eficiente em alterar a LTP hippocampal em nosso modelo experimental. Aprovação do CONCEA-FMRP- nº008/2017 / Endocannabinoids (ECs) are lipid neuromodulators that are produced on demand having retrograde action. There are two molecules that are currently recognized as the major ECs, anandamide (AEA) and 2-arachidonoylglycerol (2-AG). The hippocampus synthesizes endocannabinoids and expresses their receptors (CB1, CB2, TRPV1). There is a discrepancy of endocannabinoid effects on hippocampal long term potentiation (LTP) which may be a result of AEA acting on both CB1 and TRPV1 receptors. Given that the activation of TRPV1 receptors potentiate hippocampal LTP, and do not inhibit it as observed with AEA, then what would be the mechanism of action of AEA in inhibiting LTP? Was it possible that AEA was preferentially inhibiting 2-AG production and thus inhibiting LTP? To test this hypothesis, we used pharmacological inhibitors of the hydrolytic degradation of 2-AG and AEA and also used TRPV1 receptor antagonists and a knock-out animal for the TRPV1 receptor. Male BlackC57 mice and TRPV1 knockout (KO) aged 35 to 49 days were used to obtain hippocampal slices (400 ?m), and the long-term potentiation in the Schaffer-CA1 pathway studied). The LTP of the knock-out mouse was inhibited, but the pharmacological antagonism of TRPV1 receptors did not mimic this effect, whereas the WIN55212-2 cannabinoid receptor agonist inhibited the induction of LTP. We conclude that increasing the levels of endocannabinoids by inhibiting their degradation was not efficient in altering hippocampal LTP in our experimental model Approval of CONCEA-FMRP- nº 008/2017

O hipocampo dorsal (HD) é uma estrutura do sistema límbico que está envolvida em processos emocionais, de memória e aprendizado. Alem disso, o HD também exerce influência sobre a atividade autonômica. Durante situações aversivas pode se observar tanto respostas autonômicas (aumento da pressão arterial, frequência cardíaca e queda da temperatura cutânea) quanto comportamentais. O HD está envolvido com diversas alterações associadas a reações defensivas e apresenta conexões com diversas estruturas que modulam essas respostas, fazendo parte de uma via responsável por modular as respostas durante situações aversivas. São observadas aumentos nas respostas autonômicas durante o estresse por restrição (ER). Durante a atividade do HD está aumentada. Além disso, é possível observar aumento dos níveis de glutamato no HD. A ativação de receptores glutamatérgicos do tipo NMDA no sistema nervoso central aumenta a síntese de óxido nítrico (NO) por ativação da isoforma neuronial da óxido nítrico sintase (nNOS). Além disso, esta interação, NMDA/NO, no HD parece ser importante nas reações defensivas. Portanto, no presente estudo nós observamos que a administração de glutamato no HD promove aumentos do sistema cardiovascular, similares a aqueles observados durante situações de estresse. Estas respostas cardiovasculares são associadas com um aumento da atividade simpática. Além disso, os efeitos do glutamato foram inibidos pela administração do AP7, um antagonista NMDA, do N?-Propyl-L-Arginine, um inibidor da nNOS ou do Carboxy-PTIO(S)-3-carboxy-4- hydroxyphenylglicine, um sequestrador de NO. Finalmente, a administração destas drogas foi capaz de reduzir as respostas autonômicas causadas pelo ER. Portanto, nossos achados mostram que o sistema glutamatérgico presente no HD esta envolvido com a modulação autonômica através de receptores do tipo NMDA e a ativação de nNOS. Além disso, esta via NMDA/NO está envolvida na modulação autonômica durante situações de estresse. / The dorsal hippocampus (DH) is a structure of limbic system that is involved in emotional, leaning and memories process. Moreover, the DH also exerts influence on autonomic activity. During aversive situations it is possible observes autonomic responses (increase in blood pressure, heart rate and decrease in cutaneous temperature) associated to defensive behavioral. The DH is involved with alterations associated to defensive reactions and presents connections with several structures which modulate that responses, making part of a pathway involved with behavior and autonomic responses associated with aversive situations. Increase of autonomics responses are observed during restraint stress (RS). During RS the DH activity is increased. Moreover, it is possible observe increases in glutamate levels in DH. In central nervous system the activation of NMDA glutamatergic receptors increases the nitric oxide (NO) synthesis by activate the neuronal isoform of nitric oxide syntase (nNOS). Moreover, this interaction, NMDA/ NO, in the DH appears to important in the defensive reactions. Therefore, in the present work we observed that administration of glutamate in the DH promotes increases of cardiovascular system, similar those observed during stress situation. These cardiovascular responses were associate with an increase of sympathetic activity. Also, the glutamate effects were inhibited by administration of AP7, a NMDA antagonist, N?-Propyl-L-Arginine, a nNOS inhibitor, or Carboxy-PTIO(S)-3- carboxy-4-hydroxyphenylglicine, a NO scavenger. Finally, the administration of these drugs were able to reduces the autonomic responses evoked by RS. Therefore, our findings showed that glutamatergic system present in DH are involved with autonomic modulation through NMDA receptors and nNOS activation. Moreover, this NMDA/ NO is involved with autonomic modulation during stress situation.

O nosso grupo tem investigado os efeitos da Clorfeniramina (CPA), antagonista H1, e da L-histidina (LH), uma droga precursora da síntese de histamina, sobre a ansiedade e a memória emocional. Diante disso, os objetivos desse estudo foram investigar os efeitos LH administrada i.p. e da CPA microinjetada no hipocampo dorsal sobre a ansiedade e a memória emocional de camundongos submetidos ao labirinto em cruz elevado (LCE). O experimento foi realizado em dois dias consecutivos. No primeiro dia (T1) 71 camundongos machos da cepa Suíço-Albino pesando 25-35g foram pré-tratados i.p. com salina (SAL) ou LH (500mg/Kg). Após duas horas, os sujeitos receberam microinjeção de SAL ou CPA (0,016nmol; 0,052nmol; 0,16nmol/0,1l) no hipocampo dorsal. Após cinco minutos, os animais foram expostos ao LCE por cinco minutos. Vinte quatro horas depois, o mesmo protocolo experimental foi adotado na reexposição (T2). Os animais foram distribuídos aleatoriamente em 8 grupos de acordo com o tratamento farmacológico: SAL/SAL (n=9), SAL/CPA1 (n=9), SAL/CPA2 (n=10), SAL/CPA3 (n=8), LH/SAL (n=10), LH/CPA1 (n=8), LH/CPA2 (n=8) e LH/CPA3 (n=9). As três doses de CPA microinjetadas no hipocampo dorsal não alteraram a porcentagem de tempo gasto nos braços abertos (%TBA) na exposição ao LCE: T1 SAL/CPA1 (46,13±4,45); SAL/CPA2 (47,59±4,89); SAL/CPA3 (44,30±6,65) quando comparados com o grupo controle SAL/SAL (35,84±2,77) e não alteraram o número de entradas nos braços fechados (EBF) SAL/CPA1 (8,56±1,06); SAL/CPA2 (9,70±1,10); SAL/CPA3 (9,38±1,25) - quando comparados com o grupo controle SAL/SAL (10,56±1,11). A administração i.p. de LH aumentou a %TBA em T1 para o grupo LH/SAL (59,79±4,71), quando comparado ao grupo controle SAL/SAL (35,84±2,77), mas não alterou o EBF: LH/SAL (9,20±1,78) e SAL/SAL (10,56±1,11). Os animais do grupo LH/CPA3 diminuíram %TBA (32,25±4,81) em T1 quando comparados com o grupo LH/SAL (59,79±4,71). Os animais do grupo SAL/CPA1 não apresentaram diminuição da %TBA em T2 (T1: 46,13±4,45; T2: 39,38±6,53). O mesmo foi observado para os sujeitos dos grupos LH/CPA2 (T1: 50,10±3,99; T2: 40,97±8,22) e LH/CPA3 (T1: 32,25±4,81; T2: 32,16±6,93). Nós concluímos que: a CPA microinjetada no hipocampo dorsal de camundongos não apresenta efeito sobre a ansiedade; a administração intraperitoneal de LH apresenta efeito ansiolítico em camundongos expostos ao LCE e que esse efeito é revertido pela maior dose de CPA (0,16nmol/0,1l); são necessárias maiores doses de CPA para que haja prejuízo na memória emocional de camundongos reexpostos ao LCE quando os níveis de histamina no hipocampo dorsal estão elevados. / Our group has been investigating the effects of Chlorpheniramine (CPA), a histaminergic H1 antagonist, and of L-Histidine (LH), a histamine precursor, on anxiety-related behaviors and emotional memory. Thus the aim of this study was to investigate the effects of LH i.p. injections and of dorsal intra-hippocampal microinjections of Chlorpheniramine (CPA) on anxiety-related behaviors and emotional memory in male mice using elevated plus-maze (EPM). The experiment was performed in two days. On the first day (T1) 71 male Swiss Albino mice of body weight 25- 35g were pre-treated with saline (SAL) i.p. or LH (500mg/Kg) i.p. After two hours they were treated with dorsal intra-hippocampal microinjections of SAL or CPA (0.016nmol; 0.052nmol; 0.16nmol/0,1l). Five minutes after intra-hippocampal microinjections the animals were exposed to EPM for 5 minutes. Twenty four hours later the same protocol was repeated (T2). The animals were randomly assigned to 8 groups based on drug treatment: SAL/SAL (n=9), SAL/CPA1 (n=9), SAL/CPA2 (n=10), SAL/CPA3 (n=8), LH/SAL (n=10), LH/CPA1 (n=8), LH/CPA2 (n=8) and LH/CPA3 (n=9). All three doses of intra-hippocampal microinjections of CPA did not change the percentage of time spent in the open-arms (%OAT) on T1 SAL/CPA1 (46.13±4.45); SAL/CPA2 (47.59±4.89); SAL/CPA3 (44.30±6.65) when compared to control group SAL/SAL (35.84±2.77) and did not change the enclosed arm entries (EAE) SAL/CPA1 (8.56±1.06); SAL/CPA2 (9.70±1.10); SAL/CPA3 (9.38±1.25) when compared to control group SAL/SAL (10.56±1.11). Intraperitoneal injections of LH increased %OAT on T1 on LH/SAL group (59.79±4.71), when compared to control group SAL/SAL (35.84±2.77), but not EAE LH/SAL (9.20±1.78) and SAL/SAL (10.56±1.11). Animals treated with LH and CPA3 (LH/CPA3) decreased %OAT (32.25±4.81) on T1 when compared to LH/SAL (59.79±4.71) group. SAL/CPA1 animals did not decreased %OAT on T2 (T1: 46.13±4.45; T2: 39.38±6.53). The same happened to LH/CPA2 (T1: 50.10±3.99; T2: 40.97±8.22) and LH/CPA3 (T1: 32.25±4.81; T2: 32.16±6.93) groups. Thus, we conclude that: dorsal intra-hippocampal microinjection of Chlorpheniramine has no effect on anxiety-related behaviors in male mice; intraperitoneal injection of L-Histidine has an anxiolytic-like effect in male mice exposed to elevated plus-maze, that is reversed by the higher dose of Chlorpheniramine (0.16nmol/0,1l); higher doses of CPA are necessary to impair emotional memory when the levels of hippocampal histamine are elevated.

Orientador: Flávia Lombardi Lopes / Resumo: A meningite se caracteriza pela inflamação da aracnóide, pia-máter e líquor; causando danos às estruturas corticais e subcorticais. As meningites bacterianas estão intimamente relacionadas ao nível de desenvolvimento socioeconômico do país e são consideradas endêmicas no Brasil. Apesar dos esforços para o desenvolvimento de medicamentos e vacinas, a doença ainda possui altos índices de morbidade. Ela ocorre quando bactérias atravessam barreiras de proteção do corpo e alcançam o sistema nervoso central, desencadeando uma resposta imunológica. Sabe-se que durante o curso da doença os níveis de homocisteína do líquor aumentam, promovendo desmielinização e danos neuronais, e que a vitamina B12 é um tratamento utilizado para diminuir danos. Os microRNAs (miRNAs) são instrumentos de resposta fisiológica, tendo sua expressão modificada em diferentes tecidos, em decorrência de diferentes estímulos fisiológicos e patológicos. Estão associados ao controle da expressão de diferentes mediadores inflamatórios e sua ausência é capaz de causar danos severos a resposta imune. Considerando a importância dos miRNAs para regulação de processos imunes o presente estudo visou elucidar os padrões de expressão dos miRNAs durante o processo inflamatório da meningite pneumocócica (MP), bem como observar esses padrões em resposta ao tratamento adjuvante da doença com vitamina B12. Observamos um total de 37 miRNAs diferencialmente expressos, a infecção regulou positivamente 22 deles, e outros 7 negativ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Meningitis is characterized by an arachnoid, pia mater and cerebrospinal fluid inflammation; causing damage to the cortical and subcortical structures. Bacterial meningitis is closely related to the level of socioeconomic development of country and is considered endemic in Brazil. Despite efforts to develop drugs and vaccines, the disease still has high rates of morbidity and mortality. Occurring when bacteria cross body protection barriers and reach the central nervous system, triggering immune response. It is known that during disease course the the levels of homocysteine increase in cerebrospinal fluid, leading to demyelination and neuronal damage, and that vitamin B12 is a treatment used to reduce those damages. MicroRNAs (miRNAs) are instruments of physiological response, having their expression modified in different tissues, due to different physiological and pathological stimuli. They are associated with expression control of different inflammatory mediators and their absence is capable of causing severe damage to the immune response. Considering the importance of miRNAs in regulation of immune processes, the present study aimed to elucidate miRNA expression patterns during the inflammatory process resulting from pneumococcal meningitis (PM), and to observe these patterns in response to adjuvant treatment of vitamin B12 in infected rats. We observed a total of 37 differentially expressed miRNAs; the infection positively regulated 22 and negatively regulated 7 of them, ... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

A esclerose multipla (EM) é uma doença neurodegenerativa autoimune. As células da glia contribuem para o agravamento da EAE. Este trabalho objetiva mostrar a influência da dexametasona, na progressão da doença e nos défcits cognitivos da EAE. Foram utilizados camundongos C57BL/6, fêmeas, divididos em 4 grupos (CONT, DEX, EAE, EAE+DEX) imunizadas com MOG e Bordetella Pertussis, tratados com dexametasona (50mg/kg). Antes e após o aparecimento dos sintomas, os animais foram submetidos a testes comportamentais de campo aberto, labirinto em cruz elevado, contexto aversivo e reconhecimento de objetos. Os animais tratados com dexametasona (EAE+DEX) apresentaram diminuição do escore clínico em relação ao grupo EAE e apresentaram comportamento do tipo ansioso. Entretanto, o tratamento com DEX promoveu diminuição da memória de trabalho. Houve aumento marcadores inflamatórios e aumento do número de astrócitos no hipocampo do grupo EAE+DEX no 26o dia. Estes dados sugerem que a dexametasona diminui a aquisição da memória e aumenta o número e reatividade astrocitária na EAE. / Multiple sclerosis (MS) is an autoimmune neurodegenerative disease. The glial cells contribute to the aggravation of EAE. This work aims to show an influence of dexamethasone, the progression of the disease and the cognitive deficits of EAE. Female C57BL/6 mice were divided into 4 groups (CONT, DEX, EAE, EAE+DEX) immunized with MOG and Bordetella Pertussis, treated with dexamethasone (50mg/kg). Before and after the onset of symptoms, the animals were submitted to behavioral tests open field, the elevated plus maze, the aversive context and the object recognition test. The animals treated with dexamethasone (EAE+DEX) presented a decrease in the clinical score in relation to the EAE group and presented an anxious type behavior. However, treatment with DEX promoted a decrease in the work memory. There were increased inflammatory markers and increased number of hippocampal astrocytes from the EAE+DEX group on the 26th day. These data suggest that dexamethasone decreases memory acquisition and increases the astrocytic number and reactivity in EAE.