A esporotricose é uma micose subcutânea causada por espécies do complexo Sporothrix schenckii que acomete seres humanos e animais, principalmente os gatos. Desde 1998 o Instituto Nacional de Infectologia Evandro Chagas/Fiocruz no Rio de Janeiro vem acompanhando uma epidemia dessa doença envolvendo seres humanos, cães e gatos, onde as principais formas de transmissão são arranhadura, mordedura e/ou contato com o exsudato das lesões cutâneas de gatos doentes. O diagnóstico definitivo da esporotricose felina é obtido a partir do isolamento do Sporothrix sp. em meios de cultura, entretanto, o resultado desse exame pode demorar até quatro semanas, o que em algumas situações pode retardar o início do tratamento antifúngico. Os exames citopatológico, histológico e imuno-histoquímico são opções viáveis e mais rápidas para o diagnóstico dessa micose em gatos, principalmente em situações quando não é possível realizar o isolamento fúngico. O diagnóstico precoce da esporotricose felina é importante na implementação rápida do tratamento antifúngico, melhorando o prognóstico na maioria dos casos. O objetivo deste estudo foi avaliar e comparar as diferentes técnicas utilizadas no diagnóstico da esporotricose felina antes e durante o tratamento antifúngico. Na primeira etapa do estudo foram comparados os exames citopatológico (coloração pelo método panótico rápido), histológico (impregnação pela prata de Grocott) e imuno-histoquímico de 184 gatos no diagnóstico da esporotricose sem tratamento antifúngico prévio utilizando o cultivo fúngico como teste padrão de referência. Estruturas leveduriformes foram observadas em 160 (87,0%) casos no exame citopatológico, 168 (91,3%) na histopatologia e 163 (88,3%) na imunohistoquímica. A associação das três técnicas elevou a sensibilidade do diagnóstico para 98,3%, o que enfatiza a necessidade de sua implementação como ferramentas de rotina, sobretudo quando a cultura fúngica não está disponível. Na etapa seguinte, a carga parasitária e o isolamento de Sporothrix sp. das lesões cutâneas de 74 gatos foram avaliados mensalmente antes e durante o tratamento com itraconazol por um período de 12 semanas. A mediana da carga fúngica observada antes do início do tratamento antifúngico foi maior (pMW = 0,013) nos gatos nos quais foi observada a persistência da lesão (Med=98,6) em relação aqueles em que houve cicatrização (Med=15,0). A redução da carga fúngica ocorreu em todas as lesões estudadas, assim como a redução da positividade da cultura fúngica e do exame citopatológico. Estes resultados sugerem uma redução no potencial zoonótico dos gatos, enfatizando a importância do tratamento precoce como medida de controle. Adicionalmente, o isolamento do fungo e a presença de estruturas leveduriformes nas lesões de gatos com esporotricose podem ser fatores preditores da falência terapêutica, indicando a necessidade da implementação de alternativas terapêuticas. / Sporotrichosis is subcutaneous mycose caused by species of fungus from the Sporothrix schenckii complex and affects humans and animals, especially cats. Since 1998, the Instituto Nacional de Infectologia Evandro Chagas/Fiocruz in Rio de Janeiro has been describing in Rio de Janeiro an epidemic of sporotrichosis, involving humans, cats and dogs, with most of cases related to transmission through scratches, bites or contact with lesions from infected cats. The definitive diagnosis is based on the isolation of the fungus in culture; however, the results may take up to four weeks and postpone treatment outset. The cytopathology, histopathology and immunohistochemistry should be considered as rapid and accessible alternatives for the diagnosis in cats, especially when the fungal culture is not available. The early diagnosis of feline sporotrichosis is desirable for the prompt beginning of the antifungal treatment, improving the prognosis in most of the cases. The aim of this study was to evaluate and compare different techniques for the diagnosis of feline sporotrichosis before and during the treatment with itraconazol. In the first part of the study, cytopathological (Quick Panoptic), histopathological (Grocott silver stain) and immunohistochemical examinations were compared regarding the diagnosis of sporotrichosis in 184 cats without previous treatment, by using fungal culture as a reference standard. The yeast-like cells were observed in 160 (87.0%) cases by cytopathological examination, in 168 (91.3%) by histopathology and in 163 (88.3%) by immunohistochemistry. The combination of the three methods led to the diagnosis of 98.3% of cases, pointing to the need of their implementation as regular tools, notably when fungal culture is not available. In the second part of the study, the fungal burden and the isolation of Sporothrix sp. in cutaneous lesions of 74 cats were monthly evaluated before and during the treatment with itraconazole for twelve weeks. The median of the fungal load detected before the outse of the antifungal treatment was higher (pMW=0.013) in cats in which there was a persistence of the cutaneous lesion (Med=98.6) in comparison to those in which healing of the lesion was observed (Med=15.0). The decrease of the fungal burden occurred in all the lesions in this study as well as the reduction of the positivity of the fungal culture and the cytopathological examination. These results suggest a reduction in the zoonotic potential of cats and emphasize the importance of the early treatment as a control measure. In addition, the isolation of the fungus and the presence of yeast-like cells in lesions of cats with sporotrichosis during the treatment can be a predictor of treatment failure and should alert for the need of alternative therapeutic regimens.

Leprosy still constitutes a major problem of public health, in view of its prevalence, morbidity and mortality determined by its complications and its enormous social and economic impact. It is a chronic, infectious disease with long incubation period, caused by Mycobacterium leprae, required intracytoplasmic parasite that affects peripheral nerves and skin. Meet the histological pattern of injury is extremely important for the knowledge base, characterization and treatment of the disease. This research aimed to study the morphology and morphometry of collagen fibers of the extracellular matrix biopsy of patients with leprosy tuberculoid and lepromatous poles. For both experimental and descriptive research was carried out. A total of 20 paraffin blocks, biopsies of patients with leprosy. From these blocks were made in microtome histological sections serially to 5 mm thick, which were submitted to staining: hematoxylin-eosin and hematoxylin-picrosirius. Analyses were performed using images captured by video camera attached to a light microscope Olympus, with an increase of 100 X. From the images obtained from the slides stained with hematoxylin picrosírius- was performed morphometric analysis of collagen fibers through the software Image J®. The information collected was codified and entered into a database for statistical analysis. Significant differences were observed in the inflammatory infiltrate of default in the distribution of collagen fibers and collagen density between the polar forms of leprosy. The tuberculoid form is characterized by inflammatory infiltrate with multiple well-formed and defined granulomas, basically composed of lymphocytes and epithelioid macrophages. Intense inflammatory infiltrate is observed in lepromatous leprosy, distributed diffusely, formed by irregular plates with ill-defined boundaries, composed largely of foamy macrophages. The two poles of the disease, there is a predominance of type I collagen fibers arranged interlaced form. Type III collagen fibers are distributed evenly between the type I, but in less proportion. Type III collagen is more abundant in lepromatous than in tuberculoid form. The degree of collagenization is greater in tuberculoid leprosy compared to lepromatous pole of the disease. / A hanseníase ainda se constitui em um relevante problema de saúde coletiva, em vista de sua prevalência, morbidade e mortalidade determinadas por suas complicações e seu enorme impacto social e econômico. É uma doença crônica, infecciosa com período de incubação prolongado, causada pelo Mycobacterium leprae, parasita intracitoplasmático obrigatório, que afeta nervos periféricos e pele. Conhecer o padrão histológico da lesão é de extrema importância para a base do conhecimento, caracterização e tratamento adequado da doença. A presente pesquisa teve como objetivo estudar a morfologia e a morfometria das fibras colágenas da matriz extracelular de biópsia de indivíduos com hanseníase dos polos tuberculóide e virchowiano. Foram selecionados 20 blocos de parafina, biópsias de pacientes com diagnóstico de hanseníase. A partir destes blocos foram realizados no micrótomo cortes histológicos de forma seriada de 5 µm de espessura, os quais foram submetidos às colorações hematoxilina-eosina e picrosírius -hematoxilina. As análises foram realizadas através de imagens capturadas por câmera de vídeo acoplada a um microscópio de luz com um aumento de 100 X. A partir das imagens obtidas das lâminas coradas com picrosírius - hematoxilina, foi realizada a análise morfométrica das fibras colágenas através do programa computacional Image J®. As informações obtidas foram codificadas e digitadas em um banco de dados para tratamento estatístico. Foram observadas diferenças significativas no padrão de infiltrado inflamatório, na distribuição das fibras colágenas e densidade de colágeno entre as formas polares da hanseníase. A forma tuberculóide é caracterizada por infiltrado inflamatório com múltiplos granulomas bem formados e delimitados, constituídos basicamente por linfócitos e macrófagos epitelióides. Intenso infiltrado inflamatório é observado na hanseníase virchowiana, distribuido de forma difusa, formado por placas irregulares com limites mal definidos, compostas em grande parte por macrófagos espumosos. Nos dois polos da doença, há predominância de fibras de colágeno tipo I disposto de forma entrelaçada. Fibras de colágeno tipo III são distribuídas de forma homogênea entre as do tipo I, porém em proporção inferior. O colágeno tipo III é mais abundante na forma virchowiana do que na forma tuberculóide. O grau de colagenização é maior na hanseníase tuberculóide se comparado ao polo virchowiano da doença.

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2017-02-21T14:28:20Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) SILVIA_ROBERTA_SANTOS.pdf: 1500355 bytes, checksum: 1e02b5fad9ccef21b9e9af2f593d567c (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-21T14:28:20Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) SILVIA_ROBERTA_SANTOS.pdf: 1500355 bytes, checksum: 1e02b5fad9ccef21b9e9af2f593d567c (MD5) Previous issue date: 2016-02-29 / CAPES / Espécies vegetais que ocorrem na Caatinga estão submetidas ao clima semiárido que se caracteriza por altas temperaturas, baixa precipitação e elevadas taxas de transpiração, que favoreceram o desenvolvimento de adaptações morfoanatômicas, ecológicas e fisiológicas. Esse ambiente xérico abriga inúmeras plantas conhecidas como xerófitas, cujos caracteres xeromórficos estão envolvidos principalmente com o estresse hídrico. Na maioria das vezes, o estrato herbáceo, considerado efêmero, é negligenciado quanto à sua investigação em detrimento das espécies que se mantém na paisagem, como as arbustivas e arbóreas, tendo sua biologia pouco explorada e consequentemente pouco compreendida quanto às estratégias de sobrevivência em ambientes xéricos como a caatinga. Assim, esse trabalho objetivou caracterizar morfoanatomicamente espécies de herbáceas identificando caracteres adaptativos típicos e como estes podem ser influenciados pela dificuldade de obtenção de água motivada pela distância do curso de água em três áreas classificadas em: AA-curso de água ausente, AT-curso de água temporário, AP-curso de água permanente. As espécies estudadas apresentaram características xeromórficas típicas, as quais conferem vantagem adaptativa em ambientes semiáridos, tais como a presença de: cutícula espessa, parênquima paliçádico com várias camadas incluindo mesofilo isobilateral, um indumento denso marcado pela presença de muitos tricomas, cristais de oxalato de cálcio, aumento da região cortical radicular, variações na atividade cambial e densidade de elementos de vaso e fibras xilemáticas. O índice de plasticidade fenotípica apresentou maiores valores para as espécies perenes indicando ajustamento às condições ambientais. Entretanto, os caracteres xeromórficos sofrem poucas alterações significativas nas diferentes áreas estudadas, porém, esses parâmetros foram relevantes para compreender o comportamento das herbáceas no ambiente e podem servir de base para novos estudos envolvendo herbáceas e xerófitas de modo geral. No mais, aspectos como variações cambiais associados à ultraestrutura de organelas e parede celular de tecidos distintos, pode ser a chave para a compreensão de respostas à disponibilidade hídrica nas áreas aqui estudadas. / Plant species that occur in the Caatinga are subject to the semiarid climate characterized by high temperatures, low rainfall and high transpiration rates, which favored the development of morphoanatomic, ecological and physiological adaptations. This xeric environment covers numerous plants known as xerophytes, whose xeromorphic characters are mainly involved with water stress. In most cases, the herbaceous stratum, considered ephemeral, is neglected as its research to the detriment of species that remains in the landscape, such as shrub and tree, with its unspoilt biology and therefore little understood about the survival strategies in environments xeric such as Caatinga. So, This study aimed to feature morphological and anatomically herbaceous species identifying typical adaptive characters and how these can be influenced by the difficulty of obtaining water driven by the distance of the watercourse in three areas classified as: AA – no water course, AT- temporary water course and AP-permanent water course. The species present typical xeromorphic characteristics which confer adaptive advantage in semi-arid environments, such as the presence of: a thick cuticle, palisade parenchyma with multiple layers including isobilateral mesophyll, a dense indumentum marked by the presence of many trichomes, calcium oxalate crystals, increased root cortical region, variations in foreign exchange activity and density of vessel elements and xylem fiber. The phenotypic plasticity index shows higher values for perennial species indicating adjustment to environmental conditions. However, xeromorphic characters suffer few significant changes in the different areas studied, however, these parameters are relevant to understanding the behavior of herbaceous on the environment and provide the basis for new studies involving herbaceous and in general xerophytes. Therefore, aspects such as currency fluctuations associated with ultra organelles structure and cell wall distinct tissues, may hold the key to understanding responses to water availability in the areas studied here.

Submitted by Caroline Falcao (caroline.rfalcao@ufpe.br) on 2017-04-05T16:39:15Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) 2011-Tese-MoacyrRêgol.pdf: 2001004 bytes, checksum: 1fa7b5e19c232f34bd9c8735fac6c753 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-05T16:39:15Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) 2011-Tese-MoacyrRêgol.pdf: 2001004 bytes, checksum: 1fa7b5e19c232f34bd9c8735fac6c753 (MD5) Previous issue date: 2011-08-26 / Este trabalho objetivou analisar a expressão de Galectina=1(Gal=1), Galectina=3 (Gal=3) e ligantes de lectinas em ambientes hipóxicos e/ou privados de nutrientes em célula de câncer de mama e em biópsias tumorais. Para modelar o evento in vitro a linhagem celular de câncer de mama T47D foi submetida à hipóxia em câmara de hipóxia durante 24, 48 e 72h com ou sem privação de nutrientes. Os grupos controles (normóxia com ou sem nutrientes) foram mantidos em estufa de CO2. As biópsias tumorais de carcinoma ductal invasivo (CDI) foram divididas em dois grupos: um positivo e outro negativo para o marcador de hipóxia (CA IX) assim como as biópsias de carcinoma ductal in situ (CDIS) foram divididas em comedônicas/hipóxas e não=comedônicas/controle, para posterior comparação quanto aos parâmetros clínicos, histopatológicos e glicobiológicos. Os experimentos com T47D mostraram que a expressão de Gal=3 aumenta progressivamente quando submetida à hipóxia e privação de nutrientes durante 24, 48, 72h. As biopsias de CDI positivas para CA IX apresentaram uma marcação nuclear mais intensa que o grupo negativo e características tumorais mais agressivas como invasão linfonodal e ausência de Receptor de estrógeno. Gal=1 não foi expressa pelas células neoplásicas no modelo in vitro bem como nas biópsias, onde foi possível detectar positividade nas células do estroma associadas ao tumor. Quanto ao papel da Gal=3 na proteção a morte celular, utilizando=se citômetria de fluxo, observou=se que não houve correlação entre a inibição do domínio de reconhecimento a carboidratos da proteína e o aumento de morte celular. Entretanto, foi observada indução a morte para o anticorpo monoclonal M338, específico para o N=terminal de Gal=3, sendo esta marcação aumentada em até três vezes durante o aumento de morte celular em 48h e 72h de hipóxia e privação de nutrientes. A histoquímica com lectinas foi utilizada em amostras de CDIS com Con A, WGA e UEA=I e de CDI com L=PHA e SNA. Nos casos de CDIS as lectinas utilizadas reconheceram mais casos do grupo comedônico (hipóxico) que o não=comedônico. Ao passo que nas biópsias de CDI foi observado um aumento na sialilação assim como nas células T47D (in vitro) onde se pode avaliar que esta glicosilação não é de responsabilidade exclusiva de ST6GALNac. Nossos resultados indicam que ocorre uma glicosilação aberrante no ambiente hipóxico in vitro e in vivo associada a um fenótipo tumoral mais agressivo bem como sugere que Gal=3 participa da proteção contra morte celular e informativa para diagnóstico e prognóstico. / This study aimed to analyze the expression of Galectin=1, Galectin=3 and lectin ligands in hypoxic environments starved or not of nutrients in breast cancer cells and in tumour biopsies. In vitro experiments in T47D breast cancer cells were subjected to hypoxia in hypoxia chamber for 24, 48 and 72h with or without nutrients; control groups (in normoxia and nutrients supplied) were kept in CO2 incubator. Invasive ductal carcinoma (IDC) biopsies were divided into two groups: one positive and one negative for hypoxia marker Carbonic Anhydrase (CA IX); and Ductal Carcinoma in situ (DCIS) samples were divided in comedonecrosis/hypoxic or non=comedonecrosis/control groups, and then they were compared to clinical, histopathological and glycobiology aspects. Confocal microscopy, real=time PCR and western blotting showed that Galectin=3 expression was predominantly nuclear and increased progressively when subjected to hypoxia for 24, 48, 72h and nutrient starvation. CDI samples positive for hypoxia marker CA IX presented an intense nuclear staining in comparison to control group besides more aggressive tumour features as node positivines and absence of ER staining. Gal=1 was not expressed by neoplastic cells in cell model and biopsies, where it was possible to detect positivity in tumour=associated stroma. The evaluation of Gal=3 role in cell death protection using flow cytometry showed that there was no correlation between inhibition of Gal=3 carbohydrate recognition domain and the increase in cell death rate. However, it was observed that monoclonal antibody M338, specific to Gal=3 N=terminal, positivity increased with the increasing of dead cells after 48h and 72h under hypoxia and starvation. Lectin histochemistry for Gal=3 ligands or Gal=3=ligant complex preventing carbohydrates were investigated using Con A, WGA, PNA and UEA=I for DCIS and L=PHA, SNA and VVA for CDI. Results indicated that in CDIS the lectins used recognized more intensely the comedogenic/hypoxic group while in CDI samples were observed an increase in sialylation as well as in T47D cells indicating that ST6GALNac is not the only responsible for this event. Our results indicate that aberrant glycosylation occurs in hypoxic environments associated with a high aggressive tumour phenotype providing information of diagnostic and prognostic value. Results also suggest that Gal=3 participates in the protection of cell death by N=terminal and that sialylation in hypoxic environment is not mainly caused by N=glycosylation.

Orientador: Valeria Helena Alves Cagnon Quitete / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-05T09:34:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Carvalho_CesarAlexandreFabrega_D.pdf: 8130788 bytes, checksum: 3f9894f04fafdeae064bae417ac67424 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: Os efeitos nocivos da nicotina nos diferentes sistemas orgânicos foram relatados em diferentes estudos. Todavia, seus efeitos sobre o sistema genital masculino permanecem obscuros. Assim, o objetivo do presente estudo foi analisar as alterações histológicas, histoquimícas e ultra-estruturais associadas ao estudo morfométrico no lobo ventral da próstata de ratos submetidos à administração crônica de nicotina, estabelecer relações entre essas alterações e as doenças píOstáticas e avaliar os níveis de testosteíOna circülantes no soro. Vinte ratos machos Wistar (Rattus norvergicus) foram divididos em dois grupos experimentais: grupo I nicotina que recebeu 0,125mg /100g de peso corpóreo/diariamente de nicotina e o grupo II controle que recebeu solução fisiológica pela mesma via por 90 dias. Após o período experimental, os animais foram anestesiados e os pesos testiculares, da glândula de coagulação e vesícula seminal foram aferidos. Amostras do lobo ventral das próstatas provenientes dos diferentes grupos foram coletadas, processadas e submetidas às análises: histológica, histoquímicas e ultra-estruturais de transmissão e varredura. Os resultados mostraram que os pesos dos testículos, das vesículas seminais e das glândulas coaguladoras não diferiram significativamente entre os grupos experimentais. As células epiteliais secretoras do lobo ventral da próstata apresentaram-se atrofiadas, além da ocorrência de neoplasia intra-epitelial prostática (NIP), presença de micro-ácinos e diminuição da expressão da fosfatase ácida nas regiões supranuc1ear e apical. Também, foi observada desorganização das organelas envolvidas no processo secretor glandular. No estroma, houve aumento das fibras colágenas e reticulares, amplo pregueamento da membrana basal, células musculares lisas com fenótipo secretor. Assim, conclui-se que a nicotina promove drásticas alterações tanto no epitélio secretor como no estroma da próstata ventral, prejudicando o funcionamento da mesma. Além disso, conclui-se que a nicotina é um agente indutor de lesões pré-malignas podendo contribuir como um fator de risco para desenvolvimento de doenças na glândula prostática / Abstract: The harrnful effects of nicotine on different organ systems have been reported in various experimental and clinical studies. However, its effects on the male genital system remain obscure. Thus, the aim of the present study was to analyze the histological, histochemical and ultrastructural alterations, following by stereology, of the ventral lobe of the prostate of rats submitted to chronic nicotine administration. Also, it was established the relationships between these changes and prostate diseases. Twelve male Wistar rats (Rattus norvegicus) were divided in two experimental groups: group I (nicotine) in wich each rodent, received daily subcutaneously injections of 0.125 mg nicotinell 00 body weight and group II (control) whose rodents received only injections of physiologic saline by the same route for 90 days. Body weight, food and water intake were measured throughout the experimento At the end of the experimental period, the animals were anaesthetized and testicular, coagulation gland and seminal vesicle gland weights were determined. Samples of the ventral prostate obtained ITom the two groups were collected, processed and submitted for histological, histochemical and ultrastructural analyses by transmission and scanning electron microscopies. The results showed no significant differences in testicular, seminal vesicle and coagulation gland weights between the groups. In the nicotine group, the secretory epithelial cells of the ventral lobe of the prostate were atrophied, in addition to the occurrence of prostatic intraepithelial neoplasia, micro-acini and reduced expression of acid phosphatase in the supranuclear and apical cellular regions. Disorganization of organelles involved in the glandular secretory process followed by plasmatic membrane destructuring was also observed. The stroma showed increased collagen and reticular fibers, infolded basal membrane and smooth muscle cells which demonstrated secretory feature. In conclusion, nicotine caused drastic alterations not only in the secretory epithelium but also on the stroma of the ventral prostate lobe, compromising its function. Furtherrnore, nicotine also induced premalignant lesions in the prostatic gland, thus representing a risk factor for the deveIopment of prostate pathlogy / Doutorado / Anatomia / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Orientadores: Marilia de Moraes Castro, Luiza Sumiko Kinoshita / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-06T16:16:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rio_MariaCarolinaScatolindo_D.pdf: 12559404 bytes, checksum: b84a7169102130253e06c4af6c968547 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: A anatomia foliar de quatro espécies de Forsteronia que ocorrem em cerrados paulistas foi investigada com o objetivo de identificar caracteres morfo-anatômicos úteis para a identificação das espécies semelhantes em estádio vegetativo. Onze caracteres foliares foram levantados, dois macromorfológicos e nove anatômicos, permitindo diferenciar F. australis de F. glabrescens e F. pubescens de F. thyrsoidea. A anatomia das domácias e os coléteres sésseis e ramificados foram descritos pela primeira vez para órgãos vegetativos de Apocynaceae. A detecção de mucilagem na secreção dos coléteres foliares das quatro espécies confirma a identificação dessas estruturas. Os coléteres são marginais ou axilares, de acordo com a região em que se originam no primórdio foliar. Em ramos completamente desenvolvidos, os marginais são caducos e suas cicatrizes ocupam posição interpeciolar; os axilares são persistentes e posicionam-se sobre a nervura mediana na base da lâmina foliar. Em todos os tipos estruturais (padrão, séssil e ramificado), a secreção é produzida por uma epiderme em paliçada que reveste o eixo central parenquimático. Os coléteres marginais de F. glabrescens produzem inicialmente mucilagem, passando a secretar compostos fenólicos em uma segunda fase de secreção. O estudo histoquímico de ápices caulinares vegetativos de F. glabrescens indicou que as células da hipoderme secretora produzem uma mistura heterogênea de ácidos graxos e compostos fenólicos, enquanto o látex é uma emulsão de substâncias lipofílicas, incluindo lipídios neutros, ácidos graxos, compostos fenólicos e alcalóides. Provavelmente, a hipoderme e os laticíferos atuam em conjunto, protegendo o ápice vegetativo de radiação UV e do ataque de herbívoros no cerrado. As estruturas secretoras florais encontradas em F. australis, F. glabrescens, F. pubescens e F. velloziana foram: idioblastos; hipoderme e epiderme, laticíferos; apêndices apicais e epiderme da cabeça do estilete; coléteres calicinais, coléteres bracteolares (apenas em F. pubescens); e nectários. Em F. glabrescens, os idioblastos secretores, as células que constituem os apêndices da cabeça do estilete, a hipoderme de diferentes órgãos (anteras, lacínias da corola e do cálice, e ovário) e a epiderme do nectário produzem ácidos graxos e compostos fenólicos. Três tipos estruturais de coléteres (padrão, séssil ou ramificado) ocorrem indefinidamente distribuídos pela base do cálice. Os cinco nectários podem ser livres ou unidos dois a dois na base (e o quinto livre), ou uma estrutura anelar, dividida em cinco lobos apicais. O ginostégio é formado pela união dos estames com a cabeça do estilete, que é revestida por uma epiderme secretora em paliçada. Em F. glabrescens, a secreção é composta por polissacarídeos. A cabeça do estilete, 5-lobada, apresenta cinco projeções laterais adnatas ao conectivo pela cimentação das paredes das células epidérmicas de ambas as estruturas. A zona de adesão é dividida em duas partes, uma envolvida com a produção e acúmulo de secreção, e outra com o processo de adnação. Essas características do ginostégio, associadas à ocorrência de coléteres calicinais sésseis em Forsteronia, corroboram a exclusão do gênero da tribo Apocyneae e o seu reposicionamento em Mesechiteae. / Abstract: The leaf anatomy of four cerrado species of Forsteronia was investigated in order to determine characters that could help to identify individuals collected in vegetative stage. Eleven characters, two macromorphological and nine anatomical, were surveyed and are useful to differ F. australis from F. glabrescens and F. pubescens from F. thyrsoidea. Domatia and sessile and branched colleters were described for the first time in vegetative organs of species of Apocynaceae. The mucilage detection in the secretion of foliar colleters confirms the identification of these structures on the four species. The colleters are marginal or axilar, in agreement with the region of leaf primordia that they originate. In completely developed branches, the marginal colleters are deciduous and their traces are interpetiolar placed; the axilar colleters are persistent and they are placed upon the midrib, on the base of leaf blade. In all structural types (standard, sessile and branched), the secretion is produced by a secretory epidermis that surrounds the central core of parenchyma. The marginal colleters of F. glabrescens produce mucilage initially and become secretory of phenolic compounds on a second phase of secretion. The shoot apex histochemical analysis of F. glabrescents indicated that the secretory hypodermis produces a heterogeneous secretion containing fatty acids and phenolic compounds, while the latex is an emulsion of lipophilic substances including neutral lipids, fatty acids, phenolic compounds and alkaloids. Probably both the hypodermis and the laticifers protect the shoot apex from UV radiation and from herbivorous in the cerrado vegetation. The floral secretory structures found in F. australis, F. glabrescens, F. pubescens e F. velloziana were: idioblasts, hypodermis and epidermis, laticifers, style-head apical appendages and secretory epidermis; calycine colleters, bracteole colleters (only in F. pubescens); and nectaries. In F. glabrescens, the secretory idioblasts, the cells that constitute the style-head apical appendages, the hypodermis of several organs (anthers, corolla and calyx lobes, and ovary) and the nectary epidermis produce fatty acids and phenolic compouds. Three structural types of colleters (standard, sessile and branched) occur indefinitely distributed on the calyx base. The five nectaries may be free each other or united two and two (the fifth free), or an annular structure divided in five apical lobes. The gynostegium is a structure formed by the union of stamens and style-head; the last is surrounded by a palisade secretory epidermis. In F. glabrescens, the secretion is constituted by polysaccharides. The 5-lobed style-head has the five projecting ribs adnated to the connective by the cementation of the both structures epidermal cells walls. The glue zone is divided in two functional and structural parts, one of them involved in production and storage of secretion, and other involved with the adnation process. These gynostegium characters, associated to occurrence of sessile calycine colleters, support the exclusion of the genus from the tribe Apocyneae and their inclusion in Mesechiteae. / Doutorado / Biologia Vegetal / Doutor em Biologia Vegetal

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / O pinhÃo manso (Jatropha curcas L.), pertencente à famÃlia Euphorbiaceae, à uma planta oleaginosa com grande potencial para a produÃÃo de biocombustÃvel devido à riqueza de lipÃdios em suas sementes. Ele tambÃm apresenta toxicidade devido à presenÃa de Ãsteres de forbol. Nesse contexto, o objetivo deste estudo à realizar o isolamento de plastÃdios, local de sÃntese de Ãcidos graxos e de Ãsteres de forbol, presentes no endosperma de sementes em desenvolvimento de J. curcas. Experimentos preliminares atravÃs de anÃlises morfolÃgica, histolÃgica e histoquÃmica foram realizados para determinaÃÃo do estÃgio do desenvolvimento da semente mais adequado para o isolamento de plastÃdios presentes no endosperma. Estas anÃlises revelaram que a deposiÃÃo de lipÃdios e proteÃnas no endosperma se inicia por volta do 30o DAA. O isolamento de plastÃdios, do endosperma de sementes nesse estÃgio foi realizado por centrifugaÃÃo em gradiente descontÃnuo de PBF-Percoll (10%, 22%, 35%). A fraÃÃo enriquecida de plastÃdios foi obtida a partir da banda formada na interface da camada de 22-35%. AnÃlises por microscopia eletrÃnica de varredura e de transmissÃo foram realizadas para confirmar a eficiÃncia do protocolo empregado na purificaÃÃo dos plastÃdios. Mapas bidimensionais foram estabelecidos, os âspotsâ detectados nos mesmos serÃo identificados por espectrometria de massa, o que possibilitarà a identificaÃÃo das proteÃnas plastidiais envolvidas na sÃntese dos Ãcidos graxos e dos Ãsteres de forbol no endosperma de sementes de J. curcas. / Jatropha (Jatropha curcas L.), belonging to the Euphorbiaceae family, is an oilseed plant with great potential for biofuel production because of the richness of lipids in their seeds. It also presents toxicity due to the presence of phorbol esters. In this context, the objective of this study is the isolation of plastids, the site of synthesis of fatty acids and phorbol esters, present in the endosperm of developing seeds of J. curcas. Preliminary experiments by testing morphology, histology and histochemistry was performed to determine the stage of seed development most suitable for the isolation of plastids present in the endosperm. These analyzes revealed that the deposition of lipids and proteins in the endosperm starts around the 30th DAA. The isolation of plastids, the endosperm of the seeds in this stage was performed by gradient centrifugation PBF-Percoll discontinuous (10%, 22%, 35%). The enriched fractions of plastids has been obtained from the band formed in the interface layer of 22-35%. Analysis by scanning electron microscopy and transmission were performed to confirm the efficiency of the protocol employed in the purification of the plastids. Two-dimensional maps have been laid, the "spots" detected in the same will be identified by mass spectrometry, which will allow the identification of the plastid proteins involved in the synthesis of fatty acids and phorbol esters in the endosperm of seeds J. curcas.

Orientadores: Olga Maria de Toledo Correa, Paulo Pinto Joazeiro / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-04T13:23:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Garcia_EduardoAnselmo_M.pdf: 5637432 bytes, checksum: 7856ba76c45912e029c4e039ce280e21 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: O tecido interpúbico no camundongo é conhecido pelas rápidas adaptações sofridas devido as novas demandas impostas durante a prenhez, parto e pós-parto. O desenvolvimento de um ligamento interpúbico é explicado em parte pelas modificações observadas na hidratação deste tecido, assim como, pela presença de Ácido Hialurônico (AH). O presente estudo focou-se na presença do AH na sínfise púbica, uma vez que pouco se sabe a respeito do seu papel durante as modificações sofridas neste período. A localização e quantificação do AH, por meio de uma sonda específica para AH, foi feita em amostras de sínfises púbicas de camundongos virgens, com 12 a 18 dias de prenhez, no dia do parto (D19) e durante o 3° e 5° dia pós-parto. A análise quantitativa fluorométrica indicou um aumento gradual no AH do tecido interpúbico durante a prenhez, seguido de uma diminuição já presente no dia do parto. A análise histoquímica demonstrou a presença de AH na matriz extracelular deste tecido assim como dentro das células. Baseado nestes resultados, pudemos demonstrar a provável participação do AH em três processos. Quando encontrado na matriz extracelular, o AH contribui para a formação de uma estrutura flexível, de consistência rígida, que vai permitir a passagem do feto pelo canal de parto. Ao passo que, quando encontrado intracelularmente, o AH contribui em dois processos distintos: até o 18° dia de prenhez, o AH participa nos processos de proliferação celular, através de possíveis interações com moléculas e estruturas importantes neste processo. O AH talvez também contribua para a proliferação através da formação de uma zona hidratada ao redor das células facilitando o destacamento das mesmas de seu substrato. Finalmente, após o parto e até o 5° dia pós-parto o AH contribui para a manutenção do fenótipo miofibroblástico destas células ajudando no processo de involução sofrido pelo tecido interpúbico no pós-parto / Abstract: The interpubic tissue in mice is known to rapidly adapt itself to the ali new demands imposed during pregnancy, partum and post-partum. The development of an interpubic ligament may be explained, in part, due to the modifications observed in the hydration of this tissue, as well as, the presence of hyaluronan (HA). The present study focuses on the presence of HA in the pubic symphysis, since still very little is known of its role during the modifications suffered through this period. The localization and quantification of HA using a HA-probe were studied in samples of mice pubic symphyses from virgin, 12th to 18th days of pregnancy, the day of delivery (D19) and during 3 and 5 days post-partum. The quantitative fluorimetric analysis indicated a gradual increase of HA in the interpubic tissue throughout pregnancy, being followed by a decrease already present on the day of the delivery. In addition, the histochemical analysis demonstrated the presence of HA in the extracellular matrix of the tissue as well as within its cells. Based on these results, it can be shown that HA may participate in three processes during pregnancy, partum and post-partum. While found in the extracellular matrix, HA contributes in the formation of a flexible structure, yet of rigid consistency, that allows the passage of the embryo for the birth canal. Whereas, while found intracellular, HA contributes in two distinct processes: until the 18th day of pregnancy, HA participates in the process of cellular proliferation through its possible interaction with mitotic cells. HA may also contribute to cellular proliferation through the formation of a hydrated zone from parturition as well as the 5th day post-partum HA contributes to the maintenance of the myofibroblastic phenotype of these cells, aiding in the process of involution suffered by the interpubic tissue following parturition / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientadores: Sandra Maria Carmello-Guerreiro, Marilia de Moraes Castro, Lia Ascensão / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-08T00:05:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Lacchia_AnaPaulaStechhahn_D.pdf: 8477823 bytes, checksum: a1685fc288b20acce389a79bd6302d17 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: Anacardiaceae é composta por 70 gêneros com aproximadamente 600 espécies de distribuição principalmente pantropical, com poucas de regiões temperadas. A classificação infrafamiliar mais amplamente utilizada, proposta por Engler (1892), divide a família em cinco tribos: Anacardieae, Rhoeae, Semecarpeae, Spondiadeae e Dobineeae. No presente trabalho, foram estudadas uma espécie da tribo Anacardieae (Anacardium humile St.Hil), uma espécie da tribo Rhoeae (Lithraea molleoides (Vell.) Engl. e duas espécies da tribo Spondiadeae (Spondias dulcis G.Forst e Tapirira guidnensis Aubl.). As estruturas secretoras dos órgãos vegetativos e reprodutivos destas espécies foram caracterizadas anatômica e histoquimicamente e apenas os canais secretores foram caracterizados ultra-estruturalmente. Os canais têm epitélio unisseriado; os associados ao floema são resiníferos (lato sensu) e os medulares de A. humile e S. dulcis, são mucilaginosos. A presença de canais produzindo secreções quimicamente distintas em um mesmo órgão, de uma mesma espécie, está sendo descrita pela primeira vez neste tranalho. Em A. humile, L. molleoides e T.guianensis os canais estão associados ao floema da pétala, sépala, receptáculo, pedicelo florais de todas as flores e ao floema do mesofilo ovariano das flores pistiladas e do pistilódio das flores estaminadas de L. molleoides e, T. guianensis. Canais também são encontrados no fruto e pedúnculo de A. humile e no fruto de T. guianensis. Os canais têm epitélio unisseriado; os florais de A. humile, L. molleoides e T. guianensis são resiníferos (lato sensu), os do fruto e pedúnculo de A. humile são resiníferos (stricto sensu) e os do fruto de T. guianensis são resiníferos (lato sensu). Em uma mesma espécie os canais secretores presentes em diferentes órgãos podem produzir substâncias distintas¿Observação: O resumo, na íntegra poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: Anacardiaceae is comprised of 70 genera with approximately 600 species of pantropical distribution, mainly, with few species from temperate regions. The most used infrafamilial classification, proposed by Engler (1892), divides this family in five tribes: Anacardieae, Rhoeae, Semecarpeae, Spondiadeae, and Dobineeae. In the present work, there were studied a species from Anacardieae tribe (Anacardium humile St.Hil), a species from Rhoeae tribe (Lithraea molleoides (Vell.) Engl., and two species from Spondiadeae tribe (Spondias dulcis G.Forst and Tapirira guianensis Aubl.). The secretory structures of the vegetative and reproductive organs of these species were characterized anatomically and histochemically, and the secretory canals present in them were ultrastructurally characterized. The canals present uniseriate epithelium; the ones associated to the phloem are resiniferous (lato sensu) and the medullar ones of A. humile and S. dulcis are mucilaginous. The presence of canals that produce chemically distinct secretions in the same organ of a species is being described for the first time. In A. humile, L. molleoides, and T. guianensis, the canals are associated to the phloem of petal, sepal, receptacles, and ovarian mesophyll; only in the pistil-like structure of the male flowers of L. molleoides and T. guianensis, there are found some canaIs. The canals are also found in the fruit and peduncle of A. humile and in the fruit of T. guianensis. The canaIs have uniseriate epithelium; the floral canaIs of A. humile, L. molleoides, and T. guianensis are resiniferous (lato sensu), the ones from fruit and peduncle of A. humile are resiniferous (stricto sensu), and the ones from the fruit of T. guianensis are resiniferous (lato sensu). In the same species, the secretory canaIs present in different organs may produce distinct substances...Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Doutorado / Doutor em Biologia Vegetal

Face à l’enjeu de la transition énergétique, l’utilisation de la biomasse végétale ligno-cellulosique pour produire des énergies et matériaux ‘bio-sourcés’, est l’une des alternatives au pétrole ciblées. Le sorgho (Sorghum bicolor) est à ce titre de plus en plus étudié. Sa diversité génétique est une richesse considérable pour concevoir des variétés à forte production de biomasse de tige, de composition biochimique adaptée à divers usages et adaptées à des agroenvironnements limités en eau. Cette thèse s’inscrit dans deux projets d’amélioration variétale du sorgho biomasse, Biomass For the Future (ANR) et BioSorg (Agropolis-Cariplo). Son objectif est de comprendre les traits phénotypiques, de nature morphologique, biochimique, histologique, et leurs interactions, expliquant à l’échelle de l’organe (entrenœud) la production de biomasse de tige du sorgho, sa variabilité génotypique et en réponse à l’environnement climatique notamment hydrique. Pour cela une approche combinant expérimentations et modélisation écophysiologique a été adoptée.Trois saisons d’expérimentation ont été organisées au champ (plateforme DIAPHEN, Mauguio, France), afin de comparer des génotypes sous condition irriguée et déficitaire en eau durant la phase d’allongement des tiges. Deux hybrides de sorgho biomasse ont été étudiés (2013-2014) pour mettre en évidence les traits contribuant à la régulation par la disponibilité en eau de l’accumulation de la biomasse de tige. Une dynamique de développement commune à tous les entrenœuds d’un génotype a été mise en évidence pour les traits histochimiques étudiés ; les entrenœuds d’âge différent sur la tige d’une même plante peuvent donc être utilisés pour le phénotypage de cette dynamique. Ainsi, les traits fixés progressivement durant le développement de l’entrenœud s’avèrent les plus sensibles au déficit hydrique. La quantité de biomasse de tige produite a été réduite par le déficit hydrique et sa composition biochimique modifiée. Ceci s’explique par une réduction du nombre d’entrenœuds allongés, de leur longueur et teneur en ligno-cellulose, mais une augmentation de leur teneur en sucre soluble. Les entrenœuds développés après ré-irrigation ont montré une récupération remarquable à l’inverse des entrenœuds développés durant la période de stress. Ainsi, à la récolte, l’effet du déficit hydrique sur la production de la biomasse de tige était très atténué. Ces mêmes traits ont été étudiés sur 8 génotypes de morphologie et biochimie de tige contrastées (2014-2015). Les résultats ont montré une forte variabilité génotypique de sensibilité au déficit hydrique et de capacité de récupération. Les traits de croissance et histochimie de l’entrenœud ont montré des réponses au statut hydrique partiellement corrélées. La faible corrélation entre traits biochimiques et histologiques suggère que la variabilité de la qualité de tige entre génotypes et environnements s’explique au niveau tissulaire. La stabilité de la production de biomasse de tige est donc contrôlée par ces traits de façon complexe et fonction du pattern de disponibilité en eau.Ces résultats ont été utilisés pour adapter et tester la capacité du modèle écophysiologique Ecomeristem à capturer les traits expliquant la variabilité des phénotypes de sorgho biomasse sous conditions hydriques non limitantes. La validation du modèle s’est avérée satisfaisante avec quelques limites dans sa capacité à capturer les cinétiques de vie des talles et, de fait, la répartition de la biomasse entre talles. L’analyse de sensibilité du modèle a montré que les génotypes simulés produisant le plus de biomasse de tige résultent de combinaisons de traits différentes en fonction de la densité de peuplement. Le trade-off entre propension au tallage et à accumuler plus de biomasse au niveau de l’entrenœud individuel s’avère déterminante. La balance entre ces traits devrait être davantage considérée dans la démarche de phénotypage et d’idéotypage et sous des environnements contrastés. / In the context of the energy transition, the use of ligno-cellulosic biomass for producing ‘bio-sourced’ energy and product is one of the major alternatives to oil. Sorghum bicolor is with this respect more and more studied, particularly for water limited cropping environments. Its genetic diversity is a huge opportunity for creating varieties with a high production of stem biomass, with a biochemical composition adapted to diverse end-uses and for water-limited environments. This PhD thesis takes place in the context of two projects dedicated to biomass sorghum improvement: Biomass For the Future (ANR) and BioSorg (Fondation Agropolis-Cariplo). Its objective is to understand the morphological and histochemical traits and their interactions, underlying at organ (internode) level, stem biomass production in sorghum, its genotypic variability and its plasticity in response to climatic environment, in particular water availability. For this purpose, an approach combining field experiments and eco-physiological modeling was adopted. Three experimental seasons were organized in the field (DIAPHEN platform, Mauguio, France), in order to compare genotypes under contrasted water situations (irrigated, water deficit during stem elongation). Two biomass sorghum hybrids were studied (2013-2014) to point out the traits contributing to the regulation by water availability of stem biomass accumulation. First, a common dynamics of internode development for a given genotype was highlighted for studied histochemical traits. This result will enable to use all internodes of different ages on a given plant to set up such a dynamic in a phenotyping context. Accordingly, the traits set up progressively along internode development were those with the highest drought sensitivity. Stem biomass production was reduced by drought and its biochemical composition modified. This could be explained by a reduced number of expanded internodes with a reduced length and ligno-cellulosic content. A contrario, their soluble sugar content was increased. The internodes developed after re-watering observed a remarkable recovery whereas those developed under stress did not recover. At final harvest, water deficit effect on stem biomass production was thus strongly attenuated. The same traits were studied on 8 genotypes more contrasted for stem morphology and biochemistry (2014-2015). The results confirmed those on two hybrids and showed a high genotypic variability for drought sensitivity and recovery capacity. The response to water availability of traits related to internode or stem growth and to their biochemical composition was only partially correlated. The weak correlation between biochemical and histological traits suggests that the vartiability of stem biomass quality among genotypes and environments is explained at tissue level. The stability of stem biomass production is thus a highly complex process involving trade-off among morphological and histochemical traits that may differ depending on drought pattern, targeted end-use and cycle duration.These results were used for adapting and testing the ecophysiological model Ecomeristem in its capacity to capture the traits underlying phenotypic variability in biomass sorghum, in a first time under non-limiting water conditions. Model validation was satisfying but pointed out remaining limitation in the way the model captures tillering and accordingly biomass partitioning among them. A sensitivity analysis was performed showing that the simulated genotypes with the highest stem biomass production resulted from variable trait combinations (model parameters) depending on plant density in the field. The trade-off between tillering propensity and the capacity to accumulate biomass in the individual internode was particularly influencing and the balance between these traits should be further considered in a phenotyping and ideotyping context, with respect to fluctuating environmental conditions.