Orientador: Liana Maria Cardoso Verinaud / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-06T19:49:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Souto_PaulaCristinadeSouza_D.pdf: 7669317 bytes, checksum: eeec29689d95e50ddec45928c2c76343 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: O Paracoccidioides brasiliensis é um fungo dimórfico que cresce na forma miceliar a temperatura ambiente e na forma de levedura a 35-37ºC. Recentemente, no laboratório de Imunopatologia do Departamento de Microbiologia e Imunologia do Instituto de Biologia da Unicamp, foi observado que uma amostra da cepa virulenta Pb18 crescia de forma diferente das outras. A análise preliminar desta cultura mostrou que o fungo se apresentava, exclusivamente, em formas intermediárias entre levedura e micélio. Assim, este trabalho teve como objetivo a caracterização parcial deste isolado atípico através da comparação com a cepa selvagem. Para tanto, foram analisados: a morfologia do isolado a 25 e 37ºC; a composição de proteínas de parede celular; o desenvolvimento da doença e a resposta imunológica adaptativa em camundongos BALB/c. Os resultados mostraram que este isolado não alterou a sua forma de crescimento, independente da temperatura de cultivo ou da passagem por animal. Através da análise das proteínas de parede celular observou-se ausência de expressão de algumas proteínas e baixa concentração da glicoproteína 43 (gp43) no fungo atípico quando comparado com o selvagem. A infecção causada por este isolado atípico foi mais branda do que aquela observada com a cepa virulenta Pb18, com completa resolução das lesões de disseminação. Entretanto, não foi possível determinar diferenças na avaliação da resposta imune adaptativa dos animais infectados com os diferentes isolados. Apesar da necessidade de mais estudos, estes resultados indicam que o isolado atípico pode vir a ser uma importante ferramenta para o estudo da biologia do fungo e sua relação com o hospedeiro / Abstract: P. brasiliensis is a dimorphic fungus that grows in mycelial phase at room temperature and in yeast form at 35-37°C. Recently, in the Immunopathology Laboratory of the Department of Microbiology and Immunology (Biology Institute/Unicamp), it was observed that a sample of the virulent strain Pb18 grew in a different way from other ones. Preliminary analysis of this culture showed that the isolated exhibited, exclusively, an intermediate form of pseudohyphae. That way, the objective of this work was the partial characterization of the atypical isolated (Pb18PH) through the comparison with the wild strain Pb18. For this, there were analyzed: the morphology of the isolated to 25 and 37ºC; the composition of cell wall proteins; the disease development and the adaptative immune response in BALB/c mice. The results showed that Pb18PH didn't alter their growth form, independently of the cultivation temperature or the passage through animal. By the analysis of the cell wall proteins, it was observed that Pb18PH didn't express some proteins and presented low concentration of the glicoprotein 43 (gp43) when compared with the wild one. The infection caused by this atypical isolated was softer than that observed with the virulent strain Pb18. Besides, it was noted the complete resolution of disseminated lesions. However, it was not possible to determine differences in the adaptative immune response evaluation of the animais infected with the different isolated. To despite the need of more studies about this atypical isolated, our results indicate that Pb18PH would come to be an important tool for the study of the fungus biology and their relationship with the host / Doutorado / Imunologia / Doutor em Genetica e Biologia Molecular

Schistosomiasis is an important endemic disease worldwide, affecting over 200 million people. The city of Flores Island, Sergipe, is situated 135 km from the capital, North of the State and has 8,598 inhabitants. Has an extensive irrigation area, where there are many species of snails Biomphalaria glabrata and Biomphalaria straminea. The objectives were to evaluate the morbidity of schistosomiasis in an area of high prevalence of disease by parasitologic, clinical and ultrasound examinations and the relation between infection and disease severity with socioeconomic, educational, exposure to surface water sources in the region and the immune response. A survey was conducted clinical, epidemiological and parasitologic in 500 randomly selected individuals. The prevalence of schistosomiasis was 24%, and 65% of these were male. There is an association between male with S. mansoni infection. Thirty tree percent (33.3%) had clinical forms hepatointestinal or hepatosplenic. Patients with a greater degree of contact with water had higher worm burdens, just as patients with hepatosplenic disease had the higher infection intensity (eggs / g stool). Due to the lower number of hepatosplenic patients, for the immunological studies we have selected 20 patients with confirmed hepatosplenic schistosomiasis actively recruited from the Gastro-hepathology ambulatory of the Hospital Universitário of the Universidade Federal de Sergipe. The abdominal ultrasound examination was performed on a sample of 78 subjects from Ilha das Flores with positive parasitological for S. mansoni and in the 20 hepatosplenic patients from the hospital by the method of Niamey. The evaluation of immune response reveled a direct correlation between the concentrations of IL-5 in response to adult worm antigen and the intensity of infection, as well as a tendency for concentrations of IFN-γ to decrease with the increase the intensity of infection. The immunological data also showed, for the first time, the presence of high concentrations of IL-17 in cultured cells of patients with more severe disease. These data reveal the influence of socioeconomic, cultural and immunological factors on severity of infection by S. mansoni. / A esquistossomose mansônica é uma importante endemia mundial, que acomete mais de 200 milhões de pessoas, causada pelo Schistosoma mansoni. A cidade sergipana de Ilha das Flores está a 135 quilômetros da capital, ao norte do estado e possui uma população de 8.598 habitantes. Possui uma extensa área de irrigação, onde se encontram muitos caramujos da espécie Biomphalaria glabrata e Biomphalaria straminea. Os objetivos do trabalho foram avaliar a morbidade da esquistossomose em uma área de alta prevalência da doença, através de exames parasitológico, clínico e ultrassonográfico e verificar a relação entre a infecção e a gravidade da doença com os aspectos socioeconômicos, educacionais, exposição às fontes hídricas superficiais da região e com a resposta imune aos antígenos do S. mansoni. Foi realizado um inquérito clínico-epidemiológico e coproparasitológico em 500 indivíduos selecionados aleatoriamente. A prevalência da esquistossomose foi de 24%, destes 65% eram do gênero masculino, tendo este uma forte associação com a infecção por S. mansoni. Trinta e três por cento (33,3%) apresentaram formas clínicas hepatointestinal ou hepatoesplênica. Os pacientes com maior grau de contato com a água, como os pacientes com a forma hepatoesplênica, apresentaram uma maior intensidade de infecção (ovos/g de fezes). Devido ao pequeno número de pacientes com a forma hepatoesplênica, para o estudo imunológico foram incluídos mais 20 pacientes recrutados por busca ativa no ambulatório de Gastrohepatologia do Hospital Universitário da Universidade Federal de Sergipe. O exame de ultrassonografia abdominal foi realizado numa amostra de 78 indivíduos de Ilha das Flores com parasitológico positivo para S. mansoni e nos 20 hepatoesplênicos do HU pelo método de Niamey. A avaliação da resposta imune mostrou uma correlação direta entre as concentrações de IL-5 em resposta ao antígeno de verme adulto e a intensidade da infecção, bem como uma tendência das concentrações do IFN-γ em diminuir com o aumento das cargas parasitárias. Os dados imunológicos mostraram também de forma pioneira a presença de concentrações elevadas de IL-17 nas culturas de células de pacientes com a forma mais grave da doença. Estes dados revelam a influência de fatores socioeconômicos, culturais e imunológicos na gravidade da infecção por S. mansoni.

Orientador: Gabriel Hessel / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-12T18:27:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pereira_ThalitaCremonesi_M.pdf: 1737488 bytes, checksum: 5ad93d7cbdf6ec7ffe8a969713e5b3e2 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: A deficiência de zinco em crianças ou adolescentes acarreta danos ao crescimento, desenvolvimento e ao sistema imune dos indivíduos. Essa deficiência ainda não foi investigada em pacientes com hepatite auto-imune que apresentam comprometimento hepático e utilizam medicamentos que podem causar a deficiência de vitaminas e minerais no organismo. Esta pesquisa teve por finalidade verificar a existência de deficiência de zinco plasmático e/ou leucocitário em adolescentes com hepatite auto-imune. Para isso, participaram do estudo 23 pacientes com hepatite auto-imune entre 10 e 18 anos atendidos no Ambulatório de Hepatologia Pediátrica do Hospital de Clínicas da Unicamp e 23 adolescentes com idade pareada com os pacientes formaram o grupo controle. Foi coletado sangue dos indivíduos dos dois grupos em quantidade suficiente para preencher dois tubos de heparina para a dosagem de zinco leucocitário e um tubo de EDTA para a análise de glutationa reduzida eritrocitária. O zinco plasmático foi analisado pelo HC/Unicamp como exame de rotina. Foi avaliado nos grupos o estado nutricional por meio da aferição de dados antropométricos como peso, altura, circunferência do braço, prega cutânea tricipital e subescapular. Somente no grupo de pacientes também foi realizado o exame de bioimpedância elétrica com aparelho que fornecia dados de resistência e reactância que foram utilizados em cálculos por equações preditivas para estimar a gordura corporal dos pacientes. A ingestão alimentar dos pacientes e do grupo controle foi avaliada pelo preenchimento, pelos próprios adolescentes, de três dias de diário alimentar. Os testes estatísticos empregados foram o de Mann Whitney, correlação de Spearman e análise de concordância interclasses. O nível de significância adotado foi de 5%. A média de zinco plasmático nos pacientes foi de 71.91±11.79 µg/dl e no grupo controle foi de 80.74±10.92 µg/dl, essa diferença foi significante (p=0.04). O nível de zinco leucocitário nos pacientes foi igual a 222.33±166.13 pmol/106 células e no grupo controle foi de 226.64±217.81 pmol/106 células, não ocorrendo diferença estatisticamente significante entre esses (p=0.45). A análise de glutationa mostrou média de 57.34±25.95 mg/dl nos pacientes e de 52.55±23.08 mg/dl no grupo controle, sem diferença estatística (p=0.50). A avaliação do estado nutricional mostrou que a eutrofia é prevalente nos pacientes e estes possuem maior valor de gordura corporal que o grupo controle com diferença significativa. A ingestão alimentar média de zinco (mg/dia) foi de 9.40±3.60 nos pacientes e de 10.94±4.32 no grupo controle, sendo que esta diferença não foi significante (p=0.16). Em comparação com as recomendações nutricionais, a ingestão de zinco e macronutrientes apresenta alta probabilidade de adequação tanto nos pacientes como no grupo controle. Entretanto, a proteína foi o único nutriente estudado que apresentou ingestão significantemente menor nos pacientes quando comparada ao grupo controle, mas ainda dentro do ideal. Conclui-se que os pacientes com hepatite auto-imune apresentam deficiência de zinco plasmático; não apresentam deficiência de zinco leucocitário; possuem ingestão alimentar adequada em relação à Zn, carboidratos, proteínas e lipídeos; não estão em estresse oxidativo e apresentam estado nutricional prevalente de eutrofia com tendência à obesidade. / Abstract: Zinc deficiency in children and adolescents impairs their growing, development and immune system. This deficiency was still not investigated in patients with autoimmune hepatitis who present hepatic involvement and use medications that may cause vitamin and mineral deficiency in their organism. The aim of this research was to verify the existence of plasma and leukocyte zinc deficiency in adolescents with autoimmune hepatitis. The study comprised 23 patients with autoimmune hepatitis, aged 10-18 years, assisted at the Ambulatory Service of Pediatric Hepatology of the University of Campinas Teaching Hospital (HC/Unicamp); and adolescents with ages compatible with the patients'ages comprised the control group. Two blood tubes containing heparin for the dosage of leukocyte zinc and one tube with EDTA for analysis of reduced erythrocitary glutathione were collected from both groups. The plasma zinc was analyzed by HC/Unicamp as custom examination. The nutritional state in both groups was evaluated by anthropometric data measurement, such as weight, height, arm circumference, triciptal and subscapular cutaneous fold. Only the patient group underwent electrical bioimpedance examination with device that provided resistance and reactance data, which were used in calculations by predictive equations in order to estimate the patients' body fat. The alimentary ingestion of the group of patients and control group was evaluated by the application of a three-day alimentary inquiry, filled by adolescents. The following statistical tests were used: Mann Whitney, Spearman's correlation and interclass concordance analysis. The significance level adopted was 5%. The mean plasma zinc in patients was 71.91±11.79 µg/dl, and in the control group, it was 80.74±10.92 µg/dl, showing a significant difference (p=0.04). The leukocyte zinc level in patients was 222.33±166.13 pmol/106 células, and in the control group, it was 226.64±217.81 pmol/106 células; there was not statistical significance between them (p=0.45). The glutathione analysis showed a mean of 57.34±25.95 mg/dl in patients and 52.55±23.08 mg/dl in the control group; without statistical significance (p=0.50). The evaluation of the nutritional state showed that the eutrophy is prevalent in patients, and they presented a higher body fat value than the control group, with significant difference. The mean alimentary ingestion of zinc (mg/day) was of 9.40±3.60 in patients, and of 10.94±4.32 in the control group; therefore, there was not a significant difference (p=0.16). In comparison with nutritional recommendations, zinc and macronutrient ingestion had a high probability of adequacy in group of patients and control group. However, the protein was the only nutrient studied that presented ingestion significantly lower in patients when compared with the control group, but within of recommended values. The results showed that patients with autoimmune hepatitis presented plasma zinc deficiency; did not present leukocyte zinc deficiency; and they showed adequate alimentary ingestion in relation to Zn, carbohydrates, proteins and lipids; as well as they were not in oxidative stress and presented prevalent nutritional state of eutrophy with obesity tendency. / Mestrado / Saude da Criança e do Adolescente / Mestre em Saude da Criança e do Adolescente

Orientadores: Vitor Baranauskas, Leonilda Maria Barbosa dos Santos / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Eletrica e de Computação / Made available in DSpace on 2018-08-13T15:52:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Grecco_AnaCarolinaPimenta_M.pdf: 4028722 bytes, checksum: 6c6aa22381786380372d5a804c0a2fe1 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: Os nanotubos de carbono estão sob intenso estudo diante da possibilidade de serem utilizados em aplicações biomédicas. Estudos prévios descreveram que a inalação de nanopartículas de carbono induz resposta inflamatória no tecido pulmonar; entretanto o efeito dessas partículas na resposta imune adaptativa não está completamente entendido. Assim, três diferentes preparações de nanotubos de carbono (NT1, NT4, NT5) foram testadas in vivo na resposta de linfócitos T e B de camundongos C57Bl/6. Os nanotubos de paredes múltiplas NT1 e NT4 foram produzidos em nosso laboratório e seu efeito na resposta imune adaptativa foi comparado com uma preparação comercial de nanotubos (NT5). A preparação (NT4) demonstrou alguns efeitos citotóxicos, sendo inadequada para uso in vivo. As outras preparações não mostraram toxicidade quando administradas sistemicamente. Os nanotubos NT1 e NT5 induziram a uma significativa ativação de linfócitos T e B. A administração sistêmica dessas estruturas resultou no aumento da resposta proliferativa de linfócitos ao mitógeno inespecífico Con A, no aumento da expressão de mRNA de citocinas como TNFa, IL-6, IL-10 e significativa redução do TGFß. As nanoestruturas induziram significativo aumento da produção de anticorpos específicos para ovalbumina. Esses resultados enfatizam a importância de estudar a resposta imune induzida pelas nanopartículas antes funcionalizá-las com proteínas, DNA ou utilizá-las na oferta de fármacos. / Abstract: Carbon nanotubes are currently under scrutiny as new tools for biomedical applications. Previous studies have shown that inhalation of carbon nanoparticles elicited an inflammatory response in the lung tissue; however the effect of these particles in the adaptive arm of the immune response deserves more attention. Thus, three different preparations of carbon nanotubes (NT1, NT4, NT5) were tested on in vivo T and B lymphocytes response of C57Bl/6 mice. The multi-walled carbon nanotubes NT1 and NT4 were produced in our facilities and their effect on adaptive immune response was compared to commercial carbon nanotubes (NT5). The preparation (NT4) has demonstrated some cytotoxic effects and was inappropriate for use in vivo. No cytotoxicity was observed in the other preparations when administered systematically in vivo. Carbon nanotubes NT1 and NT5 lead to a significant activation of the T and B lymphocytes. The systemic administration of these structures resulted in increased proliferative response oflymphocytes to nonspecific mitogen ConA, augmented the mRNA cytokines expression such as TNFa, IL-6, IL-10 and significant decrease of TGFß. Nanostructures induced significant increase in the production of antibody to a specific antigen (OVA). These results emphasize the importance of studying the immune response induced by the nanoparticles before functionalizing them with proteins, DNA or for drug delivery purpose. / Mestrado / Eletrônica, Microeletrônica e Optoeletrônica / Mestre em Engenharia Elétrica

Orientadores: Antonio Condino Neto, Sara Teresinha Olalla Saad / Tese (doutorado)- Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-13T18:06:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Almeida_AnaCarolinade_D.pdf: 1227023 bytes, checksum: 25438a379e180eeb0d1972b464b909b0 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: SIRP 'alfa'(Signal Regulatory Protein 'alfa') é um receptor que medeia funções inibidoras em fagócitos. Sua ativação e conseqüente fosforilação dos ITIMs ocorre pela ligação ao CD47 presente na membrana dos eritrócitos, e permite o recrutamento e a ativação de SHP-1, a qual desfosforila substratos específicos envolvidos na mediação de diversos efeitos fisiológicos. O objetivo deste trabalho foi avaliar o papel da dexametasona (dexa) e de IFN?/TNFa sobre a expressão de SIRPa e SHP-1; a consequência desta regulação sobre a eritrofagocitose; e o nível de expressão gênica de SIRPa e SHP-1 em monócitos de pacientes com anemia hemolítica autoimune (AHAI) antes e depois de corticoterapia. Monócitos de doadores sadios e células mielomonocíticas U937 foram cultivados por 48 horas com dexa (1µM) ou IFN? (100U/ml) e TNFa (1000U/ml), por 6 horas com Hemina® (30uM), ou por 72 horas com prednisolona (0,15 e 1mg/l). Monócitos foram isolados de pacientes com AHAI antes e depois da corticoterapia. A expressão gênica de SIRPa e SHP-1 foi determinada por PCR em Tempo Real, a expressão protéica de SIRPa e SHP-1 foi determinada por Western Blotting, e a capacidade de eritrofagocitose foi determinada por microscopia. IFN? e TNFa, in vitro, promoveram o aumento da expressão gênica e protéica de SIRPa e a expressão gênica de SHP-1, em paralelo com a redução da capacidade de eritrofagocitose em monócitos normais. Em contrapartida, embora tenha aumentado a expressão gênica de SIRPa e SHP-1, dexa in vitro não alterou a expressão destas proteínas, assim como não alterou a capacidade de eritrofagocitose de monócitos normais. A expressão gênica de SIRPa e SHP-1 foi maior em monócitos de pacientes com AHAI em comparação a doadores sadios. Após corticoterapia, a expressão gênica de SIRPa e SHP-1 em monócitos de pacientes com AHAI se mostrou similar a doadores sadios. Pacientes com AHAI estudados antes da corticoterapia apresentaram baixos níveis de hemoglobina e após corticoterapia esse índice de mostrou normal. A expressão gênica de SIRPa foi aumentada pela cultura de monócitos com hemina, mas a expressão de proteína permaneceu a mesma. Nossos resultados confirmam o papel fundamental da SIRPa na regulação da eritrofagocitose e sugere que a expressão de mRNA de SIRPa em monócitos de pacientes com AHAI antes de corticoterapia é aumentada pela liberação de heme, e que a redução da expressão gênica de SIRPa após corticoterapia se deve a um efeito indireto desta droga pela redução da eritrofagocitose e diminuição da disponibilidade de heme. / Abstract: SIRPa (Signal Regulatory Protein a) is an inhibitory receptor in phagocytes. Its activation and consequent phosphorylation of ITIMs occurs by the binding to CD47 on erythrocyte membrane, what allows SHP-1 recruitment, which dephosphorylates specific substrates involved in the mediation of several physiologic effects. The aim of this work was to determine the role of dexamethasone and IFN?/TNFa upon SIRPa and SHP-1 expression, and the consequence of this regulation over erythrophagocytosis; and to evaluate the regulation of SIRPa and SHP-1 in peripheral blood monocytes (PBM) of autoimmune hemolytic anemia (AIHA) patients before and after glucocorticoid (GC) therapy. PBM from healthy donors and U937 myelomonocytic cells were cultured for 48 hours with dexamethasone (1µM) or IFN? (100U/ml) and TNFa (1000U/ml), for 6 hours with Hemin (30uM), or for 72 hours with prednisolone (0.15 and 1mg/l). PBM were isolated from AIHA patients under GC therapy or not. SIRPa and SHP-1 gene expression was determined by Real Time PCR, SIRPa and SHP-1 protein level was determined by Western Blotting, and erythrophagocytosis was determined by microscopy. IFN? and TNFa increased SIRPa gene and protein expression and SHP-1 gene expression, in parallel with a decrease in erythrophagocytosis ability in PBM. On the other hand, although SIRPa and SHP-1 gene expression was significantly increased, dexamethasone did not alter SIRPa and SHP-1 protein expression, and did not alter erythrophagocytosis ability in monocytes. SIRPa and SHP-1 expression was significantly higher in PBM from AIHA patients compared to normal. After GC therapy, SIRPa and SHP-1 expression was similar in PBM of AIHA patients compared to healthy donors. AIHA patients studied before glucocorticoid therapy showed low hemoglobin and after glucocorticoid therapy the level of hemoglobin was normal. SIRPa gene expression was increased by culture with hemin, but protein expression remained the same. Our results confirm the key role of SIRPa in erythrophagocytosis regulation and suggest that SIRPa mRNA expression in AIHA patients before glucocorticoid therapy is increased by heme release, and the decrease of SIRPa gene expression after glucocorticoid therapy is due to an indirect effect of this drug by the reduction of erythophagocytosis and free heme availability. / Doutorado / Doutor em Farmacologia

Orientador: Maria Marluce dos Santos Vilela / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-15T16:38:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oya_Vanessa_M.pdf: 7331490 bytes, checksum: 529a54e17d287da53b76a70429a62b6d (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: A doença de Crohn (DC) é uma doença crônica inflamatória que acomete o trato gastrointestinal (TGI) com repercussão sistêmica. Existe uma interação de agentes patogênicos, tais como a microbiota intestinal e a imunidade de mucosa em indivíduos geneticamente susceptíveis. DC é mediada por uma resposta T helper 1 (Th1). Atualmente, dietas compostas de proteínas de soro de leite bovino enriquecidas com TGF-? poderiam indicar uma alternativa para controlar a doença, já que não são uma opção invasiva, resultando em uma melhoria na qualidade de vida dos pacientes. Objetivos: Avaliar a influência da suplementação nutricional oral com proteínas de soro de leite bovino enriquecido com TGF-? durante 16 semanas, na resposta imune celular para o BCG em pacientes com DC. Métodos: Vinte e dois pacientes com DC que estavam em terapia anti-TNF-? e azatioprina participaram de um ensaio clínico, prospectivo, de intervenção nutricional com um concentrado de proteínas de soro de leite bovino enriquecido com TGF- ? durante 16 semanas. Os grupos de comparação sem suplementação nutricional foram compostos por 10 pacientes com DC sob terapia com anti-TNF-? e azatioprina, 11 pacientes em uso apenas de azatioprina e 21 indivíduos normais como controle. A imunidade celular para o BCG foi caracterizada pela proliferação linfocitária (por citometria de fluxo) em cultura de células mononucleares de sangue periférico e a produção de citocinas (IFN-?, TNF-? e IL-6, dosadas por ELISA) em sobrenadante de cultura. Foi realizada a fenotipagem de subpopulações de linfócitos T em sangue periférico e a dosagem de TGF-_ ?2 e TGF- ?3 em soro e plasma por ELISA. Resultados: Em pacientes com DC, a suplementação nutricional com um concentrado de proteínas de soro de leite bovino enriquecido com TGF-? aumentou o percentual de linfócitos T em sangue periférico e a concentração de TGF- ?2 no plasma, após as 16 semanas de intervenção. Os pacientes apresentaram proliferação de subpopulações de linfócitos T (CD4+, CD8+ e TCR ??+) e a produção de IFN-?, TNF-? e IL-6 BCG específicas, que não diferiram no início e no fim da suplementação nutricional. Com relação ao grupo controle normal, os três grupos de pacientes com DC apresentaram menor concentração de IFN-y BCG específica. Conclusão: Assim, conclui-se que, uma dieta baseada em proteínas de soro de leite bovino enriquecido com TGF- ? pode levar a uma imunomodulação sistêmica. / Abstract: Crohn's disease (CD) is a inflammatory chronic disease that affects the gastrointestinal tract with systemic repercussion. There is an interaction of pathogens such as enteric microbiota with mucosal immunity in genetically susceptible individuals. CD is mediated by a T-helper 1 (Th1) response. Currently diets containing bovine whey proteins enriched with TGF-? could indicate an alternative for controlling the disease. Objective: To investigate the influence of oral supplementation for 16 weeks with bovine whey proteins enriched with TGF-? on the BCG cellular immune response in patients with Crohn's disease. Methods: Twenty-two CD patients who were under anti-TNF-? and azathioprine therapy took part in a prospective, clinical trial of nutritional intervention with bovine whey proteins enriched with TGF- ? for 16 weeks. As comparison groups without nutritional supplementation, 10 CD patients under anti-TNF-? and azathioprine therapy, 11 CD patients under taking just azathioprine and 21 health controls were selected. The cellular immunity to BCG was evaluated by lymphoproliferation (by flow cytometry) in peripheral blood mononuclear cell cultures and cytokine production (IFN-?, TNF-? and IL-6, by ELISA) on supernatant cultures. Immunophenotyping of T cell subpopulations in peripheral blood and TGF-_ ?2 and TGF- ?3 plasma and serum levels were also evaluated in CD patients. Results: Nutritional supplementation with concentrated whey proteins enriched with TGF- ? increased T lymphocyte percentage in peripheral blood and plasma TGF- ?2 concentration after 16 weeks of intervention in DC patients. They showed BCG-specific proliferation of CD4+, CD8+ and TCRy?+ T lymphocytes and IFN-?, TNF-? and IL-6 production, which were not different between begin and end of the supplementation period. In relation to the healthy controls, all three groups of CD patients had lower BCG-specific IFN-? production. Conclusions: Thus, it is concluded that a diet based on bovine whey proteins enriched with TGF- ? can lead to a systemic immunomodulation. / Mestrado / Saude da Criança e do Adolescente / Mestre em Saude da Criança e do Adolescente

Concentrações séricas basais da proteína amiloide sérica A (SAA) estão significativamente aumentadas em pacientes com câncer e alguns autores sugerem uma relação causal. Trabalho anterior do grupo mostrou que a SAA induz a proliferação de duas linhagens de glioblastoma humano e afeta os processos de invasividade in vitro, sustentando um papel pró-tumoral para esta proteína. Com base nesse trabalho, investigamos a abrangência dos efeitos de SAA para outro tipo de célula tumoral e para isso escolhemos um painel de linhagens de melanoma humano e uma linhagem primária obtida a partir de aspirado de linfonodo de paciente com melanoma, por nós isolada. Observamos que apesar da célula precursora de melanomas, isto é, melanócito, não produzir SAA, todas as linhagens de melanoma produziram a proteína e expressaram alguns dos seus receptores. Além disso, quando estas células foram estimuladas com SAA houve uma inibição da proliferação em tempos curtos de exposição (48 horas) e efeitos citotóxicos após um tempo maior (7 dias). A SAA também afetou processos de invasividade e a produção das citocinas IL-6, IL-8 e TNF-α. Aos avaliarmos o efeito da SAA na interação das células de melanoma com células do sistema imune, vimos que a SAA ativou uma resposta imune anti-tumoral aumentando a expressão de moléculas co-estumolatórias, como CD69 e HLA-DR, e sua função citotóxica. Ainda, vimos que a produção de TNF-α, IFN-&#947, IL-10, IL-1β e IL-8 estimuladas por SAA podem contribuir com os efeitos desta. De forma geral estes resultados nos levam a crer que a SAA tem atividade anti-tumoral em melanomas. Finalizando, com base na importância do desenvolvimento da resistência às terapias atuais para o melanoma, observamos que em células resistentes ao PLX4032, um inibidor de BRAF, os efeitos imunomodulatórios induzidos pela SAA estão abolidos, possivelmente identificando um novo componente da resistência. / Basal serum concentrations of the protein serum amyloid A are significantly increased in cancer patients and some authors suggest a causal relationship. Previous work of our research group showed that SAA induces proliferation of two cell lines of human glioblastoma and affects invasiveness processes in vitro, supporting a pro-tumor role for this protein. Based on this work, we investigated the extent of SAA effects to another type of tumor cell and we chose a panel of human melanoma cell lines and primary line obtained from a patient with melanoma by lymph node aspirate. Melanoma cells were isolated by us. We observed that while the precursor cells of melanoma, melanocytes, do not produce SAA, all melanoma cell lines expressed the protein and produced some of their receptors. Moreover, when these cells were stimulated with SAA there was an inhibition of proliferation in short exposure times (48 hours) and cytotoxic effects after a longer period (7 days). SAA also affected invasive procedures and the production of the cytokines IL-6, IL-8 and TNF-α. To evaluate the SAA effect in the interaction of melanoma cells with immune system cells, we found that SAA activated an anti-tumor immune response by increasing the expression of co-estimulatory molecules such as CD69 and HLA-DR, and their cytotoxic function. Furthermore, we found that the production of TNF-α, IFN-γ, IL-10, IL-1β and IL-8 stimulated by SAA can contribute to this effect. In general these results lead us to believe that the SAA has anti-tumor activity in melanomas. Finally, based on the importance of the resistance development to current therapies for melanoma we observed that in cells resistant to PLX4032, a BRAF inhibitor, the immunomodulatory effects induced by SAA are abolished, possibly identifying a new resistance component.

A Mannheimia haemolytica é uma importante bactéria relacionada ao Complexo Doença Respiratória dos Bovinos e a essa atribui-se uma evolução para uma forma grave de pneumonia fibrinonecrótica. É considerada um habitante comensal da nasofaringe que em situações de comprometimento da resposta imune adquire um perfil oportunista. O presente estudo buscou observar por meio de modelo de infecção experimental, as possíveis alterações locais e sistêmicas causadas pela M. haemolytica em bezerros experimentalmente inoculados. Dessa forma seria possível de maneira longitudinal, acompanhar a dinâmica dos principais aspectos de defesa das vias aéreas posteriores durante a infecção e após o tratamento com o antimicrobiano norfloxacina associado ou não à flunexina meglumina. Avaliou-se por exame físico acrescido de broncoscopia, alterações funcionais das células de defesa e mediadores inflamatórios, tanto séricos quanto locais e a atividade in vitro da norfloxacina sobre a função dos fagócitos sanguíneos e do lavado broncoalveolar (LBA). Para tal foram utilizados 12 bezerros sadios que foram experimentalmente infectados por M. haemolytica dos quais foram avaliadas as alterações clínicas e, quantitativamente e funcionalmente, as populações leucocitárias no sangue e no LBA, assim como o efeito da norfloxacina sobre a atividade funcional dos fagócitos no sangue e no LBA. Os resultados do presente estudo demonstraram o sucesso da infecção experimental por M. haemolytica pelos achados clínicos, broncoscópicos e citológicos. Ademais, a infecção experimental por M. haemolytica foi associada a alterações nas subpopulações de linfócitos T CD8+ e уδ, na produção intracelular de espécies reativas de oxigênio (ERO), fagocitose e viabilidade pelas células CD14+ sanguíneas e do LBA e granulócitos do sangue e, expressão de L-selectina pelos leucócitos polimorfonucleares do sangue. Nenhuma alteração evidente foi observada na expressão de citocinas IL-1β, IL-8 e TNF-α nas células sanguíneas e do LBA. O tratamento com antimicrobiano associado ou não ao anti-inflamatório foi capaz de curar a infecção e reestabelecer os parâmetros avaliados à sua condição basal. Portanto, não se observou benefícios com a utilização adicional do anti-inflamatório no reestabelecimento do quadro clínico e da resposta imune neste experimento. Contudo, apesar de algumas alterações na resposta sistêmica durante o quadro infeccioso, as alterações locais foram mais perceptíveis. Outro aspecto importante encontrado foi o efeito in vitro da norfloxacina na produção intracelular de ERO, fagocitose bacteriana pelas células CD14+ sanguíneas e do LBA e em leucócitos polimorfonucleares no sangue. Conclui-se que as alterações funcionais dos fagócitos apresentaram papel importante na patogenia da mannheimiose, que foram condizentes com os achados clínicos da mannheimiose e da evolução do tratamento quando realizado no início do processo nosológico. / Mannheimia haemolytica is an important bacterial pathogen associated with Bovine Respiratory Disease Complex (BRDC) and it is believed to be the predominant cause of the disease’s evolution into a fibrinonecrotic pneumonia. A commensal inhabitant of the nasopharynx, M. haemolytica acts as an opportunist when host defenses are compromised. This study used an experimental infection model to investigate the possible local and systemic changes caused by M. haemolytica in inoculated calves. It sought to linearly follow the dynamics of the lower respiratory tract defense mechanisms, during the course of infection and after treatment with the antibacterial norfloxacin, which was administrated both with and without the anti-inflammatory flunixin meglumine. With clinical examination followed by bronchoscopy, this study evaluated the physiological modifications in defense cells and mediators of inflammation, and the in vitro influence of norfloxacin on phagocytes from the peripheral blood and Bronchoalveolar Lavage Fluid (BLF). Twelve (12) healthy calves were infected with M. haemolytica and posteriorly physically examined, and had samples of white cells from the peripheral blood and BLF analyzed for changes in count and physiology, further, the norfloxacin effect on phagocytes from the peripheral blood and BLF was also studied. The experimental infection proved itself to be successful based on clinical, bronchoscopic and cytological findings. Furthermore, the M. haemolytica experimental infection was associated with modifications in the subpopulations of lymphocytes CD8+ and уδ T cells, in intracellular production of Reactive Oxygen Species (ROS), viability and phagocytosis activity of CD14+ cells from the peripheral blood and BLF and granulocytes from the peripheral blood. No obvious change was observed in the expression of cytokines IL-1β, IL-8 e TNF-α by cells from the peripheral blood or BLF. The treatment with the antibacterial agent, with or without the anti-inflammatory, was proved to be successful in curing the disease, thus, the addition of an anti-inflammatory was considered unnecessary to revert the clinical infection and in the immune response. Although there was a systemic response during the course of infection, the local response was more noticeable. Another key finding of the present study was the in vitro effect of norfloxacin on the intracellular production of ROS and on phagocytosis activity of CD14+ cells from the peripheral blood and BLF and granulocytes from the peripheral blood. In conclusion, the functional changes in phagocytes play an important role in the pathogenesis of pulmonary infection caused by M. haemolytica, as they were consistent with the clinical findings of mannheimiosis and with the treatment when it was administrated in the beginning of the infection.

Made available in DSpace on 2015-04-11T13:54:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 soriane.pdf: 3202394 bytes, checksum: 55f87924522756721f3a0349e37b2bac (MD5) Previous issue date: 2013-09-17 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas / Introduction: Hepatitis C virus (HCV) infection is the major cause of liver disease worldwide. Approximately 170 million more people are infected with the virus . The immune response against HCV leads to secretion of cytokines and activation and proliferation of effector T cells to act in infected hepatocytes and thus initiate the inflammatory process in the liver. Objective: This study aimed to characterize the immune response and to estimate the frequency of polymorphism of TNF - α -308 G / A in patients with chronic hepatitis C treated at the Tropical Medicine Foundation Dr. Heitor Vieira Dourado. Material and Methods: In this study we used samples from 30 patients with hepatitis C virus infection and 28 samples from individuals not infected with HCV . The analysis of T lymphocyte and adhesion molecules were performed by flow cytometry. The cytokine levels were assessed by flow cytometry using the CBA kit. The characterization of TNF- α -308 polymorphism was obtained by PCR-RFLP. The fibrosis was determined after histological analysis of liver biopsy according to the METAVIR score. Results: Our data revealed that percentage of regulatory T lymphocytes (T regs) and cytokines are increased in patients with hepatitis C when compared to the control group. Patients with fibrosis ≥F3 (N = 10) was characterized relevant frequency ( 100%) of individuals with high production of IL-2 and low frequency (50%) of individuals with high production of IL-10 and patients with fibrosis ≤F2 was characterized relevant frequency ( 85%) of individuals with high production of IL-4 and frequency ( 55%) of individuals with high production of IL-10. Conclusion: The effector T cells are regulated by T lymphocytes regs. In the fibrosis ≥F3 was characterized Th1 cytokine profile while in fibrosis ≤F2 ws characterized TH2 cytokine profile. The low IL-10 production was associated an increased fibrogenic activity in patients with hepatitis C. / Introdução: A infecção pelo vírus da hepatite C (VHC) é a principal causa de doença hepática em todo mundo. Aproximadamente 170 milhões de pessoas estão infectadas com o vírus. A resposta imune contra o VHC conduz a secreção de citocinas e ativação e proliferação de células T efetoras para atuarem nos hepatócitos infectados e assim iniciam o processo inflamatório no fígado. Objetivo: o estudo teve como objetivo caracterizar a resposta imune e estimar a frequência do polimorfismo do TNF-α -308 G/A em pacientes com hepatite C crônica atendidos na Fundação de Medicina Tropical Doutor Heitor Vieira Dourado. Material e Métodos: Foram utilizadas amostras de 30 de pacientes com hepatite C e 28 amostras de indivíduos não infectados com o VHC. As análises dos linfócitos T e moléculas de adesão foram realizadas por citometria de fluxo. As citocinas séricas foram analisadas por citometria de fluxo utilizando o kit CBA. A caracterização do polimorfismo de TNF-α- 308 foi obtida por PCR-RFLP. A fibrose foi determinada após análise histológica de biópsia hepática de acordo com o escore METAVIR. Resultados: Os pacientes com hepatite C apresentaram porcentagem de linfócitos T regulatórios (T regs) e citocinas aumentadas quando comparados ao grupo controle. Na fibrose ≥F3 (N=10) foi caracterizada relevante frequência (100%) de indivíduos com alta produção de IL-2 e baixa frequência (50%) de indivíduos com alta produção de IL-10 e na fibrose ≤F2 foi caracterizada relevante frequência (85%) de indivíduos com alta produção de IL-4 e frequência (55%) de indivíduos com alta produção de IL-10. Conclusão: Os linfócitos T efetores são regulados pelos linfócitos T regs. Na fibrose ≥F3 foi caracterizado um perfil de citocinas Th1 enquanto na fibrose ≤F2 um perfil de citocinas Th2. A baixa produção de IL-10 foi associada com uma atividade fibrogênica aumentada em pacientes com hepatite C.

Made available in DSpace on 2015-04-11T13:55:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Maria Raika.pdf: 1899808 bytes, checksum: 77cc709bf1d3f9b9a28dfa1611a631fa (MD5) Previous issue date: 2013-08-27 / Dengue disease is a serious public health problem in Brazil. There are four serotypes, DENV 1 to 4. In Brazil, all serotypes are circulating and are able to cause disease to humans, and may progress to a severe level, including death. Dengue transmission occurs by the bite of the female mosquito Aedes aegypti, widely distributed in tropical and subtropical countries. Brazil underwent a major epidemic in 1955 after which the disease was considered eradicated, causing disinterest among the medical community. The objective of this project was to trace the profile of cytokines in serum from patients with dengue in the city of Manaus. The immune response to dengue virus (DENV) and their serotypes has not yet been fully elucidated. Recently, studies demonstrated increased proinflammatory cytokines in patients infected with DENV-2, as IFN-γ, IL-6 and IL-17. However, the role of cytokines in the immune reponse Th1, Th2 and Th17 in dengue disease is still poorly understood. Tropical countries such as Brazil are conducive to a proliferation of vectors making it necessary to investigate the cytokine profile in the serum of patients with dengue, especially in a locality like Manaus. This study was a retrospective cross-sectional analytical component with cases of patients seen during the dengue epidemic in the Tropical Medicine Foundation of Amazonas Dr. Heitor Vieira Dourado (FMT / HVD) in the period of January to December 2011, as well as negative controls from the Foundation of Hematology and Hemotherapy of the State of Amazonas (FHEMOAM). There were 90 serum samples, 60 from patients with dengue and 30 control patients divided into: Group I: negative control - blood donors (n = 30), Group II: positive control - DENGUE NOT SEVERE (n = 30) and Group III: positive control DENGUE SEVERE (n = 30). The diagnosis was made by viral protein NS1, dengue IgM serology, and finally the RT-PCR. The project was approved by the Ethics Committee of the Universidade do Amazonas (UFAM), n. 256-163 - CONEP. The dosages of IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, TNF-α, IFN-γ and IL17A were performed by flow cytometry (BD CBA Kit ® Biosciences). We used the nonparametric Kruskal-Wallis (P<0,05). The graphics were designed using Graphprisma ® software. In all quantified cytokines (IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IFN-γ and IL-17A and TNF-α) it was possible to evaluate that in dengue groups (severe and non-severe) they had concentrations increased and statistically significant when compared to the negative control group. There was no difference in these cytokines when comparing the severe and not severe groups. Observing the behavior of cytokine IL-10, there was a trend in increase when comparing patients from dengue group who progressed to severe dengue. This pioneer study in this field in the northern region enabled us to identify the profile of a group of cytokines and infer their involvement in the immune response in circulating serotypes in Manaus in 2011. / A dengue é uma doença considerada como problema de saúde pública no Brasil. São conhecidos quatro sorotipos virais: 1, 2, 3 e 4, que são denominados de DENV 1, 2, 3 e 4. No Brasil todos os sorotipos estão circulantes e são capazes de causar doença ao homem, podendo evoluir para quadros graves, inclusive óbito. A transmissão da dengue ocorre exclusivamente pela picada da fêmea do mosquito Aedes aegypti que se desenvolve amplamente em países tropicais e subtropicais. A resposta imunológica ao vírus da dengue (DENV) e seus sorotipos, ainda não está totalmente elucidada. Recentemente foi demonstrado aumento de citocinas pró-inflamatórias em pacientes infectados com DENV-2, entre os quais foram observados altos níveis séricos de IFN-γ, IL-6 e IL-17. No entanto, o papel das citocinas na resposta Th1, Th2 e Th-17 na dengue ainda é pouco compreendido. Sendo assim, o objetivo deste projeto foi traçar o perfil de citocinas no soro de pacientes com dengue na cidade de Manaus. Este estudo foi retrospectivo de caráter transversal com componente analítico de casos de pacientes atendidos durante a epidemia de dengue na Fundação de Medicina Tropical do Amazonas Dr. Heitor Vieira Dourado (FMT / HVD) no período de Janeiro a Dezembro de 2011, bem como controles oriundos da Fundação (FHEMOAM). Foram utilizadas 90 amostras de soro, sendo 60 de pacientes com dengue e 30 de indivíduos separados em: Grupo I: controle negativo doadores de sangue (n= 30), Grupo II: controle positivo 1 DENGUE NÃO GRAVE (n= 30) e Grupo III: controle positivo 2 DENGUE GRAVE (n= 30). O diagnóstico foi feito por isolamento viral da proteína NS1, sorologia para dengue IgM, e finalmente o RT-PCR. O projeto foi aprovado no Comitê de Ética em Pesquisa da Universidade do Amazonas UFAM sob parecer n0 256.163 via CONEP. As dosagens das citocinas IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, TNF-α, IFN-γ e IL17A foram realizadas pela técnica de citometria de fluxo (kit CBA da BD® Biosciences). A comparação de médias dos níveis séricos de citocinas foi realizada por meio do teste não paramétrico de Kruskall-Wallis (P < 0,05). Os gráficos foram elaborados utilizando o software Graphprisma®. Em todas as citocinas quantificadas (IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IFN-γ e IL-17A e TNF-α) foi possível avaliar que os grupos de dengue (grave e não grave) apresentaram concentrações aumentadas e estatisticamente significativas em relação ao grupo controle negativo. Não houve diferença entre as citocinas quando comparados o grupo de dengue grave com o de dengue não grave. Este estudo, pioneiro nessa linha na Região Norte, possibilitou identificar o perfil de um grupo de citocinas e inferir no seu envolvimento/relação na resposta imunológica aos sorotipos circulantes em Manaus no ano de 2011. Observando isoladamente o comportamento da citocina IL-10, houve tendência no seu aumento no grupo composto por pacientes que evoluíram para dengue grave quando comparado ao grupos dengue não grave.