Orientador: Paulo Traiman / Coorientador: Andréa Teixeira de Carvalho / Banca: Anagloria Pontes / Banca: Rogério Dias / Banca: Walter Antonio Prata Pace / Banca: Ricardo Bassil Lasmar / Resumo: Introdução: O câncer epitelial de ovário (CEO) e endometriose apresentam alguns aspectos semelhantes, como infiltração tecidual e capacidade de produzir lesões em órgão adjacentes e a distância, no entanto, diferem de forma marcante em sua evolução. A análise das semelhanças e diferenças do sistema imune e resposta inflamatória relacionados a estas patologias podem permitir um melhor entendimento de seus mecanismos fisiopatológicos e consequentemente contribuir no aprimoramento do rastreamento, diagnóstico e estratégias terapêuticas. O objetivo desde estudo é avaliar e comparar a expressão gênica tecidual , citocinas, quimiocinas e micropartículas no plasma, líquido ascético e lavado peritoneal de pacientes com CEO e endometrioma. Métodos: Foram estudadas 60 pacientes, dividias em 3 grupos: Grupo 1 (CEO): 26 pacientes; Grupo 2 (endometriomas): 18 pacientes; Grupo 3 (controle): 16 pacientes. Todas as pacientes tiveram coletadas amostras de sangue, líquido ascítico ou lavado peritoneal e amostra tecidual das lesões. O material foi estocado para posterior análise. Citocinas e quimiocinas foram dosadas utilizando-se CBA, as amostras teciduais foram avaliadas com técnica de RT-qPCR e as micropartículas com técnica de imunoflorescência modificada para esta análise. Utilizou-se os teste de Mann-Whitney e Kruskal-Wallis quando apropriados. Para a identificação de associações entre dosagens de líquido ascítico e soro foi utilizado o coeficiente de correlação de Sperman. O valor de p<0,05 foi considerado significativo. Resultados: A idade média das pacientes no grupos CEO, endometrioma e controle foram respectivamente 62, 37 e 40,2 anos. Os pacientes foram estadiados segundo o critérios da FIGO para o câncer de ovário,10 pacientes nos estadios I e II, e 16 no estádio III/IV no grupo de CEO. O estadiamento dos pacientes com endometriomas foram realizados conforme os critérios da ASRM identificando-se ... / Abstract: Not available / Doutor

Orientador: Sueli Aparecida Calvi / Banca: Ana Paula Fávero Trombone Garlet / Banca: Rita Cristina Chaim / Resumo: A leishmaniose visceral (LV) é um problema emergente de saúde pública, sendo uma das principais doenças negligenciadas no Brasil e no mundo. É causada por L. donovanie L.chagasi/infantum. A resistência à infecção está associada à produção de citocinas de perfil Th1 e a suscetibilidade às citocinas do perfil Th2. Os receptores Toll-like (TLRs) da imunidade inata têm importante papel no reconhecimento microbiano e no desenvolvimento da resposta imune adaptativa. Além disso, o estado nutricional possui grande impacto na resposta imune. Desse modo, nosso objetivo foi avaliar o perfil bioquímico-nutricional, o envolvimento dos TLR2 e TLR4 na produção de citocinas e NO e relacionar as lipoproteínas com a resposta imune em pacientes com LV antes e após o tratamento. Foram estudados 13 pacientes com LV antes e após o tratamento e 16 indivíduos controles.A avaliação bioquímica-nutricional foi realizada através da impedância biolétrica e testes bioquímicos de colesterol total (CT), HDL, LDL, triglicerídeos (TG), glicose e proteínas totais e frações. A expressão de TLR2 e TLR4 em linfócitose monócitosfoi realizada através da citometria de fluxo. A produção das citocinas e NO em sobrenadantes de cultura de PBMCs estimuladas ou não com agonistas dos receptores TLR2 (PGN) e do TLR4 (LPS), foi avaliada através da técnica de CBA Flex e de kits comerciais. Pacientes prétratamento apresentaram menor ângulo de fase em relação aos controles, níveis diminuídos de CT, HDL, LDL e albumina e níveis aumentados de triglicerídeos em relação ao póstratamento e controles. Além disso, mostraram maior porcentagem de linfócitos expressando TLR2 e TLR4 e aumento da expressão destes receptores em monócitos. Quanto às citocinas, foi verificado aumento da produção de TNF-α, IL-10 e TGF-β enquanto os níveis de IFN-γ, IL-17 e NO foram menores. Os resultados também mostraram o envolvimento dos receptores TLR2 e TLR4 na ... / Abstract: Visceral leishmaniasis (VL) is an emerging public health problem, being of the major neglected diseases in Brazil and worldwide. It is caused by L. chagasi and L. donovani/infantum. Resistance to infection is associated to production of Th1 cytokines and susceptibility to Th2 cytokine profile. The toll-like receptors (TLRs) of the innate immunity plays an important role in microbial recognition and development of the adaptive immune response. In addition, nutritional status has a great impact on the immune response. Our objective was to evaluate the biochemical and nutritional profile, the involvement of TLR2 and TLR4 in the production of cytokines and NO and relate the lipoproteins to the immune response in VL patients, before and after the treatment. Were studied 13 patients with LV before and after the treatment and 16 control subjects. Biochemical and nutritional evaluation was performed by bioelectrical impedance and biochemical assays of total cholesterol (TC), HDL, LDL, triglycerides (TG), glucose, and total protein and fractions. Expression of TLR2 and TLR4 in lymphocytes and monocytes was performed by flowcytometry. The production of cytokines and NO in culture supernatants of PBMCs stimulated or not with agonists of TLR2 (PGN) and TLR4 (LPS) receptors was evaluated by CBA Flex technique and commercial kits. Patients on pre-treatment had lower phase angle compared to controls, reduced levels of TC, HDL, LDL and albumin and increased triglycerid elevels in relation to post-treatment and controls. In addition, pre-treatment patients presented a higher percentage of lymphocytes expressing TLR2 and TLR4 and increased expression of these receptors on monocytes. Regarding the cytokines, was observed increased of the production of TNF-α, IL-10 and TGF-β, while production of IFN- γ, IL-17 and NO were lower. The results also demonstrated the involvement of TLR2 and TLR4 receptors on TNF-α, IL-10 and NO production. With treatment ... / Mestre

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2016-02-29T22:53:27Z No. of bitstreams: 1 JoaoFirminoRodriguesNeto_TESE.pdf: 2194031 bytes, checksum: fb646e671a736d92f6d4e5cc3cc5acc2 (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2016-03-02T00:38:57Z (GMT) No. of bitstreams: 1 JoaoFirminoRodriguesNeto_TESE.pdf: 2194031 bytes, checksum: fb646e671a736d92f6d4e5cc3cc5acc2 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-02T00:38:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 JoaoFirminoRodriguesNeto_TESE.pdf: 2194031 bytes, checksum: fb646e671a736d92f6d4e5cc3cc5acc2 (MD5) Previous issue date: 2015-04-27 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico - CNPq / A leishmaniose visceral (LV) ? uma doen?a end?mica em muitos pa?ses, incluindo o Brasil. O protozo?rio Leishmania infantum ? o agente etiol?gico da LV, sendo transmitido pela picada das f?meas dos flebotom?neos, durante o repasto sangu?neo. A maioria dos indiv?duos quando expostos ao parasita n?o desenvolvem a doen?a, pois apresentam um predom?nio da resposta celular Th1. Aqueles que desenvolvem doen?a, apresentam sinais como febre, perda de peso, hepatoesplenomegalia e um comprometimento da resposta imune celular, espec?fica a ant?genos de Leishmania. N?s avaliamos se essa anergia, observada durante a doen?a ativa, poderia estar associada com altera??es nas mol?culas coestimulat?rias de linf?citos T ou em seus ligantes em mon?citos CD14+. H? aumento na porcentagem de CTLA-4 em linf?citos T CD4+ (p=0,001) e ICOS em linf?citos T CD4+ e CD8+ (p=0,002 para CD4+ e p=0,003 para CD8+) ap?s est?mulo por ant?geno sol?vel de Leishmania (SLA) na LV sintom?tica, e que h? maior porcentagem dessas mol?culas ex vivo, quando comparados indiv?duos sintom?ticos aos recuperados (p=0,04 para CTLA-4 em CD4+, e p=0,001 para ICOS em CD4+ e p=0,026 para CD8+). Al?m disso, encontramos uma maior express?o dos genes CTLA-4, OX-40 e ICOS, durante a LV ativa. As mol?culas CD40, CD80, CD86, HLA-DR e ICOSL, n?o sofrem altera??o durante a doen?a. H? produ??o de IFN-? por c?lulas de sangue perif?rico, ap?s est?mulo por SLA, em indiv?duos sintom?ticos; no entanto, h? diminui??o na raz?o entre IFN-?/IL-10, com aumento desta ap?s a cura. A observa??o do comprometimento de algumas vias de mol?culas coestimulat?rias poderia diminuir a capacidade microbicida dos fag?citos, durante a leishmaniose visceral sintom?tica, podendo facilitar a sobreviv?ncia e a prolifera??o do parasita. / Visceral leishmaniasis (VL) is endemic in many countries, including Brazil. The protozoan Leishmania infantum, is the etiological agent of VL, and is transmitted by the bite of female sandflies during the blood meal. The majority of subjects when exposed to the parasite do not develop the disease, because of development of Th1 cellular responses. Those who have develop signs of VL such as fever, weight loss, hepatosplenomegaly, have impairment of the cellular immune response, specific to the Leishmania antigens. We evaluated whether the specififc anergy during symptomatic VL, may be associated with changes in T cells costimulatory molecules or their ligands in CD14+ monocytes. There is an increase in CTLA-4 porcentage on CD4+ T lymphocytes (p=0.001) and ICOS on CD4+ and CD8+ T cells (p=0.002 to CD4+ and p=0.003 to CD8+), after stimulation by soluble Leishmania antigen (SLA) during active visceral leishmaniasis, and that there is a higher percentage of these molecules ex vivo, when comparing symptomatic to recovered individuals (p=0.04 to CTLA-4 in CD4+, and p=0.001 to ICOS in CD4+ and p=0.026 to CD8+). Moreover, we found a high gene expression of CTLA-4, OX-40 and ICOS during active VL. CD40, CD80, CD86, HLA-DR and ICOSL molecules do not suffer changes during disease. There is IFN-? production by the peripheral blood cells, after SLA stimulation, by peripheral blood cells in symptomatic subjects; however, there is a decrease of the ratio IFN-?/IL-10, which is reversed after clinical recovery. The impairment of some costimulatory molecules pathways during symptomatic VL could inhibit the ability of phagocytes to kill Leishmania and could facilitate their survival and the proliferation inside macrophages.

A esplenectomia total (ET) acarreta alterações na resposta imune que aumentam o risco de desenvolvimento de infecções graves. Objetivou-se determinar as subpopulações linfocitárias no sangue, nos baços e nos auto-implantes esplênicos (AIE), em ratos submetidos a ET isolada ou combinada com AIE (ET+AIE) e a suplementação dietética com L-glutamina (GLN). Utilizou-se ratos Sprague-Dawley submetidos a operação simulada, ET e ET + AIE, com AIE recuperados após seis e 12 semanas do início do experimento, e com e sem GLN. A suplementação ocorreu diariamente, nos 15 dias que antecederam a coleta sangüínea realizada imediatamente antes dos procedimentos operatórios (D0), após 12 semanas da operação simulada e ET, e após seis e 12 semanas de ET+AIE. As avaliações foram realizadas por meio de hemograma e citometria de fluxo (CF). A análise estatística utilizou testes paramétricos e não-paramétricos, sendo p<0,05 considerado para a rejeição da hipótese nula. ET acarretou diminuição da contagem relativa de linfócitos T totais e T- CD4 no sangue, mas GLN evitou a diminuição do percentual de células T- CD4; AIE, após 12 semanas de experimento, propiciou a manutenção da contagem relativa de linfócitos T totais e T- CD4 no sangue, e dentre esses animais, aqueles que receberam GLN, apresentaram contagens relativas de linfócitos T- CD4 maiores que animais esplenectomizados sem suplementação; AIE, após seis semanas de experimento, associado a GLN, ocasionou contagens absoluta e relativa de linfócitos T- CD4 no sangue significativamente maiores que em animais submetidos ao mesmo procedimento cirúrgico, com o mesmo tempo de avaliação, mas sem GLN; GLN manteve o número de células brancas / g de tecido nos AIE, em comparação ao encontrado nos baços de animais saudáveis; após período de regeneração de 12 semanas, AIE apresentaram contagem relativa de linfócitos B de zona marginal do baço semelhante à encontrada nos baços de animais saudáveis, o que não ocorreu com período de regeneração de seis semanas. O auto-implante esplênico em ratos, após esplenectomia total, associado à suplementação dietética com L-glutamina, foi capaz de reverter alterações observadas em algumas das subpopulações linfocitárias, ocasionadas pela esplenectomia. / Total splenectomy (TS) causes changes in the immune response that increase the risk of development of severe infection. The objective of the present study was to determine the lymphocyte subpopulations in blood, spleen, and splenic auto-implants (SAI) of rats subjected to TS alone or in association with SAI (TS + SAI) and to dietary supplementation with L-glutamine (GLN). Sprague-Dawley rats were subjected to sham surgery, to TS, and to TS + SAI, with SAI retrieved six and 12 weeks after the beginning of the experiment, with and without GLN. Supplementation was provided daily for 15 days preceding the blood collection performed immediately before the surgical procedures (D0), 12 weeks after sham surgery and TS, and six and 12 weeks after TS + SAI. Blood count and flow cytometry were used for the evaluations. Data were analyzed statistically by parametric and nonparametric tests, with the level of significance set at p<0.05. TS caused a reduction in the relative counts of total T and T-CD4 lymphocytes in blood, but GLN prevented the reduction in the percentage of T- CD4. After 12 weeks of the experiment, SAI favored the maintenance of the relative count of total T and T-CD4 lymphocytes in blood, and the animals receiving GLN presented higher relative T-CD4 counts than unsupplemented splenectomized animals. After six weeks of the experiment, SAI combined with GLN caused significantly higher absolute and relative T-CD4 lymphocyte counts compared to animals subjected to the same surgical procedure but receiving no GLN. GLN maintained the number of white cells/g tissue in SAI animals compared to those detected in the spleen of healthy animals. After a 12 week period of regeneration, SAI presented a relative B lymphocyte of the marginal zone of the spleen count similar to that detected in the spleen of healthy animals, a fact that did not occur after period of regeneration of six weeks. Splenic auto-implant in rats after total splenectomy, associated with dietary supplementation with L-glutamine, in some of the lymphocyte subpopulations, was able to reverse the changes induced by splenectomy.

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2017-09-04T20:38:59Z No. of bitstreams: 1 ManoellaDoMonteAlves_DISSERT.pdf: 1198432 bytes, checksum: ece756325d875906e5cafaa70c73612e (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2017-09-06T19:35:23Z (GMT) No. of bitstreams: 1 ManoellaDoMonteAlves_DISSERT.pdf: 1198432 bytes, checksum: ece756325d875906e5cafaa70c73612e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-06T19:35:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ManoellaDoMonteAlves_DISSERT.pdf: 1198432 bytes, checksum: ece756325d875906e5cafaa70c73612e (MD5) Previous issue date: 2017-03-17 / A Leishmania infantum ? um pat?geno de comportamento oportunista. O risco de pessoas com infec??o assintom?tica por L. infantum desenvolverem leishmaniose visceral (LV) ? maior naquelas coinfectadas com HIV (v?rus da imunodefici?ncia humana) do que em imunocompetentes. A hip?tese do presente estudo ? que ativa??o persistente de c?lulas T em pessoas coinfectadas com HIV (HIV+) e L. infantum aumenta o risco de progress?o para LV. Para testar essa hip?tese, foi realizado um estudo, entre maio de 2014 a agosto de 2016, em uma ?rea end?mica para LV no estado do Rio Grande do Norte, Brasil, com objetivo de determinar a frequ?ncia de coinfec??o assintom?tica HIV/L. infantum e avaliar a resposta imune em pessoas com coinfec??o Leishmania-HIV. Em estudo transversal, um total de 1.134 pessoas HIV+ foram avaliadas quanto a frequ?ncia de infec??o por L. infantum, usando-se como marcador anticorpo anti-Leishmania. Um subgrupo de coinfectados HIV/L. infantum foi seguido e determinados os n?veis de ativa??o, senesc?ncia, anergia, exaust?o e regula??o de c?lulas T e a evolu??o cl?nica, comparando-os com pessoas HIV+, AIDS/LV, LV e saud?veis. A taxa de infec??o assintom?tica por L. infantum em pessoas HIV+ foi de 23,6% (n=268), destas 2 desenvolveram LV dentro de 1 ano e foram a ?bito. Pessoas dos grupos HIV/L. infantum, AIDS/LV e LV apresentaram maior express?o de CD38HLA-DR e PD1 em linf?citos T CD8 do que pessoas com HIV. Em todos os grupos houve express?o aumentada de CD57 nos linf?citos T CD8. O grupo HIV/L. infantum apresentou maior express?o de CD25FoxP3 nos linf?citos T CD8. Pessoas infectadas por L. infantum apresentaram uma maior ativa??o de linf?citos T CD8. Essa ativa??o persistente em pessoas com HIV/L. infantum pode levar a d?ficits imunol?gicos que aumentaria o risco de progress?o para LV. Esses resultados sinalizam para a necessidade de avalia??o de profilaxia com drogas leishmanicidas como medida para reduzir o risco de desenvolver LV sintom?tica. / The risk to develop visceral leishmaniasis (VL) in subjects with HIV+ (Human immunodeficiency virus) is greater than for immunocompetent people with asymptomatic Leishmania infantum. The hypothesis of this study was that persistent T cell activation in HIV co-infected persons and asymptomatic Leishmania infection increases the risk of progression to VL and to relapse. To test this hypothesis, a crosssectional study of subjects HIV+ was carried out between May 2014 and August 2016 in an endemic area for LV, in the state of Rio Grande do Norte, northeast Brazil, with the goal to determine the rate of asymptomatic L. infantum infection in HIV-infected persons (HIV +) and the immunological status of this co-infection. A total of 1,134 HIV+ subjects was recruited. A subgroup of HIV/L. infantum was followed to determine the level of T cell activation, senescence, anergy, exhaustion and regulation and clinical follow up and compared to a HIV+, AIDS/VL, VL alone and healthy individuals. The rate of L. infantum asymptomatic infection was 23.6%. Of the 268 HIV/L. Infantum, 2 developed VL and died. Subjects with HIV/L. infantum, AIDS/VL and VL group presented higher expression of CD38HLA-DR and PD1 in CD8 cells than subjects with only HIV. For all groups, there was an increased expression of CD57 in T CD8 lymphocytes. HIV/L. infantum group presented the higher CD25FoxP3 expression in T CD8 lymphocytes. People infected with L. infantum had a greater activation of CD8 T lymphocytes. This persistent activation may lead to possible immunologic deficits that in individuals with immunosuppressive diseases would increase the risk to develop VL. Therefore, prophylaxis with leishmanicidal drugs should be considered.

A identificação de moléculas com potenciais ações terapêuticas e a compreensão dos mecanismos envolvidos na modulação da resposta imune frente à administração de substâncias farmacologicamente ativas em modelos experimentais infectados por Trypanosoma cruzi tem contribuído de maneira importante nas investigações de novas terapias para a doença de Chagas. Estudos prévios demonstraram as ações do zinco e da melatonina sobre a imunidade do hospedeiro, durante a fase aguda da infecção chagásica experimental, potencializando a resposta imune gerada contra o parasita. O presente estudo teve como objetivo avaliar o possível efeito imunomodulador da administração de zinco e melatonina em ratos Wistar machos durante a fase crônica da infecção por T. cruzi, utilizando os seguintes parâmetros: dosagens de citocinas IL-2, IL-4, IL-10, IFN-, e TNF-, produção de óxido nítrico, proliferação de esplenócitos, citometria de fluxo para análise fenotípica das subpopulações de células T CD3+CD4+ e CD3+CD8+, células dendríticas, células NK (CD161+) e NKT (CD3+CD161+), macrófagos, moléculas co-estimuladoras CD28, CD80 e CD86, RT1B, análise dos marcadores CD11a e CD25 e detecção do processo de apoptose celular. O efeito imuno-modulador do zinco e da melatonina durante a fase crônica da infecção chagásica pode ser comprovado através redução no percentual de macrófagos, células dendríticas, linfócitos TCD4+ e TCD8+, apoptose celular, das concentrações de óxido nítrico, IFN- e MCP-1. Adicionalmente, a terapia com zinco e melatonina durante a infecção experimental resultou em modificações importantes na resposta imunológica, como evidenciado pelo aumento no percentual de células T reguladoras, da proliferação celular e dos níveis das citocinas IL-2, IL-4 e IL-10. O desenvolvimento de novas estratégias terapêuticas, que possam modular a resposta inflamatória, contribuindo para prevenção dos danos teciduais observados na fase crônica da doença, são alvos importantes no tratamento da doença de Chagas. / The identification of molecules with potential therapeutic actions and the comprehension of the mechanisms involved in modulating the immune response by the administration of pharmacologically active substances in experimental models infected with Trypanosoma cruzi have contributed significantly in the investigation of new therapies for Chagas\' disease. Previous studies have demonstrated the actions of zinc and melatonin on host\'s immunity during the acute phase of experimental Chagas\' disease, enhancing the immune response generated against the parasite. The present study aimed to evaluate the possible immunomodulatory effect of zinc and melatonin administration in male Wistar rats during the chronic phase of T. cruzi infection, using the following parameters: measurement of IL-2, IL-4, IL-10, IFN- and TNF-, nitric oxide, proliferation of splenocytes, flow cytometry for phenotypic analysis of CD3+CD4+ and CD3+CD8+ T cells subpopulations, dendritic cells, NK cells (CD161+) and NK T (CD3+CD161+), macrophages, co-stimulatory molecules CD28, CD80 and CD86, RT1B, analysis of markers CD11a and CD25 and detection of the apoptosis process. The immunomodulator effect of zinc and melatonin during the chronic phase of Chagas\' disease was evaluated by a reduction of the percentage of macrophages, dendritic cells, CD4+ and CD8+ lymphocytes, cellular apoptosis, the concentrations of nitric oxide, IFN- and MCP-1. In addition, the treatment with zinc and melatonin during the experimental infection resulted in significant changes in the immune response, as evidenced by the increased percentage of regulatory T cells, cell proliferation and cytokine levels of IL- 2, IL-4 and IL-10. The development of new therapeutic strategies that can modulate the inflammatory response, contributing to prevention of tissue damage observed in the chronic phase, are important targets in the treatment of Chagas disease.

Este estudo tem como objetivo principal avaliar os efeitos da suplementação crônica com extrato de chá verde sobre os indicadores inflamatórios e da função de neutrófilos de ratos obesos. Ratos machos Wistar (Rattus norvegicus) foram tratados com extrato de chá verde via intragástrica, durante 12 semanas (5 dias/semana; 500mg/kg) e a obesidade foi induzida por dieta de cafeteria (8 semanas). Os neutrófilos foram obtidos da cavidade peritonial pela injeção de glicogênio de ostra (1% em PBS) 4h antes do procedimento de eutanásia por decapitação. Os resultados obtidos demonstram que a obesidade causa uma redução nas funções efetoras de neutrófilos o que pode pode aumentar a suceptibilidade à infecções, e o tratamento com extrato de chá verde melhora as funções dessas células. Dessa forma, este trabalho contribui para a elucidação das alterações decorrentes da obesidade no sistema imune e as ações benéficas do extrato de chá verde nesta condição. / This study aims to evaluate the effects of chronic supplementation with green tea extract on inflammatory markers and neutrophil function of rats with obesity induced by cafeteria diet intake. For this study, male Wistar rats (Rattus norvegicus) were treated with green tea extract intragastric for 12 weeks (5 days/week; 500mg/kg) and obesity induced by cafeteria diet (8 weeks). Neutrophils were obtained from peritoneal cavity by injection of oyster glycogen (1% in PBS) 4 h before euthanasia by decapitation procedure. The results obtained demonstrate that the obesity causes a reduction in neutrophil effector functions which may increase susceptibility to infections, and the treatment with green tea extract seems to improve the functions of these cells in obese mice. This work contributes for the elucidation of the changes arising from obesity in the immune system and the beneficial actions of the green tea extract in this condition.

Orientadores: Maria Marluce dos Santos Vilela, Marcos Tadeu Nolasco da Silva / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-10T07:56:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mazzola_TaisNitsch_M.pdf: 3018206 bytes, checksum: 39fdba437713dd35f918f994fd3bd77d (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: Este estudo teve como objetivos analisar a resposta imune celular de lactentes saudáveis à vacina de Bacillus Calmette-Guérin (BCG), vacinados ao nascer com BCG e Hepatite B combinada ou separada e compará-la à de lactentes expostos ao Vírus da Imunodeficiência Humana (HIV) e não infectados. Nos lactentes sadios, a proliferação de linfócitos T frente a BCG, medida por citometria de fluxo, foi semelhante nos grupos que receberam a vacina combinada e separada e a subpopulação que mais expandiu nos ensaios in vitro foi a TCR ?d+. As concentrações de IL-10, IL-12, IFN-? e TNF-a nas culturas estimuladas com BCG, determinadas por ELISA, não diferiram entre os grupos, sugerindo que a vacinação combinada de BCG e Hepatite B promoveu resposta celular semelhante à separada. Os lactentes expostos ao HIV foram recrutados no Ambulatório de Pediatria da UNICAMP. A proliferação de linfócitos T específica para BCG foi reduzida em relação a lactentes sem exposição e apenas nos expostos com idades entre 18,1 e 23,4 meses as porcentagens de blastos CD4+, CD8+ e TCR ?d+ foram semelhantes aos controles. A concentração de IFN-? estimulada por BCG em cultura foi mais baixa nos expostos entre 6,7 a 8,8 meses, em relação às outras faixas etárias e aos controles. IL-10 e TNF-a não foram diferentes entre os lactentes com e sem exposição ao HIV. A deficiência da resposta imune celular específica para BCG observada nos lactentes expostos ao HIV sugere um atraso na maturação do sistema imune, fazendo-se necessário um seguimento prospectivo para definir se esta alteração é ou não transitória / Abstract: The objectives of this study were to evaluate cell-mediated immune response to Bacillus Calmette-Guérin (BCG) vaccination in infants vaccinated with combined or separated BCG and Hepatitis B and to compare with BCG-specific response from uninfected infants with vertical exposure to Human Immunodeficiency Virus-1 (HIV-1). BCG-specific proliferation by flow cytometry and IL-10, IL-12, IFN-? and TNF-a concentrations by ELISA were similar in PBMC from infants vaccinated with combined or separated BCG and Hepatitis B. There was CD4+, CD8+ and remarkable ?d+ T cell proliferation in BCG-stimulated cultures. The results suggested that the combined BCG and Hepatitis B vaccine was as immunogenic as BCG vaccine inoculated alone. Exposed HIV-uninfected infants were recruited at Pediatrics Out-Patients Unit of Hospital das Clínicas in UNICAMP and separated into three groups: E1 (aged 6.7-8.8 months), E2 (aged 9.1-17.1) and E3 (aged 18.1-23.4). Unexposed infants (UE, aged 7.0-8.7 months) and E1 matched for age. Proliferation in cell cultures with BCG was significantly reduced in all exposed groups in comparison to UE. Only BCG-stimulated cultures from E3 were similar to UE in relation to CD4+, CD8+ and ?d+ T cell subsets. TNF-a and IL-10 production was not different in BCG-stimulated cultures of unexposed and exposed infants from all groups and there were lower IFN-? concentration in the samples from E1 in comparison to all of the other groups. The results demonstrated a delay in immune system development of HIV-exposed infants / Mestrado / Saude da Criança e do Adolescente / Mestre em Saude da Criança e do Adolescente

O sistema imunológico preserva a integridade do organismo perante o ambiente que ele está inserido. As reações imunológicas são essenciais para controle e eliminação da infecção, no entanto se os mecanismos contra regulatórios da resposta imunológica forem superados, a homeostasia pode falhar levando a um desequilíbrio no processo de reparo do organismo, podendo causar danos, insuficiência de órgão e até a morte. Muitos estudos têm demonstrado a interação entre o sistema imunológico e os aminoácidos. Visto que a glutamina é utilizada como substrato energético para enterócitos, além de fornecer nitrogênio para síntese de purinas e pirimidinas para proliferação celular e a taurina participa da hemostasia, estabilização de membranas, mobilização de cálcio, além de ser importante agente antioxidante, nos propusemos nesse trabalho investigar os efeitos da glutamina e taurina sobre aspectos relacionados a resposta imunológica de células da linhagem Raw 264.7. Para tanto foram avaliadas: viabilidade celular; a capacidade proliferativa e o ciclo celular; a capacidade de síntese de citocinas: IL-1 &#945;, IL-1&#946;, IL-6, IL-10 e TNF-&#945; e a expressão do fator de transcrição NF&#954;B, bem como de seu inibidor I&#954;B&#945;. Foi possível observar aumento da viabilidade e proliferação celular para células tratadas com glutamina, entretanto não foi observado o mesmo efeito para taurina. Quando ambos aminoácidos foram associados, houve prevalência dos efeitos da glutamina. Observamos neste trabalho, que houve uma tendência da diminuição de expressão da relação de p-NF&#954;B/NF&#954;B quando se aumentou a concentração de glutamina. Paralelamente, o mesmo foi encontrado para relação p-I&#954;B/I&#954;B. Esses resultados corroboram com os resultados encontrados na produção das citocinas pró-inflamatórias IL-1&#945;, Il-1&#946; e TNF-&#945;, uma vez que ao aumentarmos a concentração de glutamina bem como glutamina e taurina, observamos menor produção das mesmas. Complementarmente, encontramos resultados opostos para a citocina anti-inflamatória IL-10, a qual teve maior síntese em resposta ao aumento da concentração dos aminoácidos. Portanto concluímos que tanto a glutamina quanto a taurina possuem capacidade de modular aspectos da resposta imunológica de células Raw 264.7. / The immune system protect the body\'s integrity to the environment it is inserted. The immune responses are essential for control and elimination of infection, however if the mechanisms against regulatory immune response are overcome, homeostasis may fail leading to an imbalance in the repair of the body process and may cause damage, organ failure and even death. Many studies have demonstrated the interaction between the immune system and amino acids. Since glutamine is used as an energy substrate for the enterocytes and provides nitrogen to purine and pyrimidine synthesis to cell proliferation and taurine participates of hemostasis, stabilization of membranes, calcium mobilization, and besides being an important antioxidante, this work aimed to study the effects of glutamine and taurine in some aspects of the immune response of RAW 264.7 cell line. Therefore, we evaluated: cell viability; the proliferative capacity and the cell cycle phases; cytokine synthesis capacity: IL-1 &#945;, IL-&#946;, IL-6, IL-10 and TNF-&#945;, as well as the expression of the transcription factor NFkB and its inhibitor I&#954;B&#945;. It was possible to observe increased cell viability as well as proliferation in cells treated with glutamine, but was not observed the same effect in cells treated with taurine. When cells were treated with both amino acids, there was a prevalence of the effects of glutamine. We observed in this study, a trend of decreasing expression of p-NF&#954;B/ NF&#954;B relationship when cells were treated with higher concentration of glutamine. In parallel, the same was found for p-I&#954;B / I&#954;B relationship. These results corroborate wih the results about the production of pro-inflammatory cytokines IL-1&#945;, IL-1&#946; and TNF-&#945;, since by increasing concentration of glutamine as well as glutamine and taurine, we observed reduced production of this cytokines. In addition, we found opposite results for the anti-inflammatory cytokine IL-10 which had higher production in response to increased concentration amino acids treatment. Therefore we conclude that both glutamine and taurine have the capacity to modulate some aspects in the immune response of RAW 264.7 cell.

Estudos prévios em nosso laboratório mostraram na interface materno-fetal de camundongos, aos 10 dias de gestação, a expressão máxima do fator de inibição de migração de macrófagos (MIF) pelas células trofoblásticas e de seus receptores (CD44/CD74) pelas células deciduais, tornando estas células potenciais alvos da ação desta citocina. Dentre funções atribuídas a esta citocina, destacam-se ações pró-inflamatórias sobre a resposta imunológica e sobre processos de proliferação e sobrevivência celular. Neste contexto, este estudo tem como objetivo analisar uma possível participação de MIF na ativação de processos de sobrevivência celular mediados pela proteína quinase Akt, nas células deciduais de camundongo, in vitro. Utilizou-se cultivo primário de células deciduais que receberam MIF recombinante de camundongo (mrMIF) associado ou não a inibidores da via PI3K/AKT (LY294002 e Wortmannin). As culturas foram analisadas por meio de reações imuno-histoquímicas, Western blot e ensaios de morte celular. Assim como in vivo, o complexo receptor de MIF, CD74/CD44 foi imunolocalizado nas células deciduais cultivadas. A adição de MIF exógeno reduziu os níveis de apoptose. MIF também interferiu no processo de sobrevivência das células deciduais in vitro diminuindo as taxas de morte por apoptose quando desafiadas com peróxido de hidrogênio. Além disto, as células tratadas com mrMIF apresentaram maior expressão de pAKT e pMDM2. Dados da literatura mostram que a via AKT é responsável por ativar mecanismos de sobrevivência celular e sua ativação por MIF nas células deciduais pode indicar um papel para esta citocina na homeostase decidual, garantindo a integridade da barreira materno-fetal e, desta forma, a manutenção desta interface imprescindível para o sucesso da gestação. / Previous studies from our laboratory showed that the maternal-fetal interface in mouse at gestation day 10 exhibits high levels of macrophage inhibiting migration factor (MIF) expressed by trophoblast cells and its receptors (CD44/CD74) by decidual cells, making these cells potential targets for this cytokine action. Among the roles attributed to this cytokine, it can be highlighted the pro inflammatory actions on the immune response and on proliferation and cellular survival processes. In this context, this study aim to analyze the possible role of MIF in the activation of survival mechanisms mediated by the protein kinase Akt in mouse decidual cells in vitro. We have used primary culture of decidual cells receiving recombinant mouse MIF (mrMIF) with or without the PI3K/AKT pathway inhibitor (LY294002 and Wortmannin). Cultures were analyzed by immunohistochemical reactions, Western blotting and cell death analysis. As in vivo, the MIF receptor complex, CD74/CD44 was immunolocalized in the cultured decidual cells. The addition of exogenous MIF reduced the apoptotic rates in decidual cells. MIF also interfered in the process of survival of decidual cells in vitro by decreasing rates of cell death by apoptosis when challenged with hydrogen peroxide. In addition, cells treated with mrMIF have higher expression of pAKT and pMDM2. Recent studies show that AKT pathway is responsible for cell survival. In this context, AKT activation by MIF in decidual cells may indicate a role for this cytokine in decidual homeostasis by ensuring the integrity of the maternal-fetal barrier and thereby, maintaining this essential interface and successful pregnancy.