A malária continua sendo um dos maiores problemas de saúde pública no mundo e apesar dos muitos esforços no combate a doença, as estratégias disponíveis hoje ainda não foram capazes de controlar com eficiência sua disseminação global. Por isso o desenvolvimento de uma vacina é de extrema importância. Devido a complexidade do ciclo do parasita, consideramos que uma formulação vacinal eficaz para a indução de resposta imune protetora contra o P. vivax deverá conter regiões de antígenos de vários estágios do parasita. Dentre os vários antígenos da fase sanguínea do plasmódio identificados, o Antígeno 1 de Membrana Apical (AMA1), a porção C-terminal da Proteína 1 de Superfície do Merozoíto (MSP119) e as proteínas da família MSP3 têm se mostrado promissores. Portanto, o objetivo deste estudo foi caracterizar a resposta imune celular induzida em camundongos pela imunização experimental com antígenos de P. vivax candidatos a vacina, tendo como foco principal a combinação das proteínas AMA1, MSP119 e MSP3β. Inicialmente, as imunizações experimentais com a combinação dos 3 antígenos foram realizadas na presença de Adjuvante Incompleto de Freund (AIF) em camundongos C57BL/6. Os camundongos imunizados não apresentaram respostas significativas com proliferação e secreção de IFN-γ por linfócitos T CD4+ e CD8+ após estimulação in vitro com as proteínas recombinantes ou peptídeos sintéticos baseados na proteína AMA1. Por outro lado, o adjuvante Poly (I:C) mostrou-se mais eficiente na indução de resposta proliferativa por linfócitos T CD4+, quando testado com a proteína MSP119-PADRE. Assim, selecionamos este adjuvante para dar continuidade às imunizações experimentais com a combinação de antígenos. Por ELISPOT, foi possível demonstrar que a co-administração dos 3 antígenos foi capaz de estimular células produtoras de IFN-γ em resposta à todos os antígenos testados. Também foi nosso objetivo avaliar a produção de IFN-γ após imunização de linhagens distintas de camundongos com uma proteína quimérica recentemente produzida em nosso laboratório (AMA1-MSP119). Em C57BL/6, a produção de IFN-γ foi significativamente maior no grupo imunizado com a proteína de fusão, quando comparado com o grupo que recebeu a co-adminstração dos dois antígenos, mostrando que a utilização de proteínas fusionadas pode solucionar possíveis problemas de competição antigênica. Em conjunto, nossos dados demonstram que a utilização de múltiplos antígenos fusionados, ou co-administrados, pode ser uma estratégia promissora de vacinação contra a malária. / Malaria remains as a major public health problem worldwide. In spite of the efforts for prevention, the strategies available today have not succeeded to control its global distribution. Therefore, the development of a vaccine is extremely important. Due to the complexity of the parasite cycle, we consider that an effective vaccine formulation to induce protective immune response against P. vivax should contain regions of antigens from several stages of the parasite. Among the different blood stage antigens of Plasmodium identified, the Apical Membrane Antigen 1 (AMA1), the C-terminal portion of the Merozoite Surface Protein 1 (MSP119) and MSP3 family proteins have shown promising results. Therefore, the aim of this study was to characterize the cellular immune response induced in mice by experimental immunization with antigens from P. vivax vaccine candidates, focusing mainly on the combination of proteins AMA1, MSP119 and MSP3β. Initially, the experimental immunizations with the combination of the three antigens were performed in the presence of Incomplete Freund\'s Adjuvant (IFA) in C57BL/6 mice. Immunized mice displayed no significant proliferative responses and secretion of IFN-γ by CD4+ and CD8+ T lymphocytes after in vitro stimulation with recombinant proteins or synthetic peptides based on the AMA1 protein. In contrast, Poly (I:C) adjuvant was more efficient inducing CD4+ T lymphocytes proliferative response to the MSP119-PADRE protein. Thus, we selected this adjuvant to continue the experimental immunizations with the different antigen combinations. The ELISPOT results demonstrated that co-administration of the 3 antigens stimulated IFN-γ producing cells in response to all antigens tested. We also assessed the production of IFN-γ after immunization of distinct mouse strains with a chimeric protein produced recently in our laboratory (AMA1-MSP119). In C57BL/6, IFN-γ production was significantly higher when we used spleen cells from mice immunized with the fusion protein, when compared with cells from mice that received the co-administration of two antigens, showing that the use of fused proteins can solve possible antigenic competition problems. Together, our data demonstrate that the use of multiple fused or co-administered antigens may be a promising strategy for malaria vaccination.

Camundongos da linhagem BALB/ c foram infectados com 5x106 leveduras de S. schenckii e acompanhados durante vinte e oito dias de infecção. Através da contagem do número de UFC nos baços fígados verificou-se que a carga fúngica nos órgãos dos animais diminui drasticamente na segunda semana de infecção. O teste ELISA revelou que nos órgãos destes animais a citocina IL-10 produzida em níveis mais elevados durante toda a infecção, assim modulando o controle da infecção. O padrão de proteínas secretadas pelas células leveduriformes de S. schenckii quando cultivadas em meio de cultura líquido e visualizado através de SDS-PAGE, apresentou bandas com pesos moleculares entre 97kDa e 20,1 kDa. Uma banda de 70 kDa foi reconhecida pelos soros dos animais infectados somente após a segunda semana de infecção e persistiu até o final desta. Os níveis de Ig total produzidos contra o antígeno solúvel e a proteína de 70 kDa aumentaram na segunda semana infecção e os títulos mantiveram-se durante a infecção. A isotipagem dos anticorpos revelou a predominância dos isotipos IgG1 e IgG3 para os dois antígenos testados. Notou-se que o aumento dos níveis de Ig contra o exoantígeno e a proteína imunorreativa de 70kDa, assim como o reconhecimento desta proteína, ocorreu inversamente proporcional à diminuição da carga fúngica nos órgão dos animais infectados. As proteínas secretadas pelas leveduras de S. schenckii, principalmente a proteína de 70 kDa, são capazes de ativar uma resposta humoral e conseqüente produção de altos níveis anticorpos e inibir a fagocitose do fungo pelos macrófagos. Desta maneira, estes antígenos modulam a resposta imune na esporotricose e contribuem para a patogenicidade do fungo. / BALB/c mice had been infected with 5xl06 yeasts of S. schenckii and followed during twenty and eight days of infection. Through the counting of the number of UFC in the livers and spleens it was verified that the fungaI load in the organs of the animais decreased drastically in the second week of infection. The ELISA test disclosed that in the organs of these animaIs the cytokine IL-10 was produced in leveIs more raised during alI the infection, thus modulating the control of the infection. The protein standard secreted for the yeasts of S. schenckii when cultivated in liquid medium and visualized through SDS-PAGE, it presented bands with molecular weights between 97 and 20,1 kDa. A band of 70 kDa was recognized for the sera of the infected animals after the second week of infection and persisted until the end of this. The leveIs of total Ig produced against the exoantigen and the protein of 70 kDa had increased in the second week of infection and the titers had been remained during the infection. The isotyping of the antibodies disclosed the predominance of the IgG1 and IgG3 for two tested antigens. One noticed that the increase of the leveIs of Ig against antigens and the recognition of the protein of 70 kDa occurred parallel with the reduction of the fungal load in the organs of the infected animals. The proteins secreted by the yeasts of S. schenckii, mainly the protein of 70 kDa, they are capable to activate a humoral response and consequent production high leveIs of antibodies and to inhibit phagocytosis of the fungi for the macrophages. In this way, these antigens modulate the immune response in sporotricosis and contribute for the pathogenic potential of fungi.

Os linfócitos, principais células do sistema imune, podem ser encontrados em órgãos e tecidos de dois grandes sistemas do corpo: o sistema linfático, composto por uma extensa rede de vasos linfáticos e linfonodos; e o sistema linfoide, mais abrangente e que, além de englobar o sistema linfático, abrange todas as células, tecidos e órgãos do corpo que contêm agregados linfocitários, tais como o timo, baço e linfonodos. Embora esteja amplamente descrito para animais domésticos e alguns animais silvestres, estudos sobre o sistema imune em cetáceos são escassos. A influência negativa de contaminantes no sistema imune em mamíferos aquáticos está em constante discussão. Assim, um conhecimento mais profundo da anatomia deste sistema é essencial para a interpretação clínica e de achados de necropsia, para uma melhor compreensão dos achados patológicos. Portanto, o objetivo deste estudo foi caracterizar morfológica e ultraestruturalmente os órgãos do sistema linfoides de odontocetos de ocorrência no litoral brasileiro. As amostras utilizadas foram procedentes de animais encalhados nas regiões norte e nordeste do Brasil. Os órgãos analisados foram baço, timo e linfonodo, bem como os tecidos linfoides associados à mucosa. Primeiramente as amostras foram localizadas topograficamente e avaliadas macroscopicamente. Posteriormente, as amostras foram fixadas e analisadas por microscopias de luz, eletrônica de varredura e transmissão, imunohistoquímica e histomorfometria. Através das análises realizadas foi possível observar que os órgãos e tecidos linfoides em cetáceos são semelhantes ao observado em mamíferos domésticos, com algumas particularidades. Não existem diferenças morfológicas com relação ao timo entre as espécies estudadas, com exceção da não existência de tecido adiposo substituindo o órgão em animais mais jovens, e a presença de Corpúsculos de Hassal mais evidentes em tamanho neste grupo. Novos grupos de linfonodos foram descritos de acordo com a sua localização, entretanto todos possuiram arquitetura semelhante ao descrito na literatura para mamíferos terrestres. Os linfonodos estavam dispostos de forma solitária ou em grupos e apresentavam formato variado, recobertos por uma cápsula, e o parênquima do órgão dividiu-se em região cortical e medular. Os centros germinativos apresentaram-se mais evidentes e desenvolvidos em animais filhotes e jovens. Os baços e baços acessórios eram morfologicamente semelhantes, caracterizados por numerosos nódulos linfáticos delimitados pela bainha linfoide periarterial e uma rede celular difusa que circundava os nódulos linfáticos, sem diferenciação entre as camadas cortical e medular. Centros germinativos se tornaram mais discretos e reduzidos em número com o aumento da idade. Os baços acessórios estavam firmemente aderidos ao baço e/ou à grande curvatura da primeira cavidade do estômago, sendo mais prevalentes em animais com maior escore corporal e de mergulhos mais profundos, sugerindo uma função de reservatório sanguíneo complementar. Os tecidos linfoides associados à mucosa em cetáceos foram semelhantes aos observados em mamíferos terrestres, com adaptações inerentes ao meio aquático, como a presença de tonsilas orofaríngea e anal, assegurando uma resposta imunológica mais eficiente diante de desafios antigênicos constantes presentes em seu habitat. Sugere-se que este segmento do sistema linfoide é essencial para a proteção do animal diante dos contaminantes presentes em seu habitat. Com base nos achados do presente estudo, será possível uma melhor compreensão do funcionamento e estrutura do sistema imunológico das espécies estudadas, colaborando na elucidação das causas de encalhe destes animais, que poderão funcionar como potenciais indicadores ambientais / Lymphocytes, key cells of the immune system, can be found in organs and tissues of two major systems of the body: the lymphatic system, composed of an extensive network of lymph vessels and lymph nodes; and the lymphoid system, more comprehensive that, in addition to comprise the lymphatic system, includes all cells, tissues and organs containing lymphoid aggregates, such as the thymus and spleen. Although these systems are widely described in domestic animals and some wildlife species, studies about marine mammals are scarce. The negative influence of contaminants in the immune system of aquatic mammals is in constant discussion. The knowledge on the anatomy of these systems is essential for clinical interpretation and necropsy, providing a better understanding of the pathological findings. Therefore, the aim of this study was to characterize the morphology and ultrastructure of lymphoid system of odontocetes occurring in the Brazilian coast. Samples from animals stranded in the northern and northeastern regions of Brazil were collected and organs spleen, thymus and lymph node and mucosa-associated lymphoid tissue were analyzed. First, all samples were evaluated macroscopically and topographically located. Subsequently, they were fixed and analyzed by light microscopy, scanning electron and transmission, immunohistochemistry and histomorphometry. Through these analyzes it was observed that the organs and lymphoid tissues in cetaceans are similar to that observed in domestic mammals, with some peculiarities inherent to their habitat. There were no morphological differences from the thymus in the species studied, except for the absence of adipose tissue replacing the organ in younger animals, and the presence of Hassall corpuscles more prominent in this group. New groups of lymph nodes were described, possessing architecture similar to that described in the literature for terrestrial mammals. Lymph nodes were arranged solitarily or in groups and had varied format, covered by a capsule and the parenchyma of the organ was divided into cortical and medullary region. Their germinal centers had become more evident and developed in puppies and young animals. Spleens and accessory spleens were morphologically similar, characterized by numerous lymph nodules delimited by periarterial lymphoid sheath and a diffuse cellular network in its surrounding area, without differentiation between cortical and medullary layers. Germinal centers became more discrete and reduced in number with increasing age. Accessory spleens were firmly adhered to the spleen and / or the greater curvature of the first stomach and were more prevalent in animals with higher body score and dives deeper, suggesting a role of complement blood reservoir. The mucosa-associated lymphoid tissues in cetaceans were similar to those observed in terrestrial mammals, with inherent aquatic adaptations, such as the presence of oropharyngeal and anal tonsils, ensuring a more efficient immune response in the face of constant antigenic challenges present in their habitat. It is suggested that this segment of the lymphoid system is essential for the protection of the animal before the contaminants in their habitat. Based on these findings, this study will enable a better understanding of the structure and functioning of the immune system of the species studied, collaborating in the elucidation of causes of stranding of these animals, whicih may act as potential environmental indicators

Made available in DSpace on 2014-06-12T18:00:43Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo3038_1.pdf: 683140 bytes, checksum: eada2c543903b755d4846405298237c0 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2011 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A doença auto-imune da tireóide (AITD) afeta de 2 a 5% da população e é o transtorno auto-imune órgão-específico mais comum. Sua apresentação clínica varia do hipertireoidismo da doença de Graves (GD) ao hipotireoidismo da tireoidite de Hashimoto (HT). O presente trabalho tem como principal objetivo analisar a associação dos polimorfismos de dois genes ligados ao sistema imune inato, DEFB1 e MBL2, na susceptibilidade à doença auto-imune da tireóide. O gene DEFB1 codifica a β-defensina humana 1 (HBD-1), um peptídeo antimicrobiano capaz de romper a membrana de uma ampla variedade de patógenos. Polimorfismos de única base (SNPs) na região 5 UTR do DEFB1 têm sido associados com uma maior susceptibilidade a diversas infecções e distúrbios auto-imunes. O gene da lectina ligadora de manose (MBL2) codifica uma proteína de reconhecimento de padrões moleculares que tem como alvo resíduos de carboidratos na membrana de patógenos, células transformadas e apoptóticas. Polimorfismos no éxon 1 desse gene têm sido alvo de diversos estudos e revelou ser de suma importância na susceptibilidade a infecções e doenças auto-imunes. O grupo de estudo consistiu de 74 e 163 pacientes com AITD para análise de SNPs do gene DEFB1 e MBL2, respectivamente. O grupo controle foi formado por 92 e 214 indivíduos saudáveis para análise dos genes DEFB1 e MBL2, já coletados em estudos anteriores. A genotipagem dos SNPs nas posições -20, -44 e -52 na região 5 UTR do gene DEFB1 foi realizada através do seqüenciamento de DNA, enquanto que os SNPs nos códons 52, 54 e 57 do éxon 1 do gene MBL2 foram genotipados através da PCR tempo real. Os resultados do gene DEFB1 mostraram uma diferença significativa para as freqüências genotípicas do SNP -52 entre pacientes AITD e controles (pvalue= 0.04431). Considerando os 33 pacientes diagnosticados com HT, houve uma diferença significativa apenas nas freqüências alélicas do SNP -52 (pvalue= 0.03205) entre pacientes com HT e controles. Os resultados do gene MBL2 mostraram uma diferença significativa entre as freqüências alélicas (pvalue= 0.009163) e genotípicas (p-value=0.04588) dos pacientes com AITD e controles. Considerando os 87 pacientes diagnosticados com HT, houve uma diferença significativa nas freqüências alélicas do gene MBL2 (p-value=0.01354) entre pacientes com HT e controles. Nossos resultados mostraram uma associação entre o alelo -52A do gene DEFB1 e o alelo O do gene MBL2 com a AITD e HT, identificando novos marcadores de susceptibilidade à doença auto-imune da tireóide

Orientador: Ricardo de Lima Zollner / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-07T22:53:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Brito_RhubiaBethaniaSocorroLemosde_M.pdf: 1643193 bytes, checksum: 3883ffa4fdb888928db0d59dc9e0a674 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: A imunoterapia é a estratégia empregada no tratamento das doenças alérgicas que, quando bem indicada, é considerada eficaz com redução dos sintomas. Apesar disso, uma das desvantagens é a possibilidade de surgirem reações sistêmicas adversas durante o tratamento. Dentro do contexto de inovação tecnológica, o surgimento da nanotecnologia oferece a perspectiva de novas formas de elaboração de vacinas e imunoterápicos, com estruturas com propriedades de encapsulação da droga/alérgeno permitindo a construção de sistemas de liberação controlada. Dentre os diversos sistemas em estudo, as microesferas de PLGA apresentam-se como promissores, uma vez que têm a propriedade de, juntamente com o antígeno/alérgeno, modular a resposta imune por meio das células apresentadoras de antígenos que os fagocitam, propiciando apresentação antigênica lenta e gradual. Com objetivo de estudarmos a resposta imune de camundongos BALB/c previamente sensibilizados com ovalbumina (OVA, antígeno Th2), injetamos dose única de microesferas de PLGA encapsuladas com OVA e microesferas vazias como controle. Os animais eram sacrificados 30, 60, 90 e 120 dias pós-injeção das microesferas. Após os 120 dias de observação, nossos resultados sugerem que as microesferas encapsuladas com OVA, promovem modulação de resposta com perfil misto Th2/Th1, com elevação predominante da citocina IFN-? e tendência de elevação de IL-12. Além disso, pode-se observar diminuição significativa dos níveis séricos da subclasse IgG1 representativa da resposta Th2, embora a IgE permaneça inalterada / Abstract: The immunotherapy is a strategy used in the treatment of allergic diseases when properly indicated is considered efficient with reduction of the symptoms. In spite of that, one of its disadvantages is the possibility to adverse systemic reactions appear during the treatment. In the context of technological innovation, the sprouting of the nanotechnology offers the perspective of new forms of immunotherapies using structures with properties of encapsulation allergen/drug allowing the construction of controlled delivery systems. Amongst the different systems in study, the PLGA microspheres seem to be promising. Microspheres with the encapsulated allergen/antigen, modulate the immune response through the antigens presenters cells that phagocyte them, propitiating slow and gradual antigenic presentation. Aiming to study the immune response of BALB/c mice previously sensitized with ovalbumin (OVA, Th2 antigen), we inject single dose of PLGA microspheres encapsulated with OVA and empty microspheres as control. The animals were sacrificed 30, 60, 90 and 120 days after-injection of the microspheres (ME-PLGA). Followed the 120 days of observation, our results suggest that microspheres encapsulated with OVA promote modulation of immune response with mixing profile Th2/Th1, however with statistical significant increase of cytokines IFN-_?and tendency of IL-12 increase. Moreover, it can be observed statistical significant reduction of the serum levels of IgG1 subclass representative of the Th2 profile, although the IgE remains unchanged. / Mestrado / Ciencias Basicas / Mestre em Clinica Medica

A doença de Chagas representa um importante problema para a Saúde Publica na América Latina, onde o tratamento é limitado principalmente na fase crônica. Mesmo controlando a replicação parasitária, a completa eliminação do parasita e a cura da doença não são observadas de forma consistente. A ativação do eixo adrenal-hipotálamo-hipófise possui um papel importante na supressão do sistema imune. Neste trabalho foram observados os efeitos do estresse repetitivo em ratos Wistar infectados com a cepa Y de Trypanosoma cruzi durante as fases aguda e crônica da doença experimental, através da exposição dos animais a vapores de éter por um minuto duas vezes ao dia. O estresse repetitivo provocou aumento do número de parasitas e a administração de DHEA reduziu significantemente a parasitemia durante a fase aguda. A resposta TH-1 foi mais vigorosa em animais submetidos à terapia com DHEA mesmo quando submetidos ao estresse repetitivo. Assim TNF-, IFN-, IL-2, NO e linfoproliferação mostraram concentrações mais elevadas quando comparadas aos animais não submetidos à terapia. A resposta TH-2 nos grupos sem suplementação com DHEA, IL-4 e IL-10 apresentaram valores reduzidos nos animais infectados e estressados submetidos à terapia com DHEA. A concentração de corticosterona mostrou-se elevada para animais estressados e infectados em relação aos animais submetidos a terapia com DHEA. A histopatologia apresentou redução no número de neurônios nas fases aguda e crônica para os animais estressados e infectados, os mesmos apresentaram desorganização tecidual cardíaca com aumento do número de ninhos de amastigotas e moderado processo inflamatório por células mononucleares. Estes resultados sugerem que o estresse repetitivo pode ser considerado como ii fator importante durante o desenvolvimento da doença de Chagas experimental, aumentando sua patogênese através de distúrbios do sistema imune do hospedeiro. / Chagas disease represents an important public health problem in Latin American, where the treatment is limited especially to chronic phase, besides the harmful side effects. Although controlling the parasite replication, the complete elimination of the etiologic agent still was not observed. Activation of the hypothalamuspituitaryadrenal axis plays a major role in the suppression of the immune system. We have investigated the effects of repetitive stress on Wistar rats infected with the Y strain of Trypanosoma cruzi during the acute and chronic phases of the experimental disease by the exposure to ether vapor for one minute twice a day. Repetitive stress resulted in an elevated number of circulating parasites and DHEA administration reduced significantly blood parasites during the acute phase. Several immunological parameters were evaluated. TH-1 response was more vigorous in animals submitted to DHEA therapy even those which underwent repetitive stress. So, TNF-, IFN-, IL-2, NO and lymphoproliferation displayed enhanced concentrations as compared to unsupplied animals. The TH-2 immune response in groups without DHEA supplementation, showed reduce values for IL-4 and IL-10 in groups infected and stressed submitted to DHEA therapy. Enhanced corticosterone concentration was a observed for infected and stressed animals. DHEA triggered reduced levels of corticosterone. The histopathology revealed that stressed animals showed a reduction in the number of neurons. Histological sections of heart smears from infected and stressed animals displayed deep tissue disorganization, increased parasite burdens and moderate diffused mononuclear inflammatory process. These results suggest that repetitive stress could be considered an iv important factor during development of experimental Chagas disease, enhancing pathogenesis through disturbance of the hosts immune system.

O mecanismo de imunorregulação gerado pelo catabolismo do triptofano pela IDO protege o feto contra a resposta imunológica materna. Neste estudo, esse mecanismo foi em avaliado em gestantes imunossuprimidas e portadoras de transplante renal. Examinou-se a expressão da IDO e sua atividade nos compartimentos placentários de gestantes saudáveis e portadoras de transplante. Células produtoras de IDO e IFN-<font face=\"Symbol\">g foram imunolocalizadas na região vilosa e região decidual em ambos os grupos analisados, com mudanças no tipo celular envolvido nestas expressões nas gestantes transplantadas. Os níveis de IDO e sua atividade, assim como seus fatores de regulação NF-kB, IFN-<font face=\"Symbol\">g e IL-10 estavam diminuídos na região vilosa. No compartimento decidual a atividade enzimática da IDO estava aumentada nas gestantes transplantadas, mas não dos seus reguladores. Sendo assim, eixo de imunorregulação gerado por IDO-IFN-<font face=\"Symbol\">g na interface placentária de gestantes portadoras de transplante renal responde diferencialmente a insultos ocasionados pela utilização de imunossupressores durante a gestação. / The mechanism of immunoregulation generated by the catabolism of tryptophan by IDO protects the fetus against maternal immune response. In this study, this mechanism was evaluated in renal transplanted pregnant women and immunosuppressed. We examined the expression and activity of IDO in placental compartments of healthy pregnant women and patients with transplants. IDO and IFN-<font face=\"Symbol\">g producing cells were imunolocalizated in villous and decidual region in both groups analyzed, with changes in cell type involved in these expressions in pregnant patients transplanted. The levels and activity of IDO, as well as their regulatory factors NF-kB, IFN-<font face=\"Symbol\">g and IL-10 were decreased in the villous region. In the decidual compartment IDO activity was increased in pregnant women transplanted, but not their regulators. Thus, the axis of immunoregulation generated by IDO and IFN-<font face=\"Symbol\">g in placental interface of pregnant women with renal transplantation responds differently to insults caused by the use of immunosuppressive drugs during pregnancy.

Células dendríticas são importantes na interação dos sistemas imune inato e adaptativo, apresentando antígenos para linfócitos T CD4+ e CD8+ e induzindo respostas adaptativas contra estes. Elas são alvo de interesse no desenvolvimento de novas estratégias vacinais que visam o direcionamento de antígenos para as diferentes populações de DCs in vivo. Consiste na administração de anticorpos contra receptores da superfície da DC em fusão com o antígeno. Nós comparamos o direcionamento da proteína NS1 de DENV2 para as duas principais populações de DCs no baço, na presença de diferentes agonistas. Poly I:C é capaz de induzir as respostas de Linfócitos T CD8+ mais robustas, mas somente quando o antígeno é direcionado para a população de DCs CD8+DEC205+. Com CpG observamos resposta de células T CD8+ equivalente quando a proteína foi direcionada para qualquer uma das populações estudadas. Direcionamento com Poly I:C gerou proteção contra desafio por DENV2 quando NS1 é direcionada para a população de DCs DEC205+, sendo esta proteção dependente de Linfócitos T CD8+ e CD4+. / Dendritic Cells are critical in the interaction between innate and the adaptive immune system, presenting antigens to T lymphocytes and inducing adaptive immune responses against these. DCs are target for development of new vaccine strategies based on targeting antigens to different DCs populations in vivo. This consists on the administration of antibodies specific to DC surface endocytic receptor fused to an antigen. In this study, we evaluated the differences in adaptive responses when the NS1 protein from the DENV2 was directed to the two main populations of DCs in the spleen along with different agonistic molecules. Highest CD8+ T cell responses were seen when Poly I:C was used, but only when directed to the CD8+DEC205+ DC population. In the presence of agonist CpG we observed similar responses when the protein was targeted to either CD8+DEC205+ or CD8-DCIR2+ DCs. In the presence of Poly I:C, only targeting to the DEC205+ DCs was able to protect mice against a challenge with DENV2. This protection was dependent on both CD8+ and CD4+ T cell responses.

Os artrópodes constituem o grupo mais diverso do Reino Animal, apresentando uma distribuição muito ampla nos ecossistemas e habitats. O fato de esses animais terem mudado muito pouco durante sua evolução e estarem bem adaptados aos ambientes inóspitos e com uma alta presença de microorganismos patogênicos, torna interessante a realização de estudos sobre o seu sistema imunológico. Parte importante deste sistema são os peptídeos antimicrobianos, que controlam a invasão dos diferentes patógenos. Estas moléculas não só podem fornecer informação sobre o sistema imune e o funcionamento deste, como também pode ajudar a buscar alternativas nas lutas contra as doenças infecciosas. Sendo assim, se torna interessante a purificação e a caracterização dos peptídeos antimicrobianos presentes nesses animais como também o conhecimento do funcionamento de seu sistema imune. Neste trabalho foram utilizadas duas espécies da ordem quilópoda: Scolopendra viridicornis e Otostigmus cavalcanti como modelo experimental. Foi avaliada a presença de moléculas bioativas na hemolinfa (plasma e hemócitos) e no extrato total do corpo, bem como a produção destas moléculas após o animal receber um estímulo ou injúria. Foi observada a presença de diferentes frações com atividade antimicrobiana na hemolinfa (plasma e hemócitos) e no extrato total de animais desafiados e não desafiados em Otostigmus cavalcanti, apresentando um aumento na atividade antimicrobiana nos animais do grupo estimulado. O que pode significar que algumas das moléculas antimicrobianas estão presentes constitutivamente no animal enquanto outras precisam de um estímulo para ser expressas. No plasma de S. viridicornis foram observadas diferentes frações com atividade antimicrobiana, observando-se atividade contra a bactéria Gram-negativa E coli e contra a levedura C. albicans. No entanto, nos hemocitos, diferentes frações apresentaram atividade somente contra a bactéria Gram-positiva M. luteus. Na porção hidrofóbica do extrato total do corpo de S. viridicornis também foram observadas diferentes frações com atividade antimicrobiana. No material eluído em 5% de ACN, por análise de ESI-MS de uma fração com atividade contra M. luteus foram observadas duas moléculas com massa molecular baixa (848,49 e 861,94 Da). Ainda no extrato total da fração hidrofóbica foram observadas duas moléculas que se apresentaram puras. A primeira destas mostrou uma massa molecular de 1,7 kDa mas ainda não foi caracterizada. Enquanto a segunda evidenciou um peptídeo de 925,4658 Da e cuja estrutura primaria apresentou um composto de 8 resíduos de aminoácidos (RYPAVGYT). Esta molécula foi nomeada Lacraina. Entretanto na porção hidrofílica do extrato total de S. viridicornis e de Otostigmus cavalcanti foram observadas frações de baixa massa molecular com atividade antiparasítica contra Leishmania amazonensis e Trypanosoma brucei e antibacteriana contra E. coli e M. luteus. Também nesta fração foi observada uma molécula semelhante à Gomesina um peptídeo antimicrobiano da aranha caranguejeira Acanthoscurria gomesiana. A análise e caracterização desta molécula ainda esta em progresso. / Arthropods constitute the most diverse group in the Animal Kingdom, representing a very wide distribution in different ecosystems and habitats. The fact that these animals have changed very little during their evolution and that theyre well adapted to harsh environments with a high presence of pathogenic microorganisms, makes it interesting to conduct studies on their immune system. An important part of these systems are antimicrobial peptides that control the invasion of various pathogens. These molecules not only provide us with information on their immune system and its functioning, but can also help us find alternatives in the struggle against infectious diseases. Therefore, the purification and characterization of antimicrobial peptides present in these animals becomes important, as well as gaining knowledge on how their immune systems work. In this work two specimens of the Chilopoda order, Scolopendra viridicornis and Otostigmus cavalcanti, were used as an experimental model for the characterization of bioactive molecules present in the hemolymph and total body extract as well as the production of these molecules after stimulating or injuring the animal. The presence of different fractions with antimicrobial activity in the hemolymph (plasma and hemocytes) and the total body extract of defied and not defied animals in Otostigmus cavalcanti was observed. Presenting an increase in the antimicrobial activity in the stimulated group of animals, this could mean that some of the antimicrobial molecules are constitutively present in the animal, while others need to be induced to be expressed. In the plasma of S. viridicornis different fractions with antimicrobial activity and with activity against the Gram-negative bacteria E coli and against the C. albicans yeast were observed. Notwithstanding, in the hemocytes, there are different fractions that presented activity only against the Gram-positive M. luteus bacteria. In the hydrophobic portion of the total extract of the S. viridicorniss body, different fractions with anti-microbial activity were also observed. In the 5% ACN eluted material, by an ESI-MS analysis of a fraction with activity against M. luteus two molecules with low molecular mass (848.49 and 861.94 Da) were present and two pure molecules were observed in the total extract of the hydrophobic fraction. The first one presented a molecular mass of 1.7 kDa that remains to be characterized. The second one was a 925.4658 Da peptide, whose primary structure presented a compound of 8 amino acid residues (RYPAVGYT). This molecule was named Lacrain. However, in the hydrophilic portion of the total extract of S. viridicornis and O. cavalcanti low molecular mass fractions with antiparasitic activity against Leishmania amazonensis and Trypanosoma brucei as well as antibacterial activity against E. coli and M. luteus were observed. Also in this fraction a molecule similar to Gomesin, an antimicrobial peptide from the spider Acanthoscurria gomesiana. was present. The analysis and characterization of this molecule is still in progress.

Em artrópodes o sistema imune inato contribui para a adaptação de animais como os escorpiões à diferentes ambientes. Esse sistema é composto por mecanismos capazes de agir contra injúrias e a ação de microrganismos e entre esses mecanismos estão os peptídeos antimicrobianos (PAMs). O objetivo deste trabalho foi identificar PAMs presentes na hemolinfa de Tityus serrulatus. Para isso sua hemolinfa foi extraída e separados os hemócitos e plasma, em seguida fracionamos em 3 concentrações de acetonitrila em TFA 0,05% (05, 40 e 80%). Estas frações foram submetidas a uma cromatografia liquida de alta eficiência (CLAE) e os picos foram avaliados quanto a sua ação antimicrobiana e hemolítica. Foram identificadas 16 frações que apresentam atividade antimicrobiana. Uma das frações com atividade antimicrobiana, presente nos hemócitos apresentou similaridade com defensina descrita em carrapatos da espécie Ixodes scapularis. Essa fração possui aproximadamente 3486 Da, não apresenta atividade hemolítica e foi denominada como Serrulina. / In arthropods, its innate immune system contributes to the adaptation of animals like scorpions to different environments. This system consists of mechanisms that act avoiding injuries and against the action of microorganisms, among these mechanisms are antimicrobial peptides (AMPs). The aim of this study was to identify AMPs, present in the hemolymph of Tityus serrulatus. The hemolymph was extracted and then we separated hemocyte and plasma. The samples were fractionated in different concentrations of acetonitrile in TFA 0.05% (05, 40 and 80%). These fractions were subjected to high-performance liquid chromatography (HPLC) and the peaks obtained were evaluated for its antimicrobial and hemolytic action. We found sixteen fractions with antimicrobial activity. One of the fractions with antimicrobial activity, present in hemocytes, is similar with a defensin described in ticks, Ixodes scapularis. This fraction has about 3486 Da, has no hemolytic activity and was named as Serrulina.