Orientadores: Miriam A. S. Trevisan, Jose Vassallo / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-21T03:49:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dias_ChristianePiennaSoares_D.pdf: 4700219 bytes, checksum: cf712946f0d1470edb7a32bedbead0d8 (MD5) Previous issue date: 1996 / Resumo: O papiloma vírus humano (HPV) tem sido descrito como um fator de risco para o desenvolvimento de lesões benignas e malignas no esôfago, sendo os tipos mais frequentes os HPVs 6, 11, 16, 18, 31, 33 e 35. No presente trabalho, selecionamos 49 casos de biópsias endoscópicas de esôfago coradas por hematoxilina-eosina. que continham graus variados de atipia coilocitótica (coilocitose, discariose, bi ou multinucleação). Esses casos foram submetidos às reações de imuno-histoquímica e hibridização " in situ " com sondas biotiniladas 6/11, 16/18, 31/33/35 (Kit Viratype-DIGENE). Os resultados para os casos estudados foram negativos, com controles positivos de forte sinal, por ambos os métodos. Assim, é possível que as alterações morfológicas do epitélio escamoso do esôfago possam não ser de origem viral e outros fatores devem ser considerados como potencialmente responsáveis por essas alterações / Abstract: Human Papillomavirus has been describe as a risk factor to benign and malign esophageallesions. The HPV s eommons in esophageal epithelium are 6, 11, 16, 18, 31, 33 and 35. We had select fourty nine endoscopie biopsies which histologic analysis had show koilocytotic atypia in different grades. We has use immunohistochemical and in situ hibridization reactions with commercially biotynilated probes 6/11, 16/18 and 31/33/35 (Viratype probe set.- DIGENE). We couldn't find HPV's antigen or DNA in any fourty nine samples. Then, our studies suggest other factors to development of esophageal tissues alterations / Doutorado / Doutor em Ciências Médicas

Orientadores: Maria Leticia Cintra, Oslei Paes de Almeida / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas. Faculdade de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-07-29T04:49:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Villar_CristinaCunha_M.pdf: 3307979 bytes, checksum: c4e54d6d6ec2b6dd6955628c3fc8dfd5 (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: O líquen plano (LP) é uma doença mucocutânea crônica, de causa desconhecida, que freqüentemente afeta a mucosa oral. Histologicamente, o LP apresenta diferentes graus de acantose e atrofia, com desorganização da camada basal e infiltrado inflamatório subepitelial em banda, composto principalmente de linfócitos T. Lesões semelhantes ao líquen plano, chamadas reações liquenóides, podem acometer a mucosa oral. As reações liquenóides podem estar associadas à desordens sistêmicas, como na doença do enxerto contra o hospedeiro crônica (GVHDc). Os achados histológicos da reação liquenóide associada à GVHDc são semelhantes aos encontrados no LP. O objetivo deste trabalho foi comparar as características microscópicas do LP e da GVHDc em boca. As alterações epiteliais e no tecido conjuntivo foram avaliadas em 40 casos de LP e 31 de GVHDc, assim como a presença de mastócitos, macrófagos e células de Langerhans (CL). As maiores diferenças entre as lesões foram observadas na região da junção epitélio tecido conjuntivo. No LP, o infiltrado inflamatório foi mais intenso, porém a desorganização e vacuolização das células da camada basal foram menos evidentes. Os mastócitos foram mais numerosos no LP, e apresentaram menor quantidade de grânulos quando observados no infiltrado inflamatório. As CL foram mais freqüentes no LP, e os macrófagos na GVHDc. A expressão de laminina foi similar nos dois grupos. Estes resultados mostram que a lesão liquenóide associada a GVHDc difere do LP, particularmente na junção epitélio-tecido conjuntivo. No LP, o infiltrado inflamatório é mais intenso, mas a expressão antigênica, possivelmente menor, gera alterações epiteliais mais discretas / Abstract: Lichen planus (LP) is a chronic mucocutaneous disease of unknown etiology, that frequently affects the oral mucosa. Microscopically, LP is characterized by areas of epithelial acantosis and atrophy, with disorganization of the basal layer, and by a subepithelial band-like mononuclear inflammatory infiltrate. Lichenoid lesion are diseases that present a similar pattern to LP, that can affect the mouth and skin, as Lichenoid lesions may be associated with chronic Graft versus Host Disease (cGVHD). The objective of this work was to compare the microscopic characteristics of LP and those of cGVHD in the oral mucosa. Epithelial and connective tissue alterations were evaluated in 40 cases of LP and in 31 cases of cGVHD, as well as the presence of mast cells, Langerhans cells (CL) and macrophages. The main differences found between the two diseases were at dermal-epithelial junction area. In LP the inflammatory infiltrate was more intense, but disorganization and vacuolization of the epithelial basal cells were less evident. Mast cells were more numerous in lichen planus, and showed less granules when observed in the inflammatory infiltrated. LC were more numerous in lichen planus and macrophages in cGVHD. The laminin expression was similar in both groups. From these observations it was concluded that lichenoid lesions of cGVHD of the oral mucosa differs from LP, particularly at the dermal-epithelial junction region. In LP the inflammatory infiltrate is more intense, but the antigenic expression possibly is less than in cGVHD, causing a more discrete epithelial cells alterations / Mestrado / Estomatologia / Mestre em Estomatopatologia

Orientador: Marcio Ajudarte Lopes / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-12T16:30:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Gueiros_LuizAlcinoMonteiro_D.pdf: 2422021 bytes, checksum: 202698f5d9480859e17aa7f8417aaec6 (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: O carcinoma espinocelular oral é a principal neoplasia maligna da boca, sendo a língua o local mais acometido. Recentemente tem sido relatado que tumores deste local apresentam características clínicas e comportamento biológico distintos dos demais tumores orais. O objetivo do presente trabalho foi avaliar as características clínicas, histopatológicas e expressão de marcadores de proliferação celular e actina de músculo liso (AML) em carcinomas espinocelulares (CECs) de língua. Para tanto, foram retrospectivamente analisados 63 casos de lesões de língua sem tratamento prévio e sem metástase à distância ao diagnóstico. As informações clínicas foram obtidas dos prontuários do Hospital do Câncer A.C. Camargo e as características histopatológicas observadas segundo os critérios de Anneroth e Bryne, sendo feitas reações imunoistoquímicas para Ki-67, mcm-2, geminina e AML. O tumor foi mais prevalente em homens, com 51 casos (80,95%) e apenas 12 em mulheres (19,05%), com idade variando de 31 a 92 anos, e média de 57,6 anos (dp = 11,81). Maior parte dos pacientes era fumante (85,7%) e consumia bebidas alcoólicas regularmente (82,5%). Com relação à gradação histológica, verificou-se que um escore de Anneroth maior que 15 esteve associado a etilismo (p=0,05), tipo de tratamento (p=0,05), tamanho do tumor (p=0,05), presença de êmbolos tumorais em vasos sanguíneos (p=0,003), comprometimento nodal (p=0,05), ruptura de cápsula nodal (p=0,016) e desenvolvimento de metástase à distância (p=0,002). Por outro lado, um escore maior que 12 segundo a gradação de Bryne apresentou associação com ruptura de cápsula (p=0,02) e desenvolvimento de metástase à distância (p=0,002), além de sobrevida global (p=0,03) e sobrevida livre de doença (p=0,05). O Ki-67 se mostrou capaz de prever metástase cervical (p=0,06). A expressão de mcm-2 correlacionou-se com idade (p=0,03) e metástase cervical (p=0,008) e a expressão de geminina com gênero feminino (p=0,02) e presença de invasão neural (p=0,05). Alta expressão de AML no estroma tumoral apresentou associação com estádio N maior ou igual a 1 (p=0,01), estadiamento clínico III e IV (p=0,03) e evolução com metástase nodal após o tratamento (p=0,07). Com base nestes resultados, sugere-se que os critérios de Bryne, associados à utilização de marcadores de proliferação celular e de miofibroblastos, podem ser importantes na avaliação do comportamento biológico de CECs de língua. / Abstract: The aim of this study was to evaluate the clinical and histopathological features as well as proliferation markers and smooth muscle actin (SMA) immunohistochemical expression in tongue squamous cell carcinomas. Sixty three cases of tongue lesions with no previous treatment and no distant metastasis were selected. Clinical informations were retrieved from the clinical files of A.C. Camargo Cancer Hospital and the tumors were graded according to Anneroth et al. (1987) and Bryne et al. (1992) grading systems. Immunohistochemical reactions to Ki-67, mcm-2, geminin and SMA were performed. A male predilection could be noted since the sample was composed by 51 men (80,95%) and 12 women (19,05%). Age ranged from 31 to 92 years, with a mean age of 57,6 years (sd=11,81) and a median age of 58 years. Most of the patients were smokers (85,7%) and regular consumers of alcoholic beverages (82,5%). A total Anneroth score was related to regular consumption of alcoholic beverages (p=0,05), treatment (p=0,05), tumor size (p=0,05), tumoral embolization of blood vessels (p=0,003), nodal metastasis (p=0,05), nodal capsule rupture (p=0,016) and distant metastasis (p=0,002). On the other hand, total Bryne score above 12 was related to nodal capsule rupture (p=0,02) and distant metastasis (p=0,002), as well as overall survival (p=0,03) and disease-specific survival (p=0,05). Ki-67 was capable of predicting nodal metastasis (p=0,06). Immunohistochemical evaluation of mcm-2 revealed a relation between expression and age (p=0,03) and nodal metastasis (p=0,008). Geminin expression was related to female gender (p=0,02) and neural invasion (p=0,05). High levels of SMA were related to N stage (p=0,01), clinical stage III and IV (p=0,03) and nodal metastasis after treatment (p=0,07). It could be concluded that Bryne score together with proliferation and myofibroblast markers expression can be useful for evaluating the biological behavior of tongue squamous cell carcinomas. / Doutorado / Estomatologia / Doutor em Estomatopatologia

Orientador: Jose Vassallo / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-13T20:55:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Moreira_LucianaRegina_D.pdf: 5414614 bytes, checksum: f35e45f7f891a1120abd69e0862a2875 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: Contexto: A angiogênese e linfangiogênese são processos em que as células endoteliais se dividem e migram para a formação de novos capilares, dando suporte para a progressão tumoral. A mensuração destes processos pode discriminar diferentes extratos prognósticos no câncer. O valor prognóstico da determinação da angiogênese e linfangiogênese no carcinoma colorretal (CRC) é assunto controverso na literatura. Isto pode ser devido a variações na forma de análise, como local de quantificação dentro da amostra tumoral, escolha do marcador imunoistoquímico e o método de quantificação. No presente trabalho, a angiogênese e linfangiogênese são estudadas através de programas de análise de imagem, comparando métodos de quantificação (densidade microvascular - MVD versus estimativa da área vascular total - TVA), diferentes marcadores imunoistoquímicos (pan-endoteliais versus vasos neoformados) e áreas de análise (campo central da lesão versus periferia versus campo de invasão mais profunda no carcinoma). Objetivos: Comparar esses parâmetros entre adenomas de pacientes sem e com carcinoma na mucosa adjacente; compará-los nos tecidos colorretais não neoplásicos, em adenomas e carcinomas, além de encontrar um meio de quantificação de angiogênese e linfangiogênese que fosse mais fidedigno como fator prognóstico no CRC. Métodos: 60 CRC esporádicos, 30 adenomas e 10 tecidos colorretais não neoplásicos foram submetidos a estudo imunoistoquímico para a detecção dos antígenos CD31, CD34, CD105, VEGF-A, VEGF-C e D2-40. Imagens dos preparados imunoistoquímicos foram capturadas para avaliar a MVD e a TVA em um programa de análise de imagem. Também foram analisadas a porcentagem e a intensidade de expressão protéica de VEGF-A e VEGF-C nas células carcinomatosas. Resultados: A imunocoloração da maioria dos marcadores, bem como a expressão de VEGF-A e VEGF-C, mostraram aumento estatisticamente significante nos adenomas e carcinomas quando comparados com tecido não neoplásico para MVD e TVA nos diversos campos da lesão. Os adenomas de pacientes com carcinoma apresentaram aumento estatisticamente significante na TVA determinada pelo CD105 (p= 0,019) e na MVD determinada pelo D2-40 (p= 0,041), quando comparadas com os adenomas de pacientes sem carcinoma. Dentre os carcinomas, apenas a MVD determinada pelo marcador CD34 no campo central da lesão diferencia-se estatisticamente com a recorrência/metástase (p= 0,04) e a sobrevida (p= 0,02). Conclusões: Os achados apóiam o fato da angiogênese e o aumento da vascularização linfática ocorrer precocemente, ainda nos adenomas. Também corroboram o fato de que angiogênese e aumento da contagem de vasos linfáticos ocorram mais em adenomas de pacientes com carcinomas na mucosa adjacente, possivelmente influenciados por fatores produzidos pelo tumor. A MVD na área central do carcinoma determinada pelo marcador imunoistoquímico CD34 adiciona critério prognóstico, associando-se com recidiva/metástase e sobrevida, enquanto os outros meios de quantificação vascular e de expressão de fatores de crescimento não apresentaram resultados estatisticamente significantes. Este método é um fator prognóstico independente e adicional no CCR / Abstract: Background: Angiogenesis and lymphangiogenesis play an important role in the progression of solid tumors, and its quantification may be associated with prognostic stratification. However, the prognostic value of the assessment of angiogenesis and lymphangiogenesis in colorectal cancer (CRC) is still controversial. This may be due to variations in the methods of analysis, as the precise location of assessment within a tumor sample, the choice of immunohistochemical markers and the quantification system. In the present study, angiogenesis and lymphangiogenesis were assessed using image analysis software, comparing two methods of quantification (microvessel density - MVD versus estimation of the total vascular area - TVA), different immunohistochemical markers (pan-endothelial versus neovessel) and areas of analysis (periphery versus inner portions of the lesion versus the deepest invasion area of carcinoma). Objectives: To compare angiogenic and lymphangiogenic patterns in adenomatous polyps from patients without and with sporadic CRC; to compare angiogenesis and lymphangiogenesis in non neoplasic colorectal tissue, adenomas and cancer, and to search for a reliable approach to quantify angiogenesis and lymphangiogenesis, which could be of clinical value as prognostic factor in CRC. Methods: 60 sporadic CRC, 30 colorectal adenomas and 10 non neoplasic colorectal tissues were submitted to immunohistochemical analysis for CD31, CD34, CD105, VEGF-A, VEGF-C and D2-40. MVD and TVA were determined by digitalizing the immunohistochemical reactions and examining them by computer image analysis. Immunostaining for VEGF-A and VEGF-C was evaluated using a parameter based on the percentage of tumor area stained and staining intensity. Results: Staining for most markers, as well as for VEGF-A and VEGF-C, exhibited significant increase in adenomas and carcinomas, when assessment of MVD and TVA in different tumor fields was compared with non neoplastic colorectal tissues. Adenomas from patients with carcinoma showed significantly higher values of TVA determined by immunostaining for CD105 (p = 0.019) and of lymphatic MVD determined by D2-40 (p = 0.041) when compared with adenomas from patients without cancer. Among patients with CRC, only MVD determined by immunostaining for CD34 in the central areas of the tumor was significantly correlated with recurrence/metastasis (p=0.04) and survival rates (p=0.02). Conclusions: Our results support that angiogenesis and lymphatic vascularization, plays a role in early tumor development at the stage of adenoma formation. The findings further support the notion that neoangiogenesis and elevated lymphatic vessel counts occur in colorectal adenomas from patients with CRC when compared to those without carcinoma, possible under the influence of factors produced by the carcinoma. Our results suggest that MVD determined with staining for CD34 in the inner part of the tumor is more closely related with relapse/metastasis and survival than other means of vascular quantification. The method is an additional prognostic factor in CCR / Doutorado / Anatomia Patologica / Doutor em Ciências Médicas

Orientador: Maria Heloísa de Souza Lima Blotta / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-19T20:40:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silva_RosianeMariada_M.pdf: 6290627 bytes, checksum: d2988b9310700896c1ab013ae1e3a509 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: A paracoccidioidomicose (PCM), micose sistêmica causada pelo fungo Paracoccidioides brasiliensis, apresenta um largo espectro de manifestações clínicas e imunológicas, variando de formas benignas e localizadas a quadros graves e disseminados. A forma crônica ou adulta (FA) se caracteriza por lesões localizadas com acometimento da pele, mucosa oral (MO) e pulmões; enquanto a forma aguda ou juvenil (FJ) é mais grave e disseminada com acometimento do fígado, baço e linfonodos (LNs). Nós examinamos a resposta inflamatória/imunológica em lesões de pacientes com formas clínicas distintas da PCM. Foram analisados a expressão de citocinas e o fenótipo das células presentes nos infiltrados de biópsias de mucosa oral de 15 pacientes com a forma adulta e de linfonodos de 15 pacientes com a forma juvenil da PCM por imuno-histoquímica (IHQ) e qPCR. Anticorpos monoclonais ou policlonais foram utilizados para caracterizar o infiltrado celular (CD68, CD15, CD3, CD8, CD56 e FOXP3), citocinas...Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: Paracoccidioidomycosis (PCM), a systemic disease caused by the fungus P. brasiliensis, presents with a wide spectrum of clinical and immunological manifestations, varying from benign and localized forms to severe and disseminated forms. The chronic or adult form (AF) is characterized by localized lesions with involvement of the skin, oral mucosa (OM) and lungs. While the acute or juvenile form (JF) is more severe and presents disseminated widespread with the involvement of the liver, spleen and lymph nodes (LNs). In order to examine the inflammatory/immune response in lesions of patients with different clinical forms of PCM, we analyzed the expression of cytokines as well as the phenotype of the cells in the inflammatory infiltrate. Paraffin-embedded OM biopsies from 15 patients with the localized AF of PCM and LN from 15 patients with the JF of PCM were analyzed by immunohistochemistry (IHC) and qPCR. Monoclonal or polyclonal antibodies were used to characterize the cellular infiltrate (CD68, CD15, CD3, CD8, CD56, and FOXP3), cytokines...Note: The complete abstract is available with the full electronic document / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestre em Ciências Médicas

Orientadores: Maria Elvira Pizzigatti Corrêa, Cecília Amélia Fazzio Escanhoela / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-20T05:39:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Soares_TaniaCristinaBenetti_D.pdf: 3640740 bytes, checksum: 3cc935c816cada9809557953ff7cae3e (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: A doença do enxerto contra o hospedeiro crônica (DECHc) é um processo inflamatório aloimune o qual resulta da resposta celular (células T) do doador contra o receptor em pacientes tratados pelo transplante de células progenitoras hematopoiéticas (TCTH). Os órgãos mais afetados são pele, mucosa oral, glândulas salivares e fígado. O objetivo deste trabalho foi avaliar os achados histopatológicos das glândulas salivares menores (GSM) e fígado dos pacientes afetados pela DECHc, comparando-os entre si, com as amostras destes órgãos de pacientes que não desenvolveram DECHc pós TCTH e com pacientes que não foram tratados pelo TCTH. Amostras de GSM e fígado de pacientes tratados por TCTH mieloablativo, de doadores aparentados com HLA idêntico, entre 1994 e 2006, foram analisadas. Cinquenta e sete pacientes foram selecionados, sendo 36 com DECHc oral e hepática e 21 sem DECH. O diagnóstico de DECHc foi definido por critérios clínicos (extensa/localizada), laboratoriais e de seguimento. Amostras sem alterações de pacientes não transplantados também foram avaliadas (19 de GSM e 20 de fígado). Os espécimes foram corados em hematoxilina e eosina, ácido periódico de Schiff (PAS), Tricrômio de Masson, Reticulina e Perls e tratados pela técnica de imuno-histoquímica para CD45, CD45RO, CD68, CD4, CD8, CD138 e AE1/AE3. Os critérios definidos pela classificação proposta pelo grupo de trabalho em histopatologia da reunião de consenso do National Institutes of Health (NIH) foram empregados para a avaliação de todas as amostras de ambos os órgãos. Nos espécimes corados pelo PAS, foi tomada a medida da área acinar das GSM, em imagens digitalizadas. No fígado de pacientes que desenvolveram DECH, foi observado aumento estatisticamente significante do número de células imunomarcadas para CD8 e CD45RO, quando comparado ao dos outros 2 grupos...Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: Chronic graft-versus-host disease (cGVHD) is an alloimmune inflammatory process, which results from a donor-origin cellular response (T cells) against host tissues. The organs mostly affected are skin, oral mucosa, salivary glands and liver. The aim of this study was to evaluate the histopathological findings of minor salivary glands (MSG) and liver of patients affected by cGVHD, comparing the findings each other and with those of the patients who did not develop cGVHD after HSCT and patients who were not underwent HSCT. MSG and liver samples from patients who underwent myeloablative HLA-matched HSCT from sibling donors, between 1994 and 2006, were analyzed. Fifty-seven patients were selected, being 36 with oral and hepatic cGVHD and 21 without GVHD. The diagnosis of cGVHD was defined through clinical/ laboratory criteria and follow-up. Samples from non-transplanted patients were also evaluated (19 MSG and 20 liver specimens). The specimens were stained with haematoxylin & eosin, periodic acid-Schiff (PAS), Masson's trichrome, reticulin and Perls, and immunolabeled for CD45, CD45RO, CD68, CD4, CD8, CD138, and AE1/AE3. The criteria defined in the classification proposed by the consensus meeting of the National Institutes of Health were used for the evaluation of all samples of both organs. Digital images of the PAS stained sections were used to estimate the MSG acinar area. In the liver of patients who developed GVHD it was observed a statistically significant increase in the number of CD45RO and CD8 immunostained cells, comparatively with the other 2 groups...Note: The complete abstract is available with the full electronic document / Doutorado / Patologia / Doutor em Estomatopatologia

Orientador: Edgard Graner / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-03T21:51:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silva_SabrinaDanielada_M.pdf: 583438 bytes, checksum: cb8d4da55276ed74f695c0b1a0eec406 (MD5) Previous issue date: 2004 / Mestrado

Orientadores: Clarice Weis Arns, Liana M. Cardoso Verinaud / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-04T00:24:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Almeida_RenataServande_D.pdf: 8139323 bytes, checksum: 5f1811651bc45b3676a6e65c545345ff (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: O Vírus Respiratório Sincicial Bovino (BRSV) é o agente etiológico de infecções respiratórias amplamente distribuídas e que produzem perdas importantes na criação comercial de bovinos. A infecção pelo BRSV produz alterações patológicas como bronquiolite e pneumonia intersticial e acomete, sobretudo, animais jovens. A limitada multiplicação do vírus em cultivos celulares e a sua instabilidade, representam dificuldades durante os procedimentos de isolamento do BRSV a partir de amostras clínicas. O presente trabalho teve como objetivo padronizar técnicas rápidas, sensíveis e específicas para a detecção do BRSV, utilizando um isolado brasileiro. Para tanto, foram utilizados camundongos Balb/c como modelo de infecção experimental pelo BRSV, a partir dos quais o vírus foi detectado pelas técnicas de RT-nested-PCR e imuno-histoquímica (IHQ) e os resultados foram comparados com aqueles obtidos em bovinos infectados experimentalmente. A técnica de RT-nested-PCR mostrou-se mais sensível para detecção do BRSV do que a técnica de IHQ, tanto para tecidos murinos quanto bovinos. As técnicas foram utilizadas em tecidos de bovinos suspeitos de infecção por BRSV. Uma destas amostras apresentou resultado positivo no RT-nested-PCR e na IHQ. O seqüenciamento dos produtos de PCR deste vírus detectado foi realizado. Esta nova estirpe, juntamente com a descrita previamente BRSV-25-BR (único isolado presente até então no Brasil), é representante do subgrupo B do BRSV e constitui importante ferramenta para a avaliação do perfil dos isolados brasileiros de BRSV, estimar a origem destes isolados e redefinir as necessidades locais com relação ao conteúdo das vacinas. As técnicas de RTnested- PCR e IHQ padronizadas serão úteis em estudos epidemiológicos bem como, no diagnóstico laboratorial do BRSV no Brasil / Abstract: Bovine respiratory syncytial virus (BRSV) is the etiologic agent of widely distributed respiratory infections and is responsible for significant economic losses in commercial cattle production. Infection by BRSV produces pathological changes such as bronchiolitis and interstitial pneumonia and affects mainly young animals. The poor growth of the virus in cell cultures and its instability represent difficulties in virus isolation from clinical samples. The aim of the present work was to standardise fast, sensitive and specific methods to detect BRSV, using a Brazilian strain. For this purpose, Balb/c mice were used as experimental model to the BRSV infection, from which the virus was detected by the RT-nested-PCR and immunohistochemistry (IHC) standardised, and the results were compared with experimentally infected calves. RT-nested-PCR was more sensitive in detecting BRSV than IHC, from both mouse and calf tissues. These techniques were also used to screen calves suspected of being infected with BRSV. One of the suspected samples was positive by RTnested- PCR and IHC. Sequencing of the PCR products of this sample was carried out. This new isolate and the previously described BRSV-25-BR strain (the only well-known isolate in Brazil) are belong to subgrupo B and provide an important tool to evaluate the profile and to esteem the origin of Brazilian BRSV isolates and to determine the local necessities about the vaccines content. The standardised RT-nested-PCR and IHC techniques could be useful in the epidemiological studies and laboratory diagnosis of BRSV in Brazil / Doutorado / Microbiologia / Doutor em Genetica e Biologia Molecular

Orientador: Albina Messias de Almeida Milani Altemani / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-04T15:06:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Brito_HugoLeitedeFarias_D.pdf: 985712 bytes, checksum: 049c9f97cfac78c5235143ee9925a67f (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: A inflamação da vilosidade placentária, ou vilosite, pode ser causada por diversos agentes infecciosos, porém na maioria dos casos a etiologia é desconhecida. As vilosites estão associadas a aborto, malformações fetais, prematuridade e retardo do crescimento intra-uterino, que é a principal manifestação clínica nos casos de etiologia desconhecida. Estes casos têm sido explicados como o resultado de uma reação imune materna contra o tecido placentário ou causados por algum agente infeccioso não identificado e sem manifestação clínica materno-fetal. Não é possível distinguir, ao exame histológico, a vilosite de etiologia desconhecida (VED) de uma vilosite infecciosa, se nesta última não for identificado microorganismos no tecido ou sinais histológicos de infecção, tais como inclusões virais. O aspecto histológico é semelhante em ambos os grupos e na maioria dos casos a reação inflamatória está constituída por linfócitos e histiócitos. A presença de padrões imunofenotípicos específicos nos diferentes tipos de vilosite poderia auxiliar tanto no diagnóstico como na compreensão da patogênese dessas lesões placentárias. Foi estudada a composição do infiltrado inflamatório em 23 placentas com vilosite (oito por T. cruzi, cinco por T. gondii e oito de etiologia desconhecida), duas placentas com intervilosite pelo Paracoccidioides brasiliensis e 8 placentas controles sem inflamação, através da técnica imunoistoquímica avidina-biotina-peroxidase em cortes histológicos de material fixado em formalina e incluido em parafina. Os anticorpos pesquisados foram: UCHL1 (CD45RO), L26 (CD20), CD45RO/0PD4 (CD4), CD8, NK-like, M1 (CD15), Mac 387, HAM 56 (CD68) e proteína S-100. Em todos os casos e nos diferentes tipos de vilosite estudados a reação inflamatória estava predominantemente constituída por linfócitos T do subtipo CD8+ e histiócitos HAM 56+. Também foram identificados, em menor quantidade, linfócitos T CD4+, macrófagos MAC 387+, granulócitos, células S-100 + e escassas células NK. Os linfócitos B estavam ausentes ou eram menos do que 2% das células inflamatórias em todos os casos. Nas placentas com intervilosite por P. brasiliensis o infiltrado era composto por macrófagos Mac 387 + e granulócitos M1+. O estudo da composição do infiltrado inflamatório, por imunoistoquímica, não permite diferenciar VED de vilosite infecciosa. A presença de um mesmo perfil de células inflamatórias em ambos os grupos (infeccioso e VED) favorece a hipótese de que a VED seja causada por algum agente infeccioso não identificado, possivelmente viral. Também é possível que diferentes agentes etiológicos causem inflamação vilositária através do mesmo mecanismo patogênico, o qual envolve uma reação imune celular mediada por linfócitos T CD8+ e histiócitos / Abstract: Villitis is characterized by an inflammatory infiltrate within the villous stroma and can be caused by a large number of infectious agents, although most are of unknown etiology. Villitis, not rarely, is associated with intrauterine fetal death, abortion, malformations and fetal growth retardation. The latter has been the major clinical association of villitis of unknown etiology (VUE). Two hypotheses has been advocated to explain this lesion: a maternal immune attack against fetal tissue or an unidentified infection. Histology alone cannot distinguish VUE from an infectious villitis, unless microorganisms or viral inclusions are found in tissue. Both lesions are characterized by chronic inflammatory cells, mainly lymphocytes and macrophages, in the placental villous stroma. Granulomas and trophoblast damage, very typical of some infectious villitis, can also be a feature of VUE. Therefore, immunohistochemical phenotyping of the inflammatory cells could be of diagnostic value in villitis. There are few immunomorphological studies about the inflammatory cells in infectious villitis as well as in VUE. We studied the inflammatory cells by immunohistochemistry in 23 placentas with villitis (8 cases of Trypanosoma cruzi villitis, 5 cases of Toxoplasma gondii villitis and 8 cases of VUE). Two cases of P. brasiliensis intervillositis and 8 control placentas without inflammation were also analysed. Paraffin sections of all placentas were submitted for immunohistochemistry analysis according the avidin-biotin-peroxidase technique. Antibody panel consisted of UCHL1 (CD45RO), L26 (CD20), CD45RO/OPD4, CD8, NK-like, M1 (CD15), Mac387, HAM 56 (CD68) and S-100 protein. In all cases of villitis (infectious and of unknown etiology) the inflammatory infiltrate consisted mainly of HAM 56+ macrophages and T lymphocytes. Among T cells, CD8+ cells outnumbered CD4+ cells in all placentas. B lymphocytes were absent or very rare (<2%). A small number of Mac 387+ monocytes, NK cells and S-100+ cells were also detected. Paracoccidiodomycosis intervillositis consisted of Mac387+ histiocytes and M1+ granulocytes. Our findings showed that immunohistochemical study of the inflammatory cells cannot distinguish VUE from infectious villitis. The same cellular composition of the inflammatory infiltrate in the two studied groups (VUE and infectious villitis) favors the hypothesis that VUE could result from an infectious cause. In addition, this finding raises the possibility that different etiologic factors acts through a common pathway to cause villitis which is an inflammatory lesion mediated by CD8+ T lymphocytes and macrophages / Doutorado / Anatomia Patologica / Doutor em Ciências Médicas

Orientadores: Pablo Agustin Vargas, Luiz Paulo Kowalski / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-22T08:56:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Gondak_RogeriodeOliveira_D.pdf: 3115921 bytes, checksum: 6a0ba84f4ad5ecaa9e8dbd843e421cf0 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: Na infecção pelo HIV, as células dendríticas (CDs) podem desempenhar vários papéis, incluindo a provável captação inicial do HIV, transporte para os linfonodos, e posterior transferência para células T, desempenhando um importante papel no sistema imune. As manifestações orais observadas em pacientes infectados pelo HIV, incluindo aquelas associadas ao HSV-1 podem estar diretamente relacionadas à injúria das CDs. A proposta deste estudo foi identificar e quantificar as CDs intersticiais na língua de pacientes autopsiados com AIDS e portadores de infecção herpética lingual (n=10), pacientes com AIDS e sem lesões linguais (n=10) e pacientes sem AIDS e sem lesões linguais (n=10) por meio de reações imunoistoquímicas. Além disso, investigamos a população de CDs nos linfonodos e tonsilas palatinas de pacientes com AIDS (n=32) e sem AIDS (n=21). Nos tecidos linguais, foram utilizados os anticorpos contra CD1a e CD83 para identificação das CDs e o anticorpo contra HSV-1 para detecção do vírus da herpes simples tipo 1. Nos linfonodos e tonsilas palatinas foi utilizados além dos anticorpos contra CD1a e CD83, o anticorpo contra fator XIIIa. Para a quantificação das CDs nos tecidos linguais foi utilizado análise histomorfométrica convencional e nos tecidos linfóides foi aplicado o método analítico Positive Pixel Count (software Image Scope). Os resultados mostraram uma intensa depleção na população de CDs em tecidos linguais e linfóides de pacientes com AIDS e a infecção lingual pelo HSV-1 não potencializou a redução de CDs / Abstract: During HIV infection, dendritic cells (DCs) may play several roles, including the probable initial uptake of HIV, transport to the lymph nodes, and subsequent transfer to T cells. Oral opportunistic infections observed in HIV-infected patients, including those associated with HSV-1 may be directly related to injury of DCs. The purpose of this study was to identify and quantify the interstitial DCs in the tongue of autopsied patients with AIDS and lingual herpes (n = 10), AIDS patients with normal tongues (n = 10) and non-AIDS patients with normal tongues (n = 10) by immunohistochemistry. Furthermore, we investigated the DCs population in lymph nodes and palatine tonsils of AIDS patients (n = 32) and non-AIDS patients (n = 21). CD1a and CD83 antibodies were carried out to identify DCs in lingual tissues and HSV-1 antibody for detection of herpes simplex virus type 1. In lymphoid tissues, CD1a, CD83 and factor XIIIa antibodies were carried out to identify DCs. Interstitial DCs were measured by conventional histomorphometry whereas the lymphoid DCs were measured by Positive Pixel Count Algorithm method using ImageScope software. The results showed a decreased population of DCs in lingual and lymphoid tissues of AIDS patients independently of the presence of concomitant infection by HSV-1 / Doutorado / Patologia / Doutor em Estomatopatologia