Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:58Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-12-11Bitstream added on 2014-06-13T20:36:41Z : No. of bitstreams: 1 sacchi_abv_me_jabo.pdf: 876901 bytes, checksum: bbd58ecdb2c29112b3d0b1112c51b549 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O presente trabalho teve por objetivo pesquisar no sangue de cervos-do-pantanal (B. dichotomus), a presença de DNA de agentes rickettsiais, tais como Ehrlichia chaffeensis, E. ewingiii, E. canis, Anaplasma phagocytophilum, A. marginale e Neorickettsia risticii, pela Reação em Cadeia pela Polimerase (PCR), além de estudar a prevalência de anticorpos anti-E. chaffeensis e anti-A. phagocytophilum utilizando-se a Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI). Os 143 animais utilizados foram capturados durante o desenvolvimento do Projeto Cervo-do-Pantanal (1998 a 2002) na área de inundação da Usina Hidrelétrica de Porto Primavera, no Rio Paraná, e divididos em quatro sub-populações de acordo com o local e momento da captura, em áreas denominadas MS01, MS02 (Mato Grosso do Sul, antes e após a inundação, respectivamente), PX (Rio do Peixe, depois da primeira cota de inundação) e AGUA (Rio Aguapeí, depois da inundação). Na avaliação sorológica, as freqüências de animais positivos para anticorpos anti-E. chaffeensis e anti-A. phagocytophilum foram de 76,76% e 20,20% em MS01, 88,88% e 22,22% em PX, 88,88% e 5,55% em MS02, e 94,12% e 5,88% em AGUA, respectivamente. Na pesquisa de DNA, dos 143 animais testados, 61 (42,65%) foram positivos para E. chaffeensis, sendo 38 (38,38%) de MS01, 4 (44,44%) de PX, 12 de MS02 (66,66%) e 7 (41,18%) de AGUA. Amostras positivas enviadas para seqüenciamento revelaram 100% de similaridade com amostras de Ehrlichia chaffeensis da Argentina e dos Estados Unidos (números de acesso no Genbank EU826516.2 e AF416764.1, respectivamente). Já para o genogrupo de A. phagocytophilum, 70 cervos (48,95%) foram considerados positivos. Destes, 51 (51,51%) são provenientes de MS01, 12 (66,66%) de MS02 e 7 (41,18%) de AGUA. Animais provenientes de PX foram todos negativos. Amostras positivas enviadas para seqüenciamento... / The present work had as objective to research in the blood of marsh deer (B. dichotomus), the presence of rickettsial agents DNA such as Ehrlichia chaffeensis, E. ewingii, E. canis, Anaplasma phagocytophilum, A. marginale e Neorickettsia risticii, by the Polimerase Chain Reaction (PCR), as well as studying the prevalence of anti-E. chaffeensis and anti-A. phagocytophilum antibodies using Indirect Imunofluorescence Reaction (IFA). The 143 animals that were used were captured during the development of the Marsh Deer Project (1998 to 2002) in the flood area of the Porto Primavera Hydroelectric Power Station, in Parana River, and divided in four sub-populations according to the local and moment of the capture, in areas denominated MS01, MS02 (Mato Grosso do Sul, before and after flood respectively), PX (Peixe’s River, after the first flood quota) and AGUA (Aguapeí River, after flood). In the serological avaliation, the frequency of positive animals for anti-E. chaffeensis and anti-A. phagocytophilum antibodies were 76,76% and 20,20% in MS01, 88,88% and 22,22% in PX, 88,88% and 5,55% in MS02, and 94,12% and 5,88% in AGUA, respectively. In the DNA research, from the 143 tested animals, 61 (42,65%) were positive for E. chaffeensis, 38 (38,38%) from MS01, 4 (44,44%) from PX, 12 from MS02 (66,66% and 7 (41,18%) from AGUA. Positive samples send to sequency demonstrate 100% of similarity with samples of Ehrlichia chaffeensis from Argentina and United States (numbers of access in Genbank EU826516.2 and AF416764.1, respectively). For the A. phagocytophilum genogroup, 70 deers (48,95%) were considered positive. Of these, 51 (51,51%) come from MS01, 12 (66,66%) from MS02 and 7 (41,18%) from AGUA. The animals that come from PX were all negative. Positive samples send to sequencing demonstrated 99% of similarity with a sample of Anaplasma... (Complete abstract click electronic access below)

( )-linalool (LIN) is a monoterpene alcohol majority in the essential oils of several aromatic species commonly found in northeastern Brazil, such as Ocimum basilicum and Cinnamomum verum. Recent studies have shown that LIN has important therapeutic properties, including its antinociceptive, anti-inflammatory and anticonvulsant. Despite the benefits described above, the LIN, such as monoterpenes generally exhibits low solubility in water, high volatility and short half-life, thus incorporation into cyclodextrins (CDs), especially β-CD, has emerged as a tool important to improve the physicochemical properties and biological isoprênico this derivative. Thus, we investigated the possible antinociceptive effects of LIN isolated and included in β-CD in chronic non-inflammatory muscle pain model, besides to the effects on the motor activity and the central action. Male Swiss mice (25-35 g) were divided into groups and subjected to induction protocols non-inflammatory nociception by injecting acid saline (pH 4; 20 μL) in the belly left of gastrocnemius muscle. Subsequently, they were treated orally (p.o.) with LIN (25 mg/kg) LIN/β-CD (25, 50 and 100 mg/kg) tramadol (TRM 4 mg/kg, i.p.) or vehicle (solution 0.9% saline), and evaluated for behavioral parameters over a period of 27 days. The animals were subjected to tests of mechanical hyperalgesia (von Frey digital), motor coordination (Rota Rod) and muscle strength (Grip Strength Metter), and to determine the possible involvement of areas of the central nervous system (CNS), the animals were treated and ninety minutes, were anesthetized, perfused, the brains extracted and cut in a cryostat. The brain sections were subjected to immunofluorescence protocol for Fos protein. The results were expressed as mean ± standard error of the mean. Differences between groups were analyzed by ANOVA test, a path followed by Bonferroni test. P values <0.05 were considered statistically significant. Treatment with LIN and LIN/β-CD showed antinociceptive activity in animal model of chronic non-inflammatory muscle hyperalgesia in mice at all doses tested, with the LIN/β-CD prolonged activity against isolated substance, confirming the possibility of significant improvement in the therapeutic action; treatment with LIN and LIN/β-CD did not induce motor incoordination or change in muscle strength. By immunofluorescence, we observed that treatment of LIN and LIN/β-CD presented action in the CNS, acting in the brain, whereas the retrosplenial cortex and periaqueductal gray central structures are strictly related to the mechanisms of pain modulatory. / O ( )-linalol (LIN) é um monoterpeno alcoólico majoritário nos óleos essenciais de várias espécies aromáticas comumente encontradas no nordeste brasileiro, tais como Ocimum basilicum e Cinnamomum verum. Estudos recentes tem demonstrado que o LIN produz importantes propriedades terapêuticas, incluindo seus efeitos antinociceptivo, anti-inflamatório e anticonvulsivante. Apesar dos benefícios supracitados, o LIN, como os monoterpenos em geral, exibe baixa solubilidade em água, alta volatilidade e curta meia vida plasmática; desta forma a incorporação em ciclodextrinas (CDs), especialmente a β-CD, vem se destacando como uma ferramenta importante para melhorar as propriedades físico-químicas e biológicas deste derivado isoprênico. Assim, foram investigados os possíveis efeitos antinociceptivos do LIN, isolado e incluso em β-CD no modelo animal de hiperalgesia muscular não inflamatória, além dos efeitos do tratamento na atividade motora e a ação central. Camundongos Swiss machos (25-35 g), foram divididos em grupos e submetidos ao protocolo de indução da nocicepção não inflamatória através da injeção de solução salina ácida (pH 4; 20 μL) no ventre do músculo gastrocnêmio esquerdo. Posteriormente, foram tratados, por via oral (v.o.) com LIN (25 mg/kg), LIN/β-CD (25, 50 e 100 mg/kg), tramadol (TRM 4 mg/kg, i.p.) ou veículo (solução salina 0,9%), e avaliados quanto à parâmetros comportamentais durante um período de 27 dias. Os animais foram submetidos aos testes da hiperalgesia mecânica (von Frey digital), da coordenação motora (Rota Rod) e da força muscular (Grip Strength Metter), e para determinar o possível envolvimento de áreas do Sistema Nervoso Central (SNC), os animais foram tratados e, noventa minutos após, foram anestesiados, perfundidos, os cérebros extraídos e cortados em criostato. As secções cerebrais foram submetidas ao protocolo de imunofluorescência para proteína Fos. Os resultados foram expressos como média ± erro padrão da média. As diferenças entre os grupos foram analisadas por meio do teste de variância ANOVA, uma via, seguido pelo teste de Bonferroni. Valores de p < 0,05 foram considerados estatisticamente significantes. O tratamento com LIN e LIN/β-CD apresentou atividade antinociceptiva no modelo animal de hiperalgesia muscular crônica não inflamatória em camundongos, em todas as doses testadas, tendo o LIN/β-CD atividade prolongada em relação a substância isolada, confirmando a possibilidade de melhora significativa na ação terapêutica; o tratamento com LIN e LIN/β-CD não induziu incoordenação motora nem alteração da força muscular. Através da imunofluorescência, observou-se que o tratamento de LIN e LIN/β-CD apresentou ação no SNC, atuando no encéfalo, visto que o córtex restrosplenial e a substância cinzenta periaquedutal são estruturas centrais intimamente relacionadas com os mecanismos modulatórios da dor.

O câncer de tireoide é a neoplasia maligna mais comum de glândula endócrina e tem sua incidência aumentada em vários países, inclusive o Brasil, nos últimos anos. Em crianças e adolescentes, o câncer de tireoide é raro, correspondendo a cerca de 2% dos casos, sendo o carcinoma papilífero o tipo histológico mais frequente. O prognóstico de crianças e adolescentes com câncer de tireoide é excelente, com taxas de sobrevida superiores a 95%. Contudo, quando diagnosticada, essa parcela da população apresenta características clínico-patológicas de doença avançada, como invasão de cápsula e extensão extratireoidiana, além de metástase linfonodal. A leptina é um hormônio produzido principalmente pelo tecido adiposo, participando da regulação da ingestão de alimentos e do gasto energético e tem sido associada a fator prognóstico de alguns tumores, como hematológicos, pancreático, câncer de mama e tireoide. Há relatos deste hormônio atuar como fator angiogênico e mitogênico. O objetivo deste estudo é avaliar a associação entre o carcinoma papilífero de tireoide em crianças e adolescentes e proteínas da via de sinalização da leptina, através de imunofluorescência para ObR (receptor de leptina), pJAK2 e pSTAT3, relacionando com dados que apontam para o prognóstico da doença. Foram incluídos no estudo 52 pacientes, sendo a expressão e o padrão de marcação avaliados por consenso entre dois patologistas. O perfil de marcação foi puntiforme e multifocal para o tecido não neoplásico adjacente como para o tecido tumoral. Foram atribuídos scores para a imunomarcação (1-10% e >10%) e analisadas possíveis associações entre ObR, pJAK2 e pSTAT3 com variáveis demográficas qualitativas ou características clínico-patológicas. Todos os casos apresentaram marcação relevante (>10%) no tecido não-neoplásico para as 3 proteínas, enquanto no tecido neoplásico, houve marcação em 53% dos casos para ObR, 47% para pJAK2 e 71% para pSTAT3. ObR foi 6,2 vezes mais frequente em pacientes sem metástase linfonodal. O tamanho do tumor foi inversamente relacionado com marcação relevante para pJAK2 e pSTAT3. Nossos achados mostram que ObR está relacionado a menos metástase linfonodal e pJAK-pSTAT3 com tamanho tumoral reduzido, sugerindo que a via de sinalização da leptina em câncer de tireoide de crianças e adolescentes pode contribuir para prevenir o aumento da tumorigênese. / Thyroid cancer is the most common endocrine gland neoplastic malignancy and its incidence has increased in many countries in recent years, Brazil included. Thyroid cancer is rare in children and adolescents and it accounts for 2% of the cases. Its histologically more frequent type is papillary carcinoma. The prognosis in this population is excellent, with survival rates superior to 95%. However, when diagnosed, this part of the population has clinical and pathological characteristics of advanced disease, such as capsular invasion, extrathyroidal extension and lymph node metastasis. Leptin is a hormone produced mainly by adipose tissue, participating in the regulation of food uptake and energy expenditure and it has been associated with the prognostic factor of hematologic, pancreas, breast and thyroid tumors. There are reports about the action of this hormone as an angiogenic and mitogenic factor. The goal of this study is to assess the association between thyroid papillary carcinoma in children and adolescents and the leptin signaling pathway proteins through ObR, pJAK2 and pSTAT3 immunofluorescence, related to data that point to the prognosis of the disease. This study included 52 patients and the expression and staining were assessed in consensus by two pathologists. The staining profile was punctiform and multifocal for both the non-neoplastic adjacent tissue as well as the tumor tissue. Scores were assigned for immunostaining (1-10% and >10%) and possible associations among ObR, pJAK2 and pSTAT3 were analyzed, with qualitative demographic variables or clinical and pathological features. All the cases presented relevant staining (>10%) in the non-neoplastic tissue for the three proteins while in the neoplastic tissue there was staining for ObR in 53% of the cases, 47% for pJAK2 and 71% for pSTAT3. ObR was 6.2 times more frequent in patients without lymph node metastasis. The tumor size was inversely related to relevant staining for pJAK2 and pSTAT3. This study shows that ObR is related to less lymph node metastasis and pJAK-pSTAT3 to smaller tumor size, suggesting that the leptin signaling pathway in thyroid cancer in children and adolescents may play an important role in the prevention of tumorigenesis.

Hipopituitarismo congênito é caracterizado por deficiência hormonal múltipla devido a mutações de fatores de transcrição envolvidos na embriogênese hipofisária. As células-tronco estão presentes na hipófise e são caracterizadas por dar origem a uma célula progenitora e uma célula indiferenciada por divisão assimétrica. Estão envolvidas na hipófise em processos de alta demanda metabólica em diferentes fases da vida. Em estudos prévios, observou-se o acúmulo dos marcadores de células-tronco Sox2 e Nr2e1 no camundongo Ames, que apresenta mutação no gene Prop1. O Sox2 é o marcador consenso de células-tronco na hipófise enquanto que o Nr2e1, nunca antes caracterizado na hipófise, é essencial para a manutenção de células-tronco e neogenese no cérebro. A perda de função deste gene pode causar agressão e falta de instinto materno em camundongos. Com isso, o objetivo desse projeto foi utilizar o animal modelo zebrafish para avaliar o papel repressor do gene prop1 e caracterizar o gene nr2e1 bem como, confirmar se o mesmo está envolvido com a diferenciação terminal na hipófise, e sua interferência no comportamento do animal mutado. O zebrafish se encaixa adequadamente nesse projeto pois é de fácil manutenção, econômico e com rápido desenvolvimento. No presente estudo criou-se 2 modelos de zebrafish utilizando-se a técnica de edição genômica conhecida como CRISPR (Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats) para nocautear os genes prop1 e nr2e1. Esta técnica permite uma interrupção específica e substituição de bases no genoma, resultando em uma alta especificidade, baixa toxicidade celular e é herdável. O zebrafish homozigoto com mutação no gene nr2e1 se desenvolve e reproduz como o animal controle, porém apresenta um comportamento mais exploratório quando comparado com o animal selvagem e o heterozigoto. A imunofluorescência para o anticorpo Sox2 no animal mutado mostrou se diferente do selvagem, pois apresenta um aumento da expressão temporal e o mesmo não se colocaliza com o Nr2e1. A imunofluorescência feita com os hormônios não se mostrou diferente entre o mutado e o selvagem. Conclui-se diante dos achados de normalidade do desenvolvimento, fertilidade, ausência de co-localização com o gene Sox2 e presença de hormônios como Tsh, Fsh e Gh, que o gene nr2e1 não é crucial na diferenciação terminal na hipófise porém o animal mutado apresenta um comportamento diferente do animal selvagem. Os resultados da caracterização do zebrafish com mutação no gene prop1 ainda estão em andamento devido a dificuldade de se estabelecer essa linhagem / Congenital hypopituitarism is characterized by multiple hormone deficiencies due to mutations in transcription factors involved in pituitary embryogenesis. Stem cells, which by definition can each give rise to a progenitor and an undifferentiated cell by asymmetric division, are present in the pituitary gland and are important during periods of high metabolic demand in different phases of life. In previous studies, the accumulation of the stem cell markers Sox2 and Nr2e1 was observed in the Ames mouse, which harbors a mutation in Prop1. Sox2 is the consensus stem cell marker in the pituitary gland, while the role of Nr2e1 in the pituitary development has not been characterized although it is essential for neural stem cell maintenance and neogenesis in the brain and its loss of function causes pathological aggression and lack of maternal instinct in mice. In this project, the zebrafish animal model was used to characterize the role of nr2e1, to confirm whether this gene can be involved in the pituitary terminal differentiation, and to determine the effects of this gene on animal behavior. The zebrafish is a particularly appropriate model for use in this project because it is easy to maintain, is economical, and has a rapid metabolism and growth rate. In the present study, we created 2 zebrafish models by knocking out prop1 and nr2e1 using the CRISPR (Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats) genome-editing technique. This technique enables highly specific gene/reading frame interruption and/or base substitution in the genome, with low cellular toxicity and high heritability. Zebrafish with homozygous nr2e1 mutations develop and reproduce similarly to wild-type zebrafish, but present a more exploratory behavioral pattern compared to wild-type and heterozygous zebrafish. Based on immunofluorescence, Sox2 expression was higher in the mutant zebrafish than in the wild type and was not co-localized with Nr2e1 expression. Hormone expression did not differ between wild-type and mutant zebrafish. We conclude that nr2e1 is not crucial in the terminal differentiation of the hormone-forming pituitary gland; however, it induces a distinct behavioral phenotype at the larval stage. Analyses of zebrafish harboring a prop1 mutation are ongoing owing to issues with the establishment of the lineage

( )-linalool (LIN) is a monoterpene alcohol majority in the essential oils of several aromatic species commonly found in northeastern Brazil, such as Ocimum basilicum and Cinnamomum verum. Recent studies have shown that LIN has important therapeutic properties, including its antinociceptive, anti-inflammatory and anticonvulsant. Despite the benefits described above, the LIN, such as monoterpenes generally exhibits low solubility in water, high volatility and short half-life, thus incorporation into cyclodextrins (CDs), especially β-CD, has emerged as a tool important to improve the physicochemical properties and biological isoprênico this derivative. Thus, we investigated the possible antinociceptive effects of LIN isolated and included in β-CD in chronic non-inflammatory muscle pain model, besides to the effects on the motor activity and the central action. Male Swiss mice (25-35 g) were divided into groups and subjected to induction protocols non-inflammatory nociception by injecting acid saline (pH 4; 20 μL) in the belly left of gastrocnemius muscle. Subsequently, they were treated orally (p.o.) with LIN (25 mg/kg) LIN/β-CD (25, 50 and 100 mg/kg) tramadol (TRM 4 mg/kg, i.p.) or vehicle (solution 0.9% saline), and evaluated for behavioral parameters over a period of 27 days. The animals were subjected to tests of mechanical hyperalgesia (von Frey digital), motor coordination (Rota Rod) and muscle strength (Grip Strength Metter), and to determine the possible involvement of areas of the central nervous system (CNS), the animals were treated and ninety minutes, were anesthetized, perfused, the brains extracted and cut in a cryostat. The brain sections were subjected to immunofluorescence protocol for Fos protein. The results were expressed as mean ± standard error of the mean. Differences between groups were analyzed by ANOVA test, a path followed by Bonferroni test. P values <0.05 were considered statistically significant. Treatment with LIN and LIN/β-CD showed antinociceptive activity in animal model of chronic non-inflammatory muscle hyperalgesia in mice at all doses tested, with the LIN/β-CD prolonged activity against isolated substance, confirming the possibility of significant improvement in the therapeutic action; treatment with LIN and LIN/β-CD did not induce motor incoordination or change in muscle strength. By immunofluorescence, we observed that treatment of LIN and LIN/β-CD presented action in the CNS, acting in the brain, whereas the retrosplenial cortex and periaqueductal gray central structures are strictly related to the mechanisms of pain modulatory. / O ( )-linalol (LIN) é um monoterpeno alcoólico majoritário nos óleos essenciais de várias espécies aromáticas comumente encontradas no nordeste brasileiro, tais como Ocimum basilicum e Cinnamomum verum. Estudos recentes tem demonstrado que o LIN produz importantes propriedades terapêuticas, incluindo seus efeitos antinociceptivo, anti-inflamatório e anticonvulsivante. Apesar dos benefícios supracitados, o LIN, como os monoterpenos em geral, exibe baixa solubilidade em água, alta volatilidade e curta meia vida plasmática; desta forma a incorporação em ciclodextrinas (CDs), especialmente a β-CD, vem se destacando como uma ferramenta importante para melhorar as propriedades físico-químicas e biológicas deste derivado isoprênico. Assim, foram investigados os possíveis efeitos antinociceptivos do LIN, isolado e incluso em β-CD no modelo animal de hiperalgesia muscular não inflamatória, além dos efeitos do tratamento na atividade motora e a ação central. Camundongos Swiss machos (25-35 g), foram divididos em grupos e submetidos ao protocolo de indução da nocicepção não inflamatória através da injeção de solução salina ácida (pH 4; 20 μL) no ventre do músculo gastrocnêmio esquerdo. Posteriormente, foram tratados, por via oral (v.o.) com LIN (25 mg/kg), LIN/β-CD (25, 50 e 100 mg/kg), tramadol (TRM 4 mg/kg, i.p.) ou veículo (solução salina 0,9%), e avaliados quanto à parâmetros comportamentais durante um período de 27 dias. Os animais foram submetidos aos testes da hiperalgesia mecânica (von Frey digital), da coordenação motora (Rota Rod) e da força muscular (Grip Strength Metter), e para determinar o possível envolvimento de áreas do Sistema Nervoso Central (SNC), os animais foram tratados e, noventa minutos após, foram anestesiados, perfundidos, os cérebros extraídos e cortados em criostato. As secções cerebrais foram submetidas ao protocolo de imunofluorescência para proteína Fos. Os resultados foram expressos como média ± erro padrão da média. As diferenças entre os grupos foram analisadas por meio do teste de variância ANOVA, uma via, seguido pelo teste de Bonferroni. Valores de p < 0,05 foram considerados estatisticamente significantes. O tratamento com LIN e LIN/β-CD apresentou atividade antinociceptiva no modelo animal de hiperalgesia muscular crônica não inflamatória em camundongos, em todas as doses testadas, tendo o LIN/β-CD atividade prolongada em relação a substância isolada, confirmando a possibilidade de melhora significativa na ação terapêutica; o tratamento com LIN e LIN/β-CD não induziu incoordenação motora nem alteração da força muscular. Através da imunofluorescência, observou-se que o tratamento de LIN e LIN/β-CD apresentou ação no SNC, atuando no encéfalo, visto que o córtex restrosplenial e a substância cinzenta periaquedutal são estruturas centrais intimamente relacionadas com os mecanismos modulatórios da dor.

O núcleo pré-mamilar dorsal (PMd), de crucial importância para expressão do comportamento de defesa exibido por roedores durante o confronto com predador natural, odor ou contexto associado, representa o sítio hipotalâmico com maior aumento no número de células imunorreativas a proteína Fos após o confronto predatório. Estudos mostram que a mediação noradrenérgica central é crítica para a expressão das respostas de medo e que tanto as respostas incondicionadas como as contextuais ao odor do gato dependem de sua ação central, mediada pelo PMd. Dada a importância da modulação noradrenérgica no PMd para a expressão das respostas anti-predatórias, investigamos quais grupamentos catecolaminérgicos aferentam o núcleo empregando técnicas de rastreamento retrógrado somado a técnica de imunofluorescência (dupla-marcação). Nossos resultados revelaram que a única fonte de aferência catecolaminérgica para o PMd é oriunda do locus ceruleus, onde encontramos um número conspícuo de células duplamente marcadas, indicando ser este o responsável pelo suporte noradrenérgico ao PMd. / Evidence suggests the medial hypothalamic defensive system plays a pivotal role in processing of predator-derived and contextual-related cues. Fear responses to predatory threats rely heavily on the PMd beta adrenergic neurotransmission. Thus, it has been shown that propranolol significantly reduced PMdFos expression in response to cat odor, and that beta adrenoceptor blockade, in the PMd, reduced defensive responses to both cat odor exposure and cat odor-related context. Given the importance of the noradrenergic innervation of the PMd to the expression of unconditioned and learned fear responses, we have presently investigated the putative noradrenergic source of inputs to the nucleus. To this end, we have combined Fluoro-Gold retrograde tract-tracing and catecholamine immunostaining, and found that the locus ceruleus is seemingly the only source of catecholaminergic source of inputs to the PMd. In addition, the present findings are particularly interesting given the well-documented roles of the locus ceruleus roles in attentional processes.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:29:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Monica Canedo.pdf: 1399065 bytes, checksum: d8dbbf45d1c8e0d832e311c7d2c9c8f7 (MD5) Previous issue date: 2011-03-02 / Background: Actually the Chlamydia trachomatis is responsible for the major number of cases of sexual transmitted bacterial infections. The likelihood of tubal damage in infertile women is associated to the evidence of chlamydia infection. Objectives: To evaluate the ability of indirect immunofluorescence for Chlamydia trachomatis on tubal occlusion and to establish the cutoff point (best sensitivity and specificity) of antibodies IgG titres (indirect immunofluorescence) to detect tubal occlusion (ROC curve). Methodology: This is a retrospective study with 204 electronic records of patients attended at a university and private infertility center in the city of Goiania, in the period of 2006 to 2009. Patients had 17 to 47 years old. To evaluate the risk of tubal occlusion the patients were divided into two groups: patients exposed to chlamydia (significant IFI &#8805; 1:16) e unexposed (no significant IFI < 1:16). It was verified patients who had the disease (tubal occlusion) and not sick (without tubal occlusion) in the hysterosalpingography. For the calculations the Chi-square (&#967;2) were used, corrected to small samples (Fisher Exact Test) when necessary. The p chosen level was 0.05. The ROC curve was calculated with BioEstat® software, using the standard methodology. This study was submitted and approved by Ethics Committee of Hospital Clinics of the Federal University of Goias.Results: Of the 72 patients with significant titres, 34 (47,2%) showed the occurrence of tubal occlusion. In relation the 132 patients with no significant titres, only 18 (13,7%) had tubal occlusion (p < 0,001). We also observed a progressive increase in the levels of antibodies and the likelihood of tubal occlusion (p < 0,001). The best cutoff point of the ROC curve with the titre was 1:64. However, we believe that we can continue using a cutoff titre to &#8805; 1:16 by interfering little in sensitivity and specificity and because it is currently used in the Clinical Laboratory of Hospital Clinics. Conclusions: The results indicate that serology for Chlamydia trachomatis (indirect immunofluorescence) is valid for screening of tubal damage. We also showed that the best cutoff (ROC) indirect immunofluorescence to detect tubal occlusion is 1:64, but between 1:16 and 1:64 there is a slight change in sensitivity and specificity. / Introdução: Atualmente, a Chlamydia trachomatis é responsável pelo maior número de casos de infecções bacterianas sexualmente transmissíveis. A probabilidade de lesão tubária em mulheres inférteis é relacionada com evidência de infeccção passada por clamídia. Objetivos: Avaliar a capacidade da imunofluorescência indireta para Chlamydia trachomatis em rastrear obstrução tubária e estabelecer o ponto de corte (melhor sensibilidade e especificidade) de títulos de anticorpos IgG imunofluorescência indireta) para detectar obstrução tubária (curva ROC). Métodos: Este é um estudo retrospectivo com 204 prontuários eletrônicos de pacientes atendidas em um centro universitário e particular de infertilidade na cidade de Goiânia, no período de 2006 a 2009, com faixa etária entre 17 e 47 anos. Para avaliar o risco de obstrução tubária as pacientes foram divididas em dois grupos: pacientes expostas à clamídia (IFI significativa &#8805; 1:16) e não expostas (IFI não significativa < 1:16). Verificou-se então, as pacientes que tiveram a doença (obstrução tubária) e não doentes (sem obstrução tubária) na histerossalpingografia. Para os cálculos foi utilizado o teste Qui-quadrado (&#967;2), corrigido para pequenas amostras (teste Exato de Fisher) quando necessário. O nível de p escolhido foi 0,05. A curva ROC foi calculada com o programa BioEstat® utilizando a metodologia usual. Este estudo foi submetido e aprovado pelo Comitê de Ética do Hospital das Clínicas da Universidade Federal de Goiás. Resultados: Das 72 pacientes com titulação significativa, 34 (47,2%) apresentaram a ocorrência de obstrução tubária. Em relação as 132 pacientes com titulação não significativa, somente 18 (13,7%) apresentaram obstrução tubária (p < 0,001). Foi observado também um aumento progressivo entre os níveis de anticorpos e a probabilidade de obstrução tubária (p < 0,001). O melhor ponto de corte na curva ROC foi com a titulação de 1:64. Porém, consideramos que pode-se continuar utilizando como ponto de corte a titulação &#8805; 1:16, por interferir pouco na sensibilidade e especificidade e por ser a atualmente utilizada no Laboratório Clínico do Hospital das Clínicas. Conclusões: Os resultados deste estudo revelaram que a sorologia para Chlamydia trachomatis (imunofluorescência indireta) é válida para rastreamento de lesão tubária. Verificamos ainda que o melhor ponto de corte (curva ROC) da imunofluorescência indireta em detectar obstrução tubária é 1:64, mas, entre 1:16 e 1:64 há uma discreta mudança na sensibilidade e especificidade do teste.

A hipertensão arterial cursa com hiperativação de neurônios glutamatérgicos (excitatórios) e depressão de neurônios gabaérgicos (inibitórios) em áreas centrais autonômicas. Avaliamos em ratos SHR e WKY os efeitos temporais do treinamento aeróbio (T) sobre a expressão/funcionalidade das vias gabaérgicas e glutamatérgicas no núcleo paraventricular do hipotálamo (PVN), núcleo do trato solitário (NTS) e bulbo ventrolateral rostral (RVLM), correlacionando-as a dados hemodinâmicos. SHRs apresentavam elevada PAM e FC e níveis elevados de RNAm de GAD67 no NTS. T promoveu bradicardia de repouso (T2 SHR e T8 WKY) e redução da PAM nos SHR (T8). O aumento de GAD em SHR e WKY induzido pelo T correlacionava-se com a redução da FC basal. T determinou aumento da razão inibição/excitação nos WKY e não a alterou nos SHR. Alterações nas expressões gênicas foram confirmadas por alterações similares na expressão protéica. Assim, o aumento da inibição gabaérgica essencialmente no PVN de WKY e SHR treinados é um fator determinante para a instalação da bradicardia de repouso. / Hypertension is accompanied by hyperactivity of glutamatergic (excitatory) and depression of gabaergic (inhibitory) neurons in autonomic areas driving cardiovascular control. Evaluated in SHR and WKY rats the time effects of T on cardiovascular parameters and on the expression/activity of gabaergic and glutamatergic pathways in the hypothalamic paraventricular nucleus (PVN), nucleus of solitary tract (NTS) and rostroventrolateral medulla (RVLM), correlating the hemodynamic data. SHRs exhibited elevated BP and HR and high GAD67 mRNA levels within the NTS. T caused resting bradycardia (T2 SHR and T8 WKY) and BP basal in SHR (T8). In both groups, T-induced elevated GAD expression was correlated with baseline HR reduction. T caused in the WKY augmentation of inhibitory/excitatory ratio, and did not change it in the SHR. Gene expression changes were confirmed by similar changes in protein expression. So, the increased gabaergic inhibition within the PVN of trained WKY and SHR is a main factor determining the appearance of resting bradycardia.

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:37:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_cintia_lidiane_guidoti_aguiar_cunha.pdf: 517290 bytes, checksum: 54cdb2ba4dc72f12759c702f6b1b7cda (MD5) Previous issue date: 2013-07-31 / Neospora caninum is an obligate intracellular protozoan, causes neosporosis and resembles formation by Toxoplasma gondii tissue cysts in their hosts. Humans are not considered intermediate hosts for N. caninum, but its zoonotic potential is questionable, because of the close phylogenetic relationship with T. gondii and the report of a study, which fetuses of nonhuman primates, Rhesus, (Macaca mulatta) infected artificially with lesions similar to those caused by congenital toxoplasmosis. The present study aimed to verify the occurrence of antibodies to N. caninum in humans and its possible association with HIV infection and other risk factors. The presence of antibodies to N. caninum was determined from a sample of 156 HIV-positive patients and 100 HIV-negative individuals of Pelotas, Rio Grande do Sul, Brazil, through the reaction of Indirect Immunofluorescence Assay (IFA), with initial dilution of 1:25. Antibody titers found by IFA ranged between 25 and 800. Samples of 256 human sera analyzed, 47 (18.3%) were positive for N. caninum. Since antibodies to this protozoan were found in 36 HIV-positive patients (23.1%) and in 11 HIV-negative individuals (11%). Multivariate analysis showed that HIV-positive patients who have CD4+ T-lymphocyte count ≤ 350 cells/mm3 have 2.4 times more likely to be seropositive for N. caninum. HIV-negative individuals who have seropositivity for T. gondii have 4.71 times more likely to have antibodies to the agent studied. The results indicate the exposure of humans to N. caninum, with higher prevalence in immunocompromised individuals. / Neospora caninum é um protozoário intracelular obrigatório, causador da neosporose e assemelha-se a Toxoplasma gondii pela formação de cistos teciduais em seus hospedeiros. Os humanos não são considerados hospedeiros intermediários para N. caninum, mas seu potencial zoonótico é discutível, em virtude da proximidade filogenética com T. gondii e do relato de um estudo, onde fetos de primatas não humanos, Rhesus, (Macaca mulatta) infectados artificialmente, apresentaram lesões semelhantes às causadas por toxoplasmose congênita. O presente estudo teve por objetivo verificar a ocorrência de anticorpos para N. caninum em humanos e sua possível associação com a infecção por HIV e outros fatores de risco. A ocorrência de anticorpos para N. caninum foi determinada a partir de uma amostra de 156 pacientes HIV-positivos e 100 de indivíduos HIV-negativos do município de Pelotas, Rio Grande do Sul, Brasil, por meio da Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI), com a diluição inicial de 1:25. Os títulos de anticorpos encontrados através da RIFI variaram entre 25 e 800. Das 256 amostras de soros humanos analisadas, 47 (18,3%) foram positivas para N. caninum. Sendo que anticorpos para esse coccídio foram encontrados em 36 pacientes HIV-positivos (23,1%) e em 11 indivíduos HIV-negativos (11%). A análise multivariada demonstrou que pacientes HIV-positivos que possuem contagem de linfócitos T-CD4+ ≤ 350 células/mm3 possuem 2,4 vezes mais chances de serem soropositivos para N. caninum. Indivíduos HIV-negativos que apresentam soropositividade para T. gondii possuem 4,71 vezes mais chances de apresentarem anticorpos para o agente estudado. Os resultados obtidos indicam a exposição de seres humanos a N. caninum, com prevalência mais elevada em indivíduos imunocomprometidos.

The dog (Canis lupus familiaris) can be infected by a variety of protozoa and may develop clinical signs or remain asymptomatic. Due to the proximity of this kind with the man some protozoa present zoonotic potential, as researchers studied, including Leishmania infantum, Neospora caninum and Toxoplasma gondii. L. infantum, it is responsible for causing visceral leishmaniasis in several species, including the dog and the man with deleterious impacts on public health. The dog is considered the urban reservoir of the parasite, and it is recommended the euthanasia of seropositive, including asymptomatic. N. caninum and T. gondii are widely distributed protozoa. These agents, when affecting dogs, can cause neurological, gastrointestinal, respiratory and muscle disturbs. N. caninum is a protozoan of great economic importance and may cause reproductive problems in farm animals and the dog is the definitive host of this agent. T. gondii is an opportunistic microorganism, a zoonotic potential, with world-occurrence. The dogs as well as humans, are considered intermediate hosts, infection may be more severe in pregnant women and immunocompromised individuals. This study aimed to research anti-Leishmania infantum antibodies, Neospora caninum and Toxoplasma gondii in autopsied dogs; and to determine the occurrence of infection in animals from Agudo, Jaguari, Júlio de Castilhos, Mata, Santa Maria, Santiago, São Martinho da Serra, São Vicente do Sul and Tupanciretã, towns in the central region of Rio Grande do Sul (RS). In addition, there were correlated epidemiological data on sex, age, race, origin and occurrence of these protozoa in the seasons, with the pathological lesions. The animals were necropsied during routine at Pathology Laboratory in the Universidade Federal de Santa Maria, from November 2014 to April 2016. For detection of seropositive dogs, the Indirect Immunofluorescence Antibody Test (IFAT) was performed on stored samples in serum bank Analysis Laboratory in Veterinary Clinics. It analyzed 78 samples, where 53/78 (67.9%) were seropositive, demonstrating the presence of antibodies to one or more of the agents in the population studied. The occurrence of antibodies to L. infantum, N. caninum and T. gondii was 26/78 (33.3%) 29/78 (37.1%) and 34/78 (43.5%) respectively. Mono infections observed in 5/53 (9.4%) of L. infantum, 10/53 (18.8%) to N. caninum and 11/53 (20.7%) T. gondii, while the coinfection appeared in 27/53 (50.9%) of the dogs were detected in 4/53 (7.5%) L. infantum + N. caninum, 8/53 (15.0%) L. infantum + T. gondii, 6/53 (11.3%) N. caninum + T. gondii and 9/53 (16.9%) L. infantum + N. caninum + T. gondii, affecting animals of different ages, without predominance sex or race. There were no pathological characteristic lesions, featuring animals as asymptomatic, indicating a role for these sentinels of dogs these diseases. This study contributed to a better understanding of the epidemiology of protozoa and noted the emergence of visceral leishmaniasis in animals from areas considered harmless. In addition, this work can support the public health services in the adoption of preventive measures, avoiding possible cases of autochthonous leishmaniasis in central RS. / O cão (Canis lupus familiaris) pode ser infectado por uma variedade de protozoários, podendo desenvolver sinais clínicos ou permanecer assintomático. Devido à proximidade desta espécie com o homem e por alguns protozoários apresentarem potencial zoonótico, se realizou um estudo, incluindo Leishmania infantum, Neospora caninum e Toxoplasma gondii. L. infantum, é responsável por causar a leishmaniose visceral em diversas espécies, abrangendo o cão e o homem, com impactos deletérios na Saúde Pública. O cão é considerado o reservatório urbano deste parasita, e recomenda-se a eutanásia dos soropositivos, inclusive os assintomáticos. N. caninum e T. gondii são protozoários de ampla distribuição geográfica. Estes agentes, quando acometem os cães, podem causar distúrbios neurológicos, gastrintestinais, respiratórios e musculares. N. caninum é um protozoário de grande importância econômica, podendo ocasionar problemas reprodutivos em animais de produção e o cão é o hospedeiro definitivo deste agente. T. gondii é um micro-organismo oportunista, de potencial zoonótico, com ocorrência mundial. Os cães, assim como o homem, são considerados hospedeiros intermediários, podendo a infecção ser mais grave em indivíduos imunocomprometidos ou gestantes. Este estudo teve por objetivo pesquisar anticorpos anti-Leishmania infantum, Neospora caninum e Toxoplasma gondii em cães necropsiados; bem como determinar a ocorrência da infecção em animais procedentes de Agudo, Jaguari, Júlio de Castilhos, Mata, Santa Maria, Santiago, São Martinho da Serra, São Vicente do Sul e Tupanciretã, municípios da região central do Rio Grande do Sul (RS). Adicionalmente, correlacionou-se os dados epidemiológicos referentes a sexo, idade, raça, procedência e a ocorrência destes protozoários nas estações do ano, com as lesões anatomopatológicas. Os animais foram necropsiados durante a rotina do Laboratório de Patologia da Universidade Federal de Santa Maria, no período de novembro de 2014 a abril de 2016. Para detecção dos cães sororreagentes, foi realizada a Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI), nas amostras armazenadas no banco de soro do Laboratório de Análises Clínicas Veterinárias. Analisou-se 78 amostras, onde 53/78 (67,9%) apresentaram soropositividade, demonstrando a presença de anticorpos para um ou mais dos agentes na população estudada. A ocorrência de anticorpos para L. infantum, N. caninum e T. gondii foi de 26/78 (33,3%), 29/78 (37,1%) e 34/78 (43,5%) respectivamente. Observou-se mono infecções em 5/53 (9,4%) para L. infantum, 10/53 (18,8%) para N. caninum e 11/53 (20,7%) para T. gondii, enquanto que, as coinfecções apareceram em 27/53 (50,9%) dos cães, sendo detectados em 4/53 (7,5%) L. infantum + N. caninum, 8/53 (15,0%) L. infantum + T. gondii, 6/53 (11,3%) N. caninum + T. gondii e 9/53 (16,9%) L. infantum + N. caninum + T. gondii, acometendo animais de diferentes idades, sem predominância de sexo ou raça. Não verificaram-se lesões anatomopatológicas características, caracterizando os animais como assintomáticos, denotando um papel para estes cães de sentinelas destas enfermidades. Este estudo contribuiu para um maior conhecimento da epidemiologia destas protozooses e observou o surgimento da leishmaniose visceral em animais provenientes de áreas consideradas indenes. Além disso, este trabalho poderá subsidiar os serviços de Saúde Pública na adoção de medidas preventivas, evitando possíveis casos de leishmaniose autóctones na região central do RS.