Orientador: Mateus José Rodrigues Paranhos da Costa / Resumo: Objetivou-se avaliar a eficácia do uso do colostro comercial em pó como substituto do colostro de vaca na primeira mamada de bezerras. Foram utilizadas 31 bezerras mestiças Holandês (H) x Gir (G), provenientes dos grupos genéticos 3/4HG, 5/8HG, 7/8HG e LA, divididas em dois grupos experimentais: G1 (n=15) 2L de colostro de vaca e G2 (n=16) 470g de colostro comercial em pó (SCCL, Saskatoon, SK, Canadá) diluídos em 1,5L de água morna, ambos fornecidos nas primeiras três horas de vida, e posteriormente recebendo mais 2L de colostro de vaca em até 12 horas após o nascimento. As concentrações de IgG presentes (p=0,006) foram maiores no colostro comercial em pó, enquanto as médias da β- caseína (p<0,0001), haptoglobina (p<0,0001) e α1-glicoproteína ácida (p=0,002) foram maiores nos colostros de vaca. As concentrações séricas de PT (G1 = 7,70 ± 1,00g/dL e G2 = 6,73 ± 0,65g/dL; p=0,003) e IgG (G1 = 2110,25 ± 595,03mg/dL e G2 = 1567,6 ± 418,25mg/dL; p=0,004) demonstraram diferenças estatísticas entre os grupos de manejo, com maiores médias para o G1. Houve diferenças significativas para a concentração de albumina sérica (p=0,005), com maiores médias para o G1 (4660,7 ± 384,61mg/dL). Não ocorreu diferença significativa para a haptoglobina sérica (p=0,29), porém suas concentrações médias se apresentaram bem mais altas em ambos os grupos de manejo (G1 = 33,86 ± 4,90 e G2 = 29,31 ± 5,63mg/dL). As enfermidades com maior ocorrência foram diarreia e pneumonia, sendo registrados também casos ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The purpose of this study was value the effectiveness in commercial colostrum powder using as a cow colostrum substitute in the first calf suckling. Twenty-one Holstein (H) x Gir (G) crossbred calves from 3/4HG, 5/8HG, 7/8HG and LA genetic groups were divided into two experimental groups: G1 (n = 15) 2L of cow colostrum and G2 (n = 16) 470g of commercial powdered colostrum (SCCL, Saskatoon, SK, Canada) diluted in 1.5L of warm water, both supplied within the first three hours of life, and subsequently receiving an additional 2L of cow colostrum in up to 12 hours after birth. Present IgG concentrations (p = 0.006) were higher in commercial powdered colostrum, while mean β-casein (p < 0.0001), haptoglobin (p <0.0001) and α1-acid glycoprotein (p = 0.002) were higher in cow colostrums. Serum concentrations of PT (G1 = 7.70 ± 1.00 g/dL and G2 = 6.73 ± 0.65 g/dL; p = 0.003) and IgG (G1 = 2110.25 ± 595.03 mg/dL and G2 = 1567.6 ± 418.25 mg/dL; p = 0.004) demonstrated statistical differences between management groups, with higher means for G1. There were significant differences in serum albumin concentration (p = 0.005), with higher means for G1 (4660.7 ± 384.61mg / dL). There was no significant difference for serum haptoglobin (p = 0.29), but its mean concentrations were much higher in both management groups (G1 = 33.86 ± 4.90 and G2 = 29.31 ± 5.63 mg/dL). The most common diseases were diarrhea and pneumonia, with cases of parasitic sadness and omphalitis, and two deaths in G2. Althou... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: José Jurandir Fagliari / Coorientador: Maria da Glória Buzinaro / Coorientador: Luiz Francisco Zafalon / Banca: Luis Guilherme de Oliveira / Banca: Annelise Carla Camplesi dos Santos / Banca: Viviani Gomes / Banca: Raimundo Souza Lopes / Resumo: O objetivo do presente estudo foi avaliar a resposta imune humoral de vacas primíparas e pluríparas imunizadas ou não contra rotavírus com vacina comercial inativada e a transferência dessa imunidade para seus bezerros. Para tal, ensaio imunoenzimático indireto (EIE indireto) foi utilizado, sendo constituídos dois grupos e quatro subgrupos experimentais: grupo V1: 24 vacas imunizadas contra rotavírus bovino (BRV), com dois subgrupos - V1n (12 vacas primíparas) e V1v (12 vacas pluríparas) e grupo V2: 24 vacas não imunizadas contra BRV, com dois subgrupos - V2n (12 vacas primíparas) e V2v (12 vacas pluríparas). Os bezerros também foram alocados em grupos e subgrupos, de acordo com a distribuição de suas mães para a avaliação da imunidade humoral sérica, da cinética de parâmetros hematológicos, bioquímicos e da excreção de rotavírus nas fezes nos trinta primeiros dias de vida. Os bezerros foram ainda realocados, de acordo com a ocorrência de diarreia no primeiro mês de vida, sendo constituídos os grupos A (sem diarreia), B (diarreia, negativos para a detecção de rotavírus) e C (diarreia, positivos para rotavírus). Os dados foram submetidos à análise de variância, e o teste de Tukey e o teste de correlação de Pearson foram empregados, considerando-se as diferenças significativas quando P<0,05. Nas vacas dos grupos V1 e V2, não foi verificada influência do número de parições sobre os parâmetros séricos analisados, enquanto que na análise do colostro, verificou-se maiores teores de IgA e IgG em vacas do subgrupo V1v. A imunização pré-parto aumentou significativamente os títulos séricos de IgG anti-BRV, sendo os maiores títulos verificados também nos animais do subgrupo V1v. Os bezerros que receberam colostro dessas vacas (grupo B1) também apresentaram maiores títulos de IgG anti-BRV, quando comparados ao grupo B2, no entanto, a vacinação da vaca ... / Abstract: The aim of this study was to evaluate the humoral immune response of primiparous and multiparous cows immunized with an inactivated commercial vaccine against rotavirus, as well as the passive immunity transfer to its calves through indirect enzymatic immunoassay (EIE); thus, two groups and four subgroups were formed: Group V1: 24 cows immunized with a commercial inactivated vaccine against BRV, comprising two subgroups - V1n (12 first gestation cows) and V1v (12 second or later gestation cows) and Group V2: 24 cows not immunized against BRV, comprising two subgroups - V2n (12 first gestation cows) and V2v (12 second or later gestation cows). The calves were also allotted into groups and subgroups according to its mother's distribution, in order to evaluate humoral immune response in serum, the kinetics of hematological and biochemical parameters, the acute phase proteins response, and rotavirus excretion in feces throughout the first 30 days of life. The same calves were also redistributed into groups according to the occurrence of diarrhea in the first month of life as Group A (no diarrhea), group B (diarrhea, but negative to rotavirus detection) and group C (diarrhea, positive to rotavirus detection). Data were submitted to variance analysis and Tukey's test was performed in order to compare mean values of parameters and establish differences between groups; differences were considered significant when P<0,05. Pearson's correlation test was also performed in some of the studied parameters, and was considered significant when P<0,05. In group V1 and V2 cows, there was no influence of lactation number in the serum parameters analyzed, whilst in the colostrum whey, higher levels of IgA and IgG were noted in V1v cows when compared to the other Subgroups. Prepartum immunization of cows with a commercial vaccine against rotavirus effectively raised titers of specific IgG against rotavirus ... / Doutor

Orientador: Camila Buonani da Silva / Banca: Alexandre Moreira / Banca: Vinicius Flavio Milanez / Resumo: INTRODUÇÃO: O treinamento no futebol pode ser exigente para os jovens atletas devido ao excesso de cobrança com relação ao seu desempenho físico, técnico-tático e psicológico, o que influenciar o funcionamento dos seus sistemas orgânicos e interferir no seu desempenho. Analisar e interpretar essas alterações pode auxiliar no planejamento e na organização adequada dos treinamentos atenuando o possível declínio do rendimento dos atletas. OBJETIVO: Analisar a resposta da imunoglobulina salivar A (SIgA) e dos hormônios esteroides cortisol e testosterona em duas sessões de treinamento diferentes de jovens futebolistas semiprofissionais. METODOLOGIA: A amostra foi composta por 12 atletas de futebol do sexo masculino e da categoria sub19 de um time semiprofissional da cidade de Presidente Prudente (SP). Foram realizadas avaliações antropométricas e de composição corporal e coletas salivares para dosagem de cortisol (CS), testosterona (TS) e SIgA. Foram monitoras duas sessões de treinamento: jogo-treino (JT) e uma sessão de treinamento usual da equipe (TT). Foi realizado um JT respeitando as regras do futebol e contra uma equipe que disputaria o mesmo campeonato da equipe avaliada no presente estudo. O TT foi composto por atividades de condicionamento físico, técnicas e táticas específicas do futebol. As coletas salivares foram realizadas antes e após as sessões de treinamento. A saliva coletada foi dosada por ensaio imunoenzimático (ELISA) e Kits Salimetrics, seguindo instruções do ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: INTRODUCTION: Football training can be strenous for young athletes due to the demands in relation to their physical, technical-tactical and psychological performance, which influences the functioning of their organic systems and interferes in their performance. Analyzing and interpreting these changes can optimize the planning and organization of training, improving the performance of athletes. OBJECTIVE: To analyze the response of salivary immunoglobulin A (SIgA) and steroid hormones cortisol and testosterone in two different training sessions of young semiprofessional soccer players. METHODS: The sample consisted of 12 male soccer players and the sub 19 category of a semiprofessional team from the city of Presidente Prudente (SP). Anthropometric and body composition measurements were performed and salivary collection for analysis cortisol (CS), testosterone (TS) and SIgA. Two training sessions were analyzed: game-training (JT) and a usual training session of the team (TT). A JT was observed respecting the rules of the soccer and against a team that would dispute the same championship of the evaluated team in the present study. The TT was composed of specific physical conditioning activities, techniques and tactics of soccer. Salivary collections were performed before and after the training sessions. The collected saliva was analyzed by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and Salimetrics kits, following the manufacturer's instructions. For the statistical analysis, the... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

A patogênese das lesões teciduais na leishmaniose visceral (LV) foi pesquisada em hamsteres infectados com amastigotas de Leishmania (Leishmania.) chagasi. Foi observada a internalização de IgG de hamsteres com LV por células endoteliais da veia umbilical humana in vitro e no fígado e rim, sob microscopia eletrônica de transmissão aos 30 e 60 dias de infecção. Também foi observado o aumento na permeabilidade vascular aos 60 dias de infecção e a IgG purificada de hamsteres com LV induziu aumento na permeabilidade em hamsteres normais. Os resultados sugerem a internalização de IgG por células endoteliais como um mecanismo alternativo envolvido na patogênese das lesões teciduais em LV. / Pathogenesis of tissue lesions in visceral leishmaniasis (VL) was searched in hamsters infected with Leishmania (Leishmania) chagasi amastigotes. Internalization of IgG from VL hamsters by human umbilical vein endothelial cells was observed in vitro and in liver and kidney in hamsters VL, under transmission electron microscopy, at 30 and 60 days of infection. Increased vascular permeability was observed at 60 days of infection in VL hamsters, and purified IgG from VL hamsters induced permeability increase in normal hamsters. These data suggest the internalization of IgG by endothelial cells as an alternative mechanism involved in the pathogenesis of tissue lesions in VL.

O objetivo deste estudo foi avaliar o processo de aquisição de anticorpos em cordeiros recém-nascidos aleitados com colostro bovino e ovino, bem como a taxa de proliferação celular no epitélio intestinal. Este estudo contribui com informações sobre a aquisição de imunidade passiva nesta espécie, com o conhecimento do desenvolvimento e maturação do trato gastrintestinal no período neonatal, e para a avaliação de uma alternativa de manejo de colostro para estes pequenos ruminantes. Foram utilizados 30 cordeiros recém-nascidos. Às 0 e 6 horas de vida, 12 animais receberam 250 mL de colostro bovino (grupo CB) e outros 12 animais receberam 250 mL de colostro ovino (grupo CO). Amostras de sangue foram coletadas às 0, 6, 24, e 72 horas de vida para quantificação de imunoglobulina G (IgG) e proteína total sérica (PT). Seis animais foram sacrificados aleatoriamente, logo após o nascimento, sem ingestão de colostro, constituindo o grupo controle. Os demais grupos foram abatido às 24 e 72 horas. Amostras do intestino delgado foram coletadas para a quantificação da taxa de divisão celular nas criptas intestinais. O delineamento experimental adotado foi inteiramente casualizado, sendo as variáveis séricas analisadas como medidas repetidas no tempo. Para a variável histológica foi considerado um arranjo fatorial 2 X 2 + 1, tendo como efeitos principais o colostro fornecido, as idades de abate e o grupo controle. As concentrações de IgG sérica às 6, 24 e 72 horas foram significativamente superiores para o grupo CB (16,58±6,19; 34,12±5,67 e 28,77±5,45 mg mL-1) comparado com CO (10,76±6,08, 20,77±6,53 e 20,25±7,3 mg mL-1). A eficiência aparente de absorção (EAA) da IgG mostrou-se inferior no grupo CB (15,06±4,97%) em relação aos animais do grupo CO (25,70±13,08%). O grupo CB apresentou às 24 e 72 horas maiores (P<0,05) valores de PT (7,29±0,87 e 6,89±0,30 g 100mL-1) em relação ao grupo CO (5,73±1,35 e 5,69±0,57 g 100mL-1). Ao nascimento, os animais apresentaram 32,52%, 45,47% e 30,60% de células em divisão para as regiões do duodeno, jejuno médio e íleo, respectivamente. Às 24 horas, os animais do grupo CO apresentaram menor (P<0,0001) porcentagem de células em mitose no duodeno (42,12%) e no íleo (35,66%) em relação aos animais CB, 46,44% e 39,74%, respectivamente. Às 72 horas, foi observada uma porcentagem menor (P<0,0001) de células em divisão nas criptas do duodeno dos animais CO (36,28%), comparados com o grupo CB (43,18%). Não foi observada diferença significativa entre os tratamentos na porcentagem de células mitóticas nas criptas do jejuno às 24 e 72 horas, bem como nas criptas do íleo às 72 horas (P>0,05). Independente do tratamento, o jejuno foi o segmento com maior (P<0,0001) porcentagem de células mitóticas em todos os períodos. Os valores superiores na taxa de divisão celular no grupo CB indicam que o colostro bovino, provavelmente pela elevada concentração de fatores bioativos e de anticorpos, influencia positivamente o processo de renovação epitelial e que o mesmo pode ser utilizado como fonte alternativa de IgG para cordeiros recém-nascidos. / The objective of this study was to evaluate the antibody acquisition mechanism in newborn lambs fed bovine or ovine colostrum as well as the cell proliferation rate in the intestine epithelium. This study contributes with information about passive immunity acquisition in this specie, with knowledge about development and maturation of the small ruminant intestine tract, and for the evaluations of colostrums management alternative to these small ruminant. Thirty newborn lambs were used. At 0 and 6 hours of life, 12 animals received 250 mL of bovine colostrum (BC group) and another 12 animals received 250 mL of ovine colostrum (OC group). Blood samples were collected at 0, 6, 24, e 72 hours of life for immunoglobulin G (IgG) and total serum protein (TP) quantification. Six animals were randomly slaughtered just after birth, without colostrum intake, constituting the control group. The other groups were randomly slaughtered at 24 and 72 hours. Samples of the small intestine were collected for quantification of cellular division rate in intestinal crypts. A completely randomized desining was used, with the serum variables analyzed as repeated measures on time. For the histological variable it was considered a 2 X 2 + 1 factorial arrangement, having as the main factors colostrum supply, slaughter date and the control group. The IgG serum concentration at 6, 24 and 72 hours were significantly higher for the BC group (16,58±6,19; 34,12±5,67 and 28,77±5,45 mg mL-1) compared with the OC group (10,76±6,08, 20,77±6,53 and 20,25±7,3 mg mL-1). The apparent efficiency of IgG absorption (AEA) were lower for the BC group (15,06±4,97%) in relation to the animals from the OC group (25,70±13,08%). The BC group showed at 24 and 72 hours higher (P<0,05) TP values (7,29±0,87 and 6,89±0,30 g 100mL-1) in relation to the OC group (5,73±1,35 and 5,69±0,57 g 100mL-1). At birth, the animals showed 32,52%, 45,47% and 30,60% cells in division for duodenum, jejunum and ileum, respectively. At 24 hours, the animals from the OC group showed lower (P<0,0001) percentage of cells in mitosis in the duodenum (42,12%) and ileum (35,66%) in relation to the BC animals, 46,44% and 39,74%, respectively. At 72 hours, it was observed lower percentage (P<0,0001) of cells in division in the duodenum crypts of the OC animals (36,28%) compared with the BC group (43,18%). It was not observed significantly difference between treatment in mitotic cell percentage of jejunum crypts at 24 and 72 hours as well as in ileum crypts at 72 hours. Independent of the treatment the jejunum was the segment with higher mitotic cells percentage in all periods. The highest values in cellular division rate in the BC group, probably due to high concentrations of bioactive factors and antibodies, indicates that bovine colostrum influences positively the epithelium renovation process and that it can be used as an alternative source of IgG for newborn lambs.

Anticorpos são moléculas de grande interesse científico e farmacêutico, principalmente, devido a sua alta especificidade contra antígenos determinados. Atualmente, anticorpos monoclonais estão entre os medicamentos (biofármacos) mais vendidos do mundo. São utilizados para o tratamento das mais diversas doenças, como câncer, retinopatias, doenças inflamatórias e do sistema imune, entre outras. Nos últimos 30 anos, as tecnologias para a obtenção de anticorpos monoclonais evoluíram muito, desde a tecnologia do hibridoma, até os processos de humanização de anticorpos murinos. Entre os métodos mais utilizados para a produção de anticorpos humanos, destaca-se a tecnologia do Phage Display. Nesta técnica, os genes que codificam as regiões variáveis de imunoglobulinas são inseridos no genoma de um bacteriófago, resultando na produção de partículas virais híbridas que contém fragmentos de anticorpos em fusão com uma das proteínas do capsídeo viral. Neste trabalho, desenvolvemos novos vetores para a apresentação de fragmentos ScFv em fusão com duas proteínas das proteínas do capsídeo viral, a pIII e pVIII. Os oligonucleotídeos utilizados para amplificar os genes de imunoglobulinas foram redesenhados e para minimizar a perda do repertório durante a produção da biblioteca, avaliamos em bancos de dados enzimas de restrição que não apresentam sítios de restrição nas sequencias gênicas. Esses sítios de restrição foram utilizados para construir as regiões de clonagem do vetor Phagemid. Outra etapa crítica na produção de bibliotecas de anticorpos é a reação do PCR de overlap, que pode restringir a diversidade de anticorpos e resultar na produção de amplicons codificando anticorpos truncados. Por isso, nossos vetores foram desenhados para permitir a clonagem direta das regiões variáveis das imunoglobulinas humanas ou murinas, sem a necessidade do PCR de overlap. Nossa expectativa, é que estes novos reagentes serão mais efetivos para a produção de novas bibliotecas de anticorpos pelo sistema do Phage Display. / Antibodies are molecules of great scientific and pharmaceutical interest, mainly because of their high specificity against certain antigens. Currently, monoclonal antibodies are among the best selling drugs (biopharmaceuticals) in the world. They are used for the treatment of the most diverse disorders, such as cancer, retinopathies, inflammatory and immune system diseases, among others. In the past 30 years, technologies for obtaining monoclonal antibodies has greatly evolved from hybridoma technology to the humanization processes of murine antibodies. Among the methods used for the production of human antibodies, the technology of Phage Display stands out. In this technique, the genes encoding the immunoglobulin variable regions are inserted into the genome of a bacteriophage, resulting in the production of hybrid virus particles which contain fragments of antibodies in fusion with one of the viral capsid proteins. In this work, we developed new vectors for the presentation of ScFv fragments in fusion with two proteins of viral capsid proteins, pIII and pVIII. The oligonucleotides used to amplify the immunoglobulin genes were redesigned and to minimize repertory loss during library production, we evaluated restriction enzymes in databases that lack restriction sites in the gene sequences. These restriction sites were used to construct the cloning regions of the Phagemid vector. Another critical step in the production of antibody libraries is the overlap PCR reaction, which may restrict the diversity of antibodies and result in the production of amplicons encoding truncated antibodies. Therefore, our vectors were designed to allow the direct cloning of human or murine Immunoglobulins variable regions without the need for overlap PCR. Our expectation is that these new reagents will be more effective for the production of new antibody libraries by the Phage Display system.

O carrapato do boi, Rhipicephalus microplus, é o principal empecilho para o avanço da produção pecuária, causando enormes prejuízos econômicos. Durante a infestação, o carrapato acaba ingerindo uma grande quantidade de imunoglobulinas presentes no soro do hospedeiro. Desse modo, como mecanismo de defesa e com o objetivo de auxiliar o repasto sanguíneo realizado pelas fêmeas, carrapatos machos Ixodidae, secretam proteínas ligantes de IgG (IGBPs) contidas em sua saliva, teoricamente interferindo na ligação específica de anticorpos com antígenos do carrapato, bem como nas funções efetoras da IgG. Raças bovinas taurinas e zebuínas possuem uma peculiar distribuição de alótipos de IgG e, ao mesmo tempo, frente às infestações por carrapatos, tais raças se comportam de maneira distinta, sendo taurinas susceptíveis e zebuínas resistentes a esse ectoparasita. Uma vez que já é relatado na literatura existir diferença na ligação entre as IGBPs de diversos patógenos e os diferentes alótipos de IgG, o presente trabalho teve por objetivo avaliar a natureza das interações entre a IGBP-C de R. microplus e os alótipos de IgG bovina de animais suscetíveis ou resistentes a carrapatos. Para isso, foi feita a genotipagem por sequenciamento da região CH1-CH3 de IgG1 e IgG2, de 40 bovinos da raça taurina Holandesa (Holandês preto e branco - HPB) e 40 bovinos zebuínos da raça Nelore, com posterior purificação do alótipo de IgG1 e IgG2 mais comum em cada raça a partir do soro dos animais homozigotos. Curiosamente, verificou-se que havia uma associação entre os genótipos da região constante da cadeia pesada de IgG1 e IgG2 com os fenótipos de infestação por carrapato observados nos animais estudados. Em seguida, foram realizados ensaios em sistema de Ressonância Plasmônica de Superfície (Biacore T200 - GE Healthcare) para avaliar a afinidade de ligação entre a proteína recombinante IGBP-C e os alótipos de IgG1 e IgG2 bovinas, de uma forma não cognata. Por meio do ensaio em Biacore, observou-se uma maior afinidade de ligação da IGBP-C com alótipos de IgG2 de ambas as raças estudadas em relação aos alótipos de IgG1 e apesar de ligar em mais moléculas do alótipo de IgG2 mais frequente em bovinos Nelore (resistente a carrapato), apresentou uma afinidade maior para o alótipo de IgG2 mais frequente na raça HPB (suscetível a carrapato). Além disso, foi possível confirmar a porção Fc como o sítio de ligação preferencial da IGBP-C na IgG. Por fim, para um maior entendimento da sua função, foi feita a modelagem por homologia da IGBP-C e em ensaios adicionais, visto que essa proteína também interfere no processo de angiogênese, bem como na ativação da via clássica do complemento. Em suma, no presente trabalho foi possível descrever algumas funções promovidas pela IGBP-C, demonstrando assim, a sua importância em compor mecanismos de escape do carrapato R. microplus em relação a resposta imune do hospedeiro / The cattle tick, Rhipicephalus microplus, is the main impediment to the advance of livestock production, causing enormous economic losses. During infestation, the tick ingests a large amount of immunoglobulins present in the host\'s serum. Consequently as a defense mechanism and for assisting the blood meal performed by females, male Ixodidae ticks secrete IgG binding proteins (IGBPs) contained in their saliva, theoretically interfering in the specific binding of antibodies with tick antigens and in the effector functions of IgG. The taurine and zebu bovine breeds have a peculiar distribution of IgG allotypes and also present different phenotypes of tick infestation, being susceptible taurines and zebuines resistant to this ectoparasite. Since it is reported in the literature that there is a difference in the binding between the IGBPs of different pathogens and the different IgG allotypes, the present work aimed to evaluate the nature of the interactions between the IGBP-C of R. microplus and the IgG from susceptible or tick resistant animals. For this, was done genotyping by sequencing of the CH1-CH3 region of IgG1 and IgG2 from forty Holstein taurine and forty Nelore zebu cattle, with subsequent purification of the more common IgG allotypes in each breed, from the serum of homozygous animals. Interestingly, there was an association between IgG1 and IgG2 heavy chain constant region genotypes with tick infestation phenotypes. Subsequently, assays were performed in Surface Plasmon Resonance System (Biacore T200) to evaluate the binding affinity between the recombinant IGBP-C protein and the bovine IgG1 and IgG2 allotypes in a non-cognate manner. Through the Biacore assay, was observed that IGBP-C binding more affinity with IgG2 than IgG1 allotypes of both breeds, and although IGBP-C binds more molecules of the most frequent IgG2 allotype in Nelore tick resistant cattle, showed a higher affinity for the most frequent IgG2 allotype in the HPB, tick susceptible cattle. In addition, it was possible to confirm the Fc portion as the preferred binding site of IGBP-C in IgG. The homology modeling of this protein was done for a better understanding of its function and finally, IGBP-C has also been shown to interfere with the angiogenesis process, as well as in the activation of the classical complement pathway. In short, in the present work it was possible to describe some of the functions promoted by the IGBP-C, thus demonstrating its importance in composing escape mechanisms of the R. microplus tick to the host immune response

O reconhecimento e interação intermoleculares são cruciais na patogênese de doenças desmielinizantes autoimunes, como a esclerose múltipla (EM). A EM é uma doença que acomete o sistema nervoso central (SNC) e leva à desmielinização e axonopatia. Os alvos da resposta não são claros, mas proteínas da mielina, como a glicoproteína oligodendrocítica da mielina (MOG) e a proteína básica da mielina (MBP), são potenciais candidatas ao reconhecimento por células e autoanticorpos durante o processo autoimune. Assim, métodos de modelagem e simulações de dinâmica molecular (MD) e steered molecular dynamics (SMD) foram empregados para detalhar o reconhecimento e ligação do domínio externo da MOG e do peptídeo imunogênico MBP85-99 por anticorpos específicos. Para a obtenção das estruturas 3D dos anticorpos, particularmente do anti-MBP, um protocolo computacional envolvendo mutações sequenciais da região determinante de complementaridade (CDR) de estruturas-molde foi proposto. Dados obtidos evidenciaram grande contribuição das ligações de hidrogênio na manutenção dos complexos antígeno-anticorpo. Treze resíduos da MOG foram identificados como âncoras da ligação com o anti-MOG, os quais se relacionaram a peptídeos importantes descritos na literatura, principalmente o MOG92-106. No caso da MBP, os resíduos do MBP85-99 com maior interação com o anti-MBP envolveram a Arginina 99, Lisina 93, Asparagina 94 e Histidina 90, corroborando achados na literatura acerca da resposta celular e análises do anti-MBP em casos postmortem. Dados de SMD envolvendo os sistemas moleculares foram confirmados por dados de microscópio de força atômica, sugerindo grande participação do peptídeo MOG92-106 na manutenção da ligação com o anti-MOG. Com relação à MBP, os estudos computacionais indicaram que o ponto de interação da região da Arginina 99 é muito importante para a ligação com o anti-MBP. A consonância entre dados computacionais e dados experimentais resultantes de décadas de pesquisas da MOG e a MBP, bem como com dos experimentos de AFM, ficou evidente. Desta forma, as aproximações teórico-experimentais aplicadas neste trabalho para a caracterização de moléculas ainda não estudadas é uma via em potencial para otimização de passos iniciais e pré-clínicos de investigações de doenças autoimunes, guiando experimentos, reduzindos custos e o uso de modelos animais. / Intermolecular recognition and interaction are crucial in autoimmune demyelinating diseases pathogenesis as multiple sclerosis (MS). MS causes demyelination and axonopathy in the central nervous system (CNS). The targets of immune cells and autoantibodies are not clear, but myelin proteins, such as myelin oligodendrocyte glycoprotein (MOG) and myelin basic protein (MBP), are potential candidates. Thus, methods of molecular modeling, molecular dynamics (MD), and steered molecular dynamics (SMD) simulation were applied to detail the recognition and binding of MOG external domain and the immunogenic MBP85-99 peptide by specific antibodies. A computational protocol based on mutations of complement determinant regions (CDR) in template structures was proposed to obtain antibodies 3D structures, especially the anti-MBP. The obtained data evidenced a significant contribution of hydrogen bonds in the maintenance of antigen-antibody complexes. Thirteen anchor residues were found in the MOG structure. These residues were related to three well-known epitopes recognized by immunologic components, mainly MOG92-106. In the case of MBP, the most interactive residues of the MBP85-99 with the anti-MBP were Arginine 99, Lysine 93, Asparagine 94, and Histidine 90. These data complied with several studies concern cellular recognition of MBP and postmortem cases involving anti-MBP. SMD information of both molecular systems was confirmed by atomic force microscopy and suggested the MOG92-106 acting as an anchor for the complex with the anti-MOG. Regarding MBP, the computational force study evidenced the importance of Arginine 99 interaction region for the antigen-antibody binding. The agreement between the obtained computational data and experimental information resulted of decades of MOG and MBP research was evident. In this context, theoretical and experimental approaches application as described here for characterizing novel molecules in autoimmune disease is a potential pathway to optimize early-stage and pre-clinical steps of investigations, guiding experiments, reducing costs, and animal model usage.

Objetivo: Comparar as relações de custo-efetividade de duas terapias, Imunoglubulina Intravenosa (IgIV) e Plasmaferese (PE), no tratamento da Síndrome de Guillain-Barré sob a perspectiva do sistema público (SUS). O objetivo secundário foi avaliar a adesão às recomendações da Comissão de Medicamentos do HCPA Métodos: estudo transversal com análise econômica de pacientes tratados por Síndrome de Guillain-Barré no período de junho de 2003 a junho de 2008 no Hospital de Clínicas de Porto Alegre (HCPA). Foi realizada análise de custo-efetividade do emprego de IgIV e de PE nestes pacientes, pelo método de minimização de custos, considerando-se somente os custos diretos sanitários, fornecidos pelo sistema gerencial da instituição . Foram excluídos os pacientes que usaram outro tipo de tratamento associado ou isolado. Coletaram-se os dados através da revisão dos prontuários. A gravidade da doença na internação foi classificada como: doença leve, quando caminhar foi possível; doença moderada, quando caminhar foi impossível; doença grave, quando os pacientes necessitaram de ventilação assistida. A incapacidade na alta foi estabelecida pela escala de sete pontos de Hughes. A adesão às recomendações da Comissão de Medicamentos do HCPA, objetivo secundário, foi avaliada através da dose e o esquema de prescrição da IgIV. Resultados: Vinte e cinco participantes (2 a 70 anos) foram incluídos no estudo, cinco tratados com PE, empregando-se Albumina Humana como substituto do plasma, e 20 tratados com IgIV. O custo total do tratamento de um paciente com PE foi R$10.603,88 (± 2.978,12) e o de um que recebeu IgIV foi R$ 32.103,00 (± 21.454,24). O custo total da internação foi de R$45.027,14 (± 32.750,45) para os tratados com PE e de R$ 60.844,28 (±48.590,52) para os que receberam IgIV. Em relação ao desfecho clínico principal, melhora na escala de incapacidade de sete pontos, após o tratamento com uma das alternativas escolhida, a mediana dos pacientes que internaram com grau de gravidade 3 e que foram tratados com PE foi igual a dos que receberam IgIV. Em relação à permanência hospitalar, permanência em UTI e dias de Ventilação Mecânica, não houve diferença estatisticamente significativa entre os dois tratamentos. Conclusões: Quando comparados os custos médios das duas opções terapêuticas, uma delas aparece claramente com menor custo. Quando comparados os desfechos, após o emprego de cada opção terapêutica, estes não revelam diferença. Concluímos que, no HCPA, a opção pelo procedimento Plasmaferese é mais custo efetiva do que o emprego da IgIV. / Objectives: To compare the cost-effectiveness of two distinct therapies, Intravenous Immunoglobulin (IVIg) and Plasma Exchange (PE) in the treatment of Guillain-Barré Syndrome, concerning the public health care system. Compliance to the guidelines of the Pharmacy and Therapeutics Committee of the Hospital de Clínicas de Porto Alegre was a secondary objective. Methods: A cross-sectional, economical analysis was conducted, including patients treated for GBS in the period from June, 2003 through June, 2008 in Hospital de Clínicas de Porto Alegre (HCPA). The cost-effectiveness of the use of IVIg and PE in such patients was studied through the cost minimization method, considering direct medical costs only (2008 currency), yield by the management of the institution. Patients receiving treatments other than PE or IVIg were excluded. Data were collected by chart reviews. Severity of disease on admittance was classified as follows: mild disease, when the patient was able to walk; moderate disease, when the patient was unable to walk, and severe disease, when assisted ventilation was required. Disability on discharge was established by the 7-point scale of Hughes. Compliance to the guidelines of the Pharmacy and Therapeutics Committee was evaluated through the dose and prescription scheme of IVIg. Results: Twenty-five participants (2 to 70 years of age) were included in the study, 5 were submitted to treatment with PE, using human albumin as replacement for plasma, and 20 were treated with IVIg. The total treatment cost for PE in a single patient was US$6,058.85 (±1,701.78 SD), and the same expense for IVIg was US$18,344.57 (± 12,259.56 SD) (p = 0.035). Total inpatient cost was US$25,729.79 (± 18,714.54 SD) in the PE group, and US$34,768.16 (±27,766.01 SD) (p=0.530) in the IVIg group. The main clinical outcome was improvement in the 7-point disability grade scale. The median of that measure in patients admitted with a severity grade 3 treated either with PE and IVIg was the same. Secondary outcomes, such as in-hospital stay, ICU stay, and number of days on mechanical ventilation revealed no statistically significant difference between treatments. Conclusions: As the mean expenses of both therapeutic options are compared, one clearly stands-out as less onerous. Clinical outcomes, when compared, reveal no statistical difference after each treatment. We concluded that, in HCPA, plasma exchange is more cost-effective than intravenous immunoglobulin.

O presente projeto teve como proposta estudar a utilização do colostro bovino liofilizado como manejo alternativo para caprinos recém-nascidos. Estudos relacionados com a aquisição de proteção passiva e o desenvolvimento do epitélio intestinal, como aspectos citológicos e histológicos, atividade celular e expressão do receptor específico para o IGF-I (IGF-IR), foram realizados. Às 0, 7 e 14 horas de vida, 15 machos recém-nascidos receberam 5% do peso inicial de colostro bovino liofilizado (CBL) e 14 colostro caprino (CC), ambas as refeições com 55 mg/mL de IgG. Amostras de sangue foram coletadas às 0, 7, 14, 18, 24, 36, 48, 72 e 96 horas de vida para a quantificação da imunoglobulina G (IgG), proteína total (PT) e do fator de crescimento semelhante à insulina tipo I (IGF-I). Amostras do duodeno, jejuno e íleo foram coletadas às 18, 36 e 96 horas de vida para análises utilizando microscopia óptica e microscopia eletrônica de varredura e transmissão. A atividade de enzimas extracelulares, quantificação da proteína, DNA e RNA total e expressão do IGF-IR também foram determinadas. Amostras de um grupo adicional (0 h), que não ingeriu colostro, foram coletadas. No grupo CBL, as concentrações séricas de IgG às 14, 18, 24 e 48 horas foram maiores que às 0 e 7 horas, enquanto no grupo CC, apenas às 18 horas a concentração sérica foi maior que às 0 e 7 horas (P<0,05). A capacidade de absorção de IgG diminuiu entre 7 e 14 horas em CC (P<0,05), enquanto em CBL, manteve-se sem alteração nestes horários (P>0,05). As variáveis PT e IGF-I não foram influenciadas pela ingestão de colostro bovino liofilizado (P>0.05). Os indicativos de atividade celular, concentração de proteína, DNA e RNA total, proteína/DNA, proteína/RNA e RNA/DNA, e a atividade das enzimas aminopeptidase N, dipeptidil peptidase IV, aminopeptidase A, lactase, maltase e sacarase diferiram nos horários experimentais e em relação ao grupo adicional (P<0,05). Apenas as razões proteína/DNA, proteína/RNA no jejuno e a atividade da aminopeptidase A no íleo foram maiores no grupo CBL (P<0,05). A atividade da fosfatase ácida foi observada nas primeiras horas de vida, especialmente no duodeno. Com relação à morfologia do epitélio intestinal e densidade das vilosidades, o fornecimento de colostro bovino liofilizado não determinou alterações. As variações na ultraestrutura dos enterócitos revelaram a presença, no segmento jejuno, de material absorvido e do complexo endocítico apical às 0, 18 e 36 horas. No duodeno, a expressão gênica do IGF-IR ao nascimento foi maior que às 18 e 36 horas nos grupos CC e CBL (P<0,05). Enquanto, a expressão do receptor deste peptídeo bioativo no jejuno do grupo CBL foi maior às 18 e 36 horas em relação a 0 h (P<0,05). Os resultados obtidos do presente trabalho contribuem para que a fonte alternativa de imunoglobulinas, colostro bovino liofilizado, seja utilizada como um substituto para o colostro caprino sem alterações significativas na aquisição de proteção passiva e nas características histofisiológicas do tecido epitelial do intestino delgado de cabritos. / This project was proposed to study the use of lyophilized colostrum as an alternative management for newborn goat kids. Studies related to the acquisition of passive protection and development of the intestinal epithelium, as cytological and histological aspects, cellular activity and expression of the receptor specific for IGF-I (IGF-IR), were performed. At 0, 7 and 14 hours of life, 15 newborn males received 5% of initial weight of lyophilized bovine colostrum (LBC) and 14 goat colostrum (GC), both meals with 55 mg/mL of IgG. Blood samples were collected at 0, 7, 14, 18, 24, 36, 48, 72 and 96 hours of life to quantification of immunoglobulin G (IgG), total protein (TP) and insulin like growth factor type I (IGF-I). Samples of the duodenum, jejunum and ileum were collected at 18, 36 and 96 hours of life for analysis using optical microscopy and scanning and transmission electron microscopy. The activity of extracellular enzymes, quantification of total protein, DNA and RNA and expression of the IGF-IR were also determined. Samples from an additional group (0 h), not suckling, were collected. In LBC group, serum IgG concentrations at 14, 18, 24 and 48 hours were higher than at 0 and 7 hours, while in the GC group, only at 18 hours serum concentration was higher than at 0 and 7 hours (P<0.05). The capacity of IgG absorption decreased between 7 and 14 hours in GC (P<0.05), while in LBC, remained unchanged at these times (P>0.05). The variables TP and IGF-I were not influenced by ingestion of lyophilized bovine colostrum (P>0.05). The indicators of cellular activity, total protein, DNA and RNA concentration, protein/DNA, protein/RNA and RNA/DNA, and the enzyme activity of aminopeptidase N, dipeptidyl peptidase IV, aminopeptidase A, lactase, maltase and sucrase differed in sampling times and in relation to the additional group (P<0.05). Only the rations protein/DNA, protein/RNA in the jejunum and aminopeptidase A activity in the ileum were higher in the LBC group (P<0.05). The acid phosphatase activity was observed in the first hours of life, especially in the duodenum. Regarding the intestinal epithelium morphology and villi density, the supply of lyophilized bovine colostrum did not determine alterations. Changes in enterocytes ultrastructure revealed the presence in the jejunum segment of absorbed material and apical endocytic complex at 0, 18 and 36 hours. In the duodenum, IGF-IR gene expression at birth was higher than at 18 and 36 hours in the GC and LBC (P<0.05). While the expression of this bioactive peptide receptor in the jejunum of the LBC group was higher at 18 and 36 hours relative to 0 h (P<0.05). The results of this work indicate that the alternative source of immunoglobulins, lyophilized bovine colostrum, can be used as a substitute for goat colostrum without significant changes in the acquisition of passive protection and histophysiology characteristics of the small intestine epithelium of goat kids.