Orientador : João Ernesto de Carvalho / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-03T10:58:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Fernandes_AlikTeixeira_M.pdf: 21945046 bytes, checksum: d4e6c0dedd20aa9eaae3019b2991c9bf (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: A Plathymenia reticulata Benth. (Leguminosae), conhecida popularmente como vinhático, encontra-se amplamente distribuída em regiões do Cerrado brasileiro. A infusão em água fria da entrecasca do caule é utilizada popularmente para tratamento de diversos processos inflamatórios. O material vegetal foi coletado no município de Senador Canedo, Estado de Goiás, para a obtenção de extratos brutos hidroalcoólicos (70%), a partir de extrações a frio (EBHP) e a quente (EBHQ), e do extrato bruto acetato de etila (EBAE). Estes extratos foram posteriormente avaliados em modelos de inflamação, algesia e câncer. A realização de uma triagem fitoquímica com os extratos hidroalcoólicos detectou a presença de flavonóides, taninos, antocianinas e saponinas. O processo de purificação do EBHP foi direcionado para obtenção de frações ricas em substâncias de caráter ácido (FA), básico (FB) e uma fração neutra (FN). A atividade antiedematogênica dos extratos brutos e frações de Plathymenia reticulata foi avaliada no modelo de edema de pata induzido por carragenina. Neste ensaio, apenas os extratos brutos hidroalcoólicos (EBHP e EBHQ) promoveram uma inibição do edema principalmente após 4 e 5 horas da administração do agente flogístico. As frações FB e FN de P. reticulata inibiram o edema após 4 e 5 horas da administração de carragenina. A fração ácida (PA) não foi ativa neste modelo. No ensaio de dermatite induzida por óleo de cróton, também utilizado para avaliar a atividade antiedematogênica de P. reticulata, nenhum dos extratos foram capazes de inibir a formação do edema. A atividade do EBHF sobre a migração leucocitária foi testada no ensaio de peritonite induzida por carragenina em camundongos. A administração oral do EBHF reduziu o número de leucócitos que migraram para a cavidade peritonial, seguindo perfil semelhante ao da dexametasona. A indometacina, antiinflamatória não esteroidal, também reduziu a migração leucocitária em 67%. Estes resultados sugerem uma possível influência dos extratos brutos hidroalcoólicos na síntese de prostanóides. Com o objetivo de avaliar a relação entre as substâncias que inibem a expressão da enzima ciclooxigenase e a atividade citocida ou citostática em células tumorais, foi realizado o estudo da atividade antiproliferativa dos extratos e frações obtidos de P. reticulata. o EBHF e as frações FB e FN apresentaram seletividade, efeito citostático para todas as linhagens celulares e citocida para células de pulmão, ovário e melanoma. A fração FA apenas inibiu o crescimento das linhagens de ovário e melanoma. Os resultados obtidos demonstraram uma correlação entre a atividade antiproliferativa e antiinflamatória, provavelmente relacionada à inibição da enzima COX-2. O extrato bruto acetato de etila (EBAE), apesar de não ser considerado ativo no modelo de edema de pata, foi avaliado sobre as células derivadas de tumores humanos, demonstrando seletividade para a linhagem de mama com efeito citostático já na menor concentração e citocida na mais elevada. Para a linhagem de cólon o EBAE produziu inibição de crescimento na concentração de 25 µg/mL e morte celular com 250 µg/mL.Para as demais linhagens, o EBAE apresentou efeito citostático ou citocida somente na concentração mais elevada. Este resultado aponta para a presença de substâncias com mecanismo de ação antitumoral independente da atividade antiinflamatória. Para avaliação da atividade antinociceptiva, os extratos brutos de P. reticulata foram testados em modelos de algesia induzida por estímulo químico e térmico. No teste de algesia induzida por ácido acético, apenas os extratos brutos hidroalcoólicos reduziram o número de contorções abdominais, com inibição de nocicepção segundo perfil semelhante ao da indometacina. Além disso, o EBHF foi efetivo de maneira dose-dependente. No teste de algesia induzida por calor, o EBHF de P. reticulata aumentou o tempo de reação dos animais 60 e 90 minutos após sua administração por via intraperitonial, utilizando-se a morfina como controle positivo. o teste da formalina foi utilizado com o objetivo de melhor caracterizar a atividade antinociceptiva do extrato bruto (EBHF) de P. reticulata. Neste modelo, o pré tratamento pela via oral com o EBHF reduziu a dor neurogênica e a inflamatória induzidas pela formalina. A indometacina, atiinflamatório não esteroidal e controle positivo do teste, reduziu apenas a dor de origem inflamatória. Como o EBHF apresentou atividade antinociceptiva sobre a primeira fase de dor induzida pela formalina, testou-se sua atividade no modelo de dor neurogênica induzida pela capsaicina. A administração oral prévia do EBHF reduziu a resposta álgica induzida pela capsaicina de maneira semelhante à morfina, um analgésico opióide utilizado como controle positivo do teste. Utilizando ainda o teste das contorções abdominais para estudo do provável mecanismo de ação antinociceptivo do EBHF , foi verificado que o pré-tratamento com naloxona, um clássico antagonista de receptor opióide, não modificou a atividade do EBHF, quando comparado à morfina. Em condições experimentais semelhantes, a administração prévia de naloxona quatemária, um antagonista opióide periférico, bloqueou o efeito antinociceptivo do EBHF. Estes dados sugerem uma possível ação periférica na atividade antinociceptiva do EBHF / Abstract: Plathymenia reticulata (Leguminosae), known popularly as "vinhático" grows in dry regions of Central BraziI. The cold infusion of the stems are used by folk medicine to treat inflammatory processes. Plant material was collected from Senador Canedo city (Goiânia Statel Brazil). The lack of information on the medicinal use of P. reticulata prompted us to study P. reticulata crude hydroalcoholic extract obtained from cold (EBHF) and hot (EBHQ) extractions, crude ethyl acetate extract (EBAE) and isolated fractions on inflammation, nociception and cancer experimental models. The phytochemical screening of hydroalcoholic extracts revealed presence of flavonoids, tannins, antocianyns and saponins. The EBHF was partitioned in order to obtain an acid (FA), basic (FB) and neutral (FN) fractions. One of the models chosen to study the anti-inflammatory activity was the carrageenan paw edema induced in rats. In this assay, only the hydroalcoholic crude extracts (EBHF and EBHQ) promoted an edema inhibition mainly afier 4 and 5 hours of carrageenan administration. Adrenalectomy of animals one week before the rat mice paw inflammation model did not influence the antiedematogenic effect of EBHF. The FB and FN fractions of P. reticulata reduced the edematogenic response by 34% and 37% from 4th hour and 26% and 45% from 5th hour, respectively, afier carrageenan injection. The EBHQ and EBHF antiedematogenic activity was also tested on mice croton oil ear edema. Under these conditions, dexamethasone inhibited very effectively the edema (85%), contrasting with crude hidroalcoholic extracts, which did not show a significant effect. Previous treatment with EBHF also reduced the leucocyte infiltration in the peritonitis induced by carrageenin by 60%. The effect was similar to that produced by dexamethasone (75%) and indomethacin (67%) used as positive controI. These results suggest a possible influence of hydroalcoholic crude extracts in the synthesis of prostaglandins. Antiproliferative activity was tested employing an in vitro assay using human cancer cell lines. The results were detected with Sulforhodamine B assay (SRB). The crude hidroalcoholic extract and fractions (FB and FN) gave cytostatic inhibition with 25 µg/mL and cytocidal inhibited at 250µg/mL with melanoma (UACC-62), ovarian (OVCAR) and lung (NCI460) cell lines. Indomethacin gave cytostatic inhibition from concentration at 25 µg/mL and cytocidal inhibited at 250µg/mL with lung (NCI460), prostate (PCO3), melanoma (UACC-62) and renal (786-0) cell lines. The results demonstrated a straight correlation among the antiproliferative and anti-inflammatory activity, probably related with inhibition ofthe enzyme COX-2. The crude ethyl acetate extract (EBAE) showed selectivity for breast (MCF-7) cell line, cytostatic inhibition from 25 µg/mL and cytocidal inhibited at 250µg/mL with colon (HT29) cellline. For the other cell lines, the EBAE only presented cytostatic or cytocidal effect in the highest concentration. This result points to the presence of substances with antiproliferative action independent of the antiinflammatory activity. In chemical model of nociception, pretreatment of mice with the crude hidroalcoholic extracts produced a dose-related inhibition of the number of writhes induced by acetic acid. On the hot plate test in mice, EBHF increased the time of animal reaction afier 60 and 90 minutes. This result indicated possible participation of central or peripheric analgesic mechanisms. The formalin test was used to characterize the antinociceptive activity of the crude extract (EBHF) of P. reticulata. Under this model, the previous oral treatment reduced the nociceptive response induced by formalin during the first phase (neurogenic pain) by 46% and during the second phase (inflammatory pain) by 55%. lndomethacin, used as positive controI, only reduced the last phase by 76%. On the neurogenic pain induced by capsaicin, pretreatment of mice with EBHF reduced the nociceptive response by 72% as morphine, an opioid analgesic used as positive controI. The acetic acid-induced writhing was used to determine the possible mechanisms involved in the antinociceptive activity of EBHF. Previous administration of naloxone inhibited the antinociceptive effects induced by morphine, while it did not affect the effect of EBHF. Previous administration of quatemary naloxone blocked the antinociceptive effect induced by EBHF. These data suggest a possible peripheral action in the antinociceptive activity ofEBHF / Mestrado / Ciencias Basicas / Mestre em Clinica Medica

Orientador: Edmur Franco Carelli / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-03T19:54:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Conceicao_MargaridaPerpetuodaSilva_M.pdf: 2783202 bytes, checksum: 75b56463fbc26fc796fe363fae55cb82 (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: A presente dissertação visa organizar os conhecimentos sobre a citocina Oncostatin M (OSM) , ao mesmo tempo que realça as vias indiretas de sua expressão com o objetivo de clarear conceitos para aplicabilidade futura. Esta revisão apresenta a molécula isolada e suas propriedades benéficas e adversas, além de uma discussão sobre as ações biológicas atualmente conhecidas que favorecem a concepção para possíveis protocolos de tratamento nos Glioblastoma Multiforme (GBM). Ressalta também a possibilidade de associação entre os inibidores da cic1o-oxigenase 2 (ICOX-2) e os indutores desta citocina visando o melhor bloqueio da proliferação tumoral em seu uso futuro e também discutir a manipulação da angiogênese. Desta forma as evidências levantadas favorecem a proposta de uma possibilidade de uso desta citocina combinado com os indutores de sua expressão e os inibidores da cic1o-oxigenase 2 (ICOX-2) / Abstract: The purpose of this artic1e is to organize available information on Oncostatin M as well as higblight its indirect pathways of expression so that concepts are clarified for future applicability. This review presents the isolated molecule with its adverse as well as beneficial properties and a discussion on known biological activities that favor the developrnent of possible treatment protocols, especially in the case oftumors ofthe central nervous system. The possibility of an association between COX-2 inln"bitors and this cytokine with a view to its use in the future is also highlighted / Mestrado / Neurologia / Mestre em Ciências Médicas

Orientador: Alda Regina Monteiro Souza Brito / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-07-24T23:17:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bighetti_ElieteJanainaBueno_M.pdf: 2479902 bytes, checksum: 810af4e4fa4b9faf8a8e72ffae874611 (MD5) Previous issue date: 1999 / Resumo: A malária, doença parasitária prevalente de países tropicais, atinge aproximadamente 300 milhões de indivíduos/ano no mundo e tem se agravado pela resistência do Plasmodium às drogas. A busca de novos anti-maláricos para substituir ou complementar a terapêutica atual é uma das prioridades da Organização Mundial da Saúde. A espécie Croton cajucara ou "sacaca", uma planta tipicamente brasileira, é indicada popularmente no auxílio do tratamento de malária, inflamações no figado e icterícia, entre outros. Os efeitos da Croton cajucara sobre os aspectos associados aos sinais e sintomas relacionados à infecção malárica, além do efeito sobre o parasita em si foram estudados devido aos danos hepáticos produzidos pela malária, assim como às indicações populares da espécie. Estudamos inicialmente os efeitos farmacológicos do infuso, óleo essencial e desidrocrotonina, obtidos das cascas.de sacaca, em modelos experimentais de inflamação e hepatoproteção. O óleo essencial exerceu efeito antiinflamatório, dose-d.ependente, em modelos de inflamação aguda (edema de pata induzido por carragenina), e de inflamação crônica (granuloma cotton pellet); contudo, não foi capaz de inibir a migração de neutrófílos induzida por lipopolissacarídeo, para a cavidade peritoneal de camundongos. A desidrocrotonina foi capaz de inibir o processo inflamatório somente quando os animais foram tratados cronicamente, enquanto que o infuso não demonstrou efeito antiinflamatório em nenhum dos modelos estudados. Em ensaios de citotoxicidade, realizados em fibroblastos de pulmão de hamster chinês da linhagem V79 e em culturas primárias de hepatócitos de ratos, verificamos que a toxicidade das substâncias ~studadas foi dependente da dose. Esses resultados possibilitaram a comparação da citotoxicidade entre células metabolizantes (hepatócitos) e não metabolizantes (fibroblastos). O óleo essencial apresentou menor citotoxicidade nas células hepáticas do que em fibroblastos, diferente das demais drogas, onde ocorreu o inverso. Quando se testou o óleo essencial no modelo de hepatoproteção in vitro, utilizando como droga hepatotóxica a cumarina, o óleo essencial não foi capaz de proteger o figado desse agente lesivo. Nos testes de hepatoproteção in vivo todas as drogas foram ineficazes em proteger o figado; ao contrário, as substâncias vegetais potencializaram o efeito hepatotóxico do agente estudado, a galactosamina. Estudos preliminares do efeito das drogas na malária demonstraram que o infuso (com maior eficácia), o óleo essencial e a DHC foram capazes de inibir a parasitemia em animais (aves e camundongos) infectados principalmente por P. berghei e gallinaceum. Determinamos também a composição do infuso onde 13% de sua composição é de desidrocrotonina, além de óleo essencial e açúcares em menor quantidade. Nossos estudos demonstraram portanto que, apesar da citotoxicidade apresentada pelo infuso, o chá das cascas de sacaca usado popularmente no auxílio do tratamento da malária está, ainda que, preliminarment~, perfeitamente justificado / Abstract: Malaria a parasitic disease prevalent in tropical countries strikes approximately 300 million individuals/year in the world and has recently become more serious due to Plasmodium resistance to drugs. The search for new antimalarial drugs to replace or complement the current therapeutic arsenal is one of the priorities of the World Health Organization. The species Croton cajucara or "sacaca", a typically Brazilian plant, is popularly indicate as an aid for the treatment of malaria, inflammation of the liver and jaundice, among other conditions. The effects of Croton cajucara on the aspects associated with the signs and symptoms of malarial infection were studied in addition to the effect on the parasite itself due to the tiver damage produced by malaria and in view of the popular indications of this species. We initially studied the pharmacological effect of an infusion, of the essential oil and of dehydrocrotonin obtained from "sacaca" bark on experimental models of inflammation and of liver protection. The essential oil had a dose dependent antiinflammatory effect on models of acute inflammation (paw edema induced by carrageenin) and of chronic inflammation (corton pellet granuloma) but did not inhibit lipopolysaccharide-induced neutrophil migratfon to the peritoneal cavity of mice. Dehydrocrotonin inhibited the inflammatory process only when the animaIs were treated chronically, while the infusion had no anti-inflammatory effect on any of the models studied. In citotoxicity assays carried out on lung fibroblasts from Chinese hamsters of the V79 strain and on primary rat hepatocyte cultures, we noted that the toxicity of the substances under study was dose dependent. These results permitted us to compare citotoxicity on metabolizing cells (hepatocytes) and non-metabolizing cells (fibroblasts). The essential oil showed lower citotoxicity on hepatic cells than on fibroblasts, whereas the opposite occurred with the other products. Wnen the essential oil was tested on the model of in vitro liver protection using coumarin as a hepatotoxic drug, the essential oil was unable to protect the liver against this damaging agent. In the in vivo liver protection assays all products were ineffective in protecting the liver and indeed potentiated the hepatotoxic agent studied, galactosamine. Preliminary studies ofthe effects ofthese products on malaria demonstrated that the infusion (with higher potency), the essential oil and dehydrocrotonin inhibited parasitemia in animaIs (birds in mice) mainly infected with P. berghei and P. gallinaceum. We also determined the composition of the infusion, which consists of 13% dehydrocrotonin plus essential oils and sugars in lower amounts. Thus, the present studies demonstrated that, despite the citotoxicity of the infusion the popular use of tea of "sacaca" bark for the treatment of malaria is perfectly justified, although in a preliminary manner / Mestrado / Farmacologia / Mestre em Farmacologia

Submitted by Heitor Rapela Medeiros (heitor.rapela@ufpe.br) on 2015-03-03T19:14:55Z No. of bitstreams: 2 Dissertação Evanilson A. Feitosa.pdf: 2523769 bytes, checksum: 9d6b1fa981e3f9b8be339f3f00482c8b (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-03T19:14:55Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação Evanilson A. Feitosa.pdf: 2523769 bytes, checksum: 9d6b1fa981e3f9b8be339f3f00482c8b (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2012-02-24 / FACEPE / Hirtella racemosa Lam. (Chrysobalanaceae), popularmente conhecida como ajururana, ajirú-do-mato ou murtinha, é um arbusto que se desenvolve em biomas como caatinga, restinga e cerrado. Com o objetivo de avaliar o potencial fitoquímico e farmacológico da espécie, este trabalho compreende três tópicos referentes ao estudo farmacognóstico: farmacobotânica, fitoquímica e atividades biológicas. Para caracterização botânica da espécie foram realizados cortes histológicos que revelaram a presença, no caule, de periderme com 2-4 camadas de súber, lenticelas, idioblastos contendo drusas no córtex e floema. Na folha, foi observada a presença de pelos tectores simples, estômatos do tipo paracítico, idioblastos contendo drusas no parênquima. O estudo fitoquímico realizado em CCD (cromatografia em camada delgada) identificou constituintes terpênicos, flavonoídicos, saponinas e proantocianidinas nas folhas. Foi realizada a extração dos metabólitos em aparelho de Soxhlet, utilizando solventes de polaridades distintas para posterior avaliação das atividades biológicas de H. racemosa. Procedeu-se ao ensaio de toxicidade aguda não revelando-se tóxica na dose de 2000 mg/Kg. No ensaio de peritonite induzida por carragenina, para avaliação de atividade anti-inflamatória, foi observada atividade na dose de 200 mg/Kg para os extratos utilizados. Experimentos in vitro utilizando culturas de células cancerígenas demonstraram potencial citotóxico contra a linhagem de câncer de pulmão humano (NCI-H-292) e potencial moderado contra linhagens de carcinoma de cólon (HT29) e laringe (HEp-2). A partir de todos os resultados obtidos com esta pesquisa, torna-se possivel expressar que os estudos botânicos, fitoquímico e avaliação preliminar das atividades anti-inflamatória e citotóxica de H. racemosa, contribuem para o conhecimento de uma espécie com potenciais químico e farmacológico inexplorados, podendo vir a colaborar futuramente no arsenal terapêutico.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2016. / Made available in DSpace on 2016-09-20T04:10:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 341096.pdf: 2936966 bytes, checksum: 935577bec836eb461f4854e3cc51d7e7 (MD5) Previous issue date: 2016 / Inúmeros estudos demonstram que a inflamação em indivíduos obesos está fortemente associada com um maior risco de desenvolvimento e progressão tumoral. O fator de necrose tumoral alfa (TNF-a) é uma das citocinas responsáveis pela iniciação e progressão de tumores, como também a amiloide sérica A (SAA), proteína produzida pelo fígado e pelo tecido adiposo em condições de inflamação. Além disso, ligantes do receptor de fator de crescimento epidermal (EGFR), como o EGF, demonstraram efeitos no favorecimento da proliferação celular e metástase. Neste sentido, analisamos se o soro de pacientes obesos e meio de cultura suplementado com citocinas poderiam criar um microambiente favorável ao crescimento tumoral com células de melanoma, além de verificar alterações na expressão gênica relacionada à progressão tumoral (B-RAF e N-RAS). Realizamos o ensaio clonogênico, o ensaio de migração 2D e ciclo celular em três linhagens de melanoma, SK-mel-19, SK-mel-28 e SK-mel-147. Uma delas, a SK-mel-28, demonstrou uma resposta mais intensa em relação à migração e capacidade clonogênica quando tratada com TNF-a e EGF. Deste modo, as células com mutação em B-RAF (SK-mel-28) foram tratadas com soro de 10 pacientes com IMC acima de 30 kg/m2, e 6 indivíduos com IMC abaixo de 25kg/m2, TNF-a (25 e 50 pg/mL), EGF (100 ng/mL), IL-1ß (10 pg/mL), IL-6 (10 pg/mL), MCP-1 (25 pg/mL) e SAA (75 ng/mL) a fim de avaliar os efeitos de componentes inflamatórios na migração pelo ensaio de migração 2D, e na expressão de B-RAF e N-RAS por PCR em tempo real. Também analisamos estes tratamentos na co-cultura de SK-mel-28 e mononucleares isolados do sangue periférico (PBMC). Foi observado um aumento na capacidade migratória das células de melanoma quando tratadas com soro dos obesos, rico em SAA (soros com concentração de SAA 50 vezes maior do valor de referência), além do tratamento com TNF-a. O soro dos obesos aumentou a expressão de N-RAS nas células de melanoma, fato também observado após tratamento com IL-6. As citocinas IL-1ß e IL-6 ampliaram a expressão de B-RAF. No ensaio clonogênico, os tratamentos com EGF e TNF-a aumentaram a capacidade clonogênica. Além disso, na co-cultura de melanoma com mononucleares, as células foram capazes de liberar citocinas no sobrenadante após tratamento com proteínas inflamatórias. Os resultados demonstraram uma associação entre as citocinas envolvidas em situação de obesidade (TNF-a, EGF, IL-1ß, IL-6, MCP-1 e SAA) e progressão tumoral, e sugerem que as citocinas pró-inflamatórias podem servir como alvo secundário no tratamento do melanoma. É necessário um aperfeiçoamento no entendimento dos efeitos das citocinas nas células de melanoma a fim de desenvolver novas abordagens terapêuticas para o tratamento do câncer.<br> / Abstract : It has been shown that low-grade inflammation on obese patients is strongly associated with an increased risk of cancer development and tumor progression. Tumor necrosis factor-a (TNF-a) is one of the cytokines that are responsible for both initiation and progression of tumors, as well as serum amyloid A (SAA), a cytokine produced by both liver and adipose tissue in inflammatory conditions. In addition, epidermal growth factor receptor (EGFR) ligands, such as EGF, have also demonstrated effect on fostering cell proliferation, tumor resistance and metastasis. Therefore, we examined whether serum from obese patients and cytokine-supplemented medium could create a growth-enhancing microenvironment in melanoma cells and gene expression alterations regarding tumor progression in melanoma (B-RAF and N-RAS). We performed clonogenic assay, scratch assay and cell cycle analysis in three different melanoma cell lines. One of them (SK-mel-28) demonstrated a major improvement regarding migration and clonogenicity when treated with TNF-a and EGF. Therefore, B-RAF mutated melanoma cells (SK-mel-28) were treated with serum from 10 patients with BMI > 30 kg/m2, and 6 individuals with BMI < 25 kg/m2, TNF-a (25 and 50 pg/mL), EGF (100 ng/mL), IL-1ß (10 pg/mL), IL-6 (10 pg/mL), MCP-1 (25 pg/mL) and SAA (75 ng/mL) in order to evaluate the effect of these cytokines on 2D cell migration, along with B-RAF and N-RAS gene expression by real-time PCR. We also analyzed these treatments in co-culture of SK-mel-28 and peripheral blood mononuclear cells (PBMC). An improve in melanoma cell migration was observed on cells treated with SAA-rich serum of obese patients (sera with a 50-fold increment of SAA above reference value), along with TNF-a?treated cells. Likewise, SAA-rich serum increased N-RAS gene expression in melanoma cells, fact observed with treatment with IL-6 as well. Cytokines such as IL-1ß and IL-6 increased the expression of B-RAF. In clonogenic assay, treatment with EGF increased the colony-forming potential, as well as TNF-a. Furthermore, when in co-culture of melanoma with PBMC, cells were able to release cytokines in supernatant after treatment with inflammatory proteins. The results demonstrated an association between cytokines involved in obesity (TNF-a, EGF, IL-1ß, IL-6, MCP-1 and SAA) and tumor progression, moreover, these cytokines may be target for melanoma treatment. The improvement in the understanding of the effects of cytokines in tumor cells is important in order to pave the way for new therapeutic approaches for cancer treatment.

A bactéria Gram negativa Helicobacter pylori, além de estar associada ao câncer gástrico e duodenal, está relacionada a patologias extra gástricas. Entre essas estão as doenças cardiovasculares. Os mecanismos pelos quais o H. pylori pode causar, ou agravar essas doenças, ainda não são claros. A urease de H. pylori (HPU) é considerada um fator de virulência, visto que sua atividade catalítica cria um microambiente de pH mais elevado, possibilitando a sobrevivência do patógeno no estômago. A HPU é capaz de ativar plaquetas de coelho através da indução da secreção de seus grânulos densos com liberação de ADP, culminando na agregação plaquetária. Esse fenômeno ocorre via 12- lipoxigenase, rota de sinalização também utilizada pelo colágeno, um importante agonista intrínseco desse sistema. Demonstramos previamente que também as duas subunidades da HPU, HpUreB e HpUreA, interagem com membranas de plaquetas de coelho, sendo que a HpUreB contém o domínio da holoenzima responsável pela agregação plaquetária. Essa interação entre HPU e plaquetas pode ser mediada por GPVI, o principal receptor de colágeno dessas células No presente trabalho, estudamos a interação da HPU e suas subunidades com plaquetas humanas, através de citometria de fluxo. Demostramos que HPU ativa plaquetas humanas sem exposição significativa de P-selectina. O bloqueio com anticorpos específicos para o receptor de membrana GPIIbIIIa, mas não para GPVI, interfere na ativação plaquetária induzida por HPU. Em plaquetas ativadas por HPU ocorrem modificações do processamento pré-mRNA de proteínas pró-inflamatórias, aumentando os níveis de mRNAs que codificam IL-1 e CD14, indicando que plaquetas passam a apresentar um fenótipo pró-inflamatório após exposição à urease. No conjunto, nossos dados sugerem que a HPU, além de permitir a sobrevivência bacteriana na mucosa gástrica, pode ter um papel importante, e até agora negligenciado, nos estados inflamatórios associados com a infecção por H. pylori. / The Gram negative bacterium Helicobacter pylori, besides its association with gastric and duodenal cancer, correlates positively to several extragastric diseases suchas cardiovascular pathologies. However, the mechanisms by which H. pylori can cause or aggravate these diseases are still unclear. H. pylori urease (HPU) is considered a virulence factor, since its catalytic activity creates a microenvironment, of higher pH, that allows survival of the pathogen in the stomach. HPU is able to activate rabbit platelets by inducing the secretion of their dense granules with release of ADP, culminating in platelet aggregation. This phenomenon occurs with activation of the 12-lipoxygenase pathway, which is also used by collagen, an important intrinsic agonist of this system. We have previously demonstrated that both subunits of HPU, HpUreB and HpUreA, interact with rabbit platelet membranes, and that HpUreB contains the domain responsible for platelet aggregation This interaction of HPU and platelets could be mediated by GPVI, the main collagen receptor in these cells. In this work, by using flow cytometry assay, we have studied the interaction of HPU and of its subunits with human platelets. HPU was shown to activate human platelets without significant P-selectin exposure. Blockage with antibodies against the membrane receptor GPIIbIIIa, but not against GPVI, interfered on platelet activation induced by HPU. The processing of pre-mRNA of proinflammatory proteins was evaluated in HPU-activated platelets and increased levels of mRNAs encoding IL-1 and CD14 were found, indicating that platelets acquire a proinflammatory phenotype when exposed to the urease. Altogether, our data suggest that H. pylori urease, besides allowing bacterial survival within the gastric mucosa, may have an important, and so far overlooked role in the inflammation associated to the infection by H. pylori.

A diabetes tipo 1 (DT1) está associada `a inflamação estéril (IE) e maior susceptibilidade a sepse. A sepse induz a síndrome da resposta inflamatória sistêmica (SIRS) e a inflamação pulmonar aguda (ALI). O leucotrieno (LT) B4 produzido condições inflamatórias induz a expressão de MyD88 em macrófagos (MA). Hipotetizamos que a DT1 induz a síntese de LTB4 promovendo a IE e isto contribui para SIRS, susceptibilidade a sepse e ALI. Os diabéticos apresentaram níveis elevados de LTB4 e IL-1b no soro e seu MA expressaram mais MyD88/STAT-1. A expressão de STAT-1 foi induzida por c-Jun de forma dependente de LTB4. O tratamento com insulina restaurou os níveis de LTB4 e STAT-1/MyD88 e a inibição de LTB4 restaurou os níveis de MyD88 e IL-1b. Na sepse, a inibição de 5LO prolongou a sobrevida dos diabéticos e diminuiu a SIRS menos IL-1b e IL-10 no soro e TNF-a e IL-1b na cavidade peritoneal. O pulmão dos diabéticos apresentaram ALI menos intensa que se correlacionou com um altos níveis de SOCS-1, baixos níveis de MyD88 e falha na ativação de NFkB nos macrófagos alveolares. / Type 1 diabetes (T1D) is associated with sterile inflammation (SI) and increased sepsis susceptibility. Sepsis induces Systemic Inflammatory Response Syndrome (SIRS) and Acute Lung Injury (ALI). Leukotriene (LT) B4 is produced in inflammatory conditions and induces MyD88 expression in macrophages (MA). We hypothesized that T1D induce LB4 that promotes SI contributing to SIRS, sepsis susceptibility and ALI. Diabetics presented higher levels of LTB4 and e IL-1b in the serum and MA expressed more MyD88/STAT-1. STAT-1 expression was induced by c-Jun on LTB4 dependent manner. Insulin treatment restored LTB4 and STAT-1/MyD88 levels and inhibition of LTB4 restored MyD88 and IL-1b levels. During sepsis, 5LO inhibition increased diabetics survival and inhibited SIRS- lower levels of IL-1b and IL-10 in the serum and TNF-a and IL-1b in the peritoneal cavity. Lungs from diabetics presented milder ALI that correlated with high levels of SOCS-1, low levels of MyD88 and impaired NFkB activation in alveolar macrophages.

A diabetes tipo 1 (DT1) está associada `a inflamação estéril (IE) e maior susceptibilidade a sepse. A sepse induz a síndrome da resposta inflamatória sistêmica (SIRS) e a inflamação pulmonar aguda (ALI). O leucotrieno (LT) B4 produzido condições inflamatórias induz a expressão de MyD88 em macrófagos (MA). Hipotetizamos que a DT1 induz a síntese de LTB4 promovendo a IE e isto contribui para SIRS, susceptibilidade a sepse e ALI. Os diabéticos apresentaram níveis elevados de LTB4 e IL-1b no soro e seu MA expressaram mais MyD88/STAT-1. A expressão de STAT-1 foi induzida por c-Jun de forma dependente de LTB4. O tratamento com insulina restaurou os níveis de LTB4 e STAT-1/MyD88 e a inibição de LTB4 restaurou os níveis de MyD88 e IL-1b. Na sepse, a inibição de 5LO prolongou a sobrevida dos diabéticos e diminuiu a SIRS menos IL-1b e IL-10 no soro e TNF-a e IL-1b na cavidade peritoneal. O pulmão dos diabéticos apresentaram ALI menos intensa que se correlacionou com um altos níveis de SOCS-1, baixos níveis de MyD88 e falha na ativação de NFkB nos macrófagos alveolares. / Type 1 diabetes (T1D) is associated with sterile inflammation (SI) and increased sepsis susceptibility. Sepsis induces Systemic Inflammatory Response Syndrome (SIRS) and Acute Lung Injury (ALI). Leukotriene (LT) B4 is produced in inflammatory conditions and induces MyD88 expression in macrophages (MA). We hypothesized that T1D induce LB4 that promotes SI contributing to SIRS, sepsis susceptibility and ALI. Diabetics presented higher levels of LTB4 and e IL-1b in the serum and MA expressed more MyD88/STAT-1. STAT-1 expression was induced by c-Jun on LTB4 dependent manner. Insulin treatment restored LTB4 and STAT-1/MyD88 levels and inhibition of LTB4 restored MyD88 and IL-1b levels. During sepsis, 5LO inhibition increased diabetics survival and inhibited SIRS- lower levels of IL-1b and IL-10 in the serum and TNF-a and IL-1b in the peritoneal cavity. Lungs from diabetics presented milder ALI that correlated with high levels of SOCS-1, low levels of MyD88 and impaired NFkB activation in alveolar macrophages.

Orientador: Rosemeri de Oliveira Vasconcelos / Banca: Geórgia Modé Magalhães / Banca: Claudia Momo / Banca: Pamela Rodrigues Reina Moreira / Banca: Daniela Bernadete Rozza / Resumo: No sistema nervoso central (SNC) a homeostase é mantida pelo contato célula a célula e por meio da expressão de receptores de membrana em neurônios, que se ligam a microglia para mantê-la em estado quiescente. Os astrócitos também contribuem com este processo, além disso, eles exercem inúmeras funções para a manutenção da imunotolerância local. Em situação de injúria, os astrócitos podem apresentar um efeito deletério, pois ativam a resposta imune e os efeitos da neuroinflamação e podem contribuir para o agravamento dos sinais clínicos neurológicos. Na cinomose canina, enfermidade infecciosa que pode cursar com desmielinização e inflamação no SNC, acredita-se que além do vírus, o processo inflamatório contribua com as lesões na substância branca. Portanto, os objetivos do presente estudo foram avaliar o papel dos astrócitos na encefalite causada pelo vírus da cinomose, por meio da imunodetecção de MHC-II, linfócitos T CD3, MMP9, MIF e GFAP nas áreas de desmielinização do encéfalo, a fim de verificar se estes achados podem estar relacionados à extensão ou gravidade das lesões encefálicas. Para isso realizou-se um estudo retrospectivo do arquivo de blocos de parafina, onde utilizouse 21 blocos de encéfalos (cerebelo) de cães naturalmente infectados com o vírus da cinomose (grupo infectado), bem como, encéfalos de cinco animais livres de doenças sistêmicas ou que afetem o SNC (grupo controle). Na análise imunohistoquímica das amostras verificou-se marcação aumentada de GFAP, MHC... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: In the central nervous system (CNS) homeostasis is maintained by cellto-cell contact and by the expression of membrane receptors on neurons, which bind to microglia to keep it in a quiescent state. Astrocytes also contribute to this process, in addition, they exert numerous functions for the maintenance of local immunotolerance. In a situation of injury, astrocytes may have a deleterious effect, since they activate the immune response and the effects of neuroinflammation and may contribute to the worsening of clinical neurological signs. In canine distemper, an infectious disease that can occur with demyelination and inflammation in the CNS, it is believed that in addition to the virus, the inflammatory process contributes to lesions in the white matter. Therefore, the objectives of the present study were to evaluate the role of astrocytes in encephalitis caused by the distemper virus, by immunodetection of MHC-II, CD3, MMP9, MIF and GFAP T lymphocytes in the areas of brain demyelination, in order to verify whether these findings may be related to the extent or severity of brain lesions. For this, a retrospective study of the paraffin block file was carried out, using 21 blocks of cerebellum from dogs naturally infected with the distemper virus (infected group), as well as the brains of five disease-free animals systemic or affecting the CNS (control group). In the immunohistochemical analysis of the samples, there was an increased marking of GFAP, MHC-II, MMP9 and MIF in the... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

A polpa dental é formada de tecido conjuntivo frouxo sendo constituída por diversas células, dentre as quais os fibroblastos são as mais numerosas. Ao serem submetidas a agressões diversas, estas células respondem com a liberação de substâncias, tais como citocinas e quimiocinas, que participam de maneira ativa no processo inflamatório. Assim sendo, este trabalho teve como proposição: 1. avaliar a capacidade de fibroblastos de polpa dental humana em cultura em produzirem as quimiocinas MIP-l\'alfa\' /CCL3 e SDF-1/CXCL12; 2. avaliar a produção destas quimiocinas pelos fibroblastos quando estimulados por Enterococcus faecalis morto por calor com relação à quantidade de bactérias por célula e 3. avaliar a liberação destas quimiocinas com relação ao tempo de estímulo. Para o estabelecimento das culturas, foi coletada a polpa de terceiro molar hígido de um paciente saudável. O tecido foi extraído, armazenado e picotado em meio de cultura para fibroblastos (DMEM), os quais foram utilizados a partir da quarta passagem. Após adesão das células a placas de 24 poços, o meio de cultura contendo Enterococcus .faecalis morto por calor numa concentração correspondente a 1, 10 e 100 bactérias por fibroblasto foi adicionado aos poços. Após 1, 6 e 24 horas, o sobrenadante das células foi coletado para a análise por ELISA. A análise estatística foi realizada aplicando-se o teste Kruskal-Wallis com nível de significância de 5%. A produção de MIP-l\'alfa\' /CCL3 e SDF-l/CXCL12 pelas células pôde ser detectada por ELISA. Os fibroblastos pulpares se mostraram capazes de produzir SDF-1 constitutivamente sendo que o estímulo bacteriano levou a uma diminuição estatisticamente significativa desta produção. A produção de MIP-l\'alfa\' também foi detectada tanto de maneira constitutiva como em resposta ao desafio microbiano. Enquanto a concentração intermediária de bactéria por fibroblasto (10:1) mostrou uma produção semelhante ao grupo controle, as concentrações de 1 e 100 bactérias por fibroblasto induziram aumento maior na primeira hora de estímulo. Essas diferenças, entretanto, não foram estatisticamente significativas. A capacidade dos fibroblastos secretarem quimiocinas, como MIP-l\'alfa\' e SDF-1, reforça a importância dessas células dentro do contexto de imunidade e inflamação pulpar, principalmente por serem as células mais numerosas deste microambiente. / Dental pulp is a connective tissue structure constituted by many different cell types. Among them, the fibroblasts are the most frequent ones. When challenged by different aggressive agents, these cells are able to release some substances like cytokines and chemokines, which are essential to trigger the inflammatory process. The aims of this study were: 1. to evaluate the ability of fibroblasts to produce the chemokines MIP-l\'alfa\'/CCL3) and SDF-1/CXCL12; 2. to evaluate the expression of these chemokines by fibroblasts when challenged by heat killed Enterococcus. faecalis in gradual concentrations and 3. to evaluate the production of these chemokines in a time course manner. The dental pulp from non-carious third molar was collected from a healthy patient. Explants were made and stocked in culture medium (DMEM) for fibroblasts growth. The cells were used since passage four. In a 24-well plate and after reaching confluence, culture medium alone or containing heat killed E. faecalis at proportion 1:1, 10:1 and 100:1 bacteria:fibroblast, were added to the fibroblasts. After 1, 6 and 24 hours, the supernatants were collected for analysis. The protein detection of MIP-l\'alfa\'/CCL3 and SDF-1/CXCL12 was performed by ELISA. For statistical analysis, data were assessed by Kruskal-Wallis followed by Miller post-test. Significance levels of 5% were adopted. Production of both chemokines was detected by ELISA. Pulp fibroblasts were able to produce SDF-1 constitutively. This production decreased with the increase in the number of heat killed E. faecalis increased (p < 0.05). Production of MIP-l\'alfa\' was detected in unchallenged and challenged cells. The median bacterial concentration (10:1) presented a profile production similar to that of unstimulated cells. Bacterial concentrations of 1 and 100 microrganisms/cell showed a highly enhanced production of MIP-l\'alfa\' at the first hour of stimulum; however, these data were not statistically significant (p > 0.05). Fibroblasts ability to produce chemokines, like MIP-l\'alfa\' and SDF-1, confirms their importance at immune and inflammatory events in dental pulp, specially being fibroblasts the most abundant cells at this microenvironment .