Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2018-08-08T17:27:34Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_ingrityPPGQ_2018.pdf: 5376720 bytes, checksum: fa85e56e97f4af1ea8ebbe715d71c5ce (MD5) / Rejected by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br), reason: on 2018-08-08T17:27:55Z (GMT) / Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2018-08-08T17:29:12Z No. of bitstreams: 1 Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2018-08-08T17:30:09Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-08T17:30:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) Previous issue date: 2018-05-14 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Indisponível. / As plantas sempre foram utilizadas pelo homem como fonte de agentes terapêuticos, muitas vezes empregadas a partir do conhecimento popular. Na Amazônia apesar da sua grande biodiversidade de plantas medicinais, existem muitas espécies vegetais que não possuem estudos com relação à composição química e atividade biológica. Dessa forma o presente trabalho vem destacar a espécie conhecida como Brosimum parinarioides (Huber) Ducke, pertencente à família Moraceae, que se caracteriza por ser uma árvore de grande porte que produz um látex comestível, popularmente conhecido como leite do amapá. Nesse contexto, este projeto buscou o estudo inédito da caracterização da composição química das diferentes partes (casca e látex) da espécie B. parinarioides, por serem muito comercializadas e utilizadas pela população, devido às suas diversas propriedades fitoterápicas além de avaliar a inibição da enzima acetilcolinesterase e a atividade antitumoral, antioxidante e anti-inflamatória. Para atingir esses objetivos, foram preparados três extratos para a amostra da casca (Hexânico, Acetato de etila e Metanólico) e um para o látex (metanólico) visando à caracterização química e/ou isolamento dos metabólitos secundários. Desta forma, foram empregadas técnicas cromatográficas clássicas como CCD, CCDP, CC e modernas CG-EM e CLAE-DAD-EM além do uso de técnicas espectrométricas e espectroscópicas EM Q-TOF, RMN 1D e 2D. Para as frações proveniente do extrato metanólico do látex, foi possível identificar por APCI-MS2 no modo negativo à presença das substâncias fenólicos: ácido clorogênico e ácido quínico. No extrato hexânico da casca foram identificados por CG-EM a presença de substâncias terpênicas: lanosterol, noroleano, acetato de α-amirina, acetato β-amirina, acetato de cicloartenol e ursa-12-eno. O fracionamento do extrato de acetato de etila e metanólico auxiliado pelo uso de técnicas como CC e CLAE levou ao isolamento da substância fenólica modificada majoritária H-S1 (m/z- 527,1708; FM:C31H27O8). Foram identificados no extrato metanólico da casca por CG-EM seis terpenoides: acetato de lanosterol, α-amirina, β-amirina, lupeol e acetato de lupeol. O fracionamento do mesmo utilizando métodos clássicos como CC e CCDP, resultou no isolamento de três substâncias: 4’,6-dihidroxi-5’-prefenil-flavana (P-S1: m/z- 309,1486; FM:C20H22O3), 2,4,4’-trihidroxi-3’-prenil-chalcona (P-S2: m/z- 323,1293; FM:C20H20O4) e 2,4,4’-trihidroxi-5’-(2”-hidroxi-3”-metil-3”-butenil)-chalcona (P-S3: m/z- 339,1247; FM:C20H19O5). Sendo inéditas as substâncias 4’,6-dihidroxi-5’-prefenil-flavana e a 2,4,4’-trihidroxi-5’-(2”-hidroxi-3”-metil-3”-butenil)-chalcona, já a 2,4,4’-trihidroxi-3’-prenil-chalcona foi isolada pela primeira vez neste gênero. Visando a análise do potencial citotóxico dos extratos realizou-se o estudo de citotoxidade in vitro em linhagens de células tumorais, onde foi possível observar atividade citotóxica promissora para alguns extratos com valores de IC50 < 30μg/mL. Os extratos e as substâncias não apresentaram potencial de inibição sobre a enzima acetilcolinesterase para a concentração de 90 μg/mL. Também foram realizados ensaios de avaliação de atividade antioxidante tanto para os extratos quanto para as substâncias obtidas sendo possível obter alta atividade antioxidante frente ao radical DPPH e ABTS. Por fim, na avaliação da inibição da enzima lipoxigenase, observou-se resultado significativo quando comparados ao padrão NDGA, corroborando para o uso popular contra doenças anti-inflamatórias.

Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-11-29T13:03:50Z No. of bitstreams: 1 Dissertação - Márcia de Jesus A. Silva.pdf: 2397176 bytes, checksum: 10d2601e2d4c7bb5bd425131e63a0ebc (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-11-29T13:04:06Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação - Márcia de Jesus A. Silva.pdf: 2397176 bytes, checksum: 10d2601e2d4c7bb5bd425131e63a0ebc (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-11-29T13:04:27Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação - Márcia de Jesus A. Silva.pdf: 2397176 bytes, checksum: 10d2601e2d4c7bb5bd425131e63a0ebc (MD5) / Made available in DSpace on 2016-11-29T13:04:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação - Márcia de Jesus A. Silva.pdf: 2397176 bytes, checksum: 10d2601e2d4c7bb5bd425131e63a0ebc (MD5) Previous issue date: 2016-04-29 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Inflammation is a physiological process that begins in response to infection or tissue damage. It is a mechanism focusing on tissue repair after injury and consists of a cascade of cellular and microvascular events that aims to remove damaged tissue and generation of new ones. In this cascade is observed an increasing in microvascular permeability, followed by adhesion and cell infiltration at the site of injury, apoptosis, and growth of new tissue and blood vessels. The nitrostyrene is a group of compounds consisting of an aromatic ring linked to a chain of the nitro group (NO2). It has been studied by having various biological activities such as anti-apoptotic, anti-platelet or anti-microbial, although few studies have been made for the anti-inflammatory activity of these compounds. The aim of this study was to evaluate anti-inflammatory activity of four new compounds from the class of nitrostyrene (NPA, 7B, 7D and 7E) in in vitro/in vivo assays. Initially, the compounds were submitted to in vitro testing in a murine macrophages model activated by lipopolysaccharide (LPS) and MRC5 human lung fibroblast in order to assess the cytotoxic potential of such compounds. Shortly thereafter, they were evaluated for inhibition of nitric oxide (NO·), for dosage of the cytokine TNF-α and evaluation of the expression of proteins involved in the inflammatory process. To evaluate the acute inflammatory process in vivo was performed edema induction by carrageenan tests on zebrafish model of LPS-induced pleurisy in mice. The four new compounds tested showed cytotoxic activity on J774A.1 and MRC5 cell when tested in the concentrations (3.12-25 μg/ml). For THP-1 cytotoxic activity was starting concentration of 10 μg/ml. All compounds inhibited nitric oxide production by macrophages activated by LPS but only the NPA showed a possibly significant concentration-response at the concentrations of 10 and 20 μg/ml. This same compound also reduced TNF-α, NF-B and ERK 1/2 levels in THP-1 cells. The NPA possibly also inhibited the carrageenan-induced edema in Zebrafish fish and leukocyte migration into the pleural cavity of mice by inhibiting the intracellular signaling pathways NF-B and ERK 1/2 in in vivo assays. In conclusion, compounds tested in this study not only presented significant cytotoxic activity, as also showed an excellent in vitro/in vivo anti-inflammatory potential, most likely by acting in the inhibition of NF-B and ERK 1/2 pathways. Data were important to explore the biological activity of these novel compounds and their possible application in the treatment of inflammatory diseases. / A inflamação é um processo fisiológico que se inicia em resposta a uma infecção ou dano aos tecidos. É um mecanismo direcionado ao reparo tecidual após a lesão e consiste em uma cascata de eventos celulares e microvasculares que tem como objetivo a remoção de tecidos danificados e a geração de outros novos. Nessa cascata é observado o aumento da permeabilidade microvascular, seguido pela adesão e infiltração de células no local da lesão, apoptose celular e crescimento de novos tecidos e vasos sanguíneos. Os nitroestirenos são um grupo de compostos constituído por anel aromático ligado a uma cadeia do grupo nitro (NO2). Eles têm sido estudados por apresentar diversas atividades biológicas tais como anti-apoptótica, antiplaquetária e antimicrobiana, entretanto poucas pesquisas têm sido realizadas quanto à atividade anti-inflamatória desses compostos. O objetivo deste estudo foi avaliar atividade anti-inflamatória de quatro novos compostos da classe dos nitroestirenos (NPA, 7B, 7D e 7E) em ensaios in vitro/in vivo. Inicialmente, os compostos foram submetidos a ensaio in vitro em modelo de macrófagos murino ativados por lipopolissacarídeo (LPS) e fibroblastos de pulmão humano MRC5, a fim de avaliar a capacidade citotóxica desses compostos. Logo em seguida, foram avaliados quanto à inibição de óxido nítrico (NO·), dosagem da citocina TNF-α e avaliação da expressão de proteínas envolvidas com o processo inflamatório. Para avaliar o processo anti-inflamatório agudo in vivo foi realizado ensaios de indução do edema por carragenina em peixe Zebrafish e o modelo de pleurisia induzido por LPS em camundongos. Os quatro novos compostos testados apresentaram atividade citotóxica em célula J774A.1 e MRC5 quando testados nas concentrações (3.12-25 μg/mL). Para THP-1 a atividade citotóxica foi apartir da concentração 10 μg/mL. Todos os compostos inibiram a produção de óxido nítrico em macrófago ativado por LPS, entretanto somente NPA apresentou uma possível concentração-resposta significativa nas concentrações de 10 e 20 μg/mL. Este mesmo composto também reduziu os níveis de TNF-α, NF-B e ERK 1/2 em células THP-1. O NPA também possivelmente inibiu o edema induzido por carragenina em peixe Zebrafish e a migração de leucócitos na cavidade pleural de camundongos através da inibição das vias de sinalização intracelular NF-B e ERK 1/2 em ensaios in vivo. Em conclusão, compostos testados neste estudo nao somente apresentaram atividade citotóxica significativa, como também demonstraram um excelente potencial anti-inflamatório in vitro e in vivo, provavelmente por atuação de inibição das vias NF-B e ERK 1/2. Os dados obtidos foram importantes para exploração da atividade biológica destes novos compostos e sua possível aplicação na terapêutica de doenças inflamatórias.

A melatonina produzida pela glândula pineal apresenta diversas ações reguladoras da homeostase dinâmica interna de mamíferos. Suas ações abrangem tanto a regulação de funções endógenas circadianas e sazonais em situações de higidez quanto durante processos fisiopatológicos. O presente trabalho avalia o efeito dos moduladores de processos inflamatórios corticosterona, TNF e IFNy; sobre o metabolismo da glândula pineal. Os resultados aqui apresentados mostram que: 1- Corticosterona potencia a síntese de noradrenalina in vivo e in vitro na vigência de estimulação &beta;-adrenérgica, mas inibe a produção induzida por estimulação concomitante &alpha; e &beta;-adrenérgica. 2- Este efeito é dependente de ativação de GR e não altera a captação extraneuronal de catecolaminas. 3- Corticosterona aumenta a expressão do transcrito aa-nat e a atividade das enzimas AA-NAT e HIOMT. 4 Corticosterona inibe o acúmulo nuclear de NF-&kappa;B. 5- A inibição farmacológica da via NF-&kappa;B mimetiza o efeito potenciador da corticosterona sobre a produção hormonal da pineal. 6 IFN-y inibe a via NF-&kappa;B. 7 - IFN-y potencia a produção de melatonina pela glândula pineal. 8- TNF ativa a via NF-&kappa;B. 9 TNF inibe a produção de melatonina pela pineal. 10- TNF inibe transitoriamente a expressão do transcrito aa-nat e NAS. 11 A transitoriedade deste efeito é dependente de neosíntese protéica. O presente trabalho mostra que a glândula pineal está aparelhada para responder a diferentes agentes moduladores de processos inflamatórios além de fortalecer e darem base para a hipótese da existência de um eixo imune-pineal central no controle de processos patológicos em mamíferos. / The melatonin, synthetized by the pineal gland, exihibits a number of regulatory activities on the internal dynamic homeostasis of mammals. These functions are related to the regulation of endogenous circadian and seasonal rhythms during healthy and physiopathological processes. This study evaluates the effects of the inflammatory modulators, corticosterone, TNF and IFN- y, over the pineal gland metabolism. The results presented here show that: 1 - Corticosterone enhances the synthesis of norepinephrine in vivo and in vitro in the presence of &beta;-adrenergic stimulation, but inhibits the hormonal production when both, &alpha;and &beta;adrenoceptors, are activated. 2 - This effect depends on the GR activation and does not interfere in the extraneuronal uptake of catecholamines. 3 - Corticosterone increases the expression of the aanat transcript and also the enzymatic activity of AA-NAT and HIOMT. 4 - Corticosterone inhibits the nuclear accumulation of NF-&kappa;B. 5 - The pharmacological inhibition of NF-&kappa;B pathway mimics the effect of corticosterone on the hormonal production in pineal. 6 - IFN-y inhibits the NF- &kappa;B pathway. 7 - IFN-y enhances the synthesis of melatonin in the pineal gland. 8- TNF activates the NF-&kappa;B pathway. 9 - TNF inhibits the production of melatonin in the pineal gland. 10 - TNF transiently inhibits the production of the aa-nat transcript and also of NAS. 11 - This transient effect depends on the synthesis of proteins. This study shows that the pineal gland can respond to different inflammatory modulators, supporting the hypothesis of a central immune-pineal axis controlling pathological processes in mammals. .

A atividade cicatrizante da própolis é historicamente descrita, porém ainda não foram conduzidos experimentos que descrevam a atividade cicatrizante de amostras de própolis verde e de suas frações. Própolis é uma resina coletada por abelhas do gênero Apis sp. para diversas finalidades. Fatores fitogeográficos influenciam a composição química das amostras e diversas espécies botânicas já foram identificadas como fonte de resina para a elaboração de própolis pelas abelhas, entre elas pode-se citar a espécie B. dracunculifolia DC como origem botânica da própolis verde. Como constituintes químicos deste tipo de amostra já foram relatados flavonóides, compostos fenólicos, ácidos graxos, etc. Na análise da amostra, feita por microscopia óptica, foram identificados fragmentos vegetais que comprovam a origem botânica da própolis como B. dracunculifolia DC. Após a obtenção, o extrato hidroetanólico bruto foi fracionado, usando-se solventes de polaridade crescente, obtendo-se assim três frações: hexânica, acetato de etila e hidroetanólica. Os perfis cromatográficos em camada delgada e cromatografia líquida de alta eficiência demonstraram que houve um fracionamento químico satisfatório. O extrato hidroetanólico bruto e suas frações foram submetidos à quantificação de flavonóides totais, fenólicos totais, derivados do ácido p-cumárico, confirmando a distribuição de compostos em diferentes frações e em diferentes concentrações. Foi avaliada também a atividade antioxidante, antimicrobiana e, em ensaios in vivo em ratos, a cicatrização e a quantificação de neutrófilos e citocinas (CINC, L-Selectina, VGEF e TNF). O extrato bruto e as frações, até a concentração de 1mg/mL, não apresentaram atividade antimicrobiana frente os micro-organismos testados. Não foi observada diferença estatística significativa entre os grupos do ensaio de cicatrização, tampouco houve diferenças estatísticas entre a contagem de neutrófilos, mas foi possível delinear uma tendência de atividade anti-inflamatória nas frações hexânica e hidroetanólica. / The healing activity of propolis is historically described, but not yet experiments describing the healing activity of propolis samples and their fractions were conducted. Propolis is a resin collected by bees of the genus Apis sp. for several purposes. Phytogeographic factors influence the chemical composition of samples and various botanical species have been identified as a source of resin for the preparation of propolis by bees, among them we can mention the species B. dracunculifolia DC as botanical origin of propolis. As chemical constituents of such sample flavonoids, phenolic compounds, fatty acids, etc. have been reported. In the analysis of the sample taken by optical microscopy, plant fragments that prove the botanical origin of propolis were identified as B. dracunculifolia DC. The crude hydroethanolic extract was chemically fractionated using solvents of increasing polarity, thus obtaining three fractions: hexane, ethyl acetate and hydroethanol. The chromatographic profiles in thin-layer chromatography and high performance liquid chromatography were obtained and the chromatographic profiles showed that there was a satisfactory fractionation. The crude hydroethanolic extract and its fractions were subjected to quantification of total flavonoids, phenolic compounds, derivatives of p - coumaric acid, confirming the distribution of compounds in the different fractions at different concentrations. We also evaluated the antioxidant, antimicrobial and in vivo assays in rats, healing and quantification of neutrophils and cytokines (CINC , L- selectin , VEGF and TNF). The crude extract and the fractions until the concentration of 1mg/mL, showed no antimicrobial activity against the microorganisms tested. No statistically significant difference was observed between groups in the healing assay, there was also no statistical difference between the neutrophil count, but it was possible to delineate a trend of anti-inflammatory activity in hexane and hydroethanol fractions.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2016-06-27T20:49:15Z No. of bitstreams: 1 nataliaramospacheco.pdf: 735585 bytes, checksum: 1814ffa2fa68fa878ec76dc57b0826ad (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2016-06-27T20:50:40Z (GMT) No. of bitstreams: 1 nataliaramospacheco.pdf: 735585 bytes, checksum: 1814ffa2fa68fa878ec76dc57b0826ad (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-27T20:50:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 nataliaramospacheco.pdf: 735585 bytes, checksum: 1814ffa2fa68fa878ec76dc57b0826ad (MD5) Previous issue date: 2013-07-18 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / FAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Cecropia pachystachya, também conhecida como embaúba, umbaúba, imbaúba, embaúva é utilizada na medicina popular para o tratamento de asma, tosse, hipertensão, bem como inflamação. Assim, o presente estudo teve como objetivo avaliar o efeito anti-inflamatório tópico do extrato metanólico de C. pachystachya (EMCP) e investigar os possíveis mecanismos envolvidos nessa atividade. Para isso, o edema de orelha provocado pela aplicação de óleo de cróton (aplicação simples e múltipla), ácido araquidônico, fenol, EPP e capsaicina em camundongos foi utilizado. As aplicações tópicas desses agentes irritantes foram feitas nas orelhas direitas dos animais que foram pré-tratados com uma mistura de acetona (controle), dexametasona ou indometacina (controle positivo) e EMCP. Os resultados indicaram que EMCP apresentou atividade anti-inflamatória tópica significativa reduzindo o edema causado pelo óleo de cróton (aplicação única e múltipla), ácido araquidônico, fenol e EPP. Porém o edema causado pela capsaicina não foi reduzido por EMCP. A análise histológica mostrou que EMCP também tem atividade anti-inflamatória na inflamação crônica. Os resultados obtidos sugerem que o EMCP possui atividade anti-inflamatória tópica e indicam que um dos seus mecanismos de ação envolve a inibição na via do AA. Outro fator importante é que EMCP atua provavelmente por mais de um mecanismo, visto que foi tão efetivo contra a resposta desencadeada pelo fenol, quanto contra a resposta desencadeada pelo TPA. E também pode estar exercendo sua ação por atuar sobre mediadores, como eficientemente demonstrado no modelo do EPP e pela sua ação antioxidante. Além disso, a ação demonstrada no processo crônico torna a C. pachystachya uma planta com potencial para ser utilizada no desenvolvimento de formulações dermocosméticas destinadas ao tratamento de diversas condições dermatológicas. No entanto, estudos adicionais são necessários para confirmar o mecanismo de ação pelo qual essa planta exerce seus efeitos, bem como estudos que comprovem a segurança do seu uso tópico em humanos / Cecropia pachystachya, also known as embaúba, umbaúba, imbaúba, embaúva is used in folk medicine for the treatment of asthma, cough, high blood pressure, as well as inflammation. Thus, the present study aimed to evaluate the topical anti-inflammatory effect of the methanol extract of C. pachystachya (EMCP) and to investigate the possible mechanisms involved in this activity. Ear edema provoked by the application of croton oil (single and multiple application), arachidonic acid, phenol, EPP and capsaicin to mice was used to evaluate the potential anti-inflammatory value of the topical use of EMCP. Topical applications of these irritants were made to the right ears of animals that were pre-treated with acetone (control), dexamethasone or indomethacin (positive control), and EMCP. Our results indicated that EMCP demonstrated significant topical anti-inflammatory activity reducing inflammation related to ear edema caused by croton oil (single and multiple application), arachidonic acid, phenol and EPP. However, EMCP did not significantly reduce the edema caused by capsaicin. Histological analysis showed that EMCP also has chronic anti-inflammatory activity. The results suggest that the EMCP has topical anti-inflammatory activity and indicate that one of its mechanisms of action involves the inhibition via the AA. Another important factor is that EMCP probably acts by more than one mechanism, since it was so effective against the response triggered by phenol, and against the response triggered by TPA. And can also be exerting its action by acting on mediators, as effectively demonstrated the EPP model and its antioxidant action. In addition, the demonstrated action in the process becomes chronic C. pachystachya a plant with potential to be used in the development of dermocosmetic formulations intended for the treatment of various dermatological conditions. However, additional studies are needed to confirm the mechanism of action by which this plant exerts its effects, as well as studies to prove the safety of its topical use in humans.

Orientador: Marco Antonio Alvarenga / Resumo: A endometrite persistente pós-cobertura (EPPC) é uma afecção que acomete uma parcela significativa das éguas que estão em programas de reprodução. Em vista disso, o objetivo desta revisão de literatura foi abordar a fisiopatologia da EPPC e seus tratamentos. Após a cobertura ou inseminação artificial (IA) é fisiológico que ocorra inflamação no interior do útero a fim de promover a limpeza uterina e drenagem dos debris celulares e contaminantes. Éguas que são susceptíveis a EPPC permanecem com acúmulo de líquido uterino e elevado infiltrado neutrofílico no interior do útero por mais de 36 horas após o contato com o sêmen. Para que essas fêmeas possam ser utilizadas na reprodução e se obtenha índices de fertilidade aceitáveis é necessário controlar a inflamação, oferecendo um ambiente uterino adequando para o embrião. A maioria dos tratamentos usados para as éguas com EPPC são paliativos, como a utilização de fármacos ecbólicos e lavagem uterina para auxiliar na retirada do líquido e os polimorfonucleares (PMNs) acumulados no interior do útero. Outros tratamentos tem sido sugeridos, como os imunomoduladores que atuam bloqueando a resposta inflamatória inicial, evitando a liberação de mediadores inflamatórios. Recentemente tem sido mencionada a utilização de anti-inflamatórios não esteroidáis (AINEs) para o tratamento de éguas susceptíveis, que atuam bloqueando a cicloxigenase (COX) interrompendo assim liberação das prostaglandinas (PGs) que são as causadoras do processo inflama... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Mestre

Objetivo: Avaliar o efeito da Isobruceina B como anti-hipernociceptivo e antiinflamatório, e identificar o mecanismo molecular envolvido. Métodos: Inicialmente, o efeito da IsoB sobre a hipernocicepção inflamatória do tecido plantar foi avaliada por von Frey eletrônico. Os tecidos plantares foram removidos para quantificação indireta da infiltração de neutrófilos por mieloperoxidase (MPO). Seu efeito nocicepção térmica foi avaliado em camundongos pelo teste da placa quente a 55º C. Camundongos pré-tratados com IsoB (s.c.) e tratados com carragenina (i.pl), tiveram seus tecidos plantares removidos para quantificação da liberação de citocinas TNF, IL-1? e KC/CXCL1. Para os estudos in vitro, foram utilizados macrófagos extraídos da cavidade peritoneal de camundongos naïve, pré-tratados com 3% de tioglicolato (i.p.) ou de linhagem RAW 264.7. Macrófagos peritoneais foram incubadas com lipopolissacarídeo (LPS) na presença ou ausência de diferentes concentrações de IsoB, para a quantificação da liberação das citocinas TNF, IL-1?, KC/CXCL1 e IL-10 no sobrenadante pelo método de ELISA. A produção in vitro de óxido nítrico (NO) foi indiretamente determinada pelo método de Griess. Para verificar o efeito da IsoB sobre a via do NF-kB, foram utilizados macrófagos RAW 264.7 estavelmente transfectados com um gene para expressão de luciferase dependente de NF-kB (RAW-Luc), incubados com diferentes estímulos (LPS, peptideoglicano, TNF e acetato de forbol miristato [PMA]) na presença ou ausência de IsoB. A atividade da luciferase foi detectada por meio do Luminômetro. A citotoxicidade da IsoB foi avaliada por MTT, lactato desidrogenase e ensaios de citotoxicidade pelo azul de tripan em macrófagos, in vitro. O efeito da IsoB em macrófagos, sobre a degradação o IkB-? e translocação do NF-kB (pela marcação da subunidade p65) para o núcleo e foram examinados por Western Blot de extratos nucleares e citoplasmáticos, e por Microscopia Confocal. O efeito da IsoB sobre a transcrição do RNAm do gene TNF induzido por LPS, foi avaliada por RT-PCR. Células HEK 293 transfectadas foram utilizadas para verificar o efeito da IsoB sobre a síntese de proteínas. Resultados: A IsoB inibe a hipernocicepção inflamatória, mas não tem efeito sobre a nocicepção térmica. IsoB inibiu a produção/libertação das citocinas IL-1? e KC/CXCL1 in vivo, e de TNF, IL-1?, KC/CXCL1, IL-10 e NO in vitro de forma concentração-dependente. O composto analisado também inibiu a atividade da luciferase, NF-kB dependente, por todos os estímulos testado, de forma concentração-dependente. Não foi detectada atividade citotóxica em nenhuma das concentrações testadas. A IsoB não inibe a degradação do IkB-? ou a translocação de NF-kB para o núcleo. Inesperadamente, o composto natural testado também não reduziu a transcrição de RNAm do gene TNF, porém inibiu a síntese de luciferase inespecificamente induzida. Conclusão: A redução da liberação de citocinas pró- inflamatórias, tais como TNF, IL-1? e KC/CXCL1 e da migração de neutrófilos são mecanismos envolvidos nos efeitos anti-inflamatório e anti-hipernociceptivo da IsoB. Os presentes resultados sugerem um mecanismo molecular baseado na direta inibição da síntese de proteica. / Objective: To evaluate the effect of the Isobruceina B (IsoB) as antihypernociceptive and anti-inflammatory, and identify the molecular mechanism involved. Methods: Initially the effect of IsoB upon inflammatoy hypernociception on plantar tissue was evaluated by electronic von Frey. Plantar tissues were removed for indirect quantification of neutrophil infiltration by myeloperoxidase (MPO). Its effect on thermal nociception in mice was evaluated by the hot plate test at 55 ° C. Mice pretreated with IsoB (s.c.) and treated with carrageenan (i.pl.), their tissues were removed for quantification of plantar release of cytokines TNF, IL-1? and KC/CXCL1. For in vitro studies, macrophages derived from peritoneal cavity of naive mice, pretreated with 3% thioglycolate (i.p.) or line RAW 264.7 were used. Peritoneal macrophages were incubated with lipopolysaccharide (LPS) in the presence or absence of different concentrations of IsoB for the quantification of the release of cytokines TNF, IL-1?, and IL-10 KC/CXCL1 in the supernatant by ELISA. In vitro production of nitric oxide (NO) was indirectly determined by the Griess method. To verify the effect of IsoB on the pathway of NF-kB, RAW 264.7 macrophages stably transfected with a gene to expression NF-kB-dependent luciferase (RAW-Luc) were incubated with different stimuli (LPS, peptidoglycan, TNF and phorbol myristate acetate [PMA]) in the presence or absence of IsoB. The luciferase activity was detected by the Luminometer. The cytotoxicity of IsoB was assessed by the MTT, lactate dehydrogenase and cytotoxicity assays trypan blue on macrophages in vitro. The effect of IsoB on macrophages upon the IkB-? degradation and NF-kB translocation (p65 subunit for marking) to the nucleus were examined by Western blot of nuclear and cytoplasmic extracts, and Confocal Microscopy. The effect of IsoB on the TNF mRNA gene transcription induced by LPS was assessed by RT-PCR. Transfected HEK 293 cells were used to verify the effect of IsoB on the protein synthesis. Results: IsoB inhibits inflammatory hypernociception, but has no effect on thermal nociception. IsoB inhibited the production/release of cytokines IL-1? and KC/CXCL1 in vivo, and TNF, IL-1?, KC/CXCL1, IL-10 and NO in vitro in a concentration-dependent manner. The analyzed compound also inhibited luciferase activity NF-kB-dependent for all stimuli tested in a concentration-dependent manner. Cytotoxic activity was not detected in any of the concentrations tested. The IsoB not inhibit the degradation of IkB-? or translocation of NF-kB to the nucleus. Unexpectedly, the natural compound tested neither reduced transcription of TNF mRNA, but inhibited the synthesis of luciferase induced nonspecifically. Conclusion: The reduction on release of pro-inflammatory cytokines such as TNF, IL-1? and KC/CXCL1 and neutrophil migration are mechanisms involved in anti-inflammatory and anti-hypernociceptive effects of IsoB. The present results suggest a molecular mechanism based on the direct inhibition of protein synthesis.

Aprofundamos o estudo dos efeitos farmacológicos da dexametasona, indometacina e tenoxicam e de uma droga citostática (metotrexato), assim como a análise dos mecanismos envolvidos na estimulação flogógena causada por agentes de intensidades fraca, média e forte. Para isso. empregamos o teste edemogênico, que demonstrou ser os fármacos antiinflamatórios não esteróides (tenoxicam e indometacina), os de maior potência na inibição da exsudação plasmática induzida pela paracoccidioidina. Todavia, com agentes flogógenos de intensidade média (carragenina), o metotrexato foi o medicamento mais potente; enquanto que com a placa microbiana dental (agente forte), a dexametasona e a indometacina foram os de maior potência antiinflamatória. Por meio da análise histomorfométrica relativa dos granulomas induzidos por esse último agente, verificamos, até 14 dias, a maior potência antiinflamatória apresentada pelo tenoxicam, comparativamente à da indometacina - em relação à inibição da região central de necrose supurativa-, demonstrando efeito semelhante ao da dexametasona; não obstante, nesse período experimental, em relação à inibição da densidade do volume do tecido granulomatoso, os fármacos mais potentes terem sido a indometacina e a dexametasona. Após 14 dias, foi constatada diferença não significativa (p>0.05) entre o efeito apresentado pelo tenoxicam e o da indometacina. O acentuado efeito apresentado pelos NSAIDs em relação à inibição da densidade de volume dos macrófagos, semelhante ao do metotrexato, sugeriu que os NSAIDs inibiram a proliferação das células progenitoras mielóides dos monócitos/macrófagos. Também agiram tanto aumentando (21 dias) como inibindo (28 dias) a densidade de volume ocupada pelas fibras colágenas; enquanto que a dexametasona apresentou efeito contrário. Tais resultados indicaram que no processo inflamatório induzido por agentes flogógenos de intensidade forte (PMD), estimulores da acentuada produção de LTs e PGs, o emprego de antiinflamatórios esteróides e não esteróides foi vantajosa em relação ao fármaco citostátco. / Was studied comparatively the mechanisms of action and the antiinflammatory effect presented by dexamethasone, tenoxican, indomethacin and methotrexate in acute and chronic inflammation induced by agent flogogenous of minim, media and elevated intensity. With the employ of edemogenic test was verified that the effect presented by nonsteroid antiinflammatory (tenoxican and indomethacin), in relation to inhibition of the plasmatic exsudation induced by paracoccidioidin, was more potent than other medicaments tested. Meanwhile, in the inhibition of the acute inflammation caused by carrageenan and dental microbian plaque, methotrexate, dexamethasone and indomethacin were the most potent pharmacs, respectively. The injection of the dental microbian plaque in the air pouch model induced two experimental granulomas susceptive to the antiinflammatory effects presented for the pharmacs tested, which were utilized in the determination of the weights and of the volume density occupied by structures presents in the periods experimental of 7, 14, 21 and 28 days. With relation the inhibition of the differential mid and dry weights, methotrexate and dexamethasone followed by indomethacin and tenoxican were the most effective pharmacs in decrescent order of potency. The histomorphometric studies of the volume density of the granulomatous tissue revealed that indomethacin reduced this structure comparatively to the tenoxican at 14 days. After this experimental period tenoxican presented the most potent anti-inflammatory effect; however, without significant statistical difference to indomethacin. Tenoxican too presented elevated inhibitory effect of the volume density of the region of supurative necrose (similar to dexamethasone) particularly along to first week. NSAIDs also showed in relation the inhibition of volume density of the collagen effect stimulator (21 days) and inhibitor (28 days), while that dexamethasone revealed contrary effect. The accentuate inhibitory effect of the volume density of macrophages presented by NSAIDs was similar to methotrexate, indicating that these medicaments possibly presented anti-mitotic effect to the progenitors myeloid cells of monocytes/macrophages. These results indicated that in the inflammatory process induced by flogogenous of strong intensity, stimulators of increased production of LTS and PGs, the administration of steroids and non-steroids anti-inflammatory was advantageous in relation to methotrexate.

A transferência de embriões (TE) é uma biotecnologia amplamente utilizada na produção de equinos no Brasil, e a égua receptora exerce um papel fundamental nos resultados finais nos programas de reprodução. Alguns tratamentos têm sido preconizados com objetivo de exercer ação luteotrófica, melhorando a função luteal, e com isto aumentando os níveis sistêmicos de progesterona, como também o uso de drogas anti-inflamatórias, que evitam a perda da função luteal causada pela liberação de prostaglandina em processos inflamatórios prévios ou por manipulação na passagem transcervical do embrião no momento da TE. O objetivo deste estudo foi investigar os efeitos do anti-inflamatório inibidor seletivo COX 2 (meloxicam) associado ao uso luteotrófico da hCG na gestação, características de corpo lúteo, fertilidade e desenvolvimento embrionário em éguas receptoras. Para isto, 60 éguas receptoras alojadas em central de reprodução foram aleatoriamente divididas em 4 grupos de 15 animais, de acordo com os seguintes tratamentos: aplicação de 5ml solução fisiológica no dia da ovulação (controle); aplicação de 2500 UI hCG no dia da ovulação; aplicação de 2500 UI hCG no dia da ovulação associado a 0,6 mg/kg de meloxicam; aplicação de 2500 UI hCG no momento da transferência do embrião associado a 0,6 mg/kg meloxicam. No dia da TE, 7 dias após a TE e 21 dias após a TE para as éguas que ficaram gestantes, foi avaliada a irrigação do corpo lúteo por ultrassonografia modo doppler colorido por meio de score do percentual de irrigação (0-100%), e a irrigação do útero avaliado por score (1-4). Por meio da ultrassonografia no modo B, a área do CL em mm2 foi avaliada nos mesmos momentos, a área da vesícula em mm2 aos 15 e 21 dias da gestação e o tamanho do embrião em cm aos 29 dias de gestação. Além disso, foi realizada dosagem plasmática de progesterona no dia da TE, 7 dias após a TE e 21 dias para as éguas gestantes. As comparações entre os grupos foram analisadas para efeitos principais de tratamento e tempo, assim como para efeito de interação tratamento x tempo. Não foi observado influencia da aplicação de hCG e/ou meloxicam nos animais tratados comparados ao controle (P&gt;0,05). No entanto, foi observado um aumento numérico na taxa de gestação para os dois grupos de receptoras que receberam anti-inflamatório meloxicam, correspondendo a um índice superior em 13,3 % de gestação para éguas tratadas. Em conclusão, não há influencia da aplicação de hCG associado ou não meloxicam sobre a perfusão sanguínea uterina, do corpo lúteo, no desenvolvimento embrionário e nas concentrações plasmáticas de progesterona em receptoras de embriões. No entanto, existe, pela aplicação de meloxicam, evidência de melhora nos índices de gestação, podendo estar associado ao efeito anti-inflamatório seletivo COX-2, que pode melhorar resultados em programas comerciais de transferência de embriões em equinos. / Embryo transfer (ET) is a biotechnology widely used in equine production in Brazil, and the recipient mare plays a key role in the final results of breeding programs. Several treatments have been advocated both for the purpose of exerting luteotrophic action, improving luteal function, and thereby increasing systemic levels of progesterone, such as the use of anti-inflammatory drugs, which prevent the loss of luteal function caused by the release of prostaglandin in previous inflammatory processes or by manipulation in the transcervical passage of the embryo at the time of ET. The objective of this study was to investigate the effects of the anti-inflammatory COX 2 inhibitor (meloxicam) associated with luteotrophic use of hCG in gestation, corpus luteum characteristics, fertility and embryonic development in recipient mares. For this, 60 receiving mares housed in a reproduction center were randomly divided into 4 groups of 15 animals, according to the following treatments: application of 5ml physiological solution on the day of ovulation (control group); application of 2500 IU hCG on ovulation day; application of 2500 IU hCG on the day of ovulation associated with 0.6 mg/kg of meloxicam; application of 2500 IU hCG at the time of embryo transfer associated with 0.6 mg/kg meloxicam. On the day of ET, 7 days after ET and 21 days after ET for pregnant mares, corpus luteum irrigation was evaluated by color Doppler ultrasonography using a score of the percentage of irrigation (0-100%), and irrigation of the uterus evaluated by score (1-4). Using B-mode ultrasonography, corpus luteum area in mm2 was assessed at the same time points, the area of the embryonic vesicle in mm2 at 15 and 29 days of gestation, and the size of the embryo in cm at 29 days of gestation. In addition, plasma progesterone dosage was performed on ET day 7 days after ET in all groups and 21 days after ET for pregnant mares. The comparisons between the groups were analyzed for main effects of treatment and time, as well as for interaction effect treatment x time. No influence of application of hCG and / or meloxican was observed on treated animals compared to control (P&gt;0.05). However, a numerical increase in gestation rate was observed for the two groups of recipients who received anti-inflammatory meloxicam, corresponding to an index higher than 13.3% of gestation for treated mares. In conclusion, there is no influence of the application of hCG associated or not to meloxicam on uterine irrigation, corpus luteum, embryo development and plasma concentrations of progesterone in embryo recipients. However, there is evidence of improvement in gestation rates due to the application of meloxicam, which may be associated with the COX-2 selective anti-inflammatory effect of this drug, improving results in commercial embryo transfer programs in horses.

Envenenamentos por serpentes do gênero Bothrops provocam reações sistêmicas e locais como coagulopatias, hemorragias, reação inflamatória, dor e mionecrose. Proteínas secretadas ricas em cisteínas (CRISPs) estão presentes nas peçonhas de serpentes e estão amplamente distribuídas entre mamíferos, répteis e anfíbios. Estão envolvidas em algumas reações biológicas, porém muitas funções ainda são desconhecidas. O presente trabalho objetivou o isolamento, a caracterização bioquímica/estrutural, enzimática e funcional, a avaliação do potencial inflamatório e avaliação da atividade sobre o sistema complemento de uma CRISP isolada da peçonha de Bothrops jararaca. A CRISP denominada BJ-CRP, foi isolada da peçonha de Bothrops jararaca através da combinação de três etapas cromatográficas: exclusão molecular em Sephacryl S-200, cromatografia de troca aniônica em coluna Source 15Q e cromatografia de fase reversa em coluna C18. O grau de homogeneidade foi determinado e confirmado por eletroforese SDS-PAGE, que mostrou uma banda única de 25,19 kDa, e por MALDI-TOF/TOF que apresentou a massa molecular de 24,6 kDa. A sequência N-terminal e a análise dos peptídeos trípticos por MALDI TOF/TOF demonstrou a presença de 100 resíduos de aminoácidos, os quais apresentaram até 96% de similaridade com sequências de outras CRISPs já descritas, porém de outros gêneros e espécies de serpentes, pois ainda não há CRISPs isoladas do gênero Bothrops. A BJ-CRP não possui atividade proteolítica sobre a azocaseína, o fibrinogênio e a fibrina. Também não apresentou atividade coagulante e hemorrágica, e não demonstrou atividade quando testada na concentração de 1?M em 13 diferentes canais para potássio dependentes de voltagem. Por outro lado, esta toxina foi capaz de induzir um processo inflamatório agudo (tempos de 1 e 4 horas), observado pelo recrutamento de neutrófilos e aumento da citocina pró-inflamatória IL-6 na cavidade peritoneal de camundongos. Ensaios realizados com a BJ-CRP e a peçonha de Bothrops jararaca mostraram modulação na atividade hemolítica promovida pela via clássica do sistema complemento. A BJ-CRP também promoveu ação direta sobre alguns componentes isolados do sistema complemento, como C3 e C4, conforme avaliado por SDS-PAGE e Western blot. O presente trabalho descreve a purificação da BJ-CRP, a primeira CRISP isolada da peçonha da serpente do gênero Bothrops. Os resultados obtidos são promissores e abrem perspectivas para o melhor entendimento desta classe de proteínas, e para a compreensão do mecanismo de ação desta classe de toxinas na resposta inflamatória induzida pelo envenenamento botrópico. / Envenomation by snakes from Bothrops genus is characterized by systemic and local effects such as coagulopathies, bleeding disorders, inflammation, pain and myonecrosis.The cysteine rich secretory proteins (CRISPs) are present in snake venoms and are widely distributed mammals, reptiles and amphibians. They are involved in certain biological activities, however many of their functions are still unknown. The aim of the present study was to isolate a CRISP from Bothrops jararaca and to biochemically/functionally characterize it by evaluating its involvement on inflammatory responses and on the complement system. The CRISP named BJ-CRP was isolated from Bothrops jararaca crude venom through the combination of three chromatographic steps: molecular exclusion on Sephacryl S-200 column, anion exchange chromatography on Source 15Q and reverse phase chromatography using C18 column. A high purity degree was obtained as confirmed by SDSPAGE, showing a single band of 25.19 kDa, and by MALDI-TOF/MS showing a molecular mass of 24.6 kDa. The N-terminal sequence and analysis of tryptic peptides by MALDI TOF/ MS resulted in the determination of 100 amino acid residues, which had up to 96% similarity to sequences from other snake venom CRISPs that were previously described, but from other genus and snake species. The BJ-CRP did not have proteolytic activity on azocasein, fibrinogen or fibrin. It did not show coagulant or hemorrhagic activity, and also did not show activity on 13 different voltage dependent potassium channels when tested at a concentration of 1?M. Moreover, this toxin was able to induce an acute inflammatory response (1 and 4 hours after injection), observed by the recruitment of neutrophils and increase of interleukin-6 into the peritoneal cavity of mice. BJ-CRP and B. jararaca crude venom were capable of modulating the hemolytic activity promoted by the classical pathway of the complement system, and BJ-CRP also showed direct action on some complement system components, such as C3 and C4 as evaluated by SDS-PAGE and Western blot. The present work describes the purification of BJ-CRP, the first CRISP isolated from a Bothrops snake venom. The results obtained showed to be promising and open up prospects in order to better understand the involvement of this class of toxins in the inflammatory response induced by Bothrops envenomation.