Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:26Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-03-08Bitstream added on 2014-06-13T20:05:18Z : No. of bitstreams: 1 moreira_prr_dr_jabo.pdf: 7658386 bytes, checksum: 88b2f8c6da6bd4b4dede297970617c96 (MD5) / Na Leishmaniose Visceral Canina (LVC) a resposta imune órgãoespecífica pode variar de acordo com o órgão afetado, favorecendo ou não a multiplicação do parasito Leishmania (L.) chagasi. O objetivo deste estudo foi analisar, por meio, da técnica de imuno-histoquímica, o fígado e o baço de cães com Leishmaniose Visceral (LV), considerando a carga parasitária, a densidade de células Natural Killer (NK), de macrófagos e de linfócitos, bem como, células em apoptose, de células expressando moléculas de MHC-II e as citocinas TGF-b e TNF- a. Estes resultados foram comparados com os diferentes estágios da doença. Utilizou-se 71 cães naturalmente infectados de área endêmica para LV, classificados nos grupos sintomático (S), assintomático (A) e oligossintomático (O). Um grupo controle foi composto por 10 cães de área não endêmica para LVC. As células positivas para os anticorpos CD56, caspase 3 clivada, MHC-II, TGF- , TNF- , MAC387, CD3 e para a carga parasitária (soro hiperimune de cão positivo para LVC) foram submetidas a testes não paramétricos para a comparação entre os grupos. O baço foi o órgão que apresentou a maior carga parasitária. A apoptose de linfócitos foi maior nos cães sintomáticos quando comparados ao grupo controle. A intensidade de inflamação foi elevada nos cães com doença avançada (grupo S), caracterizada pela formação de granulomas difusos contendo parasitos. O fígado mostrou menor carga parasitária, um perfil celular dos granulomas rico em linfócitos. A densidade de células NK foi baixa no fígado e baço, bem como a imunodetecção das citocinas TGF- e TNF- . A expressão de MHC-II foi maior no baço de cães do grupo S. Portanto, pode-se sugerir que existe um padrão de resposta diferenciado no baço e fígado, porém outra metodologia deveria ser utilizada para quantificar de forma mais precisa as citocinas TGF- e TNF- nestes órgãos / In Canine Visceral Leishmaniasis (LVC), the immune response to organ-specific can vary with the affected organ, thus favoring or hindering the multiplication of the parasiteLeishmania (L.) chagasi. . The aim of this study was to analyze by immunohistochemistry, the liver and spleen of dogs with visceral leishmaniasis (VL), considering the parasitic load, the density of Natural Killer cells (NK), macrophages and lymphocytes, as well apoptosis cells, cells expressing molecules of MHC-II and the cytokines TGF- and TNF- . These results were compared with different stages of disease. We used 71 naturally infected dogs from an endemic area for VL, classifieds in the symptomatic (S), asymptomatic (A) and oligosymptomatic (O) groups. A control group consisted of 10 dogs from nonendemic area for LVC.The positive cells for CD56 antibody, cleaved caspase 3, MHC-II, TGF- , TNF- , MAC387, CD3 and parasite load (serum hyperimmune dog seropositive for VL) were subjected to nonparametric tests for comparison between groups. The spleen was the organ with the highest parasite load. The apoptosis of lymphocytes was higher in symptomatic dogs when compared to the control group. The intensity of inflammation was higher in dogs with advanced disease (group S), characterized by the formation of granulomas containing diffuse parasites. The liver showed lowest parasite load, a profile of cell granulomas rich in lymphocytes The density of NK cells was low in the liver and spleen and few cells were positive for cytokines TGF- and TNF- . Expression of MHC-II was higher in the spleen of dogs in Group S. Therefore, one may suggest that there is a differential pattern of response in the spleen and liver, but other methods should be used to quantify more accurately the cytokines TGF- and TNF- in these organs

Made available in DSpace on 2015-04-09T12:28:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-02-03Bitstream added on 2015-04-09T12:48:03Z : No. of bitstreams: 1 000819717.pdf: 4373541 bytes, checksum: a3af0e5e013e89194ce284da000b37a0 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A leishmaniose tegumentar possui ampla distribuição mundial, segundo dados da Organização Mundial da Saúde (OMS) e estima-se que haja o surgimento de 500 mil a um milhão de casos por ano. Segundo dados do Departamento de Informática do Sistema Único de Saúde (DATASUS), no ano de 2005 registraram-se mais de 180 milhões de casos de leishmaniose tegumentar no Brasil. Apesar da existência de tratamentos disponíveis, a cura da leishmaniose é um processo complexo, em virtude das dificuldades na administração dos fármacos injetáveis, dos inúmeros efeitos adversos e da toxicidade hepática, renal e cardíaca. Dessa forma o desenvolvimento de novos fármacos mais eficazes e menos tóxicos torna-se urgente. O bioisosterismo é uma ferramenta de modificação molecular que visa à obtenção de novos análogos com a mesma atividade biológica. Assim, tem sido utilizado na pesquisa de novos fármacos, buscando a melhoria na eficácia e segurança no tratamento de diversas doenças. O nitrofural (NF), 5-nitro-2-furaldeído semicarbazona, é um fármaco utilizado como antimicrobiano de uso tópico em vários tipos de lesões de pele, que apresenta atividade descrita contra formas amastigotas de L. donovani, L. enriettii e L. major. Baseando-se nas diversas atividades do fármaco, o trabalho proposto objetivou a síntese de bioisósteros de nitrofural e avaliação dos compostos quanto à atividade leishmanicida in vitro. Foram sintetizados e caracterizados através de métodos analíticos oito compostos, sendo um inédito. Sete deles foram avaliados quanto à atividade biológica frente às formas amastigotas de L.amazonensis, através do ensaio de MTT (brometo de 3-metil[4,5-dimetiltiazol-2-il]-2,5 difeniltetrazólio). O composto Lapdesf-MetSFS (8) apresentou atividade comparável à da pentamidina, fármaco padrão utilizado na terapêutica. / Cutaneous leishmaniasis is a world widely distributed disease and it is estimated, by the World Health Organization (WHO), the incidence of 500,000 to one million cases per year. According to the Department of the Unified Health System (DATASUS), in 2005 it was registered more than 180 million cases of cutaneous leishmaniasis in Brazil. Although treatments for leishmaniasis are available, it is a complex process, because of difficulties in administration, once the majority of the drugs are injectable, the several numbers of adverse effects, and liver, renal and cardiac toxicity. Due to that, the development of more effective and less toxic drugs becomes urgent. The bioisosterism is a molecular modification strategy that aims to obtain new analogues with the same biological activity. It has been used in the research for new drugs, in order to improve the effectiveness and safety in the treatment of various diseases. The nitrofural (NF) 5-nitro-2-furaldehyde semicarbazone, is a drug used as topical antimicrobial in various types of skin lesions is described which has activity against L. donovani, L. enriettii and L. major amastigote forms. Based on the various drug activities, the proposed work aimed the synthesis of bioisosters of nitrofural and evaluation of compounds for in vitro leishmanicidal activity. Were synthesized and characterized via analytical methods eight compounds, one unpublished. Seven of them were evaluated for biological activity against the amastigotesn forms of L. amazonensis by MTT assay (3-methyl bromide [4,5-dimethylthiazol-2-yl] -2,5-diphenyltetrazolium bromide). The Lapdesf-MetSFS (8) compound showed activity comparable to that of pentamidine, standard drug used in therapy.

Made available in DSpace on 2015-04-09T12:28:12Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-08Bitstream added on 2015-04-09T12:48:01Z : No. of bitstreams: 1 000814570.pdf: 325846 bytes, checksum: 38c71d9ed63b85ebabb85fe53a185b6e (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Oxidative stress occurs due to an imbalance between oxidants and antioxidant defenses. Considering that dogs with leishmaniasis may develop uremia, which affects the oxidative metabolism and apoptosis of neutrophils, we proposed to investigate the hypothesis that oxidative stress, alteration of oxidative metabolism and apoptosis of neutrophils in dogs varies according to stage of leishmaniasis and that uremia, commonly occurs in late stages of disease, would contribute to such variations. To this, we evaluated plasma markers of oxidative stress (total antioxidant capacity, lipid peroxidation, glutathione, uric acid, bilirubin and albumin), superoxide production (method of nitroblue tetrazolium reduction and flow cytometry with the probe hydroethidine), and viability and apoptosis rate (morphological method and flow cytometry using annexin V-PE system) on neutrophils from dogs with leishmaniasis classified according to the LeishVet Consensus in moderate stage of the disease, very severe stage when uremia is installed and dogs with uremia negative for leishmaniasis, comparing them to healthy dogs. Leishmaniasis regardless of stage and uremia cause oxidative stress with reduced total antioxidant capacity, which may be related to greater induced production of superoxide and stimulated apoptosis observed in these groups. While spontaneously, neutrophils of dogs in very severe stage and with uremia had lower viability, increased apoptosis and higher lipid peroxidation, suggesting that uremia is the cause of such changes. Can be concluded that the intensity of oxidative stress does not vary with the stage of leishmaniasis, however uremic condition contributes to reduce the viability of neutrophils in late-stage dogs. Changes of neutrophil oxidative metabolism occur concomitant with oxidative stress and increased neutrophil apoptosis in both leishmaniasis and in uremia alone / FAPESP: 2011/14083-0

Made available in DSpace on 2015-04-09T12:28:18Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-06-24Bitstream added on 2015-04-09T12:47:45Z : No. of bitstreams: 1 000814758.pdf: 323983 bytes, checksum: 0a6619df9715798ee57c998919b6cad0 (MD5) / A resposta imune de cães com Leishmaniose Visceral (LV) pode apresentar um perfil variado de citocinas, com predominância de citocinas pró-inflamatórias (resistência) ou antiinflamatórias (susceptibilidade), dificultando ou favorecendo a multiplicação do protozoário Leishmania infantum chagasi nos tecidos do hospedeiro. Nesses animais existe um desequilíbrio entre os perfis das respostas imunes Th1 e Th2. A avaliação da resposta imunológica destes cães com diferentes manifestações clínicas de LV é de fundamental importância para a compreensão da patogenia da doença. O objetivo geral deste estudo foi avaliar o perfil de citocinas Th1, Th2 e regulatórias, fatores de transcrição (T-bet e GATA-3) e carga parasitária em cães com LV e controle, no fígado, baço e linfonodos poplíteo e pré-escapular, para verificar possíveis diferenças na resposta imune compartimentalizada. Neste estudo foram utilizados 28 cães de área endêmica para a LV e cinco cães de área não endêmica (controle). Os cães infectados foram separados em grupos sintomático (n=16) e assintomático (n=12). A quantificação da expressão dos genes das citocinas (IFN- γ, TGF-β, IL-10, IL-4, IL-12 e MIF), da carga parasitária tecidual e dos fatores de transcrição foi feita por meio da técnica de PCR quantitativo em tempo real, em amostras de tecidos dos diferentes órgãos. O baço e os linfonodos poplíteo e pré-escapular foram os órgãos que apresentaram maior número de cópias do DNA da Leishmania infantum chagasi. Os resultados da expressão dos genes de citocinas mostraram que houve um aumento da expressão de citocinas pró-inflamatórias (TNF-α, IFN-γ, MIF, IL-12), anti-inflamatórias (IL-4) e regulatórias (IL-10, TGF-β) nos grupos de cães infectados, algumas com diferenças significativas do grupo controle (P<0,05). Enquanto o fator de transcrição T-bet teve níveis mais elevados nos animais assintomáticos. Em conclusão ... / The immune response of dogs with visceral leishmaniasis (VL) may present a varied profile of cytokines, predominantly proinflammatory (resistance) or anti-inflammatory (susceptibility) cytokines, hindering or favoring the multiplication of the protozoan Leishmania infantum chagasi in the host tissues. In these animals there is an imbalance between the profiles of Th1 and Th2 immune response. The evaluation of the immune response of these dogs with different clinical manifestations of VL is crucial for understanding the pathogenesis of the disease. The aim of this study was to evaluate the profile of Th1, Th2 and regulatory cytokines, transcription factors (T-bet and GATA-3) and parasite load in dogs with VL and control, in the liver, spleen and popliteal and prescapular lymph nodes to verify possible differences in compartmentalized immune response. In this study 28 dogs from an endemic area for VL and five dogs from non-endemic area (control) were used. The infected dogs were divided into symptomatic (n = 16) and asymptomatic (n = 12) groups of dogs. The quantification of the gene expression of cytokines (IFN-γ, TGF-β, IL-10, IL-4, IL-12 and MIF) and tissue parasitic load of the transcription factors was done using the technique of quantitative PCR in real time, tissue samples from different organs. The spleen and popliteal and pre-scapular lymph nodes were the organs that showed a higher number of copies of the DNA of Leishmania infantum chagasi. The results of the expression of cytokine genes showed that there was an increased expression of pro-inflammatory (TNF-α, IFN-γ, MIF, IL-12), anti-inflammatory (IL-4) and regulatory cytokines (IL-10 , TGF-β) in groups of infected dogs, with some significant differences from the control group (P <0.05). While the transcription factor T-bet had higher levels in asymptomatic animals. In conclusion GATA-3 was less expressed in the group of infected dogs suggesting that there other mechanisms ...

Made available in DSpace on 2015-04-09T12:28:23Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-07-22Bitstream added on 2015-04-09T12:48:12Z : No. of bitstreams: 1 000810644_20160915.pdf: 208157 bytes, checksum: c6656b5e8df5507808d5f01c0f4cd094 (MD5) Bitstreams deleted on 2016-09-16T12:08:14Z: 000810644_20160915.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2016-09-16T12:08:46Z : No. of bitstreams: 1 000810644.pdf: 2074882 bytes, checksum: bbd737f347bffa395a2b3202247cb23b (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A leishmaniose é considerada uma das 14 doenças negligenciadas segundo a Organização Mundial da Saúde, afetando cerca de 500 milhões de pessoas que vivem nas zonas subtropicais e tropicais. É causada pela infecção do hospedeiro por protozoários da família Leishmania, podendo ser do tipo cutânea, muco-cutânea e visceral. As atuais formas de tratamento da doença são através de pentavalentes antimoniais e drogas como Anfotericina B, porém ambos causam sérios efeitos colaterais, e alguns estudos sugerem que o parasita vem apresentando resistência. Neste trabalho investigamos peptídeos antimicrobianos com conhecida ação leishmanicida buscando parâmetros estruturais que possam ser responsáveis pela eficiência contra Leishmania. Sete peptídeos foram escolhidos, sendo cinco extraídos de anfíbios: Bombinin H2 e H4 da espécie Bombina variegata, Temporin A e B da espécie Rana temporária, e o Phylloseptin-1 da espécie Phyllomedusa azurea. E dois peptídeos provenientes de vespa, Decoralin com e sem o terminal-C amidado, sendo que somente a forma sem amidação é natural e ocorre na vespa solitária Ouremenes decoratus. Os parâmetros estruturais dos peptídeos escolhidos foram pesquisados através da técnica computacional de Dinâmica Molecular, em uma caixa de solvente contendo TFE/água na proporção 30/70 (v:v). Foram encontrados alguns fatores que podem estar relacionados à maior eficiência de alguns peptídeos, dentre eles o comprimento e estabilidade da hélice-α, o volume dos peptídeos, a anfipaticidade, e a solvatação da cadeia principal e dos terminais. Baseados nessas características 14 novos peptídeos foram desenhados buscando reproduzir e aperfeiçoar as caracteríticas estruturais daqueles peptídeos de melhor eficiência biológica. Esses peptídeos foram estudados por Dinâmica Molecular seguindo as mesmas condições dos peptídeos de referência. Dentre esses novos peptídeos alguns apresentaram ... / Leishmaniasis is considered one among 14 neglected diseases according to the World Health Organization, affecting about 500 million people that live in tropical and subtropical areas. The disease is caused by the infection of the host by a protozoan of the Leishmania family, and could be cutaneous, mucocutaneous or visceral. The current forms of treatment involve pentavalent antimonial drugs and others as amphotericin B; however, both cause serious side effects and some studies suggest that the parasite has already shown resistance. In this work, we investigate antimicrobial peptides with known leishmanicidal activity seeking structural parameters that could be correlated to their effectiveness against Leishmania. Seven peptides were chosen, five extracted from amphibian skins and secretions: Bombinin H2 and H4 from Bombina variegata, Temporin A and B from Rana temporaria, and Phylloseptin-1 from Phyllomedusa azurea. In addition, two peptides Decoralin with and without an amidated C-terminal, the natural form being the carboxylated, and occurring in the venom of the solitary wasp Ouremenes decoratus. The structural parameters of selected peptides were investigated by Molecular Dynamics, in a box containing the solvent TFE/water at 30/70 (v:v) concentration. Some features were found that may be related to the greater efficiency of these peptides. They include the length and stability of the α-helix, the volume of the peptides, the amphipathicity, and solvation of the backbone and terminals. Based on these features, 13 new peptides were designed to reproduce and enhance the structural features of those peptides with increased biological efficiency. The new peptides were studied by Molecular Dynamics following the same procedures used for the reference peptides. Among these new peptides some show optimized structural characteristics and will have their leishmanicidal activity determined

Made available in DSpace on 2015-06-17T19:33:53Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-11-29. Added 1 bitstream(s) on 2015-06-18T12:47:53Z : No. of bitstreams: 1 000830010.pdf: 1013512 bytes, checksum: 359beba3503aae8c6b179751e680b25e (MD5) / A leishmaniose visceral canina (LVC) é a forma clínica mais severa da doença e pode ser fatal se não tratada. Um diagnóstico específico e acurado é requerido para a identificação de cães infectados a fim de promover um melhor controle epidemiológico e tratamento adequado. O desenvolvimento de um teste diagnóstico mais específico é importante, especialmente no Brasil onde os animais infectados são eutanaziados. Diversos pesquisadores discordam quanto à especificidade dos testes atualmente utilizados. Este trabalho reporta o isolamento, expressão e teste de dois genes específicos de Leishmania infantun (syn = chagasi), como potencial epítopo para desenvolvimento de um novo método diagnóstico e vacina. Os genes denominados Lc 24 e Lc 36 foram amplificados com primers específicos, clonados e expressos em E. coli. As proteínas recombinantes rLc 24 e rLc 36 foram purificadas por cromatografia de afinidade em coluna de GST. Diferentes concentrações das proteínas foram testadas por Dot Blot usando um pool de soros de cães infectados com leishmaniose visceral e um pool de soro de cães não infectados. Concentrações das proteínas a 0,1 e 0,01μg/mL foram detectadas no ensaio, mostrando que as proteínas rLc 24 e rLc 36 são imunorreativas e apresentam potencial para serem usadas em novos testes diagnósticos e desenvolvimento de vacina. / Canine visceral leishmaniasis (CVL) is the most severe clinical form of the disease and can be fatal if untreated. A specific and accurate diagnosis is required for the identification of infected dogs to provide better epidemiological control and earlier treatment. The more accurate diagnosis test is important especially in Brazil where infected animals are euthanized. Discordance among investigators regarding the accuracy of the tests currently employed for this purpose. This works reports the isolation, expression and test of two specific genes of Leishmania infantun (syn = chagasi), as a potential epitope for the development of a new diagnosis method and vaccine. The partial sequence of the genes rLc 24 and rLc36 was amplified with specific primers, cloned, and expressed in E. coli. The rLc 24 and rLc36 recombinant proteins was purified by GST affinity chromatography. Different concentrations of proteins were tested by Dot blot using a serum pool from infected dogs with leishmaniasis and a serum pool from dogs not infected. The protein concentrations of 0,1 and 0,01μg/mL were detected in the dot blot tests, showing that the protein rLc36 is immunoreaction and has potential to used in new diagnosis tests and development of vaccine.

Made available in DSpace on 2015-07-13T12:10:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-09-19. Added 1 bitstream(s) on 2015-07-13T12:25:30Z : No. of bitstreams: 1 000834841.pdf: 1067389 bytes, checksum: 7e8cce7866a293f952884030f830b2f2 (MD5) / A Leishmaniose visceral (LV) no Brasil representa um grave problema de saúde pública; portanto, é importante estudar novas alternativas para o tratamento de cães infectados. O imunomodulador agregado de magnésio-amônio fosfolinoleato-palmitoleato anidrido proteína (P-MAPA) melhora a imunocompetência quando o sistema imunológico está comprometido, mas sua dependência de receptores Toll-like (TLRs) e os mecanismos envolvidos na resposta imune ainda não estão claros. Estudou-se a ação in vitro de P-MAPA sobre a expressão de TLR2 e TLR4, espécies reativas de oxigénio (ROS), óxido nítrico (NO) e p38 ativada por mitógeno proteína quinase (p38MAPK) e fosforilação de IKK em células mononucleares do sangue periférico (PBMC) e macrófagos de cães saudáveis e infectados. O PBMC ou macrófagos foram isolados e cultivados com diferentes concentrações de P-MAPA (20,100 e 200 μg/mL) em uma atmosfera húmida, a 37°C com 5% de CO2. A observação revelou que nos macrófagos de cães infectados com Leishmania sp. mostraram uma diminuição em TLR2 em comparação com cães saudáveis e em indução com P-MAPA. ROS foram aumentados em PBMC de cães infectados com Leishmania sp. em comparação com cães saudáveis e P-MAPA melhorou a produção de ROS. A produção de NO foi aumentada no sobrenadante da cultura a partir de macrófagos estimulados por P-MAPA em ambos os grupos de cães saudáveis e infectados com Leishmania sp. O tratamento de macrófagos de cães saudáveis com imunomodulador P-MAPA induziu p38 MAPK e fosforilação de IKK, sugerindo a transdução de sinal por esta via. Estas descobertas sugerem que a P-MAPA tem potencial como uma droga terapêutica no tratamento de leishmaniose visceral canina / Visceral leishmaniasis (VL) in Brazil represents a serious public health problem; therefore, it is important to study new alternatives to treat infected dogs. The immunomodulator protein aggregate magnesium-ammonium phospholinoleate-palmitoleate anhydride (P-MAPA) improves immunocompetence when the immune system is impaired, but its dependence on Toll-like receptors (TLRs) and the mechanisms involved in the immune response remain unclear. The in vitro action of P-MAPA on the expression of TLR2 and TLR4, reactive oxygen species (ROS), nitric oxide (NO) and p38 mitogen-activated protein kinase (p38MAPK) and IKK phosphorylation were studied in mononuclear cells from peripheral blood and macrophages from healthy and Leishmania-infected dogs. The PBMC or macrophages were isolated and cultured with different concentrations of P-MAPA (20,100 and 200 μg/mL) in a humid environment at 37°C with 5% CO2. Observation revealed that Leishmania-infected dogs showed a decrease in TLR2 in macrophages compared with healthy dogs and in induction with P-MAPA. ROS were increased in PBMCs from Leishmania sp.-infected dogs compared with healthy dogs and P-MAPA improved ROS production. NO production was increased in culture supernatant from macrophages stimulated by P-MAPA in both healthy and Leishmania-infected dogs. Treatment of macrophages from healthy dogs with immunomodulatory P-MAPA induced p38 MAPK and IKK phosphorylation, suggesting signal transduction by this pathway. These findings suggest that P-MAPA has potential as a therapeutic drug in the treatment of canine visceral leishmaniasis

Made available in DSpace on 2015-07-13T12:10:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-03-03. Added 1 bitstream(s) on 2015-07-13T12:25:14Z : No. of bitstreams: 1 000835544.pdf: 2267708 bytes, checksum: f2c7c302de53b251d3e5440b6bc98d9c (MD5) / O objetivo deste trabalho foi realizar um estudo descritivo sobre o perfil das células granulocíticas e monocíticas na mucosa intestinal de cães naturalmente infectados por Leishmania infantum, na presença ou na ausência do parasita no intestino. Além disso, realizou-se um estudo de correlação entre a intensidade parasitária e os fatores clínicos do hospedeiro, as células envolvidas e as alterações histopatológicas da parede intestinal. Dos 39 cães avaliados, somente 20 foram utilizados no estudo, sendo, 17 positivos para leishmaniose visceral canina (LVC) e três negativos. Os animais com LVC foram eutanasiados no Centro de Controle de Zoonoses (CCZ) de Ilha Solteira, SP, Brasil, e os negativos vieram a óbito natural por motivos diversos. As técnicas de histoquímica e imunoistoquímica foram utilizadas para marcar as células estudadas, identificar as amastigotas de Leishmania e auxiliar nas análises histopatológicas do trato intestinal. Os cães foram divididos em três grupos (G1, G2 e G3). Oito cães positivos para LVC e com amastigotas de L. infantum no intestino foram selecionados para o grupo G1; nove cães positivos para LVC sem amastigotas intestinais para o grupo G2 e, três cães negativos compuseram o grupo controle (G3). Todos os animais não apresentaram coinfecção parasitária gastrintestinal, mediante exames coproparasitológicos realizados in vivo ou pos-morten. As variáveis clínicas dos animais, a intensidade parasitária e a presença das células mononucleares (linfócitos T CD4+, CD8+ e macrófagos) foram avaliadas por uma classificação semiquantitativa baseada em escores que variaram de 1 a 4. Já as células granulocíticas (neutrófilos, eosinófilos e mastócitos) foram quantificadas na mucosa (unidade de vilo e cripta - UVC), submucosa e na muscular. Para as análises de comparação entre os grupos (G1, G2 e G3), o teste de KrusKal-Wallis foi empregado... / The aim of this study was a descriptive evaluation on the profile of granulocytic and monocytes cells in the intestines of dogs naturally infected by Leishmania infantum in the presence or absence of the parasite in the intestine. In addition, it was performed a correlation study among parasite intensity, clinical factors of the host, the cells and the histopathological changes of the intestinal wall. 39 dogs were evaluated, but only 20 were used in the studies, 17 positive for canine visceral leishmaniasis (CVL) and three negative. The animals with CVL were euthanized in the Zoonosis Control Center (CCZ) of Ilha Solteira, SP, Brazil, and the negative animals had natural death for several reasons. The histochemical and immunohistochemical techniques were used to stain the cells and Leishmania amastigotes, and to proceed the histopathological analysis of the intestinal tract. The dogs were divided into three groups (G1, G2 and G3). Eight dogs positive for CVL and with amastigotes of L. infantum in the gut was selected to G1 group; nine CVL positive dogs without intestinal amastigotes were in G2 group and three negative dogs in the control group (G3). All animals showed no gastrointestinal parasite co- infection by coproparasitological examinations in vivo or post-mortem. Clinical variables of the animals, the parasite intensity, the presence of monocytic cells (CD4 + and CD8 + T lymphocytes and macrophages) were evaluated by a semiquantitative analysis based on scores ranging from 1 to 4. However, granulocytic cells (neutrophils, eosinophils, and mast cells) was quantified in the mucosa (villus and crypt unit - UVC), submucosa and muscle. For comparison analysis between groups (G1, G2 and G3), the Kruskal-Wallis test was used to evaluate the clinical variables, the t test for granulocytic cells, and Duncan's test to compare the monocytic cells. Correlation analyzes were based on Spearman test ...

Made available in DSpace on 2015-07-13T12:10:30Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-08-20. Added 1 bitstream(s) on 2015-07-13T12:24:11Z : No. of bitstreams: 1 000836316.pdf: 1042031 bytes, checksum: 4a8a8f1f380a58dcfe20921854b03eae (MD5) / Leishmaniose visceral é uma doença grave que tem no cão seu principal reservatório doméstico. Algumas lacunas no conhecimento dificultam ainda mais o controle da doença. Com relação ao reservatório canino, a possibilidade de se estabelecer indicadores de infectividade ao vetor, como a carga parasitária, poderia resultar em melhor caracterização de seu papel como fonte de infecção na cadeia epidemiológica. Foram realizados xenodiagnósticos em cães acometidos de leishmaniose visceral, com subsequente avaliação da carga parasitária no hospedeiro e no vetor, utilizando-se flebotomíneos da área urbana de Araçatuba,SP. Após cinco dias do repasto, as fêmeas foram dissecadas e submetidas à avaliação parasitológica por meio da demonstração direta do parasito (DDP) e da contagem em câmara de Neubauer (NC). Fragmento de DNA de cinetoplasto (kDNA) de Leishmania spp. foi amplificado por meio da PCR convencional e em tempo real (qPCR), para quantificação da carga parasitária. Os cães foram avaliados para a presença de sinais clínicos e amostras de sangue, swab conjuntival e de pele foram colhidas e processadas por PCR e qPCR. Os resultados dos métodos diagnósticos utilizados foram correlacionados em modelo de regressão linear e a positividade de felbotomíneos foi corrigida pela positividade natural. Tanto a PCR convencional quanto a qPCR mostraram-se adequadas para a avaliação da infectividade canina. Houve correlação entre a carga de parasitos presentes na pele e no swab conjuntival do cão bem como com a cargas de parasitos dos flebotomíneos. Alguns sinais clínicos dos cães, pela análise de componentes principais (PCA), estiveram relacionados com a maior taxa de infecção dos vetores. / Visceral leishmaniasis is a severe disease that has the dog as its main domestic reservoir. Gaps in the knowledge difficult even more the control of this disease. Regarding the canine reservoir, the possibility of establishing infectivity indicators, like the dogs parasite load, could result in better characterization of its role as source of infection in the transmission chain. Xenodiagnosis in dogs with visceral leishmaniasis were performed with subsequent parasite load evaluation of the host and the vectors, using sandflies captured in the urban area of Araçatuba,SP. After five days, the female sand flies were dissected, subjected to parasitological evaluation by the direct demonstration of the parasite (DDP) and by counting in a Neubauer chamber (NC). A kinetoplast DNA fragment of Leishmania spp. was amplified by conventional PCR and by qPCR to check the presence and quantification of Leishmania kDNA. Dogs were assessed for clinical signs and blood, skin and conjunctival swab samples were taken and tested for parasite load. The diagnostic methods tested (NC, PCR and qPCR) were correlated by linear regression and positivity results were corrected by the natural infection rate. Conventional PCR and qPCR proved to be appropriate for evaluating canine infectivity. There was a correlation between the parasite load present in the dog' skin and the conjunctive swab, as well as with the sandflies parasite loads. Principal component analysis revealed that some of the clinical signs shown by the dogs were related to a highest sandfly infection rate.

Made available in DSpace on 2015-08-20T17:09:27Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-06-25. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-20T17:27:09Z : No. of bitstreams: 1 000840958.pdf: 626379 bytes, checksum: cdcf4314b4ef6a4265388d09c2020f3f (MD5) / tentativa de compreender a resposta imune de gatos com leishmaniose visceral, o presente estudo teve como objetivo avaliar a expressão gênica das interleucinas IL-4, IL-10, IL-12 e de IFN-γ por reação em cadeia da polimerase em tempo real em amostras de baço de felinos naturalmente acometidos pela doença. Para tanto foram avaliados três grupos de animais; o primeiro e o segundo grupos compostos por seis gatos infectados por Leishmania cada, sintomáticos e assintomáticos, respectivamente; e o terceiro por seis gatos clinicamente hígidos e não infectados. Nos gatos sintomáticos, as expressões de mRNA das citocinas IL-4, IL-10, IL-12 e IFN-γ estavam reduzidas em 2,52; 2,4; 2,3 e 0,57 vezes em relação ao grupo controle, respectivamente. Nos animais assintomáticos, as expressões de IL-4, IL-10, IL-12 e de IFN-γ foram, respectivamente, de 2,22; 2,15; 2,52 e 1,15 vezes menores quando comparadas ao grupo controle. Ainda, uma forte correlação foi observada entre as expressões de IL-4 e de IL-10 nos gatos sintomáticos, e entre IFN-γ e IL-10, IL-12 e IL-4 e entre IL-12 e IL-10 nos gatos assintomáticos. A redução na expressão das quatro citocinas analisadas evidencia pequena participação dos linfócitos Th1 e Th2 na resposta frente à infecção por Leishmania spp. em gatos, independente do estado clínico dos animais / TIn an attempt to understand the immune response of cats with visceral leishmaniasis, the present study aimed to evaluate the gene expression of interleukins IL- 4, IL-10, IL-12 and IFN-γ by real-time polymerase chain reaction in samples of spleen from cats naturally affected by the disease. For this, three groups of cats were evaluated; the first and second groups composed of six Leishmania-infected cats each, symptomatic and asymptomatic, respectively; and the third composed of six clinically healthy and uninfected cats. In symptomatic cats the mRNA expressions of IL- 4, IL -10, IL - 12 and IFN- γ were respectively supressed 2.52, 2.4, 2.3 and 0.57 times compared to the control group. In asymptomatic animals the expression of IL- 4, IL -10, IL -12 and IFN- γ were, respectively, 2.22, 2.15, 2.52 and 1.15 times lower when compared to the control group. Also, a strong correlation was observed between the expressions of IL4 and IL-10 in symptomatic cats; between IFN-γ and IL-10, IL-12 and IL-4 and between IL-12 and IL-10 in asymptomatic cats. The reducion of expression the four cytokines analyzed evidences a small involvement of Th1 and Th2 lymphocytes in the response to infection by Leishmania spp. in cats, regardless of the clinical status of animals