Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:58Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-27Bitstream added on 2014-08-13T17:59:53Z : No. of bitstreams: 1 000770940.pdf: 1289436 bytes, checksum: 33abe6c9a7b830d30b60ef7e021fa7c2 (MD5) / A leishmaniose visceral canina (LVC), conhecida como leishmaniose visceral americana (LVA) ou calazar é uma antropozoonose, causada pelo protozoário flagelado do gênero Leishmania, com ampla distribuição mundial. No Brasil, o agente responsável pela doença é a Leishmania (Leishmania) chagasi, transmitida pela picada da fêmea do flebotomínio da espécie Lutzomyia longipalpis, e o principal reservatório doméstico é o cão. É uma doença sistêmica grave, de curso lento e crônico, de diagnóstico complexo. Entre as estratégias de controle da LVC está o inquérito sorológico canino, com a eliminação dos cães reagentes, sendo que diferentes técnicas podem ser utilizadas para o diagnóstico desta enfermidade. Muitos avanços têm ocorrido nos últimos anos, mas a respeito dos testes disponíveis para o seu diagnóstico, nenhum apresenta 100% de sensibilidade e especificidade. Neste contexto, o presente projeto teve como objetivos determinar a prevalência de anticorpos para L. chagasi, em 164 cães capturados pelo CCZ de Bauru, SP, área epidêmica para LVC, comparar as técnicas de imunofluorescência indireta, ensaio imunoenzimático (ELISA) e aglutinação direta (DAT); determinar a carga parasitária pela técnica de PCR em tempo real, a partir da punção de linfonodo poplíteo e de medula óssea; e identificar possíveis variantes genotípicas de Leishmania. spp a partir do sequenciamento e genotipagem, a fim de contribuir para o diagnóstico da leishmaniose visceral canina, a partir da análise obtida nos diferentes testes, bem como pela avaliação dos sintomas apresentados pelos animais. A sensibilidade apresentada pelas provas DAT e ELISA tendo a RIFI como padrão-ouro foi respectivamente, de 94% e 87%, enquanto a especificidade foi de 28% e 93%. Do total de amostras de sangue, linfonodo e medula óssea submetidas a PCR gênero e espécie- específica, 20 foram positivas somente para gênero, e estas foram sequenciadas ... / The canine visceral leishmaniasis (LCV), known as American visceral leishmaniasis (LVA) or kala-azar is a anthropozoonosis caused by the flagellate protozoan of the genus Leishmania, with worldwide distribution. In Brazil, the agent responsible for the disease is Leishmania (Leishmania) chagasi, transmitted by the bite of the female of the species Lutzomyia longipalpis, and the main reservoir is the domestic dog. It is a severe systemic disease, with chronic and slow course and complex diagnostic. Among the strategies for control of LVC are the canine serological survey, with the elimination of reagents dogs and different techniques can be used to diagnose this disease. Many advances have occurred in recent years, but about the tests available for diagnosis, none had 100% sensitivity and specificity. In this context, this project aimed to determine the prevalence of antibodies to L. chagasi in 164 dogs captured by the CCZ, Bauru, SP, epidemic area for LVC, to compare the techniques of indirect immunofluorescence, enzyme immunoassay (ELISA) and direct agglutination (DAT) to determine the parasite burden by PCR in real time from peripheral blood puncture, popliteal lymph node and bone marrow of animals serologically positive, and identify potential genotypic variants of Leishmania. spp. from the sequencing in order to contribute to the diagnosis of canine visceral leishmaniasis, from the analysis obtained for the different tests as well as for assessment of symptoms presented by the animals. The sensitivity shown by DAT and ELISA with IFA as the gold standard were respectively, 94% and 87%, while specificity was 28% and 93%. Of the total sample of blood, lymph node and bone marrow subjected to PCR genus and species-specific, 20 were positive only for gender, and these were sequenced and characterized, yielding cleavage bands profile and common sequences belonging to the species L.donovani complex

Made available in DSpace on 2015-01-26T13:21:19Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-27Bitstream added on 2015-01-26T13:30:40Z : No. of bitstreams: 1 000793388.pdf: 1066055 bytes, checksum: 044f31f69403fcf74fb56af93e6c86b7 (MD5) / A leishmaniose visceral americana, causada pelo parasita intracelular Leishmania (L) infantum chagasi, é transmitida pela picada do mosquito Lutzomyia longipalpis. O tratamento é realizado à base de quimioterápicos clássicos, que desenvolvem importantes efeitos colaterais no hospedeiro. A prospecção de novas drogas é o grande desafio mundial do momento. Assim, este estudo realizado in vitro teve por objetivos avaliar o efeito anti-leishmania de frações do veneno de Crotalus durissus terrificus sobre as formas promastigotas e amastigotas de Leishmania (L) infantum chagasi. Do veneno total foram extraídas e purificadas duas frações denominadas respectivamente de fosfolipase A2 (PLA2) e peptídica. Além disso, formas promastigotas e macrófagos infectados por amastigotas foram expostos a uma diluição seriada de PLA2 e da fração peptídica em intervalos que variaram entre 1,5625 μg/mL e 200 μg/mL. Ambas demonstraram atividade contra as formas promastigotas de Leishmania (L.) infantum chagasi variando de acordo com as doses testadas e o tempo de incubação. O ensaio MTT (3- (4,5-dimetiltiazol-2yl)-2,5-difenil brometo de tetrazolina) das frações contra as formas promastigotas mostrou IC50 de 52,07 μg /mL para a PLA2, e uma IC50 de 16,98 μg/mL para a fração peptídica. O ensaio MTT para se avaliar a citotoxicidade nos macrófagos peritoneais mostrou uma IC50 de 98 μg/mL para PLA2 e uma IC50 16,98 μg/mL para a fração peptídica. Nos macrófagos peritoneais infectados pelas formas amastigotas de Leishmania (L) infantum chagasi a PLA2 estimulou o crescimento dos parasitas; em doses mais elevadas foi capaz de controlar em 23% o seu crescimento. A fração peptídica controlou 43% do crescimento do parasita intracelular na dose de 16,98 μg/mL., mostrando-se tóxica acima desta doe para os macrófagos. Ambas as frações estimularam a produção de H2O2 pelos macrófagos, mas apenas PLA2 foi capaz de estimular a produção ... / American visceral leishmaniasis is caused by the intracellular parasite Leishmania ( L ) infantum chagasi , and transmitted by sand fly Lutzomyia longipalpis. Treatment is based on classical chemotherapeutics with significant side effects and the search for new drugs is the greatest global challenge. Thus , this in vitro study aimed to evaluate the anti - leishmanicidal effect of Crotalus durissus terrificus venom’s fractions on promastigotes and amastigotes of Leishmania (L) infantum chagasi. The whole venom were purified two fractions called respectively phospholipase A2 (PLA2) and peptide. Furthermore, promastigotes and macrophage infected per amastigotes were exposed to serial dilutions of the peptide fraction and PLA2 at intervals varying between 1.5625 μg/mL and 200 μg/mL. Both showed activity against promastigotes and varies according to the tested doses and the time of incubation. The MTT assay (3-(4,5-Dimethyl-1,3- thiazol-2-yl)-3,5-diphenyl-2H-tetrazol-3-ium bromide) against promastigotes showed IC50 of 52.07 μg/mL to PLA2, and 16.98 μg/mL for peptide venom’s fraction. The MTT assay to evaluate the cytotoxicity in peritoneal macrophages showed an IC50 of 98 μg/mL for PLA2 and 16.98 μg/ml for peptide. In peritoneal macrophages infected by Leishmania (L) infantum chagasi amastigotes the PLA2 stimulated growth of parasites, at higher doses was able to control 23 % growth. The peptide fraction controlled 43 % of the intracellular parasite growth at a dose of 16.98 μg/mL, showing up this dose toxic to macrophages . Both fractions stimulated H2O2 production by macrophages but only PLA2 was able to stimulate NO production . The results encourage further studies to describe the metabolic pathways involved in cell death , as well as the prospect of molecules with antiparasitic activity present in the peptide fraction of Crotalus durissus terrificus

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-graduação em Medicina Tropical, 2014. / Submitted by Ana Cristina Barbosa da Silva (annabds@hotmail.com) on 2015-05-28T16:46:46Z No. of bitstreams: 1 2014_RebeccaMartinsCardoso_Parcial.pdf: 2132419 bytes, checksum: 631e8e1c99e6ebafd085cc50c2cd2126 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2015-06-01T19:13:28Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_RebeccaMartinsCardoso_Parcial.pdf: 2132419 bytes, checksum: 631e8e1c99e6ebafd085cc50c2cd2126 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-06-01T19:13:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_RebeccaMartinsCardoso_Parcial.pdf: 2132419 bytes, checksum: 631e8e1c99e6ebafd085cc50c2cd2126 (MD5) / Mamíferos silvestres, sinantrópicos e domésticos podem ser hospedeiros dediferentes espécies de Leishmania. Estudos sobre possíveis reservatórios de Leishmania em diferentes áreas são fundamentais para a definição das estratégias de vigilância e controle das doenças. No presente estudo, avaliou-se a ocorrência de infecção por Leishmaniaspp. em mamíferos de duas unidades de conservação e entorno do DF, Brasília, Brasil. Pequenos mamíferos foram capturados em2011 e 2012 em duas Unidades de Conservação Federais do DF, o Parque Nacional de Brasília (PNB) e a Reserva Biológica da Contagem (Rebio), e, em 2013, foram amostrados cães de condomínios residenciais e núcleos rurais do entorno das unidades. Amostras de pele e sangue dos animais silvestres e dos cães foram avaliadas por meio de diferentes testes moleculares, direcionados à região polimórfica D7 do gene 24Sα rRNA, para a região conservada do minicírculo de kDNAe para a região espaçadora interna do DNA ribossômico ITS1 de Leishmania spp.As espécies de Leishmaniaforam identificadas mediante o sequenciamento dos produtos amplificados. As amostras de sangue dos cães foram submetidas ao teste imunocromogrático rápido (DPP) para detecção de anticorpos anti-Leishmania. Foram estudados 179 mamíferos silvestres, os quais 20,1% tiveram amostras positivas para Leishmania spp. nos testes moleculares (Clyomys laticeps, Gracilinanus agilis, Necromys lasiurus, Nectomys rattus, Rhipidomys macruruse Didelphis albiventris). Não foram observadas diferenças significativas comparando a proporção de indivíduos infectados por Leishmania spp.entre as duas áreas amostradas e entre as espécies.A maioria das amostras positivas era do roedor N. lasiurus, as quais foram identificadas como L. amazonensisouL. braziliensis. As 19 amostras dos cães estudados foram positivas ao teste DPP, porém, apenas cinco(26,3%) foram positivas para Leishmania spp. nas análises moleculares.As amostras de cães foram identificadas como L. infantum.Os resultados sugerem o envolvimento de seis espécies de mamíferos silvestres na transmissão enzoótica de Leishmania spp.no Distrito Federal, sendo o primeiro registro de L. amazonensisnoroedor silvestreN. lasiurusno Brasil Central. / Wild, synanthropic and domestic mammals are hosts of Leishmania spp. Studies on possible reservoirs of Leishmania in different areas are fundamental for the development of strategies for the surveillance and control of this disease. In the present study, we evaluated the Leishmania spp. occurrence in mammals in two conservation units and their surroundings in Brasilia, Federal District (FD) Brazil. Small mammals were captured in 2011 and 2012 in two conservation units of FD, the Brasília Nacional Park (BNP) and the Biological Reserve of Contagem (BRC). In 2013, we took samples from dogs in residential areas in the surroundings of these conservation units. Skin and blood samples were evaluated by PCR using different molecular markers (D7 24Sα rRNA, kDNA and DNA ITS1). The Leishmania species were identified by sequencing. Blood samples from the dogs were also subjected to the rapid imunocromogratical test (DPP) for detection of anti-Leishmania antibodies. 179 wild mammals were studied, of which 20.1% had DNA of Leishmania spp successfully detected in at least one positive sample. Six species were considered infected: Clyomys laticeps, Gracilinanus agilis, Necromys lasiurus, Nectomys rattus, Didelphis albiventris and Rhipidomys macrurus. No significant differences comparing the proportion of individuals infected with Leishmania spp were observed between the two sampled areas and between wild mammal species. Most of the positive samples were collected from the rodent N. lasiurus, infected by L. amazonensis or L. braziliensis. All 19 dog samples studied were positive by DPP, however, only five (26.3%) were positive for Leishmania spp. by PCR. DNA sequence of ITS1 amplicons from dog samples had 100% identity with L. infantum sequence. The results suggest the involvement of six species of wild mammals in the enzootic transmission of Leishmania spp. in FD. This is the first record of L. amazonensis in N. lasiurus in Central Brazil.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Pós-graduação em Medicina Tropical, 2016. / Texto parcialmente liberado pelo autor. Conteúdo restrito: Capítulos 3 Métodos, 4 Resultados, 5 Discussão, 6 Conclusão e 7 Referências. / Submitted by Raquel Almeida (raquel.df13@gmail.com) on 2017-08-16T17:52:01Z No. of bitstreams: 1 2016_GetúlioBernardoMoratoFilho_PARCIAL.pdf: 280428 bytes, checksum: a2054acb11f5c4a32675ba0355b09442 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2017-08-22T21:06:30Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_GetúlioBernardoMoratoFilho_PARCIAL.pdf: 280428 bytes, checksum: a2054acb11f5c4a32675ba0355b09442 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-22T21:06:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_GetúlioBernardoMoratoFilho_PARCIAL.pdf: 280428 bytes, checksum: a2054acb11f5c4a32675ba0355b09442 (MD5) Previous issue date: 2017-08-22 / Os antimoniais pentavalentes continuam como primeira opção para o tratamento da leishmaniose cutânea (LC) em crianças e adultos no Brasil. Estudos têm mostrado diferenças de resposta clínica ao tratamento da LC entre adultos e crianças em diferentes cenários. Poucos são os estudos comparando a taxa de falha entre adultos e crianças abaixo de 10 anos em pacientes infectados pela Leishmania (Viannia) braziliensis. Foi realizado um estudo com análise de registros de dados secundários do tipo coorte clínica para avaliar a influência da idade no prognóstico da leishmaniose cutânea entre 2000 e 2005 em Corte de Pedra, Bahia, Brasil. Foram incluídas 987 fichas de pacientes com leishmaniose cutânea tratados com antimonial pentavalente. A taxa de falha no estudo foi 45,8% (452/987) (IC95% 42,7 a 48,9%. As crianças abaixo de 10 anos apresentaram uma taxa de falha terapêutica superior (60%) ao dos adultos (43,6%) com risco relativo de falha de 1,37 (IC95% 1,17 a 1,61). A idade menor que 10 anos e o diâmetro da IDRM menor que 10 mm foram fatores associados à falha terapêutica. A forma mucosa da doença foi verificada em 4,2% dos pacientes durante o acompanhamento. No presente estudo, crianças abaixo de 10 anos apresentaram um maior risco de falha terapêutica após o uso de 20 dias de antimoniais pentavalentes se comparado a indivíduos com 10 anos ou mais de idade. A maior taxa de falha terapêutica em crianças pode estar relacionada a fatores relacionados ao metabolismo dos antimoniais pentavalentes e à qualidade da resposta imune nessa faixa etária. / Pentavalent antimonies are still the first-line treatment for cutaneous leishmaniasis (CL) in children and adults in Brazil. Different studies have shown differences in clinical response to treatment of CL between adults and children in different settings. There are few studies comparing the failure rate among adults and children under 10 years old in patients infected with Leishmania (V.) braziliensis. We conducted a study with secondary data records from clinical cohorts to evaluate the influence of age in the prognosis of cutaneous leishmaniasis between 2000 and 2005 in Corte de Pedra, Bahia, Brazil. 987 files were included from patients with cutaneous leishmaniasis treated with pentavalent antimony. The overall failure rate in the study was 45.8% (452/987) with a 95% CI 42,7 a 48,9%. Children below 10 years had a higher therapeutic failure rate (60%) compared to adolescents and adults (43.6%) with relative failure risk of 1.37 (95% CI 1.17 to 1.61). Children below 10 years and the MST smaller than 10 mm were prognostic factors for treatment failure. 4.2% of patients had mucosal form during the monitoring period. In this study, children below 10 years had a higher risk of treatment failure after using 20 days of pentavalent antimony compared to individuals aged 10 or more years old. The higher treatment failure rate in children may be related to factors related to the metabolism of pentavalent antimony and quality of the immune response.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Pós-Graduação em Ciências Médicas da Faculdade de Medicina da Universidade de Brasília. 2016. / Submitted by Camila Duarte (camiladias@bce.unb.br) on 2016-07-26T15:23:17Z No. of bitstreams: 1 2016_VivianeFragosodeMouraLane.pdf: 1949901 bytes, checksum: f80753bb17ef36abbe6db644e4af4156 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2016-09-08T18:10:30Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_VivianeFragosodeMouraLane.pdf: 1949901 bytes, checksum: f80753bb17ef36abbe6db644e4af4156 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-08T18:10:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_VivianeFragosodeMouraLane.pdf: 1949901 bytes, checksum: f80753bb17ef36abbe6db644e4af4156 (MD5) / Esta tese tem como objetivo contribuir para o entendimento dos aspectos determinantes da Leishmaniose visceral como problema de saúde pública no Brasil. Para este fim, foram delineados quatro estudos: o primeiro se propôs a descrever a judicialização das ações direcionadas ao reservatório canino, um dos pilares de controle da LV no Brasil. Analisou-se Termos de Ajustamento de Conduta e de Ações Judiciais relativas à LV. Constatou-se um comportamento hiperendêmico da LV nas capitais de Belo Horizonte, Campo Grande, Fortaleza e Palmas. Além disso, verificou-se que a interferência do Ministério Público direcionadas ao reservatório doméstico, colabora para a descontinuidade das ações de controle da doença. No segundo estudo, analisou-se o conhecimento e práticas profissionais no âmbito da atenção primária e a atenção aos casos diagnosticados em um território endêmico do Distrito Federal. Realizou-se um descritivo exploratório e quantitativo. Aplicou-se um questionário estruturado aos profissionais de saúde pertencentes às unidades de atenção básica. Apesar dos participantes revelarem a importância epidemiológica da LVH na região, demonstrou-se que essas regiões apresentam dificuldades operacionais, as quais dificultam a execução de ações direcionadas aos casos de LV. No terceiro estudo realizou-se uma série de casos, entre 2011 a 2014, em um território endêmico do Distrito Federal, cuja finalidade foi acompanhar a evolução da doença em pacientes com teste Montenegro positivo, além de analisar a dinâmica de transmissão no local. Conclui-se, portanto, que o entendimento acerca da progressão de indivíduos assintomáticos, em áreas endêmicas, não depende apenas da confirmação de casos por meio de testes diagnósticos, mas também da dinâmica de transmissão no local. Por fim, o último estudo teve o intuito de compreender o processo que consolidou a urbanização da LV no Brasil, criou-se uma narrativa histórica da epidemiologia da doença agregando informações que possam criar hipóteses para o entendimento da LV urbana e também medidas de controle mais efetivas. O advento da industrialização no país motivou o êxodo rural permitindo mudanças demográficas com o crescimento populacional. O fenômeno atual deveu-se a criação de condições ideais para a manutenção do ciclo de transmissão nas cidades brasileiras. Além deste fato, a descontinuidade das ações de controle foi relevante para a determinação de epidemias urbanas. Ao considerar o cenário epidemiológico atual da LV, é necessário que seja considerado um planejamento urbano nas cidades e não apenas estratégias centradas na dinâmica de transmissão da doença para que se tenha um impacto positivo na epidemiologia da LV. _______________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / This thesis aims to contribute to the understanding of the determinants of the Visceral leishmaniasis as a public health problem in Brazil. To this end, four studies were outlined: the first proposed to describe the legalization of actions directed to the canine reservoir, one of the LV control pillars in Brazil. It analyzed Terms of Conduct Adjustment and lawsuits related to LV. It found a hyperendemic behavior of LV in the cities of Belo Horizonte, Campo Grande, Fortaleza and Palmas. Moreover, it was found that the interference of the prosecution aimed at the domestic reservoir, contributes to the discontinuance of the disease control measures. In the second study, we analyzed the professional knowledge and practice within primary care and attention to cases diagnosed in an endemic area of the Federal District. We conducted an exploratory and quantitative descriptive. Applied a structured questionnaire for health professionals belonging to the primary care units. Although the participants reveal the epidemiological importance of LVH in the region, it was shown that these regions present operational difficulties, which hinder the implementation of actions directed to cases of VL. In the third study a number of cases took place between 2011 to 2014 in an endemic area of the Federal District, whose purpose was to monitor the evolution of the disease in patients with positive Montenegro test, and analyze the dynamics of transmission in place. It follows therefore that the understanding of the progression of asymptomatic individuals in endemic areas, not only dependent on the confirmation of cases by diagnostic tests, but also the dynamic transmission on site. Finally, the latest study aimed to understand the process that consolidated the urbanization of VL in Brazil, created a historical narrative of the epidemiology of the disease adding information that can create hypotheses for understanding the urban LV and also control measures more effective. The advent of industrialization in the country motivated the rural exodus allowing demographic changes with population growth. The current phenomenon was due to the creation of ideal conditions for maintaining the transmission cycle in Brazilian cities. In addition to this fact, the discontinuity of control actions was relevant to the determination of urban epidemics. When considering the current epidemiological situation of the LV, it must be considered an urban planning in cities and not just centered strategies in the transmission dynamics of the disease in order to have a positive impact on the epidemiology of VL.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Zoologia, 2016. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2016-10-18T14:25:32Z No. of bitstreams: 1 2016_BárbaraGiordaniFagundes.pdf: 2191571 bytes, checksum: 1c29ac487f4e08ccc5b45265ef48d500 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2016-11-24T15:00:34Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_BárbaraGiordaniFagundes.pdf: 2191571 bytes, checksum: 1c29ac487f4e08ccc5b45265ef48d500 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-11-24T15:00:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_BárbaraGiordaniFagundes.pdf: 2191571 bytes, checksum: 1c29ac487f4e08ccc5b45265ef48d500 (MD5) / Phlebotominae (Dipetra: Psychodidae) é uma subfamília de insetos de grande importância em Saúde Pública por serem transmissores de espécies de Leishmania. O subgênero Lutzomyia merece uma atenção especial por conter a principal espécie vetora de Leishmania infantum, causadora de Leishmaniose Visceral nas Américas: Lutzomyia longipalpis. Esse subgênero possui um grupo de espécies crípticas que não podem ser diferenciadas por morfologia. No entanto, a identificação correta dessas espécies tem relevantes implicações epidemiológicas. Logo, a busca de mais caracteres taxonômicos e métodos para identificação torna-se fundamental e, nesse sentido, a morfometria geométrica de asas poderia auxiliar como uma técnica importante. O objetivo do presente estudo foi analisar as variações de forma e tamanho de asas das espécies do subgênero Lutzomyia que ocorrem no Brasil e avaliar se essas análises poderiam ser úteis para a separação dessas espécies. Foram analisadas asas de 18 espécies de flebotomíneos depositadas na Coleção da Faculdade de Saúde Pública da Universidade de São Paulo e na Coleção do Centro de Pesquisas René Rachou, FIOCRUZ, Minas Gerais, pertencentes ao subgênero Lutzomyia. Outros gêneros e subgêneros foram utilizados como grupo externo. As asas foram fotografadas e seis marcos anatômicos foram digitalizados para obtenção das coordenadas cartesianas. Por meio da Análise Generalizada de Procrustes foi possível obter as variáveis de tamanho e forma. Análises de Componentes Principais, de Funções Discriminantes e de Análise de Variância foram realizadas para analisar as modificações na forma e tamanho das asas. Ainda foi utilizada uma análise baseada nas distâncias de Mahalanobis para verificar os agrupamentos formados por geometria alar. Os resultados obtidos mostraram significativa variação de tamanho e forma das asas de Lutzomyia (Lutzomyia) em comparação com outros subgêneros e gêneros de flebotomíneos. Considerando somente o subgênero Lutzomyia a morfometria alar diferenciou dois grupos. Um deles formado por Lu. ischnacantha, Lu. cavernicola, Lu. almerioi, Lu. forattinii, Lu. renei e Lu. battistinii no qual os valores de reclassificação correta das espécies foram muito altos (Kappa = 0,91) e o outro incluindo Lu. alencari, Lu. ischyracantha, Lu. cruzi, Lu. longipalpis, Lu. gaminarai e Lu. lichyi em que esses valores foram baixos (Kappa = 0,42), mesmo utilizando 10 marcos anatômicos das asas. Os agrupamentos gerados pela geometria das asas reforçaram a proposta de classificação de Galati (2003). A morfometria geométrica de asas foi útil para identificar padrões morfológicos de gêneros e subgêneros e auxiliar na identificação de algumas espécies de flebotomíneos do subgênero Lutzomyia, mas não permitiu a identificação de espécies crípticas como L. longipalpis and L.cruzi. _________________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Phlebotominae (Diptera: Phlebotominae) is a subfamily of insects with great importance for Public Health as transmitters of Leishmania species. The Lutzomyia subgenus deserves special attention because contains the main vector species of Leishmania infantum, responsible for Visceral Leishmaniasis in the Americas: Lutzomyia longipalpis. This subgenus includes a group of sibling species that are not differentiated by morphology. However, the correct identification of these species has important epidemiological implications. Thus, the search for more taxonomic characters and methods for identification is fundamental and, in this sense, the wing geometry can help as an important tool. The objective of this study was to analyze the variations in size and shape of wings of Lutzomyia subgenus species occurring in Brazil and assess whether these analyzes can be useful to identify these species. Wings of 18 sand fly species from two Brazilian collections (Collection of the School of Public Health - University of São Paulo and Collection of the Research Center René Rachou - FIOCRUZ, MG) were analyzed. Other genera and subgenera were used as outgroups. The wings were photographed and six landmarks were scanned to obtain the cartesian coordinates. A Generalized Procrustes Analysis was performed to obtain variables of size and shape. Principal Component Analysis, Discriminant Functions and Variance Analysis were performed to analyze the changes in the shape and size of the wings. An analysis with the Mahalanobis distances was also performed to check the groups formed by wing geometry. The results showed significant variation in size and shape of species of Lutzomyia (Lutzomyia) wings when compared to other sandflies subgenera and genera. Considering only the Lutzomyia subgenus, the wing morphometry distinguished two groups. In the group 1 (Lu. ischnacantha, Lu. cavernicola, Lu. almerioi, Lu. forattinii, Lu. renei and Lu. battistinii) correct reclassification scores were very high (Kappa = 0.91), but in the group 2 (Lu. alencari, Lu. ischyracantha, Lu. cruzi, Lu. longipalpis, Lu. gaminarai and Lu. lichyi) lower reclassification scores were observed (Kappa = 0.42) even in analyses using ten wing landmarks. The clusters generated by wing morphometry were similar of those proposed by Galati (2003).The wing geometry proved to be useful to identify morphological patterns of Phlebotominae genera and subgenera and assist in the identification of some species of the Lutzomyia subgenus but the technique did not allow identification of sibling species such as L. longipalpis and L.cruzi.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Ciências Médicas, 2016. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2017-02-06T17:05:35Z No. of bitstreams: 1 2016_AdrianadeOliveiraSantosAlfani_Parcial.pdf: 1139143 bytes, checksum: dd954dd6f8c1114fccbc8298c25b2c33 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2017-03-24T21:48:19Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_AdrianadeOliveiraSantosAlfani_Parcial.pdf: 1139143 bytes, checksum: dd954dd6f8c1114fccbc8298c25b2c33 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-24T21:48:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_AdrianadeOliveiraSantosAlfani_Parcial.pdf: 1139143 bytes, checksum: dd954dd6f8c1114fccbc8298c25b2c33 (MD5) / A leishmaniose tegumentar americana (LTA) é uma doença infecciosa, endêmica e reemergente da pele e mucosa, causada por várias espécies de Leishmania. Nas últimas décadas a primeira linha de escolha de tratamento das leishmanioses tem sido o antimônio pentavalente (SbV) cujo o surgimento de resistência e este medicamento está se tornando um problema de saúde pública. Em alguns estudos foi observado que a HSP70 quando super expressa aumentou a tolerância ao SbIII em isolados resistentes de Leishmania. O objetivo geral deste projeto foi identificar proteínas dos isolados de leishmânias dos pacientes tratados com antimonial pentavalente (SbV) que possam estar relacionadas à resistência ao tratamento. No presente estudo, após avaliação do sequenciamento, os genes foram sub clonados individualmente no vetor pET-19b e utilizadas as enzimas de restrição (Nde1 e BamHI), produzidos anticorpos para as proteínas recombinantes de HSP70 e ATPase. Avaliou-se 12 isolados de pacientes resistestes e não resistentes ao tratamento. Ocorreu diminuição das formas promastigotas na maioria dos isolados tratados com IC 50 do N - metilglucamina. Verificou-se que não houve diferença significativa representativa na expressão das proteínas HSP70 e ATPase de isolados de pacientes com falha terapêutica e pacientes que não apresentaram falha terapêutica. A observação dos genes super expressos estudados em isolados considerados resistentes e não resistentes in vitro mostrou-se em diferentes concentrações em isolados de pacientes que apresentaram falha terapêutica, sugerindo que a falha, em sua maioria, ocorreu por características do hospedeiro. / American cutaneous leishmaniasis (ACL) is an infectious, endemic and reemergent disease of the skin and mucosa caused by several species of Leishmania. In the last decades the first line of choice of treatment of leishmaniasis has been pentavalent antimony (SbV) whose emergence of resistance and this drug is becoming a public health problem. In some studies it was observed that HSP70 when super expressed increased tolerance to SbIII in resistant isolates of Leishmania. The overall objective of this project was to identify proteins from leishmaniasis isolates from patients treated with pentavalent antimonial (SbV) to be related to resistance to treatment. In the present study, after sequencing evaluation, the genes were subcloned individually into the pET-19b vector and the restriction enzymes (Nde1 and BamHI), produced antibodies to the HSP70 and ATPase recombinant proteins, were used to evaluate 12 isolates from patients Resistant and not resistant to outpatient treatment. There was a decrease in promastigote forms in the majority of isolates treated with IC 50 of N - methylglucamine. It was verified that there was no representative difference in the expression of HSP70 and ATPase proteins from isolates of patients with failed therapy and patients who did not present therapeutic failure. The observation of the superexpressed genes studied in isolates considered resistant and not resistant in vitro was demonstrated in different concentrations in isolates of patients that presented therapeutic failure, suggesting that the fault, for the most part, occurred due to host characteristics.

Submitted by THAÍS GABAN PASSALACQUA (thaisgp@gmail.com) on 2018-07-18T14:56:29Z No. of bitstreams: 1 Tese_versão_final_Thais.pdf: 2308911 bytes, checksum: 622a2233481617eb319633deb52d4382 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Carolina Gonçalves Bet null (abet@iq.unesp.br) on 2018-07-20T19:23:18Z (GMT) No. of bitstreams: 1 passalacqua_tg_dr_araiq_int.pdf: 2302768 bytes, checksum: cbe14d5ab984e60beba939f2db4d53c9 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-20T19:23:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 passalacqua_tg_dr_araiq_int.pdf: 2302768 bytes, checksum: cbe14d5ab984e60beba939f2db4d53c9 (MD5) Previous issue date: 2018-07-06 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / As leishmanioses são um grupo de doenças causadas por parasitos protozoários do gênero Leishmania e são transmitidas pela picada da fêmea infectada do inseto flebotomíneo. Segundo a Organização Mundial da Saúde, as leishmanioses estão distribuídas em áreas tropicais e subtropicais e são encontradas em 98 países da Europa, África, Ásia e América. São estimados 700 a um milhão de novos casos com 20 a 30 mil mortes anuais. A quimioterapia das leishmanioses é deficiente, tóxica e se baseia no uso de compostos antimoniais pentavalentes desenvolvidos na década de 40, os quais são tóxicos e apresentam ineficácia devido ao desenvolvimento de cepas resistentes. Desta forma, a busca por novos compostos antileishmaniais é importante. Pensando nisso, uma série de compostos ciclopaladados foram avaliados quanto ao seu potencial leishmanicida. Em ensaios in vitro, o composto CP2, cuja eficácia no tratamento da leishmaniose cutânea foi demonstrada pelo nosso grupo de pesquisa, apresentou atividade antipromastigota e amastigota de L. (L.) infantum, espécie causadora da leishmaniose visceral. O tratamento in vivo demonstrou a eficácia na diminuição da carga parasitária no fígado e baço (50%), sendo superior à anfotericina B. Adicionalmente, CP2 não apresentou efeitos tóxicos como revelado pelos marcadores bioquímicos ALP, AST, ALT e creatinina. Para tentar entender os possíveis mecanismos de ação de outro composto ciclopaladado, CP4, foram realizados ensaios de relaxamento utilizando a enzima topoisomerease IB de L. (L.) donovani, verificando-se que esse composto, também é capaz de inibir a enzima do parasito em concentrações submicromolares. / Leishmaniasis is a group of diseases caused by protozoan parasites of the genus Leishmania and are transmitted by the bite of the infected female of the insect phlebotomine. According to the World Health Organization, leishmaniasis is distributed in tropical and subtropical areas and are found in 98 countries in Europe, Africa, Asia and America. Seven hundred to one million of new cases are estimated with 20 to 30 thousand annual deaths. The chemotherapy for leishmaniasis is deficient, toxic and is based on the use of pentavalent antimony compounds developed in the 40´s, which are toxic and present ineffectiveness due to the development of resistant strains. In this way, the search for new anti Leishmania compounds is very important. Thinking about it, a series of cyclopalladated compounds were evaluated regarding to their leishmanicidal potential. In vitro assays with the CP2 compound, which efficacy in the treatment of cutaneous leishmaniasis was previously demonstrated by our research group, presented promastigote and amastigote activity against L. (L.) infantum, a species that causes visceral leishmaniasis. In vivo treatment demonstrated the efficacy in the reduction of the parasitic load in the liver and spleen (50%), being higher than amphotericin B. Additionally, CP2 did not exhibit toxic effects as revealed by the evaluation of the biochemical markers ALP, AST, ALT and creatinine. To try to understand the possible mechanisms of action of another compound ciclopaladado, the CP4, relaxation tests were carried out using the enzyme topoisomerease IB of L. (L.) donovani. It was verified that this compound is also able to inhibit the parasite enzyme in submicromolar concentrations.

Resumo: tentativa de compreender a resposta imune de gatos com leishmaniose visceral, o presente estudo teve como objetivo avaliar a expressão gênica das interleucinas IL-4, IL-10, IL-12 e de IFN-γ por reação em cadeia da polimerase em tempo real em amostras de baço de felinos naturalmente acometidos pela doença. Para tanto foram avaliados três grupos de animais; o primeiro e o segundo grupos compostos por seis gatos infectados por Leishmania cada, sintomáticos e assintomáticos, respectivamente; e o terceiro por seis gatos clinicamente hígidos e não infectados. Nos gatos sintomáticos, as expressões de mRNA das citocinas IL-4, IL-10, IL-12 e IFN-γ estavam reduzidas em 2,52; 2,4; 2,3 e 0,57 vezes em relação ao grupo controle, respectivamente. Nos animais assintomáticos, as expressões de IL-4, IL-10, IL-12 e de IFN-γ foram, respectivamente, de 2,22; 2,15; 2,52 e 1,15 vezes menores quando comparadas ao grupo controle. Ainda, uma forte correlação foi observada entre as expressões de IL-4 e de IL-10 nos gatos sintomáticos, e entre IFN-γ e IL-10, IL-12 e IL-4 e entre IL-12 e IL-10 nos gatos assintomáticos. A redução na expressão das quatro citocinas analisadas evidencia pequena participação dos linfócitos Th1 e Th2 na resposta frente à infecção por Leishmania spp. em gatos, independente do estado clínico dos animais / Abstract: TIn an attempt to understand the immune response of cats with visceral leishmaniasis, the present study aimed to evaluate the gene expression of interleukins IL- 4, IL-10, IL-12 and IFN-γ by real-time polymerase chain reaction in samples of spleen from cats naturally affected by the disease. For this, three groups of cats were evaluated; the first and second groups composed of six Leishmania-infected cats each, symptomatic and asymptomatic, respectively; and the third composed of six clinically healthy and uninfected cats. In symptomatic cats the mRNA expressions of IL- 4, IL -10, IL - 12 and IFN- γ were respectively supressed 2.52, 2.4, 2.3 and 0.57 times compared to the control group. In asymptomatic animals the expression of IL- 4, IL -10, IL -12 and IFN- γ were, respectively, 2.22, 2.15, 2.52 and 1.15 times lower when compared to the control group. Also, a strong correlation was observed between the expressions of IL4 and IL-10 in symptomatic cats; between IFN-γ and IL-10, IL-12 and IL-4 and between IL-12 and IL-10 in asymptomatic cats. The reducion of expression the four cytokines analyzed evidences a small involvement of Th1 and Th2 lymphocytes in the response to infection by Leishmania spp. in cats, regardless of the clinical status of animals / Orientador: Mary Marcondes / Banca: Wagner Luis Ferreira / Banca: Maria cecília Rui Luvizotto / Banca: Márcia Dalastra Laurenti / Banca: Raimundo Souza Lopes / Doutor

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / In this study, two flow systems with a solid phase extraction were developed for the determination of Sb(III), Pb(II) As(V) and total As by atomic absorption spectrometry in sample of meglumine antimonate, which is the chosen medication in Brazil for treating leishmaniasis. For the determination of Sb(III) and Pb(II) with solid phase extraction and flame atomic absorption spectrometry (FI SPE F AAS), the species were retained in a micro-column containing 8-hydroxyquinoline as a chelating agent, supported in glass with controlled porosity (CPG 8HQ). The principal experimental parameters established were, respectively for Sb(III) and Pb(II): pH 5.8 and 6.8; HCl 2 and 1 mol L-1 as eluent; limit of detection (LOD) 0.1 mg L-1 and 2.0 μg L-1; analytical frequency 9 and 13 cycles h-1. The determinations of Sb(III) were carried out on two different batches of meglumine antimoniate, and values varied from 2.65 to 2.97 mg mL-1, which correspond to approximately 3.5% of Sb(III) in relation to the total concentration of antimony. For the speciation study of arsenic, a flow system with a solid phase extraction and hydride generation atomic absorption spectrometry (FI SPE HG AAS) were used. The sorbent used in the pre-concentration phase was a Dowex ion-exchange resin. Among the principal parameters optimized for the selective determination of As(V), we can highlight the following: eluent H2SO4 1 mol L-1; reducing reagent NaBH4 0.5% m/v; NaOH 0.001 mol L-1 for pH adjustment. The LOD value calculated for the determination of As(V) was 2.65 mg L-1 and the analytical frequency was 20 cycles h-1. For the determination of total As, an initial stage for the oxidation of the species As(III) with a 3+1 mixture of concentrated hydrochloric and nitric acid was necessary, and the limit of detection calculated for total As was 6 mg L-1. Based on the results demonstrated, the use of the FI SPE F AAS procedure is proposed for the selective determination of Sb(III) in meglumine antimoniate, which contains close to 81,000 mg L-1 of Sb(V). Furthermore, the use of the FI SPE F AAS and FI SPE HG AAS systems is proposed for the determinations of lead and arsenic, respectively, in the same pharmaceutical products, being that the limit for the total concentration of heavy metals, according to current pharmacopoeias, is 10 mg L-1, greater than the limit of detection of the proposed methods. / Neste trabalho foram desenvolvidos dois sistemas em fluxo com extração em fase sólida para a determinação de Sb(III), Pb(II), As(V) e As total por espectrometria de absorção atômica em antimoniato de meglumina, o qual é o medicamento utilizado no Brasil para o tratamento da leishmaniose. Para a determinação de Sb(III) e Pb(II), com extração em fase sólida e determinação por espectrometria de absorção atômica com chama (FI-SPE-F AAS), as espécies de interesse foram retidas em uma micro-coluna contendo 8-hidroxiquinolina suportada em vidro de porosidade controlada (CPG 8HQ), como agente complexante. Os principais parâmetros experimentais estabelecidos foram, respectivamente, para Sb(III) e Pb(II): pH de complexação 5,8 e 6,8; HCl 2 e 1 mol L-1 como eluente; limite de detecção (LD) 0,1 mg L-1 e 2 μg L-1 e freqüência analítica de 9 e 13 medições h-1. As determinações de Sb(III) foram feitas em dois diferentes lotes de antimoniato de meglumina, cujas concentrações variaram de 2,65 a 2,97 mg mL-1, o que corresponde a aproximadamente a 3,5% de Sb(III) com relação à concentração total de antimônio. Para o estudo de especiação de As, foi utilizado um sistema em fluxo com extração em fase sólida e determinação por espectrometria de absorção atômica com geração de hidretos (FISPE- HG AAS). O material sorvente utilizado na etapa de pré-concentração foi uma resina de troca aniônica Dowex 1-X8. Dentre os principais parâmetros otimizados para a determinação seletiva de As(V), pode-se destacar: eluente H2SO4 1 mol L-1; reagente redutor NaBH4 0,5% m/v e NaOH 0,001 mol L-1 para ajuste do pH. O LD de As(V) foi 2,65 mg L-1 e a freqüência analítica 20 medições h-1. Para a determinação de As total foi necessária uma etapa prévia de oxidação da espécie As(III) com água régia e o limite de detecção calculado para As total foi 6,0 mg L-1. Com base nos resultados obtidos, propõe-se o uso do procedimento FI-SPE-F AAS para a determinação seletiva de Sb(III) em antimoniato de meglumina, o qual contém cerca de 81.000 mg L-1 de Sb total. Além disso, propõe-se o uso dos sistemas FI-SPE-F AAS e FI-SPE-HG AAS para as respectivas determinações de chumbo e arsênio no referido medicamento, uma vez que o limite para a concentração total de metais pesados, segundo os órgãos oficiais, é de 10 mg L-1, superior aos LDs dos métodos propostos.